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摘要：诺罗病毒属于杯状病毒科，是一种无包膜、正链单股RNA病毒。它被广泛认为是引起非细菌性急性胃肠炎的重要病原体，并被认为是主要原因之一。诺罗病毒主要通过粪-口途径传播，但也可以通过空气传播。临床表现通常包括与急性胃肠炎相关的症状，如恶心、呕吐、水样腹泻、胃痉挛等。由于病毒特定的致病机制和基因组多样性，目前尚无预防性疫苗或有效的抗病毒药物用于治疗诺罗病毒引起的急性胃肠炎感染。这类感染的管理主要依赖于口服补液疗法，而预防则需要坚持个人卫生措施。本文讨论了诺罗病毒的性质、传播途径、临床表现、免疫反应机制和疫苗研究。本综述论文的目标是系统地收集、分析和总结诺罗病毒的最新研究和调查，以增强我们对其特性和发病机制的理解。这不仅有助于后续研究者更快、更全面地掌握诺罗病毒的现有知识，而且为未来的研究提供了更清晰的方向和目标。 1.诺罗病毒介绍 1.1.诺罗病毒的基本结构和病理特征 诺罗病毒属于杯状病毒科，是一种无包膜、正链单股RNA病毒（ssRNA(+)病毒），可以分为10个基因群。诺罗病毒最早于1968年在美国俄亥俄州诺沃克市一次急性胃肠炎爆发中被发现，当时从受影响患者的粪便中分离出来。从那时起，这种病毒在全球胃肠炎患者的粪便样本中被持续检测到。人类诺罗病毒被广泛认为是急性胃肠炎的重要病原体，在五岁以下儿童中约占20%的病例。一些诺罗病毒基因群感染动物，如狗、猪和老鼠，而其他基因群感染人类。主要传播方式是通过粪-口途径，包括摄入受污染的食物或水和人与人之间的接触。然而，也有证据表明诺罗病毒可以通过空气传播。近年来，与诺罗病毒相关的急性胃肠炎发病率稳步上升。临床表现通常包括恶心、呕吐、水样腹泻、胃肠痉挛等症状，偶尔伴有发热、寒战、头痛和全身不适。此外，近年来的研究表明，诺罗病毒可以与急性胃肠炎一起引起良性惊厥，暗示与神经系统有潜在关联。从临床角度来看，感染后无症状的个体与有症状的患者具有相似的传播能力。这对于准确临床识别诺罗病毒构成了重大挑战。 1.2.病毒在宿主中的入侵模式 诺罗病毒侵入人体的主要方式是通过感染胃肠道中的巨噬细胞和树突状细胞。感染人类后，这些病毒表现出对胃肠道的偏好，诺罗病毒可以利用肠道上皮屏障的M细胞，并且肠细胞能够从肠腔收集物质并将其转移到潜在的免疫细胞。值得注意的是，由于在人类细胞中成功培养诺罗病毒的挑战，大多数研究这一机制的研究主要利用了小鼠或其他杯状病毒。诺罗病毒的入侵主要分为五个步骤，即粘附、受体结合、内吞、脱壳和翻译。根据有限的报告，小鼠诺罗病毒附着到细胞膜上的HBGAs结构是由多种因素促进的，包括胆汁酸、唾液酸和阳离子，然后诺罗病毒结合到CD300lf。神经酰胺在结合过程中起着重要作用。与大多数依赖pH值进行内吞的病毒不同，诺罗病毒主要依赖胆固醇和动力蛋白进行内吞。由于缺乏5'帽结构，诺罗病毒RNA依赖于VPg蛋白与启动因子结合以启动翻译过程，如图1所示。 图1. 基于诺如病毒感染患者发现的诺如病毒感染发病机制的假设模型。 1.3.病毒亚型 诺罗病毒的基因分类目前被归类为十个不同的基因群（诺罗病毒GI至诺罗病毒GVX）和两个未分配的基因群。通过对诺罗病毒基因序列的比较，研究人员进一步将这些基因群分类为49个不同的壳蛋白基因型和60个独特的p型，显著增强了我们对诺罗病毒的理解。由于GI和GII诺罗病毒的大流行，它们值得特别关注。 从GenBank获得的全球流行潜力最高的GI和GII型诺如病毒的完整基因组序列被用作系统发育分析的参考菌株。序列信息可在补充材料中的表S.1找到。我们使用MEGA 10.1.8中的“通过肌肉对齐”功能对下载的序列进行比较分析，随后使用MrBayes v3.2.7构建整个基因的贝叶斯推断树。获得的结果揭示了图2中所示的许多诺如病毒GI株变体。 图2. 18种全球诺如病毒GI亚型的完整基因组序列中的基因进化树。这棵树代表了诺如病毒传播过程中基因家族的进化历史，以及不同地区和国家中各种诺如病毒全球流行株之间的系统发育关系（见颜色图例）。"0.006″代表分支长度的尺度，用来衡量祖先和后代之间的距离。内部节点上的其他数字，也称为支持值，用来评估一个分支结构的可靠性。分支的支持值越高，意味着支持该分支的证据越多。 图3描述了诺如病毒GII株的众多变体。菌株的持续变异为开发能够有效中和广泛菌株和亚基因型的通用疫苗带来了挑战。因此，即使接种了完整疫苗的个体仍可能易感染，特别是如果疫苗效力受到损害。因此，迫切需要新型抗病毒药物以及疫苗研究的进步。 图3. 18种全球诺如病毒GII亚型的完整基因组序列中的基因进化树。这棵树是按照图2的方法生成的。 1.4.预防诺如病毒感染的公共卫生策略 在疫苗的研发中，为诺如病毒开发有效解决方案存在许多挑战，包括人类对诺如病毒的自然免疫反应的复杂性，病毒诺如病毒基因组的遗传多样性，缺乏可靠的病毒体外培养系统，以及可用于疫苗测试的动物模型有限。因此，尚未建立经批准的诺如病毒疫苗。幸运的是，一些研究报告称，斑马鱼可以作为一种新型的HuNov模型，为诺如病毒疫苗的研究提供了宝贵的见解。另一方面，对于由诺如病毒引起的急性胃肠炎，目前的主要治疗方法是口服补液疗法。这包括摄入口服补液电解质和水的补液阶段，以及涉及摄入电解质、水和适当食物的维持阶段治疗。研究表明，昂丹司琼可用于缓解经历呕吐的儿童的症状。与此同时，应进一步加强公共卫生保健计划，以有效预防病毒感染。此外，应采取措施加强日常生活，降低病毒感染风险。这些措施主要依赖于持续坚持手部卫生习惯，密切关注环境表面的消毒，以及尽量减少与传染源的直接接触。 2.受体和分布 病毒的组织和细胞嗜性由许多因素决定，宿主细胞表面受体在这一过程中起着关键作用。