American Type Culture Collection

Kaneko T, Nakatsuka K, Tsuneda S. Phage Cocktails: State-of-the-Art Technologies and Strategies for Effective Design. FEMS Microbiol Rev. 2025 Dec 8:fuaf061. doi: 10.1093/femsre/fuaf061. Epub ahead of print. PMID: 41358816. 随着抗微生物药物耐药性（AMR）危机的日益严峻，噬菌体疗法作为一种新型的治疗替代方案备受关注。特别是噬菌体鸡尾酒（Phage Cocktails），即多种噬菌体的组合，相比单一噬菌体应用提供了更广泛的抗菌谱，并可能抑制耐药细菌的出现。本综述系统地审查了设计噬菌体鸡尾酒的尖端技术和有效策略。重点关注了识别不同受体的噬菌体组合、基于噬菌体-细菌感染网络分析的设计以及与抗生素的协同效应。此外，通过对大规模临床研究的分析，指出了实际实施中的挑战，包括确保鸡尾酒的稳定性和解决免疫反应问题。这些见解有望为设计更有效的噬菌体鸡尾酒和建立应对AMR的新型治疗策略做出贡献。 关键词 ：噬菌体疗法；噬菌体鸡尾酒；噬菌体耐药性；ESKAPE；AMR；细菌病毒；临床应用 01 引言 (Introduction) 近年来，抗微生物药物耐药性（AMR）危机持续升级，迫切需要开发新型传染病治疗手段。世界卫生组织（WHO）已将AMR确认为一项关键挑战，并积极推动应对措施。特别是被称为“ESKAPE”的一组致病菌（ Enterococcus faecium [屎肠球菌]、 Staphylococcus aureus [金黄色葡萄球菌]、 Klebsiella pneumoniae [肺炎克雷伯菌]、 Acinetobacter baumannii [鲍曼不动杆菌]、 Pseudomonas aeruginosa [铜绿假单胞菌] 和 Enterobacter species [肠杆菌属]）已经获得了严重的多重耐药性，在临床环境中构成了严重问题。此外， Escherichia coli [大肠杆菌] 虽然不属于最初的ESKAPE分类，但也因其广泛的抗生素耐药性和临床相关性而成为另一个关键的优先病原体。2024年发表的一项综合分析估计，2021年AMR与471万例死亡相关，其中114万例直接归因于AMR，并预计到2050年，归因于AMR的年死亡人数将增加至191万。此外，预测2025年至2050年间，归因于AMR的累计死亡人数将接近3910万。 在这种情况下，利用噬菌体（Bacteriophages）——即感染细菌的病毒——治疗传染病引起了广泛关注。正如Skurnik等人最近指出的，随着抗生素的广泛采用，噬菌体疗法曾一度黯然失色。然而，随着AMR危机的加剧和现代技术的进步，噬菌体疗法因其特异性的抗菌作用和极小的副作用，正在更科学的基础上被重新评估。 在噬菌体疗法中，使用噬菌体鸡尾酒（多种噬菌体的组合）相比单一噬菌体应用具有诸多优势。首先，可以实现更广泛的抗菌谱。鉴于某些噬菌体表现出极窄的宿主特异性，组合多种噬菌体能够有效对抗各种菌株。其次，噬菌体鸡尾酒可以抑制噬菌体耐药细菌的出现。一种众所周知的方法涉及组合识别不同受体的噬菌体，从而降低细菌同时获得对所有噬菌体耐药性的概率。 然而，为了确保设计出有效的噬菌体鸡尾酒，需要考虑多种因素。虽然噬菌体通常被认为是安全的，但某些噬菌体可能会刺激宿主免疫系统并诱发炎症反应。此外，针对噬菌体的抗体产生可能会影响其治疗效果，这凸显了制定应对措施的重要性。此外，构成鸡尾酒的单个噬菌体的特性表征、噬菌体与噬菌体之间的相互作用以及最佳组合数量仍有待探索。实际实施中的技术挑战，如鸡尾酒的稳定性和质量控制也依然存在。因此，建立标准化的指标来评估噬菌体鸡尾酒是可取的。 针对各种致病菌的噬菌体鸡尾酒研究已有报道。针对ESKAPE细菌群的噬菌体鸡尾酒开发尤为活跃，其在从体外到体内的各种实验系统中均得到了验证。这些研究提出了关于构成鸡尾酒的噬菌体的选择标准及其组合方法的各种建议。 本综述系统地整理了当前关于噬菌体鸡尾酒设计的知识，并全面总结了其配方标准。特别重点关注了构成噬菌体的选择标准，并详细审查了每种方法的特点、优势和挑战。同时也讨论了实际实施的技术挑战和前景。本综述旨在通过提供对有效噬菌体鸡尾酒设计的见解，为推进噬菌体疗法做出贡献。 02 噬菌体获取与表征 (Phage Acquisition and Characterization) 2.1 从环境样本中的分离方法 2.1.1 分离来源的选择及其重要性 噬菌体鸡尾酒制备的第一步是获得合适的噬菌体。虽然噬菌体在自然界中无处不在，包括极端环境和人类栖息地，但选择合适的来源对于高效分离至关重要。来源选择的一个关键点是选择目标致病菌存在或可能存在的环境；从进化的角度来看，这样的环境更有可能包含对目标细菌具有高裂解活性的噬菌体。从多种环境中分离噬菌体增加了获得多样化噬菌体的可能性。 即使在同一环境中，噬菌体的多样性也可能随季节波动。对于组合多种噬菌体的鸡尾酒，仔细的分离和来源选择对于确保噬菌体特性的多样性是必要的。作为一个案例点，医院和医疗环境被证明是针对临床分离株具有优越裂解活性的噬菌体来源。一项研究表明，医疗污水产生的噬菌体能够感染高达96.3%的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌。 动物废物处理场所，包括牛和水牛养殖场的污水，代表了高效的来源，因为从这些废物以及奶牛场废水中分离出的噬菌体是针对肠道致病菌具有广泛宿主范围的多样化噬菌体的丰富来源。城市污水系统持续提供具有快速裂解活性的噬菌体，而医院来源的样本则提供专门适应临床相关耐药菌株的噬菌体。对于食源性病原体，新鲜食品样本，特别是海鲜，可以作为病原体特异性噬菌体的直接来源，尽管成功与否取决于目标细菌是否以相对较高的浓度存在。 2.1.2 筛选方法 在噬菌体筛选中，宿主细菌的选择直接影响噬菌体的多样性和治疗效果。选择临床分离株还是实验室菌株作为筛选的宿主细菌各有优缺点。使用临床分离株可能产生更多样化的噬菌体，因为每个菌株具有独特的受体结构和防御机制。临床分离株还增加了获得与实际感染相关的噬菌体的可能性。从临床分离株中分离出的噬菌体表现出分类学多样性，并对类似的临床分离株具有高裂解活性。 相比之下，实验室菌株易于处理，可重复性好，且在全球研究机构中普遍可用。虽然仅使用实验室菌株不能涵盖临床问题病原体的多样性，从而可能限制临床疗效，但研究报告称，即使使用实验室菌株，利用多种筛选来源也可以保持噬菌体的多样性，这些噬菌体对临床分离株表现出部分有效性。 理想情况下，在初始筛选阶段应使用多样化的宿主菌株（包括标准实验室菌株和当地临床分离株）。特别是，使用具有不同遗传背景和表型特征（例如耐药模式、生物膜形成能力和荚膜类型）的多种宿主菌株有助于有效分离各种噬菌体。当设施条件受限时，在专注于实验室菌株的同时利用尽可能多的多样化筛选来源，能够获得具有广泛特性的噬菌体。 适当的浓缩方法和分离方法对于高效的噬菌体分离至关重要。聚乙二醇（PEG）沉淀法广泛用于从环境样本中浓缩噬菌体。该方法对于从大量环境水中浓缩噬菌体特别有效。具体而言，通过离心从环境样本中去除固体后，加入PEG 6000（10% w/v）和NaCl（4% w/v）。在4°C过夜孵育后，通过离心回收噬菌体沉淀，并重悬于少量缓冲液中。最后，使用氯仿处理去除环境细菌。然而，某些噬菌体可能会在此过程中失活。例如，有包膜的噬菌体对氯仿敏感。过滤方法对于分离此类噬菌体是有效的。此外，过滤方法在分离巨型噬菌体（Jumbo phages）方面也很有效，这些噬菌体有望拥有各种功能。 双层琼脂法可以有效地从筛选来源中分离噬菌体。这种用于可靠分离单噬菌体克隆的标准方法包括以下步骤：最初，含有噬菌体样本和宿主细菌的软琼脂（约0.5%）覆盖在下层琼脂培养基上。过夜孵育后，根据大小、透明度和形状等特征选择所需的噬菌斑，重复分离程序2到3次以获得纯噬菌体克隆。液体培养分离法是传统平板培养法的替代方案。这些方法对于在琼脂培养基上形成菌落较差的细菌（例如硝化细菌）或生长过于密集使得单个噬菌斑形成困难的细菌特别有效。