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导读：基于PD-1/PD-L1的免疫检查点阻断（ICB）疗法可阻断肿瘤细胞的免疫逃逸，引发抗肿瘤免疫反应。但由于肿瘤内免疫效应细胞浸润不足，通过PD-1/PD-L1 ICB治疗实现的持久有效的免疫应答的患者数较少，因此，在肿瘤免疫微环境中动员免疫效应细胞是促进上述疗法的有效策略。2024年1月，国内学者在Journal of Controlled Release（影响因子10.8）发表文章：《A combination of PD-L1-targeted IL-15 mRNA nanotherapy and ultrasound-targeted microbubble destruction for tumor immunotherapy 》，研究人员开发了一种“DPPA/IL-15 NPs”纳米平台，利用超声靶向微泡破坏技术（UTMD）将白介素-15（IL-15）mRNA靶向递送至PD-L1。该平台通过诱导免疫原性细胞死亡（ICD）和IL-15表达，介导有效的抗肿瘤免疫治疗。01背景介绍白细胞介素-15（Interleukin-15，IL-15）可增殖、募集和激活细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）和自然杀伤细胞（NKs），但半衰期短、毒副作用强。因此，将IL-15 mRNA靶向递送至肿瘤细胞可解决上述问题。脂质纳米颗粒（LNPs）是最有效的非病毒递送载体，免疫原性低、生物安全性高、易于合成，可通过优化脂质的组成和比例将mRNA靶向递送至特定器官，但血管畸形和细胞外基质密度高等肿瘤特征限制LNPs的深度渗透。超声（US）介导的药物递送显示出良好的临床前景，可暂时破坏血管内皮屏障促进细胞内化。超声靶向微泡破坏技术（UTMD）可通过增加细胞内活性氧（ROS）介导多种细胞反应，如自噬、上皮-间充质转化和逆转耐药性。已知ROS诱导的内质网（ER）应激是免疫原性细胞死亡（ICD）的前兆，释放的DAMPs显著促进树突状细胞（DCs）的活化和CTLs的募集，DCs激活是肿瘤免疫周期的初始阶段，UTMD有望成为这一步骤的有效刺激剂。基于以上背景，研究人员提出基于UTMD实现免疫检查点靶向的mRNA纳米疗法，研究将其命名为DPPA/IL-15 NPs。其递送系统的特色在于核心成分为全氟己烷（PFH），赋予其超声响应性和超声造影成像性能，同时脂质层存在抗PD-L1肽DPPA修饰。02DPPA/IL-15 NPs的制备、表征和回声性2.1 DPPA/IL-15 NPs的制备PD-L1靶向性LNP递送系统的制备：将100mg DSPE-PEG-NHS溶于3mL DMF中，加入DPPA肽和三乙胺，使其完全溶解并反应12h。将反应液在纯化水中透析24h，透析液冷冻干燥，得DSPE-PEG-DPPA。MC3和PLGA溶于DMF，DSPE-PEG-DPPA溶于无RNase水中（所有试剂使用前超声处理2min）。在pH3.5下，将固定比例的MC3和mRNA加入柠檬酸盐缓冲液中，混合并孵育20min，MC3-mRNA复合物，200μL PFH和250μg PLGA在冰浴条件下超声处理1min。将1mg DSPE-PEG-DPPA水溶液滴加到混合物中并超声处理3min。用无RNase水离心洗涤3次后，收集DPPA/IL-15 NPs并分散到PBS缓冲液中。通过评估发现在相同mRNA质量下，增加MC3可提高转染和翻译效率，当MC3/mRNA质量比为10达到饱和，后续实验MC3/mRNA=10。为探究DPPA/IL-15 NPs的最佳mRNA封装效率，制备分别含有2%、5%、10%、15%、20%和30% MC3的DPPA/IL-15 NPs，发现随MC3含量增加，包封效率逐渐提高，但伴随的溶血速率也增加，为保证生物安全性，后续实验使用10%的MC3。