Shenzhen Institute for Drug Control

点击上方蓝字 关注我们 这里是研之有理 专注医学核心期刊文献深度解析，为临床医师、医学生、科研工作者筛选前沿成果、拆解研究逻辑、提炼实用结论。每天5分钟，高效吸收期刊精华，助力学术积累与临床实践。 大家好，今天为大家带来的是2026年1月2日，来自中山大学的洪艳军团队发表于Gut Microbes的一篇研究论文。该研究首次揭示了他莫昔芬肝毒性的肠道菌群机制，并提出了猪去氧胆酸作为潜在辅助治疗策略的新思路。 文献信息： 原文标题：《Tamoxifen induced hepatotoxicity via gut microbiota-mediated hyodeoxycholic acid depletion and Farnesoid X receptor signaling disruption》 DOI号：10.1080/19490976.2025.2610077 一、摘要 他莫昔芬是一种广泛用于乳腺癌治疗的雌激素受体调节剂。然而，该药在临床中表现出显著的肝毒性，影响近50%的患者，从而限制了其临床应用。他莫昔芬所致肝损伤的具体机制迄今尚不清楚。本研究阐明了他莫昔芬相关肝毒性中肠道菌群的机制性作用。 他莫昔芬给药可诱发小鼠显著的肝损伤和肠道菌群失调，表现为大肠杆菌丰度升高及毛螺菌科NK4A136群减少。这些菌群变化导致粪便总胆汁酸水平降低，尤以猪去氧胆酸下降最为明显，且其水平与他莫昔芬诱导的肝损伤呈负相关。此外，他莫昔芬通过增强肠道法尼醇X受体活性，同时经非肠道FXR替代机制刺激肝脏胆汁酸合成，从而扰乱胆汁酸稳态。 值得注意的是，肠道菌群耗竭可逆转上述效应，证明菌群在调节他莫昔芬致肝损伤中的肠-肝FXR轴方面发挥关键作用。粪便菌群移植实验进一步证实，他莫昔芬通过菌群依赖机制直接刺激肝脏胆汁酸合成。肠-肝胆汁酸-FXR轴的破坏导致肠肝胆汁酸循环障碍，促成他莫昔芬给药相关的肝毒性。 重要的是，补充猪去氧胆酸可恢复肠-肝胆汁酸-FXR轴并缓解他莫昔芬诱导的肝损伤。这些发现凸显了他莫昔芬、肠道菌群与胆汁酸代谢之间的复杂关系，提示以猪去氧胆酸靶向肠-肝FXR轴可能为缓解他莫昔芬相关肝损伤提供有前景的治疗策略。 二、引言 乳腺癌是全球最常见的恶性肿瘤，其中雌激素受体阳性乳腺癌为主要亚型，约占全部病例的70%。他莫昔芬是一种选择性雌激素受体调节剂，广泛用于乳腺癌的一线治疗。然而，他莫昔芬治疗与显著的肝损伤相关，在临床中影响30.4%–56.2%的患者。尽管他莫昔芬诱导的肝毒性已被认为与活性氧生成增加有关，但其具体潜在机制迄今尚未完全阐明。 近期，越来越多的证据表明药物-肠道菌群相互作用在治疗结局中发挥关键作用。药物可调节肠道菌群组成，而肠道菌群反过来也可影响药物疗效与毒性。值得注意的是，尽管他莫昔芬是一种靶向人体的药物，但其表现出广谱杀菌活性。此外，特定细菌可通过影响宿主脂肪酸代谢来调节他莫昔芬诱导的氧化应激。鉴于他莫昔芬与肠道菌群之间存在的这些潜在相互作用，本研究推测肠道菌群可能在调节他莫昔芬相关肝损伤中发挥关键作用。 肠-肝轴是指肝脏与肠道之间的双向通讯，涉及肠道微生物的相互作用，并受遗传和环境因素调控。营养物质、细菌产物和胆汁酸在调节宿主代谢和免疫应答中发挥关键作用，进而塑造肠道菌群的组成与功能。细菌代谢产物，特别是胆汁酸，作为关键信号分子影响肠-肝轴，从而调节肠道和肝脏功能。这种宿主-微生物对话的破坏已被证实与多种肝脏疾病的发病机制有关，包括药物性肝损伤。 胆汁酸可通过肠-肝轴有效调节自身的代谢与转运。胆汁酸代谢、转运和信号传导的损害可导致胆汁淤积性肝损伤，其特征为线粒体功能障碍及随之而来的氧化应激。基于这些发现，本研究推测他莫昔芬可能扰乱肠道菌群稳态、损害肠-肝轴功能，最终导致肝毒性。 本研究旨在阐明肠道菌群在他莫昔芬诱导肝毒性中的机制性作用。首先，研究利用伪无菌小鼠模型证实，肠道菌群的缺失可减轻他莫昔芬诱导的肝脏氧化应激。16S rDNA测序结果显示，他莫昔芬显著改变了肠道菌群组成，表现为大肠杆菌丰度显著增加，而毛螺菌科NK4A136群明显减少。重要的是，这些菌群变化与次级胆汁酸生物合成途径的抑制显著相关。粪便胆汁酸分析进一步证实了这一密切关联：他莫昔芬暴露导致猪去氧胆酸水平下降，进而激活肠道FXR信号。 与此同时，改变的菌群反过来调节他莫昔芬对肝细胞的影响，增加下游肝脏胆汁酸的产生，该结果已通过粪便菌群移植实验验证。这些发现表明，他莫昔芬破坏肠-肝猪去氧胆酸-FXR轴，从而导致胆汁酸代谢紊乱。此外，补充猪去氧胆酸可逆转他莫昔芬在小鼠中的上述效应，恢复肠-肝胆汁酸-FXR轴并减轻肝脏氧化应激。综上，本研究强调了猪去氧胆酸在缓解他莫昔芬相关肝毒性方面的治疗潜力。 三、材料与方法 1. 实验动物 雌性C57BL/6J小鼠（6–7周龄）购自广东维通利华实验动物技术有限公司。所有动物饲养于12小时光照/黑暗循环环境中，自由进食饮水。为减少笼养效应并均衡肠道菌群组成，实验前小鼠合笼饲养3周。玉米芯垫料和饮用水每3–4天更换一次。所有实验在深圳市药品检验研究院完成，并遵循机构动物护理与使用委员会批准的方案（202209082）。 2. 他莫昔芬肝毒性小鼠模型的建立 他莫昔芬肝毒性模型（200 mg/kg）基于已发表研究并略作修改建立。简言之，将他莫昔芬溶解于0.5%羧甲基纤维素钠中，经口服给药。小鼠随机分为六组（n = 5–10），分别给予溶媒对照（0.5% CMC-Na）或他莫昔芬溶液（200 mg/kg），每日一次，持续4周、8周或16周：4周对照组、8周对照组、16周对照组、4周他莫昔芬组、8周他莫昔芬组和16周他莫昔芬组。 3. 抗生素处理实验 小鼠随机分为四组（n = 9–10）：WT对照组（野生型+溶媒）、WT他莫昔芬组（野生型+他莫昔芬）、ABX对照组（抗生素处理+溶媒）和ABX他莫昔芬组（抗生素处理+他莫昔芬）。为耗竭肠道菌群，ABX组饮用水中加入广谱抗生素混合物（1 g/L新霉素、1 g/L氨苄西林和0.5 g/L万古霉素），并每日口服灌胃2 mg甲硝唑。WT组在整个研究期间饮用正常水。经过3天抗生素预处理后，所有小鼠开始每日口服给予溶媒对照（0.5% CMC-Na）或他莫昔芬溶液（200 mg/kg），持续4周。 4. 粪便菌群移植 粪便菌群移植按照已发表方法进行，持续4周。小鼠随机分为两组（n = 10）：FMT对照组（接受WT对照供体菌群）和FMT他莫昔芬组（接受WT他莫昔芬供体菌群）。移植前，受体小鼠通过连续5天每日口服抗生素混合物（氨苄西林200 mg/kg、新霉素200 mg/kg、甲硝唑200 mg/kg和万古霉素100 mg/kg）进行肠道菌群耗竭。 为验证抗生素处理耗竭肠道菌群的效果，采用通用16S引物（正向：5′-TCCTACGGGAGGCAGCAGT-3′；反向：5′-GGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTT-3′）通过定量PCR检测总细菌载量。FMT制备时，将WT对照和WT他莫昔芬供体小鼠的新鲜粪便样本在含20%甘油的PBS中匀浆（20 mg粪便/mL），于4°C以100×g离心10分钟。收集所得粪便上清液，分装后于-80°C保存待用。 移植方案包括初始强化阶段，即连续3天每日口服200μL粪便上清液；随后进入维持阶段，在整个4周实验期间每2天给药一次。 5. 猪去氧胆酸和奥贝胆酸干预研究 经过12周对照或他莫昔芬处理后，小鼠进入额外的4周干预期，实验分组如下（n = 4–6）：（1）溶媒组：继续给予对照或他莫昔芬溶液及0.5% CMC-Na溶媒；（2）OCA组：给予对照或他莫昔芬溶液加OCA（10 mg/kg/天，溶于0.5% CMC-Na）；（3）HDCA/100 mg/kg组：给予对照或他莫昔芬溶液加猪去氧胆酸（溶于0.5% CMC-Na）；（4）HDCA/150 mg/kg组：给予对照或他莫昔芬溶液加猪去氧胆酸。所有溶液每日通过口服灌胃给药。OCA和猪去氧胆酸的剂量依据已发表研究选择。 6. 细菌β-葡萄糖醛酸酶靶向抑制 小鼠随机分为四组（n = 8）：对照-溶媒组、对照-GUSi组、他莫昔芬-溶媒组和他莫昔芬-GUSi组。按照已发表方案，将细菌GUS抑制剂（UNC10201652，MCE）溶于100% DMSO中（2 mg溶于200μL），然后用水稀释至20 mL，终浓度为0.1μg/μL。GUSi通过口服灌胃给药，持续4周，每日两次（每10小时一次，10μg/天）。溶媒组给予等体积的1% DMSO（每日两次，每次100μL）。 7. 生化检测 禁食12小时后，采集血样并于1000×g离心10分钟以获取血清。采用商品化试剂盒（南京建成生物工程研究所）定量检测血清碱性磷酸酶活性。肝脏脂质谱分析中，取肝组织样本检测甘油三酯和总胆固醇浓度（南京建成生物工程研究所）。 为评估氧化应激，将肝组织在冰浴缓冲液中匀浆，并于4°C以8000×g离心10分钟。收集所得上清液，使用商品化试剂盒（Solarbio，北京）按照制造商说明书测定还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽水平。