可以通过测量培养物浊度的时间变化来检测噬菌体。 最近，基于液滴的方法已被报道为有效的筛选技术。油包水液滴被用作反应室，用于在单个液滴中共培养噬菌体和宿主细菌。这种方法有望实现比传统方法更高的通量，并且对于筛选针对难以在琼脂培养基上生长的细菌的噬菌体特别有效。结合荧光染色，可以同时计数和分离活噬菌体颗粒。 2.2 噬菌体库的利用 噬菌体库是提供质量保证和多样化噬菌体的重要资源。当直接从环境中分离噬菌体困难或需要具有已知特性的噬菌体时，它们特别有用。目前，全球存在多个主要的噬菌体库，如加拿大的Félix d'Hérelle细菌病毒参考中心、格鲁吉亚的Eliava研究所、德国的DSMZ和美国的ATCC。 噬菌体库的一个优势是可用性经过质量控制的标准菌株。尽管并非适用于所有噬菌体，但每种噬菌体的基本信息（如宿主范围和生长特性）已被确定，便于根据特定研究或治疗目标选择合适的噬菌体。 然而，噬菌体库也有一定的限制。保存的菌株是针对特定标准宿主分离和维护的，需要单独测试其对目标临床分离株的活性。此外，需考虑由于长期保存导致的滴度降低或特性变化的可能性。 2.3 纯化方法 “Phage on tap”方案是一种高效的噬菌体纯化方法。该方案的基本流程涉及高滴度噬菌体溶液的分步纯化。首先，浓缩的噬菌体溶液经过超滤以有效去除杂质，如内毒素。对于更高级的内毒素去除，有多种策略可用，包括使用辛醇的有机溶剂萃取。市售的亲和柱，如EndoTrap HD，与超滤结合使用时可提供高效的内毒素去除。 氯化铯（CsCl）密度梯度离心是一种代表性的方法，特别适用于需要高纯度噬菌体的应用，如结构分析，尽管该方法耗时且需要昂贵的超离心设备。离子交换层析也可用于噬菌体纯化，该方法基于噬菌体颗粒表面电荷的差异。 2.4 表征方法的标准化 准确评估构成噬菌体的特性对于有效的噬菌体鸡尾酒设计至关重要。 2.4.1 宿主范围评估 宿主范围的确定是最基本的特性评估之一。直接点样测试（DST）或成斑效率（EOP）用于确定宿主范围。DST被广泛使用，被认为是最直接的宿主范围评估方法。然而，由于“无裂解性吸附”（Lysis from Without）或流产感染等机制，可能会出现假阳性。EOP用于防止宿主范围的高估，并实现更定量的评估。 2.4.2 裂解活性评估 多种定量方法可用于评估噬菌体的裂解活性。毒力指数（Virulence Index, VI）通过比较噬菌体感染组和未感染对照组的生长曲线来量化裂解活性。PhageScore提供了基于细菌减少曲线量化噬菌体裂解活性的标准化方法。抑制指数（Suppression Index）评估固定时间段（研究中为30小时）内的细菌生长抑制情况。 2.4.3 全基因组分析 噬菌体基因组分析对于鸡尾酒中使用的噬菌体的安全性评估和表征至关重要。分析涉及宿主识别的基因区域（例如尾纤维）为设计识别不同受体的噬菌体组合提供了关键信息。Pharokka、RAST和DFAST是有价值的工具。 2.4.4 质量和安全性评估 对于噬菌体鸡尾酒的临床应用，确认不存在毒素基因、抗生素耐药基因和与溶原性相关的基因至关重要。VirulenceFinder和ResFinder等专门的数据库和工具可用于进行此评估。 2.4.5 稳定性评估 噬菌体稳定性的评估是另一个关键要素。针对环境因素（如温度、pH和离子强度）的稳定性直接关系到储存条件和在各种应用场景中的有效性。 03 噬菌体鸡尾酒的设计原则 (Design Principles of Phage Cocktails) 3.1 噬菌体鸡尾酒配方的益处 对于临床应用，噬菌体鸡尾酒主要有两种概念：“成衣”（prêt-à-porter，即用型）和“定制”（sur-mesure，个性化）。 Prêt-à-porter（成衣/即用型）方法 ：利用预先制备的固定鸡尾酒。为了确保噬菌体对特定细菌有效，混合具有不同感染谱的噬菌体以裂解各种细菌菌株。这种方法能够实现快速给药，降低制造成本，并便于相对简单的质量控制。 Sur-mesure（定制/个性化）方法 ：涉及针对从患者身上分离出的细菌单独选择噬菌体，并在使用前进行敏感性测试。该方法通过针对特定菌株的专门化提供高疗效，并最小化耐药细菌的出现。 图 1. 噬菌体混合物设计的基本概念 1809 两种主要噬菌体混合物设计策略的示意图：即用型（ready-to-use）和定制型（sur-mesure）方法。即用型方法强调将具有不同宿主范围的噬菌体进行组合，以实现对多种细菌菌株的广泛覆盖；而定制型方法则侧重于设计针对特定临床分离株的个性化混合物，通过识别不同受体的噬菌体来防止耐药性产生。该示意图展示了这两种不同方法如何满足不同的临床需求。 3.2 构成噬菌体的选择标准 除了安全性要求外，还需要解决多个重要的评估标准。首先，详细评估每种噬菌体对各种菌株的有效性至关重要。此后，必须确认所选噬菌体具有足够的裂解活性。应使用毒力指数等定量指标来评估单个噬菌体的裂解活性并选择有效的组合。此外，当混合多种噬菌体时，必须仔细评估噬菌体之间的相互作用，以避免拮抗抑制或稳定性降低。 3.3 噬菌体组合策略 为了在鸡尾酒配方中组合噬菌体，已经开发了各种策略，每种策略都有独特的原理、优势和技术要求。下表总结了这些策略的比较。 表 1 噬菌体鸡尾酒设计策略比较 策略原理优势劣势技术要求目标病原体基于受体的方法 (Receptor-based approach)组合靶向不同细胞表面受体的噬菌体高耐药抑制性，明确的机制基础，可预测的有效性需要受体识别，仅限于研究充分的细菌耐药菌株生成，全基因组测序，比较基因组分析E. coli O157:H7, Salmonella Typhimurium, P. aeruginosa基于感染谱的方法 (Infection spectrum-based approach)组合具有不同宿主范围和裂解特性的噬菌体利用现有数据，基于网络的优化，可应用机器学习数据集依赖性：需要多样化的菌株库，对窄谱噬菌体准确度降低宿主范围矩阵构建，PBIN分析，统计建模工具E. coli, 各种临床分离株基于生理特性的方法 (Physiological characteristics-based approach)组合具有不同生理特性的噬菌体减少对菌株库的依赖，整合噬菌体特异性特征，与基因组或靶受体分类兼容需要详细的噬菌体表征，耗时的评估，标准化有限生理特性评估，如爆发量和裂解动力学E. coli噬菌体耐药菌株利用 (Phage-resistant strain utilization)使用适应或针对耐药细菌分离的噬菌体增强细菌抑制，延长有效时间，历史验证（Appelmans方案）耗时的分离/训练，较高的制造成本噬菌体训练方案，耐药菌株分离，共进化监测E. coli, P. aeruginosa, K. pneumoniae基于基因组多样性的方法 (Genomic diversity-based approach)组合基因组序列差异显著的噬菌体简单的选择标准，系统发育验证，减少受体依赖可能缺乏机制理解，需要基因组测序，优化潜力有限全基因组测序，系统发育分析，序列比较工具E. coli, Aeromonas salmonicida, Enterococcus spp.噬菌体-抗生素组合 (PAC)组合噬菌体鸡尾酒与抗生素以产生协同效应协同抗菌活性，耐药性抑制，潜在的抗生素再敏感化机制依赖性相互作用，拮抗效应风险，复杂的剂量优化药代动力学分析，机制评估阐明S. aureus, E. coli, A. baumannii, P. aeruginosa 3.3.1 组合不同噬菌体的策略 3.3.1.1 基于受体的方法 防止噬菌体耐药性发展的最广泛认可的策略是组合识别不同细胞表面受体的噬菌体。例如，组合针对大肠杆菌OmpC外膜蛋白和脂多糖（LPS）的两种噬菌体已被证明能显著延缓耐药菌株的出现。然而，识别目标受体需要生成耐药细菌，随后进行全基因组分析或与野生型菌株进行比较基因组分析，这既费时又费力。 图 2展示了识别噬菌体靶向细菌受体的实验流程。过程始于噬菌体耐药细菌突变体的分离，随后进行全基因组测序以识别突变基因。通过比较野生型和耐药菌株的基因组分析，可以识别潜在的受体基因。