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项与 阿达木单抗生物类似药 (华兰基因工程有限公司) 相关的临床试验 / Active, not recruiting临床3期 多中心、随机、双盲、平行对照HL01与原研药修美乐在中重度活动性类风湿关节炎患者中疗效和安全性的Ⅲ期研究
重组抗人肿瘤坏死因子(TNF-α)单抗注射液(HL01)与原研药阿达木单抗注射液(修美乐®)在中重度活动性类风湿关节炎患者中疗效和安全性的Ⅲ期临床研究
在中国健康男性受试者中比较HL01与修美乐单次皮下注射给药的生物等效性和安全性的临床研究
在中国健康男性受试者中比较重组人抗肿瘤坏死因子TNF-α单克隆抗体注射液(HL01)与原研药阿达木单抗注射液(修美乐)单次皮下注射给药的生物等效性和安全性的临床研究。
100 项与 阿达木单抗生物类似药 (华兰基因工程有限公司) 相关的临床结果
100 项与 阿达木单抗生物类似药 (华兰基因工程有限公司) 相关的转化医学
100 项与 阿达木单抗生物类似药 (华兰基因工程有限公司) 相关的专利(医药)
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项与 阿达木单抗生物类似药 (华兰基因工程有限公司) 相关的新闻(医药)人甲状腺鳞癌细胞系SW579,作为研究甲状腺癌特别是鳞状细胞癌的重要工具,其复苏形式供应的科学性和技术性,直接关系到后续研究的质量和可靠性。本文将围绕SW579细胞的复苏形式供应,从细胞生物学基础、复苏技术流程、质量控制标准、应用场景及未来发展趋势五个维度展开深入探讨,旨在为相关研究人员提供全面、系统的参考。
一、细胞生物学基础:SW579细胞的特性与意义
1.1 甲状腺鳞癌的病理特征
甲状腺癌是内分泌系统最常见的恶性肿瘤之一,其中鳞状细胞癌虽然占比不足1%,但因其侵袭性强、预后差而备受关注。SW579细胞系源自甲状腺鳞癌患者的原发肿瘤,保留了该亚型细胞的典型特征,如角化珠形成、细胞间桥连接等鳞状分化标志,为研究甲状腺鳞癌的分子机制提供了理想的体外模型。
1.2 SW579细胞的生物学特性
SW579细胞具有以下显著生物学特性:
形态特征:呈多角形或梭形,细胞质丰富,可见明显角化现象。
生长特性:贴壁依赖性生长,倍增时间约24-48小时,在含10%胎牛血清的DMEM培养基中生长良好。
遗传稳定性:经过多代传代后,仍保持稳定的遗传背景和表型特征。
功能特性:表达甲状腺特异性转录因子(如TTF-1、PAX8),同时具有鳞状细胞癌标志物(如p63、CK5/6)的阳性表达。
这些特性使得SW579细胞成为研究甲状腺鳞癌发病机制、转移潜力及药物反应的理想模型。
二、复苏技术流程:从冻存到复苏的精准操作
2.1 冻存前的准备
2.1.1 细胞状态评估
在冻存前,需对SW579细胞进行全面的状态评估,包括:
细胞活力检测:通过台盼蓝染色法,确保细胞活力≥95%。
支原体检测:采用PCR法或培养法,排除支原体污染。
遗传稳定性验证:通过STR分型技术,确认细胞身份与原始样本一致。
2.1.2 冻存液配制
冻存液通常由基础培养基(如DMEM)、胎牛血清(FBS)和冷冻保护剂(如DMSO)按比例配制而成。对于SW579细胞,推荐使用含10%FBS和10%DMSO的冻存液,以确保细胞在低温下的存活率。
2.2 冻存操作
2.2.1 细胞收集
将处于对数生长期的SW579细胞用胰酶消化后,离心收集细胞沉淀,用预冷的冻存液重悬,调整细胞密度至1×10⁶ cells/mL。
2.2.2 冻存管标记
在冻存管上清晰标注细胞名称、代次、冻存日期、操作者等信息,以避免混淆。
2.2.3 梯度降温
将冻存管置于程序降温盒中,以每分钟1℃的速度从室温降至-80℃,随后转入液氮罐中长期保存。这一过程可有效减少冰晶形成对细胞的损伤。
2.3 复苏操作
2.3.1 快速解冻
从液氮罐中取出冻存管,立即放入37℃水浴中,轻轻摇晃使内容物在1分钟内完全融化。此步骤需迅速完成,以避免DMSO对细胞的毒性作用。
2.3.2 细胞稀释
将融化的细胞悬液缓慢加入预温的完全培养基中,轻轻混匀,使DMSO浓度降至1%以下。这一步骤可逐步稀释DMSO,减少其对细胞的伤害。
2.3.3 离心与重悬
将稀释后的细胞悬液离心(1000 rpm,5分钟),弃上清,用新鲜培养基重悬细胞,调整细胞密度至适当浓度后接种于培养皿中。
2.3.4 培养与观察
将接种后的细胞置于37℃、5% CO₂的恒温培养箱中培养,定期观察细胞贴壁和生长情况。通常,SW579细胞在复苏后24小时内可开始贴壁,48小时后进入对数生长期。
三、质量控制标准:确保复苏细胞的质量与可靠性
3.1 细胞活力检测
通过台盼蓝染色法,在复苏后24小时内检测细胞活力,要求≥90%。若细胞活力低于此标准,需检查冻存液配制、冻存/复苏操作过程是否存在问题。
3.2 支原体检测
采用PCR法或培养法,在复苏后72小时内检测细胞是否被支原体污染。若检测结果为阳性,需立即处理被污染的细胞,避免影响后续实验。
3.3 遗传稳定性验证
通过STR分型技术,在复苏后1个月内验证细胞的遗传背景是否与原始样本一致。若发现遗传变异,需评估变异对细胞功能的影响,必要时重新冻存或更换细胞系。
3.4 功能特性验证
通过免疫组化或Western blot等方法,检测细胞是否表达甲状腺鳞癌相关标志物(如p63、CK5/6),以确认细胞的功能特性未发生改变。
四、应用场景:SW579细胞在生物医学研究中的价值
4.1 疾病机制研究
SW579细胞可用于研究甲状腺鳞癌的发病机制,如基因突变、信号通路异常等。通过基因编辑技术(如CRISPR-Cas9),可构建特定基因敲除或过表达的细胞模型,深入探究基因在肿瘤发生发展中的作用。
4.2 药物筛选与评价
SW579细胞可作为药物筛选的平台,用于评价候选药物的抗肿瘤活性。通过MTT法、流式细胞术等方法,可检测药物对细胞增殖、凋亡、周期的影响,为药物研发提供有力支持。
4.3 基因功能研究
通过转染或病毒感染技术,可在SW579细胞中过表达或沉默特定基因,研究基因对细胞功能的影响。例如,可研究特定基因在细胞迁移、侵袭中的作用,为开发靶向治疗策略提供理论依据。
4.4 免疫治疗研究