通过计算GSH/GSSG比值进一步评估抗氧化活性。 8. 组织病理学 肝组织样本以4%多聚甲醛固定，石蜡包埋后进行苏木精-伊红染色。切片经苏木精和伊红染色后，使用Leica Aperio GT450扫描仪获取组织学图像。 免疫荧光检测中，将石蜡包埋的肠组织切成4μm厚切片，在二甲苯中脱蜡，并依次通过梯度乙醇系列复水。通过微波炉或水浴加热，在柠檬酸盐缓冲液（pH 6.0）中于95°C进行抗原修复15–20分钟。冷却至室温后，用PBS洗涤切片，以0.3% Triton X-100透化处理10–15分钟，并以5%牛血清白蛋白封闭1小时以减少非特异性结合。加入一抗（FXR，稀释比1:100，Abcam 129089），于4°C在湿盒中孵育过夜。洗涤后，用相应的荧光素标记二抗在室温避光条件下孵育1小时。以DAPI复染细胞核5分钟。切片以抗荧光淬灭封片剂封片，于荧光显微镜下观察。从每个样本的多个随机视野中采集图像。使用ImageJ软件定量荧光强度。 9. 16S rDNA基因测序 在无菌条件下收集盲肠内容物，立即冷冻于-80°C待分析。16S rDNA基因测序由上海美吉生物医药科技有限公司按照已发表方法完成。简言之，使用粪便DNA提取试剂盒（QIAGEN）根据制造商说明书提取微生物DNA。采用通用细菌引物338F（5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3′）和806R（5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′）扩增16S rDNA基因的V3–V4可变区。 扩增产物在2.0%琼脂糖凝胶上分离，并使用QIAquick PCR纯化试剂盒（QIAGEN）纯化。微生物DNA在Illumina MiSeq平台上测序，按照标准方案对连接接头的DNA片段进行进一步测序。16S扩增子分析的标准流程涉及将97%相似性阈值内的序列聚类为操作分类单元。原始序列数据随后使用美吉云平台进行处理。 10. 胆汁酸分析 称取约50 mg粪便样本，在5 mL冰甲醇（含10μL内标氯丙酰胺，10μg/mL）中匀浆。涡旋后，样本于4°C以14,000×g离心15分钟。收集上清液，真空干燥，以500μL 50%甲醇复溶。样本溶液经0.22μm滤膜过滤后进行LC-MS/MS分析。 胆汁酸分析使用Nexera LC-30系统（岛津）联用AB SCIEX 4500三重四极杆质谱仪。色谱分离采用ACQUITY HSS T3色谱柱（100× 2.1 mm i.d., 1.8μm, Waters），柱温40°C，流速0.3 mL/min。流动相A为含10 mM乙酸铵水溶液的20%乙腈，流动相B为含10 mM乙酸铵水溶液的80%乙腈。质谱参数设置如下：离子化模式为电喷雾负离子模式；毛细管电压4.5 kV；气源压力：GAS1（50 psi），GAS2（60 psi）；源温550°C；Curtain气30 psi；检测模式为多反应监测。 11. 胆盐水解酶活性测定 取新鲜粪便样本（55±5 mg），在250μL冰PBS（pH 7.4）中涡旋2分钟匀浆。细菌细胞通过超声处理（在冰浴中超声90秒，间隔30秒）裂解。裂解物于4°C以15,000 rpm离心30分钟，收集所得上清液用于进一步分析。使用Multiskan Sky微孔板分光光度计（Thermo Scientific）测定总蛋白浓度。样本以PBS稀释至1 mg/mL用于后续检测。 通过测定d4-CA的生成量评估胆盐水解酶活性。酶促反应在200μL乙酸钠缓冲液（3 mM，pH 5.2）中进行，含50μM d4-TCA作为底物和0.1 mg/mL蛋白工作液。37°C孵育20分钟后，反应通过干冰速冻立即终止。样本与100μL甲醇混合，于4°C以15,000 rpm离心20分钟。收集上清液测定BSH活性。采用上述LC-MS/MS方法定量d4-TCA向d4-CA的转化。 12. 定量实时PCR 使用传统TRIzol法从组织样本中提取总RNA，并以HifairⅡ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR（含gDNA digester）进行逆转录。使用Hieff qPCR SYBR Green Master Mix（High Rox Plus）在Applied Biosystems QuantStudio 5实时PCR系统上进行实时PCR。 13. 统计分析 所有定量数据以平均值±标准误表示。采用社会科学统计软件包（IBM，版本27）进行统计分析。组间比较采用独立样本t检验和单因素方差分析。统计学显著性设定为三个水平：p < 0.05、p < 0.01和p < 0.001。使用GraphPad Prism软件（版本9）进行数据可视化。 四、结果 1. 他莫昔芬治疗诱导小鼠肝损伤 他莫昔芬给药（4周、8周和16周）在小鼠中诱导了显著的肝损伤。与对照组相比，他莫昔芬处理小鼠的肝脏重量显著增加（图1A），并出现组织病理学改变，表现为肝索排列紊乱、显著的肝细胞空泡化和大量炎性细胞浸润（图1G–J）。此外，他莫昔芬处理还增加了脾脏和盲肠组织的重量（图1B,C）。 氧化应激已被确立为他莫昔芬介导肝毒性的关键机制。他莫昔芬给药显著降低肝脏GSH水平（图1D），同时GSH/GSSG比值明显降低（图1E,F）。他莫昔芬处理4周和8周后，肝脏GSH/GSSG比值较对照小鼠显著降低（图1F），提示早期氧化失衡。尽管16周他莫昔芬处理组小鼠该比值也有所下降，但与对照组相比差异无统计学意义（图1F）。这些发现表明，短期他莫昔芬暴露可诱导肝脏氧化应激，而长期暴露可能触发适应性抗氧化反应，部分恢复GSH池和氧化还原平衡。 2. 他莫昔芬以肠道菌群依赖方式诱导肝毒性 为探究肠道菌群在他莫昔芬介导肝损伤中的作用，进行了抗生素处理实验（图2A）。使用广谱抗生素混合物消除肠道微生物后，观察到他莫昔芬诱导的肝损伤显著减轻，表现为肝脏重量（图2B）和肝脏指数（图2C）显著降低。他莫昔芬引起的脾脏重量和脾脏指数也通过抗生素处理降低，盲肠组织重量也减少（图2D–G）。 组织病理学结果显示，抗生素处理后肝脏结构显著改善，表现为肝细胞肿胀和圆润程度减轻（图2K,L）。重要的是，抗生素干预调节了他莫昔芬处理小鼠的肝脏氧化应激标志物，同时降低GSH水平（图2H）和GSSG生成（图2I），导致GSH/GSSG比值降低（图2J）。这些发现表明，肠道菌群耗竭可缓解他莫昔芬诱导的氧化应激和肝毒性，凸显肠道细菌在他莫昔芬相关肝损伤中的关键作用。 3. 微生物β-葡萄糖醛酸酶不是他莫昔芬诱导肝损伤的核心驱动因素 肠道菌群因其广泛的代谢能力常被称为"第二肝脏"，在调节药物代谢和毒性中发挥关键作用。在肠腔内，微生物β-葡萄糖醛酸酶（GUS）可水解葡萄糖醛酸结合物，释放出母体化合物，从而促进其肠肝循环。这一过程是药物毒性的公认驱动因素——例如，GUS催化的SN-38（伊立替康活性代谢物）再活化可诱发严重胃肠道毒性。他莫昔芬及其活性代谢物主要通过肝脏葡萄糖醛酸化灭活，随后排入肠道。先前的体外研究已证明他莫昔芬-葡萄糖醛酸苷是微生物GUS酶的底物，提示微生物GUS活性可能调节他莫昔芬的清除和毒性。 为验证这一假说，研究考察了药理学抑制微生物GUS酶能否缓解他莫昔芬相关肝毒性。在他莫昔芬处理小鼠中，检测了粪便GUS活性并评估了GUS抑制剂的保护效果。出乎意料的是，他莫昔芬给药4周或8周后并未显著影响粪便GUS活性，而16周他莫昔芬暴露后观察到显著降低（补充图3B）。肠道菌群耗竭后，粪便GUS活性较野生型组显著降低（补充图3A）。此外，研究还评估了FMT受体小鼠的粪便GUS活性，但FMT对照组和FMT他莫昔芬组之间未检测到显著差异（补充图3I）。 而且，4周GUS抑制剂处理未能缓解他莫昔芬诱导的肝损伤，表现为肝脏重量增加、肝脏指数、血清ALP水平和肝脏空泡化均无明显变化（补充图3D–H）。综合这些发现，微生物GUS不太可能是他莫昔芬诱导肝毒性的主要驱动因素，提示需要进一步探究其他微生物因素。 4. 他莫昔芬诱导小鼠肠道菌群失调 为确定他莫昔芬诱导肝毒性中的其他微生物驱动因素，进行了16S rDNA测序以全面表征他莫昔芬诱导的肠道菌群组成改变。他莫昔芬处理显著降低了α多样性，表现为Chao指数（图3A）和Ace指数（图3B）降低。通过主坐标分析（PCoA）进行的β多样性分析显示，他莫昔芬处理组与对照组之间的微生物组成存在差异（图3C）。 他莫昔芬给药引起肠道菌群组成的显著改变，与对照组相比，革兰氏阳性菌减少，革兰氏阴性菌增加（图3I）。在门水平上，厚壁菌门和拟杆菌门仍占主导地位（图3D），但他莫昔芬处理特异性降低了厚壁菌门丰度，导致厚壁菌门/拟杆菌门比值下降（图3H），这是公认的菌群失调指标。值得注意的是，毛螺菌科（厚壁菌门的一个特定分类群）在各分类水平上的相对丰度均下降（图3E–G）。相反，疣微菌门和变形菌门在他莫昔芬处理后显著增加（图3D）。在科、属和种水平上，艾克曼菌科和肠杆菌科的相对丰度也显著升高（图3E–G）。这些发现表明，他莫昔芬对肠道微生物组成具有显著影响。 5. 