通过研究诺如病毒的表面受体，我们可以了解它们在人体内的入侵机制和特征。根据先前的研究，CD300被确定为小鼠诺如病毒受体，它是一种含有免疫球蛋白（Ig）结构域的膜蛋白。相比之下，人类诺如病毒受体主要可分为两类：一类是以组织血型抗原（HBGAs）为代表的碳水化合物受体，另一类是以Toll样受体（TLR）为代表的免疫受体。表1总结了人类诺如病毒受体在宿主上的表达位点和作用方式。 碳水化合物结合是大多数病毒和微生物用来粘附宿主细胞的普遍机制。其中，HBGAs代表一类碳水化合物结构，利用碳水化合物结合模式作为它们主要的诺如病毒附着于宿主细胞的受体。HBGAs的催化由三个基因家族（ABO、分泌型和Lewis）编码的糖基转移酶促进，这些酶依次向前体添加单糖。HBGAs主要存在于呼吸道、消化道和泌尿生殖道的粘膜上皮中，也存在于唾液等自由低聚糖的形式中。FUT3酶促进H型1抗原转化为Lewis b。ABO基因编码的A和B酶可以酶促地向H抗原添加乙酰半乳糖胺或半乳糖。根据诺如病毒的不同亚型，菌株可以以不同的方式结合HBGAs。这里以GII株为例，说明它们主要通过α-Fuc残基与HBGAs相互作用。例如，GII.17株通过在VP1的444位点发生突变，增强了其HBGA结合能力，用酪氨酸替代。此外，GII.2 BJSMQ爆发株的HBS在VP1的382位点发生了突变，从而增加了其稳定性和结合能力。另一方面，具有低HBGA结合能力的病毒引发爆发的能力归因于低聚糖结合分子模式的变化。相关研究表明，诺如病毒利用其自身的P结构进行HBGAs结合，通过一个被称为结合袋的过程。细胞和非细胞宿主分子都增强了诺如病毒的结合。例如，胆汁盐可以在P结构域中引起适度的结构变化，以促进诺如病毒的结合，而鞘氨醇可能改变细胞上抗体表位的构象，以促进病毒进入。 免疫反应是关键的抗病毒防御响应系统，在识别和清除细胞内病原体中发挥着核心作用。Toll样受体（TLRs）在各种先天免疫细胞中表达，并定位于血浆、内质体和溶酶体膜中，代表一类跨膜受体家族。诺如病毒蛋白衣壳的病毒样颗粒（VLPs）展示出对宿主细胞表面的TLR2和TLR5受体的剂量依赖性结合，从而引发免疫介导的反应。先前的研究报告称TLR2途径涉及病毒宿主感染和炎症促进，而TLR5途径显著引发粘膜和系统性IgA和IgG反应。 一般来说，诺如病毒可以通过各种受体进入宿主细胞，这些受体的表达在不同组织中有所不同。目前，诺如病毒的受体研究主要集中在HBGAs上，自2003年12月以来的报告中已有记录。后续研究揭示了多种附着因子在促进诺如病毒与HBGAs结合以及免疫受体如TLRs中发挥关键作用。受体的多样性逐渐揭开了诺如病毒的侵袭机制和特征。然而，仍有一定机制和受体尚未完全理解。鉴于诺如病毒的不断进化和其基因库的扩展，研究人员需要探索更广泛的受体亚型。 3.临床观察 与诺如病毒感染相关的最普遍症状包括呕吐和腹泻，偶尔伴有恶心、腹部不适、绞痛、食欲减退、不适和低热。常见并发症可能包括良性惊厥、热性惊厥、抽搐、坏死性小肠结肠炎以及炎症性肠病的加重。从有呼吸道症状的儿童的呼吸道分泌物中检测发现，诺如病毒也可能涉及呼吸道疾病。此外，还有报道称，轻度脑膜炎可以根据临床表现归因于诺如病毒感染。 与诺如病毒感染相关的症状在个体间表现出变异性，在婴儿、老年人和免疫受损个体中观察到更高的发病率。研究表明，幼儿表现出更严重的症状，通常在2岁之前建立保护性免疫以防止再感染。1岁以下婴儿腹泻的主要表现为水样腹泻，这可能导致脱水、电解质失衡、抽搐，严重情况下可能致命。 此外，伴有抽搐的诺如病毒胃肠炎患者还经历了短暂的呕吐（大约持续2天）且无发热。对于免疫正常的诺如病毒胃肠炎患者，感染的潜伏期通常较短，通常在24至48小时之间。这种状况的特征是呕吐、恶心、腹痛和腹泻等症状，通常在72小时内解决。 此外，病毒的不同株会表现出不同的临床表现。根据先前的研究，GII基因型在全球人类诺如病毒感染中普遍流行，而GI基因型只在有限的病例中观察到。考虑到季节变化，GI基因型的流行主要在春季观察到，而GII基因型在秋季占主导地位。与其他基因型相比，诺如病毒GII感染与严重腹泻和呕吐的发病率更高。此外，感染基因型GI的患者中有较大比例经历了恶心、腹泻持续不到3天以及肠鸣音增加等症状。 对主导株及其与临床表现的相关性的理解将有助于提高临床诊断的准确性和基于证据的预防和治疗策略的发展。 4.诺如病毒的结构和宿主对病理的免疫反应 诺如病毒基因组通常由三个开放阅读框（ORFs）组成，其中ORF1编码六个非结构（NS）蛋白，即p48、核苷酸三磷酸酶（NTPase）、p22、VPg、蛋白酶（Pro）和RNA依赖性RNA聚合酶（RdRp）。病毒衣壳的主要结构蛋白VP1由ORF2编码，而衣壳的次要结构蛋白VP2由ORF3编码。 通过VP1蛋白的P域与细胞受体结合后，病毒内化并脱壳，在细胞质中释放正RNA（+RNA）。复制通过Pol、VPg和NTPase蛋白的协调作用完成。随后，VPg蛋白结合到RNA的5′端，招募起始因子，并参与启动病毒RNA翻译以产生VP1和VP2蛋白。 成功翻译后，大多数由诺如病毒ORF1编码的蛋白通过病毒编码的蛋白酶（Pro/NS6）介导的蛋白水解处理，被切割成不同的实体：p48（NS1/2）、NTPase（NS3）、p22（NS4）、VPg、Pro和RdRp。这些单独的蛋白具有对复制和感染过程至关重要的特定功能。诺如病毒通过其各种结构元素进入和复制的过程如图4所示。 图4. 病毒结构在复制和感染过程中的重要性。 有关诺如病毒ORFs及其编码蛋白的全面信息，这些蛋白在复制和感染过程中发挥关键作用，总结在表2中。 诺如病毒的发病机制特征在于复杂的宿主-病毒相互作用，其中许多因素发挥着关键作用，包括组织细胞嗜性、宿主免疫反应和细菌微生物。