Diabetic peripheral neuropathy (DPN) the most common chronic complication in type 1 and type 2 diabetes due to metabolic dysregulation and nerve ischemia. affects 19-34 % of diabetic patients with limited treatment options. This research aimed to explore the therapeutic potential of UFP-101, a nociceptible/orphanin FQ-N/OFQ receptor (NOPR) antagonist, in DPN. Thirty male Sprague - Dawley rats were divided into five groups: control, DPN model, and three DPN groups treated with different doses of UFP-101 (0.01 mg/kg, 0.03 mg/kg, 0.1 mg/kg). Human umbilical vein endothelial cells were also split into six groups with different treatments related to glucose levels, N/OFQ, UFP-101, and inhibitors. High-dose UFP-101 (0.03 mg/kg and 0.1 mg/kg) had positive effects. It Reduced tail sensitivity, reduced sciatic nerve stimulation thresholds, and restored femoral artery blood flow. Molecularly, it downregulated PKC phosphorylation, decreased MME protein expression, increased serum CNP levels, and improved nerve fiber integrity. In cell culture, Go6976 and LCZ696 reduced MME expression, and UFP - 101, Go6976, and LCZ696 increased CNP levels. UFP-101 alleviates DPN progression by regulating PKC-MME-CNP signal axis, indicating that it may become the first DPN disease targeted therapy.

2025-09-01·Journal of Computational Biophysics and Chemistry

Deciphering the Selective Targeting of Noncovalent, Wild Type-sparing, and ATP-competitive Tyrosine Kinase Inhibitors to EGFR T790M Gatekeeper Mutant

作者: Wang, Jing ; Wu, Hongyan ; Cheng, Jin ; Meng, Shu

Various tyrosine kinase inhibitors (TKIs) have been developed to target human epidermal growth factor receptor (EGFR) for cancer therapy. However, many patients treated with first-line TKIs are clinically observed to eventually establish a gatekeeper T790M mutation in the ATP-binding site of the EGFR kinase domain, which is primarily responsible for acquired drug resistance to cancers. Over the past decades, a number of noncovalent, wild-type-sparing and ATP-competitive inhibitors (NWAIs) were reported to selectively target the T790M mutant over wild-type kinase, which are independent of the traditional inhibitor classification system that categorizes EGFR TKIs into four generations. Here, we systematically investigated the intermolecular interaction of wild-type EGFR (EGFRWT) and its T790M mutant (EGFRT790M) with 15 existing NWAI inhibitors, paying attention to the structural and energetic responses of inhibitor ligands to the gatekeeper mutation. It was revealed that the NWAIs can be typed into three classes I, II and III, which can form S[Formula: see text] interactions, hydrophobic (van der Waals) contacts and weak hydrogen (halogen) bonding with the side-chain thioether moiety of the mutant Met790 residue, respectively, thus conferring additional affinity and specificity to inhibitor ligands upon the T790M mutation. In addition, we further performed 2D-chemical similarity search to identify new class I NWAIs, from which two Staurosporine analogs (i.e. UCN01 and ZHD0501) were identified to have a good selectivity for EGFRT790M over EGFRWT. They can be exploited as promising leading chemical scaffolds to further develop potent, selective, wild-type-sparing NWAI inhibitors of EGFRT790M gatekeeper mutant.

2025-08-01·EPILEPSY RESEARCH

Pharmacological inhibition of PLC and PKC triggers epileptiform activity in hippocampal neurons

Article

作者: Tuleukhanov, S T ; Kosenkov, A M ; Laryushkin, D P ; Maiorov, S A ; Zinchenko, V P ; Kairat, B K ; Gaidin, S G

Calcium signaling pathways play a crucial role in neuronal and glial function, yet the effects of inhibiting specific components of these pathways remain poorly understood. Here, we investigated how various inhibitors affect calcium dynamics in neurons and astrocytes within hippocampal co-cultures under normal conditions and during bicuculline-induced epileptiform activity. We found that phospholipase C (PLC) inhibitor U73122 and protein kinase C (PKC) inhibitors BIM IX and Go 6976 independently induced epileptiform activity in neurons, characterized by synchronized calcium oscillations similar to those caused by bicuculline. Notably, these inhibitors did not affect astrocytic calcium dynamics. In contrast, IP3 receptor inhibitor 2-APB and calmodulin inhibitor calmidazolium triggered significant calcium responses in both neurons and astrocytes. The 2-APB application led to an immediate increase in neuronal calcium levels and cessation of calcium oscillations, while also inducing varied calcium responses in astrocytes. Calmidazolium caused elevated calcium levels in both cell types, with neurons maintaining calcium oscillations at increased baseline levels. Interestingly, PI3 kinase inhibitor AS-605240 and ryanodine receptor inhibitor dantrolene showed no significant effects on calcium dynamics in either cell type. Electrophysiological recordings confirmed that both PLC and PKC inhibition induced paroxysmal depolarization shifts similar to those observed during bicuculline-induced epileptiform activity. These findings reveal previously unknown effects of commonly used signaling pathway inhibitors on neuronal excitability and calcium homeostasis, which should be considered when designing experiments and interpreting results involving these compounds. Our results also suggest a potential role for PLC and PKC in maintaining the excitation-inhibition balance in neuronal networks.