他莫昔芬下调次级胆汁酸生物合成途径 为研究他莫昔芬诱导肠道菌群失调的功能后果，进行了KEGG通路分析（图4A）。虽然他莫昔芬处理上调了鞘脂和甘油磷脂代谢（图4B），但同时下调了多条关键通路，包括脂肪酸生物合成、甘油脂代谢，以及最显著的次级胆汁酸生物合成（图4C）。 相关性分析显示，次级胆汁酸生物合成通路与特定毛螺菌科分类群（包括毛螺菌科_NK4A136_群、unclassified_f_毛螺菌科和norank_f_毛螺菌科属）呈强正相关（图4G），这些分类群已知可通过依赖胆盐水解酶的去结合反应介导次级胆汁酸转化。重要的是，他莫昔芬给药显著抑制了粪便胆盐水解酶活性（图4D），并抑制了后续次级胆汁酸转化关键酶的基因表达，包括3-脱氢胆汁酸Δ4,6-还原酶（图4E）和7α-羟基类固醇脱氢酶（图4F）。 综合这些发现表明，他莫昔芬破坏了次级胆汁酸生物合成途径，这可能归因于毛螺菌科各属的耗竭。 6. 他莫昔芬破坏微生物依赖的猪去氧胆酸生成 肠肝循环通过高效回收胆汁酸至肝脏并将剩余部分排入粪便，有效维持胆汁酸稳态。胆汁酸谱分析显示，他莫昔芬处理显著改变了粪便胆汁酸组成，次级胆汁酸水平明显降低（图5A–O）。此外，他莫昔芬诱导粪便总胆汁酸浓度显著下降（图5C,H,M及补充图1C），这与肝脏氧化应激密切相关（补充图1D）。相比之下，肝脏脂质谱基本保持不变（补充图1A和B），仅16周暴露后总胆固醇水平下降。 粪便胆汁酸分析显示，去结合胆汁酸占主导地位，包括初级胆汁酸（α-鼠胆酸、β-鼠胆酸）和次级胆汁酸（脱氧胆酸、ω-鼠胆酸和猪去氧胆酸）（图7A,D,E）。这些去结合胆汁酸疏水性更强，有利于粪便排泄。他莫昔芬给药显著降低了去结合/结合胆汁酸比值（图5B,G,L），提示粪便胆汁酸排泄减少。 在给药4周期间，他莫昔芬显著诱导ω-鼠胆酸和猪去氧胆酸耗竭（图6A,B和7A），同时增加β-鼠胆酸和牛磺酸-β-鼠胆酸水平。ω-鼠胆酸是β-鼠胆酸经肠道微生物C6-差向异构化生成的关键代谢物，可进一步经7α-脱羟基化形成猪去氧胆酸（图7C）。他莫昔芬对胆盐水解酶活性的抑制可能损害了牛磺酸-β-鼠胆酸向游离β-鼠胆酸的去结合，从而减少ω-鼠胆酸和猪去氧胆酸的生成。长期他莫昔芬处理（8周和16周）降低了牛磺酸-β-鼠胆酸和β-鼠胆酸水平（图6C–F），从而限制了ω-鼠胆酸和猪去氧胆酸合成的底物供应（图7D,E）。 重要的是，相关性分析表明猪去氧胆酸水平与关键肝脏抗氧化标志物（GSH和GSH/GSSG比值）之间存在强正相关（补充图1D）。此外，相关性分析揭示了特定微生物分类群与胆汁酸谱之间的显著关联（补充图2B）。值得注意的是，毛螺菌科NK4A136群与猪去氧胆酸浓度呈强正相关，而大肠杆菌与猪去氧胆酸呈负相关（补充图2B）。这些发现表明，他莫昔芬显著诱导微生物猪去氧胆酸耗竭，直接导致肝脏氧化应激。 7. 他莫昔芬扰乱肠-肝胆汁酸-FXR轴 胆汁酸主要通过调节FXR活性发挥其生理效应，FXR在肠道和肝脏组织中均高表达。由于猪去氧胆酸是已知可调控肝脏胆汁酸合成的肠道FXR信号抑制剂，本研究探究了他莫昔芬诱导肝毒性是否涉及肠-肝胆汁酸-FXR轴的破坏。 在他莫昔芬给药初始4周内，观察到肠道FXR显著激活（图7G）。肠道FXR激活与肝脏疾病相关，因其可增加胆汁酸蓄积。长期他莫昔芬处理（8周和16周）后，肠道FXR信号降低至对照水平（图7I,K）。肠道FXR蛋白相对表达量在4周他莫昔芬处理时显著增加，随后在长期给药期间下降（图8）。在4周时，FXR激活可能代表对早期胆汁酸失调和他莫昔芬处理后初级胆汁酸短暂蓄积的代偿反应。鉴于肠道总胆汁酸池逐渐减少，FXR信号通路最初恢复正常，随后在后期（8–16周）下降。 有趣的是，调控肝脏胆汁酸合成的关键酶显著上调（图7F）。这种肝脏胆汁酸合成的高激活状态在更长处理时间（8–16周）内持续存在，CYP8B1和CYP7B1保持升高（图7H,J），表明他莫昔芬通过FXR非依赖通路的代偿性激活对胆汁酸代谢产生持续影响。尽管肝脏胆汁酸生成增强，但粪便胆汁酸排泄显著减少，提示肠肝胆汁酸循环障碍。这种代谢失调进一步通过升高的ALP水平（图7B，胆汁淤积的临床标志物）得到证实。综合这些结果表明，他莫昔芬诱导的肝损伤涉及以复杂微生物-胆汁酸-FXR信号为特征的肠-肝轴破坏。 8. 他莫昔芬诱导的肠-肝胆汁酸-FXR轴破坏具有菌群依赖性 为探究肠道菌群在他莫昔芬诱导的肠-肝胆汁酸-FXR轴破坏中的作用，在抗生素处理小鼠中进行了粪便胆汁酸谱分析和FXR信号通路检测。结果显示，抗生素给药显著升高结合胆汁酸水平（图9A,B），粪便中牛磺酸-β-鼠胆酸显著增加（图9E,F）。鉴于牛磺酸-β-鼠胆酸是公认的肠道FXR拮抗剂，其蓄积抑制成纤维细胞生长因子15表达，从而刺激肝脏胆汁酸合成。 值得注意的是，肠道菌群耗竭减弱了肠道FXR激活，尤其是在他莫昔芬处理小鼠中（图9D），这可能归因于粪便胆汁酸组成的显著改变促进了牛磺酸-β-鼠胆酸蓄积（图9E,F）。有趣的是，抗生素处理抵消了他莫昔芬诱导的肝脏胆汁酸合成，表现为肝脏关键生物合成酶（CYP7A1、CYP8B1、CYP27A1和CYP7B1）的下调（图9C）。这些发现提示，他莫昔芬诱导的肝脏胆汁酸合成可能由额外的菌群依赖机制介导。 为进一步证实肠道菌群在他莫昔芬介导的肠-肝胆汁酸-FXR轴破坏中的作用，将来自对照组和他莫昔芬处理组供体的菌群移植到抗生素预处理的受体小鼠中（图9G）。移植前，抗生素处理显著降低了盲肠样本中的总细菌载量（补充图4），证明有效清除了大部分肠道菌群。 引人注目的是，来自他莫昔芬组的肠道菌群在受体小鼠中重现了与供体小鼠相似的改变，包括盲肠重量减少（图9J）和肠道FXR信号激活增强（图9L）。尽管肠道FXR激活，FMT受体的肝脏胆汁酸合成能力显著降低，表现为CYP8B1、CYP27A1和CYP7B1下调；然而，肝脏中CYP7A1表达上调（图9K）。因此，他莫昔芬可能直接作为刺激信号作用于肝细胞，增强下游胆汁酸生成，这一过程受肠道菌群影响。 综合这些发现表明，他莫昔芬-微生物相互作用通过特定机制途径扰乱肠-肝轴：一方面，他莫昔芬诱导的肠道菌群失调减少特定胆汁酸（如猪去氧胆酸）的生成，增强肠道FXR激活；另一方面，改变的菌群反过来调节他莫昔芬对肝细胞的影响，上调胆汁酸合成酶，提示存在非肠道FXR机制。 9. 猪去氧胆酸通过肠-肝胆汁酸-FXR轴缓解他莫昔芬诱导的肝损伤 越来越多的证据表明，猪去氧胆酸通过调节肠-肝FXR轴成为治疗肝脏疾病的有前景药物。本研究进一步探究了猪去氧胆酸在他莫昔芬肝毒性中的治疗潜力。在对照组中，猪去氧胆酸处理未改变肝脏重量或形态（图10A,B和11A），也未影响脾脏或盲肠重量（图10C,D），表明基础条件下的生理扰动极小。有趣的是，猪去氧胆酸显著增强肝脏抗氧化活性，表现为肝脏GSH/GSSG比值升高（图10E–G）。 值得注意的是，在他莫昔芬处理小鼠中，猪去氧胆酸发挥显著保护作用。具体而言，猪去氧胆酸补充明显缓解氧化应激并降低血清ALP水平，改善肝脏胆汁酸超负荷（图10M–P）。组织病理学分析证实，猪去氧胆酸处理减轻了他莫昔芬诱导的肝脏形态学改变，减少肝脏空泡化（图10J和11A）。这些发现共同证明猪去氧胆酸对他莫昔芬诱导肝损伤的保护作用。 研究进一步评估了猪去氧胆酸对FXR信号通路的影响。猪去氧胆酸对肠道FXR信号表现出剂量依赖性的矛盾作用：在100 mg/kg剂量下作为拮抗剂，在150 mg/kg剂量下发挥激动剂样作用（图11F–I），这与近期报道的高剂量猪去氧胆酸通过FXR过度激活诱导细胞毒性一致。有趣的是，研究发现两个剂量（100和150 mg/kg）的猪去氧胆酸均可恢复他莫昔芬扰乱的肝脏胆汁酸合成，下调关键肝脏胆汁酸合成酶（CYP7A1、CYP8B1、CYP27A1和CYP7B1）（图11B–E,J–M）。这些发现提示，猪去氧胆酸减少肝脏胆汁酸过度产生的作用可能依赖于额外的调节机制。 已有研究表明，猪去氧胆酸可促进与胆汁酸代谢相关的细菌生长，特别是毛螺菌科NK4A136群。这种微生物组成改变改变了粪便胆汁酸池，增加总胆汁酸和次级胆汁酸同时降低初级胆汁酸水平。相反，他莫昔芬给药后，小鼠表现出大肠杆菌的显著富集，该菌与保护性毛螺菌科NK4A136群和次级胆汁酸生物合成通路均呈负相关。他莫昔芬诱导的肝脏胆汁酸过度产生可能通过特定细菌（如大肠杆菌）的增殖介导，而抗生素或猪去氧胆酸处理可抑制该菌。 这些发现揭示，100 mg/kg剂量的猪去氧胆酸通过抑制肠道FXR激活和调节肝脏胆汁酸合成有效保护他莫昔芬诱导的肝损伤，可能以菌群依赖方式发挥作用。 奥贝胆酸是一种临床批准的半合成胆汁酸类似物，用于治疗胆汁淤积性肝病。本研究采用奥贝胆酸验证肠-肝胆汁酸-FXR轴在他莫昔芬诱导肝毒性中的关键作用。结果显示，奥贝胆酸处理显著缓解了他莫昔芬诱导的肝损伤（图11A），表现为肝脏氧化应激和血清ALP水平降低（图10I–P）。此外，奥贝胆酸通过抑制肠道FXR激活和下调肝脏胆汁酸合成恢复肠-肝胆汁酸-FXR轴（图11H–M）。这些发现揭示，改善肠-肝胆汁酸-FXR轴为治疗他莫昔芬诱导肝损伤提供了有前景的治疗途径。 五、讨论 药物性肝损伤是常见且临床意义重大的不良事件，在患者治疗中构成重大医学挑战。