HBsAg(Zhejiang la figure parker pharmaceutical)

乙肝病毒感染引起的慢性乙型肝炎仍是我国主要的感染性疾病，乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen, HBsAg)在慢性乙型肝炎的致病过程中起重要作用。病人血液中高达300μg/ml的HBsAg除了吸附特异性的中和性抗体还损害人体针对乙肝病毒的免疫反应；经过一段时间的治疗促使病人外周血HBsAg持续性消失被认为是慢性乙肝功能性治愈的主要标志，其目的是降低慢性乙肝病人发生肝硬化和肝癌的风险。但是目前的药物治疗极少达到HBsAg持续性消失。近期有报道，采用HBsAg特异性抗体和HBV疫苗接种或抗病毒药物的联合治疗措施可使慢性乙肝病人HBsAg持续消失的比例显著提高。HBsAg特异性抗体的抗病毒效应的机制包括：中和外周血中的游离病毒以防止感染新的肝细胞从而抑制cccDNA池扩增；抗体Fc介导的效应机制；肝细胞内吞抗体抑制HBsAg分泌。内吞的抗体可在细胞内吞体或其它细胞腔室与HBsAg结合形成免疫复合物，并抑制HBsAg分泌。尽管免疫复合物累积在肝细胞内但并未观察到肝脏损伤和其它副作用。目前需要频繁静脉注射HBsAg特异性抗体才能维持有效的血浆浓度，但也降低了病人治疗的依从性。一旦停止抗体治疗，病人血浆HBsAg和病毒DNA载量经常反弹至治疗前的水平，而且HBsAg特异性抗体制备仍然繁琐而且昂贵。单链抗体(single chain variable fragment, scFv)是将抗体轻、重链可变区通过一段柔性多肽连接而成的重组蛋白，具有与亲本抗体相似的抗原结合特异性，但它的分子量更小(约30kDa)。将scFv与铰链区(hinge domain, HD)、跨膜结构域(transmembrane domain, TMD)及一个或多个细胞内结构域串联可形成嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor, CAR)。表达CAR的T细胞(CAR-T)可不依赖主要组织相容复合物(major histocompatibility complex)识别和杀伤肿瘤细胞，在治疗血液肿瘤上已显示具有显著疗效。近日，复旦大学基础医学院医学分子病毒学教育部/卫健委/医科院重点实验室王勇翔、袁正宏，于胃、肠和肝脏学领域著名期刊Gut 发表题为“Chimeric antigen receptors of HBV envelope proteins inhibit hepatitis B surface antigen secretion”的论文。介绍了该研究团队在持续抑制乙肝表抗原分泌和持续降低血循环中的乙肝表面抗原领域取得新进展。在该研究中，研究团队前期制备了高亲和力结合包膜蛋白抗原环(antigenic loop, AGL)的G12-scFv(解离常数为1.77×10-10M)，并发现外源G12-scFv可被肝细胞内吞而选择性抑制病毒体分泌(Antiviral Research, 2019, 162: 118-129; Nature Communications, 2022, 13: 4614)，这可能由于在细胞晚期内吞体内G12-scFv与病毒体结合所致。因此，推测内源性表达的G12-scFv或靶向PreS1的MA18/7-scFv可能有效地抑制病毒体或亚病毒颗粒(subviral particle, SVP)分泌。为验证这一假设，应用分泌信号肽将内源表达的G12-scFv或MA18/7-scFv及其CAR或与Fc融合的衍生物转位至内质网和分泌通路，在表达HBV的肝癌细胞系和小鼠模型中评价它们对HBsAg分泌的效应。结果显示G12-CAR能够有效阻止病毒体和亚病毒颗粒分泌，但并不引起细胞内cccDNA扩增；MA18/7-scFv及其CAR还能有效阻止HBV感染肝细胞。在HBV小鼠模型中，Fc融合的G12-scFv和G12-CAR能强烈抑制血清HBsAg(抑制效率高达130倍)；通过AAV载体表达可使抑制效应持续8周以上。