2.2 IL-15 mRNA纳米颗粒的表征IL-15 NPs和DPPA/IL-15 NPs均带负电荷，平均流体动力学尺寸分别为290.8±9.8 nm和325.9±9.4 nm，PDI分别是0.169±0.015和0.139±0.016，表明均匀性高；透射电镜（TEM）显示，DPPA/IL-15 NPs分散良好，粒径主要分布在300nm处；AFM和SEM图像显示DPPA/IL-15 NPs具有完整的球形结构；纳米复合物中mRNA不易被RNase降解，稳定性好；在含10% FBS的培养基中储存48h的DPPA/IL-15 NPs的血清稳定性好，在血液循环过程中可保持稳定。2.3 回声性给药后24h对Cy5-DPPA-NPs和Cy5-NPs的生物分布进行成像和定量，其主要通过肝肾系统代谢。为评估DPPA/IL-15 NPs作为超声造影剂的回声性，使用灰度和CEUS模式获取体外和体内超声图像，静脉注射DPPA/IL-15 NPs后，荷瘤小鼠的US图像在CEUS模式下表现出回声信号和对比增强（p＜0.01），治疗性超声暴露后，肿瘤灌注面积和造影剂强度均较照射前增加（p＜0.05）。因此，DPPA/IL-15 NPs有望在实时超声成像引导下确定肿瘤位置、监测治疗过程和评估治疗效果，实现诊断和治疗的整合。图1 DPPA/IL-15 NPs合成及特征03mRNA递送至肿瘤细胞进行蛋白质翻译免疫细胞分泌的IFN-γ可上调黑色素瘤细胞中的PD-L1，DPPA-NPs与肿瘤细胞上的PD-L1结合效率实验结果发现：PD-L1在IFN-γ处理的B16F10细胞中高表达(83.6%)，经游离DPPA和DPPA-NPs处理后，PD-L1分别下降至24.6%和26.4%，故DPPA-NPs表面的DPPA与PD-L1具有良好的结合能力。进一步探究Cy5-DPPA-NPs的细胞内化及其在US下的增强作用。相较NPs组，DPPA-NPs+US组中cy5阳性细胞比例比DPPA-NPs组高1.15倍，比NPs+US组高1.21倍，表明DPPA-NPs可通过DPPA介导的主动靶向和UTMD介导的超声加工被肿瘤细胞内化。高翻译效率是mRNA有效治疗的基础，研究人员探究DPPA-NPs联合UTMD的翻译效率，与NPs相比，DPPA-NPs介导的主动靶向增强mRNA翻译。DPPA-NPs组与DPPA-NPs+US组观察结果表明增强的mRNA表达受益于US暴露。DPPA-NPs+US组中GFP阳性细胞的数量最多、百分比最高为9618±191#s，96.2±1.9%，DPPA-NPs组和NPs+US组分别为7671±547#s（76.8±5.5%），7220±688#s（72.2±6.8%），荷瘤小鼠模型体内翻译效率与细胞实验结果一致，综上，DPPA/IL15 NPs与UTMD组合可提高翻译效率。图2 UTMD介导的DPPA-NPs mRNA的体外递送IVIS光谱成像系统结果表明UTMD增加了肿瘤部位的药物富集，对肿瘤组织进行解剖发现DPPA-NPs联合UTMD可深度穿透肿瘤。图3 UTMD介导的DPPA-NPs mRNA的体内递送04UTMD诱导ER应激驱动的ICD增强肿瘤免疫原性对于激活抗肿瘤免疫反应至关重要，肿瘤免疫原性可能由死亡的肿瘤细胞引起，称为ICD。采用膜联蛋白V-FITC/PI染色测定UTMD的细胞毒性，单独用US、NPs和DPPA-NPs（无超声）无法诱导显著的细胞凋亡，NPs＋US和DPPA-NPs+US组诱导的细胞凋亡水平明显高于其他组，且出现细胞膜破裂、细胞内容物渗漏和明显的内质网扩张，表明UTMD的声毒性导致细胞凋亡。利用FCM和荧光显微镜评估细胞内ROS的产生，NPs和DPPA-NPs在US照射后均在细胞内产生超氧化物水平的ROS，表明UTMD可诱导氧化应激，且UTMD组中观察到的GRP78高表达表明UTMD在肿瘤细胞内诱导ER应激。内质网中ROS诱导的氧化应激是ICD的先决条件。产生ICD通常伴随着DAMPs的释放，促进DCs的募集和激活，从而触发针对肿瘤细胞的CTLs。进一步探究发现UTMD可诱导内质网应激以触发ICD并驱动多种DAMPs释放，如CRT暴露、HMGB1释放和HSP70增加，综上，UTMD增加了药物向肿瘤部位的递送及肿瘤微环境（TME）中的抗肿瘤免疫反应。图4 UTMD诱导的内质网应激提高DAMPs释放05UTMD联合DPPA/IL-15NPs在体外进行免疫激活为进一步证明UTMD与DPPA/IL-15 NPs在细胞水平上诱导免疫反应的功能，提取小鼠BMDCs，通过门控CD80/CD86阳性细胞评估UTMD联合DPPA/IL-15 NPs对DCs成熟的影响。