越来越多的证据强调肠道菌群在通过组成性和代谢性改变调节肝毒性方面发挥关键作用。药物相关肝毒性中特征性的肠道菌群改变通常表现为微生物多样性降低、厚壁菌门丰度减少和变形菌门升高。本研究发现，他莫昔芬处理在小鼠中重现了这种菌群失调改变。 具体而言，他莫昔芬给药显著耗竭有益菌毛螺菌科NK4A136群，同时富集致病性大肠杆菌。由此产生的菌群失调显著破坏了次级胆汁酸生物合成途径。具体而言，他莫昔芬给药显著抑制了微生物胆盐水解酶活性，从而损害牛磺酸-β-鼠胆酸向游离β-鼠胆酸的去结合，进而减少猪去氧胆酸的生成。本研究结果与近期将毛螺菌科NK4A136群确立为猪去氧胆酸水平关键微生物调节者的研究一致，将该细菌分类群定位为维持猪去氧胆酸水平和缓解他莫昔芬相关肝损伤的潜在益生菌。 胆汁淤积是药物性肝损伤的关键机制，其特征为胆汁酸转运和代谢障碍。胆汁淤积期间胆汁酸在肝脏蓄积引发线粒体功能障碍和氧化应激，驱动疾病发病机制。此外，本研究结果表明，他莫昔芬通过类似机制诱发平行的病理改变，表现为破坏胆汁酸代谢并诱导氧化应激（补充图1D）。此外，肠道菌群作为胆汁酸代谢的关键调节者，对胆汁淤积性肝病的发病和进展产生深远影响。 法尼醇X受体不仅作为胆汁酸稳态的主调节者，还与临床胆汁淤积的发生发展密切相关，凸显其作为胆汁淤积性肝病关键治疗靶点的重要性。本研究表明，他莫昔芬给药引起肠道菌群失调，进而改变肠道胆汁酸组成。最显著的是，他莫昔芬处理显著降低猪去氧胆酸水平，导致肠道FXR信号激活（图7G和8A）。由于肠道FXR激活可上调肠胆汁酸结合蛋白和成纤维细胞生长因子15表达，而两者是胆汁酸肠肝循环的关键介导者。肠胆汁酸结合蛋白表达增加可增强跨肠细胞胆汁酸转运，促进其进入门静脉循环。因此，抑制肠道FXR凸显了一种缓解病理性胆汁酸蓄积和促进胆汁淤积性肝病临床治疗的有前景的治疗途径。 本研究发现，猪去氧胆酸补充可缓解他莫昔芬诱导的肝损伤（图10I–P）。机制上，研究结果表明猪去氧胆酸通过调节肠-肝胆汁酸-FXR轴调控胆汁酸代谢。值得注意的是，研究鉴定出猪去氧胆酸对肠道FXR信号具有剂量相关的相反效应——100 mg/kg剂量发挥抑制作用，150 mg/kg剂量激活FXR（图11F–I），这与近期报道的FXR介导的高浓度肠道细胞毒性一致。因此，建议使用100 mg/kg剂量的猪去氧胆酸以有效抑制他莫昔芬诱导的肠道FXR激活。 此外，本研究结果揭示，他莫昔芬通过非肠道FXR依赖机制刺激肝脏胆汁酸过度产生（图7F–K）。粪便菌群移植实验结果进一步表明，他莫昔芬可能以菌群依赖方式对肝脏胆汁酸合成酶发挥刺激作用（图9K,L）。给予猪去氧胆酸补充后，可下调参与胆汁酸合成的肝脏酶的基因表达（图11J–M）。 广泛研究已阐明猪去氧胆酸通过两种互补机制在维持胆汁酸稳态中的关键作用：1）抑制肠道FXR/FGF15信号通路；2）调节肠道菌群群落。猪去氧胆酸已被报道可诱导粪便胆汁酸组成的有利改变，表现为初级胆汁酸减少和总胆汁酸及次级胆汁酸增加，可能改善胆汁酸的肠肝循环。重要的是，猪去氧胆酸促进胆汁酸代谢细菌的生长，特别是毛螺菌科NK4A136群——该关键微生物分类群具有胆盐水解酶活性，能够产生猪去氧胆酸。这强调了他莫昔芬和猪去氧胆酸在调节微生物-胆汁酸轴方面的对立作用。具体而言，他莫昔芬通过选择性抑制胆汁酸转化细菌分类群增强肝脏胆汁酸合成，而猪去氧胆酸可对抗这一效应。 广泛的临床前研究已确立猪去氧胆酸作为非酒精性脂肪性肝病的有前景治疗候选药物。本研究首次提供证据表明，猪去氧胆酸在小鼠模型中有效减轻他莫昔芬诱导的肝损伤（图10I–P），阐明了内源性猪去氧胆酸通过肠-肝微生物-FXR信号轴改善胆汁酸代谢的药理学潜力。这一研究方向可能将猪去氧胆酸定位为缓解他莫昔芬相关肝毒性同时保持其抗癌疗效的新型辅助治疗。未来研究应阐明猪去氧胆酸保肝作用的分子介导因素，特别是其与FXR以外核受体的相互作用，并在相关患者人群中评估其临床转化潜力。 本研究首次证实，他莫昔芬处理引起肠道菌群组成的显著改变，表现为选择性富集大肠杆菌和耗竭参与胆汁酸代谢的关键细菌分类群毛螺菌科NK4A136群。这些菌群变化驱动猪去氧胆酸水平降低，从而破坏肠-肝胆汁酸-FXR轴并加重肝脏损伤。重要的是，100 mg/kg剂量的猪去氧胆酸有效恢复肠-肝胆汁酸-FXR信号并缓解小鼠他莫昔芬诱导的肝损伤。研究结果表明肠道菌群组成、猪去氧胆酸信号和他莫昔芬诱导肝毒性之间存在复杂的相互作用。这些结果强调猪去氧胆酸在治疗他莫昔芬相关肝病方面的治疗潜力，为改善这一广泛应用药物的安全性提供了新方法。 六、局限性与展望 尽管本研究提示他莫昔芬诱导肝毒性、肠道菌群紊乱和猪去氧胆酸缺乏之间存在强关联，但仍有以下几点局限需要注意。 首先，鉴于猪去氧胆酸在人体中的含量远低于啮齿类动物，未来需要纳入人类胆汁酸谱分析和临床验证的研究以提高本研究发现的转化相关性。 其次，毛螺菌科，特别是NK4A136群，在猪去氧胆酸代谢和他莫昔芬诱导肝损伤中的因果作用尚不充分明确，未来需要使用无菌或悉生模型开展研究。进一步阐明微生物贡献并进行临床验证，有助于更好地理解这些发现在人体中的相关性。 数据可用性声明 本研究分析的数据可在国家医学图书馆网站（https://dataview.ncbi.nlm.nih.gov/object/PRJNA1271280）查阅。 缩略语表 英文缩略语 TAM  他莫昔芬 BA  胆汁酸 DILI  药物性肝损伤 GSH  还原型谷胱甘肽 GSSG  氧化型谷胱甘肽 ABX  抗生素混合物 PCoA  主坐标分析 BSH  胆盐水解酶 BaiN  3-脱氢胆汁酸Δ4,6-还原酶 7α-HSDH  7α-羟基类固醇脱氢酶 αMCA  α-鼠胆酸 βMCA  β-鼠胆酸 ωMCA  ω-鼠胆酸 CA  胆酸 DCA  脱氧胆酸 LCA  石胆酸 CDCA  鹅去氧胆酸 UDCA  熊去氧胆酸 HDCA  猪去氧胆酸 T-αMCA  牛磺酸-α-鼠胆酸 T-βMCA  牛磺酸-β-鼠胆酸 T-ωMCA  牛磺酸-ω-鼠胆酸 TCA  牛磺胆酸 TDCA  牛磺脱氧胆酸 TLCA  牛磺石胆酸 TCDCA  牛磺鹅去氧胆酸 TUDCA  牛磺熊去氧胆酸 THDCA  牛磺猪去氧胆酸 FXR  法尼醇X受体 FGF15  成纤维细胞生长因子15 CYP7A1  胆固醇7α-羟化酶 CYP8B1  固醇12α-羟化酶 CYP27A1  固醇27-羟化酶 CYP7B1  细胞色素P450家族7亚家族B成员1 OCA  奥贝胆酸 CMC-Na  羧甲基纤维素钠 TG  甘油三酯 TC  总胆固醇 **研之有理为感谢长读用户的不离不弃，现扫描医学科技交流群二维码的前100名用户，即可免费领取原价29.9￥《医学科技创新前沿洞察白皮书 》一份** 本期期刊精华已送达～ 若觉得内容对你的学术研究或临床工作有启发，欢迎点赞、留言，或者转发给身边的伙伴，让优质文献惠及更多医学人！下期将聚焦「医学科技前沿」，记得星标关注，不错过前沿干货～ ---往期精品合集（点击图片可查看）--- ---往期热点合集--- science advance IF=11.7丨鉴定一种靶向 ACSL4 抑制剂，以治疗铁死亡相关疾病 Nature 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中西医结合肝病杂志 中西医结合肝病领域唯一的一份国际标准的专业学术期刊 系中国科技论文统计源期刊、中国科技核心期刊 以“基础与临床并重、普及与提高兼顾、中医与西医结合”为办刊宗旨 临床论著 茵陈五苓散加味治疗乙型肝炎肝硬化合并自发性细菌性腹膜炎患者的疗效及对肠道菌群的影响 李丹1  胡萌1  张冬1 卓永祥1  申弘2  邓远军1 王文辉1 田广俊1△ 1.广东省中医院珠海医院肝病科(广东  珠海，519015)  2.澳门大学中华医药研究院 目的：研究茵陈五苓散加味治疗乙型肝炎肝硬化合并自发性细菌性腹膜炎( SBP )患者的疗效及对肠道菌群的影响。方法：选取符合纳入标准的乙型肝炎肝硬化合并 SBP 患者共 70 例，随机分为对照组和观察组，每组各 35 例。两组患者均给予抗病毒、抗感染、利尿等综合治疗，对照组患者联合双歧杆菌乳杆菌三联活菌片(金双歧)口服，观察组患者联合茵陈五苓散加味汤剂口服，疗程2周。比较两组患者临床疗效、症状消失时间、治疗前后中医症候评分、血清学炎症指标的变化情况，并运用16S rDNA 测序技术对两组治疗前后肠道菌群进行检测，使用生物信息学方法比较两组肠道菌群变化。结果：对照组患者总有效率为 74.3%，观察组为 91.4%，观察组患者总有效率高于对照组(x²=6.103，P=0.047)；观察组患者体温复常时间及腹痛消失时间、腹胀消失时间及腹部压痛消失时间均短于对照组( P<0.05 )。治疗后，两组患者中医症候总积分均有明显下降( P<0.05 )，且观察组低于对照组( P<0.05 )，观察组患者治疗后在腹胀、倦怠乏力、面色苍白、肢体浮肿 4 项评分上均低于对照组( P<0.05 )。治疗后，两组患者CRP、PCT、IL-6 均低于治疗前( P<0.05 )，且观察组低于对照组( P<0.05 )。