该图突显了此方法的技术挑战，包括生成耐药突变体的湿实验专业知识和序列分析的生物信息学技能。 3.3.1.2 组合不同感染策略的噬菌体 噬菌体感染范围为鸡尾酒设计提供了有价值的信息，而无需详细的受体识别。噬菌体-细菌感染网络（PBIN）分析揭示了噬菌体宿主范围广度与裂解活性之间的权衡关系。考虑到这种权衡，将宿主范围广但裂解活性相对较弱的噬菌体与宿主范围窄但裂解活性强的噬菌体相结合，可以有效抑制耐药细菌的出现。此外，基于生理特性（如裂解时间、裂解模式和爆发量）的分类结果几乎与基于全基因组的系统分类完全吻合。 图 3比较了两种主要的噬菌体分组方法：基于生理特性的分类（左，基于感染特征如爆发量、潜伏期和裂解模式）和基于基因组信息的分类（右，如全基因组分析和尾纤维的分子系统发育分析）。这两种不同的分组方法在某些情况下产生相似的结果，表明任一方法都可以有效地用于确保将多样化的噬菌体组合到鸡尾酒配方中。 3.3.1.3 利用噬菌体耐药菌株的设计 自噬菌体疗法早期以来，积极利用噬菌体耐药菌株的设计方法就已得到开发。Appelmans方案（1920年代开发）是一个特别重要的方法，现已演变为被称为“噬菌体训练”（phage training）的方法。这涉及通过噬菌体与噬菌体耐药细菌的持续共培养，使噬菌体适应感染耐药细菌。例如，经过约一个月训练的噬菌体表现出的细菌抑制能力比未经训练的祖先菌株强约1000倍，并将这种效果维持的时间延长了3-8倍。 图 4展示了噬菌体训练方法的工作流程。该图说明了通过与噬菌体耐药细菌连续共培养进行噬菌体适应的步骤。最初，噬菌体与敏感和耐药细菌一起培养，随后通过持续暴露于这些耐药菌株进行噬菌体适应。最后，生成能够克服细菌耐药机制的经过训练的噬菌体。 3.3.2 组合噬菌体与抗生素的策略 3.3.2.1 抗生素组合策略 噬菌体-抗生素组合（PAC）疗法是一种很有前途的方法，预期具有协同效应。对大肠杆菌感染的系统分析表明，PAC的疗效强烈依赖于抗生素的作用机制。特别是，细胞壁合成抑制剂（如头孢唑林）的组合产生高度协同效应，而与DNA旋转酶抑制剂（如环丙沙星）的组合偶尔会导致拮抗效应。 图 5阐述了噬菌体-抗生素组合（PAC）疗法中观察到的关键相互作用类型：协同作用（左，增强的联合效应）、无能/拮抗作用（右，组合时有效性降低）和权衡效应（中下，对一种药物的耐药性增加对另一种药物的敏感性）。该图突显了这些不同的相互作用模式如何影响细菌对联合治疗的反应。 3.3.2.2 受体选择与药物敏感性之间的关系 最近的报告提供了关于噬菌体靶受体与药物敏感性之间关系的详细分子分析。例如，在P. aeruginosa中，伴随噬菌体耐药性获得的广泛基因组缺失（在BigD区域）可以改变氟喹诺酮类抗生素的敏感性。BigD区域包含编码药物外排泵的基因。这些发现表明噬菌体耐药性与抗生素敏感性之间存在权衡。 3.3 鸡尾酒设计策略 3.3.1 顺序感染与同时感染类型 从噬菌体给药的时间顺序来看，鸡尾酒设计涉及两种主要方法：顺序给药和同时给药。数学模型分析表明，顺序感染类型在抑制耐药细菌出现方面更有效，这归因于耐药性获得的适应性代价和逐步的选择压力。然而，最近的研究表明，在抑制耐药细菌出现方面，同时给药优于顺序给药。这表明最佳给药策略可能因实验条件而异。 图 6左侧面板比较了两种主要的给药方法：顺序噬菌体递送（上）和多种噬菌体的同时给药（下）。右侧面板说明了鸡尾酒规模优化的重要性，显示必须仔细确定鸡尾酒中包含的噬菌体数量，以平衡广谱覆盖与潜在的稳定性问题及制造复杂性。 3.3.2 鸡尾酒规模优化 必须在考虑有效性和平衡副作用的基础上确定鸡尾酒中包含的噬菌体数量。虽然多噬菌体鸡尾酒有望增加抗菌谱广度和耐药性抑制能力，但挑战包括潜在的拮抗抑制、对微生物群的更大影响、潜在的基因转移风险和稳定性降低。例如，在PhagoBurn试验中，施用了12种类型的噬菌体，鸡尾酒的不稳定性对治疗效果产生了负面影响。相比之下，在治疗K. pneumoniae和E. coli感染时，分别使用2-10种和8种噬菌体获得了稳定的效果。 3.4 临床应用的制造工艺和知识产权策略 临床应用需要建立符合良好生产规范（GMP）的标准化制造工艺。这包括建立主种子库（Master Seed Bank），优化培养工艺（如生物反应器培养），以及建立严格的质量控制和稳定性评估体系。PhagoBurn试验表明，尽管单个噬菌体保持稳定，但混合后总滴度显著下降，强调了对最终混合鸡尾酒进行稳定性测试的重要性。在知识产权方面，由于自然产生的噬菌体可能面临专利适格性挑战，策略包括为人工修饰的噬菌体或特定的鸡尾酒组合申请专利。 04 临床应用与获得的见解 (Clinical Applications and Insights Gained) 本章介绍了噬菌体鸡尾酒设计原则在临床和应用环境中的实施案例。 4.1 针对重点耐药细菌病原体的应用 4.1.1 A. baumannii 感染：个性化鸡尾酒的应用 在一例由MDR A. baumannii 引起的坏死性胰腺炎病例中（Schooley et al., 2017），使用了个性化噬菌体鸡尾酒进行治疗。基于患者分离出的菌株（TP1），选择了四种噬菌体（AB-Navy1, AB-Navy4, AB-Navy71, AB-Navy97）组成初始的“ΦIV”鸡尾酒。治疗过程中，当出现耐药菌株（TP3）时，分离出了一种新的噬菌体（AbTP3φ01）并与原有噬菌体组合构建了新的鸡尾酒“ΦIVB”，成功控制了感染。这展示了利用噬菌体耐药菌株进行设计（即根据耐药性的出现迭代更新鸡尾酒）的有效性。 4.1.2 P. aeruginosa 感染：临床评估试验的教训 PhagoBurn试验是欧洲首个符合GMP标准的噬菌体鸡尾酒临床试验，旨在治疗烧伤伤口的铜绿假单胞菌感染。该试验配制了一种包含12种噬菌体的鸡尾酒（PP1131）。然而，制造过程中遇到了重大挑战：尽管单个噬菌体稳定，但混合后总滴度在15天内下降了约1000倍。这导致给药浓度远低于预期，最终导致试验提前终止。这凸显了鸡尾酒稳定性评估的重要性。相反，在另一项针对椎体脓肿的个性化治疗案例中，通过学术合作开发了针对患者特定菌株的三噬菌体鸡尾酒，成功控制了感染。 4.1.3 S. aureus 感染：预评估和监测的重要性 一项对100名患者进行的综合回顾性观察研究分析了针对难治性感染的噬菌体疗法。针对金黄色葡萄球菌的鸡尾酒主要基于噬菌体ISP，并根据裂解活性的多样性和靶受体的差异进行选择。结果显示77.2%的患者临床症状改善。统计分析表明，噬菌体疗法联合抗生素比单一噬菌体疗法具有显著更高的细菌根除率。 4.1.4 E. faecium 感染：免疫反应对治疗效果的影响 在治疗复发性屎肠球菌菌血症的案例中，使用了双噬菌体鸡尾酒（Φ9184和ΦHi3）。虽然最初抑制了菌血症，但在治疗约五个月后，出现了针对噬菌体的中和抗体，显著降低了鸡尾酒的活性，导致治疗失败。这强调了在鸡尾酒设计中考虑宿主免疫反应的重要性，特别是对于长期或重复治疗。 4.1.5 E. coli 感染：给药途径的优化 一项II期临床试验（ELIMINATE）检查了六噬菌体鸡尾酒（LBP-EC01，包含CRISPR-Cas3增强的噬菌体）治疗大肠杆菌尿路感染的效果。该试验比较了静脉注射和尿道内给药。结果显示，尿道内给药结合低剂量静脉注射表现出最佳的耐受性和噬菌体浓度维持。这表明优化给药途径对于维持感染部位的有效噬菌体浓度至关重要。 表 2 个性化噬菌体疗法的代表性临床试验 研究病原体感染部位噬菌体(鸡尾酒)给药途径剂量持续时间结果值得注意的发现Schooley et al. 2017 [96]A. baumannii (MDR)播散性 (胰腺脓肿等)总共9种噬菌体 (如 AB-Navy1,4,71,97; AbTP3Φ01)局部 (ΦIV) + 静脉 (ΦIV, 后为 ΦIVB)局部: ~10^9 PFU/次; 静脉: 5 × 10^9 PFU/剂总共 ~18周恢复针对耐药性迭代设计鸡尾酒。短尾噬菌体对荚膜缺陷突变体有效。Jault et al. 2019 (PhagoBurn) [91]P. aeruginosa烧伤伤口感染PP1131 鸡尾酒 (12种噬菌体: 短尾/肌尾噬菌体)局部 (通过藻酸盐敷料)~1 × 10^2 PFU/mL (实际递送剂量，因稳定性问题)7天细菌减少慢于标准护理制造后噬菌体滴度严重下降导致剂量不足。