SW579细胞可作为免疫治疗的模型,研究免疫检查点抑制剂(如PD-1/PD-L1抑制剂)对肿瘤细胞的影响。通过流式细胞术检测细胞表面免疫检查点分子的表达,可评估免疫治疗的有效性。
五、未来发展趋势:技术创新与挑战
5.1 冷冻保护剂的优化
目前,DMSO作为常用的冷冻保护剂,虽然效果显著,但存在一定的细胞毒性。未来,可探索新型冷冻保护剂(如海藻糖、聚乙二醇等),以降低对细胞的损伤,提高复苏效率。
5.2 复苏技术的自动化
随着生物技术的发展,复苏技术的自动化将成为可能。通过开发自动化的复苏设备,可实现细胞复苏的标准化操作,减少人为误差,提高复苏效率。
5.3 细胞培养技术的创新
传统的贴壁培养方式虽然简单,但存在细胞生长不均、传代频繁等问题。未来,可探索三维培养、微流控技术等新型培养方式,更真实地模拟体内环境,提高细胞的功能性和稳定性。
5.4 质量控制标准的提升
随着研究的深入,对细胞质量的要求将越来越高。未来,需建立更加严格的质量控制标准,包括细胞活力、遗传稳定性、功能特性等多个方面,以确保细胞的质量和可靠性。
"SW579 Cells人甲状腺鳞癌细胞复苏形式供应
SW579 Cells人甲状腺鳞癌细胞复苏形式供应英文别名::SW-579; SW 579
背景信息:SW579 Cells人甲状腺鳞癌细胞复苏形式供应在裸鼠中成瘤(产生三级恶性纺锤状巨细胞瘤)。
细胞来源:主要来源于ATCC、ECACC、DSMZ等国际知名细胞库。国内供应商(如南昌全亮科技有限公司(QLCells)等)提供复苏或冻存形式的细胞。
bEnd.3-RFP Cells小鼠脑微血管内皮细胞传代性好|STR图谱细胞传代:传代时,应使用适量的胰蛋白酶溶液进行消化,并在显微镜下观察细胞消化情况。消化下来的细胞容易成团,需要吹打吹散。传代后,应确保细胞均匀分布在培养瓶或培养皿中。
消化条件:室温下用胰酶消化1-3分钟。
LoVo Cells人结肠癌细胞传代性好|STR图谱细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。一般使用冻存液进行冻存,并置于液氮中储存。
来源说明:SW579 Cells人甲状腺鳞癌细胞复苏形式供应主要来源ATCC、ECACC、DSMZ、RCB等细胞库
NCI-H446-luc Cells人小细胞肺癌细胞传代性好|STR图谱换液周期:SW579 Cells人甲状腺鳞癌细胞复苏形式供应每周2-3次
空泡现象:在密集培养时,细胞中可见巨大的空泡,这是细胞的正常特性,无需担心。
143B Cells人骨肉瘤细胞传代性好|STR图谱细胞状态:传代和消化过程中,应密切关注细胞状态,避免过度消化或机械损伤导致细胞活性下降。
生长特性:SW579 Cells人甲状腺鳞癌细胞复苏形式供应贴壁生长
PY8119-GFP Cells小鼠恶性乳腺癌细胞传代性好|STR图谱血清比例:使用10%-20%的血清浓度有助于优化SW579 Cells人甲状腺鳞癌细胞复苏形式供应实验条件,提高实验的重复性和稳定性。这一浓度范围经过多年实验和实践的验证,被认为是较为适宜的选择。
产品包装:复苏发货:SW579 Cells人甲状腺鳞癌细胞复苏形式供应T25培养瓶(一瓶)或冻存发货:1ml冻存管(两支)
HIEC-6 Cells人肠上皮细胞传代性好|STR图谱形态特性:SW579 Cells人甲状腺鳞癌细胞复苏形式供应上皮细胞样
培养条件:37°C、5%CO₂、饱和湿度环境,使用含10%-20%FBS的基础培养基。
HuH-1 Cells人肝癌细胞传代性好|STR图谱物种来源:SW579 Cells人甲状腺鳞癌细胞复苏形式供应来源于人源、鼠源等其它物种来源
消化传代:使用0.25%胰酶-EDTA溶液,37°C孵育1-2分钟,轻拍培养瓶促进细胞脱落。(悬浮细胞可省略这步操作)
Capan-2 Cells人胰腺癌细胞传代性好|STR图谱细胞接收流程:收到细胞后,应首先观察细胞状态,然后进行75%酒精消毒处理。将细胞置于37℃培养箱中放置2-4小时以稳定SW579 Cells人甲状腺鳞癌细胞复苏形式供应状态。当细胞密度达到80%-90%时,即可进行首次传代培养。传代比例:1:2-1:4(SW579 Cells人甲状腺鳞癌细胞复苏形式供应首次传代建议1:2)
细胞复苏:复苏细胞时,应快速将冻存管从液氮中取出并置于37℃水浴中解冻,然后转移到含新鲜培养基的无菌管中并吹打混匀。整个复苏过程应尽可能在5-10分钟内完成,以确保细胞的高存活率。
Colo-16 Cells人皮肤鳞状细胞癌细胞传代性好|STR图谱污染检测:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性。
污染防控:严格无菌操作,定期检测支原体污染,必要时使用双抗预防细菌污染。
BT-474-Luc Cells人乳腺导管癌细胞传代性好|STR图谱培养观察:定期观察SW579 Cells人甲状腺鳞癌细胞复苏形式供应生长状态,注意培养基的pH值变化和细胞密度,及时换液和传代。NCI-H2110 Cells人非小细胞肺癌细胞专业复苏技术|STR图谱生物安全等级:1级。
操作规范:在细胞培养和处理过程中,需严格遵守无菌操作规范,以避免细胞污染和交叉污染。
CCRF CEM细胞来源清晰;背景说明:G.E. Foley 等人建立了类淋巴母细胞细胞株CCRF-CEM。 细胞是1964年11月从一位四岁白人女性急性淋巴细胞白血病患者的外周血白血球衣中得到。此细胞系从香港收集而来。;传代方法:1:2传代。3天内可长满。;生长特性:悬浮生长;形态特性:淋巴母细胞样;相关产品有:ARO81-1细胞传代率高、MKN 7细胞传代率高、2PK-3细胞
SKRC 39细胞来源清晰;背景说明:详见相关文献介绍;传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;生长特性:贴壁或悬浮,详见产品说明书部分;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:JM1细胞传代率高、HOCF细胞传代率高、NCI H69细胞