深入研究发现，G12-scFv和G12-CAR能使包膜蛋白截留在内质网而阻止HBV出芽(图1)，而且这些免疫复合物并不引起细胞毒性和肝脏损伤。图1. G12-scFv或MA18/7-scFv及其CAR或与Fc融合的衍生物抑制乙肝表面抗原分泌上述结果表明，Fc融合的G12-scFv和G12-CAR代表了一种有效降低外周血HBsAg的新方法。此外，这项工作也提示CAR除了应用于T细胞治疗以外，还具有直接抗病毒活性；通过内源表达靶向包膜蛋白的CAR或scFv可用于预防其它包膜病毒感染或通过抑制病毒释放而阻止传播。该论文的通讯作者为复旦大学王勇翔和袁正宏，共同第一作者为王阳、李琦琪、李程和王丛。该工作得到了复旦大学闻玉梅院士和童舒平、上海交通大学附属瑞金医院于德敏、德国弗赖堡大学Michael Nassal等专家的支持和帮助，注：文中插图源于 Gut原文链接：http://dx.doi.org/10.1136/gutjnl-2023-330537本文仅用于学术分享，转载请注明出处。若有侵权，请联系微信：bioonSir 删除或修改！

中文摘要目的   了解西双版纳州乙型肝炎（乙肝）疫苗接种情况，评价乙肝预防效果，为制定免疫策略提供依据。方法   采取分层整群抽样法抽取西双版纳州3个县（市）0~34岁健康人群对象，收集其乙肝疫苗接种史，采集静脉血，用ELISA检测血清标志物乙肝表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）和乙肝表面抗体（hepatitis B surface antibody，HBsAb）。阳性率的比较采用卡方检验。结果   2016—2020年西双版纳州报告乙肝病例1 647例，年平均发病率35.48/10万。乙肝疫苗估算首针接种及时率为47.98%，全程接种率为55.26%。3 956名调查对象中，HBsAg和HBsAb阳性率分别为2.10%（95%置信区间：1.65%~2.54%）和65.72%（95%置信区间：65.24%~67.20%）。HBsAb阳性率男性高于女性，城区人群高于乡镇，且差异均有统计学意义（χ2分别为18.35、4.48，P值均<0.05）。3个县（市）HBsAg阳性率差异有统计学意义（χ2=11.51，P<0.01）。结论   西双版纳州农村人群乙肝免疫基础较为薄弱。薄弱地区应加强乙肝疫苗免疫接种工作，提高乙肝疫苗的接种率，做好乙肝疫苗免疫强化，完善慢性HBV感染者筛检、诊断、抗病毒治疗等综合防控措施。正文乙型肝炎（乙肝）是一种由HBV感染引起的慢性传染性疾病，主要累及肝脏，也可造成多个器官的损害。传播途径主要是体液传播，如经血液、性接触等水平传播或母婴垂直传播等[1]。主要症状是恶心、乏力、食欲不振、上腹不适和肝区疼痛等，严重时可导致肝硬化或肝癌[2-3]。乙肝是世界范围内主要的公共卫生问题之一。目前，中国慢性HBV感染人数仍然很大。根据WHO发布的数据，2018年，全球约有2.57亿乙肝表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）携带者，我国约为8 600万人，其中约3 200万需要治疗的慢性乙肝患者[4-5]。乙肝是一个严重的公共卫生问题，将在未来很长一段时间内危及人们的健康。目前，防治乙肝的方法是实施规范的筛查、预防和抗病毒治疗[6]，其中乙肝疫苗（hepatitis B vaccine，HepB）接种使机体产生免疫性抗体，从而保护人群的健康，是长期预防乙肝的最经济有效和耐受性最高的方法[7-8]。新生儿接种HepB后，儿童中的HBsAg阳性率已降至不足1%[9]，但及时接种HepB的儿童中仍存在5%~10%不能够产生有效保护性抗体，表现为无免疫应答，仍有感染HBV的可能[10]；并且HepB接种后机体内免疫保护会随着时间推移而减弱甚至消失[11]，导致发生乙肝感染。因此，通过对人群进行乙肝抗体水平的监测工作，掌握人群的免疫状况、了解发病情况、发现免疫薄弱人群和地区显得尤为重要。1材料与方法1.1监测对象和抽样方法监测对象：2016—2020年西双版纳州每年以县（市）为单位，分6个年龄组：8~17月龄、18~35月龄、3~6岁、7~14岁、15~24岁、25~34岁，每个年龄组不少于36人，全县（市）共调查不少于216人。