Triptolide

“ 点击蓝字 关注我们 孙丽新 药理学博士，中国药科大学副研究员，硕士生导师。主要从事分子药理学和药物毒理学研究。主要研究方向为：药源性肝肠损伤及肝脏、肠道疾病的分子机制研究；药物对肝脏毒性作用机制和物质基础研究；炎症性肠病的分子机制研究及内源性代谢物对肠道免疫的影响。曾主持国家自然科学基金项目 4 项、江苏省自然基金项目 1 项，发表 SCI 收录论文数十篇。 中性粒细胞在药物性肝损伤中的作用研究进展 PPS  文晴 1，杨梦娇 1，原玉柱 1，赵永睿 1，肖莉 2，孙丽新 1* （1. 中国药科大学多靶标天然药物全国重点实验室新药筛选与药效评价中心，江苏 南京 210009；2. 湖州师范学院生命科学学院，浙江 湖州 313000） [ 摘要 ] 在药物性肝损伤（DILI）的疾病发展过程中，被募集到肝脏中的中性粒细胞通过多种途径加重肝损伤的作用受到广泛关注。然而，中性粒细胞在不同种类药物导致的直接型、间接型、特异质型 DILI 中的作用机制不同，尚待进一步研究。综述中性粒细胞在 DILI 中发挥加重肝损伤作用以及中性粒细胞分别在乙酰氨基酚、雷公藤甲素和吡咯里西啶生物碱导致的直接型 DILI，氟烷诱导的特异质型 DILI，免疫检查点抑制剂引起的间接型 DILI 中的作用机制，为探究 DILI 的内在机制和治疗手段提供参考。 药物性肝损伤（drug-induced liver injury，DILI）是一种严重的药物不良反应，轻症可致血清转氨酶浓度升高，重症可致肝衰竭甚至死亡 [1]。DILI 是临床上急性肝衰竭的常见病因，引起人们广泛关注。然而，DILI 内在机制复杂，目前尚未被完全阐明，仍需大量研究。研究表明，多种药物导致的 DILI 中，均存在中性粒细胞在肝脏中蓄积和活化的现象。中性粒细胞在 DILI 的疾病进程中起重要作用。本文重点阐述中性粒细胞在 DILI 中的作用，探讨中性粒细胞作为 DILI 治疗靶点的潜在作用。 1 药物性肝损伤概述 DILI 是一种常见药物不良反应，是多种新药开发受阻和上市药物撤市的原因。导致 DILI 的药物主要包括化学药物、中草药和膳食补充剂。导致 DILI的药物类别存在地区差异。在欧美国家，膳食补充剂导致的肝损伤病例逐渐增多，但其所占比重较小，以抗生素为首的化学药物仍是导致 DILI 的主要药物 [2-5]。在亚洲地区，尤其是东亚地区，中草药导致的 DILI 所占比重较大 [6-8]。在中国人群中导致 DILI的主要药物为中草药，占比为 26.81%，其次是抗结核药物，占比为 21.99%，而抗肿瘤药物、抗感染药物、抗精神病药物的占比均不超过 10%[9]。 DILI 表现为肝功能障碍，可能伴有黄疸，严重时可致急性肝衰竭甚至死亡 [10-12]。根据药物导致肝损伤的不同方式，DILI 可分为直接型 DILI、特异质型 DILI 和间接型 DILI[10]。其中，直接型 DILI 由具有肝毒性的药物直接引起，具有剂量依赖性、重复性和可预测性。引起特异质型 DILI 的药物一般只有极小的直接毒性或无直接毒性。特异质型 DILI 具有不可预测性，动物实验难以复制，个体差异显著，通常与药物剂量无相关性。间接型 DILI 与以上 2 种不同，继发于药物的药理作用，而不是由药物固有的毒性或免疫原性引起，表现为诱发或加重肝脏疾病 [11,13]。 2 中性粒细胞对药物性肝损伤的调节过程 2.1 中性粒细胞的分化和成熟 中性粒细胞是哺乳动物体内数量最多的白细胞，具有强大的抗菌作用，是体内抵御病原体入侵的第一道防线 [14]。然而，中性粒细胞的抗菌活性也使其具有生物毒性，可导致组织损伤和自身免疫性疾病 [15-17]。成熟中性粒细胞以约 1 011 个/d 的速率在骨髓中生成，但在血管内停留的时间平均只有 6 ~8 h。当病原体感染机体时，骨髓中的中性粒细胞将加速生成 [15]。成熟中性粒细胞的形成过程分为 2 个阶段，即分化和成熟。其中，分化是指造血干细胞分化和发育为髓系祖细胞，再分化为中性粒细胞前体的过程。成熟则是指中性粒细胞前体依次生成初级颗粒、次级颗粒、三级颗粒和分泌囊泡，并形成分叶核，成为成熟中性粒细胞的过程 [18-19]。 2.2 中性粒细胞的募集 循环中的中性粒细胞受到损伤相关分子模式（damage-associated molecular patterns，DAMPs）、促炎因子和趋化因子等因素诱导，向肝脏趋化，黏附在内皮上，通过迁移抵达损伤部位，这一过程被称为中性粒细胞的募集（见图 1）。当中性粒细胞被招募时，其在骨髓中的分化和生成速度也加快。在DILI 中，肝细胞释放 DAMPs，如热休克蛋白 60（heat shock protein 60，HSP60）、 高 迁 移 率 族 蛋 白 1（high mobility group proteins，HMGB1）和腺嘌呤核苷三磷酸（adenosine triphosphate， ATP）等，与相应受体结合，介导中性粒细胞的趋化 [20-21]。肝脏中的枯否细胞（Kupffer cell，KC）释放肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）等促炎因子，诱导中性粒细胞的趋化。同时，CXC 趋化因子配体 1（C-X-C chemokine ligand 1，CXCL1）、CXC 趋化因子配体2/8（C-X-C chemokine ligand 2/8，CXCL2/8）与 CXC趋化因子受体 2（C-X-C chemokine receptor type 2，CXCR2）结合，甲酰肽与甲酰肽受体 1（formyl peptide receptor 1，FPR1）结合，协同招募中性粒细胞至肝坏死部位 [22]。中性粒细胞的黏附和迁移过程由中性粒细胞表达的 β2 整合素（integrin β2，ITGβ2）和内皮细胞表达的黏附因子 [ 细胞间黏附分子 -1（intercellular adhesion molecules-1，ICAM-1）、血管细胞黏附分子 -1（vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1）、血小板内皮细胞黏附分子 -1（platelet endothelial cell adhesion molecule-1，PECAM-1）] 共同调控 [23]。 