PDCD10

5   丁香园神经科讨论群（498）@所有人 看片子：患者 62 岁男性，头晕、右侧肢体麻木及轻度无力 10 天。查体：右侧感觉减退。 颅脑 MRI 如图。图 A：T1WI，图 B：T2WI-GRE，图 C：DWI，图 D：ADC。  考虑什么诊断？影像提示颅内多发微出血灶，双侧的新发脑梗死，考虑小血管病变，淀粉样变性？头晕，右侧肢体麻木无力，右侧桥臂病灶，左侧MCA和PCA分水岭病灶。肢体麻木无力应该是分水岭病灶引起的，桥臂病灶引起头晕。多发微出血。病因，一元论脑卒中。需要除外干燥综合征，血管炎，脱髓鞘病。多发微出血，右侧桥小脑角急性梗死，考虑脑小血管病。9:30患者老年男性，亚急性起病，主要表现为右侧肢体感觉减退、轻偏瘫。颅脑 MRI ：T1WI，双侧颞枕叶多发类圆形低信号；T2WI-GRE，双侧颞枕叶多发类圆形高信号；DWI，右侧桥脑圆形低信号，ADC，右侧桥脑高信号。初步考虑：脑淀粉样变性。鉴别脑小血管病、脑寄生虫病等，建议增加SWI的序列。嚯 有点意思，同时存在多发脑梗死，脑微出血，首先是单基因遗传病等脑小血管病。Dwi高信号，adc低信号，提示脑梗死可能。dwi可见多发腔隙性病灶，提示脑小血管病可能。病因不能排外脑淀粉样病。@所有人 公布答案：患者头颅 MRI 显示：双侧大脑、小脑和脑干多发斑点状微出血灶（图 A、B），幕下和幕上区域多发 DWI 高信号（图 C、D），相应 ADC 低信号（图 D）病变。 影像学结果提示存在：多发急性腔隙性脑梗死。这些腔隙性脑梗死在空间位置上与微出血灶有所不同，但大多数都紧邻微出血灶。 为了确定多发性脑梗死的病因，对患者补充了多项检查，包括脑血管成像、心脏节律监测、经颅多普勒气泡试验、血液和脑脊液检测以及其他常规实验室检查，但均无明显异常。 因此考虑家族遗传疾病的可能性，补充基因检测发现，患者的 CCM1/KRIT1 基因杂合突变，从而确诊为：家族性脑海绵状血管畸形（FCCM）。 脑海绵状血管畸形（CCM）是一种由异常形成的小血管簇组成的血管畸形疾病，可能散发性出现，也可能是由常染色体显性基因突变导致的。CCM 由静脉-毛细血管床内多个扩张且充满血液的内皮腔隙组成，其间没有脑实质组织，在 T2WI-GRE 图像上更为明显。CCM 患者通常没有明显症状，但也可能出现癫痫发作、头痛和（或）局灶性神经功能缺损等症状。FCCM 的诊断主要依据家族史、临床表现，影像学检查以及基因检测。多处微出血灶是 FCCM的一个明显特征。与 FCCM 相关的基因包括：KRIT1/CCM1、MGC4607/CCM2、PDCD10/CCM3。  本例患者，在接受对症治疗后很快康复。不过之后的 1 年随访期间，患者出现了 2 次自限性的短暂局灶性神经系统症状复发，多次重复脑部 MRI 检查显示出现了新的腔隙性脑梗死，而微出血灶则没有任何进展。

▲5月30-31日 第八届广州生物医药创新者峰会 扫码立即报名 注：本文不构成任何投资意见和建议，以官方/公司公告为准；本文仅作医疗健康相关药物介绍，非治疗方案推荐（若涉及），不代表平台立场。任何文章转载需得到授权。在前段时间举行的2024年世界政府峰会期间，英伟达/NVIDIA的创始人/CEO黄仁勋在会上表示，现在已经不是人人必须学计算机的时代了，人类生物学才是最复杂的科学之一，这一领域具有难以置信的影响力，但与其他领域相比，目前生命科学领域只能取得零星的进展。回顾整个2023年，英伟达多次出手，投资生命科学领域，其中不乏AI新药研发企业。2023年7月12日，AI制药上市公司Recursion Pharmaceuticals宣布获得英伟达5000万美元私募股权投资，英伟达将获得该公司约4%的股份。同时，Recursion计划利用其庞大的专有生物和化学数据集（超过23千兆字节和3万亿可搜索基因和化合物关系），加速英伟达DGX™ Cloud上基础模型的训练，从而帮助英伟达生成式AI药物发现云服务平台BioNeMo的商业化许可和发布。英伟达还将利用其AI堆栈和全堆栈计算专业知识，帮助Recursion优化和扩展基础模型。