诺如病毒的细胞趋向主要针对远端回肠的肠道相关淋巴组织（GALT）免疫细胞，包括巨噬细胞（Mφ）、树突状细胞（DCs）、B细胞和T细胞；以及在滤泡相关上皮（FAE）内的少量细胞群体。一些趋化因子/细胞因子具有抑制病毒复制的功能。在病毒感染期间，I型和II型干扰素都可以通过诱导先天免疫介质来抑制复制子表达的复制，同时阻碍VPg与翻译起始因子之间的相互作用，从而抑制非结构蛋白的翻译。IL-4对集群细胞的作用增强了免疫反应。此外，适应性免疫系统的B细胞和T细胞在有效清除肠道和肠系膜淋巴结病毒方面发挥着关键作用。外膜囊泡（OMV）在促进共生细菌与其宿主之间的交流中发挥着重要作用。在诺如病毒感染后，肠道共生细菌表现出增强的细菌外膜囊泡（BEV）生成，这有助于调节免疫反应。 5.药物和疫苗的管理 在药物研究中，抗病毒药物主要分为三大类，基于其机制：第一类旨在防止病毒附着在宿主细胞表面。例如，HBGAs已被确定为促进病毒粘附和进入的重要因素。研究表明，某些焦糖类碳水化合物，如柠檬酸盐，可以有效抑制病毒活性，并在抗病毒药物开发中具有巨大潜力。第二类涉及病毒蛋白酶抑制剂，针对病毒蛋白酶对复制相关蛋白的催化分解。鲁匹那韦是这一类别中的一种显著抗病毒药物，主要用于治疗人类鼻病毒，但也显示出对其他小RNA病毒、冠状病毒和诺如病毒的疗效。第三类是RdRp抑制剂，以核苷类似物为最具代表性的例子。这些化合物通过阻止核苷酸结合，从而阻碍病毒入侵。目前，CM521是唯一获批用于诺如病毒感染治疗的药物；其次是20-C-甲基胞苷（2CMC），一种流行的胞苷类似物，能够抑制病毒聚合酶活性和翻译；此外，腺苷类似物如7-去氮-20-C-甲基腺苷（7DMA）和NITD008也表现出类似特性。 首先，来自植物的天然产品，如黑覆盆子种子、藻类多糖、陈年绿茶、草种细辛提取物和葡萄籽提取物（GSE）已被研究。GSE已被证实含有超过83%的原花青素，主要功能是病毒聚集，并显著抑制病毒入侵和复制。同样，香附子（AGR）提取物及草种细辛中的α-阿萨酮和β-阿萨酮通过防止病毒与P结构结合表现出显著的抗病毒效果。类似的发现也在石榴皮提取物（PPE）中观察到。其次，合成化合物如达萨布韦（DSB），最初为治疗丙型肝炎而开发，但意外发现其能阻碍诺如病毒在体内的发展，代表了另一类潜在的治疗药物。 在疫苗方面，开发有效的诺如病毒疫苗对于减少诺如病毒相关的发病率和死亡率至关重要。根据最近的研究，诺如病毒疫苗可以分为两组：VLP疫苗和P颗粒疫苗。在VLP疫苗类别中，根据诺如病毒衣壳蛋白VP1的组成（基于VLP）和使用重组腺病毒表达VP1（基于重组腺病毒）进一步分类。如表3所示，现有的诺如病毒疫苗因其不同的类型和来源而具有不同的特征、优缺点。 总之，诺如病毒疫苗和药物的开发进展迅速。同时，更多的临床试验和动物实验正在进行，以进一步促进其进展。疫苗研究将为药物开发提供新思路和方向，而药物创新将探索疫苗改进的更多可能性。 6.未来展望 诺如病毒约占全球急性胃肠炎负担的20%。根据现有文献，诺如病毒每年导致约6.988亿例疾病和218,800例死亡，涵盖所有年龄组。然而，有限的研究内容和发现阻碍了对诺如病毒的全面理解。 根据诺如病毒的相关特征，未来对抗病毒药物和疫苗的研究可以集中在抑制病毒入侵或阻止病毒与诺如病毒表面受体（如HBGAs和TLR）的结合。此外，针对诺如病毒基因组表达的特定蛋白，可以抑制病毒复制、转录和翻译，以促进抗病毒药物和疫苗的开发。此外，植物来源的物质或合成药物可以用于阻碍病毒致病机制，以便进行治疗和预防。目前，许多研究已针对药物和疫苗进行，一些制药公司已经通过临床实验推进相关产品。预计未来将开发出更有效的药物，从而改善诺如病毒的研究和治疗结果。 识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入 生物制品微信群！ 请注明：姓名+研究方向！ 版 权 声 明 本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。

摘要：人诺如病毒（HuNoVs）是引起急性胃肠炎的主要病原体，每年导致巨大的经济损失。由于缺乏合适的培养系统，HuNoVs的致病机制以及疫苗和药物的研发进展缓慢。尽管研究人员在上个世纪采用了多种方法在体外培养HuNoVs，但后代病毒的不可还原性、低病毒滴度和非传染性等问题不容忽视。2016年，研究人员利用人肠道类器官成功培养并连续传代了一些HuNoV基因型，初步展示了类器官在克服这一挑战中的潜力。本文回顾了过去20年在体外培养HuNoVs方面的努力，并讨论了使用人肠道类器官/类器官作为HuNoVs体外培养模型的优势和局限性。 1.引言 诺如病毒（NoVs）属于杯状病毒科诺如病毒属。病毒颗粒具有二十面体对称结构，T=3，直径约为25-40纳米，由90个VP1衣壳蛋白二聚体和少量VP2复合体组成，无包膜（图1A）。病毒基因组为正义单链RNA，长度约为7.7-8.3 kb，5'端与病毒编码的蛋白VPg结合，3'端聚腺苷酸化。根据遗传特征，NoVs可分为10个基因群和49个基因型，其中与人类感染相关的五种株（称为人诺如病毒，HuNoVs）为GI、GII、GIV、GVIII和GIX（图1B）。GII.4以其快速突变率而闻名，与全球50%的诺如病毒爆发相关，自1990年代以来，这一基因型株已引起六次大流行。2014年冬季，逃避人群免疫的GII.17株在亚洲出现，在中国和日本引起广泛爆发，并在某些地区取代了GII.4。近年来，非GII.4病毒如GII.2和GII.3也在几个国家引起大型爆发。 图1. 诺如病毒的形态特征、宿主范围和基因组特征：（A）透射电子显微镜下HuNoV GII.4 VLP的形态，显示直径约40纳米的正二十面体结构；（B）诺如病毒的宿主范围；（C）HuNoVs的基因组组织。