Aminobenzoic acid

关注小药说药，一起成长！ 前言 抗体偶联药物(ADC)是由靶向特异性抗原的单克隆抗体与小分子细胞毒性药物通过连接子链接而成,兼具传统小分子化疗的强大杀伤效应及抗体药物的肿瘤靶向性。ADC由三个主要部分组成：负责选择性识别癌细胞表面抗原的抗体，负责杀死癌细胞的药物有效载荷，以及连接抗体和有效载荷的连接子。 ADC对抗原的识别导致ADC通过内吞途径进入细胞内，通过溶酶体降解后，有效载荷以生物活性形式释放并发挥作用，导致癌细胞死亡。细胞内有效载荷的数量由每个细胞表面抗原的数量、每个ADC的药物有效载荷分子的数量（也称为药物抗体比率，DAR）以及抗原返回细胞表面所需的时间决定。有效载荷可能在癌细胞死亡和降解后逃逸，也可能从胞浆中透膜而出。这种释放的后果可能是有益的（也称为旁观者效应），也可能是有害的，导致全身毒性。 ADC中有几个变化的部分，成功显然没有通用的公式。因此，如何选择合适的抗体、在何处以及如何将连接子连接到抗体、每个抗体连接多少药物分子、如何连接连接子和药物有效载荷、最佳药物有效载荷是什么样的？这些问题需要我们深刻理解ADC各个组分的生物学和化学特性，才能获得满意的答案。 微管破坏药物 金盏花素 Auristatins是ADC中使用的重要有效载荷，最著名的家族成员MMAE存在于两种上市药物Adcetris和Polivy中。目前，超过10种以金盏花素（如MMAE）或一甲基金盏花素F（MMAF）为有效载荷的ADC正在进行临床试验。 上图描述了auristatine及其常用的连接位点。金盏花素的构效关系（SAR）已被广泛研究，主要集中在末端亚单位：P1（N-末端）和P5（C-末端），最常见的方法是在P1上引入氨基甲酸酯功能。 2015年，西雅图遗传学的研究人员将ADC有效载荷的范围扩大到包括叔胺，特别是N-二甲基auristatine，首次通过铵键将药物与单克隆抗体结合。所得ADCs在生理条件下稳定，体内外活性高，免疫特异性强。这些结果扩大了ADC可用于靶向给药的药物种类。 最近，Agensys公司通过调节中心亚基P2-P3-P4，将叠氮化物基团引入P2和P4亚基，在与蛋白酶可裂解的连接子偶联后，产生了在体外和体内效力提高的亲水性衍生物，这为连接子的连接提供了新途径。 一般来说，在同时含有胺和醇反应的auristatin中，首选的连接点是胺通过氨基甲酸酯键偶联。西雅图遗传学开发了一种新的策略，将含醇的有效载荷与亚甲基烷氧基氨基甲酸酯（MAC）偶联。为了稳定MAC键，碱性基团和吸电子基团都靠近氨基键，结果表明，该偶联物在生理条件下是稳定的，具有很高的效价，并且在体内外都具有免疫特异性。 此外，乌普萨拉大学的研究人员还开发了AZASTATIN，作为一类新的强有力的auristatin衍生物，包含一个中心胺侧链的抗体结合位点。他们的研究结果证实，这些auristatin衍生物是一类新的细胞毒性有效载荷，适合ADC开发。 美登素衍生物（DM2，DM4） 美坦辛是一种非常有效的微管组装抑制剂，可诱导细胞的有丝分裂停止。但是这种结构很难共轭，因为它没有反应性官能团，为了克服这个问题，一系列含有SMe基团的非常有效的衍生物被创造出来。这一类分子的第一个例子是DM1和DM4，它们带有甲硫丙酰基而不是天然N-乙酰基。 从有效载荷DM1和DM4中，通过使用二硫键与连接子偶联。稳定的二硫键连接子在血液循环中表现出良好的稳定性，同时在细胞内保持有效的分裂。 此外，几种基于maytansine的ADC利用相同的二级羟基作为附着点，并在大多数情况下携带转谷氨酰胺酶生物结合的连接子。例如，一种基于Daratumumab的ADC被证明能向CD38过度表达的癌细胞特异性地传递DM4。最近ImmunoGen开发了一种新型的ADC，它包含一种含硫的maytansinoid，通过一种高度稳定的三肽连接体连接到抗体上，附着点与上述羟基相同。与先前的美登素ADC相比，增加连接物中亚甲基单元的数量增加了旁观者杀伤活性，并提高了小鼠体内的疗效。在类似的方法中，保持核心大环不变，Regeneron和Abzena的研究人员研究了N-甲基丙氨酸氮取代的影响，也改变了大环上侧链的长度，以及通过伯胺和仲胺连接的连接子。 