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▲8月03-04日 2023CMC-China大会 · 限时免费报名中我们在做药物的分析检测时，有时候发现样品的检测结果不重复，特别是有关物质检测中杂质的检出量较大时，现象更明显，杂质忽大忽小，没规律，在排除误差（如仪器误差、人为误差、方法误差）外，还有一个原因，就是样品本身不稳定，杂质升高或者降解了。出现样品不稳定的原因有很多种（我在这里说的不稳定，是指在样品的正常的检测过程中的不稳定，不包括影响因素和强制降解的杂质，因为影响因素和强制降解是在非正常的条件下进行的试验，不属于正常检测样品的范畴），如何在复杂的种种不稳定因素中快速找到“靶点”并进行解决，现进行如下解析。一、寻找不稳定的因素样品不稳定，某些情况下是对某特定因素不稳定，当我们接到一个新的项目的时候，在前期文献的调研过程中，能发现一些端倪。譬如，从样品的说明书中找线索。如果药品说明书上的贮藏条件显示“遮光，密封保存”表明本品对光比较敏感；说明书上显示“本品在冷处2~8度贮藏”表明本品对温度比较敏感，不耐高温；说明书上显示“本品需密封保存”表明本品对湿度比较敏感。有时候还可以从各国药典的检测方法中找线索，如“称取本品，置棕色量瓶中……”，暗示本品对光比较敏感，又譬如“取本品，置冰水中超声”，暗示本品对温度比较敏感，在常温或者高温下不稳定，“取本品，研磨后立即检测”，暗示本品可能有引湿性，当初次接触到这些信息的时候，脑海中对本品大致有个宏观的了解，在开发方法的时候，就会有针对性的进行研究。二、确定不稳定因素由于样品对某个特定因素的不稳定，可能引申出在实际的样品的检测的过程中，样品本身的不稳定，这就提到我们前面说的样品的检测结果不重复，忽大忽小，没规律，如何快速判断样品是否稳定，大家一般想到的是做溶液的稳定性，按照常规操作，配制一份样品，于不同的时间点进针，然后各个时间点所得的数据和0小时进行对比，通过检测样品的变化率来判断样品是否稳定。在这里需要特别强调的是，仅通过测供试品的稳定性是不够的，还需要测加标（100%加标和50%加标）溶液的稳定性，我们以甲钴胺的溶液稳定性进行对比研究。供试品溶液的配制：取甲钴胺原料约20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加溶剂适量超声使溶解，并用溶剂稀释至刻度。分别于不同的时间点进样检测，测得结果见下表：单纯从以上结果来看，甲钴胺及降解杂质羟钴胺的检出量的变化在±0.01%范围内波动，认为溶液在24小时内是比较稳定的，但是这个数据能证明本品比较稳定吗？看另个例子。100%加标供试品溶液的配制：取甲钴胺原料约20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加溶剂适量超声使溶解，加杂质贮备液1ml（取羟钴胺杂质约1mg置10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度），用溶剂稀释至刻度。测得结果见下表:从这个例子，可以得出完全相反的结论，甲钴胺在1小时时，峰面积的变化率超过20%，已经不稳定。为什么同是做稳定性，得出相反的结论呢？主要的原因是供试品溶液中甲钴胺的杂质检出量比价小，在杂质很小的检出量的情况下，杂质量变化非常小，给人一种假象。但是如果考察100%加标溶液或者50%加标溶液的稳定性的话，样品的稳定性能很直观表现出来，更能反映出样品的稳定的情况。因此，我们在考察样品的稳定性的时候，不仅需要考察样品的稳定性，还一定要考察100%加标供试品溶液或者50%加标溶液的稳定性。三、解决不稳定因素确定样品溶液不稳定了，就要去解决问题，我一般从以下4个方面入手。1.降低进样室温度，原因很简单，降低进样室的稳定，能够减缓样品的稳定性。举例如下：从以上数据上看出，在室温（进样室稳定25℃）条件下，在3小时下，供试品溶液中杂质B峰面积变化率为23.15%，至12小时时，杂质B变化率快速增长为56.88%，证明本品在常温条件下极不稳定。因此，将进样室的温度调整为4℃，进一步考察本品溶液中的稳定性。从以上数据上看出，降低进样室稳度为4℃，放置48h内，杂质B峰面积的最大变化率为7.94%，小于20%，认为供试品溶液在4℃进样室放置47小时是比较稳定的，这样能保证在检测周期内，样品是稳定的。需要在这里说明的是，只是延缓了样品的稳定性，在检测周期内样品是稳定的，不能阻止杂质的降解。2.优化溶剂盐酸莫西沙星氯化钠滴眼液的有关物质的测定，配置后的溶液在室温条件下不稳定，降低进样室的稳定，效果也不很理想，为了提高工作效率，溶剂中增加稳定剂。通过查找各种文献，发现欧洲药典原料药检测方法中，溶剂中增加了无水亚硫酸钠，无水亚硫酸钠的作用是保护对氧敏感的杂质，实际上起到一个保护的作用，因此，我们可以借鉴原料的溶剂的方法，在制剂的溶剂中增加无水亚硫酸钠，其他组分保持不变。最起码能在24小时，在整个的检测周期内，保证样品是稳定的。2.优化配置方式我们在做软膏制剂的时候，由于基质的存在样品往往比较黏稠，这样导致样品不易溶解，当样品不稳定的时候，给分析检测带来一定的难度，我们可以借鉴其他软膏的溶解方式，譬如， 降低溶液浓度，相当于减少基质的称样量，减缓基质的干扰，对于对温度比较敏感的制剂，可以在超声仪中加入冰块，冰浴超声，虽然降低温度，很大可能会导致溶解的速度更慢，但是由于保证了较低的温度，会增加对温度敏感的杂质的稳定性。3.改变环境对于对光照比较敏感的样品，常规的方法是用棕色瓶配置样品，将配置好多样品溶液至于避光的进样室放置，或者装上有遮光效果的窗帘，或者将分析室的白炽灯换为比较柔和的红灯。4.临用新制 就是现配现进。当样品本身比较特殊，各个杂质在溶剂中不稳定，以上种种措施均无效的时候，往往采用这种方法。需要说明的是临用新制的劳动成本太高，从仪器的使用和人员配置和工作效率来讲，成本也大，到了万不得已的情况下，选此下策。在写这篇文章之前，我特意翻了一下中国药典2020年版，好家伙，品种还真不少，如马来酸氟伏沙明及片、贝诺酯及片、去羟肌苷及制剂，头孢他啶……等等，有几十个品种之多，我相信随着科技的发展，随着技术的进步，人类一定有能力突破这道大难关。参考文献［1］2020年版《中国药典》二部逐月老师更多作品：干货 | 容量分析方法的开发验证及案例分析干货 | 分析方法验证中耐用性验证的剖析