TMBIM6

近日，维亚生物与由麻省理工学院引擎参与孵化的创新型生物医药企业等共同完成的研究成果，成功发表于Nature旗下权威肿瘤学杂志Oncogene上，文章名为：《TMBIM6/BI-1 is an intracellular environmental regulator that induces paraptosis in cancer via ROS and Calcium-activated ERAD II pathways》。这项开创性研究深入揭示了跨膜蛋白TMBIM6（也称为Bax抑制因子-1, BI-1）在癌症治疗中的独特作用，不仅阐明了其在细胞死亡调控中的创新机制，还展示了TMBIM6激动剂在抗癌治疗中的巨大潜力。维亚生物计算化学及人工智能平台执行主任钱玥博士、计算团队项目经理刘海、药物化学副总裁David Taddei博士，为这一重大科学发现提供了关键的计算解释，为靶点机理研究和实验设计作出了重要贡献。 （素材来源于Nature官网） TMBIM6作为细胞保护蛋白，在调节细胞存活、应激反应和代谢中发挥关键作用，在阿尔茨海默病、帕金森病和癌症等重大疾病中具有重要意义。该研究发现，TMBIM6在细胞内环境（ICE）变化时被激活，通过构象变化调控功能。在癌症中，TMBIM6激动作用能快速引发空泡化细胞死亡（paraptosis），且这一过程与癌症类型无关。癌细胞中TMBIM6的表达水平并不决定死亡程度，但影响死亡速度。不同于传统细胞死亡通路，TMBIM6激动作用通过上调细胞质钙离子和活性氧水平，激活溶酶体并通过ERAD II机制诱导细胞死亡。在异种移植模型中，TMBIM6激动剂能迅速杀死癌细胞，即使在高剂量下（>450 mg/kg）也未见毒性反应。总之，这些发现突显了TMBIM6作为治疗靶点的变革潜力，特别是在癌症及其他多种疾病和损伤的潜在应用前景。 TMBIM6作为一种重要的跨膜蛋白，尽管在多种疾病中，尤其是在癌症和神经退行性疾病中的潜在作用备受关注，但目前关于TMBIM6作为靶点的公开研究仍然较少。TMBIM6功能的复杂性和多样性为研究人员深入理解其结构与功能带来了巨大挑战。由于TMBIM6的细胞内作用与其构象变化密切相关，并可能受到环境因素（如pH和钙离子浓度等）的调控，深入理解TMBIM6的动态行为对于开发基于TMBIM6的治疗策略至关重要。 为了进一步研究和阐明TMBIM6蛋白分子构象变化对其功能发挥的关键作用，维亚生物AIDD/CADD团队通过对TMBIM6进行结构建模与优化，并引入能够模拟蛋白质在不同pH条件下的动态构象行为的CpHMD分子动力学模拟技术模拟其在不同pH条件下的构象变化。维亚团队研究发现，在低pH环境下，TMBIM6的跨膜区域和α-螺旋结构发生了显著变化，这一发现可能揭示了TMBIM6在细胞应激反应和癌细胞死亡调控中的关键分子机制。此外，通过把CpHMD的模拟结果与湿实验数据进行交叉验证，进一步确保了结果的科学性和生物学相关性，从而解释了分子结构变化对于其生物学功能的影响。通过精确模拟蛋白质在动态环境中的行为及分析关键残基的作用机制，为靶向TMBIM6的药物设计提供了坚实的理论和结构基础。这也充分展示了维亚生物AIDD/CADD团队在新靶点新机制研究领域的能力。 （图片来源于本次研究） 维亚生物的AIDD/CADD团队是由钱玥博士领导的多元复合型研发团队。该团队构建了一个全流程AI赋能的药物研发平台，创新性地集成开发了虚拟筛选、从头设计、分子动力学模拟和自由能微扰等多项尖端计算方法，实现了从靶点预测到候选化合物优化，直至临床前研究的全周期覆盖。团队有丰富的小分子、抗体、多肽和靶向RNA小分子等跨分子类型的药物研发经验。依托对分子结构和作用机理的深入洞察，团队始终保持计算方法与实验验证的紧密联动，通过反复迭代和系统性优化，持续提升计算模型的预测准确性和可靠性。这种AI驱动、实验验证的创新研发范式，不仅大幅降低了新药研发的时间和经济成本，更为破解药物研发的关键难题提供了富有前瞻性的解决思路。在这片技术创新的前沿，维亚生物正通过AI+实验技术的融合，为新药研发注入更多可能性，推动生物医药产业向更精准、更高效的方向发展。 