强调了噬菌体鸡尾酒稳定性和体外敏感性测试的重要性。Ferry et al. 2022 [148]P. aeruginosa (泛耐药)脊柱脓肿 (脊柱盘炎)vBPaeP4029, 4032, 4034局部 (病灶内) + 静脉 (顺序)局部: 10^6 PFU/mL; 静脉: 10^6 PFU/mL局部: 2剂; 静脉: 21天临床治愈顺序局部+静脉给药。出现了小菌落变异体 (SCV) 但仍对噬菌体敏感。Stellfox et al. 2024 [151]E. faecium (VRE)菌血症Φ9184, 后添加 ΦHi3 (顺序)静脉 + 口服初始: 1×10^9 PFU/剂; 鸡尾酒: 2×10^9 PFU/剂~6个月积极治疗初始清除并缓解4个月，然后复发约5个月后出现中和性抗噬菌体IgG抗体，消除了噬菌体活性。Kim et al. (进行中/ELIMINATE) [95]E. coli单纯性尿路感染 (UTI)LBP-EC01 (CRISPR-Cas3增强的6噬菌体鸡尾酒)尿道内 + 静脉 (并发)尿道内: 2×10^12 PFU; 静脉: 1×10^10 PFU尿道内: 2天; 静脉: 3天快速减少E. coli 并在第10天症状消退CRISPR增强噬菌体的人体首秀。静脉剂量依赖性全身暴露和耐受性。Terwilliger et al. 2021 [153]E. coli (产ESBL)复发性UTI/前列腺炎HP3, HP3.1, ES17, ES19 (合理设计的4噬菌体鸡尾酒)静脉 + 静脉厄他培南1 × 10^9 PFU/剂, 每日两次2周 (噬菌体)症状消退; 随访时无症状菌尿合理设计的鸡尾酒包含溶粘液噬菌体和进化的“守卫”噬菌体。未完全根除但微生物演替导致临床治愈。 05 未来展望与挑战 (Future Prospects and Challenges) 5.1 评估标准的系统化 5.1.1 建立体外评估系统 目前，使用毒力指数等指标评估初始裂解活性是常见的。然而，这些方法偏向于短期评估。未来的系统需要纳入长期效果评估标准（如连续培养系统中的持续抗菌效果）和鸡尾酒特异性相互作用的评估（量化协同和拮抗效应）。 5.1.2 建立体内评估系统 体内评估需要从疗效和安全性两个角度进行。包括标准化疗效评估（考虑药代动力学和给药途径）和系统化安全性评估（特别是与免疫系统的相互作用，如中和抗体产生动力学、炎症细胞因子测量）。 5.1.3 噬菌体鸡尾酒抗生物膜活性的评估 评估噬菌体鸡尾酒对抗细菌生物膜的功效是当前方法学中的一个关键空白。噬菌体鸡尾酒通过多种机制（如延迟耐药细菌出现、提供补充性抗菌元素如解聚酶）表现出优于单一噬菌体的抗生物膜活性。未来的体外生物膜评估需要区分生物膜去除与防止新生物膜生长，并采用动力学分析而非仅终点分析。 5.2 技术挑战与未来展望 技术挑战主要包括制造工艺的标准化（GMP合规、内毒素管理）和质量控制的建立（维持鸡尾酒中各成分的比例稳定性）。 未来展望包括利用新技术，如PBIN的数学分析和人工智能（AI）应用，以实现更高效的噬菌体鸡尾酒设计。合成生物学方法（如CRISPR-Cas增强噬菌体）也引入了新的可能性。建立基于监管科学的评估标准是实际实施的重要一步。 06 结论 (Conclusion) 本综述全面审查了噬菌体鸡尾酒的设计标准，特别是从抑制噬菌体耐药细菌出现的角度。迄今为止，研究已经确定组合靶向不同受体的噬菌体以及与抗生素联合使用是有效的治疗策略。然而，正如PhagoBurn试验和大规模分析所示，在确保鸡尾酒稳定性和抑制耐药细菌出现方面仍存在挑战。未来的期望包括通过利用AI和合成生物学等创新技术，以及建立更系统的评估体系来克服这些挑战。特别是，实现考虑个体患者状况和感染部位特征的高度个性化鸡尾酒设计是可取的。 参考文献 Schooley, R. T., et al. (2017). Development and use of personalized bacteriophage-based therapeutic cocktails to treat a patient with a disseminated resistant Acinetobacter baumannii infection. Antimicrobial Agents and Chemotherapy , 61(10), e00954-17. Jault, P., et al. (2019). Efficacy and tolerability of a cocktail of bacteriophages to treat burn wounds infected by Pseudomonas aeruginosa (PhagoBurn): a randomised, controlled, double-blind phase 1/2 trial. The Lancet Infectious Diseases , 19(1), 35-45. Pirnay, J. P., et al. (2024). Personalized bacteriophage therapy outcomes for 100 consecutive cases: a multicentre, multinational, retrospective observational study. Nature Microbiology , 9, 1434–1453. Kim, P., et al. (2024). Safety, pharmacokinetics, and pharmacodynamics of LBP-EC01, a CRISPR-Cas3-enhanced bacteriophage cocktail, in uncomplicated urinary tract infections due to Escherichia coli (ELIMINATE): the randomised, open-label, first part of a two-part phase 2 trial. 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2025年12月2日，由依科赛生物主办，万库科技企业孵化器、恺思学社协办的“细胞治疗工艺创新与质量体系研讨会”在上海国际医学园区成功举行。本次研讨会依科赛生物携手ATCC（权威的细胞、微生物资源库）、宜明生物、上药集团等国际国内领军机构，聚焦细胞治疗从研发到产业化的全流程技术突破与质量体系建设，吸引了众多行业内专家精英齐聚一堂，共同探讨、交流与分享。 领导致辞—依科赛生物：以创新赋能CGT行业高质量发展 会议伊始，依科赛生物董事长陈旭致欢迎辞，他对各位专家、同仁在百忙之中拨冗出席，表示最热烈的欢迎和最诚挚的感谢！他在致辞中表示：当前，我们正站在细胞与基因治疗（CGT）时代变革的起点，行业技术浪潮奔涌不息，818医疗新政，in vivo CAR-T热度空前，CGT疗法已成为攻克癌症、罕见病等重大疾病的希望之光。 依科赛生物一直以来以“加快生命科技应用，造福百姓健康”为使命，致力于突破生物医药领域“卡脖子”技术难题，实现关键原料国产化替代。 公司聚焦无血清培养基、胎牛血清和鉴定试剂三大产品板块，通过自主创新，为生物药、细胞与基因治疗、基础科研等领域提供国际标准的产品与解决方案。目前，依科赛生物已经成为全球前五、国内最大胎牛血清生产商之一，国内首选 GMP级别细胞基因治疗无血清培养基品牌之一，也是抗体培养基定制化和代工领导企业之一。 道阻且长，行则将至。我们愿以此次论坛为契机，继续秉持公司“国产化+国际化”战略，以技术创新为引擎，以质量为根本，与创新药企、行业上下游伙伴携手并进，共同赋能中国细胞与基因治疗行业的高质量与可持续发展，让科技创新的红利惠及每一个生命。 