HCT_116细胞来源清晰;背景说明:结肠腺癌;男性;传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;生长特性:贴壁;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:RT4-D6P2T细胞传代率高、Hs-675-T细胞传代率高、WB F344细胞
hFOB1.19 Cells人成骨细胞传代性好|STR图谱┈全┈亮┈科┈技┈TEL┈:┈①┈⑤┈②┈七┈零┈九┈零┈⑥┈⑥┈⑨┈⑥┈SCC-4 Cells人舌鳞状细胞癌细胞传代性好|STR图谱
HepG2.2.15-LUC Cells人肝细胞传代性好|STR图谱
CTLL-2 Cells小鼠T细胞传代性好|STR图谱
PLC/PRF/5 Cells人肝癌细胞传代性好|STR图谱
GLI-H7细胞新批次复苏|STR图谱
M21细胞来源清晰;背景说明:黑色素瘤;女性;传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;生长特性:贴壁;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:NCIH1385细胞传代率高、RKO细胞传代率高、SKCO 1细胞
HUT-28细胞来源清晰;背景说明:详见相关文献介绍;传代方法:1:3-1:6传代,每周换液2-3次;生长特性:贴壁生长;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:P-815细胞传代率高、Hut292细胞传代率高、NMCG1细胞
HCC1500细胞来源清晰;背景说明:详见相关文献介绍;传代方法:1:2-1:3传代;每3-5天换液;生长特性:贴壁生长;形态特性:上皮样;相关产品有:OEC33细胞传代率高、HTR-8/SV neo细胞传代率高、H1417细胞
OVCAR-3 Cells人卵巢癌细胞传代性好|STR图谱
C3H/10T1/2 clone 8细胞来源清晰;背景说明:详见相关文献介绍;传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;生长特性:贴壁或悬浮,详见产品说明书部分;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:TE 32细胞传代率高、PIG1细胞传代率高、RPMI-8402细胞
C-Lu65细胞来源清晰;背景说明:详见相关文献介绍;传代方法:1:10传代;生长特性:贴壁生长;形态特性:成纤维细胞;相关产品有:MOLP-2细胞传代率高、RCC10细胞传代率高、NCIH2009细胞
MCF-12F细胞来源清晰;背景说明:乳腺上皮细胞;女性;传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;生长特性:贴壁;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:COLO-741细胞传代率高、FHL 124细胞传代率高、GRSL细胞
KHM-5M Cells人甲状腺癌细胞传代性好|STR图谱
SK-MEL-2+luc Cells人皮肤黑色素瘤细胞传代性好|STR图谱
JROECL 19细胞来源清晰;背景说明:详见相关文献介绍;传代方法:1:2传代;生长特性:贴壁生长;形态特性:上皮样;相关产品有:BI-Mel细胞传代率高、KRC Y细胞传代率高、HBSMC细胞
639V细胞来源清晰;背景说明:膀胱癌;男性;传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;生长特性:贴壁;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:Hs695T细胞传代率高、OPM2细胞传代率高、SUDHL-4细胞
Scott and White No. 13细胞来源清晰;背景说明:详见相关文献介绍;传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;生长特性:贴壁或悬浮,详见产品说明书部分;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:NCI-H735细胞传代率高、MCF-7ADR细胞传代率高、NCIH740细胞
LNCaP C4-2B细胞来源清晰;背景说明:前列腺癌;左锁骨上淋巴结转移;男性;传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;生长特性:贴壁;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:EB1细胞传代率高、HCE细胞传代率高、MAD109细胞
SK-MEL-25细胞新批次复苏|STR图谱
PC-12+GFP Cells大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞传代性好|STR图谱
BHK-21 Cells仓鼠肾成纤维细胞传代性好|STR图谱
A-875 Cells人黑色素瘤细胞传代性好|STR图谱
SU-DHL-1 Cells人B细胞淋巴瘤细胞传代性好|STR图谱
HuT 102细胞来源清晰;背景说明:详见相关文献介绍;传代方法:1:3传代,2-3天传一代;生长特性:悬浮生长 ;形态特性:圆形;淋巴母细胞样;相关产品有:CAKI 1细胞传代率高、GM15452细胞传代率高、SW954细胞
CHO K1细胞来源清晰;背景说明:1957年,PuckTT从成年中国仓鼠卵巢的活检组织建立了CHO细胞,CHO-K1是CHO的一个亚克隆。CHO-K1的生长需要脯酸。;传代方法:1:2传代;生长特性:贴壁生长;形态特性:上皮样;相关产品有:CAL 78细胞传代率高、NCIH1623细胞传代率高、NCI-H82细胞
MC3T3-L1细胞来源清晰;背景说明:详见相关文献介绍;传代方法:1:2传代;生长特性:贴壁生长;形态特性:成纤维细胞样;相关产品有:C-Li-7细胞传代率高、BV2细胞传代率高、MES-SA-Dx5细胞
NCC-IT Cells人畸胎癌细胞传代性好|STR图谱
2172F4细胞新批次复苏|STR图谱