2.3 中性粒细胞加重肝损伤 中性粒细胞在组织损伤部位，被环境信号激活，表现为在胞内合成颗粒蛋白和分泌囊泡，并转录趋化因子 [24]。在 DILI 的肝脏损伤部位，活化的中性粒细胞产生多种效应：1）脱颗粒，释放髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）、中性粒细胞弹性蛋白酶（neutrophil elastase，NE）等颗粒蛋白，对肝细胞产生毒性作用；2）分泌 TNF-α、IL-1β 等炎症因子，加剧肝脏炎症；3）诱导活性氧（reactive oxygen species，ROS）的生成，引起氧化应激，从而损伤肝脏；4）形成中性粒细胞胞外诱捕网，直接杀伤肝细胞，或介导肝血窦中微血栓的形成 [15]。 3 中性粒细胞在药物性肝损伤中的作用 3.1 中性粒细胞在直接型药物性肝损伤中的作用 阿司匹林、对乙酰氨基酚（acetaminophen，APAP）等非甾体抗炎药是造成直接型 DILI 的常见药物。APAP 诱导的急性肝损伤模型广泛应用于直接型 DILI 的机制研究。近年来，不仅在中国，在日本、韩国、新加坡等许多国家，因服用中草药而导致 DILI 的病例所占的比重也逐渐增加 [25]。一些中草药中的特定化学成分已被确定为肝毒性成分，对人体具有内在肝毒性，直接损伤肝脏，例如雷公藤中的雷公藤多苷和雷公藤甲素、蓖麻子中的蓖麻毒素、常山中的常山碱、合欢皮中的合欢皮皂苷、商陆中的商陆碱等 [26]。同时，多种肝毒性中草药（如菊三七、千里光等）中均含有不饱和吡咯里西啶生物碱，其诱导的 DILI 引起广泛关注 [27]。 3.1.1 中性粒细胞在对乙酰氨基酚导致的药物性肝损伤中的作用 APAP 是一种具有解热镇痛作用的非甾体抗炎药，服用过量时可导致急性肝损伤。APAP诱导的急性肝损伤已成为肝衰竭的主要原因之一，严重威胁人类健康。因此，APAP 导致 DILI 的毒理机制和治疗靶点研究引起广泛关注，其诱导的肝损伤动物模型也被大量研究。APAP 诱导的肝损伤发生早期，中性粒细胞迁移到小鼠肝组织中，大多数位于肝脏的健康部位；在肝损伤逐渐加重直至最高峰期间，大部分中性粒细胞迁移至坏死区域；然而在肝损伤恢复期，肝脏中中性粒细胞的数量则降低 [28]。 研究表明，中性粒细胞可加重 APAP 诱导的肝损伤，耗竭小鼠体内的中性粒细胞则可明显减轻APAP 诱导的肝损伤。在 APAP 导致的 DILI 中，中性粒细胞在肝脏中蓄积和活化，分泌 IL-1α 等炎症因子以加剧炎症，并释放髓过氧化物酶、一氧化氮和硝基酪氨酸，从而损伤肝细胞 [29]。研究表明，抑制中性粒细胞的肝脏浸润可减轻 APAP 导致的肝损伤，例如巨噬细胞迁移抑制因子抑制剂 [30]、溶解素 [21]、甘草次酸 [31]、胃泌素释放肽受体（gastrin-releasing peptide receptor，GRPR）拮抗剂均可通过抑制中性粒细胞的浸润，从而减轻肝损伤 [32]。激活白三烯 B4 受 体 1 型（leukotriene B4 receptor 1，BLT1）信号通路和肝线粒体脱氧核糖核酸（mitochondrial DNA，mtDNA）/Toll 样受体 9（Toll-like receptor 9，TLR9）/微小核糖核酸-223（microribonucleic acid-233，miRNA-233）通路也抑制中性粒细胞在肝脏中蓄积，从而保护肝脏免受APAP 肝毒性的影响 [33-34]。综上所述，在 APAP 诱导的 DILI 中，中性粒细胞向肝脏募集，释放炎症因子和颗粒蛋白，从而加重肝损伤。 3.1.2 中性粒细胞在雷公藤甲素导致的药物性肝损伤中的作用 雷公藤甲素是从雷公藤中提取出的主要活性成分，具有抗癌、抗类风湿、抗炎、抗阿尔茨海默病等药理作用 [35]。然而由于雷公藤甲素具有肝毒性、肾毒性和生殖毒性等多种毒性，可导致严重不良反应，其在临床上的应用受到限制。研究表明，在雷公藤甲素诱导的小鼠肝损伤模型中，随着肝损伤的发展，中性粒细胞在肝脏中蓄积和活化。肝脏中 CXCL1、TLR4、TLR9 和单核细胞趋化因子-1（monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1）的表达增加，介导中性粒细胞向肝脏募集。肝脏中的中性粒细胞被激活后，释放髓过氧化物酶，分泌炎症因子，从而对肝细胞造成损伤。耗竭小鼠体内的中性粒细胞可使雷公藤甲素导致的肝损伤减轻 [36]。 3.1.3 中性粒细胞在吡咯里西啶生物碱导致的药物性肝损伤中的作用 吡咯里西啶生物碱诱导的肝损伤主要表现为肝窦内皮细胞损伤，肝组织淤血，形成微血栓阻塞肝窦，导致肝窦阻塞综合征 [25, 37]。野百合碱诱导的动物模型是目前研究吡咯里西啶生物碱导致的 DILI 的机制和治疗药物的常用模型 [38]。研究表明，在野百合碱诱导的 C57BL/6 小鼠模型中，肝脏中 HSP60 和 HMGB1 的释放增加，TLR4 的表达也增加，从而诱导中性粒细胞的募集，加剧炎症反应 [39]。肝窦内皮细胞与中性粒细胞之间存在相互作用，一方面肝窦内皮细胞参与中性粒细胞的趋化、黏附、迁移和活化过程，另一方面中性粒细胞也可损伤肝窦内皮细胞以加重肝损伤 [23, 40]。此外，中性粒细胞形成的中性粒细胞胞外诱捕网可促进凝血和抑制纤溶，从而导致血管内微血栓的形成 [41-42]。因此，靶向中性粒细胞可能成为研究吡咯里西啶生物碱导致的 DILI 的内在机制和治疗手段的新思路。 3.2 中性粒细胞在特异质型药物性肝损伤中的作用 特异质型 DILI 的不可预测性和不可重复性，是探究 DILI 的毒性机制和治疗靶点的难题。导致特异质型 DILI 的主要药物包括异烟肼、利福平、吡嗪酰胺等抗结核药和头孢菌素、氟喹诺酮类抗生素、大环内酯类抗生素等抗生素以及氟烷等 [11, 43-44]。氟烷是一种吸入性全身麻醉剂，可导致急性肝损伤，氟烷诱导的 DILI 模型是研究特异质型 DILI 的重要模型之一 [44]。不同品系的小鼠对氟烷肝毒性的易感程度不同，其中 BALB/c 小鼠最敏感，DBA/1 小鼠次之，C57BL/6J 小鼠无明显肝毒性。