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在生物制药领域,细菌内毒素的控制是一条不可逾越的安全红线。其引发的热原反应不仅直接危及患者生命安全,也可能导致整个批次产品报废、临床研究失败乃至严重的监管后果。哺乳动物细胞培养基作为贯穿细胞生长与产物表达全过程的核心原料,其内在的细菌内毒素水平已成为影响下游药品安全性的关键因素之一。然而,培养基干粉生产工艺复杂——尤其是成分多样、物料粘附性强,使得生产设备,特别是结构精密且庞大的针磨系统,极易成为残留物累积与微生物滋生的“风险隐匿区”。传统的清洗方式是否足以彻底清除这些可能携带内毒素的残留?如何通过科学、可验证的清洗工艺,从源头上阻断交叉污染与内毒素引入的风险?
本文将深入探讨哺乳动物细胞培养基(干粉)生产的关键清洁环节——在线清洗(CIP)系统,并聚焦于最具挑战性的针磨系统的清洗科学与实践。我们将解析:在追求“合规洁净”的基础上,如何构建针对内毒素控制的强化清洗策略;以及赛普生物如何通过超越行业常规的清洗介质选择、全流程闭环的精细化管理与精准分级质控体系,从设备清洁这一源头起点,为生物制药企业筑牢产品安全与工艺稳定性的基石。
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CIP系统的组成和工作原理是怎样的?
一个完整的CIP系统通常包括以下组件:
✔ 清洗液储罐:用于储存不同种类的清洗剂,如碱性清洗剂、酸性清洗剂、纯化水和注射水等
✔ 加热系统:控制清洗液温度,提高清洗效率
✔ 循环泵:提供足够的流速和压力,确保清洗液在设备内充分流动
✔ 喷淋装置:用于罐体和管路的清洗,形成均匀的清洗膜;对于结构复杂的针磨系统,可能需要设计专用的旋转喷头或固定喷杆,以确保针棒区域能被完全覆盖。
✔ 管道系统:连接各个部件,形成闭合循环
✔ 自动控制系统:预设清洗程序,监控清洗参数
CIP系统的工作流程通常包括以下步骤:
1、预冲洗阶段
使用常温或加温的水对设备内表面进行强力冲刷。作为清洗过程的第一步,其首要目标是高效移除绝大部分松散的、可溶性的工艺残留物,从而显著降低后续化学清洗阶段的污染物负荷,并提升整体清洗效率。清洗动力学研究表明,此阶段能够清除大部分(通常占可轻松移除残留物的主要部分)的可溶性污染物,为后续深度清洁奠定基础。对于针磨系统,此阶段旨在快速去除大部分松散粉末,防止其在后续步骤中结块。
2、碱洗阶段
使用碱性清洗剂(通常为0.5-2%的NaOH溶液)循环清洗。碱性条件可以皂化脂肪、溶解蛋白质,并对微生物有杀灭作用。此阶段温度通常控制在70-80°C,循环时间15-30分钟。这是清除针磨机内有机残留的关键步骤。
3、中间冲洗阶段
用纯化水冲洗,去除碱性清洗剂和已溶解的污染物。
4、酸洗阶段(可选)
使用酸性清洗剂(如0.5-1.5%的硝酸或磷酸溶液)循环清洗。酸性条件可以溶解无机盐沉淀,并对某些碱性条件下不易去除的残留物有效。
5、最终冲洗阶段
使用纯化水或注射用水进行最终冲洗,直至冲洗水达到规定的电导率、pH值和总有机碳(TOC)标准。
6、消毒/灭菌阶段(可选)
根据需要,可以使用纯蒸汽、热水(85°C以上)或化学消毒剂(如过氧乙酸)进行消毒处理。
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CIP验证:如何证明"干净"?