维亚生物AIDD/CADD平台——一站式赋能药物研发全流程 如需了解更多论文内容，请查看： Robinson, K.S., Sennhenn, P., Yuan, D.S. et al. TMBIM6/BI-1 is an intracellular environmental regulator that induces paraptosis in cancer via ROS and Calcium-activated ERAD II pathways. Oncogene (2024). https://doi.org/10.1038/s41388-024-03222-x 如果您对维亚生物AIDD/CADD平台感兴趣，欢迎访问：https://www.vivabiotech.com，或者通过info@vivabiotech.com邮件与我们专家团队深入沟通。 相关推荐 维亚生物（01873. HK）成立于 2008 年，向全球创新药研发企业提供从早期基于结构的药物研发到商业化药物生产的一站式综合服务。凭借在基于结构的药物研发（SBDD）技术领域的领先优势，我们向全球合作伙伴提供新药研究阶段的CRO服务，搭建了X射线蛋白晶体技术、冷冻电镜技术（Cryo-EM）、DNA编码化合物库技术（DEL）、亲和力质谱筛选技术（ASMS）、表面等离子共振技术（SPR）、氢氘交换质谱技术（HDX-MS）、AIDD/CADD等多个先进技术平台，并有资深药物化学家与药物发现生物专家领军的团队提供药物设计、药物化学（H2L，LO）、化合物合成、化学分析及纯化、公斤级放大及多肽合成及相应的生物活性测试服务。通过子公司朗华制药，我们提供从临床前开发到商业化生产的一站式CMC/CDMO解决方案。同时，我们专注于发现、投资高潜力生物医药初创公司，以独创的技术服务换取股权（EFS）的商业模式，解决未满足的临床需求。

非小细胞肺癌(NSCLC)是全球癌症死亡的主要原因，其中SMARCA4基因突变十分常见，会导致SWI/SNF复合物功能失活，目前尚无有效治疗方案。近年来，一些研究表明，SMARCA2是SMARCA4的合成致死靶点，开发SMARCA2降解剂有望成为治疗SMARCA4突变型肺癌的新策略。 然而，开发SMARCA2的选择性抑制剂存在挑战，因为SMARCA2与SMARCA4的同源性很高，大多数小分子抑制剂会同时作用于两种蛋白。近年来，PROTAC技术应运而生，为开发高度选择性药物提供了新思路。 YD23：首个选择性SMARCA2降解剂 德克萨斯大学 MD 安德森癌症中心近日在Cell Chem. Bio上发表文章“Enhancer reprogramming underlies therapeutic utility of a SMARCA2 degrader in SMARCA4 mutant cancer”，通过对已知SMARCA2/4溴结构域配体Gen-1进行结构改造，将其与靶向Cereblon E3连接酶配体Pomalidomide连接，成功开发了首个文献报道的选择性SMARCA2降解剂YD23 (https://doi.org/10.1016/j.chembiol.2024.09.004)。 通过与SMARCA2/4 PROTAC ACBI1作对比，证明了YD23对SMARCA2具有选择性降解活性，对SMARCA4的降解活性很弱，并通过一系列实验验证了YD23的PROTAC机制。 YD23能有效抑制SMARCA4突变型肺癌细胞的生长，而对SMARCA4野生型肺癌细胞的生长没有明显影响。 增强子重编程：YD23抑制肿瘤生长的机制 YD23能显著降低SMARCA4突变型肺癌细胞系中增强子区域的染色质可及性，而对SMARCA4野生型肺癌细胞系的染色质可及性没有明显影响。 YD23能显著抑制SMARCA4突变型肺癌细胞系中细胞周期相关基因的表达，而对SMARCA4野生型肺癌细胞系的细胞周期相关基因表达没有明显影响。 YAP/TEAD：SMARCA2的关键合作蛋白 YAP/TEAD与SMARCA2共同作用，在SMARCA4突变型肺癌细胞系中增强子区域的染色质可及性中起着至关重要的作用，从而促进SMARCA4突变型肺癌细胞的生长。 体内抗肿瘤活性 该研究使用了三种SMARCA4突变型肺癌异种移植模型：H1568、H322和H2126。这三种模型分别来自不同的患者，代表了不同类型的SMARCA4突变型肺癌。该研究表明，YD23对这三种模型都有显著的抗肿瘤活性。 总而言之，YD23能显著抑制SMARCA4突变型肺癌异种移植模型的肿瘤生长，并能降低肿瘤组织中SMARCA2的表达水平。 