HuNoVs的RNA基因组可以分为三个开放阅读框（ORFs），这些开放阅读框编码六个非结构蛋白的前体、主要结构蛋白VP1和次要结构蛋白V。 HuNoVs主要通过粪-口途径传播，具有高传播能力（最小感染剂量少于100个病毒颗粒），传播范围广（可通过人类、食物、水源等传播），存活时间长（可在物体表面存活2周，在环境中存活9周）。据估计，HuNoVs每年在全球引起近7亿病例和超过20万人死亡。HuNoVs感染所有年龄段的人群，感染者通常在12-24小时内出现恶心、水样非血性腹泻、腹痛、发热和不适；在这些病例中，HuNoVs在粪便（每克粪便10^5-10^11病毒拷贝）和呕吐物（每毫升呕吐物10^3-10^6病毒拷贝）中大量排出。尽管免疫能力正常的人通常在2-3天内从感染中恢复，但反复感染和新株的增加对健康不利。对于老年人和幼儿，HuNoVs感染可能有严重后果，如胃肠炎甚至死亡。对于免疫受损的人或实体器官移植（SOT）受者，可能会发生慢性HuNoVs感染，病毒脱落持续数周至数年。尽管HuNoVs在全球，特别是在发展中国家引起了严重的健康问题和社会经济负担，但由于对病毒致病机制了解不完全，目前尚无药物获批用于治疗HuNoVs。此外，已有四种针对几种HuNoVs的疫苗候选物在临床试验中进行了测试，但这些疫苗目前尚未获得许可。 胡诺病毒（HuNoV）的基因组（图1C）由三个开放阅读框（ORFs）和两端的非翻译区（UTRs）组成。ORF1大约有5kb大小，编码一个大约200千道尔顿（kDa）的前体多蛋白，该多蛋白可以被病毒编码的蛋白酶NS6水解成六个非结构蛋白（从N端到C端：p48、NTPase、p22、VPg、蛋白酶和RNA依赖的RNA聚合酶（RdRP））。ORF2和ORF3是从亚基因组RNA翻译而来。ORF2大约有1.8kb大小，编码主要的衣壳蛋白VP1。VP1的每个单体包含一个壳（S）域和一个突出（P）域。S域高度疏水，围绕病毒RNA形成二十面体壳，通过大约10个残基长度的柔性铰链与P域相连。P结构域可以细分为两个子域，P1和P2，P1子域由一个α螺旋和八个β-折叠组成，连接S结构域和P2子域。P2位于VP1的最外层，由六个从P1延伸出的反平行β-折叠组成。它是中和抗体的靶标，含有与碳水化合物和造血组织抗原相互作用的中和表位；此外，它在免疫选择压力下进化。同时，P2是决定病毒抗原性的区域，包含小鼠诺如病毒（MNV）的确定性受体结合位点和胡诺病毒（HuNoVs）的假定受体结合位点。ORF3大约有0.6kb大小，编码次要结构蛋白VP2，它位于病毒颗粒内部，通过与VP1衣壳结构域的相互作用与病毒颗粒的内表面结合；它也被认为参与衣壳聚集。 自从胡诺病毒被发现以来，科学家们一直在探索体外培养。尽管许多研究筛选了各种胡诺病毒敏感的细胞系，但尚未发现稳定的胡诺病毒体外复制系统。同时，株特异性和肠道生理学的差异导致了缺乏合适的模型来展示胡诺病毒如何感染动物。因此，很难解决胡诺病毒感染的机制、它们与宿主的相互作用、抗病毒药物的筛选和疫苗的开发。在本文中，我们回顾了胡诺病毒的四种主要体外培养系统（图2），并专注于肠类器官/类器官培养技术的有效性。 图2. 胡诺病毒（HuNoVs）的四种体外培养方法。其中，肠上皮细胞只能实现胡诺病毒样颗粒（VLPs）的附着和内化，而三维培养的肠上皮细胞尚未显示出能够培养胡诺病毒GI.1和GII.4的能力。2.胡诺病毒的体外培养2.1.胡诺病毒在肠上皮细胞系中的培养 肠上皮细胞是胡诺病毒从粘膜表面侵入内部时首先遇到的细胞类型。在阳性患者的近端小肠活检中观察到了绒毛缩短、粘膜炎症以及微绒毛缩短的肠上皮细胞空泡化等病理特征。此外，对一名患有急性胡诺病毒GII.4悉尼株腹泻的儿童肠移植患者的不同肠段活检组织进行了分析，发现人类诺如病毒靶向肠内分泌细胞（EECs），这些是具有感觉和内分泌功能的特化上皮细胞。这些迹象表明肠上皮细胞与胡诺病毒感染过程密切相关，因此研究人员最初尝试在肠上皮细胞中培养胡诺病毒。 利用含有诺罗病毒VP1 cDNA的杆状病毒重组体感染昆虫细胞可以产生类似病毒颗粒（VLPs），这些颗粒在形态和抗原性上与诺罗病毒相似；这些颗粒在实验动物接种后也被发现能够获得高水平的特异性血清抗体。White等人特别将放射性标记的重组诺罗病毒样颗粒（rNV VLPs）与13种不同的细胞系结合，并发现分化的人类结肠癌细胞（Caco-2）结合了最多的rNV VLPs，明显多于未分化的Caco-2细胞和其他细胞；此外，观察到rNV VLPs的内化。进一步的研究表明，分化的Caco-2细胞具有微绒毛结构，并表达H型1抗原，这与人群中HuNoV感染密切相关。Marionneau等人也观察到分化的Caco-2细胞表达H型1结构后rNV VLPs的结合和内化。同时，人类胃十二指肠结合部组织切片的接种实验显示rNV VLPs优先结合分泌型个体十二指肠和十二指肠上皮细胞的顶端表面以及十二指肠绒毛水平；这表明微绒毛的结构可能增加了病毒结合的面积，并促进了病毒的吸附和内化。 尽管使用rNV VLPs实现了进入Caco-2细胞的内化，但结合的rNV VLPs的内化水平较低（1.4%至6.8%）。同时，当Duizer等人尝试将HuNoVs接种到包括Caco-2在内的八种人类肠道上皮细胞系时，他发现它们中没有一个实现了基因拷贝的显著增加或新感染性病毒的产生。 2.2.在抗原呈递细胞中培养HuNoVs 抗原呈递细胞（APCs）是一群摄取和处理抗原并将它们呈递给T细胞的免疫细胞，包括巨噬细胞（MΦ）、树突状细胞（DCs）和B细胞。Wobus等人在2003年发现了第一种MNV菌株，随后发现MNV能通过口服感染STAT1−/−小鼠高效复制在DCs和MΦ中；因此，他们建立了第一个诺瓦克病毒的细胞培养系统，并首次证明诺瓦克病毒普遍无致病性。