在氟烷诱导的 BALB/c 小鼠模型中，CXCL2 表达增加以招募中性粒细胞，促炎介质 IL-6、IL-1β、TNF-α、诱导型 一 氧 化 氮 合 酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）表达量增加，引发炎症反应 [45]。研究表明，在 BALB/c 的亚系 BALB/cJ 小鼠中，耗竭自然杀伤T 细胞以抑制中性粒细胞的募集，可降低对氟烷导致的 DILI 的易感性 [46]。在 C57BL/6J 小鼠中，敲除IL-10 以增加 CXCL2 的表达，从而诱导中性粒细胞的募集，则可增加对氟烷导致的 DILI 的易感性 [47]。值得关注的是，性别是氟烷引起 DILI 的风险因素之一，女性更易发生氟烷引起的 DILI。研究表明，在氟烷诱导的 BALB/c 小鼠模型中，雌二醇可使CXCL1、CXCL2 和 ICAM-1 在肝脏中高表达，诱导大量中性粒细胞浸润至肝脏，从而加重氟烷对肝脏的损伤，而黄体酮则可抑制中性粒细胞的募集，减轻氟烷对肝脏的损伤 [48]。女性体内雌二醇和黄体酮的平衡失调导致中性粒细胞向肝脏募集，可能是氟烷在女性中易感程度更高的重要原因。 氟喹诺酮类抗生素曲伐沙星导致的特异质型DILI 也与中性粒细胞相关 [49]。曲伐沙星因导致肝损伤发病率高而于 2001 年退市，距离其上市仅 3 年。研究显示，在中性粒细胞弹性蛋白酶缺陷小鼠中，曲伐沙星对肝脏的损伤作用减轻 [49]。这表明，中性粒细胞在损伤部位释放中性粒细胞弹性蛋白酶，参与曲伐沙星导致的肝损伤。 3.3 中性粒细胞在间接型药物性肝损伤中的作用 间接型 DILI 继发于药物的治疗作用，与药物的固有肝毒性或免疫原性无关，表现为诱发或加重肝脏疾病。其中，免疫检查点抑制剂导致的间接型 DILI 引起广泛关注。靶向的免疫检查点分子主要是程序性细胞死亡蛋白 1（programmed cell death protein 1，PD-1）、程序性死亡配体 1（programmed death-ligand 1，PD-L1）和细胞毒性 T 淋巴细胞相关蛋白 4（cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4，CTLA-4）[50]。随着免疫检查点抑制剂越来越多地用于癌症的治疗，免疫相关不良事件的发生逐渐增多。免疫检查点抑制剂导致的肝损伤主要表现为胆汁淤积、胆管炎和肝功能障碍 [50]。 免疫检查点抑制剂诱导的间接型 DILI，主要是由 T 细胞过度活化引起的细胞毒性导致 [51-52]。临床病例的肝活检结果显示，在抗 CTLA-4 治疗诱导的DILI 中，肝脏浸润的炎性细胞主要是 CD8+ T 细胞，而在抗 PD-1/PD-L1 治疗导致的 DILI 中，肝脏中CD4+ T 细胞和 CD8+ T 细胞的数量相当 [53]。研究表明，抗 PD-1 致 DILI 临床病例的肝脏中也存在中性粒细胞浸润 [54]。在用 B6/lpr 小鼠建立的抗 PD-1 和抗 CTLA-4 抗体共同诱导的肝损伤模型中也观察到CD4+ T细胞和CD8+ T细胞的肝脏浸润[55]。研究显示，中性粒细胞在流感病毒感染动物模型中介导 CD8+ T细胞的反应，在分支杆菌感染动物模型中促进CD4+ T细胞的活化和增殖 [56]。中性粒细胞可以分泌趋化因子以促进 T 细胞迁移到炎症部位，也可作为抗原呈递细胞，表达主要组织相容性复合体Ⅱ类、CD80和 CD86，从而驱动 CD4+ T 细胞和 CD8+ T 细胞活化 [56]。综上可见，在免疫检查点抑制剂导致的肝损伤中，中性粒细胞可能促进 CD4+ 和 CD8+ T 细胞活化，从而加重肝损伤。 4 结语与展望 综上所述，中性粒细胞在骨髓中分化和成熟，受到 DAMPs、趋化因子和炎症因子等环境信号的刺激，从骨髓释放至血液循环，通过肝血窦进入肝脏，抵达损伤部位并活化。活化后的中性粒细胞脱颗粒、促进炎症、生成 ROS 和形成中性粒细胞胞外诱捕网，从而损伤肝细胞。在多种 DILI 中，中性粒细胞均具有加重肝损伤作用。 目前在 APAP 诱导的急性肝损伤中，中性粒细胞对肝损伤的作用仍存在争议，可能与实验观察的时间点差异相关。研究表明，在 APAP 诱导的急性肝损伤修复期，中性粒细胞可通过生成 ROS，介导促炎性巨噬细胞向修复性巨噬细胞转化，从而促进肝脏修复 [57-58]。在 APAP 诱导的 DILI 病理生理过程的不同阶段，中性粒细胞发挥的效能可能不同，以单一时间点作为实验观察点得到的实验结果可能存在片面性。为更深入地探究中性粒细胞在 APAP 诱导的 DILI 的不同阶段中的作用，还需在肝损伤加重期和修复期内设置多个实验观察时间点，考察肝脏损伤和修复情况 [59]。 中性粒细胞弹性蛋白酶是一种由活化的中性粒细胞分泌的颗粒蛋白，其抑制剂西维来司和 N-乙酰半胱氨酸联合治疗可显著减轻肝损伤，比 N-乙酰半胱氨酸单药治疗更有效，为 APAP 诱导的 DILI 的治疗提供新的选择。另外，研究表明，一些小分子物质也可通过抑制中性粒细胞的招募和浸润以减轻APAP 诱导的 DILI，如小檗碱 [60]、栀子苷 [61]、柠檬醛 [62] 等。中性粒细胞可能是预防和治疗 APAP 诱导的急性肝衰竭的潜在靶点。抑制中性粒细胞向肝脏募集，降低其对肝脏的损伤作用可作为 DILI 的潜在治疗方案，也为避免新药肝毒性提供思路。虽然中性粒细胞在 DILI 中的作用机制研究已取得一定进展，但其在 DILI 治疗中的作用仍须进一步探索，与其他损伤相关成分之间的相互作用尚须进一步研究。 参考文献 ： [1] 肇丽梅 , 缪丽燕 . 药物性肝损伤研究进展及展望 [J]. 药学进展 , 2023, 47(2): 81-83. 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DOI: 10.1155/ 2017/1796209. 美编排版：陈鑫茹 感谢您阅读《药学进展》微信平台原创好文，也欢迎各位读者转载、引用。本文选自《药学进展》2024年第 10 期。 《药学进展》杂志由中国药科大学和中国药学会共同主办、国家教育部主管，中国科技核心期刊（中国科技论文统计源期刊）。刊物以反映药学科研领域的新方法、新成果、新进展、新趋势为宗旨，以综述、评述、行业发展报告为特色，以药学学科进展、技术进展、新药研发各环节技术信息为重点，是一本专注于医药科技前沿与产业动态的专业媒体。 