ADC的临床成功离不开连接子的精准设计—作为连接抗体与细胞毒性载荷的“桥梁”，连接子需在血液循环中保持稳定，同时在肿瘤部位高效释放载荷，其性能直接决定ADC的治疗窗口。
目前全球已获批的19款ADC中，16款采用可切割连接子，其中11款为酶切肽连接子（如Val-Cit、Gly-Gly-Phe-Gly），成为临床主流选择。然而，传统肽连接子存在结构同质化、小鼠血浆稳定性差、高DAR下易聚集等缺陷。
基于切割机制，连接子分为不可切割型与可切割型：不可切割型依赖抗体在溶酶体中的降解释放载荷，无旁观者效应，仅适用于高抗原表达肿瘤。可切割型通过肿瘤微环境的低pH、还原环境或特异性酶（如组织蛋白酶B）触发切割，适用范围更广。目前临床中酶切肽连接子占比最高，其核心优势在于—通过设计特异性肽序列，可精准匹配肿瘤相关蛋白酶的底物偏好，实现“肿瘤特异性释放”。
一：临床阶段肽连接子的“进化之路”
临床转化验证了多款经典肽连接子的价值，其序列设计、酶切机制与临床应用各具特色，构成ADC连接子技术的“基石”。
1.Val-Cit连接子：最成功的二肽连接子
1993年BMS首次设计Val-Cit-PABC结构，2002年通过系统筛选证实其为组织蛋白酶B的优质底物—P1位Cit（瓜氨酸）与P2位Val（缬氨酸）的组合可高效被酶切割，同时引入对氨基苄基氨基甲酸酯（PABC）自噬间隔臂，确保载荷完全释放。
全球7款获批ADC采用Val-Cit-PABC-MMAE组合（如维布妥昔单抗、戈沙妥珠单抗），覆盖淋巴瘤、乳腺癌等多种肿瘤。
酶切灵活性：除组织蛋白酶B外，组织蛋白酶L、S、Z也可介导切割，且在循环内体（而非仅溶酶体）中即可释放载荷，扩大适用抗原范围（如MET、EGFR等循环受体）。
2.Val-Ala连接子：低疏水性优势者
与Val-Cit同为组织蛋白酶B底物，但疏水性更低，可制备DAR高达7.4的ADC且聚集率<10%，显著优于Val-Cit。目前没ADC Therapeutics的loncastuximab tesirine（CD19靶向，Val-Ala-PBD）已获批治疗淋巴瘤，阿斯利康AZD8205（B7H4靶向，PEG8-Val-Ala-DXd）进入临床II期。挑战与优化：早期Val-Ala-PBDADC（如SGN-CD33A）因毒性终止开发，后续通过引入PEG修饰改善药代动力学，提升安全性。
3.Ala-Ala连接子：高DAR兼容性强者
L-Ala-L-Ala构型的治疗指数最高，其溶酶体切割速率虽慢于Val-Cit，但快于D-Ala-D-Ala，且可被组织蛋白酶B、S、F共同介导切割。在DAR=10的ADC中，Ala-Ala连接子的聚集率仅2.8%，远低于Val-Cit（>15%）。目前ImmunoGen的IMGN632（CD123靶向，Ala-Ala-IGN）用于急性髓系白血病（AML），目前处于II期临床。AbbVie的ABBV-3373（TNF靶向，Ala-Ala-糖皮质激素受体调节剂）用于自身免疫疾病，同样进入II期。
4.GGFG连接子：拓扑异构酶I抑制剂的“黄金搭档”
1994年首次报道，2013年与拓扑异构酶I抑制剂DXd结合，通过氨基亚甲基（AM）间隔臂降低疏水性，支持DAR=8的ADC制备。第一三共的曲妥珠单抗deruxtecan（DS-8201，HER2靶向）采用GGFG-DXd组合，成为HER2-low乳腺癌治疗的突破性药物，后续datopotamab deruxtecan（TROP2靶向）、patritumab deruxtecan（HER3靶向）均延续该设计。
不同于传统认知，GGFG在肿瘤微环境中主要被组织蛋白酶L切割（效率是组织蛋白酶B的5倍），72小时内载荷释放率近100%，为HER2-low肿瘤的旁观者效应提供关键支撑。
5.Val-Lys-Gly（VKG）与TMALIN连接子：肿瘤微环境激活新范式
Seattle Genetics的SGN-CD30C采用VKG三肽连接子，在肿瘤微环境中可通过两种路径切割—直接切割Lys-Gly键释放载荷，或先切割Val-Lys键生成中间产物后进一步释放。TMALIN平台：中国宜联生物开发的TMALIN连接子（如YL201，B7H3靶向）突破传统ADC对细胞内吞的依赖，可在肿瘤微环境中胞外切割，即使低抗原表达肿瘤也能通过旁观者效应发挥作用，目前YL201已进入III期临床，客观缓解率（ORR）达40.8%，疾病控制率（DCR）83.6%。