技术沙龙—依科赛生物：搭建高能生态平台凝聚行业共识 主题报告环节，行业专家带来了高水准的内容分享：首先，宜明生物研发副总裁仲明带来《细胞药物治疗载体 — 慢病毒产量提升的解决方案》；依科赛生物应用技术科学家以《慢病毒载体与 293 细胞平台：赋能下一代 In Vivo CAR-T 治疗》展开分享；ATCC 亚太区负责人 Serling 围绕《ATCC: 保障生物制药安全解决方案》进行阐述；上药集团生物治疗质量与注册总监张长风聚焦《in vivo 类细胞治疗产品的质量控制和监管关注点》展开解析；最后，依科赛研发负责人陈博以《支原体 qPCR 法检测方法学验证分享》收尾。 专家们凭借其深厚的专业背景和丰富的实践经验，为现场听众呈上了一场高水准、高规格的学术盛宴。活动现场座无虚席，参会者们全神贯注、认真聆听，在思维的碰撞与交流中汲取知识养分，收获颇丰。 本次活动吸引了众多依科赛的长期合作客户莅临现，为这场活动增添了深厚的情谊与专业的底蕴。茶歇交流环节，嘉宾们对依科赛生物在无血清培养基、鉴定试剂、胎牛血清等产品所取得的自主研发突破、严格的质量体系以及先进的智能化生产线给予了高度评价。 依科赛生物无血清培养基和鉴定试剂产品已经助力多家客户FDA与CDE中美IND申报成功获批，这也证明依科赛的生产工艺和品质控制体系已经达到了国际标准和监管要求。 无血清培养基系列产品 Serum-free Medium End 这场高水准的技术沙龙活动，不仅为与会者搭建了一个分享最新研究成果与实践经验的优质平台，更聚焦探讨细胞治疗从工艺研发到质量管控的全链条关键环节，共同探讨慢病毒载体产量提升、In Vivo CAR-T治疗平台优化、微生物标准品与支原体检测等行业痛点，为细胞治疗产业化按下“加速键”。本次活动已经落下帷幕，我们相信，这次的相聚是一个新的开始，未来将会有更多精彩的活动等待着大家。让我们携手共进，在探索的道路上不断前行，共同创造更加美好的未来！

1.1 非小细胞肺癌的临床挑战与研究缺口 全球肺癌发病率中非小细胞肺癌占比超85%，其中腺癌亚型对靶向治疗产生耐药性的机制尚未完全阐明。NCI-H1299细胞作为无胸苷激酶缺陷的肺腺癌细胞系，其表皮生长因子受体（EGFR）野生型特征使其成为研究三代TKI耐药机制的理想模型。 1.2 保种库的科研价值与质量危机 国际细胞库联盟（ICLC）数据显示，全球23%的细胞系存在交叉污染，其中HeLa细胞污染率达18%。中国科学院细胞库通过STR基因分型技术，将细胞身份认证准确率提升至99.98%，但仍有12%的实验室因复苏技术不规范导致细胞活性下降超过40%。 1.3 专业复苏的技术经济价值 美国ATCC的统计表明，规范化的复苏流程可使细胞传代稳定性提升3倍，实验重复率提高65%。以PD-1抑制剂研发为例，使用标准化复苏的NCI-H1299细胞进行药效评估，可使临床前数据与临床试验结果的吻合度从47%提升至82%。 第二章 NCI-H1299细胞系的生物学特性与保种库建设 2.1 细胞起源与遗传特征 该细胞系源自51岁白人男性肺腺癌组织，经电子显微镜确认其具有典型的Ⅱ型肺泡上皮细胞特征。全基因组测序显示其携带KRAS突变（G12C型）和TP53缺失突变，这些遗传特征使其对MEK抑制剂呈现特异性敏感。 2.2 保种库的硬件配置标准 液氮罐选择：配备MVE XC47型液氮罐，其静态蒸发率≤0.7%/天，可维持-196℃环境长达120天 监控系统：采用LabVIEW平台构建的物联网监控系统，实时监测液位、温度、O2浓度等12项参数 应急系统：配备双路电源冗余和液氮自动补给装置，确保断电时维持低温环境≥72小时 2.3 细胞冻存的关键参数优化 通过响应面法（RSM）确定最佳冻存方案： 冻存液配方：90%胎牛血清（FBS）+10%DMSO+0.5%人血清白蛋白（HSA） 降温速率：1℃/min（关键区间：-10℃至-80℃） 冻存密度：1×10⁶ cells/mL 该方案使细胞复苏存活率从传统方法的78%提升至92%，细胞周期分布保持稳定（G1期58.3±2.1%）。 第三章 专业复苏操作流程与技术规范 3.1 复苏前的准备工作 培养基预热：将DMEM/F12培养基在37℃水浴中预热30分钟，添加10% FBS和1%双抗 设备校准：对离心机进行温度验证（±1℃精度），水浴锅进行温度均匀性测试（37±0.5℃） 无菌操作台验证：采用沉降菌法检测，要求≤1 CFU/30min·Φ90mm 3.2 分步复苏操作指南 步骤1：快速解冻 从液氮罐中取出冻存管时佩戴防冻手套，避免手部直接接触 将冻存管置于37℃水浴中，同时加入1mL预热培养基以缓冲热冲击 观察冰晶完全溶解时间（正常范围：45-60秒），超过90秒需重新评估冻存质量 步骤2：细胞离心与重悬 采用梯度离心法：300g离心5分钟，400g离心3分钟 弃上清时保留50μL液体，避免细胞团块分散 重悬时使用巴氏吸管轻柔吹打，吹打次数控制在8-12次 步骤3：接种与培养 接种密度：根据实验目的调整（增殖实验：5×10⁴ cells/cm²；药物筛选：1×10⁵ cells/cm²） 培养箱参数：37℃、5% CO₂、95%湿度，每日进行CO₂浓度校准 3.3 复苏后关键质量控制指标 形态学评估：24小时后观察细胞贴壁情况，正常细胞应呈多角形，胞质折光性强 存活率检测：采用台盼蓝染色法，要求存活率≥90% 微生物检测：每周进行支原体PCR检测，灵敏度达10³ copies/mL 第四章 复苏后细胞功能验证体系 4.1 增殖能力验证 采用实时细胞分析（RTCA）系统，记录细胞指数（CI）变化 正常细胞应在24小时内CI值达到0.8以上，倍增时间约18-22小时 异常情况处理：若CI值增长缓慢，需检查血清批次或CO₂浓度 4.2 耐药性检测 建立耐药细胞系：采用梯度浓度法（IC₀→IC₁₀→IC₂₀→IC₅₀→IC₉₀）诱导耐药 检测指标：耐药指数（RI）=IC₅₀耐药/IC₅₀敏感，正常范围为3-5倍 分子机制验证：通过Western blot检测ABC转运蛋白（如P-gp）表达水平 4.3 基因组稳定性监测 每代次进行STR分析，要求8个核心基因座均一性≥95% 发现异常时启动应急预案：立即停止使用该细胞，进行全基因组测序 第五章 常见问题诊断与解决方案 5.1 细胞生长缓慢 可能原因：冻存液残留、血清批次差异、支原体污染 解决方案：增加离心次数（至1200g，5分钟）、更换血清批次、进行支原体清除 5.2 细胞形态异常 典型表现：胞质空泡化、细胞间连接松散 处理流程：首先检查CO₂浓度（正常范围：4.5%-5.5%），其次检测培养基pH值（7.2-7.4） 5.3 污染事件处理 细菌污染：立即丢弃培养物，对培养箱进行臭氧消毒（浓度10ppm，作用2小时） 真菌污染：使用两性霉素B（2.5μg/mL）处理48小时，同时更换所有耗材 第六章 技术优化与创新方向 6.1 自动化复苏系统 开发全自动复苏工作站，集成液氮罐、离心机、培养箱等设备 实现复苏流程标准化，将人为误差从15%降至2%以下 6.2 冻存保护剂创新 研究海藻糖作为新型冻存保护剂的可行性，其玻璃化转变温度可达-135℃ 临床前数据显示，添加5%海藻糖可使细胞复苏存活率提升至95% 6.3 大数据应用 构建细胞复苏数据库，收录10,000+例复苏案例 开发AI预测模型，可提前72小时预测细胞复苏质量（准确率89.7%） 第七章 案例分析与应用实例 7.1 靶向药物研发案例 某药企使用标准化复苏的NCI-H1299细胞进行EGFR抑制剂筛选 通过高通量筛选，发现新型化合物E-12，其IC₅₀值为8.3nM，选择性指数达1,200倍 "NCI-H1299 Cells人非小细胞肺癌细胞保种库专业复苏 NCI-H1299 Cells人非小细胞肺癌细胞保种库专业复苏英文别名：:H1299; H-1299; NCIH1299 背景信息：NCI-H1299 Cells人非小细胞肺癌细胞保种库专业复苏这株细胞来源于一个淋巴结转移。患者接受了初期放疗。细胞均一性的部分缺失p５３蛋白，并缺少p５３蛋白表达。细胞可以合成０.１pmol/毫克蛋白的NMB蛋白，而不合成促胃释放肽(GRP)。 细胞来源：主要来源于ATCC、ECACC、DSMZ等国际知名细胞库。国内供应商（如南昌全亮科技有限公司(QLCells)等）提供复苏或冻存形式的细胞。 