Mitoquinone mesylate

【导读】 缺氧诱导因子 2α（HIF2α）在透明细胞肾细胞癌（ccRCC）中的作用仍未完全明确。 2月13日，南开大学研究团队在期刊《Cell Death&Disease》上发表了研究论文，题为“HIF2α drives ccRCC metastasis through transcriptional activation of methylation-controlled J protein and enhanced prolegumain secretion”，本研究中，研究人员发现尿液中脯氨酸肽酶水平与透明细胞肾细胞癌（ccRCC）的恶性特征呈正相关。在培养的 786-O 和 OSRC-2 细胞中，HIF2α 下调会减少脯氨酸肽酶的分泌。RNA 测序分析表明，HIF2α 诱导MCJ的表达，MCJ是线粒体呼吸链的负调节因子。沉默 MCJ可减少脯氨酸肽酶的分泌，而 MCJ 过表达可恢复因 HIF2α 下调而受到抑制的脯氨酸肽酶分泌。染色质免疫沉淀和荧光素酶测定证实 MCJ 是 HIF2α 的转录靶点。此外，研究人员通过电子显微镜、ATP 水平、GSSG/GSH 比值、MitoSOX 和 DHE 染色等方法证明，外源性 MCJ 过表达逆转了 HIF2α 下调所改善的线粒体损伤。通过质谱分析，研究人员确定了脯氨酸肽酶序列上的氧化位点 His343 对脯氨酸肽酶分泌有贡献。在肾透明细胞癌（ccRCC）的小鼠原位异种移植模型中，沉默 MCJ 或使用 MitoQ 显著保护了线粒体免受损伤，并随后减少了肿瘤的肺转移。总体而言， 本研究确定了 MCJ 是 HIF2α 在 ccRCC 中的一个靶分子。沉默 MCJ 或使用像 MitoQ 这样的活性氧清除剂可以减少 ccRCC 的转移。 https://www.nature.com/articles/s41419-025-07432-3#Sec29 肾细胞癌（RCC）起源于肾小管上皮细胞，约占所有恶性肾肿瘤的 85%。在各种组织学亚型中，透明细胞肾细胞癌（ccRCC）最为常见，占病例的 75%。局限在肾脏内的 ccRCC 患者治愈率较高，但转移性肾细胞癌患者的 5 年生存率仍很低。迫切需要确定新的治疗靶点，以实现转移性肾细胞癌的早期检测和有效治疗。 在多达 90% 的透明细胞肾细胞癌（ccRCC）中存在希佩尔-林道（VHL）肿瘤抑制基因突变。VHL 基因产物 pVHL 负责降解缺氧诱导因子（HIF）的α亚基。当 VHL 失活时，HIFα 积累并发生核转位。HIFα 的这种激活会触发下游对肿瘤生长和转移至关重要的基因的持续转录。越来越多的证据表明，HIF1α 和 HIF2α 在 ccRCC 的发病机制中发挥着不同的作用。HIF2α 起着癌基因的作用，而 HIF1α 在 ccRCC 中则发挥着肿瘤抑制因子的作用。靶向HIF2α 的小分子抑制剂能够阻止与 ccRCC 发展相关的关键基因的转录，在小鼠异种移植模型中显示出靶向抗肿瘤活性。尽管初步发现激励人心，但 HIF2α 抑制剂的临床应用面临诸多挑战，联合疗法正成为一种有前景的策略。 尿液中豆素酶的水平与透明细胞肾细胞癌的转移状态呈正相关 01 先前的研究已证实，豆素酶与多种肿瘤的恶性特征之间存在正相关关系。在本研究中，研究人员从被诊断患有透明细胞肾细胞癌（ccRCC）的患者身上收集了 16 对肿瘤组织和相邻的肾组织，并比较了豆素酶在 mRNA 和蛋白质水平上的表达情况。定量实时 PCR 表明，ccRCC 肿瘤组织与相邻肾组织中的 Lgmn mRNA 水平无显著差异。然而，免疫印迹法显示，与相邻肾组织相比，肿瘤组织中的前豆素酶水平升高，而成熟豆素酶水平降低。豆素酶的活性和稳定性高度依赖于环境的 pH 值。研究人员接着测量了 50 名健康对照者、31 名患有局限性 ccRCC 的患者以及 19 名患有转移性 ccRCC 的患者血清和尿液样本中的前豆素酶水平。酶联免疫吸附测定（ELISA）结果显示，健康对照者与局限性或转移性 ccRCC 患者的血清豆素酶水平无显著差异，尽管有升高的趋势。然而，转移性透明细胞肾细胞癌（ccRCC）患者的尿液中豆素酶水平显著高于局限性肿瘤患者或健康对照组。研究结果还表明，尿液中豆素酶水平升高与疾病分期以及淋巴结或远处转移的发生频率呈正相关。 