肠道菌群比较上，在门分类学水平，与对照组相比，观察组患者治疗后厚壁菌门( Firmicutes ) 丰度显著升高，拟杆菌门( Bacteroidetes )  降低更明显( Z值分别为-2.226、-2.426，P值分别为 0.026、0.015 )。在属分类学水平，观察组患者治疗后布劳特氏菌属( Blautia )、阿克曼氏菌属( Akkermansia )、罗氏菌属( Roseburia )、Lachnoclostridium属丰度显著升高( Z值分别为 -2.085、-2.204、-2.121、-2.596，P值分别为 0.037、0.028、0.034、0.009 )。结论：在常规基础治疗上联合茵陈五苓散加味，可以提高乙型肝炎肝硬化 SBP “湿热水停证，湿重于热”患者临床疗效，减轻中医症候，缓解腹膜炎症，并提高患者肠道菌群中厚壁菌门丰度，降低拟杆菌门丰度，增加厚壁菌门/拟杆菌门比例，还可以促进产SCFAs细菌如布劳特氏菌属、阿克曼氏菌属、罗氏菌属、Lachnoclostridium 属增殖。 引证本文    Li D，Hu M，Zhang D，et al．Clinical effect of" Yinchen Wuling Powder Jiawei" in treating patients with hepatitis B cirrhosis combined with spontaneous bacterial peritonitis and its effect on intestinal flora[J]．J Integr Hepatol，2026，36(3):265-270． 李丹，胡萌，张冬，等.茵陈五苓散加味治疗乙型肝炎肝硬化合并自发性细菌性腹膜炎患者的疗效及对肠道菌群的影响[J]．中西医结合肝病杂志，2026，36(3):265-270． 长按识别二维码，获取全文 临床研究 乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭患者发生呼吸道感染的危险因素以及列线图预测模型构建 洪敏  俞荷花  王芳△ 海军军医大学第二附属医院重症监护室 (上海，200000) 目的：探讨乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭( HBV-ACLF ) 患者发生呼吸道感染( RTIs )的危险因素，构建列线图预测模型并验证。方法：回顾性收集2020 年 10 月至 2024 年 10 月我院收治的 217 例 HBV-ACLF 患者，根据住院期间是否发生 RTIs 将患者分为 RTIs 组( 93 例)和非 RTIs 组( 124例)。以是否发生 RTIs 为因变量，应用 LASSO 回归筛选变量纳入多因素Logistic 回归方程确定影响 HBV-ACLF 患者发生 RTIs 的危险因素。基于危险因素构建列线图预测模型并验证。 结果：肝性脑病、终末期肝病模型( MELD )评分> 18分、全身炎症反应综合征( SIRS )评分> 2分、住院时间>15 d 是 HBV-ACLF 患者发生 RTIs 的危险因素( P<0.05 )。基于危险因素构建列线图预测模型，经验证该模型具有良好的鉴别力(曲线下面积为0.877，P<0.05 )、校准度( C-index=0.881，平均绝对误差=0.013 )和临床实用性。结论：肝性脑病、MELD 评分、SIRS 评分、住院时间是影响HBV-ACLF 患者发生 RTIs 的危险因素，基于危险因素构建预测模型在RTIs 预测中具有高准确性、鉴别能力和临床效用性。 引证本文      　Hong M，Yu HH，Wang F．Risk factors of respiratory　tract infection in patients with chronic acute liver failure associated with hepatitis B and construction of a nomogram prediction model[J].J Integr Hepatol，2026，36(3):280-284． 洪敏，俞荷花，王芳.乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭患者发生呼吸道感染的危险因素以及列线图预测模型构建[J].中西医结合肝病杂志，2026，36(3):280-284． 长按识别二维码，获取全文 实验研究 肝细胞癌糖酵解预后标志物识别及复方叶下珠改善预后作用机制研究 栗昀1△ 刘林华2 黄丹萍3  魏春山4  贺劲松4 1.江苏医药职业学院(江苏 盐城，224005) 2.深圳市药品检验研究院，清华大学深圳国际研究生院 3.广东药科大学 4.广州中医药大学第四临床学院，深圳市中医院肝病科 目的：探讨肝细胞癌( HCC)  糖酵解预后标志物及复方叶下珠改善预后的作用机制。方法：通过 limma 包筛选 TCGA 和 GSE116174 数据集中HCC 患者生存差异基因，并和人类分子特征数据库 v7.2 中的糖酵解基因进行交集，确定差异基因( DEGs )，利用 STRING 进行蛋白-蛋白互作分析，通过 Lasso-Cox 确定 HCC 糖酵解预后标志物。将 BALB/c 裸鼠随机分为 HepG2 空白对照组和复方叶下珠干预组( 625 mg/kg、300 mg/kg、100 mg/kg)，移植瘤造模成功后进行复方叶下珠治疗 4 周，结束后对肿瘤组织进行 HE 染色和检测预后基因蛋白表达情况并通过 ELISA 方法检测糖酵解相关产物的表达。 结果：通过生物信息学综合分析，最终确认丝裂原激活蛋白激酶 3 ( MAPK3 )、丝氨酸/苏氨酸激酶 4 ( STK4 )、哈维鼠肉瘤病毒肿瘤基因同源物( HRAS )、肿瘤坏死因子受体相关因子 2 ( TRAF2 )和 RAS 相关蛋白 2( RRAS2 )为肝癌预后基因，并且与肿瘤状态、病理分期和生存时间相关。以 MAPK3、STK4、HRAS、TRAF2 和 RRAS2 构建肝癌风险模型，显示 5 个基因表达量越高，生存期越短，生存风险越高。HE 染色结果表明复方叶下珠干预后能促进肿瘤细胞凋亡，提高肿瘤组织分化程度，并显著降低移植瘤中 MAPK3、STK4、HRAS、TRAF2 和 RRAS2 蛋白表达。ELISA 试剂盒检测显示，复方叶下珠能有效降低血清中葡萄糖和肿瘤组织中 ATP、乳酸、己糖激酶 2 ( HK2 )和丙酮酸激酶的含量。结论：MAPK3、STK4、HRAS、TRAF2 和 RRAS2 是 HCC 潜在的预后标志物；通过干预 MAPK3、STK4、HRAS、TRAF2 和 RRAS2 表达可能是复方叶下珠改善预后的机制之一。 引证本文   Li  Y，Liu LH，Huang  DP，et  al．Identification  of Glycolysis-Related  Prognostic  Biomarkers  in  Hepatocellular  Carcinoma and Potential Mechanism of Compound Phyllanthus urinaria L.[J].J Integr Hepatol，2026，36(3):285-292. 栗昀，刘林华，黄丹萍，等.肝细胞癌糖酵解预后标志物识别及复方叶下珠改善预后作用机制研究[J].中西医结合肝病杂志，2026，36(3):285-292. 长按识别二维码，获取全文 槲芪方及其拆方治疗原发性肝癌的机制研究 陈欢1  袁慧鑫2  李伟华3△  李秀惠2△ 1.北京中医医院顺义医院康复科 (北京，101300)  2.首都医科大学附属北京佑安医院 3.北京肝病研究所 目的：探究槲芪方及其拆方对肝细胞癌的抗肿瘤活性，初步探讨其作用机制。方法：通过构建肝癌皮下瘤模型，采用灌胃给药方式评价槲芪方的抗肝癌作用；并基于药物功效将其拆分为补肾益气组(槲寄生、生黄芪)、活血化瘀组(丹参、醋莪术)、清热解毒组(白花蛇舌草、叶下珠)，探究槲芪方及各拆方组的体内抗肝癌活性；同时收集小鼠外周血和肝癌组织，检测外周血中免疫、炎症相关指标，初步阐明其作用机制。结果：槲芪方及其拆方均能够显著抑制小鼠肝癌皮下移植瘤的生长。活血化瘀组、清热解毒组药物可降低 IL-6、IL-17A 等炎症相关细胞因子的表达发挥抗肿瘤作用；补肾益气组药物通过升高小鼠外周血中 CD4⁺T 细胞、CD8⁺T 细胞和 CD8⁺ IFN-γ⁺T 细胞百分比，降低 Th2 类细胞因子水平提高机体免疫功能；槲芪方组在此基础上可降低小鼠外周血中与肝癌转移、复发相关指标 VEGF 的表达。结论：槲芪方及其拆方具有良好的体内抗肿瘤活性，槲芪方能通过提高机体免疫力、降低炎症反应等多途径发挥抗肿瘤作用，复方配伍能提高疗效。 引证本文        Chen  H，Yuan  HX，Li  WH，et　al．