微管溶素 Tubulysins是微管聚合的有效抑制剂，可导致分裂细胞的细胞骨架迅速解体，并导致细胞凋亡。它们是一个天然存在的四肽家族，含有Mep、Ile、Tuv和Tut，R3=OH或Tup，R3=H。 利用Tubulysins作为ADC有效载荷，其广泛的附着点已被充分开发。这种结构中一个明显的附着点是Tut或Tup模块的羧酸，如Endocyte的EC1428，其中羧酸通过酰肼部分连接到连接子。Oncomatryx公司也采用了同样的方法，以同样的方式安装了可切割的PABAValCit马来酰亚胺连接子。 阿斯利康、百时美施贵宝和辉瑞使用的另一种方法依赖于Tup或Tut中苯环的衍生化。 连接子与Mep基团的连接也得到了广泛的研究。Ingenica研究人员报告说，去甲基Mep类似物保留了强大的细胞毒性活性，可被视为有价值的有效载荷，允许在仲胺上引入不可切割的马来酰亚胺己基连接子。 Oncomatryx的研究表明，当Mep被另一个拥有仲胺的基序取代时，通过氨基甲酸酯键引入可切割的连接体是产生ADC的有效途径。特别有趣的是，基因泰克关于通过季铵基团将连接子连接到含叔胺的有效载荷上。在有效载荷上引入mc-Val-Cit-PABA连接子导致更多亲水性结合物并改善了血液中的稳定性。西雅图遗传学也采用了同样的方法，通过过度表达葡萄糖醛酸，葡萄糖醛酸连接子也可以改善亲水性和选择性的细胞内切割通过癌细胞中过表达的β-葡萄糖醛酸酶。 隐粘菌素 隐粘菌素（Cryptomycins，CR）是一个具有抗肿瘤活性的六元大环二肽家族。已有的临床试验的结果表明，在达到治疗效果所需的剂量下，其毒性水平是不可接受的。 几个小组尝试将CR用于ADC，但是由于在CR中缺少偶联位点，目前，有两种不同的方法通过引入其它基团，使得能够连接ADC的连接子。一种是由基因泰克的研究人员将苯转化为苄胺以产生有效的有效载荷，这种有效载荷适合通过氨基甲酸酯键连接。在第二种方法中，四川大学的研究人员利用了隐霉素-52的前药形式（CR55），它可以在生理条件下重新环化为CR52。  抗有丝分裂EG5抑制剂 纺锤体驱动蛋白（KSP，也称为Eg5或KIF11）是一种ATP依赖性运动蛋白，参与细胞周期中心体的分离。因此，用KSP抑制剂（KSPis）阻断有丝分裂中的这一重要事件可产生抗肿瘤效力。 拜耳发现了一个新的吡咯亚类的KSPis，他们研究了该分子不同位置与保持对KSP强亲和力的连接子的连接兼容性。 同样，诺华的研究人员使用含咪唑的KSP抑制剂作为Eg5 ADC。利用伯醇或仲酰胺部分，他们安装了带有马来酰亚胺端基的不可裂解连接子。当与靶向HER2和c-KIT的抗体偶联时，得到的ADC显示出优于Kadcyla的体内疗效。 DNA损伤药物 吡咯苯并氮卓类和吲哚氯苯并氮卓类 吡咯并[2,1-c][1,4]苯二氮杂卓（PBD）是一类具有抗肿瘤活性的天然产物。它们的作用方式是在DNA的小凹槽中进行选择性烷基化，其中鸟嘌呤的N2与PBD上的亲电N10/C11亚胺形成共价键。 西雅图遗传学使用SGD1882的苯胺作为附着点，模仿可切割连接子中常用的PAB单元，释放自由的PBD有效载荷。StemCentrx与Spirogen合作，利用PBD的N-10位置连接一个氨基甲酸酯的连接子。同样的氨基甲酸酯键也被Immunogen用于结构相似的吲哚氯苯偶氮卓二聚体（IBD）有效载荷。他们还报道了同一类IBD的不同方法，其中一个取代的苯环被用作两个IBD单体的C8/C8'位置之间的连接物。 以类似的方法，Spirogen和Genentech设计了一种碘苯连接的PBD，允许在过渡金属催化反应中引入不同的连接子。通过使用Sonogashira偶联、Buchwald–Hartwig偶联或叠氮化物-炔烃点击反应，分别获得炔烃、哌嗪或三唑连接的连接子有效载荷共轭物。 杜卡霉素 杜卡霉素是一种强大的细胞毒性物质，通过其高活性的环丙烷环与DNA的小凹槽结合，并在N3位置烷基化腺嘌呤。非环化的，卤甲基形式的杜卡霉素细胞毒性活性显著降低。由于分子中苯酚基团可作为内消旋体激活剂，从而形成亲电环丙烷，因此杜卡霉素ADC开发中的连接策略集中于酚官能团的连接子连接。 