Levostar Life Science Co., Ltd.

随着In Vivo CAR-T 技术（体内基因重编程）不断发展，研究者逐渐将目光从体外扩增的传统CAR-T，转向“体内一步生成CAR-T细胞”的更高效、更可扩展策略。在这一技术路线中，mRNA/tLNP靶向T细胞递送是核心，而要实现“精准靶向T 细胞”，抗体偶联（antibody conjugation）成为关键环节：通过使用不同类型的抗体结构域与LNP表面蛋白连接，可赋予纳米颗粒“特异识别能力”，让其在人体内更准确地找到 CD8、CD3 等目标受体。因此，抗体类型的选择与稳定性，已成为当In Vivo CAR-T 研究的热点讨论方向。 抗体偶联可采用哪些抗体类型？ 常见的包括： 全抗体（IgG） scFv（single-chain variable fragment） VHH（单域抗体，来源于骆驼科） scFv-Fc（二聚化后的单链抗体） VHH-Fc（带 Fc 结构域的单域抗体） 不同类型的抗体不仅在产量、亲和力、表达系统等方面存在差异，更关键的是：它们的稳定性不同，而稳定性会直接影响tLNP偶联效率、最终靶向特性以及产品开发成功率。 抗体类型的稳定性排序 根据结构复杂度、折叠能力、热稳定性、免疫球蛋白折叠域数量等因素，主流抗体形式的稳定性可大致排序如下： VHH ＞ VHH-Fc ＞ 全抗体 IgG ＞ scFv-Fc ＞ scFv VHH — 结构最简洁，因此最稳定 优势： 仅 ~15 kDa，是最小的天然抗体结构域 单域折叠、无轻链，几乎不存在错配问题 天然高热稳定性，能耐受更宽的 pH、温度 偶联到 LNP 上时表达均一、批间差更小 稳定性强的原因： 单结构域无需配对，折叠效率最高 表面疏水性较低，不易聚集 来自骆驼科的天然抗体结构，专为稳定而生 不稳定的可能因素： 连接肽过长可能引起局部柔性导致构象变化 部分 VHH 高表达时可出现低水平聚集 整体来看，VHH 的稳定性显著优于其他抗体格式。 VHH-Fc — 保留稳定性同时提升二聚化与半衰期 优势： Fc区域带来二聚化和长半衰期 成熟的 IgG工艺平台容易生产 保留 VHH核心的高稳定性 稳定性因素： Fc的加入让分子尺寸更大，但折叠已有成熟生产经验 Fc 本身高度稳定，使总体仍处于较高稳定等级 不稳定来源： Fc 糖基化不均可能影响批间一致性 长 linker 或不合适的偶联位点会影响配对效率 全抗体 IgG — 天然稳定，但复杂度高    优势： 天然二聚化、四链体结构，成熟度最高 Fc 区域增加稳定性 是临床最常用抗体形式 稳定性中等的原因： 虽然整体结构成熟，但四条链配对体系复杂 需要重链/轻链正确折叠与装配 在偶联条件下（如TCEP还原）局部结构易受影响 潜在不稳定因素： 还原条件过强可能破坏二硫键 轻重链错配导致产物不均一 更大分子尺寸可能影响LNP偶联密度 scFv-Fc —scFv稳定性较差，Fc能部分“补救” 特点： 由 scFv + Fc 构成，可稳定二聚化 Fc 带来较好的折叠框架 但由于 scFv 的固有不稳定性会传递，整体稳定性仍低于 IgG： 不稳定来源： scFv VH/VL 配对不稳定 Linker 柔性高导致构象漂移 易出现聚集或低表达 Fc 的加入改善了一部分问题，但不能完全解决。 scFv（最不稳定） 优势： 分子小、便于表达 研究应用广泛 稳定性差的主要原因： 1. 需要 VH/VL 配对，天然不稳定 2. linker 通常较柔软，导致结构漂移 3. 疏水残基暴露，易聚集 4. 在偶联/纯化/还原条件下更容易失活 因此，在 In Vivo CAR-T 中，scFv正逐渐被VHH或VHH-Fc替代。 