在制药行业,"干净"不仅仅是看起来干净,而是要通过科学数据证明。CIP验证通常包括以下内容:
⭕直接表面取样
采用棉签擦拭法对设备表面直接取样,检测残留物水平。这是最直接的验证方法。对于针磨机,必须精心选择最具挑战性的取样点,例如针棒根部、转子与定子的间隙以及机械密封附近。
⭕最终冲洗水取样
检测最终冲洗水的pH、电导率、总有机碳(TOC)、微生物限度和细菌内毒素等指标。TOC检测因其高灵敏度而成为主流方法,通常要求TOC值低于500 ppb。
⭕挑战性试验
在设备表面施加已知量的污染物,经过CIP后检测残留量,计算清洁效率。
⭕连续三批验证
在实际生产条件下,连续三批生产后的CIP效果均符合预定标准,证明CIP系统的稳定性和可靠性。
在干粉培养基生产流程中,针磨系统是至关重要的粉碎和混合设备。它通过高速旋转的转子和定子上的针棒相互撞击、剪切,将培养基配方中不同性状物料粉碎成均匀细小的粉末。然而,这种精密的机械结构也使其成为了CIP过程中最具挑战性的环节之一。
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结构复杂:密集的针棒阵列和狭窄的间隙极易藏匿粉末,形成清洗死角和盲区。
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物料特性:培养基粉末通常具有粘性,某些成分(如脂类、糖类)遇热或遇水可能熔融或板结,增加清洗难度。
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机械密封性:高速运转的轴封处是潜在的污染源和清洗难点,需要特别关注。
哺乳动物细胞培养基干粉生产过程中,设备内表面可能残留多种污染物,主要包括:营养成分残留:如氨基酸、葡萄糖等; 无机盐结晶:如钙盐、镁盐等; 微量组分残留:如生长因子等; 微生物污染:如细菌、真菌等; 细菌内毒素:微生物死亡后释放的热原物质。残留污染物若清除不彻底,会导致批次间交叉污染,严重影响培养基质量和产品一致性。
针对针磨系统的特殊结构,其CIP过程需特别关注:
✔ 清洗流体的动力学设计:必须确保清洗液能够穿透密集的针棒阵列,在所有内表面形成有效的湍流,实践表明,为实现可靠的清洁效果,清洗过程的雷诺数(Re)应持续大于3000 。这可能需要更高的泵压和精确的喷嘴设计,以产生足够的冲击力。针对针磨系统,清洗液的机械作用力是去除粘附性颗粒的关键。
✔ 温度与浓度的精准控制:碱洗温度需足够高以有效皂化,但过高可能导致某些糖类焦化或蛋白质变性,反而更难以清洗。清洗剂浓度也需优化,以在保证清洗效果的同时,避免对针磨机不锈钢材质造成腐蚀。
✔ 分段清洗与浸泡:对于残留严重的区域,有时需要采用"脉冲式"清洗或短暂的浸泡程序,让清洗剂有充分时间渗透和溶解顽固残留。
✔ 机械辅助与部分拆卸:尽管CIP旨在"在线"完成,但对于某些特定型号的针磨机或在进行清洗验证发现死角时,可能需要部分拆卸(如打开检修盖),配合手动或专用的工具进行辅助清洗,这通常作为周期性深度清洁的一部分。严格的清洁验证必须紧随其后。
✔ 关注密封与轴承区域:轴封和轴承部位是动态密封点,容易积聚物料且难以清洗,需要设计专门的冲洗回路,确保清洗液能够有效冲刷这些关键区域,防止微生物滋生。
案例分享
赛普生物采用国际先进的细川密克朗UPZ160针磨系统进行干粉培养基的生产,从源头上保障产品性能的高度稳定与批次间一致性。
表面光洁度 (Ra值):接触表面高度抛光(Ra ≤ 0.8μm或更低),以减少残留物吸附。
无死角设计:优化结构布局,确保清洗介质能全覆盖所有关键区域。
智能控制系统:量身定制智能化的CIP系统,集成PLC/SCADA,精确控制CIP流程每一步(阀门、流量/压力、浓度/温度、时间)。
高效喷淋设计:配置旋转喷淋球或固定喷头,确保清洗液均匀、有力地覆盖。
取样点预留:设置取样阀,便于CIP后对淋洗水进行取样或进行表面擦拭取样。
针磨系统的在位清洗(CIP)终淋阶段,赛普生物选择超越行业常规的注射用水(WFI)终淋方案。这一“增本提质”的选择,可深度清除设备腔体缝隙的微量残留,杜绝交叉污染;能严苛管控细菌内毒素,从源头降低产品内毒素超标风险;更筑牢远超基础标准的纯净底线,保障下游生物制药、细胞培养等场景的工艺稳定性与安全性。在严格执行包含WFI终淋的CIP程序后,连续多个批次的清洁验证结果显示如下:
所有指标均大幅优于纯化水及企业内控标准,有力证明了CIP程序(特别是WFI终淋环节)的有效性。
依托全流程闭环管控的在位清洗(CIP)体系与精细化物料管理,赛普生物以“精准分级 + 极致质控”打造差异化培养基供应方案。不仅可提供内毒素≤0.25 EU/mL的稳定产品,助力注射用药物生产等场景,保障生产合规可靠;面向细胞治疗、高端科研,定制超低内毒素(≤0.10 EU/mL)培养基,减少内毒素对细胞活性的影响,助力实验精准与临床转化。无论规模化生产还是高端研究,我们均以科学级标准保障产品可追溯、高一致,选择我们即选择护航成果的品质保障。
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CIP系统的未来发展趋势是什么?