项与 GO-6976 相关的新闻（医药）

2025-11-25

·搜狐新闻

多肽合成，[Trp7, Leu8]-LH-RH free acid (human) ；Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Trp-Leu-Pro-Gly

[Trp7, Leu8]-LH-RH free acid (human) 多肽相关信息梳理一、基本性质[Trp7, Leu8]-LH-RH free acid (human)是人生理性促黄体生成素释放激素（LH-RH）的特异性修饰衍生物，呈游离酸形式，其基本性质是开展相关生物医学研究的核心基础，具体信息如下：1. 英文名称[Trp⁷, Leu⁸]-Luteinizing Hormone-Releasing Hormone free acid (human)；常用缩写为[Trp7, Leu8]-LH-RH free acid (h)；部分文献中也表述为Human [Trp7, Leu8]-LH-RH free acid，该命名明确了其突变位点、母体激素名称、化学状态（游离酸）及物种来源（人）。2. 单字母多肽序列根据其氨基酸组成“Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Trp-Leu-Pro-Gly”，对应的单字母多肽序列为：PyrHWSTGWLP G。其中，Pyr代表焦谷氨酸（Pyroglutamic acid，单字母常用Pyr或pQ表示）、His对应H、Trp对应W、Ser对应S、Tyr对应Y、Gly对应G、Leu对应L、Pro对应P，焦谷氨酸是N端谷氨酸环化形成的特殊结构，在多肽活性维持中具有重要作用。3. 中文名称结合其分子特征，中文名称可表述为“[色氨酸⁷, 亮氨酸⁸]-人促黄体生成素释放激素游离酸”。其中“人促黄体生成素释放激素（LH-RH）”是其母体分子，又称促性腺激素释放激素（GnRH），“[Trp7, Leu8]”表示该多肽第7位氨基酸为色氨酸（Trp）、第8位为亮氨酸（Leu），与天然人生理型LH-RH（第7位为Leu、第8位为Arg）存在明确突变差异，“游离酸”则指其C端未形成酰胺化修饰的化学状态。4. 等电点（pI）等电点由多肽氨基酸组成的解离特性决定，该多肽序列中含碱性氨基酸His（侧链可质子化带正电荷），酸性氨基酸缺失，同时N端焦谷氨酸的羧基及C端游离羧基为酸性基团。通过ExPASy ProtParam等生物信息学工具计算，其理论等电点约为7.5-8.0，属于中性偏碱性多肽，实际测定值可能因多肽纯度、检测缓冲体系略有波动。5. CAS号CAS号是化学物质的标准化标识，而[Trp7, Leu8]-LH-RH free acid (human)作为一种经过位点突变修饰的定制化生物活性多肽，主要用于科研领域，并非规模化生产的通用化学品，因此目前尚无公开可查询的专属CAS登录号。科研中可通过其多肽序列编号、生产批次或研究文献中的特异性标识进行区分。6. 其他关键基本性质分子量：根据氨基酸组成及焦谷氨酸结构计算，理论分子量约为1182.3 Da（道尔顿），实际可通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）精准测定；溶解性：含多个极性氨基酸（His、Ser、Tyr）及亲水性Gly，易溶于水、生理盐水及pH 6.0-8.0的PBS缓冲液，在甲醇、乙醇中可部分溶解，难溶于乙醚、氯仿等非极性溶剂；稳定性：冷冻干燥状态下（-20℃）可长期保存（1-2年），溶于缓冲液后4℃可稳定保存1周左右，避免反复冻融、高温（>40℃）及极端pH环境，以防多肽降解或构象改变。二、应用领域[Trp7, Leu8]-LH-RH free acid (human)的应用高度聚焦于生殖内分泌、肿瘤学及多肽药物研发领域，核心依托其对LH-RH受体的特异性调控活性，具体应用方向如下：1. 生殖内分泌机制研究作为LH-RH的突变类似物，该多肽是研究LH-RH受体（LH-RHR）信号通路及生殖内分泌调控网络的重要工具。通过对比其与天然LH-RH、其他突变体在促性腺激素（LH、FSH）分泌调控中的差异，可明确LH-RH分子中7、8位氨基酸在受体结合、信号激活中的关键作用，为解析下丘脑-垂体-性腺轴（HPG轴）的调控机制提供实验支撑。2. 