因此，数据表明，豆素酶的分泌可能作为 ccRCC 转移的潜在生物标志物。 尿液中豆素酶的水平与透明细胞肾细胞癌的转移状态呈正相关 分泌的豆素酶可激活MMP2，促进肿瘤侵袭和血管生成 02 研究人员进一步探索了豆素酶通过激活HIF2α/MCJ通路诱导的促转移作用。研究结果表明，在786-O和OSRC-2细胞中，沉默HIF2α或MCJ可导致肿瘤细胞的侵袭能力下降，而过表达MCJ可抵消HIF2α下调的作用。收集786-O或OSRC-2细胞的条件培养基，用其刺激内皮细胞系HUVEC。结果表明，沉默HIF2α或MCJ可减轻ccRCC细胞条件培养基诱导的管腔形成，而过表达MCJ可恢复这一作用，且不影响HUVEC的活力。 体内实验中，使用稳定沉默MCJ或786-O细胞建立原位异种移植ccRCC模型。研究人员根据荧光素酶荧光强度评估肿瘤大小和转移状态。研究结果表明，沉默MCJ或给予MitoQ可抑制ccRCC的肿瘤生长和减少肺转移。同时检测肿瘤匀浆中的氧化还原状态和ROS水平。与各自的对照组相比，MCJ沉默组和MitoQ组的GSSG/GSH比值、线粒体（mtROS）和细胞内ROS水平均显著降低。敲低MCJ或给予MitoQ不影响HIF2α、豆素酶和MMP2基因的转录水平。在小鼠肾组织中测定的蛋白质水平表明了类似的观点。然而，在MCJ沉默组和MitoQ组中，血清和尿液中豆素酶的水平均降低，表明豆素酶分泌的变化是由于MCJ的下调或ROS的清除。这些结果表明，通过沉默MCJ或用MitoQ清除ROS来调节氧化还原环境和ROS水平可以显著影响ccRCC的进展和转移，可能通过影响豆素酶的分泌来实现。 综上所述，本研究结果表明，由 HIF2α 诱导的豆素酶分泌有助于透明细胞肾细胞癌（ccRCC）的恶性表征。HIF2α/MCJ 通路的激活导致线粒体活性氧（mtROS）过度积累，进而通过特定的氧化位点促进豆素酶的分泌。因此，通过沉默 MCJ 或使用活性氧清除剂来降低活性氧水平，能够有效阻止 ccRCC 的进展。 【参考资料】 https://www.nature.com/articles/s41419-025-07432-3#Sec29 【关于投稿】 转化医学网（360zhyx.com）是转化医学核心门户，旨在推动基础研究、临床诊疗和产业的发展，核心内容涵盖组学、检验、免疫、肿瘤、心血管、糖尿病等。如您有最新的研究内容发表，欢迎联系我们进行免费报道（公众号菜单栏-在线客服联系），我们的理念：内容创造价值，转化铸就未来！ 转化医学网（360zhyx.com）发布的文章旨在介绍前沿医学研究进展，不能作为治疗方案使用；如需获得健康指导，请至正规医院就诊。 热门推荐活动 点击免费报名 🕓 全国｜2024年12月-2025年03月 ▶ 中国转化医学产业大会 🕓 上海｜2025年02月28日-03月01日 ▶ 第四届长三角单细胞组学技术应用论坛暨空间组学前沿论坛 点击对应文字 查看详情

NETs（Neutrophil extracellular traps）即中性粒细胞胞外陷阱，是中性粒细胞在特定条件下释放到胞外的一种网状结构，在免疫应答和疾病发生发展过程中具有重要作用。 定义：NETs 是中性粒细胞在受到病原体、细胞因子、免疫复合物等刺激时发生的一种特殊的细胞死亡方式（NETosis）过程中释放到细胞外的纤维状结构。 组成成分：主要由DNA骨架、组蛋白以及多种中性粒细胞颗粒蛋白组成。其中，DNA为NETs 提供了结构基础，组蛋白具有抗菌活性，能够直接杀伤病原体；中性粒细胞颗粒蛋白包括髓过氧化物酶（MPO）、弹性蛋白酶、组织蛋白酶G等，这些蛋白赋予了NETs多种生物学功能，如杀菌、调节炎症反应等。 NETs促进肿瘤转移 最近，“Neutrophil extracellular traps promote pre-metastatic niche formation in the omentum by expanding innate-like B cells that express IL - 10” 的研究论文发表于Cancer Cell，揭示了中性粒细胞胞外陷阱（NETs）通过诱导网膜间皮细胞表达 CXCL13，招募表达IL-10的先天样B细胞，促进调节性T细胞扩增，从而推动卵巢癌网膜促转移微环境形成的机制，为卵巢癌转移机制研究提供了新见解，也为开发新的治疗策略提供了理论依据。 