在Synthon开发的SYD985中，苯酚基团是通过双氨基甲酸酯连接连接子与Mc-val-cit-PABC有效载荷的位置。组织蛋白酶B裂解后，游离苯酚促进分子内重排成亲电环丙基形式。Medarex采用了一种不同的方法，通过分子非烷基化部分的芳香胺连接连接子，并用N-甲基哌嗪氨基甲酸酯部分掩蔽苯酚前药。在体内，苯酚将被释放，随后活性环丙烷将在羧酸酯酶的作用下形成。 喜树碱 喜树碱（CPT）及其衍生物是拓扑异构酶I抑制剂的经典例子。它们稳定了拓扑异构酶诱导的DNA单链断裂，当三元DNA-TOP1-抑制剂复合物遇到复制叉时，DNA发生双链断裂。天然喜树碱是一种五环结构，其极低的溶解性阻止了其作为癌症治疗药物的广泛应用。其水溶性前药伊立替康获得了转移性结直肠癌的上市许可。SN-38是伊立新坦的活性代谢物，通过人体肝脏羧酸酯酶的作用在体内生成，其可通过打开内酯环而失活。 Immunomedics建立了两种不同的策略，通过其羟基部分结合SN-38。在一个例子中，连接子通过反应性更强的C-10苯酚基团连接，从而产生稳定的氨基甲酸酯键，而在另一个例子中，通过C-20羟基，同时稳定内酯形式，而C-20羟基对体内效力至关重要。 另一种适合ADC的非常有效的药物是依沙替康（DDX-8951f）。这种喜树碱类似物在其环己烷环上具有胺取代基，桥接7和9位。依沙替康的氨基有助于其水溶性，而环己烷环赋予的刚性被认为有利于活性内酯形式与非活性水解羟基酸的平衡。氨基羟基乙酰化生成DXd（1），而4-氨基丁酰化生成DXd（2），这两种化合物都保留了依沙替康的生物活性。 悬垂的羟基和氨基是明显的附着点，可使用酶可切割的Gly-Gly-Phe-Gly四肽连接子连接有效载荷。与抗HER2抗体偶联产生的ADC在临床环境中显示出对抗HER2表达癌症的巨大潜力。 DXd的环己胺环虽然被认为稳定了生物活性内酯形式，但它携带了一个手性中心，使合成工作和SAR研究复杂化。为了克服这一困难，Immunogen的研究人员研究了一组新的喜树碱类似物，这些类似物能够与单抗偶联。并且在这里，这个环被打开，额外的手性中心被消除。从一种常见的中间产物开始，研究人员尝试了三种类型的结构，并随后使用不同的聚苯胺连接子连接有效载荷。当与抗人表皮生长因子受体（HuEGFR）的抗体偶联时，产生的ADC对EGFR阳性的HSC-2肿瘤异种移植模型有效。 卡奇霉素 卡奇霉素是一类被广泛研究的烯二炔类抗生素，其结构和作用机制特别有趣和复杂，使其成为ADC有效载荷领域的一类抗生素。在ADC中连接calicheamicin的策略以市场上的adc Mylotarg为例，还有Besponsa。 有效载荷的释放分两步进行：在酸性细胞内环境中对腙进行敏感的裂解，然后通过细胞内谷胱甘肽还原二硫键。释放的硫醇发生分子内1，4-加成的烯酮触发伯格曼环化反应，产生一个二自由基。这种活性中间体能够从脱氧核糖骨架中提取氢原子，产生双链DNA断裂，进而导致细胞死亡。 最近，从不列颠哥伦比亚地衣中发现的链霉菌中分离出一种新的烯二炔类天然产物，称为uncialamycin。这种结构通过全合成得到证实，从那时起，一些高效的合成类似物被制备成ADC的潜在有效载荷。 BMS的研究人员表明，由于在各种肽偶联条件下反应活性较低，因此，Uncialamycin的仲胺不是一个合适的连接点。研究人员合成了一种类似物，其中一个氨基直接引入到芳香环上，但这种苯胺的反应性也太弱，不能作为连接子引入的基团。另一方面，使用氨基乙基延伸物安装脂肪族胺，为连接子提供了合适的连接点。 从后一个有效载荷中，他们使用蛋白酶可切割的二肽和不可切割的连接子制备前体。CD70-ADC具有可切割连接体，对肾癌细胞株具有高度特异性的细胞毒活性，而相应的不可切割ADC在同一细胞株上不具有活性。 最近，为了继续这项工作，BMS的研究人员在设计的、高效的、化学稳定的uncialamycin类似物中使用苯酚基作为附着点。使用新开发的苯酚烷基化，在有效载荷的苯酚基团上添加了一个经典的可裂解连接子。将产生的有效载荷与抗体偶联，其在体外和体内均显示抗原特异性抗肿瘤活性。 