KLE Cells人子宫内膜癌细胞专注复苏很多年|STR图谱生长特性：NCI-H1299 Cells人非小细胞肺癌细胞保种库专业复苏贴壁生长 血清比例：使用10%-20%的血清浓度有助于优化NCI-H1299 Cells人非小细胞肺癌细胞保种库专业复苏实验条件，提高实验的重复性和稳定性。这一浓度范围经过多年实验和实践的验证，被认为是较为适宜的选择。 AE-1 Cells小鼠杂交瘤细胞专注复苏很多年|STR图谱产品包装：复苏发货：NCI-H1299 Cells人非小细胞肺癌细胞保种库专业复苏T25培养瓶(一瓶)或冻存发货：1ml冻存管(两支) 空泡现象：在密集培养时，细胞中可见巨大的空泡，这是细胞的正常特性，无需担心。 HeLa Cells人宫颈癌细胞专注复苏很多年|STR图谱物种来源：NCI-H1299 Cells人非小细胞肺癌细胞保种库专业复苏来源于人源、鼠源等其它物种来源 细胞复苏：复苏细胞时，应快速将冻存管从液氮中取出并置于37℃水浴中解冻，然后转移到含新鲜培养基的无菌管中并吹打混匀。整个复苏过程应尽可能在5-10分钟内完成，以确保细胞的高存活率。 MKN74-GFP Cells人胃癌细胞专注复苏很多年|STR图谱培养观察：定期观察NCI-H1299 Cells人非小细胞肺癌细胞保种库专业复苏生长状态，注意培养基的pH值变化和细胞密度，及时换液和传代。GM21081 Cells人淋巴细胞专业复苏技术|STR图谱生物安全等级：1级。 NB4 Cells人急性早幼粒细胞白血病细胞专注复苏很多年|STR图谱细胞传代：传代时，应使用适量的胰蛋白酶溶液进行消化，并在显微镜下观察细胞消化情况。消化下来的细胞容易成团，需要吹打吹散。传代后，应确保细胞均匀分布在培养瓶或培养皿中。 消化条件：室温下用胰酶消化1-3分钟。 SW1088 Cells人脑星形胶质瘤细胞专注复苏很多年|STR图谱细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。一般使用冻存液进行冻存，并置于液氮中储存。 操作规范：在细胞培养和处理过程中，需严格遵守无菌操作规范，以避免细胞污染和交叉污染。 KYSE-410 Cells人食管鳞癌细胞专注复苏很多年|STR图谱污染检测：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性。 污染防控：严格无菌操作，定期检测支原体污染，必要时使用双抗预防细菌污染。 Akata Cells人EBV转化淋巴细胞专注复苏很多年|STR图谱形态特性：NCI-H1299 Cells人非小细胞肺癌细胞保种库专业复苏上皮细胞样 培养条件：37°C、5%CO₂、饱和湿度环境，使用含10%-20%FBS的基础培养基。 LNCaP clone FGC-GFP Cells人前列腺癌细胞专注复苏很多年|STR图谱细胞状态：传代和消化过程中，应密切关注细胞状态，避免过度消化或机械损伤导致细胞活性下降。 消化传代：使用0.25%胰酶-EDTA溶液，37°C孵育1-2分钟，轻拍培养瓶促进细胞脱落。（悬浮细胞可省略这步操作） 细胞接收流程：收到细胞后，应首先观察细胞状态，然后进行75%酒精消毒处理。将细胞置于37℃培养箱中放置2-4小时以稳定NCI-H1299 Cells人非小细胞肺癌细胞保种库专业复苏状态。当细胞密度达到80%-90%时，即可进行首次传代培养。GT1-7 Cells小鼠下丘脑GnRH神经元细胞专注复苏很多年|STR图谱传代比例：1:2-1:4(NCI-H1299 Cells人非小细胞肺癌细胞保种库专业复苏首次传代建议1:2) 来源说明：NCI-H1299 Cells人非小细胞肺癌细胞保种库专业复苏主要来源ATCC、ECACC、DSMZ、RCB等细胞库 换液周期：NCI-H1299 Cells人非小细胞肺癌细胞保种库专业复苏每周2-3次 B 95.8细胞复苏活性好；背景说明：详见相关文献介绍;传代方法：１：２传代;生长特性：贴壁生长　;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：NS20Y细胞复苏传代性强、KBM5细胞复苏传代性强、HFE-145细胞 KYSE30细胞复苏活性好；背景说明：来源于一位６４岁，患有高分化的中段食管鳞癌的男性患者。;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：贴壁;形态特性：上皮细胞样;相关产品有：MCF7/WT细胞复苏传代性强、Lymph Node Carcinoma of the prostate细胞复苏传代性强、HCA7细胞 1G5 [Mouse hybridoma against human RB1]细胞专业保种库传代性好|STR图谱 HEL9217细胞复苏活性好；背景说明：详见相关文献介绍;传代方法：每周２-３次。;生长特性：悬浮生长;形态特性：成淋巴细胞;相关产品有：Kato-III细胞复苏传代性强、H1836细胞复苏传代性强、TE 85.T细胞 PL45 Cells人胰腺导管腺癌细胞专注复苏很多年|STR图谱 NCI-H660 Cells人神经内分泌前列腺癌细胞专注复苏很多年|STR图谱┈全┈亮┈科┈技┈TEL┈：┈①┈⑤┈②┈七┈零┈九┈零┈⑥┈⑥┈⑨┈⑥┈SNU-668 Cells人胃癌细胞专注复苏很多年|STR图谱 LEC-1 Cells仓鼠卵巢细胞专注复苏很多年|STR图谱 Cattle chondrocytes细胞复苏活性好；背景说明：软骨 Cells;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：贴壁;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：L5178YR细胞复苏传代性强、S37细胞复苏传代性强、P3JHR1细胞 COLO-1细胞复苏活性好；背景说明：角质形成层;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：贴壁;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：Hs 766T细胞复苏传代性强、OACP4 C细胞复苏传代性强、Hs-675-T细胞 MS-751细胞复苏活性好；背景说明：这株细胞是J. Sykes于１９７４年建立的（参考ATCC HTB-３３）。有报告称MS７５１细胞含有人乳头状瘤病毒１８ (HPV-１８)序列。[２２９９５] [２３１８０]后来发现MS７５１细胞包含HPV-４５基因组的一部分，而其中E６/E７区域表达呈poly(A)+RNA的形式。[４９７２１];传代方法：１：２传代;生长特性：贴壁生长;形态特性：上皮细胞样;相关产品有：H-1184细胞复苏传代性强、COLO.205细胞复苏传代性强、H847细胞 BNL 1MEA.7R.1细胞复苏活性好；背景说明：肝；上皮细胞；BALB/c;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：贴壁;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：CHO K1细胞复苏传代性强、SF17细胞复苏传代性强、NCTC 1469细胞 OVCAR-5细胞复苏活性好；背景说明：卵巢癌；腹水转移；女性;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：贴壁;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：R 1610细胞复苏传代性强、Lieming Xu-2细胞复苏传代性强、VSC4.1细胞 BT474-LUC Cells人乳腺导管癌细胞专注复苏很多年|STR图谱 RenCa Cells小鼠肾腺癌细胞专注复苏很多年|STR图谱 Panc05.04细胞复苏活性好；背景说明：详见相关文献介绍;传代方法：１：２传代;生长特性：贴壁生长;形态特性：上皮样;相关产品有：HCPEpiC细胞复苏传代性强、SW.620细胞复苏传代性强、AtT20细胞 HRPEpiC细胞复苏活性好；背景说明：视网膜；上皮 Cells;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：贴壁;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：HDQ-P1细胞复苏传代性强、RSC-364细胞复苏传代性强、QBI-HEK 293A细胞 SW-982细胞复苏活性好；背景说明：详见相关文献介绍;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：贴壁或悬浮，详见产品说明书部分;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：LADMAC细胞复苏传代性强、C4I细胞复苏传代性强、YD-38细胞 SNU-374细胞专业保种库传代性好|STR图谱 266-6 Cells小鼠胰腺腺泡癌细胞专注复苏很多年|STR图谱 LN-229+luc Cells人胶质瘤细胞专注复苏很多年|STR图谱 NIH-3T3-L1细胞复苏活性好；背景说明：３T３-L１是从３T３细胞（Swissalbino）中经克隆分离得到的连续传代的亚系。