DPPA/IL-15 NPs+US组的B16F10细胞与BMDCs共培养后成熟DCs（CD11c+CD80+CD86+）的百分比达29.9±0.4%，高于DPPA-NPs+US组（15.0±1.3%）和DPPA/IL-15 NPs组（19.8±1.6%），表明DPPA/IL-15 NPs联合UTMD有效促进DCs成熟。细胞因子分泌对免疫激活很重要，DPPA/IL-15 NPs与UTMD结合后产生的肿瘤细胞碎片触发BMDCs分泌高水平细胞因子（包括IL-6和TNF-α），增强免疫反应。IL-15（促炎细胞因子）可促进T细胞增殖并维持其存活，DPPA/IL15 NPs+US组中的T细胞增殖率高于DPPA/IL-15 NPs组（p＜0.05），与UTMD高效转染IL-15 mRNA有关。NK细胞在无抗原刺激的情况下通过自发裂解肿瘤细胞来消灭它，DPPA/IL-15 NPs+US组NK细胞细胞毒性最高，其次是DPPA/IL-15 NPs组，表明IL-15 mRNA翻译的IL-15在NK细胞中具刺激作用。综上，DPPA/IL-15 NPs与UTMD的结合足以诱导DCs成熟、T细胞增殖并增强NK细胞毒性，具有增强抗肿瘤免疫力的潜力。图5 UTMD联合DPPA/IL-15 NPs的体外免疫激活06UTMD联合DPPA/IL-15 NPs在小鼠体内的免疫作用为评估UTMD与DPPA/IL-15 NPs在B16F10荷瘤小鼠中的联合作用。在第14d切除肿瘤，与对照组相比，DPPA-NPs +US组和DPPA/IL-15 NPs组表现出中度抑制作用，DPPA/IL-15 NPs+US组几乎完全抑制B16F10肿瘤生长，表明联合疗法抑制肿瘤生长。H&E和TUNEL染色评估B16F10肿瘤内的坏死和凋亡，对照组肿瘤细胞结构完整，DPPA-NPs+US、DPPA/IL-15 NPs、DPPA/IL-15 NPs+US组细胞结构丧失、细胞核萎缩及细胞坏死碎裂，DPPA/IL-15 NPs+US组的坏死区明显大于其他组。PD-L1靶向IL-15 mRNA纳米疗法与UTMD联合使用可有效协同，提高抗肿瘤疗效。生物安全是纳米疗法临床应用的前提，UTMD和DPPA/IL-15 NPs组合未引发显著全身毒性及明显病理损伤和炎症浸润，表明组合疗法对活体动物的高度生物安全性。图6 体内原发性B16F10肿瘤的抑制效果07UTMD联合DPPS/IL-15 NPs诱导体内抗肿瘤免疫应答DCs是激活抗肿瘤免疫反应的桥梁，与体外结果一致，DPPA/IL-15 NPs+US组中成熟DCs（CD11c+CD80+CD86+）水平最高（50.0±1.5%），DPPA-NPs、DPPA-NPs+US、DPPA/IL-15 NPs组和对照组分别为26.7±0.9%、31.3±1.7%、38.3±2.3%和22.2±0.6%，表明可能由于UTMD增强IL-15表达，IL-15与死亡肿瘤细胞释放的DAMPs协同作用，启动抗肿瘤免疫反应。CTLs（CD8+ T细胞）是抗肿瘤免疫疗法中的关键效应细胞。DPPA/IL-15 NPs+US组CD8+ T细胞的浸润率(24.1±2.3%)比DPPA-NPs+US组(11.7±1.0%)高2.05倍，比DPPA/IL-15 NPs组(17.6±2.0%)高1.37倍。表明UTMD和DPPA/IL-15 NPs的协同作用导致CTLs有效浸润到B16F10肿瘤中。与其他组相比，DPPA/IL-15 NPs+US组CD8+CD44+ T细胞百分比显著增加，大量肿瘤浸润CD4+ T细胞、CD8+ T细胞及NK细胞，表明联合治疗可系统增强T细胞免疫。与对照组相比，DPPA/IL-15 NPs+US组中IFN-γ、IL6和TNF-α分别高出6.10、3.83和5.42倍，进一步支持联合疗法诱导有效的抗肿瘤免疫反应。综上，UTMD联合DPPA/IL-15 NPs重塑肿瘤免疫微环境，促进免疫杀伤反应。图7 体内全身抗肿瘤免疫分析08UTMD联合DPPS/IL-15 NPs诱导免疫记忆进一步使用转移性肿瘤模型验证抗复发能力。在实验终端收集肺部，对照组观察到大量转移性结节，DPPA/IL-15 NPs+US组中仅观察到散发性转移灶，结合H&E图像结果表明UTMD联合DPPA/IL-15 NPs显著增强抗转移作用。