创新药物 凋亡诱导剂（Bcl-xL抑制剂） 抗凋亡Bcl-2家族成员（包括Bcl-xL）的过度表达是癌细胞获得凋亡抵抗的机制之一。能够阻断Bcl-xL上BH3结合域的药物可以触发癌细胞凋亡。2017年，AbbVie首次以ADC的形式展示了BcL-xL抑制剂的有效载荷，其靶向表达EGFR的特定细胞或组织。有趣的是，研究人员在有效载荷上使用了三个不同的连接点来连接可切割的连接子。氨基烷基延伸的核心修饰用于在需要时建立合适的连接位点。 泰兰司他丁及其类似物 靶向剪接体是一种参与mRNA加工的大型核糖核蛋白复合物，为靶向癌症治疗提供了一种有希望的治疗选择。有几种天然产物能够通过与不同的剪接体亚单位结合来抑制RNA剪接。最具代表性的是thailanstatin A，它可以与剪接体的SF3b亚单位结合，从而阻止RNA剪接。 Thailanstatin A缺乏一个适合连接连接子的基团。为了解决这个问题，将羧酸与乙二胺偶联以引入含有胺的间隔基，该间隔基通常用于连接子的安装。 将这种天然产物用于ADC的另一个困难是存在多种反应性功能。例如，中心核中的二烯可以通过Diels–Alder反应与用于生物结合的马来酰亚胺部分反应。这个问题是通过使用另一个共轭部分，卤代乙酰胺来解决的。结合这两种修饰并包含可切割连接子的ADC首次在专利文献中报道，并且声称它们在几个表达HER2的细胞系中具有适度的活性。 最近，辉瑞报告说，羧酸直接与抗体的有效表面赖氨酸（无连接子偶联）结合导致迄今为止最有效的Thailanstatin ADC。这些赖氨酸偶联物的活性与药物负载有关，而其他有效载荷类通常没有观察到这种特性。ADCs在胃癌异种移植模型中显示出良好的作用。 鹅膏毒素  在ADC技术领域，使用类似amatoxins的转录抑制剂是一种相对较新的方法。九种天然存在的amatoxin衍生物具有相同的骨架结构，一个由八个L-构型氨基酸组成的大环，通过亚砜部分连接在色氨酸和半胱氨酸残基之间。amatoxins的三个侧链是羟基化的，OH基团具有良好的水溶性并与目标分子结合。两种肽，α-鹅膏糖蛋白和β-鹅膏毒素，占所有毒素的90%。 在amatoxins上共使用过三个附着点产生ADC。第一次尝试是将β-鹅膏毒素的羧基偶联到IgG上赖氨酸的氨基，这种连接具有良好的血浆稳定性和高细胞毒性，但这种生物偶联的产率很低。二氢异亮氨酸的羟基也被认为是一个连接点，引入谷胱甘肽作为连接子，然后通过赖氨酸结合，可获得体外细胞毒性和体内抗肿瘤活性优异的ADC，但不幸的是，由于血清羧酸酯酶裂解连接子，导致其循环稳定性差。第三种方法，附着于色氨酸的6-羟基代表了目前的标准程序，苯酚与各种连接子的醚化导致了高度稳定和有效的ADC。由于鹅膏毒素其它氨基酸要么不具化学活性，要么是与RNA聚合酶II结合的关键，因此不能将其它的鹅膏毒素氨基酸（即羟脯氨酸、甘氨酸、异亮氨酸和半胱氨酸）用于偶联。 基于amanitin的代表性的ADC为HDP-101。有效载荷本身是一种合成的金刚烷醇衍生物，优化了稳定性。与天然天麻素相比，两个差异是色氨酸中没有6′-OH，硫醚链取代亚砜。通过天冬氨酸侧链上酰胺的形成，引入组织蛋白酶B-裂解连接子。 最近，Park及其合作者为含苯酚的有效载荷设计了一种新的连接基序（OHPAS）。它是一种二芳基硫酸盐，一个芳基部分来自有效载荷，另一个来自连接基序的潜在苯酚基团。将该技术应用于曲妥珠单抗ADC中的a-鹅膏毒素，在体外和体内表现出强大的细胞毒性。 烟酰胺磷酸核糖转移酶 烟酰胺磷酸核糖基转移酶（NAMPT）是一种负责将烟酰胺转化为烟酰胺单核苷酸的酶，其抑制剂在各种临床前和临床研究中显示出有效性，但其临床应用受到靶向毒性和剂量限制性毒性的限制，如血小板减少和胃肠道不良反应。 诺华公司的研究人员在NAMPT抑制剂有效载荷中的苯环对位中引入哌嗪部分，确定了合适的连接子附着点。这种分子在c-Kit和HER2表达细胞系上表现出纳摩尔水平的效力，并且耐受性良好，在体内表现出靶向依赖性。 卡马霉素 从库拉索菌中分离得到两种新的蛋白酶抑制剂，卡马霉素A和卡马霉素B。两者都具有亮氨酸衍生的α,β-环氧酮弹头直接连接到甲硫氨酸亚砜或甲硫氨酸砜。