CT26细胞来源清晰;背景说明:详见相关文献介绍;传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;生长特性:贴壁或悬浮,详见产品说明书部分;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:H-EMC-SS细胞传代率高、GM03569B细胞传代率高、H-526细胞
JKT1细胞来源清晰;背景说明:精原瘤;男性;传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;生长特性:贴壁;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:Hi-5细胞传代率高、PC3M-1E8细胞传代率高、CAL 120细胞
BA/F3细胞来源清晰;背景说明:详见相关文献介绍;传代方法:1:3传代;3-4天1次。;生长特性:悬浮生长;形态特性:圆形;相关产品有:DSL-6A-C1细胞传代率高、HEP-3B2细胞传代率高、MDA-MB468细胞
A2780+GFP Cells人卵巢癌细胞传代性好|STR图谱
SU-DHL-4 Cells人弥漫性组织淋巴瘤细胞传代性好|STR图谱
LLC-RFP Cells小鼠肺癌细胞传代性好|STR图谱
Panc02细胞来源清晰;背景说明:详见相关文献介绍;传代方法:1:2传代;生长特性:贴壁生长 ;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:P815细胞传代率高、KTA-7细胞传代率高、CHOS细胞
C22细胞来源清晰;背景说明:肺;上皮 Cells;传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;生长特性:贴壁;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:OVCAR 420细胞传代率高、Ca759细胞传代率高、NCIH1417细胞
Potorous tridactylus Kidney 2细胞来源清晰;背景说明:详见相关文献介绍;传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;生长特性:贴壁或悬浮,详见产品说明书部分;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:KYSE30细胞传代率高、RCC 7860细胞传代率高、Farage细胞
ARO细胞来源清晰;背景说明:甲状腺癌;女性;传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;生长特性:贴壁;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:2PK3细胞传代率高、MOLM-14细胞传代率高、A375.S2细胞
RD Cells人恶性胚胎横纹肌瘤细胞传代性好|STR图谱
SK-MEL-2 Cells人皮肤黑色素瘤细胞传代性好|STR图谱
MS751 Cells人肾透明细胞腺癌细胞传代性好|STR图谱
NCI-HUT-69细胞来源清晰;背景说明:详见相关文献介绍;传代方法:1:2—1:4传代,每周换液2次;生长特性:悬浮生长,聚团;形态特性:聚团悬浮;相关产品有:SKUT1细胞传代率高、Karpas 299细胞传代率高、H596细胞
GM15916细胞新批次复苏|STR图谱
HAP1 GPR137 (-) 1细胞新批次复苏|STR图谱
GM-346细胞来源清晰;背景说明:皮下结缔组织;自发永生;雄性;C3H/An;传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;生长特性:贴壁;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:OVHM细胞传代率高、KM H-2细胞传代率高、NBLS细胞
NCI-H1693 Cells人肺腺癌细胞传代性好|STR图谱
LN-229+luc Cells人胶质瘤细胞传代性好|STR图谱
RAW264.7-GFP Cells小鼠单核巨噬细胞白血病细胞传代性好|STR图谱
CMT93 Cells小鼠直肠多倍体癌细胞传代性好|STR图谱
NCI-H920细胞来源清晰;背景说明:详见相关文献介绍;传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;生长特性:贴壁或悬浮,详见产品说明书部分;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:HLEC-B3细胞传代率高、Gingival carcinoma Neck Metastasis细胞传代率高、CORL279细胞
SAS细胞来源清晰;背景说明:详见相关文献介绍;传代方法:10^5 cells/60mm dish;生长特性:贴壁生长;形态特性:上皮样;相关产品有:GA-10-Clone-4细胞传代率高、NPA细胞传代率高、H-650细胞
H-841细胞来源清晰;背景说明:详见相关文献介绍;传代方法:1:3—1:5传代,;生长特性:混合型生长;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:SUM 102PT细胞传代率高、MES-SA细胞传代率高、CEM/0细胞
RPMI 8402细胞来源清晰;背景说明:急性T淋巴细胞白血病;女性;传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;生长特性:悬浮;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:Hs-611-T细胞传代率高、AML-2细胞传代率高、HT-1197细胞