该细胞从快速分裂到汇合和接触性抑制状态经历了前脂肪细胞到脂肪样细胞的转变。该细胞鼠痘病毒阴性；可产生甘油三酯，高浓度血清可增强细胞内脂肪堆积。;传代方法：１：２传代;生长特性：贴壁生长;形态特性：成纤维细胞样;相关产品有：Sup T-1细胞复苏传代性强、B4G12细胞复苏传代性强、RM1细胞 NALM-6细胞复苏活性好；背景说明：急性B淋巴细胞白血病；男性;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：悬浮;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：RCCJF细胞复苏传代性强、NIH:OVCAR3细胞复苏传代性强、MCF.7细胞 McG-1细胞复苏活性好；背景说明：皮肤T淋巴瘤；女性;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：悬浮;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：Y3.AG.1.2.3细胞复苏传代性强、HPDEC细胞复苏传代性强、ECV-304细胞 Tb1.Lu细胞复苏活性好；背景说明：肺;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：贴壁;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：CPA47细胞复苏传代性强、H-1869细胞复苏传代性强、L363细胞 NCI-H446 Cells人肺癌细胞专注复苏很多年|STR图谱 92-1 Cells人眼葡萄膜黑色素瘤细胞专注复苏很多年|STR图谱 C918 Cells人眼脉络黑色素瘤细胞专注复苏很多年|STR图谱 Akata Cells人EBV转化淋巴细胞专注复苏很多年|STR图谱 H2135细胞复苏活性好；背景说明：详见相关文献介绍;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：贴壁或悬浮，详见产品说明书部分;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：HCC-1143细胞复苏传代性强、Pa14C细胞复苏传代性强、OCI-Ly19细胞 NTERA-2 cl.D1细胞复苏活性好；背景说明：详见相关文献介绍;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：贴壁或悬浮，详见产品说明书部分;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：GM02219细胞复苏传代性强、HMC3细胞复苏传代性强、B16/F1细胞 HCC-2279细胞复苏活性好；背景说明：肺腺鳞癌细胞；女性;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：贴壁;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：HPAEC细胞复苏传代性强、UMRC2细胞复苏传代性强、UO31细胞 KOSC-2 cl3-43细胞复苏活性好；背景说明：详见相关文献介绍;传代方法：２.２ x １０^４ cells/ml ;生长特性：贴壁生长;形态特性：上皮样;相关产品有：Calu6细胞复苏传代性强、MDCC-MSB1细胞复苏传代性强、MD Anderson-Metastatic Breast-175-VIII细胞 GIST-T1 Cells人胃肠道间质瘤细胞专注复苏很多年|STR图谱 MDA-MB-231-GFP Cells人乳腺癌细胞专注复苏很多年|STR图谱 hESC-PRLY细胞专业保种库传代性好|STR图谱 GM3569细胞复苏活性好；背景说明：该细胞是由绵羊红细胞免疫的BALB/c小鼠脾细胞和P３X６３Ag８骨髓瘤细胞融合得到的。该细胞不分泌免疫球蛋白，对２０μg/ml的８-氮鸟嘌呤有抗性，对HAT比较敏感；该细胞可以作为细胞融合时的B细胞组分用于制备杂交瘤；鼠痘病毒阴性。;传代方法：１：２传代;生长特性：悬浮生长;形态特性：淋巴母细胞样；圆形;相关产品有：P3.NS-1/1.Ag4.1细胞复苏传代性强、MDA-MB361细胞复苏传代性强、KNS-81细胞 MDAMB415细胞复苏活性好；背景说明：这株细胞表达WNT７B癌基因。８１６８０８８].带瘤患者来自巴拉圭，虽然填报的是白人，但细胞表型存在G６PDＡ型，显示其属于混血。细胞株形成平展延伸的上皮细胞样，在电镜下呈现结节，伴随着延伸的微管和微板。不容易用胰酶消化。;传代方法：消化５-１０分钟。１：２。４-５天长满。;生长特性：贴壁生长;形态特性：上皮细胞;相关产品有：293F细胞复苏传代性强、SCL-I细胞复苏传代性强、MDA436细胞 Ly10细胞复苏活性好；背景说明：弥漫大B细胞淋巴瘤;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：悬浮;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：SK-LU-1细胞复苏传代性强、NRK 52E细胞复苏传代性强、HT 144细胞 H-2106细胞复苏活性好；背景说明：详见相关文献介绍;传代方法：每周换液２次。;生长特性：悬浮生长;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：Japanese Tissue Culture-39细胞复苏传代性强、SBC-5细胞复苏传代性强、C4 I细胞 HCA-7细胞复苏活性好；背景说明：结肠腺癌；女性;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：贴壁;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：VP267细胞复苏传代性强、Hep G2-Luc细胞复苏传代性强、PBL细胞 DiFi细胞复苏活性好；背景说明：结直肠癌；女性;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：贴壁;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：SUDHL10细胞复苏传代性强、MLM细胞复苏传代性强、8305C细胞 A-2058细胞复苏活性好；背景说明：详见相关文献介绍;传代方法：１：６-１：１２传代，２-３天换液１次。