Investigation  into  the mechanisms of HuQi Formula and its separate components for Hepatocellular Carcinoma treatment[J].J Integr Hepatol，2026，36(3):298-303. 陈欢，袁慧鑫，李伟华，等.槲芪方及其拆方治疗原发性肝癌的机制研究[J].中西医结合肝病杂志，2026，36(3):298-303. 长按识别二维码，获取全文 探究肝纤维化进展中关键生物钟基因的表达变化 裴雯 王君敏  汪彦平 林柳兵  李勇△ 上海中医药大学附属市中医医院脾胃科  (上海，200071) 目的：探究肝纤维发生和发展过程中，生物钟基因 Clock、Sirt1、Rev-erb α、Per2 和 Cry1 的表达变化。 方法：建立胆管结扎大鼠纤维化和小鼠原代星状细胞模型，通过 Masson、天狼星红染色、荧光定量 PCR 和蛋白免疫印迹实验探究肝纤维进展中，生物钟基因 Clock、Sirt1、Rev-erb α、Per2 和 Cry1 表达情况。结果：随着纤维化进展，大鼠肝组织中胶原纤维量逐渐增加，生物钟基因 Clock、Sirt1、Rev-erb α、Per2 和 Cry1 的 mRNA 表达随着造模时间延长呈显著下降趋势( P<0.05 )蛋白表达呈现相同趋势( P<0.05 )。在活化的星状细胞中发现，Clock、Sirt1、Rev-erb α、Per2 和 Cry1 mRNA 表达振幅及均值水平均显著下降( P<0.05 )。结论：肝纤维进展中存在生物钟基因 Clock、Sirt1、Rev-erb α、Per2 和 Cry1 表达紊乱现象。 引证本文     Pei W，Wang JM，Wang YP，et al. Exploring the expression changes of the key circadian clock genes in the progression of liver fibrosis[J].J Integr Hepatol，2026，36(3):304-311. 裴雯，王君敏，汪彦平，等.探究肝纤维化进展中关键生物钟基因的表达变化[J].中西医结合肝病杂志，2026，36(3):304-311. 长按识别二维码，获取全文 甲芪肝纤颗粒抗慢性乙型肝炎肝纤维化的物质基础及药理机制探究 张志清1  黄胜1  陈建双2  邱新建3  胡丽彬1  颜冬兰1△ 1.九芝堂股份有限公司(湖南  长沙，410000)  2.天津中医药大学  3.中南大学湘雅医院 目的：本研究通过超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱( UPLC-Q-TOF/MS )和网络药理学探究甲芪肝纤颗粒抗慢性乙型肝炎肝纤维化的物质基础及多靶点、多途径的药理作用机制，并通过分子对接和动物实验验证。方法：使用 UPLC-Q-TOF/MS 鉴定甲芪肝纤维颗粒的化学成分，并结合数据库确定甲芪肝纤维颗粒抗慢性乙型肝炎肝纤维化关键靶点，并预测相关的药理作用通路和生物学过程，最后使用分子对接和动物实验进行验证。 结果：UPLC-Q-TOF/MS 鉴定出甲芪肝纤维颗粒的化学成分 116个，结合网络药理学确定关键活性成分 16 个，并以此筛选出抗慢性乙型肝炎肝纤维化的关键靶点 113 个。GO 和 KEGG 富集显示，甲芪肝纤颗粒主要通过调节脂质代谢、细胞衰老、氧化应激和炎症改善慢性乙型肝炎肝纤维化，涉及到的作用通路主要为 NF-κB 信号通路、FoxO 信号通路、PI3K-Akt 信号通路。分子对接结果进一步表明，谷甾醇和黄连碱与靶点AKT1、MAPK1、TNF 均具有较好的结合活性，分子对接构象稳定。动物实验表明甲芪肝纤颗能明显降低肝纤维化大鼠血清 ALT、AST 水平，抑制肝脏 PI3K、AKT、NF-κB mRNA 表达和 PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT、NF-κB、P-NF-κB 蛋白表达水平。结论：甲芪肝纤维颗粒可通过多成分、多靶点、多通路改善慢性乙型肝炎肝纤维化，实验验证了甲芪肝纤维颗粒可改善肝纤维化损伤，其药理机制可能与 PI3K/Akt/NF-κB 信号通路有关。 引证本文         Zhang ZQ，Huang S，Chen JS，et al．Study on the material basis and pharmacological  mechanism  of  Jiaqi Ganxian Granules against chronic hepatitis  B liver  fibrosis[J]．J Integr  Hepatol，2026，36(3):312-320． 张志清，黄胜，陈建双，等.甲芪肝纤颗粒抗慢性乙型肝炎肝纤维化的物质基础及药理机制探究[J].中西医结合肝病杂志，2026，36(3):312-320. 长按识别二维码，获取全文 影像学诊断 MRI 征象及参数评估肿块型肝内胆管细胞癌分化程度的研究 刘晋 王艺  季利君  汪琴 王宇翔△  程兴宇  熊敏超 鄂州市中心医院医学影像科  (湖北  鄂州，436000) 目的：探讨 MRI 征象及参数评估肿块型肝内胆管细胞癌( MICC )分化程度的价值。方法：前瞻性选取鄂州市中心医院 2021 年 6 月至 2023 年 6 月 MICC 患者 125 例，根据分化程度分为低分化组与中高分化组，均行 MRI 检查，比较两组患者 MRI 征象和参数[肿瘤直径、平均表观扩散系数( ADCmean )值、标准化ADCmean ( nADCmean )值]，评估 MRI 征象和参数对 MICC 分化程度的评估价值，并构建多模态 MRI 评估模型。另选取 2023 年 7 月至 2024 年7 月 64 例 MICC 患者作为外部验证数据，采用受试者工作特征( ROC )曲线验证多模态 MRI 评估模型的临床价值。 结果：两组患者强化环完整性、强化方式、边缘区 TIC 类型、肝胆期信号、DWI 病变中周边扩散受限比较存在明显差异( P<0.05 )；低分化组患者肿瘤直径大于中高分化组，ADCmean 值、nADCmean 值低于中高分化组( P<0.05 )；强化环完整性、强化方式、边缘区 TIC 类型、肝胆期信号、DWI 病变中周边扩散受限、肿瘤直径、ADCmean 值、nADCmean 值评估 MICC 患者分化程度的曲线下面积( AUC )为0.625、0.742、0.614、0.625、0.583、0.781、0.795、0.763；多模态 MRI 评估模型 C-index 为 0.908，校准度为 0.887，ROC 曲线分析，该模型评估 MICC 分化程度的 AUC 为 0.947( 95% CI:0.909～0.984 )，敏感度为 83.62%，特异度为 92.86%；多模态 MRI 评估模型对外部验证数据集患者分化程度评估 AUC 为0.965( 95% CI:0.923～1.000)，敏感度为 89.29%，特异度为 94.44%，且经一致性分析显示，与临床实际的一致性较高( Kappa值=0.841，95% CI:0.596～1.086)。结论：多模态 MRI 征象及参数可用于 MICC 分化程度评估中，为临床早期鉴别 MICC 分化程度、针对性制定干预方案提供参考依据。 引证本文         Liu J，Wang Y，Ji LJ，et al．Study on MRI signs and parameters to evaluate the degree of differentiation of mass type intrahepatic cholangiocarcinoma[J].J Integr Hepatol，2026，36(3):334-339. 刘晋，王艺，季利君，等.MRI 征象及参数评估肿块型肝内胆管细胞癌分化程度的研究[J].中西医结合肝病杂志，2026，36(3):334-339.    长按识别二维码，获取全文   国医大师专栏 国医大师杨震运用“气机理论”治疗急性肝衰竭患者 1 例 刘小燕  袁超  丁琳译  郝建梅△  杨震 西安市中医医院  (陕西  西安，710021)        杨震教授治疗 1 例自身免疫性肠炎引起的急性肝衰竭女性患者。急性肝衰竭是临床的危急重症，病理特征为肝细胞大面积坏死，肝功能急剧恶化。目前西医内科对此病尚缺乏特效药物和手段治疗，死亡率高，预后差，需要积极治疗，甚或肝移植。该病归属祖国医学“急黄”范畴。杨震教授基于气机理论，以补元气、建中气、补肝体、助肝用为主要治则，使气阴欲脱的患者转危为安，神志转清，黄疸消退，疾病向愈。通过对此案例进行剖析，为中医药治疗急性肝衰竭提供新的思路和方法。 引证本文         Liu XY，Yuan C，Ding LY，et al．A Case of  Treating Acute liver  failure  by  Master  of  Traditional  Chinese  Medicine Yang Zhen Based on the "Theory of Qi Mechanism" [J].J Integr Hepatol，2026，36(3):340-343. 