免疫记忆反应是成功适应性免疫的重要标志，采用流式细胞术检测小鼠脾脏中CD8+CD44highCD62Llow效应记忆T细胞(TEM)和CD8+CD44highCD62Lhigh中枢记忆T细胞(TCM)，DPPA/IL-15 NPs+US组CD8+ TEM(28.2±0.5%)和TCM(17.4±0.6%)的百分比高于DPPA-NPs+US组(分别为20.0±0.2%和11.1±0.5%)和DPPA/IL-15 NPs组(分别为25.5±0.8%和12.9±0.8%)，证实联合治疗可诱导稳健的T细胞记忆。综上，UTMD与DPPA/IL-15 NPs联合有利于建立针对复发肿瘤的免疫记忆，作为新的肿瘤治疗途径。图8 免疫治疗转移性B16F10肿瘤的体内研究09小结本研究建立的PD-L1靶向性递送系统DPPA/IL-15 NPs不仅保护了mRNA，还表现出US响应性和CEUS成像能力。当与UTMD联用时，DPPA/IL-15 NPs实现了PD-L1最佳靶向，促进IL-15 mRNA的递送，并在体外和体内显示出更高的mRNA转染和翻译效率。UTMD可显著增加细胞内ROS，诱导ER应激驱动的ICD，作为启动抗肿瘤免疫的第一步。且UTMD与DPPA/IL-15 NPs组合可增加免疫效应细胞的募集及免疫刺激细胞因子的产生，从而有效抑制肿瘤生长和肿瘤复发。该联合疗法具有通过增强免疫疗法进行临床转化的潜力，并提供实时超声成像指导。参考文献 [1] Wang X, Li F, Zhang J, Guo L, Shang M, Sun X, Xiao S, Shi D, Meng D, Zhao Y, Jiang C, Li J. A combination of PD-L1-targeted IL-15 mRNA nanotherapy and ultrasound-targeted microbubble destruction for tumor immunotherapy. J Control Release. 2024 Jan 24;367:45-60. doi: 10.1016/j.jconrel.2024.01.039.识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入生物制品微信群！请注明：姓名+研究方向！版权声明本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。END

关注并星标CPHI制药在线痛经，是许多女性的难言之隐。对于痛经严重的女性来说，每个月来例假就像是渡劫，严重影响正常的工作和生活。根据病因，痛经可分为原发性痛经和继发性痛经。继发性痛经主要是由盆腔器质性疾病引起，如子宫内膜异位症、子宫腺肌症、盆腔淤血综合征、先天性生殖道发育畸形（如阴道斜隔综合征）等。痛经是子宫内膜异位症的主要临床症状之一。       关于子宫内膜异位症       子宫内膜异位症（EMs，简称内异症）是由活性的内膜细胞种植在子宫内膜以外的位置而形成的一种常见的妇科疾病，主要表现为痛经、不孕症、慢性盆腔疼痛，严重影响女性的生殖健康和生活质量。       子宫内膜异位症在育龄女性中的发病率约为10%~15%，据世界子宫内膜异位症学会（WES）2014年统计，全球子宫内膜异位症发病人数超过2亿，亚洲的发病人数超过其他各大洲的总和。       目前，子宫内膜异位症的发病机制还不清楚，也无法治愈。当前，子宫内膜异位症已被纳入慢性疾病管理范畴，主流管理理念是尽量减少手术次数，最大化采取药物治疗。药物治疗的目的主要是缓解痛经，临床常用药物主要分为口服避孕药、非甾体类抗炎药、孕激素类药物、促性腺激素释放激素（GnRH）激动剂、促性腺激素释放激素（GnRH）拮抗剂、中医中药几类。       避孕药通过抑制排卵及负反馈抑制下丘脑-垂体-卵巢轴，形成体内低雌激素环境达到治疗效果。非甾体类抗炎药通过减少子宫内膜前列腺素合成来缓解痛经。       孕激素是治疗子宫内膜异位症最古老的药物，其通过抑制排卵及拮抗雌激素缓解痛经，临床上常用药物包括地诺孕素、地屈孕酮。       