HL-60细胞来源清晰;背景说明:该细胞由CollinsSJ从一位患有急性早幼粒细胞性白血病的36岁白人女性的外周血中分离建立;可自发分化,或在盐、次黄嘌呤、佛波醇肉豆蔻酸(PMA,TPA)、DMSO(1%to1.5%)、D和视黄酸的刺激下发生分化;PMA刺激后可分泌TNF-α。该细胞具有吞噬活性和趋化反应,癌基因myc阳性,表达补体受体和FcR。;传代方法:维持细胞浓度在1×105-1×106/ml,每2-3天换液1次。;生长特性:悬浮生长;形态特性:髓母细胞样;相关产品有:Panc-813细胞传代率高、CX-1细胞传代率高、KNS62细胞
H4细胞来源清晰;背景说明:H4细胞系建系于1973年。它衍生于一个患神经胶质瘤的37岁病人的脑组织。该细胞的致瘤特性己经被屏蔽,细胞接种动物一般不产生肿瘤结节。该细胞具有修复MNNG损伤5型腺病毒的能力。;传代方法:1:3传代,每周换液2-3次。;生长特性:贴壁生长;形态特性:上皮样;相关产品有:M1细胞传代率高、RPMI-2650细胞传代率高、SNU761细胞
B16 F10细胞来源清晰;背景说明:B16-F10是B16-F0的亚系。;传代方法:消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。;生长特性:贴壁生长;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:A-704细胞传代率高、253JBV细胞传代率高、LNCaP subline C4-2细胞
5637-GFP Cells人膀胱癌细胞传代性好|STR图谱
hRMECs Cells人视网膜微血管内皮细胞传代性好|STR图谱
MKN7 Cells人胃癌细胞传代性好|STR图谱
MDA-MB-361 Cells人乳腺癌细胞传代性好|STR图谱
HOF细胞新批次复苏|STR图谱
JAR-Smad3/c细胞新批次复苏|STR图谱
MCH057细胞新批次复苏|STR图谱
ND19276细胞新批次复苏|STR图谱
PR00331细胞新批次复苏|STR图谱
HCT 116 HRAS KO细胞新批次复苏|STR图谱
WA-2细胞新批次复苏|STR图谱
HBC-9细胞新批次复苏|STR图谱
CAL-62 Cells人甲状腺癌细胞传代性好|STR图谱
MM.1R Cells人多发性骨髓瘤细胞传代性好|STR图谱
HCE-T Cells人角膜上皮细胞传代性好|STR图谱
H4-II-EC3细胞来源清晰;背景说明:在糖皮质激素、胰岛素或cAMP衍生物的诱导下可以产生酪酸基转移酶;可被逆转录病毒感染;可产生白蛋白、转铁蛋白、凝血酶原;在AxC大鼠中可以成瘤。;传代方法:1:2传代;生长特性:贴壁生长;形态特性:上皮样;相关产品有:SUM-190细胞传代率高、SKRC-20细胞传代率高、T241细胞
H-69细胞来源清晰;背景说明:详见相关文献介绍;传代方法:1:2—1:4传代,每周换液2次;生长特性:悬浮生长,聚团;形态特性:聚团悬浮;相关产品有:VK2 (E6/E7)细胞传代率高、E304细胞传代率高、NCI-H1048细胞
ketr 3细胞来源清晰;背景说明:详见相关文献介绍;传代方法:1:2传代;生长特性:贴壁生长 ;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:HTSMC细胞传代率高、Granta-519细胞传代率高、OVCAR 4细胞
Emory University-3细胞来源清晰;背景说明:B淋巴细胞白血病;男性;传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;生长特性:悬浮;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:NCI747细胞传代率高、CHP100细胞传代率高、Capan-2细胞
A875细胞来源清晰;背景说明:NGF受体阳性。;传代方法:1:3传代;3-4天1次。;生长特性:贴壁生长;形态特性:多角形;相关产品有:SNU182细胞传代率高、U2932细胞传代率高、H820细胞
LLC-MK2细胞来源清晰;背景说明:胚胎;肾;自发永生;传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;生长特性:贴壁;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:Primary Liver Carcinoma/Poliomyelitis Research Foundation/5细胞传代率高、PC3细胞传代率高、L-M (TK-)细胞
HEK-2细胞来源清晰;背景说明:详见相关文献介绍;传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;生长特性:贴壁或悬浮,详见产品说明书部分;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:HCC0366细胞传代率高、SUM-102细胞传代率高、Namalva细胞
Hep G2细胞来源清晰;背景说明:详见相关文献介绍;传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;生长特性:贴壁或悬浮,详见产品说明书部分;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:SKLU1细胞传代率高、NCI-H187细胞传代率高、C8166-CD4细胞
ZR7530细胞来源清晰;背景说明:ZR-75-30源自一位47岁女性黑人更年期侵入性导管癌患者的腹水。 细胞定性为人,非-HeLa,恶性乳房上皮癌起始。;传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;生长特性:贴壁;形态特性:上皮细胞样;相关产品有:Caco2-BBE细胞传代率高、293-F细胞传代率高、H-1092细胞
A375-S2细胞来源清晰;背景说明:详见相关文献介绍;传代方法:1:2传代;生长特性:贴壁生长;形态特性:上皮样;相关产品有:Roswell Park Memorial Institute 7666细胞传代率高、SU-DHL-16细胞传代率高、C8166细胞