《药学进展》注重内容策划、加强组稿约稿、深度挖掘、分析药学信息资源、在药学学科进展、科研思路方法、靶点机制探讨、新药研发报告、临床用药分析、国际医药前沿等方面初具特色；特别是医药信息内容以科学前沿与国家战略需求相合，更加突出前瞻性、权威性、时效性、新颖性、系统性、实战性。根据最新统计数据，刊物篇均下载率连续三年蝉联我国医药期刊榜首，复合影响因子1.216，具有较高的影响力。 《药学进展》编委会由国家重大专项化学药总师陈凯先院士担任主编，编委由新药研发技术链政府监管部门、高校科研院所、制药企业、临床医院、CRO、金融资本及知识产权相关机构近两百位极具影响力的专家组成。 联系《药学进展》↓↓↓ 编辑部官网：pps.cpu.edu.cn； 邮箱：yxjz@163.com； 电话：025-83271227。 欢迎投稿、订阅！ 往期推荐 聚焦“兴药为民·2023生物医药创新融合发展大会”“兴药为民·2023生物医药创新融合发展大会”盛大启幕！院士专家齐聚杭城，绘就生物医药前沿赛道新蓝图“兴药强刊”青年学者论坛暨《药学进展》第二届青年编委会议成功召开“兴药为民·2023生物医药创新融合发展大会”路演专场圆满收官！校企合作新旅程已启航 我知道你在看哟

“ 点击蓝字 关注我们 吕万良 北京大学长聘教授、博士生导师、分子药剂学与新释药系统北京市重点实验室常务副主任。担任中国药学会药剂专业委员会主任委员，中国颗粒学会常务理事，《北京大学学报（医学版）》等国内外学术期刊编委、副主编等职务。历任新加坡国立大学/国大医院研究员，约翰-霍普金斯大学国际医学中心研究员，日本富山医科药科大学访问学者，北京大学药学院党委副书记等职务。主要从事生物药剂学研究，在肿瘤和炎症等重大疾病的基因重组制剂、脂质体递药系统研究领域取得了重要进展。在学术期刊上发表论文 190 余篇，主编北京大学长学制教材《现代药剂学》和《先进药剂学》、主编 Springer Nature 专著Liposomes-Based Drug Delivery Systems，入选 Elsevier 高被引中国学者名单，分别获得 2009 年、2012 年教育部自然科学一等奖，2019 年教育部自然科学二等奖等奖项。 脂质体的研究与应用进展 PPS  冯赫宣，李佩珊，刘懿萱，李建伟，吕万良 * （天然药物及仿生药物全国重点实验室 分子药剂学与新释药系统北京市重点实验室 北京大学药学院，北京 100191） [摘要] 脂质体是由脂质材料制备的可用作药物载体的双分子层脂质囊泡。脂质体是近年来发展的一种新型药物载体。脂质体可改变药物在体内的递释性能及由此引起的药效提升和毒副作用降低，其特点包括靶向性和淋巴定向性、延长药物血液循环时间、降低药物毒性、提高稳定性。脂质体的主要制备方法包括薄膜分散法、逆向蒸发法、溶剂注入法、pH 梯度法、硫酸铵梯度法、醋酸钙梯度法、离子载体法、钙融合法及改进的适合规模化生产的其他方法。目前，经过欧美药品管理部门批准上市的原研脂质体药物共有 16 个品种，而进入临床试验不同阶段的脂质体药物品种总计有千余个品种。已批准的脂质体药物主要适应证有肿瘤、真菌感染、术后疼痛等。综述脂质体的研究与应用进展，旨在为脂质体新药的研发及其医药产业技术升级提供参考。 1 脂质体 1.1 脂质体的发展 脂质体（liposome）是一种由脂质材料制备的可用作药物载体的双分子层脂质囊泡。当两亲性脂质分子分散于水相时，其分子的疏水尾部倾向于聚集在一起避开水相，而其分子的亲水头部暴露在水相，自发形成具有脂质双分子层结构的封闭囊泡。 1965 年，英国科学家 Bangham 等 [1] 发现，当磷脂分散在水中时形成多层囊泡，且每一层均为脂质双分子层，各层之间被水相隔开，形成囊泡结构。1968 年，Sessa 等 [2] 采用磷脂材料与各种阴离子、阳离子长链类脂材料，制备多种类型脂质体，并对其理化特性和结构进行了分析。随后，有关脂质体研究的文献数量逐年递增。1970 年，Korn 等 [3] 对脂质体物理结构和生物性质进行了深入研究。 1976年，Gregoriadis 等 [4] 和 Dapergolas 等 [5]的研究显示，脂质体在癌症化疗、糖尿病治疗领域显示出良好的应用前景。1988 年，瑞士 Cilag 公司开发了益康唑脂质体凝胶，该脂质体药物率先在欧洲上市 [6]。1990 年，美国 Gilead 公司开发了两性霉素 B 脂质体注射剂，该产品在美国上市，用于深部真菌感染治疗。1995 年，美国 Sequus 公司开发了阿霉素脂质体（Doxil），该产品在美国上市，用于癌症治疗。1996 年，美国 NeXstar 公司开发了柔红霉素脂质体（DaunoXome），该产品先后在美国、欧洲上市，用于癌症治疗。随后，美国 Pacira 公司开发的阿糖胞苷脂质体（DepoCyt）、美国 Berna Biotech 公司开发的甲肝疫苗脂质体（Epaxal）等以脂质体为载体的治疗药物。此外，在我国也有多种脂质体药物陆续进入临床研究和应用阶段。 1.2 脂质体的特点 脂质体的明显特征是该载体改变了药物在体内的递释性能及由此引起的药效提升和毒副作用降低，其特点包括：靶向性和淋巴定向性、延长药物血液循环时间、降低药物毒性、提高药物稳定性等。 1.2.1 靶向性和淋巴定向性  脂质体对肝、脾等存在网状内皮系统表达丰富的脏器组织具有被动靶向性。例如，锑酸葡胺脂质体可用于治疗肝利什曼寄生虫，其在肝中浓度比普通制剂提高了 200 倍以上。研究显示，经过表面功能修饰的脂质体药物，在动物体内可显著提高作用部位的药物浓度，表现出一定的主动靶向性效应，例如，叶酸受体在乳腺癌、肺癌、肾癌、卵巢癌、结直肠癌等均有高水平表达，叶酸配体修饰的多西紫杉醇脂质体表现出明显的乳腺癌靶向性治疗效应 [7]。 1.2.2 延长药物血液循环时间  脂质体可延长药物的血液循环时间，有利于脂质体荷载药物在实体肿瘤部位的滞留和聚集。例如，Doxil 是一种血液长循环（blood long-circulation）或隐型（stealth）脂质体药物，可用于治疗人体免疫缺陷病毒引起的难治性卡波西肉瘤（Kaposi's sarcoma）。