GnRH激动剂被认为是治疗子宫内膜异位症的"金标准"，其通过与垂体内的GnRH受体结合，持续占居GnRH受体并移入细胞内，使垂体卵泡刺激素（FSH）和黄体生成素（LH）分泌的节律消失，进而抑制卵泡发育及排卵，使血清雌激素达到绝经期水平，长期用药后异位内膜出现萎缩甚至"死亡"。       GnRH激动剂是人工合成的多肽药物，临床使用不便，而且其初期使用有点火效应，即初次应用GnRH激动剂时，其可短暂刺激腺垂体释放促性腺激素（FSH和LH），进而刺激卵巢激素的分泌。       GnRH拮抗剂近些年被开发用于治疗子宫内膜异位症，其也通过结合GnRH 受体发挥作用。早期开发的GnRH拮抗剂多为肽类，如西曲瑞克、加尼瑞克，应用于辅助生殖技术。针对子宫内膜异位症的GnRH拮抗剂是非肽类，其避免了GnRH激动剂的点火效应。       GnRH拮抗剂研究进展       目前，全球仅批准一款GnRH拮抗剂治疗子宫内膜异位症，即Orilissa（elagolix）。该药是由艾伯维与Neurocrine Bioscienc Chemicabookes共同研发的一款口服GnRH持抗剂，2018年7月被FDA批准用于治疗与子宫内膜异位症相关的中度至重度疼痛。       除了elagolix，全球还有多款在研GnRH拮抗剂被开发用于治疗子宫内膜异位症，如linzagolix、relugolix、CMS-D002、SHR7280、G201-Na、HS-10518。       其中linzagolix是Kissei自主研发的新型口服小分子GnRHR拮抗剂，2021年9月葆正医药获得其在中国的开发和商业化授权，2022年6月在欧盟被批准用于治疗子宫肌瘤相关的严重月经出血。目前，linzagolix针对子宫内膜异位症的临床试验处于3期阶段。       relugolix是武田研发的一款每日口服一次的GnRHR拮抗剂，2016年6月Myovant公司（Roivant和武田组建的公司）获得该药在日本和其他亚洲国家之外的全球独家授权，2019年1月在日本被批准用于改善子宫肌瘤引起的月经过多、下腹痛、腰痛和贫血。2020年12月，该药被FDA批准用于治疗成人前列腺癌。relugolix复方片（relugolix 40mg、雌二醇1.0mg、醋酸炔诺酮0.5mg）于2021年6月被FDA用于治疗绝经前女性子宫肌瘤相关月经大量出血。值得一提的是，relugolix复方片治疗子宫内膜异位症的3期临床试验已取得积极结果：与安慰剂相比，relugolix复方片显著减少了经期/非经期盆腔疼痛。       CMS-D002是康哲药业开发的一款小分子GnRHR拮抗剂，在临床前研究中表现出优异的有效性和安全性，近期在国内获批临床。       SHR7280是恒瑞医药研发的一种新型口服小分子GnRH受体拮抗剂。已公布的数据显示：该药在子宫内膜异位症相关疼痛治疗中显示出良好的安全性和药代动力学特性。药效学分析显示，SHR7280能够有效抑制雌二醇和黄体生成素浓度，并以剂量依赖的方式防止孕激素升高。       此外，催乳素受体靶向药（如HMI-115）、NK疗法也被开发用于治疗子宫内膜异位症。其中HMI-115是一种潜在"first-in-class"单克隆抗体，能够以非竞争性抑制的方式阻断催乳素下游的信号通路。2019年4月，和其瑞医药与拜耳签署一项全球独家许可协议，获得在全球开发和推广HMI-115用于治疗男性和女性脱发、子宫内膜异位症和其它与催乳素受体信号失调相关的慢性疾病的授权。2023年9月，和其瑞医药和鼎康生物达成战略合作，加速HMI-115的上市进程。       子宫内膜异位症领域的新发现       近年来子宫内膜异位症领域还有一些新发现。2021年《科学·转化医学》上发表的题为 Neuropeptide S receptor 1 is a nonhormonal treatment target in endometriosis 的研究表明，NPSR1/NPS系统是一种经过基因分析验证的非激素靶标，与III/IV期子宫内膜异位症治疗的密切相关，可作为子宫内膜异位症非激素治疗的新靶点。       