随着技术的发展,CIP系统也在不断进步:
1、智能化CIP系统
基于物联网和人工智能的CIP系统可以实时监控清洗过程,自动调整参数,预测清洗效果,实现更高效、更可靠的清洗。例如,通过实时监测冲洗水的TOC或电导率,动态调整清洗时间。
2、绿色清洗技术
开发环境友好的清洗剂,减少化学品使用量和废水排放,是CIP系统的重要发展方向。研究表明,某些生物酶清洗剂在特定条件下可以替代传统的化学清洗剂,对清除某些有机残留效果显著且更环保。
3、一次性设备与CIP的结合
随着一次性设备在制药行业的应用增多,开发适用于一次性设备的CIP方案也成为研究热点。但对于针磨这类重型机械设备,一次性技术应用有限,其CIP的优化仍是主流。
4、节水型CIP系统
通过优化清洗程序和回收利用最终阶段的冲洗水,可以显著减少CIP过程的用水量,最高可节约40%的用水。
在线清洗系统作为哺乳动物细胞培养基干粉生产过程中的关键环节,直接关系到产品质量和患者安全。而针磨系统作为核心加工设备,其清洗效果更是重中之重。通过理解其结构难点,设计科学的CIP程序,严格控制清洗参数,并进行全面的验证研究,才能有效攻克这一清洗难题,为高质量哺乳动物细胞培养基的生产提供坚实保障。 随着生物制药行业的快速发展,对培养基质量和一致性的要求越来越高,CIP技术也将继续演进,为行业提供更加高效、可靠、智能和环保的解决方案。
参考文献:
[1]Seiberling D A. Clean-In-Place for Biopharmaceutical Processes[J]. 2007.DOI:10.3109/9781420014051.
[2]PDA. (2012). Technical Report No. 29 (Revised 2012): Points to Consider for Cleaning Validation. Parenteral Drug Association.
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烟台赛普生物技术有限公司(CelluPro,Ltd)是专业从事高品质哺乳动物细胞用无血清培养基开发、生产(代生产)和销售的现代化高新技术企业,已顺利通过ISO13485医疗器械体系、ISO9001质量管理体系、ISO22301业务连续性管理体系以及知识产权管理体系等多个体系的资质认证,可满足客户从早期开发到商业化生产各阶段的培养基加工及培养基代加工需求。
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近日,杭州市萧山区人民法院就杭州科百特过滤器材有限公司与赛普(杭州)过滤科技有限公司的商业秘密侵权案作出终审判决:赛普公司构成侵犯商业秘密单位犯罪,其法定代表人郑某某及科百特前员工朱某某、王某等被判处一年十一个月至二年九个月不等有期徒刑,缓刑二年至三年六个月不等,并处以高额罚金;另外,各犯罪责任方需承担一定金额民事赔偿。
据悉,这起案件是继此前RC除病毒膜技术商业秘密侵权案终审判决赛普禁售并赔偿525万元后,双方系列纠纷的又一进展。此判决在生物医药“国产替代”浪潮汹涌的当下,向全行业发出了一记警钟:技术创新是国产替代的根基,而尊重与保护知识产权,则是其不可逾越的“合规底线”。
01
知识产权纠纷“常态化”:生物制药上游的知识产权困局
回溯此次案件,赛普公司成立前,赛普公司法定代表人等人为公司迅速开展业务、融资等需要,便伙同科百特前员工窃取科百特公司的涉案商业秘密。而后该员工入职赛普公司,利用该技术信息制造出单元层封装模具、外围封装模具供赛普公司生产牟利。这一系列技术侵权行为,构成了对科百特公司商业秘密的系统性侵犯,最终被司法机关认定为单位犯罪和个人犯罪,相关责任方均受到了法律的严惩。