根据分层整群抽样，在西双版纳州3县（市）中以政府所在地为中心，由里到外按顺时针方向排序，列出各县（市）内所有乡、镇（街道办事处）名称及人口数，小于1万人口的乡、镇（街道办事处）与邻近的乡、镇（街道办事处）合并成1万人以上的1个备选抽样单位。每个县抽取3个调查乡镇。为保证覆盖更多乡镇，原则上每年的抽样将剔除之前抽过的乡镇，乡镇数较少不能满足剔除条件的除外。采用随机数表的方法从3个调查乡、镇（街道办事处）中抽取9个行政村或居委会（社区）进行调查，原则上每年抽样将剔除之前抽过的村。1.2资料来源数据来源于中国疾病预防控制信息系统中传染病报告信息管理系统2016—2020年西双版纳州乙肝发病数据；人口资料来源于西双版纳州统计局。1.3标本采集和检测对受检对象采集5 ml静脉血。经240×g、20 min离心，无菌分离血清2 ml。在进行现场采集后，样本使用冷藏包带冰保存，并立即将其运送至州CDC实验室进行检测。按照统一要求，收集每名受检对象的基本信息与HepB免疫史。采用ELISA进行检测，试剂采用北京万泰生物药业股份有限公司生产的HBsAg和乙肝表面抗体（hepatitis B surface antibody， HBsAb）诊断试剂盒，并严格按照说明书进行操作。结果判定：临界值=阴性对照孔光密度（A）均值×2.1，若阴性对照孔A值＜0.05则按0.05计算；样品A值≥临界值判定为阳性，样品A值<临界值则判为阴性。1.4质量控制严格按照云南省CDC设计的方案执行，并对调查设计、收集资料、整理资料和统计分析各环节进行了严格的质量控制；在现场调查开始之前对相关人员进行技术培训；保证样本随机性。1.5统计学分析采用Excel 2010整理数据，运用SPSS 26.0 进行统计学分析。计数资料采用例数和相对数表示，并计算总体阳性率的95%置信区间（confidence interval，CI）。成组设计组间计数资料的比较，当总例数n≥40且理论频数T≥5时采用2×2表χ2检验，当n<40或T<1时采用Fisher确切概率法；多个样本率的比较采用行×列表χ2检验，并采用Bonferroni法调整两两比较的检验水准。P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1总体人群乙肝发病情况2016—2020年西双版纳州乙肝累计发病患者1 647例，年平均发病率为35.48/10万，5年间的发病率在26.69/10万~44.04/10万范围内波动，以2017年（44.04/10万）最高，2016年（26.69/10万）最低，见图1。2.2地区分布2016—2020年乙肝发病率均以勐腊县最高；勐腊县发病率呈逐年下降趋势，而景洪市发病率呈逐年上升趋势，见表1。2.3调查人群的HepB接种情况2016—2020年共调查西双版纳州3个县（市）0~34岁对象3 956名，首针接种及时率为47.98%（1 898/3 956），全程接种率为55.26%（2 186/3 956），见表2。2.4调查人群HBsAg和HBsAb阳性率的分布特征2016—2020年西双版纳州3 956名调查对象中，检出HBsAg阳性83人，阳性率为2.10%（95%CI：1.65%~2.54%）；HBsAb阳性2 600人，阳性率为 65.72%（95%CI：65.24%~67.20%）。各年份HBsAg阳性率和HBsAb阳性率间差异均有统计学意义（χ2=10.23、24.14，P<0.05）。其中，2020年HBsAg阳性率最高，2019年HBsAb阳性率最低，见表3。男性HBsAg阳性率高于女性但差异无统计学意义（χ2=0.26，P=0.607），而男性的HBsAb阳性率高于女性且差异有统计学意义（χ2=18.35，P<0.001），见表4。3县（市）的HBsAg阳性率间差异有统计学意义（χ2=11.51，P=0.003），勐腊县人群的 HBsAg阳性率最高；而各地的HBsAb阳性率差异无统计学意义（χ2=3.75，P=0.153），见表5。