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Agreement provides the LiNA OperaScope® Single-Use Operative Hysteroscopy System to Members of BMG's Women's Health Administrative and Purchasing Alliance (WHAAPA) across the United States. ATLANTA, Sept. 17, 2024 /PRNewswire/ -- LiNA Medical is pleased to announce a significant milestone with the establishment of an exclusive partnership aimed at advancing hysteroscopy techniques. In collaboration with Blackmaple Group (BMG), an industry leader in medical device procurement, the LiNA OperaScope® Single-Use Operative Hysteroscopy System will be made available to BMG's WHAAPA practitioners nationwide. The LiNA OperaScope® was designed specifically with the office setting in mind. The convenient single-use design is ready for use out of the box, allowing physicians to diagnose and treat patients without the constraints of traditional hysteroscopy. Continue Reading Blackmaple Group "We are delighted to partner with WHAAPA and its 3,000+ members", said Mason Green, Head of Commercial at LiNA Medical. "We have a shared mission in providing better clinical outcomes and cost-effective solutions to gynecological practices and their patients. Independent OBGYN physician groups face unique challenges in a demanding market landscape. LiNA is passionate about partnering with these dedicated professionals. Together, we are eager to drive innovation and success for women's health practices." "BMG is excited about the potential this partnership brings to WHAAPA and our commitment to advancing medical technologies," said Dr. Jeff Gold, BMG's founder and CEO. "LiNA's single-use diagnostic and operative hysteroscopy technologies eliminate the need for reprocessing and enable us to cut costs such as cleaning supplies, maintenance, and costly repairs. As a result, it simplifies workflow, frees up resources and enables our practitioners to treat more patients." About LiNA: founded in 1977, LiNA is a leading provider of medical devices and solutions dedicated to advancing women's healthcare through innovation. With a commitment to quality and patient care, we strive to make a meaningful impact on the lives of patients and healthcare professionals