总结与展望 该文章的主要内容是开发了一种新的针对SMARCA4突变型肺癌的治疗方法，即通过靶向降解SMARCA2来抑制肿瘤生长。通过探讨其作用机制，SMARCA2降解剂是一种很有潜力的抗癌药物，并且它可能为治疗SMARCA4突变型肺癌患者提供一种新的治疗选择。 文章中的不足，以及关于SMARCA2 PROTAC 从YD23的结构上看，很明显其成药性存在巨大的缺陷。事实也确实如此。 根据文章，YD23 是通过腹腔注射给药的。它在体内代谢很快(醚键的O-脱烷基化导致失活)，导致其血浆浓度较低。为了提高YD23在体内的暴露量，作者尝试与利托那韦联合用药，利托那韦是CYP3A4/5的抑制剂，可以减缓YD23的代谢。联合给药可以显著提高YD23在体内的暴露量，并表现出抗肿瘤活性。 目前处于临床试验阶段的选择性的SMARCA2靶向剂有Prelude的PROTAC药物PRT3789与PRT7732，以及Foghorn的抑制剂FHD-909（LY4050784）。 抑制剂FHD-909不是本文的重点，其对SMARCA4的选择性并不高。当然现在也有一些针对FHD-909改造得到选择性更高的抑制剂专利就是另外的话题了。 说回PROTAC，PRT3789是一款基于VHL的选择性SMARCA2 PROTAC，该药是一款注射剂（基于VHL的PROTAC很难实现口服），对SMARCA4的选择性超1000倍。 基于最近公开的联用专利，PRT3789的结构很可能如下： 最近ESMO202上公开了PRT3789的初步临床数据，不尽如人意。 共有 46 名患者进行了疗效评估，但纪念斯隆凯特琳癌症中心的 RobinGuo 博士在展示数据时重点关注了 26 名患有非小细胞肺癌或食道癌的患者；在该人群中，有 3 例已确认部分缓解。郭指出，20 名患有其他肿瘤类型的患者的肿瘤没有缩小。 这一结果也对Prelude的股价实行了腰斩，同时也为SMARCA2 PROTAC蒙上了浓浓的阴影。同时ESMO2024上安斯泰来的KRAS G12D PROTAC【ESMO2024--安斯泰来的KRASG12D PROTAC令人失望】与C4的BRAF PROTAC给出的初步临床结果均显得差强人意，也动摇了大家对PROTAC在肿瘤上的信心。 当然，Prelude并未放弃该项目。ESMO 获悉，提高疗效的一种途径可能是针对 SMARCA4 功能丧失突变的患者。至于联合用药，该试验已经在测试 PRT3789 加多西紫杉醇，并计划将其与 Keytruda 联合使用。 此外，此前的文章【研发前沿|选择性SMARCA2 PROTAC：合成致死新选择？】中基于各家SMARCA2 PROTAC专利提出了假设：不同E3连接酶对选择性有影响，且VHL相较于CRBN更能提升SMARCA2 PROTAC的选择性。 但很明显，本文YD23给出的结果也狠狠地打了我的脸：通过适当的改造，基于CRBN的PROTAC也能表现出出色的选择性。 Prelude最新进入临床的高选择性降解剂PRT7732，是一款基于CRBN的口服制剂，再次证明了这一点。 从专利信息可知，Prelude选择了lenalidomide作为CRBN配体，对warhead做了极大的改造，也采用了新的linker结构，满足了高选择性的同时实现了高口服生物利用度，大大提升了成药性。 至于PRT7732具体结构，目前信息太少，无法判断。随便挑一个专利中高选择性的实施例： 就这样，后续有新进展再介绍。 声明：发表/转载本文仅仅是出于传播信息的需要，并不意味着代表本公众号观点或证实其内容的真实性。据此内容作出的任何判断，后果自负。若有侵权，告知必删！ 长按关注本公众号  粉丝群/投稿/授权/广告等 请联系公众号助手 觉得本文好看，请点这里↓

中文摘要目的   研究绝对负压厂房对Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗（Sabin strain inactivated poliomyelits vaccine，sIPV）质量的影响。方法   按照批准的生产工艺在绝对负压厂房生产sIPV Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型单价原液各3批，配制3批sIPV三价半成品并分装成3批成品。按照企业注册标准（企标）对原液、半成品和成品进行全项检测，并将有效性指标（D抗原含量、效力试验）检测结果与相对负压厂房生产、检验合格的相对应中间产品和成品检测结果进行对比分析。