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中文摘要 目的   评价阿达木单抗注射液的运输稳定性。 方法   以武汉市至哈尔滨市作为公路运输起止点，进行1次往返运输，模拟药品运输过程的最差条件，以考察非温度因素条件下的药品稳定性。以极端温度及温度循环等破坏性试验来模拟药品脱冷链后的情况，通过检测阿达木单抗注射液常规质量检定项目考察药品温度偏移稳定性。 结果   运输后3批次药品内包材均完整，破瓶率为0%，所有检测项目均符合企业标准，药品运输前后差异无统计学意义(t=-3.23~4.00，P=0.057~0.840)。3批次药品分别在(40±2) ℃、(-20±5) ℃条件下放置7 d后所有检测项目均符合企业标准。其中药品在(40±2) ℃条件下放置7 d后，分子排阻色谱法测定的单体含量和离子色谱法测定的纯度与2~8 ℃及(-20±5) ℃下的差异均有统计学意义(t=-142.00~97.00，P=0.000~0.020)。(-20±5) ℃条件下放置7 d后，药品所有检定项目与2~8 ℃条件下差异均无统计学意义(t=0.70~3.46，P=0.074~0.556)。3批次药品经过3次冻融后所有检测项目均符合企业标准，与未经冻融试验样品差异无统计学意义(t=-4.06~1.73，P=0.056~0.478)。 结论   在本实验条件下长途运输非温度因素对药品的质量没有影响，药品在短期内温度偏移对药品的质量影响较小。 正文 重组全人源化抗TNF-α单克隆抗体（单抗）注射液阿达木单抗在中国仓鼠卵巢细胞中表达，用于治疗自身免疫性疾病，由美国艾伯维公司原研上市，商品名为修美乐®。在中国，阿达木单抗自上市以来获批类风湿关节炎、强直性脊柱炎、银屑病等8个适应证。由于药品出厂后经历的流通环境风险及在后续配送、储存过程中可能出现的温度偏移，均有可能影响药品质量，从而影响药品安全性和有效性，因此在上市前进行药品运输稳定性评估尤为重要。国内外法规虽均明确要求对产品的运输过程进行相应的稳定性模拟验证研究，但并未明确如何模拟流通过程中真实的运输路径及环境。本研究以阿达木单抗注射液为研究对象进行药品运输稳定性研究，参考美国注射剂协会有关支持分销的新药稳定性研究指南进行实验设计；经风险评估，确定模拟运输最极端且最有代表性的运输条件，通过非温度因素和温度因素研究综合评价药品在运输条件下的质量是否符合该制品的企业上市注册标准（企业标准）。 1 材料与方法 1.1 样品 3批阿达木单抗注射液（产品批号：202303001、202303002、202303003），由武汉生物制品研究所有限责任公司（武汉公司）提供。 1.2 细胞 检定用细胞L929（小鼠成纤维瘤细胞）来源于中国食品药品检定研究院，细胞库批号为201104001，由武汉公司保存。 1.3 主要试剂及仪器 阿达木单抗注射液参比品由武汉公司提供，批号为20201001。MULTISKAN FC型和SkyHIGH型酶标仪购自美国Thermo Scientific公司，ThermoMixer C恒温混匀仪购自德国Eppendorf公司，OSMOMAT auto型冰点渗透压仪购自德国Gonotec GmbH公司，UV-2600i型紫外分光光度计购自日本岛津公司，S210型pH计购自瑞士Mettler Toledo公司，e2695/2489型高效液相色谱仪购自美国Waters公司，HTY-APL01型集菌仪购自浙江泰林生物技术股份有限公司，PA800 plus型毛细管电泳仪购自美国SCIEX公司，iCE3/PrinNext型全柱成像毛细管等电聚焦电泳系统购自美国ProteinSimple公司，A2000 SIS型不溶性微粒仪购自美国PSS公司，YB-ⅡA型澄明度检测仪购自天津天光新光学仪器科技有限公司，Zillion Veripac 455-M5型密封性检测仪购自美国Protein Technologies公司。 1.4 实验设计 1.4.1　模拟运输路线的选择及设计思路　回顾武汉公司历史产品发运情况，选择武汉市→哈尔滨→武汉的运输路线，该路线往返运输距离约5 000 km，可覆盖武汉公司最远运输距离和最长运输时间，运输过程不可避免地经历颠簸、振动、碰撞、搬运等异常情况。另外该运输路线具有地域跨度大、南北温度湿度差异大、高低气压交替等特点。综合考虑后认为此运输路线可以作为最极端且最有代表性的运输条件。 1.4.2　非温度因素研究　选取经验证合格的2~8 ℃冷链车作为运输交通工具，按照武汉公司冷库→装载至冷链车→冷链车公路运输→哈尔滨→冷链车公路运输→武汉公司冷库路线进行运输，运输时间不超过4 d。