他们被发现能抑制酿酒酵母20S蛋白酶β5亚单位活性（糜蛋白酶样活性）。此外，它们对肺癌和结肠癌细胞株具有很强的细胞毒性。 然而，由于它们的高效价，它们的选择性较差，经常表现出毒副作用。因此，剧毒的卡马霉素衍生物适合作为ADC的弹头，可以保持所需的效力，并获得更好的耐受性。所设计的类似物均在P2位置并入砜甲硫氨酸衍生物（如卡马霉素B），而不是卡马霉素A中的亚砜甲硫氨酸，因为这消除了亚砜基立体异构体混合物产生的结构复杂性。  第一代类似物在P4末端含有胺基，不幸的是，这个附着点并不合适，因为有效载荷显示细胞毒性活性降低。第二代卡马霉素类似物在P2侧链上含有一个胺基，当短乙基氨基链延伸磺酰基时，效果最好。在第三代类似物中，芳基连接砜和胺，因此降低了它的碱性。第二代和第三代有效载荷都显示出强大的体外活性，并用可切割或不可切割的连接子连接。不幸的是，没有一种ADC对受试癌细胞系表现出比曲妥珠单抗更高的细胞杀伤能力。 参考文献： 1.The Chemistry Behind ADCs. Pharmaceuticals (Basel). 2021 May; 14(5): 442. 公众号内回复“疫苗篇”或扫描下方图片中的二维码免费下载《小药说药疫苗篇》的PDF格式电子书！ 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过去十几年，ADC技术逐渐成熟，并在实体瘤和血液瘤取得了很大突破。目前，有超过140多款ADC药物进入临床阶段，15款已经获批上市。不过，传统以单抗为基础的ADC也面临着一些困境，包括非预期毒性、耐药的出现等。造成这一局面的原因很多，比如实体瘤的异质性导致靶向单一抗原的临床有效性有限；靶抗原下调、抗体结合表位突变、旁路激活、靶抗原内吞抵抗等引发的耐药；抗原在正常组织的表达、连接子的不稳定等引发的脱靶毒性。解决以上问题的一个策略是双抗ADC路线，如下图所示，较单抗ADC额外增加一种抗原结合能力，可以是同一抗原的不同表位，也可以是不同抗原的不同表位。目前已经至少有12款双抗ADC处于临床不同阶段，超过50款双抗ADC处于临床前不同阶段，临床阶段的产品多以表皮生长因子家族的靶点为主，如HER2、HER3、EGFR，其次是c-MET、MUC1和TROP2靶点。目前进展最快的产品均是由我国生物医药企业开发，四川百利天恒的HER3*EGFR双靶ADC伦康依隆妥单抗、康宁杰瑞的HER2*HER2双表位ADC JSKN-003已经处于临床Ⅲ期研究阶段，紧随其后的是正大天晴开发的TQB2102，同样是靶向HER2不同表位。下表是统计的临床和临床前阶段的双抗ADC产品清单。伦康依隆妥单抗（Izalontamab Brengitecan; BL-B01D1）伦康依隆妥单抗由四川百利天恒子公司Systimmune开发，是一款EGFR*HER3双靶点的抗体-药物偶联物，结构如下图所示。2023年ASCO，Systimmune公布了在NSCLC、鼻咽癌等瘤种中的数据，如下表所示，在NSCLC中的数据非常惊艳。其中，34例EGFR突变的患者，30例前期已经用过三代EGFR TKI治疗，ORR还有61.2%，DCR高达91.2%。42例EGFR野生型患者中，37例一线已经用过PD-1/L1联合铂类为基础的化疗，ORR为40.5%，DCR高达95.2%，明显优于多西他赛标准化疗方案。2023 年12月11日， SystImmune与BMS就 BL-B01D1项目达成独家许可与合作协议。BMS 将向SystImmune 支付8 亿美元的高额首付款，和最高可达5 亿美元的近期或有付款；达成开发、注册和销售里程碑后，SystImmune 将获得最高可达71 亿美元的额外付款；潜在总交易额最高可达84亿美元。根据协议，双方将合作推动BL-B01D1在美国的开发和商业化。SystImmune将通过其关联公司独家负责BL-B01D1在中国大陆的开发、商业化以及在中国大陆的生产，并负责生产部分供中国大陆以外地区使用的药品。BMS将独家负责BL-B01D1在全球其他地区的开发和商业化。