刘小燕，袁超，丁琳译，等.国医大师杨震运用“气机理论”治疗急性肝衰竭患者1例[J].中西医结合肝病杂志，2026，36(3):340-343. 长按识别二维码，获取全文 病例报告 消膏降浊法治疗肥胖合并代谢相关脂肪性肝病验案 1 例 吴哲骁1  朱绘2,3,4  李紫明1  任朦2,3,4  肖明中2,3,4  李晓东2,3,4△ 1.湖北中医药大学中医学院 (湖北 武汉，430065) 2.湖北省中医院肝病研究所 中医肝肾研究及应用湖北省重点实验室  3.湖北时珍实验室 4.湖北中医药大学附属医院 本文报道1例“消膏降浊”法治疗肥胖合并代谢相关脂肪性肝病( MAFLD ) 的临床验案，治疗以消膏化浊、疏瀹气机为核心治则，选用小陷胸汤合厚朴三物汤加减，并随证动态化裁。经 3.5 个月系统干预，患者体重下降12.5 kg，BMI 降至 26.9 kg/m²，腰围减少 12.5 cm，体脂率降低 6.9 %；肝脏脂肪沉积( CAP 254 dB/m )及硬度( LSM 7.6 kPa )显著改善，代谢指标(血糖、胰岛素、尿酸等)均趋于正常范围。结果表明，以仝小林院士“膏浊病”理论为指导的“消膏降浊”治法，融合“肥肝同调”的整体观念与“态靶结合”治疗策略，可有效逆转肥胖合并 MAFLD 的代谢紊乱和肝脏病理变化，为代谢性疾病的中医药治疗提供了可借鉴的临床路径与实践依据。 引证本文        Wu ZX，Zhu H，Li ZM，et al．A case report on the treatment of obesity combined with metabolic-associated fatty liver disease using the fat-reducing and turbidity-resolving method[J].J Integr  Hepatol，2026，36(3):370-373. 吴哲骁，朱绘，李紫明，等.消膏降浊法治疗肥胖合并代谢相关脂肪性肝病验案 1 例[J].中西医结合肝病杂志，2026，36(3):370-373. 长按识别二维码，获取全文 综述 基于 m6A 甲基化探讨中医药治疗原发性肝癌的研究进展 张思涵1,2  蒋士卿2△ 1.河南中医药大学 (河南 郑州，450000) 2.河南中医药大学第一附属医院 原发性肝癌( PLC )是一种具有高度侵袭性和致死性的恶性肿瘤，由于发病隐匿，多数患者发现时已丧失手术机会。N6- 甲基腺嘌呤( m6A )作为真核生物中最为常见的 RNA 修饰形式之一，在调控 PLC 细胞能量代谢、药物耐药性及肿瘤微环境等方面展现出巨大潜力。近期研究表明，传统中医药在治疗 PLC 的过程中通过调控 m6A 甲基化水平，进而影响相关蛋白表达、信号传导路径及下游靶点。本文旨在系统回顾近年来中药单体与复方制剂在 PLC 诊疗中的应用进展，强调 m6A 对原发性肝癌进展的重要意义，以期为本病寻找潜在治疗策略，同时为药物研发提供理论支撑。 引证本文       Zhang SH ，Jiang SQ．Research Progress of Traditional Chinese Medicine in  the Treatment of Primary Liver Cancer Based on m6A Methylation[J].J Integr Hepatol，2026，36(3):392-396. 张思涵，蒋士卿.基于 m6A 甲基化探讨中医药治疗原发性肝癌的研究进展[J].中西医结合肝病杂志，2026，36(3):392-396. 长按识别二维码，获取全文 点击下方“阅读原文”，查看历史消息～ 往期精彩回顾 超声造影联合血清 LTBP2、PRDX6 对早期肝癌的诊断价值 基于慢性乙型肝炎合并代谢相关脂肪性肝病非靶向代谢谱的胆汁酸代谢分析 HBsAg 血清学转化后 HBV DNA 复阳的乙型肝炎肝硬化诊治 1 例 导读|《中西医结合肝病杂志》2026年第2期 基于DenseNet神经网络的CT肝硬化食管静脉曲张破裂出血风险预测模型的构建与验证 PALBI评分联合血常规参数预测肝硬化合并急性上消化道出血短期死亡的作用 国医大师杨震运用“相火理论”从肝体辨治肝损害患儿1例 导读|《中西医结合肝病杂志》2026年第1期

点击上方蓝字关注我们 摘要 民族药理学相关性： 砂仁（Amomum villosum Lour., AVL）是一种传统中药，广泛用于治疗妊娠相关呕吐和预防流产。子痫前期（PE）是一种严重的妊娠综合征。近期研究已证实PE与消化系统之间存在相互作用。然而，AVL抗PE是否与肠道相关尚不确定。 研究目的： 本研究基于肠-胎盘轴探讨了AVL对PE的治疗作用及潜在机制。 材料与方法： 砂仁水提物（WOA）经沸水提取后冻干制成颗粒。建立NG-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）诱导的PE小鼠模型，评估WOA的预防作用。此外，采用16S rRNA基因测序分析肠道微生物组成和结构。应用粪菌移植（FMT）实验验证WOA重塑的肠道菌群的功效。 结果： WOA对PE具有保护作用。值得注意的是，WOA以剂量依赖性方式显著降低母体高血压和尿蛋白水平，促进胎儿宫内生长，从而改善不良妊娠结局。此外，WOA通过降低sFlt-1（可溶性fms样酪氨酸激酶1）与PlGF（胎盘生长因子）的比值来调节血管生成失衡，修复胎盘损伤，并通过增加FPN1、FTH1、xCT和GPX4蛋白水平抑制胎盘铁死亡。WOA显著上调胎盘和结肠中的紧密连接蛋白（ZO-1、Occludin、Claudin1），增强胎盘和肠道屏障。WOA通过富集双歧杆菌和Akkermansia改善肠道菌群失调。粪菌移植（FMT）实验揭示WOA对胎盘和肠道的保护作用依赖于肠道微生物组成。此外，补充双歧杆菌（B. bifidum）和香草酸（VA，WOA的主要成分）均可改善PE症状。有趣的是，体内外分析结果表明，VA可富集B. bifidum。 结论： 本研究首次证实WOA通过富集双歧杆菌、增强肠-胎盘屏障、抑制胎盘铁死亡来预防PE。我们的发现为肠-胎盘轴在AVL保护PE中的重要作用提供了有力证据，为临床提供了新的靶点。 1. 引言 子痫前期（PE）是一种严重的妊娠并发症，以妊娠20周后出现新发高血压和蛋白尿为特征，是母婴死亡的主要原因之一（Mol等，2016）。全球PE发生率约为2-8%，对母婴健康构成重大威胁。PE患者更易发生中风、心血管疾病和糖尿病，而胎儿则易发生早产、宫内生长受限、胎盘早剥和死亡（Dimitriadis等，2023）。根据《妊娠期高血压和子痫前期诊治指南（2020）》（妊娠高血压疾病学组和妇科学，2020），PE的对症治疗包括使用口服降压药控制血压，以及静脉注射硫酸镁减少抽搐和痉挛。当药物无法控制PE的病理进程时，需立即终止妊娠以避免不良妊娠结局（Poon等，2019；Rana等，2019）。因此，寻找安全有效的预防和治疗PE方法仍是紧迫的临床挑战。 胎盘在PE的进展中起着关键作用，受多种病理因素影响。根据公认的PE两阶段模型，胎盘功能障碍是主要原因（Roberts和Hubel，2009；Staff，2019）。PE发生时，由于胎盘滋养细胞浸润不足导致子宫螺旋动脉重构异常，引起子宫螺旋动脉狭窄。子宫螺旋动脉狭窄导致胎盘缺血缺氧，进而导致形态发生异常，最终导致胎盘功能障碍。为了补偿子宫螺旋动脉的异常重构，母体血管收缩以试图增加血压并将更多血液推向胎盘，导致母体高血压。此外，功能障碍的胎盘释放多种生物活性化合物，包括抗血管生成因子、炎症细胞因子和脂质过氧化物。这些物质进入母体血液循环，导致内皮功能障碍和炎症反应，损害血管正常的收缩和舒张活动，进而减少各器官的血流量（Redman和Sargent，2009；Simas等，2014；Yuan等，2005）。特别是肾脏供血减少导致肾小球滤过膜通透性增加，使本应保留在血液中的蛋白质渗入尿液，最终导致蛋白尿（Bartal等，2022）。同时，胎盘功能障碍损害母体向胎儿的营养转运，导致宫内生长受限，增加新生儿呼吸窘迫综合征和支气管肺发育不良的风险（Dimitriadis等，2023；Hansen等，2010；Wang等，2012）。除了经典的PE两阶段模型理论，近期研究表明PE患者循环中铁浓度显著升高，可触发胎盘铁死亡（Liu等，2019a；Yang等，2023；Yang等，2022；Zhang等，2020a）。Beharier等（2020）的早期报告表明，铁死亡信号通路激活导致胎盘滋养细胞功能障碍。相反，抑制铁死亡显著减少胎盘脂毒性损伤并缓解PE症状（Yang等，2022）。这些研究表明，抑制胎盘铁死亡对保护胎盘功能至关重要，可作为胎盘疾病（如PE）的治疗方法。 临床研究报告了PE患者的肠道微生物失调（Chen等，2020b）。在早期体内研究中，接受PE患者粪菌移植（FMT）的大鼠表现出病理和症状的显著加重，而接受健康孕妇肠道菌群的大鼠则观察到强烈的保护作用（Jin等，2022），明确表明肠道细菌在PE进展中发挥重要作用。