预计Recursion将使用英伟达的BioNeMo软件来支持其内部和合作伙伴的管线。合作宣布当日，Recursion（NASDAQ:RXRX）股价暴涨78.17%。Recursion Pharmaceuticals将自身定位为一家TechBio公司（科技生物公司），通过解码生物学（decode biology），使药物发现工业化（industrialize drug discovery）。其愿景是利用计算和机器学习的进步来解决药物发现和开发效率下降的问题。Recursion的联合创始人兼首席执行官Chris Gibson博士在犹他大学攻读医学博士期间，在联合创始人Dean Li博士（默沙东实验室现任总裁）的实验室中开发了Recursion最初的技术和方法；总裁兼首席运营官Tina Marriott Larson女士在生物制药领域拥有20多年的行业经验，曾在基因泰克、罗氏和Achaogen担任高级领导职务；首席技术官Benjamin Mabey在计算机科学、机器学习、软件工程和数据科学领域拥有超过15年的行业经验，曾担任Savvysherpa的高级数据科学家、Red Brain Labs的首席技术官；首席医学官David Mauro博士在肿瘤药物开发方面拥有20多年的经验，曾担任Codiak BioSciences、Checkmate Pharmaceutical、Prelude Therapeutics和Advaxis的首席医疗官，还曾在默沙东、百时美施贵宝和Becton Dickinson的临床和医疗事务团队中担任领导职务。Recursion正在构建生物、化学、自动化、数据科学和工程学的创新集成，在跨越了药物开发过程中几十个关键工作流程的全堆栈解决方案中，使药物发现工业化。例如，通过将高内涵显微镜技术与阵列式CRISPR基因组编辑技术相结合，可以在多种人类细胞环境中严格地描绘庞大的、高维的生物和化学扰动库，以创建人类生物学的数字“图谱”，并利用大规模计算能力，进行大规模的虚拟筛选来预测数十亿种化合物的蛋白质靶点。类似地，利用Recursion从自动DMPK模块和交互式平台生成的数据，能够分别预测ADME特性并识别毒性信号，明显快于传统方法。Recursion认为，利用这种方法可以从科研以外获得新的生物学见解，减少生物学发现中固有的人类偏见的影响，并在项目开始时就降低转化风险。Recursion操作系统（Recursion OS）是该公司的核心，这是一个跨多种技术构建的平台，能够在超过50pb的专有数据中描绘和处理数万亿种生物、化学和以患者为中心的关系。该公司将这种物理组件和数字组件的集成构建为“原子和比特”的迭代循环，将规模化的“湿实验室”生物学、化学和以患者为中心的实验数据（原子）由“干实验室”计算工具（比特）组织起来，从而识别、验证和转化治疗方面的见解。Recursion相信无偏见的、以数据驱动理解生物学的方法将为患者带来更多、更新、更好的药物。回顾2013年底，Recursion刚建立之时还是犹他州的一家小型初创公司，由两名研究生和一名教授创立，第一个办公室是附近大学研究园区的一个会议室，第一个实验室是从一间储藏室改造来的。而如今的Recursion是一家临床阶段的跨国公司，总部位于犹他州盐湖城，在加拿大多伦多、蒙特利尔和美国旧金山湾区设有办事处，并计划在英国伦敦开设新的办事处，拥有5个临床阶段项目，以及世界上最大的生物和化学数据集之一，并与罗氏/基因泰克和拜耳分别建立了药物发现合作。用Recursion的话来说，公司正领导着生物技术（BioTech）向科技生物（TechBio）的转变，500多名员工（Recursionauts）组成的团队中35%是生命科学背景，40%是计算和技术背景，这也是Recursion将自身定义为TechBio公司的一个重要因素，生命科学、计算和技术的平衡造就了一个能同时将经验数据、统计严谨性和创造性思维应用于决策的环境。2023年，Recursion收购了两家AI药物发现公司Cyclica和Valence Discovery（现为Valence Labs），进一步增强了数字化学、机器学习和生成式AI的能力。