A549 ATCC细胞来源清晰;背景说明:详见相关文献介绍;传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;生长特性:贴壁或悬浮,详见产品说明书部分;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:ECC1细胞传代率高、NCI-H2023细胞传代率高、NCIH2122细胞
NCIH64细胞来源清晰;背景说明:详见相关文献介绍;传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;生长特性:贴壁或悬浮,详见产品说明书部分;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:Colo-201细胞传代率高、HL-1细胞传代率高、HOP62细胞
KM H-2细胞来源清晰;背景说明:霍奇金淋巴瘤;男性;传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。;生长特性:悬浮;形态特性:详见产品说明书;相关产品有:NCI-H1838细胞传代率高、Kit 225细胞传代率高、AZ521细胞
C6细胞来源清晰;背景说明:胶质细胞株C6是由Benda等用N-nitrosomethylurea诱导的大鼠胶质瘤克隆,并经过一系列的体外培养和动物传代交替后建成的。 当细胞从低密度生长到满瓶时,S-100产量增加10倍。;传代方法:1:2传代;生长特性:贴壁生长;形态特性:上皮细胞样;相关产品有:NCIH1975细胞传代率高、GNM细胞传代率高、MUTZ-3细胞
PC-9 Cells人肺腺癌细胞传代性好|STR图谱
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A股上市药企华兰生物11月21日晚间公告,其参股公司华兰基因工程有限公司(下简称“华兰基因”)取得国家药品监督管理局签发的贝伐珠单抗注射液《药品注册证书》, 获批正式生产和销售,有望为华兰生物新增新的利润增长点。
公告显示,华兰基因此次获批的安贝优(贝伐珠单抗注射液)主要用于治疗晚期、转移性或复发性非小细胞肺癌,转移性结直肠癌,复发性胶质母细胞瘤,肝细胞癌,上皮性卵巢癌、输卵管癌或原发性腹膜癌,宫颈癌。
2023年,国内贝伐珠单抗注射液的总销售额约为107亿元,较2022年增长23.9%。
华兰基因成立于2013年,主要开展创新药和生物类似药的研发、生产。公司已先后有10个产品取得临床试验批件,其中阿达木单抗、曲妥珠单抗、利妥昔单抗、地舒单抗4个产品在Ⅲ期临床阶段、伊匹单抗、帕尼单抗2个产品在I期临床阶段、重组抗Claudin18.2全人源单克隆抗体注射液等3个产品正准备开展I期临床。
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点击上方的 行舟Drug ▲ 添加关注关于地舒单抗生物类似药相似性评价的思考来源《中国新药杂志》 2023年 第32卷第24期作者阚红金,韦薇国家药品监督管理局药品审评中心摘要随着地舒单抗原研药(ProliaⓇ/XgevaⓇ)专利到期及原研药在我国上市,国内生物医药企业按照生物类似药路径开发的地舒单抗生物类似药逐渐增多。本文梳理了地舒单抗原研药及生物类似药国内外注册与研发现状,分析了地舒单抗相似性评价中的挑战及技术要求,结合审评实践对地舒单抗生物类似药的药学评价中常见问题进行分析探讨,以期为此类生物类似药的药学开发与评价提供帮助。关键词地舒单抗; 生物类似药; 相似性评价_正文_近年来,国内生物类似药申报及获批的品种不断增多,早年批准临床试验的多个品种已逐步完成关键临床试验,准备或已申报上市。目前已有多个单抗类生物类似药获批上市,包括阿达木单抗、利妥昔单抗、贝伐珠单抗、曲妥珠单抗等,地舒单抗成为目前研发热度最高的生物类似药之一。地舒单抗目前主要有2个适应证,其一是用于肿瘤适应证如骨巨细胞瘤、多发性骨髓瘤等,其二是用于治疗骨折高风险的绝经后妇女的骨质疏松症及骨折高风险的男性骨质疏松症,不同适应证的用法用量和规格不同。地舒单抗注射液因具有大幅降低骨吸收的靶向作用机制和方便的给药方案(皮下注射,每6个月给药1次)而可潜在提高骨质疏松症治疗的有效性和依从性。目前国内已有2款地舒单抗(适应证: 骨折高风险的绝经后妇女骨质疏松症及骨折高风险的男性骨质疏松症)批准上市,10余家在临床研究阶段。本文在梳理地舒单抗原研品种、生物类似药注册及申报的基础上,结合药学审评经验及相关文献,对此类产品药学开发中的常见技术问题进行探讨。1地舒单抗及其生物类似药研发进展1.1 地舒单抗原研产品注册与工艺变更情况地舒单抗是由安进公司原研开发的一种全人源的IgG2型单克隆抗体,其作用机制为通过阻断NF-κB受体激活蛋白配体(RANKL)抑制破骨细胞的形成、功能和存活,从而降低骨重吸收以及增加骨皮质和骨松质的骨量和骨强度。地舒单抗最早于2010年首次上市,目前已在美国、欧洲、日本等多个国家或地区获准上市,包含2个规格,分别为120mg/1.7mL·瓶-1规格和60mg/1.0mL·支-1(预充式注射器,PFS)规格。国家药品监督管理局药品审评中心上市药品信息显示,在我国地舒单抗原研药于2018年纳入境外已上市临床急需新药名单,其中120mg/1.7mL·瓶-1规格于2019年5月首次在我国有条件批准上市,用于骨巨细胞瘤患者,商品名为安加维(Xgeva)。2020年11月增加“用于多发性骨髓瘤患者和实体肿瘤骨转移患者中骨相关事件的预防”的适应证; 60mg/1.0mL·支-1(预充式注射器)于2020年6月附条件批准,用于治疗骨折高风险的绝经后妇女的骨质疏松症,商品名为普罗力(Prolia)。地舒单抗原研产品自上市以来发生了多次工艺变更。根据欧洲药监机构公布的公众评估报告(European Public Assessment Report,EPAR)所披露的信息,地舒单抗2个规格自2010年上市以来至少进行了90次不同风险等级的变更,包括增加原液生产场地、变更检测方法及部分起始物料、包材供应商改变等。2016—2019年,原研药先后在美国FDA、欧洲EMA等官网更新了说明书,显示两规格先后在处方中增加了0.01%聚山梨酯20。根据药品再注册和补充申请等受理情况分析,地舒单抗原研药2个规格在我国上市后变更包括部分检测方法优化,暂未发现其关键原材料、生产场地、生产工艺等方面发生变更。