worldwide. About BMG: founded in 2013 as a consulting firm focused on bringing business rigor to provider group management, the Blackmaple Group (BMG) has grown to become an industry leader in procurement, medical group management and healthcare economics. Under the leadership of its founder Dr. Jeff Gold and COO Marc Cooper, BMG has grown to over 16,000 physician members across the United States and continues to add new clients every day. SOURCE LiNA Medical USA WANT YOUR COMPANY'S NEWS FEATURED ON PRNEWSWIRE.COM? 440k+ Newsrooms & Influencers 9k+ Digital Media Outlets 270k+ Journalists Opted In GET STARTED

目的   研究抗新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）卵黄抗体（egg yolk immunoglobulin，IgY）在体外对SARS-CoV-2及其变异株的中和抑制作用，探讨其作为鼻腔/口腔喷雾剂用于预防和阻断SARS-CoV-2感染的可能性。方法   采用间接ELISA检测抗SARS-CoV-2 IgY原液及成品对刺突（spike，S）蛋白的抗体效价；用微量细胞病变法检测其对SARS-CoV-2的中和活性；用萤光素酶发光法检测其对SARS-CoV-2假病毒的中和作用。结果   抗SARS-CoV-2 IgY原液的抗S抗原效价为1:32 000~1:64 000，成品的效价为1:16 000~1:32 000；两批原液对活病毒的中和效价分别为1:128和1:256，相应的抑制中浓度（median inhibitory concentration，IC50）分别为36.22和36.50 μg/ml；成品对SARS-CoV-2假病毒的IC50均值分别为4.57 μg/ml（WT）和6.07 μg/ml（D614G）；对变异株假病毒的IC50分别为15.09~29.94 μg/ml（B.1.1.7）、41.71~55.56 μg/ml（B.1.351）和16.66~32.33 μg/ml（B.1.617.2）。结论   抗SARS-CoV-2 IgY与SARS-CoV-2重组S蛋白具有良好的结合活性，在体外能显著地中和SARS-CoV-2活病毒、假病毒及变异株假病毒，有望用于SARS-CoV-2感染的预防和阻断。正文       由新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）引起的COVID-19疫情，正迅速在全球蔓延[1]。SARS-CoV-2具高传染性和致病性[2]，病毒株的变异可致其感染率、致死性、免疫逃逸能力改变[3]，增加了防控的难度。目前急需制备安全有效的、能中和病毒的抗体制剂，但康复者血浆及COVID-19人免疫球蛋白来源有限。特异性鸡卵黄抗体即特异性卵黄免疫球蛋白（egg yolk immunoglobulin，IgY）是抗原免疫禽类后由卵黄中分离得到的特异性抗体，被认为是安全的，具有对抗原的高结合亲和力、热稳定性、对pH值变化的高抵抗力以及成本效益，且不受献浆源及献浆量限制，可快速大量生产，已被广泛应用于预防呼吸道感染[4]。鼻纤毛上皮细胞高表达SARS-CoV-2刺突（spike，S）蛋白的受体血管紧张素转化酶2（angiotensin converting enzyme 2，ACE2），易受SARS-CoV-2感染，使上呼吸道成为SARS-CoV-2感染的关键靶点；SARS-CoV-2早期感染者鼻腔和口咽部存在大量病毒，是病毒入侵人体的第一繁殖地，也是传播通道[5]，因此，经鼻腔和口咽部黏膜用药中和并抑制病毒、减少局部病毒载荷量，对阻断感染、降低COVID-19发病率具有积极的意义。研究证明，用灭活SARS-CoV-2免疫动物所产鸡蛋制备的抗SARS-CoV-2 IgY在体外有较强的生物学活性[6]。本研究分析抗SARS-CoV-2 IgY在体外对SARS-CoV-2及其变异株的中和抑制作用，探讨其作为鼻腔/口腔喷雾剂用于预防或阻断SARS-CoV-2感染的可能性。1材料与方法1.1样品    抗SARS-CoV-2 IgY原液3批（B-S2202005004、B-S2202005005、B-S2202005006），蛋白含量分别为4 747.96、4 635.72、9 345.50 µg/ml，由灭活SARS-CoV-2加佐剂免疫健康母鸡所得的高免疫鸡蛋经蛋黄分离、酸化稀释、盐析纯化及病毒灭活后精制而成，免疫及IgY制备方法见参考文献[6]。