图1:判决书截图(来源:科百特官微)
其中,关于个人犯罪大家应该比较熟悉,就不多说了,这里着重解释一下“单位犯罪”。公开信息显示,单位犯罪是指公司、企业、事业单位、机关、团体等单位,实施的危害社会、依照法律应受刑罚处罚的行为。在认定商业秘密单位犯罪时,应着重考察侵犯商业秘密的行为是否体现了单位意志,以及犯罪所得的利益全部或者主要归属于单位。若行为人出于个人私利,虽利用职务便利,也通常不构成单位犯罪。
与个人犯罪相比,单位犯罪的后果对企业本身的影响更为深远和广泛,可能会对企业造成不可逆的负面影响,包括商业信誉崩塌、融资渠道受阻、经营许可与资质受限、市场准入壁垒等。因此,单位犯罪的认定,意味着违法行为已从个人层面上升至整个组织体系。它不仅是法律上的严厉制裁,更会在商业层面产生连锁反应,对企业的长期生存与发展构成根本性威胁,其污点将长期伴随企业,修复成本极高,甚至可能导致企业直接走向衰落。
实际上,此类知识产权案件在生物制药用耗材领域并非个例。例如,某公司的“柱装填方法”专利案、“分离介质浆料罐”专利案、“色谱柱”专利案等,涉案双方纠纷涉及自动轴向压缩层析柱、自动匀浆罐等相关产品,其中目前已经有2项涉案专利被宣告无效;此外,今年一项据推测涉及一次性生物反应袋等关键工艺设备技术的发明专利侵权纠纷案件,也引发了行业的关注,不过涉案专利具体内容尚未公开,可见行业内硝烟弥漫。
说回科百特,除了上述提及的相关案件外,其在一次性生物反应器领域也遭遇过多次专利挑战,均被审判机构宣告专利权有效,这也进一步增强了公司产品抗风险能力,巩固和提升了其竞争优势。可见,始终坚持自主创新的重要性。
总的来说,这些案例无不印证,在生物医药这一高度依赖技术创新的领域,核心技术和商业秘密是企业的“命脉”。一旦知识产权保护失守,不仅企业多年投入的研发成果可能付诸东流,更会严重打击行业创新积极性,动摇国产替代的根基。因此,建立完善的知识产权管理体系,敢于并善于运用法律武器维权,已成为生物耗材企业生存与发展的必修课。
02
生物制药用耗材:技术高地与国产机遇
在生物制药研发及生产过程中,生物制药用膜及滤器作为分离纯化环节必不可少的耗材,应用于包括缓冲液过滤、初步分离和浓缩、除菌过滤、超滤、除病毒过滤、细胞培养及收获等众多场景,对应市场规模广阔。根据中信建投证券,2030年预计中国层析超滤系统、过滤组件市场空间将达到78亿元、118亿元。
图2:膜过滤产品广泛应用在生物制药各个环节(来源:中信建投证券)
不过,由于其技术壁垒高,行业长期被外资垄断,国内高端滤膜依赖进口,存在卡脖子风险,如中空纤维膜曾引发供应链危机。在此背景下,实现国产替代不仅是市场机遇,更是国家战略所需。然而,真正的国产替代,需要的是十年如一日的研发投入与技术沉淀。
例如科百特,其自2003年成立以来,便专注于过滤分离纯化膜技术和流体管理系统研究和开发,其愿景是成为一家全球领先的过滤分离公司。官网显示,科百特拥有超3000名工程师,建立了约42个研究&应用中心,拥有超11个膜技术平台,265项新技术研究方向。在国内市场上,公司的过滤产品和解决方案覆盖了90%以上的大型制药企业;在国际市场上,公司产品远销100多个国家和地区。
从2003年起,科百特建立从膜材料到过滤产品组件,从过滤系统设计到过滤验证测试分析的完整过滤分离产业链,逐步成长为全球领先的创新型过滤企业。此次胜诉,是科百特重视技术安全,维护知识产权,已建立系统性的知识产权保护体系的集中体现。