3批待考察药品按照上市运输包装形式进行包装，按照实际运输方式放置于冷链车内，并根据日常冷链车最大装载量堆放制品外箱，以模拟冷链车满载状态。运输过程中开门5次，冷链车到达途中站点停车，开启冷链车门，环境温度在2 ℃以上时，开门时间不超过20 min，环境温度在-10～-2 ℃之间时，开门时间不超过10 min，环境温度在-18～-10 ℃之间时，开门时间不超过5 min，进行药品冷链运输模拟实验。运输结束后检查并记录外箱包装外观完整性、运输制品完整性、破瓶数及破损率，并对药品进行外观、澄清度、可见异物、不溶性微粒、装量、pH值、蛋白质含量、渗透压摩尔浓度、单体含量（分子排阻色谱法测定）、纯度（单抗分子大小变异体测定法和离子色谱法测定）、生物学活性、聚山梨酯80含量、无菌、细菌内毒素、异常毒性、密封性等质量检定项目检测。 1.4.3　温度偏移研究 1.4.3.1　极端温度实验　将2~8 ℃储存的3批次药品，分别于（40±2） ℃、（-20±5） ℃条件下放置7 d。实验完成后对每批药品进行与非温度因素研究相同项目的检测，考察药品在极端温度条件下的稳定性。 1.4.3.2　温度循环实验　将2~8 ℃储存的3批次药品置于（-20±5） ℃冰箱2 d，然后转移至（25±2） ℃药品综合稳定性实验箱放置2 d，完成1次温度循环实验。继续将3批次药品再次置于（-20±5） ℃条件2 d，然后转移至（25±2） ℃条件放置2 d，完成第2次温度循环实验，重复以上操作，每批药品均进行3次温度循环实验。实验完成后对每批药品进行与非温度因素研究相同项目的检测。考察药品在反复冻融条件下的稳定性。 1.5 检测项目及方法 1.5.1　物理化学性质　依据中华人民共和国药典2020年版三部（药典三部）通则，对药品的澄清度（通则0902）、可见异物（通则0904）、不溶性微粒（通则0903）、装量（通则0102）、pH值（通则0631）、蛋白质含量（通则0731）、渗透压摩尔浓度（通则0632）、分子排阻色谱法单体含量（通则0514）、单抗分子大小变异体测定法纯度（通则3127）、离子色谱法纯度（通则0513）、聚山梨酯80含量（通则3203）、细菌内毒素（通则1143，凝胶法）等进行检测，密封性通过密封性检测仪进行检测。 1.5.2　生物学活性　采用TNF-α中和活性法测定阿达木单抗注射液的生物学活性。将系列稀释的阿达木单抗参比品/供试品与TNF-α混合后加至L929细胞培养，使用的染料结晶紫可使活细胞染色，再用脱色液将染料脱出，测定其吸光度值，通过计算供试品和参比品的有效中量（median effective dose，ED50）得到供试品的生物学活性=参比品的ED50 /供试品ED50 ×100% ，生物学活性应为80%~125%。 1.5.3　无菌检查　依据药典三部通则1101，对药品进行无菌检查。 1.5.4　异常毒性　依据药典三部通则1141，对药品异常毒性进行检测。 1.6 统计学分析 采用Minitab 20 软件对运输前后各指标进行配对样本t检验，比较运输前后各指标的差异性，结果用均值±标准差表示。利用Minitab 20软件对温度偏移和温度循环研究中各指标进行配对样本t检验，以储存于2~8 ℃未经冻融的对应批次药品作为对照，比较药品温度偏移及3次温度循环条件下与对照组各指标的差异性。以P＜0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 非温度因素研究 本次运输总路程4 750 km，总时长76 h 15 min，运输过程中冷链车车厢2个点位最低温度分别为3.1 ℃和3.4 ℃，最高温度分别为6.4 ℃和6.5 ℃，运输全程车厢温度均在2~8 ℃范围内。阿达木单抗注射液往返运输结束后，3个批次的药品内包材均完整，破瓶率为0%；药品的pH值和分子排阻色谱法测定的抗体单体含量在运输前后无变化，所有检测项目在运输前后差异均无统计学意义，均符合企业标准，见表1。 2.2 温度偏移研究 2.2.1　极端温度实验　3批次阿达木单抗注射液分别在（40±2） ℃、（-20±5） ℃条件下放置7 d后，药品的所有检测项目均符合企业标准。（40±2） ℃条件下放置7 d后，分子排阻色谱法单体含量与2~8 ℃及（-20±5） ℃下的差异均有统计学意义（t=11.00，P=0.008；t=-7.00，P=0.020）；离子色谱法纯度与2~8 ℃及（-20±5） ℃下的差异也均有统计学意义（赖氨酸变异体含量：t=97.00、P=0.000，t=-14.36、P=0.005；第一酸区含量：t=-50.00、P=0.000，t=10.00、P=0.010；第二酸区含量：t=-142.00、P=0.000，t=22.26、P=0.002；赖氨酸变异体之间的峰：t=-17.00、P=0.003，t=29.00、P=0.001）。