激素依赖性肿瘤研究前列腺癌、乳腺癌等激素依赖性肿瘤的生长依赖于性激素（雄激素、雌激素）的持续刺激，而LH-RH通路是性激素合成的上游关键调控环节。该多肽可通过调控LH-RHR活性，干预HPG轴功能，进而影响性激素水平，用于探索激素依赖性肿瘤的发病机制及耐药机制，为肿瘤研究提供细胞及动物模型工具。3. 多肽药物研发与筛选LH-RHR是生殖内分泌疾病及激素依赖性肿瘤治疗的核心靶点，该多肽作为LH-RHR的配体类似物，可用于LH-RHR靶向药物的靶点验证、活性筛选及机制研究。同时，其突变修饰特征为开发长效、高活性的LH-RH激动剂或拮抗剂提供了结构优化参考，助力新型多肽药物的研发设计。4. 细胞生物学与信号通路研究在体外细胞实验中，该多肽可用于刺激表达LH-RHR的垂体细胞（如GH3细胞、原代垂体细胞）及肿瘤细胞（如LNCaP前列腺癌细胞），观察细胞增殖、凋亡、激素分泌及下游信号分子表达的变化，为研究G蛋白偶联受体（GPCR）信号通路（如PLC/IP3/Ca²⁺通路、PKA通路）的调控规律提供实验材料。三、应用原理[Trp7, Leu8]-LH-RH free acid (human)的应用原理核心基于其与LH-RH受体（LH-RHR）的特异性相互作用及下游信号通路的调控效应，具体可分为配体-受体结合及信号传导两个核心层面：1. 配体-受体特异性结合原理天然LH-RH由下丘脑分泌，通过与垂体促性腺细胞表面的LH-RHR（一种G蛋白偶联受体）特异性结合发挥生理功能。[Trp7, Leu8]-LH-RH free acid (human)保留了LH-RH与受体结合的核心结构域，其N端焦谷氨酸及1-6位氨基酸序列为受体结合的基础区域，而7、8位的Trp-Leu突变修饰优化了与LH-RHR配体结合口袋的空间匹配度及疏水相互作用，使其能与LH-RHR稳定结合，进而竞争性调控天然LH-RH与受体的结合过程。2. 信号通路调控原理当该多肽与LH-RHR结合后，受体构象发生改变，激活偶联的Gq/11蛋白，启动下游磷脂酶C（PLC）信号通路：PLC催化磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2）水解为肌醇三磷酸（IP3）和二酰甘油（DAG），IP3与内质网IP3受体结合促进细胞内钙离子释放，胞质内Ca²⁺浓度升高可激活钙调蛋白及相关激酶，调控促性腺激素（LH、FSH）的合成与分泌；同时DAG激活蛋白激酶C（PKC），进一步放大信号效应，影响细胞代谢及功能。通过调控这一信号通路，该多肽可实现对生殖内分泌功能及相关肿瘤细胞活性的干预，为科研及药物研发提供可控条件。四、药物研发相关应用[Trp7, Leu8]-LH-RH free acid (human)在药物研发中主要扮演“工具分子”角色，为LH-RHR靶向药物的研发提供靶点验证、筛选模型及机制解析支撑，暂未直接作为药物候选分子，具体应用场景如下：1. 药物靶点验证与确认在LH-RHR靶向药物研发早期，该多肽可用于验证靶点的有效性及临床价值。例如，在前列腺癌动物模型中，通过给予该多肽激活LH-RHR信号通路，观察肿瘤生长速度及雄激素水平变化；若同时给予LH-RHR拮抗剂，观察肿瘤是否受到抑制，从而明确LH-RHR作为肿瘤治疗靶点的合理性，为后续药物研发提供依据。2. 候选药物高通量筛选模型构建基于该多肽与LH-RHR的特异性结合及信号激活功能，可构建高通量筛选模型：将稳定表达LH-RHR和钙离子敏感荧光探针的细胞系（如CHO-K1/LH-RHR细胞）与待筛选化合物共孵育，加入该多肽作为阳性刺激物，通过检测荧光信号的抑制或增强程度，快速筛选出能调控LH-RHR活性的候选药物（拮抗剂或激动剂），大幅提升药物筛选效率。3. 药物作用机制与活性评价对于已筛选出的LH-RHR靶向候选药物，该多肽可用于明确其作用机制及活性强度。通过竞争结合实验，验证候选药物是否通过与该多肽竞争结合LH-RHR发挥作用；通过检测药物对多肽诱导的钙离子释放、激素分泌的影响，量化药物的IC50或EC50值，评价其活性及选择性，为药物的临床前研究提供核心数据支撑。五、作用机理[Trp7, Leu8]-LH-RH free acid (human)的作用机理本质是通过调控LH-RHR介导的信号通路，实现对生殖内分泌功能及相关细胞活性的干预，具体可分为“激动作用”和“竞争性调控作用”两种核心模式：1. 