Recursion目前的三个关键价值驱动因素● 一个广泛的、内部开发的临床和临床前项目管线，专注于精确肿瘤学和基因驱动的罕见疾病，这些疾病存在未满足需求。在某些情况下，这些项目的年销售额可能超过10亿美元。● 与领先的生物制药和技术公司建立合作伙伴关系，以描绘和处理难以治疗的生物学领域，识别新的靶点，并利用先进的计算和数据资源开发潜在的新药。● 一个行业领先的数据集，旨在充分利用计算工具，并通过公司管线、合作伙伴关系和技术产品来加速价值创造。主要研发管线：罕见病+肿瘤Recursion的研发项目主要针对病因明确，存在大量未满足的需求，没有批准的疗法，或者现有治疗模式存在重大缺陷的领域。目前Recursion有5个项目正在计划或已启动2期临床研究，并计划在2024年下半年递交第6个项目的IND申请。此外，该公司还在积极开发几十个临床前和药物发现项目。REC-994是一种口服小分子超氧化物清除剂，被开发用于治疗伴有CCM1、CCM2和CCM3突变的散发性和家族性脑海绵状血管畸形（CCM）患者。目前全球约有超过100万CCM患者，尚无药物获批治疗该病，大多数患者无法接受治疗或只能接受对症治疗。Recursion OS系统发现了REC-994在CCM中的治疗潜力，并通过细胞模型中大量超氧化物积累的清除进行了功能验证，长期给药可减少小鼠病变的数量。药融云数据www.pharnexcloud.com显示，REC-994已在美国和欧盟获得孤儿药资格认定。目前该药正在开展一项名为SYCAMORE的随机、双盲、安慰剂对照的2期临床研究，旨在探索REC-994在CCM患者中的安全性、耐受性，以及疗效。该研究于2023年6月完成全部62名受试者的入组，完成12个月治疗的绝大多数受试者继续选择进入长期扩展研究，预计2期研究数据将在2024年Q3公布。REC-2282是一种口服小分子HDAC（组蛋白去乙酰化酶）抑制剂，被开发用于治疗家族性和散发性2型神经纤维瘤病（NF2）脑膜瘤患者。目前市场上尚无药物获批治疗NF2，且手术切除困难，风险高。药融云数据www.pharnexcloud.com显示，REC-2282最早由俄亥俄州立大学研究，1期临床研究显示，REC-2282在接受肿瘤切除术的成年患者前庭神经鞘瘤中抑制了异常的ERK、AKT和S6通路激活。Recursion公司利用Recursion OS系统发现了REC-2282用于NF2的治疗潜力，并借助细胞和动物模型证明了这一发现。目前该药正在进展性NF2突变脑膜瘤患者中开展一项名为POPLAR的2/3期临床试验。该研究分为两个部分，第一部分预计将在23名成人和9名儿童中探索两种剂量REC-2282的效果，计划在2024年上半年完成成人患者入组，并预计在2024年Q4公布2期临床的安全性数据与初步疗效数据。REC-4881是一种口服小分子MEK（丝裂原活化的细胞外信号调节激酶）抑制剂，被开发用于治疗携带APC突变的FAP（家族性腺瘤息肉病）患者。目前尚无药物获批治疗该病，患者整个肠道息肉恶性转化的风险极高，标准治疗方案是结肠切除手术，复发风险高。Recursion OS系统显示，特异性的MEK 1/2抑制剂可在APC功能缺失的情况下产生影响，随后的APC突变多发性肠肿瘤小鼠模型显示息肉和异常增生腺瘤的显著减少。目前该药正在携带APC突变的FAP患者中开展一项名为TUPEOL的1b/2期临床试验，预计将在2025年上半年获得2期初步数据。药融云数据www.pharnexcloud.com显示，REC-4881已获得快速通道资格，以及美国和欧盟的孤儿药认定。该药最早由美国千禧制药（Millennium Pharmaceuticals）研发，该公司在2008年被武田制药收购，2020年Recursion从武田制药获得该药的全球独家许可（当时称TAK-733）。截图自药融云数据库在罕见病之外，针对肿瘤领域，2023年底，Recursion公司启动了一项名为LILAC的多中心开放标签的2期试验，旨在研究REC-4881在不可切除的、局部晚期的携带AXIN1或APC突变的晚期或转移性癌症患者中的应用，预计将在2025年上半年公布2期安全性和初步疗效数据。