城区与乡镇人群相比，HBsAg阳性率较低但差异无统计学意义（χ2=0.57，P=0.449），而城区人群HBsAb阳性率高于乡镇（χ2=4.48， P=0.034），见表6。3讨论2016—2020年西双版纳州乙肝年均发病率为35.48/10万，高于2015—2019年云南省乙肝报告发病率（33.19/10万）[12]。一方面，勐腊县与老挝、缅甸接壤，正式和非正式口岸、通道繁多，边民来往频繁，可能造成发病率一直较高；另一方面，西双版纳州尤其是景洪市旅游资源丰富，吸引了大量游客，人口流动性较大，人口构成复杂，可能是造成景洪市乙肝发病率逐年上升的原因；有研究显示，HepB免疫后人群有5%~10%不产生保护性抗体或抗体水平很低[13-14]，同时血液制品的不规范使用也会增加乙肝感染和发病风险。各年发病率在26.69/10万~44.04/10万范围内波动，2016年（26.69/10万）最低，这可能与云南省2015年开始实施新版乙肝监测方案、进一步规范乙肝报告有关[15]。从HepB接种情况来看，2016—2020年西双版纳州共调查3 956人，5年间全程接种率为55.26%；估算首针接种及时率为47.98%，均以2020年（65.03%、56.94%）最高，2019和2020年呈明显上升趋势，提示近年来按免疫程序实施预防接种的相关工作取得一定成效[16]。但被调查者中仅2 186人（55.26%）按免疫程序完成3剂次HepB接种，1 898人（47.98%）完成出生当日和第2天接种首针HepB，接种率较其他地区偏低[17-18]。HBsAg和HBsAb的检测结果显示，2016—2020年西双版纳州3 956名调查对象中，HBsAg阳性率为2.10%；HBsAb阳性率为65.72%，5年间HBsAb阳性率在59.77%~71.30%范围内波动。从性别分布看，男性的HBsAg阳性率高于女性，可能是因为男性社交频繁度高于女性[19]，自身恢复能力和自我保护意识低于女性[20-21]，不注意个人卫生[22]，抽烟喝酒机会多，肝脏负担大[23]，暴露和自然感染机会增加；而男性HBsAb阳性率较高可能源于感染导致抗体水平增高[24-25]。城区人群HBsAg阳性率略低于乡镇，而HBsAb阳性率则高于乡镇，可能与农村乡镇地区卫生条件较差、缺少乙肝防治科普知识宣传教育、民众乙肝防护知识水平不高、缺乏防患意识有关，但由于城区调查人数较少，因此该数据仅提示了可能趋势。景洪市HBsAg阳性率最低，提示景洪市HBV感染率低；勐腊县最高，结合2016—2020年每年发病率也均以勐腊县最高，可能是由于该县经济发展相对落后，2019年之前属于贫困县，民众防患意识薄弱；同时，勐腊县边境线在3县（市）中最长（740.8 km），人口流动性大，流动人口复杂也是造成勐腊县乙肝免疫保护薄弱的原因。综上可知，西双版纳州乙肝发病仍处于云南省较高水平，不同地区的HBsAg阳性率和HBsAb阳性率以及男女HBsAb阳性率之间存在一定差异。全州应继续做好HepB常规免疫接种，固牢乙肝免疫屏障；重点关注高风险人群，及时进行免疫接种；积极开展宣传教育工作，提高人群知晓率和防范意识，提高HepB全程接种率和及时接种率；完善慢性HBV感染者筛检、诊断、抗病毒治疗等综合防控措施。坚持预防为主、防治结合的控制策略。作者赵双燕1  李欣璐2  李立群3  陆大卓1  张建中1  李海艳4  李园园4  胡筱莛31西双版纳傣族自治州疾病预防控制中心免疫规划科，景洪  666100；2昆明医科大学公共卫生学院，昆明  650500；3云南省疾病预防控制中心，昆明  650034；4西双版纳傣族自治州疾病预防控制中心疾病控制科，景洪  666100赵双燕和李欣璐对本文有同等贡献通信作者：胡筱莛，Email：kittyhxt@163.com李园园，Email：bncdclyy@126.com引用本文：赵双燕, 李欣璐, 李立群, 等. 2016—2020年西双版纳州乙型肝炎疫苗接种效果评估 [J]. 国际生物制品学杂志, 2023, 46(3):141-145. DOI: 10.3760/cma.j.cn311962-20220902-00058