抗体稳定性不足的三大共性因素 无论何种结构，抗体在偶联流程中常见的不稳定原因包括： ① 还原条件（如 TCEP）导致二硫键断裂 尤其影响全抗、scFv-Fc 的 Fc 配对与折叠。 ② 折叠或链配对效率不足 scFv 尤其明显，可能出现错配、折叠不完全。 ③ 聚集（Aggregation） 疏水区域暴露、过高蛋白浓度、缓冲液不适均可导致聚集，从而影响偶联后的靶向能力。 在众多抗体格式中，VHH 被公认为稳定性和工艺兼容性最优的选择，尤其适合In Vivo CAR-T的tLNP靶向开发。但在实际研发过程中，不同项目仍会根据靶点、生物学需求及工艺路径，采用全抗、scFv、scFv-Fc、VHH-Fc等多种抗体形式，这也对抗体偶联后的质量表征与稳定性评估提出了更高要求。 围绕In Vivo CAR-T 抗体偶联研发需求，左旋星已建立覆盖多种抗体类型的系统化检测能力，可针对不同抗体结构，提供抗体–LNP偶联效率、粒径与分布、表面抗体密度与稳定性等关键指标的综合分析，帮助研究者快速判断偶联是否成功、结构是否稳定以及是否具备进一步体内验证的可行性。通过标准化、可量化的检测手段，左旋星助力客户在抗体格式筛选、工艺优化及 tLNP 靶向递送开发过程中，降低试错成本，加速In Vivo CAR-T研究进程。 关于左旋星 . 海晏检测 左旋星 . 海晏检测，是一家专注于生物安全检测技术服务及研发的科技创新型企业，致力于为抗体药物、细胞基因治疗、核酸药物、疫苗等医药领域提供专业的检测服务。中心拥有细胞、核酸、病毒载体三大检测平台，以满足生物药从研发到商业化生产全流程的生物安全检测需求。 秉承着“安全、合规、科学、高效、保密”的理念，我们严格遵循GMP、CNAS、CMA等标准建立质量管理体系，具有CMA资质认定和CNAS认可双资质，建设有1500平符合ISO/IEC17025和cGMP标准的药物质量安全实验室，满足生物医药客户的IND/BLA法规申报和技术要求，为客户提供全面的生物安全检测解决方案。 更多详细信息，欢迎发送邮件至BD@levostar.com.cn或致电17372736310咨询了解。 关注我们,了解更多

生物制品研究所、国家食品药品监督管理局的专家发布了mRNA疫苗质量控制研究进展，文章基于线性mRNA疫苗和sa-mRNA疫苗的制造工艺，USP指南第二版规定了针对质粒模板、mRNA原料药和mRNA药物产品的相应测试项目和推荐分析了方法，具体如下： 1 质粒模板测试 2 原料药测试 3 疫苗成品与放行测试 文章指出mRNA疫苗的稳定性研究不足，降解模式不明确，需在高温条件下研究，并确定影响稳定性的因素及降解模式，LNP结构和储存条件对其稳定性有重要影响。 LNP的质量控制：LNP 作为递送系统，其组分（特别是可电离脂质）和内部结构对疫苗质量、安全性和有效性影响显著，应详细表征LNP，并研究其生物学功能。 面对mRNA疫苗的稳定性及LNP的质量控制的高要求，左旋星建立了全流程工艺质控能力，可为In Vivo CAR-T等新型疗法提供从序列到递送的完整解决方案，加速项目从研究到转化的推进。左旋星建立了完整且可量化的质控体系，覆盖外观、物理性质与功能性指标，使得关键指标可被量化、可控并满足研发与质量放行需求。 文章DOI：https://doi.org/10.1080/14760584.2024.2354251 关于左旋星 . 海晏检测 左旋星 . 海晏检测，是一家专注于生物安全检测技术服务及研发的科技创新型企业，致力于为抗体药物、细胞基因治疗、核酸药物、疫苗等医药领域提供专业的检测服务。中心拥有细胞、核酸、病毒载体三大检测平台，以满足生物药从研发到商业化生产全流程的生物安全检测需求。 秉承着“安全、合规、科学、高效、保密”的理念，我们严格遵循GMP、CNAS、CMA等标准建立质量管理体系，具有CMA资质认定和CNAS认可双资质，建设有1500平符合ISO/IEC17025和cGMP标准的药物质量安全实验室，满足生物医药客户的IND/BLA法规申报和技术要求，为客户提供全面的生物安全检测解决方案。 更多详细信息，欢迎发送邮件至BD@levostar.com.cn或致电17372736310咨询了解。 关注我们,了解更多