尽管小鼠不能被HuNoVs感染，但通过低剂量注射HuNoV VLPs可以刺激体内IgG和IgA介导的适应性反应；因此，推测HuNoVs在宿主感染后也产生细胞适应性免疫反应。Ponterio等人在重组杆状病毒表达系统中克隆并表达了HuNoV GII.4株的ORF2基因，制备了rNV VLPs，并测试了体外刺激的人外周血单核细胞（PBMCs）诱导的免疫反应，发现rNV VLPs能够诱导APCs的激活和成熟。此外，从免疫抑制移植患者分离的小肠切片证明了HuNoVs的可宿性；在DCs、MΦ、上皮内淋巴细胞、T细胞和肠上皮细胞中发现了病毒结构/非结构蛋白的表达。然而，当HuNoVs与来自易感个体的单核细胞亚群衍生的DCs和MΦ以及来自PBMCs的CD11c+ DCs一起体外培养时，发现一些来自PBMCs的DCs能够表达病毒VP1和VPg蛋白，但并非所有细胞中的病毒RNA拷贝数都增加；这表明这些细胞不满足HuNoVs体外高效复制的条件，并且之前检测到的抗原可能是被免疫细胞吞噬的感染肠上皮细胞。 尽管在血液衍生的DCs和MΦ中培养HuNoVs的尝试未成功，与此同时，研究人员发现野生型小鼠感染MNV-1增加了脾脏中特定B细胞标记物的数量和表达。因此，假设B细胞也可能对诺罗病毒敏感，并开始研究与HuNoVs培养的人类B细胞。2011年，Bok的对黑猩猩进行HuNoVs接种显示，血清抗体反应和粪便病毒持续时间与人类中发现的相似，十二指肠B细胞中发现了病毒衣壳蛋白；这表明B细胞可能对HuNoVs敏感。2014年，Jones等人成功地将HuNoVs GII.4悉尼株、MNV-1和MNV-3接种到伯基特淋巴瘤B细胞系（BJAB细胞系）中，并实现了病毒拷贝数的增加和结构/非结构蛋白的产生，通过传代实验进一步证明了新感染性病毒颗粒的产生。值得注意的是，团队强调了实验成功需要考虑的多个因素；接种物必须是未过滤的病毒阳性粪便上清液，因为肠道微生物的存在是HuNoV GII.4悉尼感染的重要辅助因子。随后的研究发现，肠道菌群成员克雷伯氏菌属（Enterobacter cloacae）表达人类组织血型抗原（HBGAs），被认为是人类HuNoVs的受体。此外，涉及的B细胞类型（可以在BJAB和Raji细胞中复制，但不能在Namalwa和HuNS1细胞系中复制）、它们的状态和密度也会影响感染效率，还有培养基中胎牛血清的来源。尽管这种体外培养系统最初取得了成功，但以下问题仍然存在。可以培养的HuNoV株较少（GII.4和GII.6）；病毒的复制效率低（0.1–0.5 Log10），远未达到体内病毒复制的水平；不同实验室复制的复制效率差异很大；随着病毒起始接种物的增加，病毒的复制效率降低。因此，这种培养系统只能适度增加HuNoV基因组拷贝数，不太可能产生体内观察到的病毒复制水平。 HuNoVs可以感染免疫缺陷患者，并在肠道上皮中高效复制，而组织切片中未检测到CD20+ B细胞。发现缺乏B细胞的患者病毒滴度比有B细胞的患者低约一个对数。在小鼠中的研究发现HuNoVs的VP2特别抑制B细胞对CD8+ T细胞的抗原呈递，这对于控制急性HuNoV感染至关重要。此外，感染HuNoVs的人类B细胞不会失去细胞活力，这与感染MNV后巨噬细胞和树突状细胞的溶解形成对比。总之，B细胞在HuNoV感染中扮演着重要角色，并有助于病毒负荷。可能的跨细胞运输发生在病毒通过肠道上皮进入先天或适应性免疫细胞时。同时，HuNoVs在体内的复制可能涉及多种细胞，并在特定环境中进行，这就是为什么很难使用单一的二维（2-D）细胞系来实现HuNoVs体外高效培养的原因。 2.3.在3D细胞团中培养HuNoVs 几十年来，HuNoVs的2D单层细胞培养系统以失败或效率低下告终，表明传统培养不能用于有效的感染和复制。在感染病毒的活体动物中，细胞在三维（3D）环境中协同工作，这种空间环境可能对病毒感染至关重要，甚至对其他传染病原也是如此。此外，传统的2D单层缺乏体内组织的极性和某些结构特征，例如紧密连接、粘液、微绒毛和粘液，这些已被证明在病毒感染、复制和递送过程中发挥重要作用；这使得准确和全面地模拟病毒-宿主相互作用变得具有挑战性。 1998年，美国国家航空航天局（NASA）报告了旋转壁式生物反应器（RWV）的使用，该反应器模拟微重力、低流体剪切环境，允许在其中培养的细胞形成极化和3D团块形式；这使得有效地再现天然组织的构造并模拟人类微环境。自其引入以来，研究人员已使用该反应器培养来自众多器官（淋巴、肺、肾、胃、肠、阴道等）的细胞团，并深入研究了涉及的病毒的发病机制。特别是，当两种3D猴肾上皮细胞（VERO）和3D牛肾上皮细胞（MDBK）的团块被两种RNA病毒（水泡性口炎病毒和牛副流感病毒）和两种DNA病毒（疱疹病毒1型和牛腺病毒）感染时，发现细胞团比单层细胞更能抵抗病毒；此外，一旦团块成功感染，就会产生更具传染性的病毒。这在其他细胞团中得到了进一步证实，证明了使用3D团块模拟真实体内环境的优越性。 为了创建一个更接近生物体的感染环境，Straub等人应用了旋转壁式生物反应器（RWV）技术，并成功地在3D聚集的人胚小肠上皮细胞（INT 407）中培养了两种株系（GI.1和GII.4）的人类诺罗病毒（HuNoVs），并进行了多次传代。感染HuNoVs一天后，细胞团表现出空泡化和微绒毛缩短，从Cytodex珠上脱落；它们还显示出细胞病理效应（CPEs），细胞形态变得细长或扭曲。病毒颗粒主要在组织团中积累。随后，该团队在3D聚集的Caco-2中培养了两种HuNoVs株系，GI.1和GII.4，这些在感染的聚集体中显示出2-3 Log10的病毒RNA拷贝数，并通过免疫电子显微镜定位感染细胞。