（-20±5） ℃条件下放置7 d后，药品所有检定项目与2~8 ℃条件下差异均无统计学意义（t=0.70~3.46，P=0.074~0.556）。不同温度条件下的离子色谱法纯度和分子排阻色谱法单体含量检测结果见图1。 2.2.2　温度循环实验　3批次药品经过3次冻融后所有检测项目均符合企业标准，与未经冻融试验样品差异无统计学意义，见表2。 3 讨论 根据中国2015年4月发布的《生物制品稳定性研究技术指导原则（试行）》和中华人民共和国药典2020年版四部中“生物制品稳定性试验指导原则”要求，对需冷链运输和保存的产品，应开展运输过程稳定性模拟验证研究。阿达木单抗注射液为抗体类生物制品，需要低温贮藏，由于药品在运输过程中可能出现短暂的脱离冷链或温度偏移情况，因此需进行运输稳定性考察，为实际运输过程中短暂偏离规定的贮藏条件提供稳定性数据支持。 本研究充分考虑了非温度因素和温度因素对药品运输的影响。非温度因素包含运输路线、交通工具、运输距离、运输时间、装载模式、外界环境以及运输过程中可能遇到的最极端和最具代表性条件。在运输最大装载量（货物堆放80%车厢容积以上），冷链温度为2~8 ℃，最远公路冷链车运输路线包含低纬度（武汉）-高纬度（哈尔滨）-低纬度（武汉），运输过程中模拟开门5次，运输路程4 750 km的前提下，运输前后各质量指标差异无统计学意义，均在企业标准合格范围内，证明了药品在运输过程中于2～8 ℃保存可以保持药品的稳定性。对于运输对药品效期的影响，目前相关研究正在进行中。 温度偏移稳定性研究中，极端温度实验结果显示3批次药品分别在（40±2） ℃、（-20±5） ℃条件下放置7 d后药品的所有检测项目均符合企业标准。其中（40±2） ℃条件下放置7 d后，分子排阻色谱法单体含量与2~8 ℃及（-20±5） ℃条件下相比有轻微下降，均下降0.2%，与2~8 ℃及（-20±5） ℃差异均有统计学意义；离子色谱法纯度与2~8 ℃及（-20±5） ℃条件下相比也均有一定变化，其中赖氨酸变异体含量分别下降6.4%和2.6%，第一酸区含量分别上升1.6%和0.6%，第二酸区分别上升4.7%和3.3%，赖氨酸变异体之间的峰分别上升1.2%和1.0%，与2~8 ℃及（-20±5） ℃差异均有统计学意义。药品在（-20±5） ℃条件下放置7 d后，所有检定项目与2~8 ℃条件下的结果差异均无统计学意义，表明模拟在极端高温暴露对药品的质量有一定影响，而极端低温对药品质量无明显影响。极端温度下放置7 d药品的所有检测项目均符合企业标准且远高于合格标准要求，本次实际模拟运输总时长76 h 15 min，表明药品在运输或贮存过程中短暂（≤7 d）的暴露于极端温度条件下不影响药品的质量可控性，药品在运输过程中应避免长时间极端高温。药品在3次反复冻融后各项质量指标均符合企业标准，与冻融前差异无统计学意义。 本研究通过非温度因素研究和温度偏移研究充分模拟了阿达木单抗的运输极端条件以考察其运输稳定性。结果表明在较差的非温度因素运输条件下，阿达木单抗可以保持药品的质量可控性。通过温度偏移稳定性研究，确认了药品在运输或贮存过程中温度短暂（≤7 d）超过规定的贮存温度时对药品质量的影响，为药品在实际运输过程中可能出现的短暂偏离规定贮藏条件的情况提供了稳定性数据支持。此外，本研究为抗体类药品运输稳定性的考察提供了实践经验，对其他抗体类药品的运输稳定性研究具有一定的参考价值。 作者 杨溢民1  童倩1  李亚楠1  刘瑞宇1  王俊2  楚乐乐1  康子航1  王睿龙1  李智龙1  解庭波1 1武汉生物制品研究所有限责任公司抗体药物室， 武汉 430207；2武汉生物制品研究所有限责任公司质量保证部，武汉 430207 通信作者：解庭波， Email：xietingbo2011@163.com 引用本文：杨溢民, 童倩, 李亚楠, 等. 阿达木单抗注射液运输稳定性初步研究 [J]. 国际生物制品学杂志, 2025, 48(6): 400-405.   DOI: 10.3760/cma.j.cn311962-20250516-00032 识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入 生物制品微信群！ 请注明：姓名+研究方向！ 版 权 声 明 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