REC-3964是一种选择性小分子艰难梭菌毒素抑制剂，被开发用于治疗艰难梭菌感染。艰难梭菌感染的标准治疗方案包括抗生素治疗，但会进一步损害肠道菌群，并导致复发。REC-3964是一种非抗生素疗法，具有与标准治疗方案和其他疗法相结合的潜力。在此项目中，Recursion OS系统识别了一种针对复发性艰难梭菌感染的新化学实体，可通过糖基转移酶抑制来潜在地预防感染，并具有潜在的口服活性。据披露，REC-3964是first-in-class的艰难梭菌毒素抑制剂，也是Recursion开发的第一个新化学实体，在相关模型中显示出良好的临床前疗效数据（优于默沙东的贝洛托舒单抗），并在1期研究中表现出良好的安全性和耐受性，公司计划在2024年启动一项2期概念验证研究。临床前项目RBM39基于Recursion OS识别的一种新的CDK12相邻靶点，抑制该靶点可模拟抑制CDK12（细胞周期蛋白依赖性激酶12）的效果，同时减轻与CDK13抑制相关的毒性。公司计划将针对该靶点的主要候选分子开发为一种潜在的治疗同源重组功能正常的（HR-Proficient）卵巢癌和其他同源重组功能正常的实体瘤的单药疗法。RBM39项目由Recursion和精准医疗公司Tempus合作，Recursion正在利用各种肿瘤类型的基因组数据来识别扩展患者人群的临床生物标志物。目前RBM39项目正在开展主要候选分子的IND-enabling研究，计划在2024年下半年递交IND申请。临床前项目Target Epsilon旨在开发一种治疗纤维化疾病的新型疗法。Recursion通过人类PBMC（外周血单核细胞）表型筛选发现了新的、结构多样的小分子，可将疾病状态纤维细胞的表型特征逆转为健康状态细胞的表型特征。最有潜力的化合物分子已被证实为靶向一种纤维化新靶点的有效抑制剂。该项目来源于Recursion与拜耳最初的纤维化疾病合作，后来Recursion从拜耳公司获得了该项目的所有权，目前正在开展IND-enabling研究。新药&技术合作Recursion的对外合作可大致分为新药合作和技术合作。2021年12月5日，Recursion与基因泰克/罗氏签订了合作和许可协议，目标是在胃肠道肿瘤学适应症和神经科学的关键领域合作发现并开发小分子治疗药物。2022年1月，罗氏向Recursion支付了1.5亿美元的预付款。2020年8月28日，Recursion与拜耳签订了一项合作，随后于2021年12月1日扩大合作，用于与纤维化疾病相关项目的研究。2023年11月8日，双方将合作重点重新调整为精准肿瘤学，为无药可及的肿瘤适应症开发新的疗法。2023年7月，Recursion与英伟达达成战略合作，利用Recursion的超级计算机BioHive-1和英伟达DGX™ Cloud的优先访问，加速生物和化学人工智能基础模型的开发。2023年11月，Recursion承诺与英伟达合作，将超级计算机BioHive-1的算力增加4倍以上，届时BioHive-1预计将成为TOP50世界上功能最强大的超级计算机，以及生物制药公司拥有并运营的最强大的超级计算机。2023年11月，Recursion与精准医疗公司Tempus合作，以获得世界上最大的专有、去标签、以患者为中心的肿瘤数据集，包括DNA、RNA、健康记录等，通过训练因果人工智能模型，支持发现潜在的具有丰富生物标志物的疗法。2023年12月，Recursion与乌克兰Enamine公司合作，为全球药物发现行业生成和设计丰富的化合物库。通过利用Recursion的AI模型MatchMaker（收购Cyclica获得）来识别Enamine REAL Space中（约360亿种化合物）预期的与高价值靶点绑定的化合物，从而生成用于药物发现的更加强大的化合物库。Enamine可将生成的化合物库提供给客户进行购买，并使用Enamine和Recursion的商标作为联合品牌。这是一种新的选择数据层驱动价值的形式。财务状况从创立至今，Recursion筹集的资金主要用于平台研究运营、药物发现、临床开发、数字和其他基础设施的运营和投资，以及创建知识产权组合和行政支持。