2023年《科学·转化医学》杂志上的发表的题为"Fusobacterium infection facilitates the development of endometriosis through the phenotypic transition of endometrial fibroblasts"的研究发现梭杆菌属感染会促进子宫内膜异位症的发展，抗生素治疗能有效减少实验动物病灶。       此外，2023年《The American Journal of Pathology》上发表的题为"Neurotrophins and Their Receptors, Novel Therapeutic Targets for Pelvic Pain in Endometriosis, Are Coordinately Regulated by IL-1β via the JNK Signaling Pathway"的研究表明，炎症、神经生长和痛觉的许多主要介质主要是通过JNK通路的一个选择性信号节点传递的，针对这一共同通路的药物有可能影响和改善子宫内膜异位症相关盆腔疼痛的多方面问题。【智药研习社近期课程预告】来源：CPHI制药在线声明：本文仅代表作者观点，并不代表制药在线立场。本网站内容仅出于传递更多信息之目的。如需转载，请务必注明文章来源和作者。投稿邮箱：Kelly.Xiao@imsinoexpo.com▼更多制药资讯，请关注CPHI制药在线▼点击阅读原文，进入智药研习社~

导读：肝内胆管癌(ICC)具有致密的纤维化微环境和高度恶性的特点，与化疗耐药和预后非常差有关。尽管circRNA已成为癌症生物学中重要的调节因子，但它们在ICC中的作用仍不清楚。近日，福建医科大学研究团队在国际权威期刊《Advance Science》发表了一篇题为“A Novel Trojan Horse Nanotherapy Strategy Targeting the cPKM-STMN1/TGFB1 Axis for Effective Treatment of Intrahepatic Cholangiocarcinoma”的研究论文，本研究中，一种环状RNA cPKM被鉴定出来，它在ICC中上调并与不良预后相关。在ICC细胞中沉默cPKM可减少TGFB1释放和间质纤维化，抑制STMN1表达，抑制ICC生长和转移，并克服紫杉醇耐药。基于这些发现，研究人员开发了一种特洛伊木马式的纳米治疗策略，即siRNA共载抗cPKM (si-cPKM)和紫杉醇(PTX)。siRNA/PTX共负载纳米系统(特洛伊木马)在体内有效穿透肿瘤组织，释放si-cPKM和紫杉醇(士兵)，促进紫杉醇致敏，抑制ICC的增殖和转移。缓解ICC肿瘤间质纤维化，重新打开塌陷的肿瘤血管(打开大门)，从而提高标准化疗方案的疗效(主力)。这种新颖的纳米疗法为ICC治疗提供了一种有前景的新策略。https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/advs.202303814研究背景 01 肝内胆管癌(ICC)起源于肝内胆管上皮细胞，是第二常见的肝脏原发性恶性肿瘤，占所有原发性肝癌的10%-15%。虽然没有肝细胞癌(HCC)那么普遍，但在过去的几十年里，ICC的全球发病率迅速上升。ICC是一种预后极差的致死性疾病，其死亡率在大多数地区稳定，5年总生存率(OS)≈9%。由于ICC在早期通常无症状，大多数ICC患者在晚期才被诊断出来。手术切除是目前治疗ICC的主要方法。不幸的是，只有20%-40%的潜在可手术疾病患者符合手术切除的条件，手术切除后的结果仍需谨慎。ICC患者的中位无病生存期为26个月，这些患者的复发率高达62.2%。目前所有晚期ICC患者的标准治疗是吉西他滨和顺铂的全身化疗。然而，这种化疗方案的生存益处有限，中位OS持续时间<1年。近年来，一些研究尝试在化疗中加入紫杉醇(PTX);然而，需要更多的证据来确定它是否对ICC患者有益。此外，ICC的化学耐药是一个广泛关注的问题，它与独特的细胞内分子机制和明显的细胞外环境耐药密切相关。因此，迫切需要开发新的治疗策略来延长ICC患者的生存期。众所周知，与HCC不同，ICC通常表现出过度的纤维化反应，其特征是以肌成纤维细胞为主要细胞成分的致密肿瘤基质。