抗SARS-CoV-2 IgY成品6批，其中AB202006004、AB202006005、AB202006006蛋白含量分别为2 175.96、2 342.60、2 367.96 µg/ml，AB202104004、AB202104005、AB202105006蛋白含量分别为2 552.30、2 483.65、2 519.80 µg/ml。以上样品均由成都钰康生物科技有限公司制备。1.2  试剂和仪器      SARS-CoV-2（20SF014/Vero-E6)、人抗体血清阳性对照（nCoV-3487S）及Vero-E6细胞由广东省CDC制备及保存[7]；重组SARS-CoV-2 S抗原〔S1+S2胞外结构域（extracellular domain，ECD）〕由解放军总医院第五医学中心提供；辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）标记的兔抗鸡IgY购自美国Earth OX公司；TMB显色96孔板细胞板及酶标板购自美国Corning公司；胎牛血清、MEM/Opti-MEM培养基购自美国Gibco公司；ACE2过表达细胞（Opti-HEK293/ACE2）、SARS-CoV-2假病毒（WT）、SARS-CoV-2假病毒（D614G）、变异株SARS-CoV-2假病毒（B.1.1.7，突变：Δ69-70、Δ144、N501Y、A570D、D614G、P681H、T716I、S982A、D1118H；B.1.351，突变：L18F、D80A、D215G、R246I、K417N、E484K、N501Y、D614G、A701V、Δ242-244；B.1.617.2，突变：T19R、Δ156-158、L452R、T478K、D614G、P681R、D950N) 均由南京金斯瑞生物科技有限公司制备；抗ACE2-Fc购自苏州近岸蛋白质科技有限公司；Bio-Glo™ Luciferase Assay购自美国Promega公司。318C+酶标仪购自上海沛欧分析仪器公司；IX73显微镜购自日本Olympus公司；3111细胞培养箱购自美国Thermo Scientific公司；5810R离心机购自德国Eppendorf公司；1300SeriesA2 1384生物安全柜购自美国Thermo Fisher公司；AutoT4细胞计数器购自美国Nexcelom公司；PHERAStar FSX酶标仪购自德国BMG公司。1.3 抗(S1+S2ECD) IgY效价检测     采用间接ELISA对原液及成品中的抗（S1+S2ECD）IgY的效价进行检测。以2 μg/ml重组SARS-CoV-2 S （S1+S2ECD）抗原包被酶标板，每孔100 μl，4 ℃过夜后，5%牛血清白蛋白-PBS 37 ℃封闭2 h；PBS-Tween洗板2次，加入1∶2 000起倍比稀释的抗SARS-CoV-2 IgY，每孔100 μl，37 ℃孵育60 min；洗板后加入1∶10 000稀释HRP标记的兔抗鸡IgY，每孔100 μl，37 ℃孵育30 min；洗板后加TMB显色液，避光孵育15 min；加终止液50 μl，用酶标仪在450 nm处测吸光度（A）值。设置阴性对照（未免疫对照组鸡蛋提取的IgY）；cutoff值设定为2.1×阴性对照A450均值，阴性对照A450小于0.05时按0.05计算。供试品IgY的A450值大于等于cutoff值为阳性结果。A450值判定为阳性时的最高稀释度即为供试品抗体效价。1.4抗SARS-CoV-2 IgY活病毒中和试验       采用经典微量细胞病变（cytopathic effect，CPE）法检测抗SARS-CoV-2 IgY对SARS-CoV-2的中和活性，确定中和抗体效价。将抗SARS-CoV-2 IgY原液（B-S2202005005、B-S2202005006）、阳性对照（nCoV-3487S）从1∶4开始稀释至1∶16、1∶64、1∶128、1∶256、1∶1 024，分别与等体积100 TCID50/50 μl的SARS-CoV-2（20SF014/Vero-E6）混合，置37 ℃中和2 h；取混合液100 μl加入生长良好并已长成单层Vero-E6细胞的96孔细胞板中，设病毒回滴及细胞对照孔，每孔各补加100 μl维持液，置CO2培养箱中37 ℃孵育5~7 d，显微镜下观察 CPE，被检孔出现100% CPE判定抗体抑制活性为阴性，50%以上细胞出现保护者为阳性。Reed-Muench法计算出能保护50%细胞孔不产生CPE的待检样品稀释度，该稀释度即为该份样品的中和抗体效价。1.5抗SARS-CoV-2 IgY假病毒中和试验1.5.1  对SARS-CoV-2假病毒（WT、D614G）的中和活性检测    采用萤光素酶发光法评价抗SARS-CoV-2 IgY对SARS-CoV-2假病毒的阻断能力。假病毒为携带SARS-CoV-2 S蛋白和萤光素酶报告基因的慢病毒。