然而，其他实验室在使用相同的方法培养INT 407或Caco-2细胞的3D聚集体后，没有观察到病毒复制的迹象；但观察到了细胞分化和顶端绒毛的形成。Herbst等人使用共聚焦显微镜没有观察到病毒VP1和VPg，免疫荧光也没有在INT 407细胞中检测到HBGAs。这表明之前观察到的CPEs很可能是由样本被细胞毒素分子污染引起的，如脂多糖（LPS）和细菌内毒素，而不是病毒感染。 2.4.在HIE/HIO中培养HuNoVs 肠类器官和类器官是指通过在体外模拟3D环境中的培养基中添加各种对干细胞维持至关重要的因素（R-spondin 1、Noggin、表皮生长因子（EGF）、激活剂、抑制剂等），使成年干细胞（ASCs）、胚胎干细胞（ESCs）或诱导多能干细胞（iPSCs）生长和分化成具有组织学和遗传特征的器官。这项技术由Hans Clevers团队在2009年开创，当时小鼠Lgr51+肠干细胞成功地在体外非上皮生态位中培养成具有多种分化细胞类型（干细胞、Paneth细胞、肠细胞、杯状细胞和小肠内分泌细胞）的绒毛状肠上皮结构域，这些结构域能够长时间生长。从那时起，这项技术迅速发展，创造了肠、大脑、胃、肺、卵巢等许多类型的类器官。由于类器官能够模拟和反映不同环境中人体器官的状态，它们被用于许多领域，如致病微生物感染、药物开发和筛选、再生医学和精准医学。 人类肠道肠类器官（HIEs）由间充质和上皮层组成，包含肠道上皮的主要细胞类型，具有类似隐窝的增殖区。结合上皮单层细胞系的高通量和实验动物肠道的复杂性，HIEs已广泛用于人类肠道相关疾病的研究，并为各种病毒的体外培养提供了新的方向。 2012年，Mary K. Estes团队通过ESCs的定向分化获得了诱导性人类肠道类器官（HIOs），并成功地接种轮状病毒以产生感染性后代病毒。这是首次使用类器官进行微生物培养的报告。实验还揭示了轮状病毒能够感染间充质细胞群体，展示了类器官作为病毒培养系统的应用性和独特优势。四年后，该团队培养了空肠来源的单层HIEs，该系统有效地支持了不同亚型的HuNoVs的复制（96小时后，HuNoV基因组RNA增加了1.5-2.5 log10，35-45%的细胞被感染，透射电子显微镜下典型的病毒颗粒结构）和传代（连续四次传代显示病毒后代的产生）。研究人员发现，胆酸等添加剂使得GII.3和GII.17两种亚型能够复制，并促进了GII.4亚型的复制；同时，热或辐射处理有效地灭活了HuNoVs。这项研究代表了HuNoVs体外培养的重大突破，极大地推进了对HuNoVs的基础研究。实验结果已由不同国家的多个实验室成功验证，支持了多种基因型的HuNoVs的复制（GI.1、GII.1、GII.2、GII.3、GII.4、GII.6、GII.8、GII.12、GII.14和GII.17）。HuNoVs在HIEs中的复制在生物学上是相关的，因为GII.4株的复制仅限于来自分泌型个体的培养，而GII.3株的复制则来自分泌型和非分泌型个体；这与流行病学研究的结果一致。此外，未分化的HIE培养主要包含干细胞，但HuNoVs不在这这些细胞中复制，与感染的人类或动物隐窝中的干细胞中未检测到HuNoVs一致。与原组织培养不同，HIEs可以使用连续传代维持，并保存以备后用。2012年分离获得的人类空肠肠类器官在7年后仍可用于实验，表明HIE培养极其稳定。更重要的是，HuNoVs在HIEs中的复制反映了宿主易感性的流行病学差异，这取决于与供体分泌状态相关的HBGAs表达的遗传变异。然而，这种培养方法的缺点包括构建肠类器官耗时、维持培养的高成本、需要接种的HuNoVs数量多（最少1×10^5基因组等价物），以及产生的HuNoVs滴度低。此外，许多实验室不易获得活体人类组织，并且涉及伦理问题，因此需要优化这种培养系统。 2019年，Sato等人使用人类iPSCs构建了单层、极化的原肠上皮类器官，并成功地接种了HuNoVs（GII.3、GII.4、GII.6和GII.17）和VLPs。他们发现HIO中HuNoV GII.3和GII.17的复制不依赖于胆汁，这表明类器官和肠类器官（iPSCs或ASCs）之间的生物学差异可能导致对外部刺激的不同反应，其机制值得进一步研究。Mirabelli等人使用胎儿空肠组织构建了2D和3D HIEs，并用HuNoV GII.4接种，发现两种培养系统的病毒产量分别为1 log10和2.5 log10。与需要微量接种病毒的2D系统相比，3D HIEs可以自发地发生极性反转并直接感染病毒（不需要微注射）。此外，在接种病毒之前对3D HIEs预施用不同的药物可以显著促进（ruxolitinib，JAK1/2抑制剂）或抑制（聚合酶抑制剂2′-C-甲基胞苷）病毒的复制，表明3D HIEs是测试抗HuNoV药物的有前景的平台。 图3显示了不同发育阶段的胎儿牛肠类器官和肠类器官的自然形态。类器官和肠类器官的形态特征是动态的，它们都有独特的形态。表1比较了HIEs和HIOs的来源、特点和当前培养的HuNoV基因型。尽管HIOs比HIEs更容易获得，HIEs只能通过活检组织获得，但它们包含的间充质元素和胎儿表型可能对其使用有影响；此外，与HIEs不同，HIOs不能无限代保存。总之，HIOs和HIEs极大地促进了我们对HuNoV感染机制的理解。同时，使用HIEs研究了几种常见抗病毒小分子化合物对HuNoV的抗病毒效果（例如，Dasabuvir对GII.3的EC50为7.55-9.85 µM，对GII.4为11.71-12.41 µM，Nitazoxanide对GI.1、GII.3、GII.4和GII.17的EC50分别为27.4 µM、14.4 µM、12.9-53.9 µM和33.4 µM）。