由于尚未有产品获批上市，Recursion尚未产生销售收入。截至2023年底，Recursion拥有3.916亿美元现金和现金等价物，足以为公司未来1年的运营提供资金。2023全年，Recursion公司总收入为4458万美元，同比增长11.9%，主要是由于Recursion与罗氏/基因泰克合作收入的确认。全年研发费用为2.412亿美元，同比增长54.9%，主要是由于Recursion扩大和升级了平台能力，包括化学技术、机器学习和转录组学平台。全年一般及行政开支为1.108亿美元，同比增长35.8%，主要是由于薪酬、法律、软件和折旧费用的增加。2023全年该公司净亏损为3.281亿美元。截至2023年底，该公司累计赤字为9.676亿美元。上图为Recursion的投资方概况（截至2023年1月），更多相关信息可查询药融云数据www.pharnexcloud.com。截止发稿前，公司市值约20.13亿美元，每股8.58美元。此文仅用于向医疗卫生专业人士提供科学信息，不代表平台立场，不作任何用药推荐参考：NMPA/CDE；药融云数据www.pharnexcloud.com；FDA/EMA/PMDA；相关公司公开披露（正文图片均来自企业官方，除非另有说明）；https://www.recursion.com/；https://www.thepaper.cn/newsDetail_forward_26379183；https://www.cnbc.com/2023/07/12/nvidia-invests-in-biotech-company-recursion-for-ai-drug-discovery-.html；https://siliconcanals.com/zh-CN/news/business-wire/bayer-and-recursion-focus-research-collaboration-on-oncology/；等等 活动推荐  5月 • 第八届大湾区生物医药创新者峰会  关键词：  小分子，XDC，多肽及GLP-1热点话题，80+行业专家（点击下方图片查看详情）▼【关于药融圈】药融圈PRHub旨在帮助生物医药科技型企业进行品牌推广及商务拓展服务，针对客户的真实需求制定系统化解决方案，通过“翻译-降维-场景化”将客户的品牌信息以直白易懂的方式被公众知悉，同时在流量渠道覆盖100万+垂直用户基础上实现合作目的，帮助合作伙伴完成从品牌开始到商务为终的闭环营销服务。我们已经完成了数十场线下1000人规模的生物医药研发类会议，涵盖小分子新药，大分子新药，改良型新药，BD跨境交易等多个领域，服务了百余家上市/独角兽/生物技术/制药企业。

这项研究发现了IFN感应性的丧失在多个动物模型中使得肿瘤对ICB更加敏感。这可以通过两种机制介导，第一是经典MHC-I类分子的上调能够抑制NK细胞，第二是非经典MHC-I类分子Qa-1b的上调可以通过 免疫检查点阻断（ICB）疗法在多种肿瘤中都取得了巨大成功。然而，仍有许多患者对ICB没有响应，不同肿瘤中的免疫逃逸机制也需要进一步探索。 近日，由布罗德研究所（Broad Institute）的Robert T. Manguso和Kathleen B. Yates带领的研究团队，在著名期刊Nature Immunology发表重要研究成果[1]。 为了发现肿瘤逃避免疫治疗的机制，他们在接受ICB治疗的癌症模型中，开展了基因组层面的CRISPR筛选。 他们的发现让他们大吃一惊：在多种肿瘤模型中，肿瘤细胞对干扰素（IFN）感应性的丧失，竟然使得肿瘤对ICB的响应更加敏感。 具体来说，肿瘤的IFN信号通过两种方式发挥免疫抑制的作用：第一，肿瘤IFN感应能够上调经典的第一类主要组织相容性复合体（MHC-I）抑制自然杀伤（NK）细胞；第二，肿瘤IFN感应通过上调非经典的MHC-I类分子Qa-1b抑制CD8+T细胞。 要知道，大量的研究表明IFN-γ在肿瘤的免疫监视中发挥重要作用[2-4]。