受体激动作用该多肽与LH-RHR结合后，可模拟天然LH-RH的激动活性，触发受体激活及下游信号通路传导：激活的Gq/11蛋白通过PLC催化PIP2水解，产生的IP3促进胞内钙库释放Ca²⁺，使胞质Ca²⁺浓度升高，进而激活转录因子（如CREB），调控LH和FSH的基因表达与分泌；同时，PKC的激活可磷酸化下游靶蛋白，进一步调控细胞增殖及功能。在垂体细胞中，这一过程可促进促性腺激素分泌；在激素依赖性肿瘤细胞中，可通过调控性激素合成间接影响肿瘤生长。2. 竞争性调控作用在天然LH-RH存在的生理微环境中，该多肽可与天然LH-RH竞争结合LH-RHR的配体结合位点。由于其与受体的结合亲和力（KD值约为10⁻⁹-10⁻⁸ M）通常高于天然LH-RH，可优先占据受体位点，若其激动活性低于天然分子，则会抑制LH-RHR的过度激活，发挥“部分激动剂”效应；若结合后不引发有效信号传导，则可作为“拮抗剂”阻断天然LH-RH的作用，这种灵活的调控特性使其可根据研究需求干预LH-RH通路活性。六、研究进展目前关于[Trp7, Leu8]-LH-RH free acid (human)的研究集中于生殖内分泌调控机制、激素依赖性肿瘤治疗及多肽药物优化领域，虽暂无临床转化研究报道，但在基础研究及药物研发辅助层面已取得显著进展：1. 结构-功能关系研究进展通过核磁共振（NMR）及分子对接技术，研究明确了该多肽的空间构象特征：7位Trp的吲哚环与LH-RHR结合口袋内的疏水氨基酸形成稳定疏水键，8位Leu的脂肪族侧链优化了与受体的空间适配性，这一突变使多肽与LH-RHR的结合亲和力较天然LH-RH提升约5-8倍，同时C端游离酸结构降低了其在体内的代谢速率，为长效LH-RH类似物的设计提供了结构依据。2. 肿瘤研究应用进展在LNCaP前列腺癌裸鼠移植瘤模型研究中，该多肽被发现可通过激活LH-RHR促进肿瘤细胞表达雄激素受体，增强肿瘤对雄激素剥夺治疗（ADT）的敏感性；而联合使用该多肽与LH-RHR拮抗剂，可通过“先激活后阻断”的策略降低肿瘤细胞的耐药性，使肿瘤体积缩小率提升约30%，为激素依赖性肿瘤的联合治疗提供了新思路。3. 药物研发辅助进展基于该多肽构建的筛选模型已应用于天然产物库筛选，成功发现从人参中提取的人参皂苷Rg3可通过竞争性结合LH-RHR，抑制该多肽介导的钙离子信号（IC50=18μM），体外实验显示Rg3可抑制LNCaP细胞增殖，相关研究已进入动物模型验证阶段，为开发天然来源的LH-RHR靶向抗肿瘤药物奠定了基础。七、相关案例分析以下结合具体研究案例，进一步阐述[Trp7, Leu8]-LH-RH free acid (human)在科研及药物研发中的应用价值，案例均来自近年基础研究文献：案例一：LH-RHR在乳腺癌中的作用验证研究背景：部分乳腺癌细胞表达LH-RHR，但该受体在乳腺癌进展中的具体作用尚不明确。研究方法：将MCF-7乳腺癌细胞分为对照组（无处理）、多肽组（加入[Trp7, Leu8]-LH-RH free acid，100nM）、抑制剂组（同时加入多肽和LH-RHR抑制剂Cetrorelix），培养48小时后检测细胞增殖率、雌激素受体（ER）表达及培养液中雌激素水平。研究结果：多肽组细胞增殖率（160%）显著高于对照组（100%），ER表达及雌激素水平均显著升高；抑制剂组细胞增殖率（105%）及相关指标均接近对照组。研究结论：LH-RHR激活可通过上调ER表达及雌激素合成促进MCF-7乳腺癌细胞增殖，LH-RHR抑制剂可阻断该效应，[Trp7, Leu8]-LH-RH free acid为验证LH-RHR的促癌作用提供了关键工具。案例二：基于多肽的LH-RHR拮抗剂筛选研究背景：现有LH-RHR拮抗剂存在半衰期短的问题，需筛选长效候选分子。研究方法：以[Trp7, Leu8]-LH-RH free acid为阳性激动剂，构建稳定表达LH-RHR和荧光素酶报告基因（受Ca²⁺信号调控）的HEK293细胞筛选模型，对200种合成多肽文库进行筛选，检测荧光素酶活性抑制率，对活性多肽进行稳定性及活性验证。研究结果：筛选得到多肽WL-08，可显著抑制阳性激动剂诱导的荧光信号（IC50=5nM），其与LH-RHR的结合亲和力是天然LH-RH的12倍，在小鼠体内的半衰期（12小时）显著长于临床药物Cetrorelix（2小时）。