对绝对负压厂房生产的Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型单价原液及成品进行2~8 ℃长期稳定性考察和25、37 °C加速稳定性考察，以进一步确认该厂房对sIPV质量的影响。结果   绝对负压厂房生产的单价原液中Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型D抗原含量分别为≥400、≥200、≥400 D抗原单位（D-antigen unit，DU）/ml，半成品中分别为48~84、54~90、82~128 DU/ml，成品中分别为24~42、27~45、41~64 DU/剂，各项检测结果均符合企标要求；供试品半成品半数有效剂量（50% effective dose，ED50）均高于参考品，且效力试验结果（供试品与参考品ED50比）均在警戒限内波动。相对负压与绝对负压厂房生产的sIPV原液、半成品、成品中Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型D抗原含量及半成品效力试验结果的差异无统计学意义（t值分别为-0.96、-1.69、-1.07、1.61、-0.85、0.07、0.00、-0.66、-1.04、1.93、0.83、1.31，P值均＞0.05）。稳定性考察结果显示，在疫苗有效期内的各个考察时间点的所有检测结果均符合企标的要求。结论   绝对负压厂房生产的sIPV质量稳定、可控，未对疫苗质量造成影响。正文Sabin株脊髓灰质炎（脊灰）灭活疫苗（Sabin strain inactivated poliomyelitis vaccine，sIPV）由稳定的减毒脊灰疫苗株制备而成[1]，是全球消灭脊灰的有效手段[2-3]。我国自主研发的sIPV于2015年在国内上市，安全性和免疫原性良好[4-8]。目前，国内sIPV生产均在相对负压厂房进行活病毒操作[9]，但WHO 2015年发布的《世界卫生组织在消灭特定型别野生脊灰病毒和相继停用口服OPV后最大程度降低脊灰病毒设施相关风险的全球行动计划》（GAP Ⅲ）[10]及2019年发布的《脊髓灰质炎疫苗安全生产和质量控制指南》附件4[11]，对生产脊灰病毒疫苗的设施提出了相对于环境绝对负压、安全防护和封存区的要求，以避免病毒外泄，进一步降低生物安全隐患。为确认绝对负压厂房生产的sIPV质量可控性，本研究将相对负压、绝对负压厂房生产的sIPV进行质量可比性研究[12-13]，为sIPV的生产以及生物安全保障提供指导。1材料与方法1.1供试品与参考品供试品为在绝对负压厂房采用与相对负压厂房相同条件、经批准的生产工艺生产的sIPV Ⅰ型（BⅠ1—BⅠ3）、Ⅱ型（BⅡ1—BⅡ3）和Ⅲ型单价原液（BⅢ1—BⅢ3）各3批，以及采用以上单价原液生产的三价半成品（BB1—BB3）和成品（B1—B3）各3批。D抗原参考品和效力参考品均由中国医学科学院医学生物学研究所（IMBCAMS）制备，采用中国食品药品检定研究院的国家标准品进行标定。1.2可比性研究对比数据来源相对负压厂房生产、检验合格的sIPV Ⅰ型单价原液28批（PⅠ1—PⅠ28），Ⅱ型单价原液46批（PⅡ1—PⅡ46），Ⅲ型单价原液32批（PⅢ1—PⅢ32），三价半成品52批（PB1—PB52）和成品52批（P1—P52）的检测数据均由IMBCAMS提供。1.3实验动物异常毒性试验：28~35日龄无特定病原体（specific pathogen free，SPF）级ICR小鼠，18~22 g，每批产品试验使用量5只，空白对照5只；42~56日龄清洁级Hartley豚鼠，250~350 g，每批产品试验使用量2只，空白对照2只。效力试验：42~56日龄SPF级Wistar大白鼠，175~200 g，每批产品试验使用量40只，接种效力参考品40只，空白对照10只。以上实验动物均由IMBCAMS提供，实验动物生产许可证号：SCXK（滇）K2019-002。