使用过表达ACE2的单克隆细胞（Opti-HEK293/ACE2）作为靶细胞，以抗ACE2-Fc作为阳性对照，假病毒采用SARS-CoV-2假病毒（WT）和SARS-CoV-2假病毒（D614G），试验样品为抗SARS-CoV-2 IgY成品（批号：AB202006004、AB202006005、AB202006006）。用Opti-MEM培养液将待测样品稀释至200 µg/ml，再4倍系列稀释成不同浓度的工作原液；将阳性对照、样品与假病毒各取18 μl混匀加入细胞板中，设3复孔，室温孵育1 h；每孔加入Opti-HEK293/ACE2细胞50 μl，20 000细胞/孔，设阴性对照和空白对照，补加50 μl新鲜的培养基，置于37 ℃、5% CO2培养箱中培养48 h。用移液器移除96孔板培养基，每孔加入50 μl Bio-Glo™萤光素酶底物，室温孵育3~5 min。在PHERAStar FSX酶标仪上读取化学发光信号值，记录数据，计算抑制中浓度（median inhibitory concentration，IC50）。1.5.2  对变异株SARS-CoV-2假病毒（B.1.1.7、B.1.351、B.1.617.2）的中和活性检测    靶细胞和阳性对照同1.5.1，采用变异株SARS-CoV-2假病毒（B.1.1.7、B.1.351、B.1.617.2），试验样品为抗SARS-CoV-2 IgY成品，批号AB202006006、AB202104005、AB202105006。用Opti-MEM培养基将阳性对照稀释至100 µg/ml、待测样品稀释至200 µg/ml再4倍系列稀释成不同浓度的工作原液；其余同1.5.1项。1.6数据分析       依据相对化学发光信号值和最终检测浓度的对应关系建立相应的量效曲线，分析结果用Excel 2016和GraphPad Prism 6软件处理。2结果2.1抗（S1+S2ECD）IgY效价     采用间接ELISA检测，3批原液中抗(S1+S2ECD) IgY效价分别为1:32 000、1:32 000、1:64 000；6批成品中4批的抗(S1+S2ECD) IgY效价均为1:16 000，另2批均为1∶32 000。2.2抗SARS-CoV-2 IgY对活病毒的中和活性       采用经典微量CPE法检测抗SARS-CoV-2 IgY对SARS-CoV-2的中和活性。结果显示，2批原液对活病毒的中和效价分别为1:128和1:256，人抗体血清对照nCoV-3487S中和效价为1:64，表明2批特异性IgY稀释128和256倍（相应的IC50分别为36.22和36.50 μg/ml）能够在体外与活的SARS-CoV-2结合，有效中和活病毒，保护50%细胞免受病毒的感染。2.3抗SARS-CoV-2 IgY对假病毒中和活性2.3.1  对SARS-CoV-2假病毒（WT、D614G）的中和活性    SARS-CoV-2假病毒中和试验结果显示，3批抗SARS-CoV-2 IgY成品（AB202006004、AB202006005、AB202006006，对应的原液批次为B-S2202005004、B-S2202005005、B-S2202005006）均能显著地中和SARS-CoV-2假病毒（WT和D614G），且批次之间样品的中和性能表现一致。依据相对化学发光信号值和最终检测浓度的对应关系建立量效曲线图，跟据量效曲线得出3个批次样品对假病毒的IC50均值分别为4.57 μg/ml（WT）和6.07 μg/ml（D614G）。假病毒中和试验结果见表1，3个批次IgY样品中和SARS-CoV-2假病毒的量效曲线和拟合结果见图1。2.3.2  对变异株SARS-CoV-2假病毒（B.1.1.7、B.1.351、B.1.617.2）的中和活性    结果显示，3批抗SARS-CoV-2 IgY成品（AB202006006、AB202104005、AB202105006）均能显著地中和B.1.1.7、B.1.351和B.1.617.2变异株SARS-CoV-2假病毒；且批次间样品的中和性能表现一致。依据相对化学发光信号值和最终检测浓度的对应关系建立相应的量效曲线图，根据量效曲线得出3批样品对假病毒的IC50分别为15.09~29.94 μg/ml（B.1.1.7）、41.71~55.56 μg/ml（B.1.351）和16.66~32.33 μg/ml（B.1.617.2）。假病毒中和试验结果见表2，3批IgY中和SARS-CoV-2假病毒的量效曲线和中和活性结果见图2。3讨论       SARS-CoV-2经ACE2感染细胞[1]，SARS-CoV-2的S蛋白在与宿主细胞表面受体结合、病毒-细胞以及细胞-细胞膜融合过程中起到关键作用。病毒通过S1的受体结合区域（receptor binding domain，RBD）与ACE2结合进而感染宿主细胞，特异性靶向S蛋白的中和抗体、血清或血浆是用于预防和治疗SARS-CoV-2感染的有效手段。目前诸多临床研究证实了恢复期血浆治疗COVID-19患者可获得较好疗效，安全性良好[8-9]，表明被动免疫方法可以用于预防和治疗COVID-19。       IgY是一种理想的预防和治疗用抗体，由于种属差异，对许多抗原而言，鸡不仅较哺乳动物更容易产生抗体，而且能产生更多抗不同抗原决定簇的抗体[10-11]。