科百特通过构建专利产品领域全覆盖的立体防护网,系统性地捍卫创新成果,如公司目前基于除病毒系列产品已申请专利近60项,发明占比60%以上,在膜材质、组件、应用和验证上都进行了全面的布局。同时,科百特的产品研发以及专利布局仍在不断完善中。此外,公司还曾入选杭州市专利示范企业等,可见其一直都特别重视在知产保护方面的布局。
图3:科百特除病毒等系列产品(来源:科百特官微)
从具体产品看,科百特除了上述提及的RC除病毒产品,如Viruclear® RC系列等除病毒滤器外,其广泛的产品线包括超滤膜包、除菌过滤器、深层过滤器等,同时,其还提供一次性生物反应袋,如Lifecask™ RW一次性生物反应袋等产品。总之,公司产品广泛应用于血液制品、抗体药、疫苗、细胞治疗等药物的生产。值得注意的是,科百特的“新型膜法水处理关键技术及应用”项目,在2023年就已荣获国家科学进步一等奖;此外,科百特还与业内众多企业,如复宏汉霖、诺唯赞、华润三九、百利多特等达成了战略合作,强强联手,技术和资源互补,加速赋能产品的创新研发。
图4:科百特一次性生物反应袋(来源:科百特官微)
而从整个产业链角度看,过滤膜的知识产权稳定性对行业供应链发展尤为重要,其作为关键材料,是药物注册的早期参数之一。因此,类似科百特这种具备独立研发创新能力、建立完善的知识产权体系的企业,对于生物医药行业的国产供应链稳定发展,就显得尤为重要了。
可以说,科百特的这一系列行动,为整个生物耗材领域树立了标杆:创新者必须勇于捍卫自己的成果,唯有如此,才能激励更多企业走上真正的自主创新之路。此次胜诉也不仅是对单一技术的守护,更证明系统性知识产权体系能为国产替代提供“安全垫”,为行业树立了“创新 + 保护”的发展范式。
03
结语:守护创新,方能行稳致远
总的来说,本案的刑事、民事双重判决,体现了司法机关对侵犯商业秘密行为的“零容忍”态度,为生物医药行业的知识产权保护树立了鲜明的司法标杆。同时,其对行业各方,如企业、投资者、产业链均有启示意义:
对企业而言,应建立完善的知识产权管理体系,考虑通过建立专利池、开展技术授权等方式,进行健康的技术交流与合作,而非恶性竞争。
对投资者而言,在评估高科技企业时,必须审慎核查其技术的独立性与来源合法性,支持真正有创新基因的企业。
对产业链而言,健康的国产替代生态,需要所有参与者共同维护。倡导行业建立良性的技术交流机制,尊重知识产权,方能行稳致远。
未来,唯有在合规的土壤上深耕细作,通过持续创新攻克“卡脖子”难题,中国生物医药产业才能真正实现高质量发展。科百特的胜利,不仅是单个企业的胜利,更是对中国创新精神的守护与致敬。
参考资料:
[1] 关于收到《刑事判决书》暨案件进展情况的公告. 科百特生命科学. 2025-10-08.
[2] 从一场过滤膜的商业纠纷,看生物医药供应链的隐形风险. E药经理人. 2025-06-21.
[3] 滤膜行业研究:从技术特性到产业发展新趋势. 梧桐树资本. 2025-08-14.
[4] 志霖业绩|志霖助力杭州科百特一次性生物反应器领域专利无效案获胜. 志霖律师事务所. 2025-04-26.
[5] 志霖业绩|志霖助力杭州科百特一次性生物反应器领域两件专利无效案获胜. 志霖律师事务所. 2025-01-03.
[6] 汉邦科技科创板IPO生效后迎诉讼转折,Cytiva涉案专利被宣告无效. 知联社. 2025-09-18.
[7] 千万索赔悬顶,汉邦科技IPO与主营产品命运何去何从?知联社. 2025-02-20.
[8] 生物制药领域专利博弈战!思拓凡起诉百林科专利侵权. IPRdaily. 2025-05-08.
[9] 挖人带技术!一生物医药供应商因侵犯商业秘密构成单位犯罪. 知产财经. 2025-10-15.
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