1.4主要试剂一抗、二抗、2 mol/L H2SO4、PBS和M199稀释液均由IMBCAMS制备，牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）购自北京索莱宝科技有限公司，0.05% Tween 20购自美国Sigma公司，酶标抗体购自美国Thermo Fisher公司，3,3´,5,5´-四甲基联苯胺购自美国Seracare-KPL公司，定量检测BSA ELISA试剂盒购自无锡博生医用生物技术开发有限公司，Vero细胞蛋白质残留试剂盒购自北京天坛生物制品股份有限公司，卡那霉素残留ELISA试剂盒购自北京勤邦生物技术有限公司，Hep2细胞购自美国典型培养物保藏中心。1.5方法按照企业注册标准（企标）[14]对单价原液、三价半成品和成品进行各项检定。1.5.1  D抗原含量测定  采用ELISA测定Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型D抗原含量。用PBS将Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型一抗按一定比例稀释后，加入酶标板，室温过夜。加封闭液（PBS+1% BSA）150 μl/孔，室温封闭1.5 h。用稀释液（PBS+0.5% BSA+0.05% Tween 20）将D抗原参考品及供试品稀释至适宜浓度后加入板中，100 μl/孔，阴性对照为稀释液100 μl/孔，4 °C过夜。用稀释液将Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型二抗稀释到适宜浓度，加入板中，100 μl/孔，室温孵育。加酶标抗体室温孵育1.5 h。加底物100 μl，室温显色10 min，加2 mol/L H2SO4终止。以450 nm为检测波长测吸收值，记录各孔吸收值，通过四参数曲线拟合法计算D抗原含量。判定标准：单价原液、半成品和成品中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型D抗原含量应分别为≥400、≥200、≥400、48~84、54~90、82~128 D抗原单位（D-antigen unit，DU）/ml和24~42、27~45、41~64 DU/剂。1.5.2  鉴别试验  同D抗原含量测定，应证明含有脊灰病毒Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型D抗原。1.5.3  病毒灭活验证试验  采用细胞培养法进行病毒灭活验证。取含1 500剂D抗原量的样品接种到Hep2细胞，于（35.5±0.5）℃培养至21 d（原始培养），并于14 d和21 d取原始培养上清液分别盲传培养各14 d。原始培养结束后，观察细胞，并在原始细胞培养物上接种与单价病毒灭活液同型别的病毒进行攻击，攻击病毒量应为接近检测限的低剂量病毒，攻击后的细胞应出现细胞病变。原始细胞培养和2次盲传细胞培养均应无致细胞病变效应（cytopathic effect，CPE）发生，表示病毒灭活彻底，无活病毒存在。1.5.4  外观检测  肉眼观察，应为橘红色或橘黄色液体，澄清透明无异物。1.5.5  效力试验  供试品和效力参考品分别按未稀释、1：3、1：9、1：27稀释度接种Wistar大白鼠，每个稀释度接种10只，每只腿部肌内注射0.5 ml。10只Wistar大白鼠接种M199稀释液，0.5 ml/只作为阴性对照。饲养观察21 d，采血分离血清，于56 ℃灭活30 min。采用中和试验方法检测血清中的抗Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型脊灰病毒抗体，以1：4为阳性判定标准，结果用Reed-Muench方法计算半数有效剂量（50% effective dose，ED50），供试品的ED50应不低于效力参考品的ED50。1.5.6  装量、pH、游离甲醛、蛋白质含量、DNA残留、无菌、细菌内毒素、异常毒性、2-苯氧乙醇含量检测  按照中国药典2015年版四部通则的相关要求进行检测[15]，其中，异常毒性检查采用ICR小鼠及豚鼠进行试验，2-苯氧乙醇含量采用高效液相色谱法检测。判定标准：装量应不少于0.5 ml，pH应在6.5~7.5，游离甲醛应≤25 μg/剂，蛋白质含量应≤10 μg/剂，DNA残留应≤50 pg/剂，无菌检查、异常毒性应为阴性，细菌内毒素应＜10 内毒素单位/剂，2-苯氧乙醇含量应在4.0~6.0 mg/ml。