协议签订以后，从2023年底到现在，SystImmune /BMS连续启动了 6项Ⅲ期临床研究，分别是PD-1/L1抑制剂+铂类联用治疗失败的EGFR野生型NSCLC、与铂类化疗联用治疗EGFR TKI经治失败的EGFR突变型NSCLC、二线以上鼻咽癌、紫杉醇治疗失败的三阴乳腺癌、PD-1/L1抑制剂+铂类联用治疗失败的复发或转移性食管鳞癌、一线化疗失败的HR+HER2-乳腺癌。JSKN003JSKN003是由康宁杰瑞开发的HER2双表位ADC，结构如下图所示。抗体部分是共轻链结构，重链则由已上市的HER2单抗曲妥珠单抗、帕妥珠单抗组成，靶向HER2胞外区的ECD2和ECD4两个表位，连接子为可切割dibenzocyclooctyne tetrapeptide，毒素为TOP I抑制剂，通过糖基定点偶联，DAR值约为4。JSKN003-101是该产品的首次临床试验，在晚期实体瘤患者中开展剂量爬升+扩组，1-8.4mg/kg，Q3W。截止2024年3月15日，共入组32例患者，大部分为经过3线及以上治疗的患者，ORR为56.3%、DCR为90.6%。按照HER2表达进行分级，IHC 1+、2+、3+的ORR分别为66.7%（6/9）、37.5%（6/16）、85.7%（6/7）。HER2+乳腺癌、HER2-乳腺癌患者中的ORR分别为100%（5/5）、50%（5/10）。安全性方面，27例患者（84.4%）出现治疗相关的AE，4例患者出现3级AE。常见AE为腹泻、恶心、乏力、呕吐和食欲减退等，直至剂量达到8.4mg/kg，尚未达到MTD剂量。康宁杰瑞已经于2023年12月启动了JSKN003的Ⅲ期临床研究，用于治疗HER2低表达的、一线或二线治疗失败的复发或转移性乳腺癌。TQB2102TQB2102由正大天晴开发，与JSKN003有点类似，也是靶向HER2胞外区的ECD2和ECD4两个表位，采用酶切割连接子，毒素为TOP I抑制剂氘代DXd，DAR约为5.8。未披露太多临床数据。目前进展最快的临床试验处于Ⅱ期阶段，2024年2月启动，用于HER2阳性乳腺癌患者的新辅助治疗。与康宁杰瑞同靶点产品JSKN003的临床开发策略区别还挺大的。处于临床阶段的HER2双表位ADC还有MEDI4276、ZW49（Zanidatamab zovodotin）、KM501MEDI4276结合HER2 ECD2和ECD4两个表位，由可切割多肽连接子经半胱氨酸残基偶联微管蛋白抑制剂tubulysin毒素（AZ13599185），DAR约为4。Ⅰ期临床数据显示，胃癌和乳腺癌患者中，0.05-0.9mg/kg，Q3W，剂量爬升，探索安全性和初步有效性。结果发现，0.4、0.6、0.9mg/kg均出现了剂量限制性毒性（DLT）。0.5mg/kg出现1例乳腺癌患者CR，0.6和0.75mgkg出现2例乳腺癌患者PR。MEDI4276人体MTD剂量<0.3mg/kg，出现药效的剂量均高于该剂量，安全窗口几乎没有。本品自2015年启动Ⅰ期临床，2021年披露数据后，就再无进展。ZW49结构如下图所示，是由HER2双抗ZW25，经v-c连接子偶联微管蛋白抑制剂ZD02044而成，DAR值为2，不算高。ZW49公布的Ⅰ期临床数据显示，在前线已经经过曲妥珠单抗、帕妥珠单抗或者T-DM1治疗的HER2+肿瘤患者中，增加给药频率并未体现出ORR的改善，2.5mg/kg Q3W是其RP2D剂量。该剂量下的ORR约为30%，中位DOR约为6.8个月。有句老话说的好，“不怕不识货，就怕货比货”，ZW49这个数据跟第一三共的DS8201、康宁杰瑞的JSKN003一比，就有些不够看了。百济神州2018年拿到的亚太区权益，已经于2023年下半年退回给了Zymeworks。ZW49单药的竞争力和前景比较有限。还有一款国内轩主生物/康明百奥开发的KM501，结合HER2 ECD2和ECD4两个表位，比较有特色的是抗体部分采用的去岩藻糖设计，ADCC活性会显著增强，动物试验中看到在中低HER2表达肿瘤中显示出不错的抑瘤效果。未见临床数据披露。REGN5093-M114REGN5093-M114由Regeneron开发，也是一个针对单靶点双表位的ADC，只不过不是HER2靶点，换成了MET靶点，抗体端的赖氨酸残基通过可切割连接子，与微管蛋白抑制剂美登素衍生物M24共价偶联，DAR约为3.2。