然而，迄今为止，这些HuNoV培养系统在连续感染传代（支持病毒复制至第四传代）中难以实现高病毒产量（病毒滴度增加30-1000倍），并且感染HuNoVs的HIE/HIOs没有显示出显著的CPEs。 图3. 不同发育阶段类器官和肠类器官的形态。发育中型类器官的形态。第3天（a）类器官呈现指状突起，第6天（b）类器官更短，类似绒毛，第9天（c）类器官呈圆形，有紧密排列的隐窝细胞，第20天（d）类器官呈球形；24小时（e）肠类器官具有清晰且紧凑的隐窝细胞，48小时（f）肠类器官呈现具有腔隙的圆形，72小时（g）肠类器官中细胞逐渐分散，144小时（h）出现大量排斥细胞和非典型隐窝细胞。 2.5.肠类器官/类器官培养系统的优越性和前景 表2展示了几种已报道用于培养人诺如病毒（HuNoVs）的体外培养系统的细节。其中，HIO/HIE培养在可重复性和效率方面显示出优势。在类器官技术发展之前，对致病微生物的研究主要基于两种培养系统：特定细胞系和动物模型。尽管细胞培养简单且成本低廉，但2D细胞层并未真实反映致病微生物侵入生物体的3D空间环境，缺乏组织或器官中各种细胞类型的相互作用和抗病毒反应。此外，细胞系通常来源于肿瘤组织或经历了特定突变，因此能够无限增殖，并不能准确代表健康组织。尽管动物模型可以反映致病微生物在生物体内的实际感染情况，但这一系统需要投入大量的时间和资源；对于绿猴和狒狒等特殊实验动物尤其如此，这些动物在大多数实验室中难以大量评估。当用于研究感染人类的微生物时，这些动物的内部环境与真实人体之间仍存在不可忽视的差异，限制了某些致病微生物的体外培养和发病机制的研究。 类器官模型介于细胞系和动物模型之间，可以通过ASCs、多能干细胞（PSCs）或iPSCs在体外大规模培养，以获得具有生态位的多类型细胞群，这些细胞群保持一定的特性和功能；它还能够重现部分生理功能，并促进稳定的自我更新。与单一细胞系相比，类器官的结构特性可以促进细胞类型之间的相互作用和细胞-基质连接，从而创造出不同区域的营养供应和氧浓度梯度。许多研究发现，多种病毒（如埃可病毒71型、星状病毒）诱导的HIE抗病毒途径或特定的干扰素（IFN）刺激基因（ISGs），在传统的单细胞系中并未发现，这表明实验室中长期使用的细胞系可能无法完全重现病毒感染所涉及的生理过程。与动物模型相比，人类衍生的类器官可以更真实地反映感染后的内部环境和生理过程，并可以缩短培养周期，实现动态追踪。因此，多种类器官模型已被用于研究病毒性传染病，包括乙型肝炎病毒、柯萨奇病毒和寨卡病毒；这些模型还与单细胞RNA测序（scRNA-seq）、CRISPR/Cas9、蛋白质组学、转录组学和芯片技术相结合，以分析病毒致病机制、宿主受体和用于抗病毒化合物筛选。同时，由于类器官技术发展时间相对较短，仍有许多未解决的问题需要进一步探索和解决。首先，目前用于制备类器官的方法依赖于各种生长因子，但这些生长因子不足以复制真实器官发育过程中身体的精细和复杂的微环境。培养过程中产生的氧浓度有限和代谢废物数量增加可能导致类器官局部坏死；成熟的类器官直径通常为100-500微米，它们缺乏概括复杂人类疾病模型所需的血管结构和免疫组分。近年来，Bouffi等人建立了一个使用人源化免疫系统小鼠中功能性人类免疫组织的类器官模型，为免疫类器官的研究提供了新的方法。其次，为了增加HIE模型的复杂性并更接近体内条件，HIE细胞可以与间充质或血管细胞和肠道微生物组分共培养。其次，用作培养基的Matrigel蛋白混合物由BD Biosciences生产；这种培养基昂贵，主要成分包括由鼠肉瘤细胞分泌的胶原固定蛋白混合物。因此，值得分析这种外源性成分是否对类器官模仿真实器官和是否可以用作可靠的临床评估治疗手段。第三，尽管主要使用的生长因子是Wnt3a、R-Spondin和Noggin，但不同制造商生产的用于培养HIE的培养基的成分和比例是保密的；这对于HIE分化和HuNoV培养很重要。Ettayebi等人比较了先前描述的初代增殖培养基（BCMp）和分化培养基（BCMd）与Stem Cell Technologies生产的商业化人类类器官生长培养基IntestiCult™的使用。他们发现，在IntestiCult™中的HuNoVs株的复制率显著更高。第四，由于类器官培养过程中自动化水平低，人为诱导的系统误差的可能性高，调节不同类型类器官成熟形态和大小的行业标准尚未出现。这间接导致了类器官实验难以重复和一致。根据在美国进行的一项研究，测试单个HuNoV样本在HIE培养中的试剂成本约为36美元，从开始到量化的过程至少需要三周。然而，对类器官的探索仍在进行中，越来越复杂的培养系统将使类器官在有效体外模型中发挥更突出的作用，以模拟真实器官发育和感染。 3.结论 人诺如病毒（HuNoVs）每年都会施加经济负担并引起健康问题，因此改进现有的体外培养模型是更好地理解、预防和治疗病毒感染的必要条件。虽然B细胞和HIE/HIO培养系统有助于疫苗和药物的开发，但有限的病毒复制仍然限制了对HuNoVs的进一步研究。建立HuNoVs体外培养的最有效方法之一是识别HuNoVs的细胞受体，然后建立过表达受体的细胞系。然而，不幸的是，已经证明MNV的主要生理受体CD300lf不是HuNoVs的受体。关于使用HIE/HIO培养HuNoVs，可以通过诱导STAT1的敲低、特定抑制剂或特定病毒蛋白的过表达等方法优化培养系统来提高效率。这将抑制JAK-STAT途径，这是宿主先天免疫的主要参与者之一。同时，HuNoVs的研究，以及与其他学科如免疫学和RNAseq等新兴技术相结合，将增强我们对它们的理解，为未来预防和治疗HuNoVs提供机会。 识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入 生物制品微信群！ 请注明：姓名+研究方向！ 版 权 声 明 本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。