2025药典对《9101 分析方法验证指导原则》进行了重大修改，进一步推进了统计学在分析方法验证中的应用。 2020年版药典中，针对分析方法验证中精密度试验，数据分析的要求为均应报告标准偏差、相对标准偏差或置信区间。2025年版药典中，针对分析方法验证中精密度试验，数据分析的要求为：所有的精密度试验都应报告标准偏差、相对标准偏差（变异系数）和适当的100（1-α）%置信区间或其他合理的统计区间。 对比可以看出，新版药典精密度试验数据分析要求已经从建议提供变为要求提供置信区间了，准确度试验同样要求提供适当的置信区间。 1 标准偏差 对于样本量适中到较大且呈对称的钟形分布，如正态分布的数据，可以结合经验规则使用标准差。该分布下，大约68%的数据将落在均值±1个标准差范围内；95%的数据将落在均值±2个标准差范围内；几乎所有（99.7%）数据将落在均值±3个标准差范围内。 标准偏差公式： 2 相对标准偏差（变异系数） 也称标准误差，用于描述抽样统计量对总体参数间的偏离程度估计，即通过抽样计算得到统计量的准确性。变异系数（CV）也称相对标准差（RSD），是标准差与均值的非负率值，通常以百分位数表示。 相对标准偏差公式： 式中，S是样本标准差；n是样本量。 3 置信区间 表达总体参数在规定置信水平下可能出现的范围，它由置信下限（CL）和置信上限（CU）组成。其中置信水平100（1-α）%反映了在相同条件下，一系列重复随机样本中置信区间[CL，CU]包含或覆盖参数真值的占比。 α表示显著性水平，用来衡量在假设检验中，实验结果可能出现错误的概率。α越小，则出错的概率越小。通常α取0.05，因为统计学上认为，如果一件事情的发生概率只有5%，那么就不太可能发生。置信水平=100（1-α）%，当α取0.05时，置信水平为95%，即：有95%的信心认为真实的参数值位于计算出的置信区间内。 置信下限（CL）公式： 置信上限（CU）公式： 式中，t1-a,df是当标准差S具有df自由度，且置信水平为1-α时的t分布的1-a分位数。 2025版药典四部《9097分析数据的解释与处理指导原则》给出了一些介绍和计算公式，分析人员可以在实际应用中参考。 2025版药典在分析方法验证方面较2020版有显著改进，更加科学且全面。药品行业各相关人员应充分认识到这些变化，积极采取应对措施，在适应新版药典要求过程中，不断提升药品质量控制水平，保障公众用药安全。 关于左旋星 . 海晏检测 左旋星 . 海晏检测，是一家专注于生物安全检测技术服务及研发的科技创新型企业，致力于为抗体药物、细胞基因治疗、核酸药物、疫苗等医药领域提供专业的检测服务。中心拥有细胞、核酸、病毒载体三大检测平台，以满足生物药从研发到商业化生产全流程的生物安全检测需求。 秉承着“安全、合规、科学、高效、保密”的理念，我们严格遵循GMP、CNAS、CMA等标准建立质量管理体系，具有CMA资质认定和CNAS认可双资质，建设有1500平符合ISO/IEC17025和cGMP标准的药物质量安全实验室，满足生物医药客户的IND/BLA法规申报和技术要求，为客户提供全面的生物安全检测解决方案。 更多详细信息，欢迎发送邮件至BD@levostar.com.cn或致电17372736310咨询了解。 关注我们,了解更多