在该脂质体组成中，含有亲水性聚合物聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）修饰的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（1，2-distearoylsn-glycero-3-phosphoethanolamine，DSPE）衍生物（PEG-DSPE），其作用是阻止血浆蛋白吸附，避免脂质体药物在血液循环过程中被单核巨噬细胞系统快速清除，延长脂质体在血液循环中暴露时间，使得脂质体可有效达到病变部位，因为在实体肿瘤、感染、炎症部位，病变可引起毛细血管的通透性增加，长循环脂质体可有效增加在这些部位的聚集量，这种现象被称为高通透性和滞留效应（enhancedpermeability and retention effect，EPR）。 1.2.3 降低药物毒性  脂质体载体降低药物毒性原因可能与脂质体膜包封掩蔽、靶向性分布、尺寸效应与组织密度等因素有关。动物实验研究显示，同游离型阿霉素注射剂相比，Doxil 减少了药物在心肌组织中的聚集量，降低了其心脏毒性。此外，同游离型两性霉素 B 脱氧胆酸盐注射剂相比，两性霉素 B脂质体明显降低了药物的肾脏毒性 [8]。 1.2.4 提高药物稳定性  脂质体提高药物的稳定性与脂质体包封掩蔽及其表面修饰成分有关。将游离药物封装于脂质双分子层中，可保护药物免受体内酶促降解、化学灭活以及被网状内皮系统快速清除。因此，脂质体可防止药物在到达目标组织之前被代谢，同时可最大限度地减少药物血液循环过程和在健康组织中药物毒性 [9]。 1.3 脂质体的主要材料 脂质体膜材料组成成分主要包括磷脂和类脂及其衍生物。磷脂是脂质体最常见的成分，磷脂由 1个亲水性头部和 2 条疏水性脂肪烃链尾部组成。头部的磷酸分子可与其他有机分子（胆碱、丝氨酸）发生酯化反应，生成不同的极性基团，这种特殊的结构使磷脂具有良好的油水两亲性质（见图 1）。 根据来源不同，磷脂可分为天然甘油磷脂和合成甘油磷脂。天然甘油磷脂主要有磷脂酸（phosphatidicacid，PA）、磷脂酰胆碱（phosphatidylcholine，PC）、磷脂酰乙醇胺（phosphatidylethanolamine，PE）、磷脂酰肌 醇（phosphatidylinositol，PI）、磷脂酰甘油（phosphatidylglycerols，PG）和磷脂酰丝氨酸（phosphatidylserine，PS）。合成甘油磷脂主要有 1，2-二硬脂酰基-sn-丙三基-3-磷酸胆碱（1，2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphatidylcholine，DSPC）、1，2- 二 棕 榈 酰 磷 脂 酰 胆 碱（1，2-dihexadecanoyl-rac-glycero-3 phosphocholine，DPPC）、1，2-二油酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱（1，2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine，DOPC）等 [10]。  按照荷电性不同，磷脂可分为中性磷脂、负电荷磷脂与正电荷磷脂。最为常见的中性磷脂为磷脂酰胆碱，在自然界中磷脂酰胆碱是多数细胞膜的组成成分。由于其易获取、价格低廉、电中性和理化稳定性，磷脂酰胆碱也是制备脂质体的主要脂质材料。除从天然来源的磷脂酰胆碱外，尚有人工合成 磷 脂，如 DPPC、DSPC、DOPC 等。鞘 磷 脂（sphingomyelin，SM）与PE也是常见的中性磷脂材料。  常见的负电荷磷脂有 PA、PG 和 PI，而常见的正电荷磷脂有硬脂酰胺（stearamide，SA）、三氟乙酸二甲基-2，3-二油烯氧基丙基-2-(2-精胺甲酰氨基 ) 乙基铵 [N-(2-((S)-2，5-bis(3-aminopropylamino)pentanamido)ethyl)-N，N-dimethyl-2，3-bis((Z)-octadec9-enyloxy)propan-1-aminiumpentahydrochloride，DOSPA] 和二油酰基三甲基氯化铵（1，2-dioleoyl-3-trimethyl ammonium-propane，DOTAP）等。  电中性磷脂常用作包载化学药物的脂质体材料，其生物相容性较好。正电荷磷脂常用于制备包载基因药物的脂质体材料，如正电荷磷脂常用于核酸大分子递送。这是因为 DOTAP 可与 DNA 或RNA 通过静电作用结合，形成稳定的磷脂核酸复合物，进而将遗传物质有效地转染入细胞内部。此外，阳离子脂质体也可用作抗原、多肽或小分子药物的高效递送载体，阳离子脂质体有一定的毒副作用。  胆固醇（cholesterol）是一种类脂材料，存在于自然界生物膜中，具有电中性、两亲性等特点，其亲油性比磷脂酰胆碱更强。胆固醇自身不能形成脂质双分子结构，但当胆固醇嵌入双分子层磷脂膜时，可改变脂质体膜的相变温度、流动性和通透性。胆固醇也具有阻止磷脂凝集的功能，从而改变或调节脂质体膜的理化性质。 2 脂质体的制备方法 2.1 薄膜分散法 薄膜分散法（film dispersion）是将脂质体膜材料通过适宜溶剂溶解，去除溶剂后形成脂质薄膜，然后再水化处理形成脂质体的一种制备方法。在药物包封过程中，脂溶性药物可随薄膜材料一起添加，水溶性药物随水化溶液一起添加，最终制备成载药脂质体。薄膜分散法具体步骤：可用有机溶剂溶解脂质体膜材料，通过减压蒸发去除有机溶剂，脂质体膜材料在器壁上形成多层堆积的脂双层，当体系内加入水化剂并进行振摇后，多层脂双层从器壁脱落，自发产生粒径为 0.5 ~ 5 μm 的多层脂质体（multilamellar vesicle，MLV）[11]。  为了制备粒径较小、尺寸均一的 20 ~ 100 nm小单层脂质体（small unilamellar vesicle，SUV）与 200 ~ 500 nm 大 单 层 脂 质 体（large unilamellar vesicle，LUV），薄膜分散后需要联用脂质体匀化技术，以制备粒径适宜且均一的 SUV 与 LUV。常用的脂质体匀化技术有超声法和挤压法。  超声法（ultrasonic method）是将薄膜分散法制得的 MLV 进行超声处理，可得到粒径约 250 nm 的LUV。