地舒单抗首次进口我国的原研处方中包含聚山梨酯20,未见发生过处方变更。1.2 国内外地舒单抗生物类似药研发进展国内申报情况梳理: 目前齐鲁制药有限公司、江苏泰康生物医药有限公司、浙江海正药业股份有限公司、山东博安生物技术有限公司、上海津曼特生物科技有限公司、华兰基因工程有限公司、珠海市丽珠单抗生物技术有限公司等多个厂家开发的与原研药序列相同的地舒单抗先后获批临床,其中山东博安生物技术有限公司、江苏泰康生物医药有限公司的地舒单抗60mg/1.0mL·支-1(PFS)规格已获批上市,其质量研究符合与原研药相似性评价的技术要求,见表1。另外,在地舒单抗原研产品的基础上,研究者还进行了改造和优化。部分研究者[1]采用与原研地舒单抗相同的Fab区序列,但对重链铰链区氨基酸序列进行改构,以期增强产品稳定性; 或将地舒单抗的Fc末端从免疫球蛋白(Ig) G2替换为IgG4而开发[2],且进行点突变,以期提高抗体的均匀性和稳定性。以上品种目前正处于临床试验或注册上市审评阶段。国外申报情况梳理: 印度Reliance Life Sciences公司研发的R-TPR-045/DenosuRel于2022年2月1日获得印度药监局(CDSCO)批准,用于治疗骨转移和绝经期后骨质疏松; 诺华制药公司和山德士公司研发的GP-2411已完成Ⅲ期临床试验[3],2023年2月向美国FDA提交上市申请,用于治疗骨质疏松症和绝经期后骨质疏松; Samsung Bioepis公司的SB-16[4]、Celltrion公司的CT-P41、以色列梯瓦制药工业有限公司的TVB-009、Intas Biopharmaceuticals公司的M05BX04[5]、Mabxience Sa公司的地舒单抗生物类似药(Mabxience)、匈牙利吉瑞大药厂的RGB-14-P目前正处于Ⅲ期临床试验阶段,开发用于治疗绝经期后骨质疏松。而Cephalon公司研发的CEP-37251因多种原因已经于2010年11月中止了Ⅰ期临床研究。文章内容由凡默谷小编查阅文献选取,排版与编辑为原创。如转载,请尊重劳动成果,注明【来源:凡默谷公众号】。2地舒单抗相似性评价的挑战按照目前国内外相关指导原则要求,质量相似性研究是生物类似药评价的基础,是后续非临床、临床研究能否简化的前提条件。但是质量相似性研究并不是生物类似药对比研究的全部,特别是对于翻译后修饰比较复杂的生物制品,候选药与原研药的质量差异还需要结合体内研究的情况进行相似性的整体评价。对按照生物类似药开发的地舒单抗,国内生物类似药开发企业早期研发时,因原研药的可获性问题导致质量相似性研究、临床试验等均无法采用我国市场来源的原研药作为参照药进行研究,多采用国外市场来源的原研药进行比对,但随着研发进程的不断推进,逐步补充开展与我国市场来源原研药的对比研究,以满足相似性研究与评价的要求。地舒单抗原研药开发了2个规格分别对应2个不同适应证,在生产和质量研究方面,两规格处方、工艺、质量研究及相似性研究可能存在差异,研究过程中还需要给予关注。此外,因生物类似药的开发是以原研药的关键质量属性为目标,如何基于对有限批次的原研药表征数据定义“目标质量属性”或如何建立“相似性评价标准”是地舒单抗及其他生物类似药面临的相同问题[6]。对于按照3.4类申报的氨基酸序列与原研药一致的重组表达治疗类产品(如地舒单抗),为了准确判断且完整呈现其质量与原研药的异同,避免因质量差异引入临床使用风险,质量研究方面建议按照与生物类似药相似性研究相同的技术要求完成质量对比研究。3地舒单抗审评中常见问题探讨3.1 二硫键异构体地舒单抗原研药为IgG2分子,此类抗体通常以3种二硫键异构体形式存在(Ax型: 包含A1和A2,B型以及中间体形式A/B型)。据Wypych等[7]和Dillon等[8]报道,在体内各型别会逐渐转化(A型→B型)。研究显示,各型别的形成主要与细胞培养过程中抗体重链组合配对时会出现不同的二硫键连接形式有关,不同亚型二硫键的连接方式不同,可能会影响药物的生物学活性[8],但Guo等[9]报道称,部分抗体在IgG2-A和IgG2-B之间并未表现出活性差异。质量相似性研究中建议针对IgG2二硫键异构体进行必要的研究,结合研究结果说明候选药、参照药二硫键异构体各亚型含量、组成等的相似性,并建议分析各亚型可能对活性的影响。一般半胱氨酸/胱氨酸孵育样品后采用RP-HPLC,CEX-HPLC等方法分离、富集二硫键异构体,对其进行表征研究(如纯度),分析各亚型对活性的影响。3.2 高分子聚体据Moussa等[10]报道,抗体多聚体的存在可能影响药物的免疫原性,目前多采用SEC-HPLC方法及其他原理互补的方法监测单抗中高分子聚体的情况。地舒单抗质量研究中显示,其含有一定量的高分子聚体,因此建议对其进行定性和定量的研究。在收集聚体时,常采用强降解方式(如高温、紫外)生成高分子聚体进行研究,一般包括定性研究(分子量、翻译后修饰)、生物学活性和定量研究等。根据研究结果,聚体中可能含有二聚体、三聚体和四聚体3种组分,通常以二聚体为主。据Kijanka等[11]报道二聚体在动物实验中未显示出比单体更显著的免疫原性,但是有研究结果显示,聚体主要为抗体分子非共价结合而成,翻译后比例(如氧化、焦谷氨酸环化)与单体相比略有差异,生物学活性低于单体,提示候选药的研究中需要对高分子聚体进行定性和定量的研究。3.3 酸碱异构体地舒单抗原研药生产细胞株为CHO细胞,目前国内生物类似药开发通常采用CHO细胞株,但是可能使用不同的亚型。由于宿主细胞及生产工艺等的差异,候选药可能在电荷异构体分布上与原研药存在差异。据Zhao等[12]报道,电荷异构体与抗体的生产工艺密切相关,可能影响药物的体内功能活性和药动学(PK),因此鼓励研究者开展深入的研究,对候选药与原研参照药酸碱异构体进行定性和定量的研究,采用敏感、正交方法从多方面考察各酸碱异构体的分子量、纯度、翻译后修饰组成和体外生物学活性等,并结合体内作用分析其对体内的安全性、有效性、PK、药效学(PD)等的影响。研究中,一般采用IEC-HPLC,CEX-HPLC,iCIEF等方法开展酸碱变异体的研究,也可以平行采用羧肽酶B(CpB)酶切后样品进行CEX-HPLC分析。若CpB酶切后候选药与原研药之间仍然存在电荷异质性差异,需进一步结合定性、定量的质量研究、文献报道、非临床药效、PK等分析差异可能对体内作用带来的影响。