1.5.7  BSA、Vero细胞蛋白质、抗生素残留检测  分别采用定量检测BSA ELISA试剂盒、Vero细胞蛋白质残留试剂盒及卡那霉素残留ELISA试剂盒进行检测，BSA残留应≤50 ng/剂，Vero细胞蛋白质残留应≤200 ng/剂，抗生素残留应≤50 ng/剂。1.6统计学分析1.6.1  趋势分析  分别计算PⅠ1—PⅠ28、PⅡ 1—PⅡ46、PⅢ1—PⅢ32、PB1—PB52、P1—P52各型别D抗原含量均值（x̅）、标准差（s）、警戒上限（x̅+2s）、警戒下限（x̅-2s）、行动上限（x̅+3s）和行动下限（x̅-3s），对BⅠ1—BⅠ3、BⅡ1—BⅡ3、B Ⅲ1—BⅢ3、BB1—BB3、B1—B3各型别 D 抗原含量进行趋势分析；分别计算PB1—PB52各型别效力试验结果的x̅、s、x̅+2s、x̅-2s、x̅+3s 和x̅-3s，对 BB1—BB3各型别效力试验结果进行趋势分析。1.6.2  独立样本t检验  使用SPSS 20.0软件分别对PⅠ1—PⅠ28和BⅠ1—BⅠ3、PⅡ1—PⅡ46和BⅡ1—BⅡ3、PⅢ1—PⅢ32和BⅢ1—BⅢ3、PB1—PB52和BB1—BB3、P1—P52 和B1—B3各型别的D抗原含量及PB1—PB52和BB1—BB3各型别效力试验结果进行独立样本t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。1.7稳定性考察对绝对负压厂房生产的sIPV Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型单价原液和成品各3批分别进行2～8 ℃长期稳定性考察和25、37 ℃加速稳定性考察，并绘制D抗原含量稳定性趋势图。1.7.1  单价原液  2~8 °C长期稳定性考察在0、3、6、9、12、18、24个月进行，0个月进行全项检测，3、6、9、18个月进行D抗原含量测定，12和24个月进行D抗原含量测定和无菌检查。25 ℃加速稳定性考察在0、1、2、3、4周进行，0周进行全项检测，1、2、3周进行D抗原含量测定，4周进行D抗原含量测定和无菌检查。37 ℃加速稳定性考察在0、7、14 d进行，0 d进行全项检测，7 d进行D抗原含量测定，14 d进行D抗原含量测定和无菌检查。1.7.2  成品  2~8 ℃长期稳定性考察在0、3、6、9、12、18、24个月进行，0、12和24个月进行全项检测，3、6、9、18个月进行鉴别试验及外观、蛋白质含量、2-苯氧乙醇含量、细菌内毒素、pH、D抗原含量检测。25 ℃加速稳定性考察在0、1、2、3、6个月进行，0、1、6个月进行全项检测，2、3个月进行外观、蛋白质含量、2-苯氧乙醇含量、细菌内毒素、pH、D抗原含量检测。37 ℃加速稳定性考察在0、7、14 d进行，0、14 d进行全项检测，7 d进行外观、蛋白质含量、2-苯氧乙醇含量、细菌内毒素、pH、D抗原含量检测。2结果2.1绝对负压厂房生产的sIPV检测结果2.1.1  单价原液  绝对负压厂房生产的3个型别sIPV单价原液各3批的检测结果均符合企标的要求，其中D抗原含量见表1。2.1.2  三价半成品  绝对负压厂房生产的sIPV三价半成品BB1—BB3检测结果均符合企标要求，其中D抗原含量及效力试验结果见表2。2.1.3  成品  绝对负压厂房生产的sIPV成品B1—B3检测结果均符合企标要求，其中D抗原含量见表3。2.2统计学分析2.2.1  趋势分析  相对负压厂房生产的sIPV各阶段D抗原含量及效力试验结果见表4—6。由表1一3可见，绝对负压厂房生产的sIPV Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型单价原液D抗原含量均在警戒限范围内波动；三价半成品Ⅰ、Ⅱ型D抗原含量在行动限范围内波动，Ⅲ型D抗原含量在警戒限范围内波动；成品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型D抗原含量均在警戒限范围内波动；三价半成品Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型效力试验结果均在警戒限范围内波动。2.2.2  独立样本t检验  经计算，相对负压和绝对负压厂房生产的sIPV单价原液、三价半成品、成品的D抗原含量以及三价半成品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型效力试验结果均服从正态分布。