超声时间长短及所选用的超声方式对最终脂质体粒径产生明显影响。水浴型超声适用于量大或浓度低的脂质体样品，由于超声过程中产生热量，因此还需要对于水温进行监控，以避免对包封药物稳定性产生影响。探针型超声适用于黏稠或浓度较高的脂质体样品，一般探针型超声会产生较高的能量，其超声效果优于水浴超声。  挤压法（extrusion）是将薄膜分散法和超声处理后制得的脂质体混悬液，在挤压的作用下通过孔径不同的激光打孔的聚碳酸酯膜，得到大量粒径较小且均一的 LUV 或 SUV。在实际操作中，选取适当孔径的碳酸酯膜进行梯度挤出至关重要。一般应采取先挤压通过大孔径膜，后多次挤压通过小孔径膜，以利于得到均一的 SUV。 2.2 逆相蒸发法  逆相蒸发法（reverse-phase evaporation）是将脂质体膜材料溶于有机溶剂，然后将溶解原料药物的水溶剂混合，进行水浴超声后可形成油包水型乳剂（W/O）样脂质体混悬液，将得到的混悬液进行减压蒸发，去掉有机溶剂即可得到脂质体混悬液。通过此方法得到的脂质体，可用于包载核酸药物，也可用于包封小分子化学药物，辅以挤出法可得到粒径均匀的 SUV。  改进后的逆向蒸发法可将脂质体膜材料溶解于有机溶剂，通过减压蒸发去除有机溶剂形成薄膜后，加入异丙醚等有机溶剂重新溶解，加入水相溶剂得到 W/O 样脂质体混悬液，再经超声、挤压法对粒径均化处理，可形成单层脂质体，再通过减压蒸发去除有机溶剂，可得到可载药物的 SUV 脂质体混悬液。  同薄膜分散法相比，逆相蒸发法制备脂质体的药物包封率高。然而，在制备过程中需要将药物与脂质体暴露在超声环境和有机溶剂中，可能影响了载药脂质体的完整度及药物稳定性，且逆相蒸发法也较为耗时，不利于脂质体的规模化生产 [12]。以制备布比卡因（bupivacaine）LUV 为例，利用逆相蒸发法可高效制备载药 LUV，相较于传统的薄膜水合法具有更高的药物包封能力。同时，用乙醇替代乙醚可降低残留溶剂的毒副作用，利用超声处理使脂质体形成均匀的分散体。为获得稳定性更高的脂质体，利用等渗缓冲溶液进行渗透压平衡处理。制剂实验结果表明，经渗透平衡处理后脂质体稳定性大幅提高，布比卡因渗漏减小，可保持药物稳定释放，并具备缓释作用 [13] 。 2.3 溶剂注入法   溶剂注入法（solvent injection）是将溶有脂质体膜材料的有机相（如乙醇、乙醚等）快速注入到溶有药物的大量水相中，再经超声等方法制备载药脂质体。当少量的有机相注入大量水相中被快速稀释，而有机相中脂质体膜材料快速形成载药SUV脂质体。  同薄膜分散法或逆相蒸发法相比，溶剂注入法具有以下优点：1）溶剂注入法操作步骤简便；2）溶剂注入法采用的有机溶剂一般为乙醇等，残留有机溶剂毒性相对小；3）溶剂注入法制备环境温和，对于敏感性脂质体膜材料或药物成分影响小，适合于工业化量产。  由于脂质体膜材料在乙醇中溶解度较低，且对于混合相中乙醇浓度还有明确的限定，因此也会导致成品脂质体浓度较低，并且在水相体系中残留乙醇难以有效去除，以上均是溶剂注入法存在的不足之处 [14]。为应对以上溶剂注入法的缺点，需要利用复合溶剂增溶处理以帮助溶解脂质体膜材料。以制备严重急性呼吸综合征冠状病毒 2（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）免疫原性脂质体为例，利用乙醇注射法制备空白脂 质 体， 并 在 高 温 磷 酸 缓 冲 盐 溶 液（phosphate buffered saline，PBS）下进行加压挤出处理，最后利用 PBS 多次透析去除残留乙醇可制备得到均一的脂质体 [15]。 2.4 pH 梯度法   pH 梯度法（pH gradient）是利用 pH 梯度差异以实现药物离子型、分子型状态转化，使得药物被包封于脂质体的高效包封方法，pH 梯度法也称为主动包封方法。pH 梯度法主要原理是利用制造脂质体膜内外水相酸碱度差异（pH 梯度），使得处于外水相中性环境中药物以分子型跨膜进入脂质体囊泡，随后药物在囊泡内部的酸性环境作用下被质子化后变为离子型，而离子型药物难以再次跨膜回到外水相中，从而可制备高包封率的载药脂质体。 pH 梯度法制备载药脂质体的主要步骤包括，在pH 值较低（如 pH 4）的水相体系中水化制备空白脂质体，并利用弱碱性溶剂将外水相体系 pH 值调至中性或弱碱性，而此时脂质体内水相仍保持弱酸性环境，将药物溶解于与脂质体外水相相同 pH 值的缓冲溶液体系中，随后加入到空白脂质体混悬液中混合、孵育，即可得到高包封率的载药脂质体（见图 2）。研究显示，采用 pH 梯度法制备的阿糖胞苷/柔红霉素脂质体，可同时实现 2 种药物的高效包封 [16]。 2.5 硫酸铵梯度法  硫酸铵梯度法（ammonium sulfate gradient）是利用硫酸铵梯度差异以实现药物离子型、分子型状态转化或在脂质体囊内形成药物沉淀，使得药物被包封于脂质体的高效包封方法，该法也是一种主动包封方法。硫酸铵梯度法的主要原理是制造脂质体膜内外水相硫酸铵梯度差异，使处于外水相环境中药物以分子型跨膜进入脂质体囊泡，随后药物在囊泡内部的硫酸铵环境中被离子化或形成胶状沉淀，从而使离子型药物或沉淀药物难以再次跨膜回到外水相中，从而可制备高包封率的载药脂质体。 硫酸铵梯度法制备载药脂质体的主要步骤包括，通过薄膜分散法制备脂膜，采用一定浓度的硫酸铵溶液水化脂膜制备空白脂质体，再通过透析除去外水相中的硫酸铵后，形成脂质体膜内外的硫酸铵梯度差，与溶有药物的水溶液共孵育，即可得到载药脂质体。以盐酸阿霉素脂质体为例，先采用薄膜分散法制备脂质膜，以硫酸铵溶液（如 250 mmol · L-1） 水化脂膜制备空白脂质体，将脂质体通过超声、挤压匀化处理，得到直径约为 100 nm 的空白脂质体，透析去除脂质体膜外部环境的硫酸铵；另将盐酸阿霉素溶于水中，盐酸阿霉素在近中性水中存在 2 种形式，分子型（DOX-2NH2）与离子型（DOX-2NH3+）动态平衡，分子型碱基可以跨越脂质体膜，进入脂质体膜内部，并在脂质体膜内部与硫酸根结合，产生硫酸阿霉素凝胶样沉淀，实现高包封率的阿霉素脂质体（见图 3）。此外，硫酸铵梯度法也为脂质体内水相提供了 pH 梯度，其包封原理类似于前述 pH 梯度法。然而，盐酸阿霉素包封后药物的沉淀现象与聚集原理较 pH 梯度法有较大的差异性。 