抗SARS-CoV-2 IgY由灭活SARS-CoV-2免疫鸡所产蛋制备，是多克隆抗体，具有全病毒完整的抗原谱。ELISA检测结果显示，抗SARS-CoV-2 IgY原液和成品中抗（S1+S2ECD）效价均不低于1∶16 000，表明供试品与SARS-CoV-2重组S蛋白具有良好的结合活性。先前的研究也显示抗SARS-CoV-2 IgY以剂量依赖的方式与SARS-CoV-2的S1上RBD结合，并可阻断RBD与ACE2的结合，抑制SARS-CoV-2的进入、融合和感染[6]。采用微量CPE法进行活病毒中和试验结果显示，2批抗SARS-CoV-2 IgY稀释至1∶128和1∶256时仍可中和SARS-CoV-2，保护50%的Vero-E6细胞不被病毒感染；相应的IC50分别为36.22和36.50 μg/ml，与用CCK-8细胞增殖试验检测的抗SARS-CoV-2 IgY对活病毒IC50（44.31 μg/ml）是一致的[6]；说明抗SARS-CoV-2 IgY中的S蛋白特异性抗体阻断了S蛋白与细胞上的受体结合，抑制了SARS-CoV-2感染Vero-E6细胞，保护细胞免于病变。        假病毒中和试验结果显示，3批抗SARS-CoV-2 IgY均能显著地中和SARS-CoV-2假病毒WT和D614G，IC50均值分别为4.57和6.07 μg/ml，且用该灭活SARS-CoV-2制备的IgY对假病毒的中和抑制效果明显优于用重组SARS-CoV-2 S1蛋白制备的IgY（IC50为270.5 μg/ml）[12]。       SARS-CoV-2为单链ＲNA病毒，比DNA病毒有着更高的变异性，而S蛋白上关键位点的变异，有可能影响其与受体的结合，从而改变病毒的特性[3]。目前，多个SARS-CoV-2变异株已在全球范围内广泛流行。α变异株（B.1.1.7）S蛋白主要携带D614G和N501Y等突变位点，致死性比原毒株高出30%[13]。β变异株（B.1.351）S蛋白主要携带N501Y、E484K、K417N等突变位点，具有较强的免疫逃逸能力，并对部分中和抗体产生抵抗。δ变异株（B.1.617.2）S蛋白上新增了L452R、T478K和P681R这3个重要突变位点，使其具有一定的免疫逃逸能力，传染性大大增强，感染后更易发展成重症[14]。       对α、β、δ变异株假病毒的中和试验结果显示，抗SARS-CoV-2 IgY可在体外有效中和变异株SARS-CoV-2假病毒，IC50分别为15.09~29.94 μg/ml（B.1.1.7，α株）、41.71~55.56 μg/ml（B.1.351，β株）和16.66~32.33 μg/ml（B.1.617.2，δ株）；表明抗SARS-CoV-2 IgY可在体外与α、β和δ变异株假病毒上的S蛋白结合，阻断假病毒侵入、感染靶细胞。       与抗SARS-CoV-2单克隆抗体相比，IgY的IC50值相对较高；IgY作为多克隆抗体，特异性抗SARS-CoV-2 IgY只是其中的一部分，但其可能具有多个中和位点，在中和病毒变异株方面具有优势。用灭活SARS-CoV-2免疫制备的高效价IgY，对α、β、δ变异株假病毒中和能力显著，可能与IgY多克隆抗体具有全病毒完整的抗原谱有关。最新变异株Omicron展现出强大的免疫逃逸和传播能力，给已上市和临床试验阶段的抗体药物带来了极大挑战；后续我们将关注抗SARS-CoV-2 IgY对Omicron以及未来新的可能流行株的中和活性研究。       研究表明，SARS-CoV-2早期感染者鼻腔和口咽部存在大量病毒，是入侵人体的第一繁殖地，也是病毒传播扩散的通道[5]。注射用中和抗体可以预防肺部感染，但对上呼吸道感染无能为力。COVID-19疫苗也对上呼吸道保护能力不足。无论是直接注射中和抗体，还是通过疫苗产生特异性中和抗体，均不能有效地抑制病毒在上呼吸道的感染[15-16]。因此，寻求适合的外用型生物抗体快速地在口鼻黏膜形成免疫屏障，可望有效中和病毒、减少局部病毒载荷量、阻断病毒的传播。      人体对鸡蛋的耐受性良好，纯化的IgY去除卵清蛋白后可以用于对鸡蛋过敏的个体[17]。在小鼠模型中注射纯化或未纯化的IgY，没有诱导IgE应答，故而没有过敏反应[18-19]。由于IgY不与人类补体系统或Fc受体结合，给药后引起的炎症极小[20]。考虑到IgY是安全的，具有良好的生物活性，可以大规模生产，在安全性和有效性进一步研究的基础上，将其以喷雾剂的形式用于鼻腔和口咽部，在局部发挥中和病毒的作用，有望成为一种新的防控SARS-CoV-2感染的手段。引用本文：林烨暄 ，张欢 ，胡方焱，等. 抗新型冠状病毒卵黄抗体对病毒及变异株的体外中和作用 [J]. 国际生物制品学杂志, 2022, 45(3):121-126.  DOI: 10.3760/cma.j.cn311962-20220124-00008识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入微信群！请注明：姓名+研究方向！版权声明本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。