二：下一代肽连接子的“创新策略”
为解决传统肽连接子的缺陷，目前从序列优化、模拟肽设计、外连接子架构等方向突破，开发出多维度创新技术。
1.肽序列优化：提升酶选择性与物种稳定性
通过在Val-Cit的P3位引入极性氨基酸（如Glu），设计出Glu-Val-Cit（EV Cit）连接子—其在小鼠血浆中稳定性提升10倍，且不影响组织蛋白酶B介导的切割。进一步将P2位Val替换为Gly，得到Glu-Gly-Cit（EGCit），可同时抵抗人中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）的切割，脱靶毒性显著降低。
有研究通过FRET筛选发现，Asn-Asn序列可被肿瘤高表达的豆荚蛋白（legumain）高效切割，切割速率是Val-Cit的5倍，且在人血浆中完全稳定，无NE介导的过早释放。拜耳开发的Ala-Ala-Asn连接子，通过N-甲基丙氨酸修饰进一步提升特异性，其ADC在大鼠肝溶酶体中稳定性优于Val-Cit ADC。
2.模拟肽策略：增强蛋白酶特异性
环丁烷二甲酰胺修饰：基因泰克设计的cBuCit连接子，将Val-Cit的P1-P2酰胺键替换为环丁烷结构，保留与组织蛋白酶B的氢键作用，同时提升底物特异性——体外实验显示，cBu-Cit ADC对组织蛋白酶B的依赖度显著高于Val-Cit ADC，脱靶切割风险降低。
氟烯烃/三唑替换：虽尝试用氟烯烃或三唑替换酰胺键，但因氢键作用减弱，切割效率下降，提示酰胺键对酶切活性的关键作用。
3.外连接子（Exo-连接子）策略：改善高DAR兼容性
有研究将可切割肽序列置于PABC的“外端”，并引入两个Glu残基增强亲水性（如exo-EE VCit），相比线性Val-Cit连接子，其ADC的聚集率降低60%，且在小鼠血浆中稳定性提升。体内显示exo-EE VCit-DXd ADC在HER2阳性肿瘤模型中，抑瘤率较线性连接子ADC提升35%，且无明显血液毒性。
4.双级联响应策略：肿瘤特异性“双重保险”
糖基化修饰：在Val-Ala连接子中引入β-葡萄糖醛酸，需先经葡萄糖醛酸酶切割糖基，再由组织蛋白酶B切割肽键，实现“双酶触发”释放—该ADC在大鼠血清中稳定性提升40%，在Granta-519淋巴瘤模型中，抑瘤率优于单酶切ADC。
糖肽连接子：百济神州在Val-Ser（VS）连接子中引入半乳糖，通过糖苷酶与组织蛋白酶B的级联切割，支持DAR=8的ADC制备，其B7H3靶向ADC在体外活性与DS-8201相当，且人血浆稳定性更优。
5.亲水性修饰：解决高DAR聚集难题
PEG修饰：Seattle Genetics在VC-PABC连接子中引入PEG24，ADC的疏水性降低50%，DAR=8时聚集率<5%，且药代动力学参数（如半衰期）提升2倍。
聚肌氨酸（PSAR）修饰：Mablink的PSAR Link平台将PSAR10引入VA-PABC连接子，开发的MBK-103（FOLR1靶向，DAR=8）在食蟹猴中耐受性良好，目前进入I期临床。普众发现的T1000平台（PSAR修饰GGFG），其HER3靶向ADC（AMT-562）在食蟹猴中毒性显著低于未修饰ADC。
双葡甲胺修饰：Mersana在PBD载荷的连接子中引入PEG8-双葡甲胺，制备的XMT-2056（HER2靶向，STING激动剂ADC），DAR=8时仍保持良好溶解性，且肿瘤穿透性提升。
总结思考
当前肽连接子已从“单一酶切”向“精准响应”升级，核心趋势包括：多维度特异性提升、理化性质精准调控、临床转化优化。未来，随着对肿瘤微环境机制的深入解析，肽连接子将进一步实现“个性化设计”，为不同亚型肿瘤患者提供定制化靶向治疗方案。
未来需要结合单细胞测序与蛋白酶组学，绘制肿瘤特异性蛋白酶图谱，指导连接子序列设计，同时开发“肽连接子-载荷”协同优化策略，如连接子释放同时调控载荷的药代动力学。最后拓展肽连接子在双载荷ADC、降解剂-抗体偶联物（DAC）中的应用，突破传统ADC的治疗边界。
Recent Advances in Peptide Linkers for Antibody-Drug Conjugates. J Med Chem. 2025 Sep 22. doi: 10.1021/acs.jmedchem.5c01982.