这一发现可以说颠覆了我们对IFN-γ信号的认知。 论文首页截图 接下来我们就一起来看看这个研究是如何开展的。 研究团队利用代表了5种癌症类型（黑色素瘤、胰腺癌、肺癌、肾癌和结肠癌）的8个小鼠肿瘤模型，进行CRISPR体内筛选，找出ICB治疗后富集或清除的sgRNA，以鉴定与ICB抵抗性或敏感性相关的基因（指该基因缺失时分别与ICB抵抗性或敏感性相关）。 他们发现Nlrc5、Pten、Casp8、Ccar1、Ubr5、Dot1lh、Smg9和Pdcd10的缺失与ICB抵抗性相关，并对Ccar1缺失这一新发现的ICB抵抗机制进行体内实验验证。 在ICB敏感性方面，除了已报道的Ptpn2、Traf2、Ripk1、Serpinb9、Cd47、Atg7外，研究团队还发现了Calr、Rnf31、Vps45、Ilf2、Pnpo、Kcmf1、Fitm2、Morc2a和Thop1的缺失与ICB敏感性相关，并进一步对Calr、Med16和Rnf31缺失介导的ICB敏感机制进行体内实验验证。 CRISPR筛选发现的与ICB抵抗性或敏感性相关的基因 研究团队进一步对清除的sgRNA进行了通路富集分析，令人意外的是，MHC-I类抗原呈递信号通路相关的基因在除Lewis肺癌细胞（LLC）外的所有模型中都被清除，细胞因子响应、II型IFN和先天免疫相关的基因也在多个模型中被清除。这提示这些基因的缺失可以使得肿瘤细胞对ICB更加敏感。 我们都知道，IFN-γ可以上调MHC-I类分子的表达，从而促进细胞毒性CD8+T细胞（CTL）识别肿瘤细胞[4]。还有很多研究表明，IFN感应性的丧失与ICB的抗性相关[2,3,5,6]。在类似的小鼠肿瘤模型中进行体外CRISPR筛选，发现肿瘤细胞IFN和抗原呈递通路的丧失会引起肿瘤细胞对CTL杀伤的抵抗[7]。而本研究发现抗原呈递和IFN通路相关基因的清除竟然与ICB的敏感性相关，这似乎与上述研究结果相矛盾。 为了搞清楚矛盾背后的原因，Manguso团队进一步对比了他们的体内CRISPR筛选结果和前人的体外CRISPR筛选结果，结果发现了一些与IFN（如Jak1、Ifngr1、Ifngr2）和抗原呈递（如Tap1、Tap2、B2m）相关的基因，在体外和体内CRISPR模型中分别发生了富集和清除。 这一发现提示，在体外研究中，这些基因的缺失可能促进了肿瘤细胞对T细胞杀伤的抵抗；而在体内研究中，这些基因的缺失让肿瘤细胞对T细胞更敏感。 体外模型与体内模型中CRISPR筛选得到的sgRNA对比 为了进一步探究IFN诱导肿瘤细胞对ICB抵抗的机制，Manguso团队对比了ICB治疗后的清除的sgRNA与IFN-γ刺激后改变的IFN刺激基因（ISG）。结果显示，抗原呈递相关基因（H2-T23、B2m、Tap1、Tap2、Tapbp和Erap1）在ISG中富集，这些基因同样在ICB治疗后清除的sgRNA中富集，这提示这些基因能够被IFN-γ刺激诱导上调，并与ICB治疗的抵抗性相关。 体外实验也说明，在IFN-γ或IFN-β刺激后，经典MHC-I类分子H-2K、H-2D，非经典MHC-I类分子Qa-1b以及PD-L1的表达会发生上调。这些结果提示IFN诱导的ICB抵抗机制可能是由MHC-I类分子的上调所介导的。 IFN-γ刺激能够诱导多种发挥ICB抵抗性的基因上调 为了验证这一假设，研究团队设计了一种体内竞争性实验，以检测IFN-γ感应基因和MHC-I类抗原呈递途径相关基因的遗传上位性。 他们将对照sgRNA和靶向Ifngr1或Jak1（IFN-γ感应基因）的sgRNA转染的KPC细胞（这些细胞分别是对照sgRNA背景、Tap1敲除背景和B2m敲除背景，Tap1和B2m为MHC-I类抗原呈递途径相关基因）1：1混合，然后将这些细胞分别在NSG鼠，WT鼠和接受ICB治疗的WT鼠体内成瘤，对比不同组中转染对应sgRNA的细胞的富集与清除。 结果显示，在对照sgRNA背景的细胞中，Ifngr1或Jak1敲除的细胞被清除；而在Tap1和B2m敲除背景的细胞中，Ifngr1或Jak1敲除的细胞没有发生显著清除。