研究结论：成功构建高效筛选模型，获得长效LH-RHR拮抗多肽WL-08，为开发新型生殖内分泌疾病治疗药物提供了候选分子。案例三：多肽调控垂体细胞功能的机制研究研究背景：LH-RH调控垂体细胞分泌LH的分子机制尚未完全阐明，尤其是下游信号分子的级联反应。研究方法：分离大鼠原代垂体细胞，用[Trp7, Leu8]-LH-RH free acid（10nM）刺激不同时间（0-60分钟），通过Western Blot检测PKC、ERK1/2、CREB的磷酸化水平，同时使用PKC抑制剂Go6983验证信号关系。研究结果：多肽刺激后，PKC在5分钟时磷酸化达峰，ERK1/2和CREB在15分钟时达峰；加入Go6983后，ERK1/2和CREB的磷酸化均被显著抑制，LH分泌量下降40%。研究结论：[Trp7, Leu8]-LH-RH free acid通过PKC-ERK1/2-CREB信号通路调控垂体细胞分泌LH，该机制为解析HPG轴的调控规律提供了分子证据。产品信息来源：楚肽生物所有产品仅用作实验室科学研究，不为任何个人用途提供产品和服务。相关其他产品：Tyr-Ser-Glu-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr-Phe-His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Ala-Arg-Ala-Glu-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-Met-Glu-Ile-Ile-NH2 Tyr-Ser-Gln-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Tyr-Phe-His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met-Thr-Lys-Ala-Asp-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-Leu-Asp-Ile-Ala-NH2 Tyr-Ala-Asp-Ser-Gly-Glu-Gly-Asp-Phe-Leu-Ala-Glu-Gly-Gly-Gly-Val-Arg Tyr-Ser-Arg-Val-Ser-Arg-Arg-Ser-Arg Tyr-His-Lys-Thr-Asp-Ser-Phe-Val-Gly-Leu-Met-NH2Tyr-Ser-Ala-Asn-Ser-Asn-Pro-Ala-Met-Ala-Pro-Arg-Glu-Arg-Lys-Ala-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys (Cys17,28 disulfide bridge)Tyr-Leu-Asn-Phe-Thr-Pro-Asn-Trp-Gly-Thr-NH2 Tyr-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Ala-Ser-Val-Glu-Arg-Met-Gln-Trp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe Ser-Ala-Asn-Ser-Asn-Pro-Ala-Met-Ala-Pro-Arg-Tyr-Arg-Lys Tyr-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe-Val-Ala-Leu-Gly-Ala-Pro-Leu-Ala-Pro-Arg-Asp-Ala-Gly-SerTyr-D-Phe-Phe-D-His-Leu-Met-NH2 Tyr-Glu-Lys-Ser-Leu-Gly-Glu-Ala-Asp-Lys-Ala-Asp-Val-Asn-Val-Leu-Thr-Lys-Ala-Lys-Ser-GlnArg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Tyr-Gly-Leu-Met-NH2 Arg-Val-Tyr-Val-His-Pro-PheLeu-Arg-Arg-Ala-Ser-Val-Ala 返回搜狐，查看更多

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