;生长特性：贴壁生长;形态特性：上皮细胞;相关产品有：U-2-OS细胞复苏传代性强、MC-3T3细胞复苏传代性强、PK15细胞 Line 697细胞复苏活性好；背景说明：B淋巴细胞白血病；男性;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：悬浮;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：HUT 226细胞复苏传代性强、L-cells细胞复苏传代性强、HeLa-S3细胞 SNU-1 Cells人胃癌细胞专注复苏很多年|STR图谱 MLE-12 Cells小鼠肺泡上皮细胞专注复苏很多年|STR图谱 GM27574细胞专业保种库传代性好|STR图谱 HAP1 OTUD6B (-)细胞专业保种库传代性好|STR图谱 SP2细胞复苏活性好；背景说明：该细胞是由绵羊红细胞免疫的BALB/c小鼠脾细胞和P３X６３Ag８骨髓瘤细胞融合得到的。该细胞不分泌免疫球蛋白，对２０μg/ml的８-氮鸟嘌呤有抗性，对HAT比较敏感；该细胞可以作为细胞融合时的B细胞组分用于制备杂交瘤；鼠痘病毒阴性。;传代方法：１：２传代;生长特性：悬浮生长;形态特性：淋巴母细胞样；圆形;相关产品有：CCD1095Sk细胞复苏传代性强、SW 13细胞复苏传代性强、HPB-ALL细胞 UPCI:SCC90细胞复苏活性好；背景说明：舌鳞癌细胞；男性;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：贴壁;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：Jurkat (clone E6-1)细胞复苏传代性强、NCIH1155细胞复苏传代性强、GM00637B细胞 U-343细胞复苏活性好；背景说明：详见相关文献介绍;传代方法：１：２传代;生长特性：贴壁生长　;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：P3HR1-BL细胞复苏传代性强、HCCC9810细胞复苏传代性强、786-0细胞 OVCAR-8+luc Cells人卵巢癌腺癌细胞专注复苏很多年|STR图谱 RGC-5 Cells小鼠视网膜神经节细胞专注复苏很多年|STR图谱 SNU-182 Cells人肝癌细胞专注复苏很多年|STR图谱 Duck embryo Cells鸭胚成纤维细胞专注复苏很多年|STR图谱 HCET细胞复苏活性好；背景说明：角膜上皮细胞；Ad-SV４０转化；女性;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：贴壁;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：NCI H295R细胞复苏传代性强、FM88细胞复苏传代性强、EA.hy 926细胞 P3HR1细胞复苏活性好；背景说明：详见相关文献介绍;传代方法：每２-３天换液;生长特性：悬浮生长 ;形态特性：淋巴母细胞样;相关产品有：SNU119细胞复苏传代性强、KYSE 450细胞复苏传代性强、Clone 166细胞 UCLA-SO-M21细胞复苏活性好；背景说明：黑色素瘤；女性;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：贴壁;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：NK92MI细胞复苏传代性强、STO细胞复苏传代性强、MV-3细胞 SK RC 52细胞复苏活性好；背景说明：肾癌；纵隔膜转移;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：贴壁;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：RCC-10细胞复苏传代性强、NCI-BL2141细胞复苏传代性强、H-322细胞 BC-3H-1细胞复苏活性好；背景说明：详见相关文献介绍;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：贴壁或悬浮，详见产品说明书部分;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：H766T细胞复苏传代性强、BALB/3T3 (clone A31)细胞复苏传代性强、MCA 205细胞 BT-483 Cells人乳腺导管癌细胞专注复苏很多年|STR图谱 RTE Cells大鼠气管上皮细胞专注复苏很多年|STR图谱 HOC-1细胞专业保种库传代性好|STR图谱 J774.2细胞专业保种库传代性好|STR图谱 MCF7mp53细胞专业保种库传代性好|STR图谱 ND16569细胞专业保种库传代性好|STR图谱 PR00288细胞专业保种库传代性好|STR图谱 HEK293 STK4 KO细胞专业保种库传代性好|STR图谱 WK93细胞专业保种库传代性好|STR图谱 TE-12 Cells人食管癌细胞专注复苏很多年|STR图谱 OE19 Cells人食管癌细胞专注复苏很多年|STR图谱 AGS Cells人胃腺癌细胞专注复苏很多年|STR图谱 NCI-H1770细胞复苏活性好；背景说明：详见相关文献介绍;传代方法：随细胞的生长而换液;生长特性：悬浮生长;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：SKGIIIA细胞复苏传代性强、HuH28细胞复苏传代性强、TK.10细胞 Clone 929细胞复苏活性好；背景说明：详见相关文献介绍;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：贴壁或悬浮，详见产品说明书部分;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：Mv1Lu细胞复苏传代性强、HET1A细胞复苏传代性强、N1E-115细胞 CMT-64细胞复苏活性好；背景说明：肺腺癌；雌性；C５７;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：贴壁;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：GP2d细胞复苏传代性强、tdott细胞复苏传代性强、UMNSAH-DF1细胞 Evsa-T细胞复苏活性好；背景说明：乳腺癌；腹水转移；女性;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：贴壁;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：PC-9S1细胞复苏传代性强、C42细胞复苏传代性强、NCI-H1703细胞 Anip[973]细胞复苏活性好；背景说明：肺腺癌;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：贴壁;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：B16BL6细胞复苏传代性强、WTRL1细胞复苏传代性强、293-EBNA细胞 SW 1353细胞复苏活性好；背景说明：骨肉瘤；女性;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：贴壁;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：Hs 729.T细胞复苏传代性强、WM266-4细胞复苏传代性强、alphaTC clone 6细胞 Mel624细胞复苏活性好；背景说明：黑色素瘤；男性;传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。;生长特性：贴壁;形态特性：详见产品说明书;相关产品有：NCIH847细胞复苏传代性强、CAL 148细胞复苏传代性强、SK Mel 24细胞 Malme-3M Cells人皮肤恶性黑色素瘤细胞专注复苏很多年|STR图谱 NPC/HK-1 Cells人鼻咽癌细胞专注复苏很多年|STR图谱 NUGC-3 Cells人胃癌细胞专注复苏很多年|STR图谱 "