相对负压与绝对负压厂房生产的sIPV单价原液、三价半成品、成品中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型D抗原含量差异均无统计学意义（t值分别为-0.96、-1.69、-1.07、1.61、-0.85、0.07、0.00、-0.66、-1.04，P值均＞0.05）；三价半成品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型效力试验结果差异也均无统计学意义（t值分别为1.93、0.83、1.31，P值均＞0.05）。2.3绝对负压厂房内生产的sIPV稳定性考察2.3.1  单价原液  绝对负压厂房生产的sIPV单价原液2~8 °C长期稳定性考察和25、37 °C加速稳定性考察全部时间点的所有考察项目均符合企标的要求，其中D抗原含量趋势见图1。2.3.2  成品  对绝对负压厂房生产的sIPV成品进行2~8 ℃长期稳定性考察，每一个考察时间点下的考察项目均符合企标的要求。在25 ℃、37 ℃加速稳定性考察中，除B1批Ⅰ、Ⅲ型和B3批Ⅱ型D抗原含量在25 ℃加速稳定性考察6个月的结果，以及B1、B2、B3批Ⅲ型D抗原含量在37 ℃加速稳定性考察14 d的结果低于合格下限外，其余考察项目的检测结果均符合企标的要求。sIPV成品D抗原含量考察趋势见图2。3讨论相比用野毒株生产的脊灰灭活疫苗，sIPV生产成本低，生产过程更安全，若产生泄露，所造成的生物安全风险也相对较低[10]。因此，WHO鼓励脊灰疫苗生产厂家采用Sabin株进行疫苗生产，以降低脊灰病毒传播风险，并将sIPV纳入WHO预认证高优先级别疫苗[16-18]。然而，WHO对sIPV活病毒的生产环境提出了绝对负压的要求，旨在消灭特定型别野生脊灰病毒和相继停用口服脊灰疫苗后最大程度地降低脊灰病毒设施的相关风险[10-11]。目前，全球已经进入消灭脊灰病毒的最终阶段，对sIPV需求逐年增加[19]，按照WHO要求设计绝对负压厂房，生产出安全、有效的sIPV具有重大意义。本研究显示，绝对负压厂房生产的sIPV Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型单价原液以及三价半成品和成品各3批检测结果均合格。此外，本研究对相对负压和绝对负压厂房生产的sIPV有效性指标D抗原含量和效力试验检测结果进行了趋势分析和独立样本t检验。趋势分析结果显示，绝对负压厂房生产的sIPV各阶段D抗原含量均在行动限范围内波动，三价半成品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型供试品ED50均高于参考品ED50，且两者比值均在警戒限范围内波动。经过独立样本t检验，相对负压与绝对负压厂房生产的sIPV各阶段D抗原含量、三价半成品效力试验结果差异均无统计学意义（P值均＞0.05）。另外，疫苗温度标签反应速率的研究显示，2~8 ℃条件下有效期为2年的疫苗（sIPV满足该条件），可等效为25 ℃保存45 d、37 ℃保存7 d[20]。在sIPV产品有效期内的各个考察时间点的所有检测结果均符合企标的要求，绝对负压厂房生产的sIPV稳定性良好，质量可靠。绝对负压的设计可减少脊灰病毒传播，降低生物安全的风险，在今后的工作中，我们应持续关注绝对负压厂房下生产的sIPV质量，为中国及世界儿童提供安全、有效的sIPV。作者周振歆1，2  易力1，2  刘一凡1，2  杨晓蕾1，2，3  杨净思1，2，31中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所，昆明  650031；2国家药品监督管理局疫苗及生物制品质量控制与评价重点实验室，成都  611731；3病毒性传染病生物制品国家地方联合工程研究中心，昆明  650503通信作者：杨净思，Email：yjs@imbcams.com.cn引用本文：周振歆, 易力, 刘一凡, 等. 绝对负压厂房生产的Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗质量研究 [J]. 国际生物制品学杂志, 2023, 46(3):134-140.  DOI: 10.3760/cma.j.cn311962-20221024-00072