这提示相比于对照细胞，IFN感应性缺陷的细胞具有依赖于MHC-I类的竞争劣势，即IFN感应性通路发挥功能依赖于MHC-I类分子的表达。 IFN-γ感应基因发挥功能依赖于MHC-I类抗原呈递途径相关基因 在人类基因组中，6p21.3基因座编码MHC-I类分子表达相关的基因，如TAP1、TAP2、TAPBP、PSMB8和PSMB9等[8-10]。TCGA中多种癌种都有超过10%的肿瘤发生了6p21.3缺失，然而6p21.3缺失与绝大多数肿瘤患者的生存无关。 在接受抗PD-1治疗的肾透明细胞癌患者队列中，当肿瘤为6p21.3两倍性时，高ISG特征与患者更差的生存相关。然而在6p21.3缺失的肿瘤中，高ISG特征不再与患者更差的生存相关。这提示肾透明细胞癌中，IFN介导的ICB抵抗作用依赖MHC-I类分子。 肾透明细胞癌中高ISG特征仅在6p21.3两倍性肿瘤中与患者差的预后相关 研究团队为进一步鉴定体内杀伤IFN感应性缺陷肿瘤的免疫细胞，分别在ICB治疗时使用抗体清除CD8+T细胞、NK细胞和CD4+T细胞，结果显示NK细胞和CD4+T细胞的清除影响了对Jak1缺陷肿瘤细胞的杀伤，而清除CD8+T细胞对Jak1缺陷肿瘤细胞的杀伤没有影响。由于NK细胞不表达PD-1，而CD4+T细胞表达PD-1，研究团队推测ICB治疗后，CD4+T细胞辅助NK细胞发挥肿瘤细胞杀伤作用。 为进一步在体外验证NK细胞对IFN感应性缺陷肿瘤的杀伤能力，他们将Jak1缺陷和对照肿瘤细胞，分别与IL-12/18激活的NK细胞共培养，结果显示活化的NK细胞能够杀伤Jak1缺陷肿瘤细胞，而肿瘤细胞中Tap1或H2-K1的缺失可以逆转这一效应。这提示肿瘤IFN感应性可以通过上调经典的MHC-I类分子，在体内和体外抑制NK细胞的毒性。 Manguso团队进一步探究了哪些MHC-I类抗原呈递途径的基因发挥功能依赖于NK细胞，他们对比了NK细胞清除与不清除时，ICB治疗清除的sgRNA。结果显示，尽管Ifngr1、Ifngr2、Stat1、Jak1、Jak2和H2-K1的清除表现出NK细胞依赖性，靶向Tap1、Tap2、H2-D1和H2-T23这几个抗原呈递基因的sgRNA在NK细胞存在与不存在时都会发生清除。这说明部分MHC-I类抗原呈递分子的缺失，所引起的肿瘤细胞杀伤是非NK细胞依赖性的。 在上述基因中，H2-T23引起了Manguso团队的关注。因为H2-T23编码非经典MHC-I类分子Qa-1b（相当于人类中的人类白细胞抗原HLA-E），而Qa-1b能够结合抑制性受体NKG2A/CD94。这些结果提示尽管NK细胞介导了对IFN感应性丧失的细胞的杀伤，但是某些MHC-I类分子（如Qa-1b）的表达可能会抑制其他的效应性细胞群。 某些MHC-I类分子（如Qa-1b）的表达可能会抑制除NK细胞外的效应性细胞 为了探究Qa-1b表达抑制了哪些效应性细胞群，研究团队首先检测了Qa-1b的缺失是否会增强ICB响应。结果显示，Qa-1b的缺失会增强ICB响应，而Qa-1b的过表达能抑制ICB响应。 当在接受ICB治疗的小鼠胰腺导管腺癌（KPC）肿瘤模型中敲除HT-T23后，分别清除NK细胞和CD8+T细胞，结果显示NK细胞清除对于Qa-1b缺陷型肿瘤的ICB响应没有影响，而CD8+T细胞清除抑制了Qa-1b缺陷型肿瘤的ICB响应。这提示Qa-1b主要通过抑制CD8+T细胞发挥作用。 单细胞测序数据也提示，ICB治疗后引起效应、耗竭和增殖的CD8+T细胞亚群扩增。而效应、耗竭和增殖CD8+T细胞亚群高表达NKG2A（Klrc1）和CD94（Klrd1），这提示肿瘤细胞的Qa-1b表达可能通过与CD8+T细胞的NKG2A/CD94抑制性受体结合发挥作用。 ICB治疗时CD8+T细胞发挥杀伤Qa-1b缺陷肿瘤作用 由于IFN能够诱导Qa-1b的表达，Manguso团队假设肿瘤的IFN感应性可以通过Qa-1b抑制CD8+T细胞。然而由于肿瘤IFN感应性丧失可能引起经典的MHC-I类分子下调，导致对CD8+T细胞的抗性，从而掩盖IFN可能介导的抑制作用。