2.6 醋酸钙梯度法 醋酸钙梯度法（calcium acetate gradient loading）是一种利用醋酸钙浓度梯度以实现药物离子型、分子型状态转化，使得药物被包封于脂质体的高效包封方法，该法也是一种主动包封方法。  醋酸钙梯度法制备载药脂质体的主要步骤包括，通过薄膜分散法制备脂膜，采用一定浓度的醋酸钙溶液水化脂膜制备空白脂质体，再通过透析除去外水相中的醋酸钙后，形成脂质体膜内外的醋酸钙梯度差，再将其与药物水溶液共孵育，即可得到载药脂质体。该种包封方法，在脂质体膜内外水相间存在 pH 和醋酸钙双重梯度，其包封载药原理与pH 梯度法均一致，即分子型药物可自由跨越脂膜，离子型药物不能自由跨越脂膜，通过人工调控介质中化学梯度，使得药物以分子型状态进入到脂质体膜内然后离子化，以免其再次返回到脂质体膜外，实现药物的高效包封。醋酸钙梯度法适用于弱酸性药物的主动包载。 2.7 离子载体包封法 离子载体（ionophore）包封法是一种利用离子载体使阳离子向脂质体膜外运动而质子向膜内运动，使得脂质体囊泡内酸化以创建pH梯度的一种方法，从而实现药物离子型、分子型状态转化，进而使得药物被包封于脂质体的高效包封方法，该法也是一种主动包封方法。  例如，利用离子载体 A23187（calcimycin，CAS 号：52665-69-7）和尼日利亚菌素，可实现长春新碱或环丙沙星的高效包封，其 LUV 由二硬脂酰磷脂酰胆碱/胆固醇（DSPC/Chol，55 : 45 mol/mol）组成，将脂质体通过葡聚糖凝胶柱处理，使脂质体膜内外呈现跨膜盐梯度（内部溶液：300 mmol · L-1 MnSO4 或 K2SO4；膜外部溶液：300 mmol · L-1 蔗糖）， 加入药物孵育，随后加入离子载体（溶于乙醇）可 使被捕获的阳离子向外运动、质子向内运动并耦合， 从而使脂质体囊泡内部酸化。膜外部弱碱性分子型 药物跨膜后转化为离子型药物，其原理与 pH 梯度 包封方法相同，药物包封率接近 100%。载药后，离 子载体可通过凝胶排阻色谱、透析或用生物珠处理 去除 [17]。对于涉及二价阳离子的实验，需加入螯合 剂乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）（见图 4）。 2.8 钙融合法 钙融合法（Ca2+ induced fusion）是在制备阴离子型脂质体过程中加入一定浓度的 Ca2+，该法可在较为温和的环境包封DNA、RNA和酶等生物大分子。研究显示，在脂质体中添加 Ca2+ 后往往会发生脂膜黏附、破裂和塌陷等现象，最终导致形成粒径较大的多层脂质体 [18]。当加入 Ca2+ 得到多层脂质体后，再向体系中加入 EDTA，可得到 LUV。钙融合法适用于核酸和蛋白质药物的脂质体包封。 2.9 其他方法 为应对脂质体工业生产中批间均匀性问题，研究人员进一步研究发展了交叉注流制备法、超临界CO2 流体制备法和微流控制备法等。如在乙醇注入制备法基础上，发展了交叉流注射技术。研究显示，与乙醇注入法相比，交叉流注射制备法在无菌性、质量控制和大规模生产方面均有长足的进步。对于超临界流体制备法而言，进入超临界流体状态物料具备液体和气体 2 种物态特性，一方面具备低表面张力、低黏度及高扩散性的气体状态性质，另一方面拥有高溶解力、高密度的液态特性。超临界流体制备法还具有廉价、溶剂对环境无害、粒度均匀、易灭菌和适合量产等优点 [19]。  3 脂质体的功能化 3.1 长循环脂质体 长循环脂质体（long circulating liposome）也称隐形脂质体，在普通脂质体表面修饰以 PEG 等亲水性物质可制备长循环脂质体。普通脂质体表面经过PEG 修饰后，PEG 在水相环境中于脂质体表面形成致密水层结构，可有效稳定脂质双层结构并产生空间位阻，从而抑制蛋白质吸附并减少吞噬细胞识别，避免脂质体在血液循环中被单核细胞吞噬系统快速清除，进而延长血循环时间，有利于脂质体有效地到达病变部位。研究显示，在脂质体总脂质中添加5 mol% PEG- 脂质，可显著延长血液循环时间 [20]。然而，PEG 化的长循环脂质体可能也会产生阻碍细胞摄取、脂质体所载药物被溶酶体降解、不能靶向至特定细胞等问题。尽管如此，长循环脂质体对于实体瘤部位药物被动靶向递送是有利的 [21]。 3.2 配体脂质体 配体脂质体（ligand-modified liposome）系将靶向性配体修饰于脂质体表面，可使脂质体识别并结合到特定病变细胞或组织，从而增强所携载药物的治疗效果。通常采用靶向分子、靶向肽等配体对脂质体进行功能化修饰。  以肿瘤细胞线粒体为靶点，将线粒体靶向性探针分子三苯基膦（triphenylphosphine，TPP）与羧基聚乙二醇 1000 维生素 E 琥珀酸酯（D-α-tocopheryl polyethylene glycol 1000 succinate，TPGS1000）连接，合成线粒体靶向性脂质体载体材料 TPGS1000-TPP，以紫杉醇为模型药物，构建线粒体靶向性紫杉醇脂质体，可将药物靶向性递送至线粒体，在线粒体水平诱导耐药性肿瘤细胞的凋亡，杀伤耐药肿瘤细胞，从而克服肿瘤的多药耐药性 [22]。  将蛋白转导肽（PTDHIV-1）靶向性分子修饰脂质体表面，可通过受体介导和吸附介导的方式实现细胞跨膜转运。将该蛋白转导肽修饰于脂质体表面，制备靶向性表阿霉素塞来昔布脂质体，能够通过被动靶向至肿瘤区域，并通过蛋白转导肽将脂质体高效转运进入肿瘤细胞，发挥化疗药表阿霉素和调节剂塞来昔布的药理作用，在杀伤肿瘤细胞的同时，清除肿瘤拟态血管，提高侵袭性肿瘤的治疗效果，防止治疗后复发 [23]。 3.3 抗体脂质体 抗体脂质体（antibody-modified liposome）是将单克隆抗体修饰到脂质体表面，形成具有主动靶向性抗体脂质体。单克隆抗体可选择性地与特定受体进行特异性结合，从而实现靶向性。  将抗碳酸酐酶 IX（carbonic anhydrase IX）单克隆抗体（CA-IX mAb）靶向性分子修饰于载雷公藤内酯脂质体表面，可介导靶向性脂质体与肺癌细胞表面 CA-IX 相互识别结合、增强肿瘤细胞对于脂质体的摄取。