考虑到酶切前样品更能直接反映样品的质量,建议选择非酶切法作为产品后续放行检测方法以便监测工艺稳健性。3.4 相似性研究3.4.1 原研药批次和来源2015和2021年国家药品监督管理局分别颁布了《生物类似药研发与评价技术指导原则(试行)》[13]、《生物类似药相似性评价和适应证外推技术指导原则》[14],其中对于相似性研究批次数量描述为“考虑到生物制品结构的异质性和批间的变异性,比对研究应纳入足够代表性批次的参照药建立相似性评价可接受范围,批次数量的要求取决于质量属性和分析方法的变异程度,应能对候选药和参照药的质量相似性进行有意义的比较”。实际审评过程中,由于生物制品类型多、结构差异大,不同产品研发风险不同,技术要求因此不同,且不同研发企业研发的策略不同(全球同步研发或仅国内上市等),其用于相似性研究的批次也有差异。例如如果开发地舒单抗的策略是全球研发,研究中将会纳入来自欧美国家多个来源的原研药批次,而如果研发策略为仅中国注册上市,则研究中将不会开展与欧美国家来源原研药的比较。对于中国注册上市的技术审评,主要关注中国来源原研药批次的比对情况,对于欧美国家的原研药可以作为参考或提供充分的研究数据支持其作为比对研究参照药。因此,直接对比每个申报同类品种的研究批次而没有分析具体情况是不妥当的,也不符合科学审评的理念。另外,国际范围内尚没有监管机构明确提出适用于所有生物制品相似性研究具体的批次数量。据悉美国FDA正在进行相关讨论,并在征求意见稿中初步制定了批次数量要求的范围[16]。我国药品审评部门也在积极推进该工作,期望能够进一步明确规范相似性研究批次要求。对于采用非中国市场来源原研药开展相似性研究的情况,我国监管部门2019年第44号公告[17]明确了申报的路径和相关的要求。美国FDA、欧洲EMA也在各相关技术指南[17-18]中明确了相关的技术要求。各国监管机构的技术要求理念基本一致,即各阶段进行比对研究的参照药应尽可能选择当地监管机构批准上市的原研药品,否则需要将用于比对研究的原研药与当地监管机构批准的原研药进行对比分析研究,对比分析研究的内容可以包括质量对比研究及体内PK和PD研究等。3.4.2 稳定性研究开展稳定性对比研究时,除常规开展长期稳定性研究外,还需采用敏感的检测条件和检测项目,定性和定量分析候选药和原研药的降解途径、降解趋势和降解速率的异同。一般通过加速条件和强制降解条件进行研究。研究中需要通过预实验等方式,合理设计研究条件(如温度、震荡等),应能观察到降解变化并可以用于稳定性变化趋势的对比研究。如果候选药和原研药降解变化结果存在差异,需进行进一步分析研究。例如某单抗生物类似药,在与原研药进行稳定性对比研究时仅采用加速条件进行研究,且该加速条件下均未见候选药与原研药有明显降解趋势,此时无法判断候选药与原研药的降解途径、降解速率、敏感条件等是否一致,无法评价两者稳定性性能的异同。因此,需要按照上述要求优化研究条件,再进行对比分析研究。稳定性研究批次方面,为准确、全面地研究稳定性的异同,建议采用至少3批我国市场来源的原研及拟上市商业化工艺生物类似药进行稳定性相似性分析。3.4.3 体外翻译后修饰质量差异的分析地舒单抗等抗体类生物类似药,由于发酵生产时间长,生产过程受到宿主细胞、培养基、培养条件、培养时间等的影响,常存在多种翻译后修饰变异体,尤其是糖谱、氧化、脱酰胺含量等方面,研究中需结合产品的作用机制、体内作用等分析其对产品安全性、有效性的影响。例如,已知高甘露糖含量增加可能增加药物的体内清除率从而影响药物的半衰期[19],可导致抗体结合FcγRⅢA的亲和力提高进而增强抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用(ADCC)效应[20],还可引起抗体的稳定性降低[21],如果候选药与原研药的高甘露糖含量存在差异,需要结合体外的ADCC及与FcγRⅢA的亲和力等方面研究和体内的PK等研究分析差异对体内作用的影响,并进一步评估是否为关键质量属性,必要时纳入质量标准进行控制。需要说明的是,重组表达的生物大分子物质(例如单克隆抗体)常由于翻译后修饰的复杂性和变异性导致候选药和原研药之间存在差异,成为生物类似药判断与评价的挑战[22-23]。通常情况下,在生物类似药开发过程中,需要通过工艺的优化与调整,获得与原研药质量更为接近或相似的候选药,在确保生产工艺稳定的前提下,再通过合理设计体内研究,分析质量的差异是否影响体内作用,进而进行整体相似性的判定。3.5 候选药研发规律候选药的研发过程一般遵循逐渐递进、不断优化与完善的规律,但生物类似药区别于创新药研发的研发规律在于,为确保生物类似药临床期间及上市后产品质量的一致性且与原研药质量的相似性,建议尽早锁定商业化生产工艺,减少研发过程中和上市后发生可能影响质量的重大变更。如果发生重大变更,需要开展充分的质量对比研究,必要时还可能需要进行体内的桥接研究。例如某单抗生物类似药,临床试验期间发生原液场地伴随生产工艺变更等的重大变更,质量研究中未充分开展与原研药的头对头对比研究,且部分关键质量属性无法达到原研水平[如毛细管电泳-聚丙烯酰胺凝胶电泳(CE-SDS)纯度低于原研],因此无法说明变更后样品与原研以及变更前样品质量的一致性,需谨慎按照生物类似药继续开发研究。4结语随着阿达木单抗、利妥昔单抗、贝伐珠单抗、曲妥珠单抗等生物类似药在国内获批上市,我国生物类似药研发已进入高速增长阶段[24-25]。地舒单抗生物类似药的开发对于提高国内患者用药可及性、降低用药成本具有重要作用。本文基于对多个地舒单抗品种的审评实践经验,结合文献调研等对地舒单抗国内外注册、申报情况及其产品特异性的相似性评价及问题进行了全面阐述,以期为这类产品的研发提供帮助。参考文献详见《中国新药杂志》 2023年 第32卷第24期文章信息源于公众号凡默谷,登载该文章目的为更广泛的传递行业信息,不代表赞同其观点或对其真实性负责。文章版权归原作者及原出处所有,文章内容仅供参考。本网拥有对此声明的最终解释权,若无意侵犯版权,请联系小编删除。学如逆水行舟,不进则退;心似平原走马,易放难收。行舟Drug每日更新 欢迎订阅+医药大数据|行业动态|政策解读
100 项与 阿达木单抗生物类似药 (华兰基因工程有限公司) 相关的药物交易