为解决这个问题，利用嵌合抗原受体（CAR）T细胞进行杀伤试验，由于CAR-T细胞的识别不依赖于MHC-I类分子，可以避免IFN-γ处理后MHC-I类分子上调带来的影响。 他们首先检测了CD19 CAR-T细胞对Qa-1b缺陷型CD19+KPC细胞的杀伤能力，结果显示CD19 CAR-T显著杀伤Qa-1b缺陷型肿瘤细胞，提示Qa-1b能够抑制CAR-T的杀伤能力。 为探讨Qa-1b上调是否是由IFN介导的CAR-T细胞杀伤抵抗机制，Manguso团队将CD19 CAR-T细胞分别与IFNγ刺激的对照和Jak1（IFN-γ感应基因）敲除CD19+KPC细胞的混合物1:1共培养。结果显示，CAR-T细胞对于这2类细胞的杀伤能力没有显著差异，这表示CAR-T细胞消除了Jak1敲除肿瘤细胞的生存优势。 为了探究IFN诱导的PD-L1上调是否抑制CAR-T的杀伤能力，他们检测了CAR-T联合抗PD-1单抗时两组细胞的存活情况。结果显示当CAR-T联合抗PD-1单抗时，Jak1敲除肿瘤细胞存活增多，这提示PD-L1上调对T细胞杀伤能力发挥抑制作用，联用抗PD-1单抗能够杀伤更多对照组肿瘤。 当Manguso团队使用Qa-1b缺陷型KPC细胞或联用抗NKG2A抗体时，结果显示Jak1敲除肿瘤细胞存活显著增多。这些结果提示CD8+T细胞优先杀死具有完整IFN感应能力的肿瘤细胞，而Qa-1b的上调抑制这种杀伤能力。至于背后的机制，Manguso团队认为这可能是因为IFN能够诱导粘附分子（如ICAM-1）的表达[11]，进而促进CD8+T细胞的杀伤。 在体内实验模型中，Manguso团队发现CAR-T对Jak1缺陷型肿瘤杀伤作用明显，而这种杀伤能力在Qa-1b缺陷的肿瘤中消失。这些结果提示IFN信号可以通过上调Qa-1b来抑制CAR-T细胞毒性。 IFN信号通过上调 Qa-1b来抑制 CAR-T 细胞毒性 最后，Manguso团队探讨了IFN信号对于免疫治疗响应预测的能力。 他们分析了一组接受抗PD-1单抗治疗的黑色素瘤患者队列（6p21.3两倍性），发现ISG的表达与更好的响应相关，这一结果与前述的ccRCC患者队列中的结果相反。 这提示利用IFN特征预测ICB响应需要考虑CD8+T细胞和NK细胞的响应优势，在NK细胞响应占优时，IFN特征与接受抗PD-1治疗差的响应相关；而在CD8+T细胞响应占优时，IFN特征与接受抗PD-1治疗好的响应相关。 高IFN特征在不同肿瘤微环境中与不同的ICB响应相关 Manguso团队还评估了1个接受ICB治疗的202名黑色素瘤患者的队列，分别在基线、治疗后6周和治疗后6个月时间点取样，检测血清中ISG蛋白的水平。 结果显示，在治疗后6周时，响应和无响应患者血清ISG蛋白含量都会增加。而治疗后6个月时，无响应患者血清ISG蛋白含量显著增加。并且，在这2个时间点，血清ISG的变化都与患者更差的无进展生存相关。因此，接受ICB治疗过程中，对于ICB的抵抗可能与IFN和ISG的水平升高有关。 ICB治疗后血清ISG蛋白水平升高与治疗抵抗有关 总的来说，这项研究发现了IFN感应性的丧失在多个动物模型中使得肿瘤对ICB更加敏感。这可以通过两种机制介导，第一是经典MHC-I类分子的上调能够抑制NK细胞，第二是非经典MHC-I类分子Qa-1b的上调可以通过NKG2A/CD94抑制CD8+T细胞。 既往研究往往关注IFN感应性的丧失会引起对ICB的抵抗，这项研究提示了IFN感应性功能的复杂性，IFN介导的MHC-I类分子上调可以发挥促进对CD8+T细胞抗原呈递和抑制NK细胞的双重作用。在高表达NK配体（MICA和MICB）的肿瘤中，由于IFN驱动的MHC-I类分子上调可以抑制NK细胞，高ISG特征与差的响应相关。而在T细胞高度克隆扩增的肿瘤中，由于IFN能够促进对T细胞的抗原呈递，高ISG特征与好的响应相关。因此，ISG特征在肿瘤中的作用可能取决于肿瘤中的免疫效应主要由NK细胞还是CD8+T细胞介导。 除此之外，这项研究中发现非经典MHC-I类分子Qa-1b（HLA-E）可以发挥免疫抑制作用，非经典MHC-I类分子如HLA-F、HLA-G可能发挥的免疫抑制作用也值得进一步探索。