近日，北京、河南、浙江、广东等多地疾控部门发布提醒，诺如病毒引起的急性感染性腹泻已进入发病高峰期。 关于诺如病毒 诺如病毒，是人类杯状病毒科（Human Calicivirus, HuCV）中诺如病毒（Norovirus, NV）属的一种病毒。是一种能够在全球范围内引起人和多种动物发生急性肠胃炎，导致严重腹泻的人畜共患病病原，也是一种重要的食源性疾病病原。 每年10月到次年3月是诺如病毒感染性腹泻流行的高发期。由于呕吐、腹泻是诺如病毒胃肠炎最常见症状，全年均可发生感染，感染对象主要是成人和儿童，寒冷季节呈现高发，所以该病又被称为“冬季呕吐病”。 病原学 NV 最早由 Kapikian 等在 1972 年爆发的一 次疫情中检测出。NV 直径 27 nm，为无包膜的单链 RNA 病毒，基因组可分为三个开放阅读框架（ORF），其中 ORF1 编码一种大型多蛋白，该多蛋白被病毒编码的蛋白酶切割成包括病毒聚合酶在内的六种非结构蛋白（NSP1-6），ORF2 编码主要衣壳蛋白 VP1，ORF3 编码次要衣壳蛋白 VP2。VP1 是病毒的抗原决定簇，将其克隆到真核细胞，病毒可自行组装、形成空壳状衣壳蛋白，从而成为病毒样颗粒（VLPs），VLPs 是 NV 疫苗研究的一个新突破的， 且研究已取得一定进展。 GⅡ基因群感染患者约占 NoV 感染患者的 70%，其中GⅡ.4 型是目前主要流行基因型，其次是 GⅡ.17 型等。GⅡ.4 型毒株易发生变异，2~5 年就会出现新的抗原特性和组织血型抗原（HBGA）变异株。2016 年以后，GII.2 成为许多地区 NV 感染的流行病毒株。 流行病学 1、传染源 诺如病毒感染的患者、隐性感染者及病毒携带者均可为传染源。患者的呕吐物及排泄物具有传染性。 2、传播途径 诺如病毒传播途径包括人传人、经食物和经水传播。 （1）人-人传播： 通过粪-口途径（包括摄入粪便或呕吐物产生的气溶胶）或间接接触被排泄物污染的环境而传播。诺如病毒感染者的呕吐物处理不及时、 不规范是造成疫情传播扩散的重要原因之一。 （2）经食物传播： 通过食用被诺如病毒污染的食物进行传播。污染环节可出现在感染诺如病毒的餐饮从业人员在备餐和供餐中污染食物，也可出现食物在生产、运输和分发过程中被含有诺如病毒的人类排泄物或其它物质（如水等）所污染。牡蛎等贝类海产品和生食的蔬果类是引起暴发的常见食品。 （3）经水传播 可因桶装水、市政供水、井水等其他饮用水源被污染所致。 研究显示：造成诺如病毒水源性传播主要的危险因素是乡镇自来水厂供水、二次蓄水装置、学校自备水井未规范消毒被诺如病毒污染（57%）；其次是桶装水（29%）和学校直饮水受到诺如病毒污染（10%）；另外学生在受诺如病毒污染的游泳池水中游泳，也可导致暴发疫情。 3、易感人群 全人群普遍易感。 儿童（尤其是5岁以下）、老年人、免疫缺陷者及器官移植患者高发。 症状 诺如病毒潜伏期短，从诺如病毒感染到发病最快仅需12小时左右，症状常可骤然出现，可从轻度疾病的发热和水样腹泻，到更严重疾病的发热、呕吐、头痛和全身症状。症状持续时间平均为 2~3 天，但高龄人群和伴有基础性疾病患者恢复较慢。 低龄儿童仍会发展成重症，甚至死亡，新生儿感染诺如病毒后，除出现与其他年龄组儿童同样的症状和体征外，还可能发生坏死性小肠结肠炎等严重并发症。有部分患儿会出现无热惊厥、肝功能损害、心肌损害、上消化道出血（考虑与胃黏膜撕裂有关）；国外有文献报道诺如病毒相关脑炎，部分患儿预后不良。 治疗 对于诺如病毒感染，目前尚无有效的抗病毒药物，但诺如病毒感染属于自限性疾病，一般只需对症、支持治疗。有肝功能损害及心肌损害的予还原型谷胱甘肽及磷酸肌酸钠对症治疗。血常规符合细菌感染改变 (白细胞明显增高且中性粒细胞为主) 予抗生素治疗，在大便检测出诺如病毒后及时停用。 无热惊厥患儿入院后予头孢噻肟等能透过血脑屏障抗生素抗感染，咪达唑仑镇静止惊、甘露醇降低颅内压等对症处理。 预防 因为诺如病毒是通过粪口途径传播的疾病，可通过污染的水、食物、物品等迅速传播，因此养成良好的个人卫生习惯、做好食品和环境卫生十分重要！ 1、手卫生 饭前便后勤洗手，掌握正确洗手方法。需要注意的是，消毒纸巾和免冲洗的手消毒液不能代替洗手。饮水卫生：保证饮用水的清洁卫生，不喝生水。 2、饮食卫生 水果和蔬菜食用前应仔细清洗，正确烹饪食物，禁食生、半生食物。尤其是食用贝类海鲜等食品时应深度加工，保证彻底煮熟。 3、流行期间少去公共场所 到人群密集的地方，建议佩戴口罩，注意手卫生。 4、消毒 诺如病毒为亲水性病毒，对环境有较强抵抗力，75%的酒精不能有效灭活。因此，患者呕吐物或者粪便污染的环境与物品使用含氯消毒剂消毒，患者使用的物品需要单独处理与消毒。在处理患病者的呕吐物和粪便的过程中，一定要做好个人防护。 撰文 | 阿拉斯加宝 编辑 | 阿拉斯加宝 ●重磅！一堆硕博医生缝合结扎都不熟练，现学现卖！科主任愤怒要求：每月给年轻医生搞一次外科基本功培训！新一代医生技能普遍偏弱令人担忧 ●震撼！住院签字又多一个！因病历写有病史，商业保险拒保，患者指责医生瞎写，要求医生负责！医生：你自己口述的病史以后都要确认签字 ●震撼！患者抱怨“科室有9个医生，咋还让我等2个小时！”医生：9个医生很少，活干不完，等不来8小时工作制… 版权说明：梅斯医学（MedSci）是国内领先的医学科研与学术服务平台，致力于医疗质量的改进，为临床实践提供智慧、精准的决策支持，让医生与患者受益。欢迎个人转发至朋友圈，谢绝媒体或机构未经授权以任何形式转载至其他平台。 点击下方「阅读原文」 立刻下载梅斯医学APP！