MET是一个单跨膜酪氨酸激酶受体，约24-75%的非鳞NSCLC过表达MET。REGN5093-M114正在开展MET过表达NSCLC的Ⅰ/Ⅱ期临床研究，截至2023年6月26日，已经完成5个剂量的爬升，共入组18例患者，未披露太多其他数据。AZD9592AZD9592由阿斯利康开发，是一款MET/EGFR双靶点ADC。MET和EGFR在NSCLC和头颈鳞癌中共表达。阿斯利康在EGFR靶点领域有一款明星产品，即第三代EGFR抑制剂奥希替尼，临床发现奥希替尼耐药的患者多出现MET受体过表达，故AZD9592这款双靶ADC有可能对奥希替尼耐药的患者有效。其实，百利天恒的那款HER3/EGFR双靶ADC，其中一个临床开发策略也是针对三代EGFR耐药的患者。但是，二者的设计有明显不同，百利天恒选择的是高EGFR亲和力、低HER3亲和力，阿斯利康为降低EGFR在正常组织表达引入的毒性，选择的高MET亲和力、低EGFR亲和力设计，相差>15倍。AZD9592采用的可切割连接子，毒素选择是TOP I抑制剂AZ14170132。AZD9592正处于临床Ⅰ期研究阶段，考察在EGFR突变型或野生型NSCLC、复发/转移性头颈鳞癌患者中安全性、有效性情况。EGFR不只与MET可以组合，还有1款EGFR/MUC1 ADC、1款EGFR-B7H3 ADC处于临床Ⅰ期阶段。M1231是由Merck开发的一款EGFR/MUC1双抗ADC，比较有特色的是引入了非天然氨基酸进行定点偶联，毒素为新型微管蛋白抑制剂，连接子为可切割型的ValCit-PABA。MUC1和EGFR在很多肿瘤中共表达，如食管鳞癌、NSCLC、头颈鳞癌、宫颈癌等。MUC1/EGFR在正常组织的共表达比例很低。双靶的预期是降低在正常组织中的毒性。不过，从进度看，M1231于2021年启动Ⅰ期临床研究后，再无数据更新。根据其合作方SUTRO BIOPHARMA披露的信息，2014年5月双方达成合作协议，2020年第二季度递交IND，2023年，Merck子公司EMD Serono宣布关闭Ⅰa期临床，且不再进行扩组研究，给出的解释是出于strategic portfolio考虑。2023年9月，M1231还在Merck产品管线中，随后没多久，就从管线中消失了，基本宣告失败。IBI3001是信达生物开发的一款糖基化定点偶联，针对EGFR/B7H3的双抗ADC，抗体部分为IBI334，毒素部分为TOP I抑制剂Exatecan，DAR值约为4。B7H3除了与EGFR在某些肿瘤表面共表达以外，还能增强EGFR信号的阻断。临床前研究证实，IBI30031对B7H3lowEGFRlow、B7H3lowEGFRhigh、B7H3highEGFRlow、B7H3highEGFRhigh细胞系均有杀伤作用，对B7H3-EGFR-也有旁观者杀伤效果。体内异源移植瘤模型可以看到对NSCLC、结直肠癌、胰腺癌、乳腺癌明显抑瘤作用。在小鼠体内的PK可达到282h。食蟹猴给药剂量高达90mg/kg/week依然耐受良好。目前本品正在开展Ⅰ期临床研究，尚无临床数据披露。临床前阶段的双抗ADC总体看，临床前双抗ADC国内企业研发比较多，布局最多的应该是百奥赛图/多玛医药/思道医药3家关联企业，前2家公司董事长都是沈月雷博士，第3家公司思道医药由多玛医药全资控股，3家公司合计至少15款双抗ADC产品在推进，靶点主要是EGFR、TROP2、HER3、MUC1、5T4、PTK7、MET的两两组合。感觉像是从原来的OX40、CD40、CTLA-4、4-1BB免疫检查点单抗管线，转而全面拥抱双抗ADC这条火热赛道。有前期大量抗体储备，这种转型确实要快上很多。除以上公司外，国内还有爱科瑞思、康源久远、多禧生物、复宏汉霖、科弈药业、普米斯、普方生物、橙帆生物、祥耀生物等有双抗ADC布局。由于临床前的管线比较早期，很多公司其实并未对外披露，很多之前做单抗、双抗的企业，将双抗ADC视为一次难得的弯道超车的机会。毕竟，单抗技术门槛太低，很难做出差异化，CD3/TAA双抗受限于实体瘤的突破难度，获批的还是以血液瘤为主。