通过在脂质体表面修饰靶向性单克隆抗体分子，能够主动靶向到肺癌组织区域，在单克隆抗体与肺癌细胞膜表面 CA-IX 识别结合后转运进入肿瘤细胞，并释放雷公藤内酯，可杀伤肿瘤细胞的同时，降低药物对于患者其他组织的毒性 [24]。  3.4 响应性脂质体 响应性脂质体是指当受到生理和病理信号变化而产生响应性变化的功能化脂质体。常见的生理和病理信号变化有 pH、温度等变化。 pH 响应性脂质体（pH responsive liposome）在正常人体体液环境（pH 7.4）中保持稳定，当脂质体通过主动或被动靶向运载至肿瘤组织处，在肿瘤微环境中酸度增加（pH ＜ 6），触发脂质体膜解聚，而释放出包载药物，从而发挥肿瘤杀伤效应。如以pH 响应性肽 H7K(R2)2 作为配体，构建 pH 响应性阿霉素脂质体，可增强肿瘤细胞内化，并在肿瘤细胞内快速释放药物，可有效杀伤肿瘤细胞 [25]。  温 度 响 应 性 脂 质 体（temperature responsive liposome）可在人体正常体温（37℃）时保持稳定，递送至肿瘤组织中的脂质体，通过局部红外加热，引起温敏脂质体解聚，并快速释放出药物，发挥疗效。例如，采用二棕榈酰磷脂酰胆碱、单棕榈酰磷脂酰胆碱和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-PEG2000 这 3 种脂质体膜材料构建的温敏型阿霉素脂质体，利用红外加热使肿瘤组织的血管升温，可快速释放出其包封的药物 [26]。 3.5 细胞仿生脂质体 细胞仿生脂质体（cell bionic liposome）是指将提取的细胞膜成分融合修饰于脂质体表面，由此在保留脂质体功能的基础上获得细胞的部分功能，如同源靶向功能、抗原呈递功能和免疫激活功能等。 将红细胞膜与甘露糖修饰脂质体得到红细胞仿生脂质体 [27]，将红细胞膜融合修饰到脂质体膜，可赋予脂质体以红细胞的长循环效应、脾脏组织靶向能力，脂质体膜上修饰的甘露糖可与脾脏中抗原呈递细胞上甘露糖受体相互识别结合并激活 T 淋巴细胞，发挥抗肿瘤效应。 提取肿瘤细胞膜成分融合修饰于脂质体表面，用于刺激树突状细胞成熟，模拟内源性免疫激活机制 [28]，提升抗原呈递细胞的抗原呈递能力，进而激活 T 淋巴细胞，发挥抗肿瘤效应。  然而，细胞膜融合仿生尚缺乏统一成熟的制备技术和可控的质量标准，细胞膜成分融合利用程度较低（约为 20%）[29]，限制了细胞仿生脂质体的产业化进程。 4 脂质体的开发与应用 4.1 已上市的脂质体药物 基于对美国食品和药品管理局（Food and Drug Administration，FDA）和欧洲药品管理局（European Medicines Agency，EMA）批准的脂质体药物数据分析，截至 2024 年 6 月，总计有 16 款原研脂质体药物上市，其主要临床适应证有肿瘤、真菌感染、术后疼痛等（见表 1）。 4.2 临床试验中的脂质体药物 基于美国临床试验注册中心（ClinicalTrials.gov）网站的数据，截至 2024 年 6 月，进入Ⅰ期临床研究有 552 个脂质体品种，其中有 486 项用于治疗晚期或转移期实体瘤或非实体瘤，21 项用于治疗细菌、真菌引起的深部感染，15 项用于手术麻醉、阵痛及其相关药代动力学研究，其余 30 项用于获得性免疫缺陷综合征（acquired immune deficiency syndrome，AIDS）、心血管疾病、干眼症等其他疾病的治疗。如治疗性核素铼（188Re）脂质体，主要用于治疗原发性实体瘤。由于核素具有放射性兼具成像作用，该产品也具有造影功能。然而研究发现，该脂质体的缺点是其在患者肝脏、脾脏中显现出放射性物质积累，这也引起了研究人员的关注。  进入Ⅱ期临床研究的脂质体药物共有 1107 个品种，其中有 976 项用于治疗晚期或转移期实体瘤或非实体瘤，55 项用于治疗细菌、真菌引起的深部感染，33 项用于治疗急性疼痛和术后疼痛，其余 43项用于 AIDS、心血管疾病、干眼症等其他疾病的治疗。如盐酸米托蒽醌脂质体，其在Ⅱ期临床试验中主要考察其治疗晚期实体瘤、T 细胞淋巴瘤的疗效，同时也评估其对患者心脏组织的安全性。  进入Ⅲ期临床研究的脂质体药物共有 518 个品种，旨在对脂质体药物进行多样本、随机、双盲试验，以确证其安全性与治疗效果，其中有 399 项用于治疗晚期或转移期实体瘤或非实体瘤，55 项用于治疗细菌、真菌引起的深部感染，53 项用于治疗急性疼痛和术后疼痛，其余 11 项用于 AIDS、贫血、心力衰竭等其他疾病的治疗。如拓扑替康脂质体（topotecan liposome）治疗小细胞肺癌、卵巢癌和其他晚期实体瘤的研究，利用剂量递增试验直至最大耐受剂量，观察施用不同剂量时受试人群的剂量限制性毒性，以此来确定该脂质体药物的最大耐受剂量、安全性、药代动力学。  进入Ⅳ期临床研究的脂质体药物共有 284 个品种，其中 188 项用于治疗急性疼痛和术后疼痛，64项用于治疗晚期或转移期实体瘤或非实体瘤，其余32 项用于治疗细菌、真菌引起的深部感染及贫血等疾病。目前主要针对已上市的脂质体药物对不同肿瘤类型的有效性研究，如观察紫杉醇脂质体对转移性乳腺癌的疗效，研究伊立替康脂质体对小细胞肺癌的疗效等。 5 结语与展望 经过 60 年的研究和发展，脂质体在开发新型脂质材料、发展新的高效药物包封方法、开发功能性脂质体等领域均取得长足进步。本文仅对目前成熟度较高的脂质体关键技术进行综述，总结了现今脂质体制备的主要方法，包括薄膜分散法、逆向蒸发法、溶剂注入法、pH 梯度法、硫酸铵梯度法、醋酸钙梯度法、离子载体法、钙融合法以及改进的适合规模化生产的其他方法，并且探讨各种制备方法的优势和不足。目前已有 16 种脂质体原研药物经 FDA 或 EMA 批准上市，也有千余项脂质体产品处于临床试验阶段。鉴于脂质体药物载体具有安全性高、全身毒性低、血液循环时间长、病灶部位靶向性强、可进行功能性修饰等优势，脂质体在肿瘤、感染、疼痛、罕见病等重大疾病根治性策略方面展示出广阔的应用前景。相信随着科学技术的不断进步，未来也会有更多新型脂质体药物用于临床治疗，脂质体有望成为用于重大疾病治疗的优质药物载体。 参考文献： [1]  Bangham A D, Standish M M, Watkins J C. 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