肝肿瘤微环境中的肌成纤维细胞主要来源于被转化生长因子- β 1 (TGFB1)激活的肝星状细胞(hsc)。活化的hsc可分泌大量胶原蛋白和基质蛋白，促进蛋白质交联沉积和基质过度纤维化。这在肿瘤周围形成了一个致密的物理屏障，阻碍了药物的渗透;此外，它还会压迫血管，导致血管塌陷，使药物递送更加困难。此外，与ICC细胞快速进展和化疗耐药相关的复杂分子机制也解释了ICC治疗具有挑战性的原因。因此，探索具有细胞内和细胞外双重作用的靶向治疗方法，有效地减少ICC细胞的纤维化，抑制ICC细胞的恶性行为，是ICC治疗的新策略。近年来，纳米医学的出现极大地丰富了癌症治疗的手段。纳米颗粒可以包封化疗药物和治疗性小干扰RNA (sirna)。通过个性化的设计和合成，它们可以在肿瘤中积累，实现化疗药物的高效传递和对靶基因的有效干扰。鉴于ICC的特点，研究人员尝试开发一种纳米系统，不仅可以减少ICC纤维化，还可以抑制ICC的恶性行为，从而在细胞外和细胞内水平上实现ICC的有效治疗。研究过程 02 在本研究中，考虑到ICC的特点和circRNA具有细胞内和细胞外作用的发现，研究人员探索了特洛伊木马纳米治疗策略。首先，研究人员通过装载si-cPKM和紫杉醇这两个“先锋战士”，合成了叶酸共轭纳米系统作为特洛伊木马。利用纳米粒子的高穿透性和靶向性，该纳米系统安全有效地将其带入固体ICC肿瘤，如特洛伊城。然后，通过ICC类器官模型和多种小鼠ICC肿瘤模型，研究人员证明了si-cPKM联合紫杉醇不仅可以内部杀死ICC，还可以减少ICC肿瘤间质纤维化，增加微血管开放，从而为药物治疗打开大门。最后，外部主要力量(external main force, GC)可以通过打开的大门涌入ICC，从而达到显著的治疗效果，提高ICC小鼠模型的存活率。该策略首次通过在ICC中共载siRNA和紫杉醇的纳米系统实现了肿瘤对紫杉醇的有效敏化;它也是第一个通过内部和外部协同增强实现有效治疗ICC。siRNA/PTX共载纳米颗粒的抗肿瘤作用 03 为了探索siRNA/PTX共载纳米颗粒对ICC肿瘤的潜在治疗作用，研究人员构建了一个ICC类器官。研究人员发现si-cPKM-FA-LNPs抑制了类器官的生长，si-NC/PTX- fa - lnps的效果略好于游离PTX处理。si-cPKM/PTX-FA-LNP处理表现出更明显的抑制作用。为了进一步验证siRNA/PTX-FA-LNPs的抗肿瘤作用，研究人员利用稳定过表达cPKM的hcc -9810细胞建立了小鼠体内ICC肿瘤模型。皮下异种移植物模型的结果与类器官模型相似。RNA-FISH实验证实，si-cPKM- fa - lnps和si-cPKM/PTX-FA-LNPs有效地沉默了异种移植物中的cPKM。免疫组化染色显示，si-cPKM- fa - lnps和si-cPKM/PTX-FA-LNPs可显著降低STMN1和TGFB1的表达及AKT磷酸化。与对照组相比，si-cPKM- fa - lnp组ki -67阳性细胞数量减少，si-cPKM/PTX-FA-LNP组减少更为明显。接下来，研究人员对LNPs的生物安全性进行了评价。各组小鼠体重无明显差异，心、肝、脾、肺、肾等主要脏器未见组织病理学异常。研究人员未观察到血液生化参数如ALT、AST、BUN和CREA的显著变化。这些结果表明纳米颗粒没有明显的副作用，可以作为一种安全的药物进一步在体内应用。siRNA和PTX共载纳米颗粒的抗肿瘤作用研究结论 04 综上所述，研究结果表明，cPKM通过促进STMN1和TGFB1的表达以及引起造血干细胞的异常激活、加剧纤维化并最终导致血管塌陷，从而促进ICC的生长、转移和对紫杉醇的耐药性。针对cPKM-STMN1 /TGFB1轴的特洛伊木马纳米疗法是一种很有前景的ICC治疗新策略。参考资料：https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/advs.202303814识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入生物制品微信群！请注明：姓名+研究方向！版权声明本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。