单抗ADC算是抗体药物的一条出路，但肿瘤异质性很强，且单靶会出现耐药，其中一种耐药机制是旁路信号的激活，所以双抗ADC理论上能更大程度解决单抗ADC的问题，更何况单抗ADC才上市了15款而已，双抗ADC的对手还不是单抗ADC，而是传统的标准治疗如化疗等。  写在最后  ADC这条赛道近两年很是火热，但实际上还是需要保持理性，毕竟那么多年仅上市了15款，临床失败了近100款，不要被幸存者偏差所误导，大部分其实成了前浪，全倒在了沙滩上。单抗ADC大戏还没唱完，双抗ADC赛道又开始蠢蠢欲动，硝烟四起。但其实回顾下目前在研的双抗ADC，只有百利天恒的EGFR/HER3、康宁杰瑞的HER2双表位两款ADC产品还算顺利，其它产品虽比较早期，但已经有产品（MEDI4276、ZW49）遇到问题，先后推出，后续产品究竟临床表现如何，尚未可知。另外，双抗ADC绝对不是简单的两个靶点的自由组合，即使是共表达靶点如德国默克的EGFR/MUC1双靶ADC M1231，也还是未能如愿推进。目前开发双靶ADC的企业，国内占了大半，如果说国内企业在靶点方面的认知超过Merck、AZ这些MNC，几乎不太可能，更多还是基于竞争对手管线、单抗ADC数据、靶点共表达等进行靶点筛选和组合。这其中，由于EGFR背后涉及的适应症是NSCLC这类大适应症，尤其受欢迎，开发以EGFR为基础的双靶ADC的企业占比很高，靶点组合包括EGFR/HER3、EGFR/c-MET、EGFR/MUC1、EGFR/TROP2、EGFR/PTK7等。毕竟有百利天恒与BMS的EGFR/HER3双抗ADC的重磅交易在前，使这一赛道更具诱惑。ADC的门槛很低，单抗大部分抗体企业都会做，连接子和毒素也已经有商业化CRO成熟供应，想开发个ADC产品的难度较前几年容易很多，所以做抗体的企业趋之若鹜。ADC的门槛也很高，高到虽未开始，但结局已定，现实情况是90多个临床失败，成功上市的仅10多个。想要成功渡劫，就要有真功夫，既需要对靶点有深刻认知，也需要对分子设计有独到理解。尤其后者，同样靶点，为何有些成功，有些失败，是毒素原因（如本文中提到的几款HER2双表位ADC）、偶联原因（如DAR值）、亦或是抗体原因（如两个靶点的亲和力调节），都要深入分析。对于双抗ADC，还是要保持敬畏之心。  BiG 十周年预告  6月26-29日，苏州，将召开BiG十周年庆典，此次会议将首次分为国内和国际篇章，以原创科学和临床需求为出发点，讨论创新技术平台和创新疗法（PROTACT/分子胶、双抗/ADC、siRNA/ASO、CGT、AI制药）的重大进展和发展前景，十年一药曙光现，大浪淘沙始见金！▼架构&完整议程（点击图片，跳转链接）论坛2:  抗体&ADC：从创新靶点到临床进展冠名支持：东曜药业策划：田  丰、刘  军B2皇冠宴会厅C上半场：抗体&ADC，新靶点与新技术14:00-14:30 肺癌领域：双抗&ADC最新临床开发进展周彩存：同济大学附属东方医院肿瘤科主任14:30-15:00 全球ADC新一代技术亮点梳理田   丰：Luxvitae Therapeutics 联合创始人/CEO15:00-15:30 肿瘤全新免疫检查点CD3L1：从源头发现到新药研发许  杰：柏全生物创始人15:30-15:50 善用糖定点偶联技术构建创新ADC分子段  清：东曜药业药物研发及技术开发负责人15:50-16:10 Break下半场：CD3双抗与双抗ADC16:10-16:40 CD3双抗：全球进展&创新设计思路康小强：维立志博董事长/CEO16:40-17:00 高通量仿临床研究平台，如何加速双抗/ADC开发陈大为：创模生物联合创始人、CSO17:00-17:40 Panel：如何开发一款双抗ADC？靶点选择vs.CMC开发vs.临床&市场潜力刘    军：东曜药业CEO兼执行董事（主持）李    竞：橙帆医药联合创始人/CEO周    辉：信达生物集团高级副总裁更多讨论嘉宾邀请中公开会议报名参会 会议门票：审核制(免费)；含主论坛+分论坛，不含餐；优先biotech/Pharma、临床、院校科学家。共建Biomedical创新生态圈！如何加入BiG会员？