NETs促进促转移生态位中B细胞扩增 实验模型构建：使用卵巢癌小鼠模型（如通过向小鼠卵巢囊内注射ID8细胞构建），包括NETs形成能力正常的 小鼠和 NETs 缺陷的 小鼠，以及通过药物（如 GSK484 抑制 PAD4）处理的小鼠模型，还涉及多种细胞系（如 ID8、BPPNM）和不同基因型小鼠（如 muMT、VertX、CD45.1、Il10 - KO 等）进行实验。 NETs对促转移生态位中B细胞数量的影响：在卵巢癌小鼠模型中，对比 和 小鼠，发现肿瘤形成三周后，两组原发肿瘤大小无显著差异，但 小鼠网膜中脂肪相关淋巴样聚集体（FALCs）显著增大，其中B细胞数量增加最为明显（增加 4 倍），而 小鼠中B细胞数量无显著增加；使用药物抑制 NETs 形成后，B6小鼠网膜中的B细胞数量显著减少，进一步证明 NETs 可增加前转移网膜中的B细胞数量。 NETs 优先增加先天样CD43⁺ B细胞 不同类型B细胞特征及分布：在健康小鼠中，约50% 的网膜B细胞为CD43⁺，多数为 IgM⁺IgD⁻且B220⁺；在肿瘤小鼠中，CD43⁺网膜B细胞数量增加，比例略有下降，而 CD43⁻B细胞数量在两组肿瘤小鼠中均增加，但增加幅度较小。在不同组织中，CD43⁺和CD43⁻B细胞的变化趋势不同，如在肠系膜和脾脏中变化不显著，在肿瘤小鼠腹腔中CD43⁺ B细胞数量减少。 NETs对CD43⁺和CD43⁻B细胞的影响差异：通过药物抑制NETs（如 GSK484 处理）和使用不同肿瘤模型（如 ID8、BPPNM）实验发现，无论肿瘤细胞来源和突变情况如何，CD43⁺B细胞对NETs更为敏感，在NETs存在时其数量增加更为显著；在人类早期高级别浆液性卵巢癌（HGSOC）患者的组织中，CD43⁺B 细胞比例也显著增加，同时伴有NETs形成，进一步表明NETs优先增加先天样 CD43⁺ B细胞。 NETs刺激CD43⁺腹膜B细胞向网膜募集 NETs对B细胞增殖和存活的影响：通过体内 BrdU掺入实验和体外CFSE染色实验发现，在卵巢癌小鼠模型中，网膜中的B细胞增殖不明显，且体外实验表明 NETs 刺激不会增加B细胞的增殖或存活，提示NETs可能通过其他方式增加网膜中B细胞数量。 NETs诱导B细胞迁移的机制：通过将B细胞过继转移到不同处理的小鼠（如 muMT 小鼠）体内实验发现，NETs可促进CD43⁺ B细胞从腹腔向网膜迁移，而对CD43⁻B细胞迁移影响较小；进一步研究发现，NETs可诱导网膜间皮细胞表达CXCL13，而CD43⁺B细胞表面CXCR5表达水平较高，且肿瘤小鼠网膜中 CXCL13⁺细胞增多，抑制 NETs 形成可降低CXCL13表达，表明NETs通过诱导 CXCL13表达吸引CD43⁺B细胞迁移至网膜。 CD43⁺ B细胞增加转移网膜中Treg/Th1细胞比例并促进转移 B 细胞对前转移网膜中T细胞组成的影响：在卵巢癌小鼠模型中， 和 小鼠网膜中总T细胞数量均增加，但 小鼠中调节性 T 细胞（Treg）数量和比例增加更明显，Th1细胞比例降低，导致 Treg/Th1比例显著升高；使用药物抑制NETs（如 GSK484 处理 B6 小鼠）可降低网膜中 Treg/Th1 比例，且在 muMT小鼠中NETs 对 Treg/Th1比例的调节依赖于B 细胞存在。 CD43⁺ B 细胞的功能验证：通过向小鼠过继转移不同类型 B 细胞实验发现，CD43⁺ B 细胞可增加前转移网膜中 Treg 数量和 Treg/Th1 比例，而 CD43⁻ B 细胞无此作用；在 muMT 小鼠中，接受 CD43⁺ B 细胞的小鼠出现网膜转移，而接受 CD43⁻ B 细胞或无 B 细胞的小鼠未发生转移，表明 CD43⁺ B 细胞可促进网膜转移，且这种作用与增加 Treg/Th1 比例有关。 NETs 选择性刺激 CD43⁺ B细胞产生 IL - 10 促进网膜转移 NETs对CD43⁺ B细胞 IL-10表达的影响：在人类早期 HGSOC患者网膜组织中，部分患者的CD19⁺CD43⁺细胞可检测到IL-10；在小鼠实验中， 小鼠肿瘤相关网膜中CD43⁺ B细胞的Il10 mRNA水平升高，而CD43⁻ B细胞无明显变化；通过使用Il10- eGFP报告基因小鼠发现，肿瘤小鼠网膜中CD43⁺ B细胞中 Il10- eGFP⁺细胞比例增加，且NETs可在体外刺激CD43⁺ B细胞表达IL - 10，但对CD43⁻ B细胞作用较小。 