TNM-009

靶点介绍原肌球蛋白受体激酶（tropomyosin receptor kinase，TRK），属于细胞表面受体酪氨酸激酶（RTK）家族，包括 TRKA、TRKB和TRKC三个亚型，它们分别由神经营养因子受体酪氨酸激酶（neurotrophin receptor kinase，NTRK）的 NTRK1、NTRK2 和 NTRK3 基因编码。在神经系统正常发育过程中，TRK 蛋白介导中枢和周围神经系统中神经元存活和突触可塑性。TRKA参与疼痛和体温调节；TRKB参与运动、记忆、认知、情绪、食欲、体重调控；TRKC在感知器官中发挥作用。图1.TRK家族(DOI: 10.1007/s12253-019-00685-2)TRKA为分子量140 kDa的跨膜糖蛋白 ，由一个胞外结构域、一个跨膜区和一个含有酪氨酸激酶结构域的胞内区组成。是神经生长因子NGF（nerve growth factor）的高亲和力受体，介导 NGF大多数生物功能。NGF与TRKA结合激活Ras/MAPK、PI3K/Akt、PLCγ 等多种信号通路，与疼痛的病理生理过程及肿瘤的发生、增殖、血管生成以及转移相关。因此，以NGF-TrkA信号通路为靶点的疾病治疗，是开发镇痛或抗肿瘤药物的研究基础。信号通路1.NGF-TRKA通路与疼痛图2.NGF-TRKA在疼痛调节中的信号传导( https://mosmedpreparaty.ru/news/14000)NGF结合并激活TRKA受体，一方面通过调节瞬态感受器电位阳离子通道（TRPV1)过表达和活性，促进 Ca2+内流传导伤害性疼痛；另一方面NGF/TRKA 复合体转运至背根神经节(dorsal root ganglion，DRG)，影响 DRG 神经元中TRPV1的表达和激活，触发电压门控钠通道（VGSC）、缓激肽受体（BK）、酸敏感离子通道（ASIC），参与DRG中伤害感受器表面受体的表达，引发外周敏化和疼痛超敏反应。此外，NGF会刺激肥大细胞表达组胺、5-羟色胺、H+等，形成正反馈回路，造成疼痛信号的局部放大。2.NGF-TRKA通路与肿瘤TRKA参与肿瘤的发生主要有两种机制：一种是NTRK1基因与另一个不相关的基因发生融合，产生嵌合癌基因，异常的TRK融合蛋白可不依赖于配体，持续激活下游多条信号途径（PI3K/ AKT、 RAS/MAPK、PLCγ 通路），引发永久性的信号级联反应，促进肿瘤细胞的增殖和转移。另一种是TRKA的过表达，通过依赖NGF的方式过度激活，进而导致细胞的过度增殖诱发癌症。疾病相关1.肿瘤相关NTRK（NTRK1、NTRK2、NTRK3）基因融合是TRK在人类恶性肿瘤中被激活的主要机制。目前已发现NTRK融合存在于超过45类癌种中：其在常见肿瘤类型中的发生率较低，约为1%-3%，如肺癌、结直肠癌；但在一些罕见癌症中，如婴儿纤维肉瘤、分泌型乳腺癌、先天性中胚层肾癌等癌症中发生NTRK融合现象的比例可达到90%或更高。此外，NTRK的其他致癌形式，包括NTRK1基因的激活、突变、剪接变异体和TRKA的过度表达。2.慢性疼痛（包括癌痛）NGF与其受体TRKA的相互作用是启动和维持疼痛的重要环节，其下游靶点TRPV1在疼痛信号传导过程中起关键作用。大量研究证明，NGF水平在创伤、炎症和慢性疼痛中都有所升高。阻断NGF/TrkA通路可显著抑制疼痛。此外，基因突变导致NGF/TRKA/TRPV1通路的功能丧失会出现一种罕见的先天性痛觉缺失症。研究现状在肿瘤治疗方面，NTRK基因融合是用于泛癌种靶向治疗重要的分子标志物。由于TRKA以不依赖于NGF的融合突变形式参与肿瘤的发生，因此针对该机制的研发主要集中在小分子TRKA激酶抑制剂上，全球上市的化药主要有拉罗替尼（Larotrectinib）和恩曲替尼（Entrectinib）2种。在疼痛治疗方面，主要通过NGF抗体阻断NGF与TRKA的作用。但目前暂未有大分子药物上市。辉瑞/礼来合作开发的Tanezumab以及再生元的Fasinumab均因安全性问题而受阻。目前，国内已有5家企业的NGF抗体获得NMPA的临床批件，包括达石药业的DS002、未名生物的SMR7694、苑东生物子公司成都优洛生物的EP-9001A、康方生物的AK115、泰诺麦博的TNM009。针对相关药物的开发、生产放行和研究需求，甲贝医药开发了高表达TRKA的报告基因细胞株HEK293-TRKA-Nanoluc。传统NGF测活依赖的原代细胞M-07e (人巨细胞白血病细胞)增殖法，存在实验周期长，方法不稳定等不足之处。与之相比，报告基因细胞株可以稳定传代，方便方法验证，同时满足生产放行和稳定性研究的需求。甲贝医药活性细胞系不仅能测试浓度，还能获得功能和生物学活性的数据。部分数据展示如下：案例展示1.检测原理HEK293细胞表面高表达TRKA，当与NGF结合时，能够激活HEK293细胞下游的报告基因Luciferase。下游的报告基因Luciferase与NGF成药物依赖关系。图3.TRKA细胞株构建MOA机制图2.数据展示图4.TRKA细胞株活性数据图3.我们的优势:方法稳定、变动小；实验窗口大、响应值高； 利用转基因构建的细胞可稳定传代；该细胞株可以作为TRKA活性检测的效应细胞；适合放行、长期稳定性检测，方便方法验证；甲贝医药活性检测平台在抗体药物的临床前研发中，一旦确定抗体药物的分子形式并在哺乳动物细胞中表达出抗体蛋白分子后，就需要对抗体的活性进行验证与测定。活性测定是对药物的有效成分和含量以及药物效价的测定，是确保抗体类药物有效性的重要质控指标。现阶段抗体药物的活性分析方法主要是体外(in vitro)检测，主要有基于细胞、转基因细胞以及新技术应用三方面对抗体药物活性测定的方法。报告基因检测系统就是其中一种方式，由于其方法稳定，方便验证，被广泛用于批次放行、稳定性检测。甲贝医药提供多种热门靶点的活性报告基因细胞株，拥有完善的单抗、双抗及多抗的活性细胞株检测体系，如CD3/EGFR、PD-1/CTLA4、PD-L1/CD47、PD-L1/TGFβ和PD-L1/VEGF等双抗分子活性检测，可按照客户需求，提供定制化方案。相关细胞株产品具有构建资料完整、溯源性好、稳定性好和便于方法验证等优势，符合客户GMP检测的需求，非常适合放行/稳定性检测，能够满足客户IND/NDA申请要求。我们的产品具有：试剂采购发票完整，细胞株构建记录完整，溯源性好，可以满足中美双报要求大量数据验证，专属性，重复性、精密度，代次稳定性表现良好产品手册ROA指导客户建立方法根据客户需求建立相应活性用细胞株及方法甲贝医药活性细胞系目录（限时优惠）点 击 链 接 靶 点 专 题Insulin|GIP|GLP1|GH|FSH|PD-1/PD-L1|CTLA4|CD32a|CD16a|CD47|VEGF【近期活动】