IL-10在CD43⁺ B细胞促进转移中的作用：通过向muMT小鼠过继转移野生型或 Il10-KO的CD43⁺ B细胞实验发现，野生型CD43⁺ B细胞可增加网膜中Treg数量和Treg/Th1比例，促进转移，而Il10- KO的CD43⁺ B细胞无此作用，表明CD43⁺ B细胞产生的 IL-10可增加前转移网膜中 Treg/Th1 比例并促进转移。 NETs 通过抑制 SHP-1 诱导 CD43⁺ B 细胞产生 IL-10 NETs对BCR信号通路及相关分子的影响：NETs刺激可诱导CD43⁺和CD43⁻ B细胞中BCR复合物重排，以及 ERK1/2、p38 MAPK和NF- κB p65 磷酸化；但在CD43⁺ B细胞中，NETs 可促使CD22聚集，抑制CD22与SHP-1的结合，降低 SHP-1磷酸化（Tyr564），从而增加SHP-1底物（如BLNK、SLP-76和 STAT3）的磷酸化，而在CD43⁻ B细胞中这些变化不明显。 SHP-1 抑制对 IL-10产生的影响：使用SHP- 1激动剂 SC- 43 处理细胞发现，其可抑制NETs诱导的STAT3磷酸化，并部分阻断NETs对CD43⁺ B细胞IL-10产生的刺激作用，表明NETs通过抑制 SHP-1 活性部分刺激CD43⁺ B细胞产生IL-10。 ROS促进NETs诱导的 SHP-1氧化和 IL-10 产生 NETs对B细胞中ROS产生的影响：NETs刺激可显著增加CD43⁺ B细胞中的总 ROS 和线粒体 ROS水平，而对 CD43⁻ B细胞无明显影响；使用ROS清除剂 N - 乙酰半胱氨酸（NAC）和线粒体氧化还原抑制剂 MitoQ 可分别抑制NETs诱导的总ROS和线粒体ROS增加；同时，NETs刺激可诱导CD43⁺ B细胞中多个氧化应激反应基因表达上调。 ROS在IL-10产生中的作用：通过 “生物素转换” 方法检测发现，NETs 刺激可增加CD43⁺ B细胞中蛋白质 S-亚硝基化水平，且 NETs 刺激后CD43⁺ B细胞中氧化型 SHP-1水平增加；使用NAC处理可抑制 NETs 诱导的CD43⁺ B细胞IL-10产生，表明ROS参与NETs诱导的SHP-1氧化和IL-10产生过程。此外，NETs中的蛋白质（如MPO和组蛋白）可诱导CD43⁺ B细胞产生ROS、蛋白质S-亚硝基化和IL-10，且NAC可抑制这些诱导作用，进一步证明NETs通过增加ROS诱导 CD43⁺ B细胞产生IL-10。 参考资料 Masucci MT, Minopoli M, Del Vecchio S and Carriero MV (2020) The Emerging Role of Neutrophil Extracellular Traps (NETs) in Tumor Progression and Metastasis. Front. Immunol. 11:1749. doi: 10.3389/fimmu.2020.01749 Fang Q, Stehr AM, Naschberger E, Knopf J, Herrmann M and Stürzl M (2022) No NETs no TIME: Crosstalk between neutrophil extracellular traps and the tumor immune microenvironment. Front. Immunol. 13:1075260. doi: 10.3389/fimmu.2022.1075260 Lee et al., Neutrophil extracellular traps promote pre-metastatic niche formation in the omentum by expanding innate-like B cells that express IL-10, Cancer Cell (2024), https://doi.org/10.1016/j.ccell.2024.12.004