与此发现一致，益生菌罗伊氏乳杆菌通过改善肠道菌群失调和内皮功能障碍缓解小鼠PE症状（Li等，2023）。除肠道微生物的直接影响外，PE的调节还受其代谢产物影响。例如，肠道菌群分泌的短链脂肪酸（SCFA）据报道可增强PE小鼠的胎盘生长和血管化（Jin等，2022；Pronovost等，2023）。氧化三甲胺（TMAO）通过调节炎症和氧化应激相关信号通路，影响血管内皮细胞的迁移和血管生成以及滋养细胞的迁移和侵袭，促进PE的发展（Wang等，2024）。鉴于这些综合结果，关注肠道微生物为PE的管理提供了创新策略。 砂仁（Amomum villosum Lour., AVL）是中国"南药"之一，也是"药食同源"药材，据报道对孕妇使用安全（Zhao等，2021）。AVL具有多种功能，包括保肝、抗肿瘤、治疗胃肠道疾病和缓解妊娠呕吐（Feng等，2024；Luo等，2022；Wei等，2024）。AVL的药理作用包括抗炎、抗菌、抗氧化和抗高血脂（Kim等，2020, 2022；Tang等，2020；Yan等，2015）。根据《中华人民共和国药典（2020年版）》，AVL传统上用于化湿开胃、温脾止泻、理气安胎（Commission，2020）。值得注意的是，安胎功能旨在保护妊娠期间免受各种不利因素影响，确保女性健康，促进胎儿生长发育，防止胎儿死亡。临床上，AVL的中成药如保胎丸和孕康合剂广泛用于治疗妊娠呕吐和预防流产。然而，AVL作为单味中药对PE的影响尚待确定。本研究集中于AVL对PE的保护作用，并将肠-胎盘轴确定为贯穿本研究的基础靶点通路。我们的发现丰富了AVL安胎能力的现有知识体系，并突出了临床治疗PE的新潜在方法。 2. 材料与方法 2.1. 试剂与化学品 砂仁由苏畅博士（深圳市药品检验研究院，中国）提供和鉴定。表儿茶素、香草酸、虎杖苷和异槲皮苷购自中国食品药品检定研究院。NG-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）购自MedChemExpress（HY-18729A，美国）。 2.2. WOA的制备与特征分析 砂仁使用前粉碎，蒸馏水浸泡30分钟。然后沸水提取3次，过滤获得滤液。合并滤液作为砂仁水提物（WOA）。为进行质量控制，我们采用高效液相色谱（HPLC）定量检测表儿茶素、香草酸、虎杖苷和异槲皮苷。这些化合物的浓度分别为3.15、11.73、1.13和0.38 mg/mL。（方法见补充表1和图S1）。 2.3. 动物 C57BL/6雌性和雄性小鼠购自生物技术有限公司（SCXK，2019-0010，中国），在标准光暗周期条件（12小时:12小时，25℃）下饲养。所有动物实验均经南方医科大学机构动物伦理护理委员会批准（SMUL202404008）。 2.4. 动物实验 L-NAME诱导的PE小鼠模型此前已有描述（Huang等，2022）。简而言之，经过一周的适应期后，雄性小鼠与雌性小鼠按1:2比例配对过夜。有栓的雌性小鼠视为怀孕，当天定为妊娠第0天（GD0）。从GD9到GD18，小鼠皮下注射125 mg/kg/d L-NAME，于GD18处死。 WOA灌胃实验。 孕鼠随机分为六组（每组n=6）：(1)正常妊娠组（NP）；(2)子痫前期组（PE）；(3)WOA低剂量组（WOA-L）；(4)WOA中剂量组（WOA-M）；(5)WOA高剂量组（WOA-H）；(6)拉贝洛尔组（Labetalol）。除NP组小鼠外，其他组小鼠从GD9到GD18皮下注射L-NAME。NP和PE组小鼠灌胃生理盐水，每天一次，持续18天。WOA-L、WOA-M和WOA-H组小鼠分别灌胃130、260和520 mg/kg WOA。Labetalol组小鼠灌胃拉贝洛尔（Disano，江苏，中国）20 mg/kg。所有干预每天进行一次，持续18天。小鼠于GD18处死。WOA的给药参考中国药典推荐的AVL临床剂量（Commission，2020），并按Chen等方法调整（Chen等，2018）。 粪菌移植（FMT）实验。 将WOA高剂量组小鼠（供体）的粪便重悬于PBS中，制成125 mg/mL的悬液。然后离心混合物，取上清液用于菌群移植。孕鼠随机分为三组（每组n=6）：(1)正常妊娠组（NP）；(2)子痫前期组（PE）；(3)FMT-WOA-H组（FMT-WOA-H）。除NP组小鼠外，其他组小鼠从GD9到GD18皮下注射L-NAME。NP和PE组小鼠每天灌胃生理盐水，持续18天。FMT组小鼠先接受5天抗生素（ABX）治疗（万古霉素100 mg/kg、硫酸新霉素200 mg/kg、甲硝唑200 mg/kg和氨苄青霉素200 mg/kg）以消除肠道微生物（Jin等，2022）。随后，每天口服WOA-H供体粪便一次，持续10天。小鼠于GD18处死。 双歧杆菌（B. bifidum）补充实验。 孕鼠随机分为三组（每组n=6）：(1)正常妊娠组（NP）；(2)子痫前期组（PE）；(3)双歧杆菌组（B. bifidum）。除NP组小鼠外，其他组小鼠从GD9到GD18皮下注射L-NAME。NP和PE组小鼠每天灌胃生理盐水，持续18天。B. bifidum组小鼠每天灌胃200 μL双歧杆菌（1×10⁸ CFU/mL），持续18天。小鼠于GD18处死。 香草酸（VA）干预实验。 孕鼠随机分为四组（每组n=6）：(1)正常妊娠组（NP）；(2)正常妊娠加香草酸组（NPVA）；(3)子痫前期组（PE）；(4)子痫前期加香草酸组（PEVA）。除NP和NPVA组小鼠外，PE和PEVA组小鼠从GD9到GD18皮下注射L-NAME。NP和PE组小鼠每天灌胃生理盐水，持续18天。NPVA和PEVA组小鼠每天灌胃70 mg/mL VA（阿拉丁，中国），持续18天（Kumar等，2014a）。小鼠于GD18处死。最后，采集血液，8000 rpm、4℃离心10分钟分离血清。解剖并称重胎儿和胎盘。血清和组织储存于-80℃。 2.5. 血压测量 使用BP-2010A无创血压仪（Softron Biotechnology，北京，中国）在GD0、4、8、10、12、14和16测量收缩压（SBP）。 2.6. 苏木精-伊红（H&E）染色和免疫组织化学（IHC）分析 H&E染色和IHC按此前描述进行（Huang等，2022）。胎盘和结肠均使用ZO-1、Occludin和Claudin-1抗体（Abmart，中国）孵育。使用Image-Pro Plus 6.0软件（Media Cybernetics Inc.，美国）分析平均光密度。 2.7. 实时定量PCR（RT-qPCR） 使用动物总RNA分离提取纯化试剂盒（Foregene Co., Ltd.）提取总RNA。使用天根粪便DNA提取试剂盒提取粪便DNA。使用HiScript III All-in-one RT SuperMix（诺唯赞生物科技，中国）将mRNA转化为cDNA。所有qPCR使用HiScript II Q RT SuperMix（诺唯赞生物科技，中国）并在LightCycler480（Roche Diagnostics International，瑞士）上进行。引物信息见补充表3。 2.8. Western blot分析 胎盘样品使用RIPA裂解液（美仑生物，中国）裂解。胎盘蛋白经10% SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜（Millipore，Billerica，MA，美国）。5%脱脂牛奶封闭1小时后，膜与多种一抗4℃孵育过夜，然后与二抗室温孵育1小时。使用凝胶成像系统（FluorChem R，ProteinSimple，San Jose，CA，美国）扫描膜。使用ImageJ软件评估条带强度。抗体见补充表4。 2.9. 酶联免疫吸附试验（ELISA） 小鼠尿蛋白（UP）ELISA试剂盒、血管内皮生长因子（VEGF）ELISA试剂盒、胎盘生长因子（PlGF）ELISA试剂盒、可溶性fms样酪氨酸激酶-1（sFlt-1）ELISA试剂盒和脂多糖（LPS）ELISA试剂盒购自江苏酶免实业有限公司。谷胱甘肽（GSH）ELISA试剂盒和丙二醛（MDA）ELISA试剂盒购自伊莱瑞特生物科技。小鼠白细胞介素-6（IL-6）ELISA试剂盒和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）ELISA试剂盒购自美仑（中国）。各ELISA试剂盒按厂家说明进行评估。 2.10. 16S rRNA基因测序 采集各组小鼠粪便。使用ABI GeneAmp 9700 PCR热循环仪扩增细菌16S rRNA基因。然后使用实时定量PCR扩增16S rRNA基因的V3-V4区。使用Illumina MiSeq（PE300）进行测序，美吉生物负责数据分析。随后，使用UPARSE 11将精修序列聚类为操作分类单元（OTUs）。每个OTU选择丰度最高的序列作为代表序列。使用16S rRNA基因数据库（如Silva v138）分析代表序列，置信度阈值为0.7。使用Mothur V.1.30.2基于OTU信息计算α多样性。然后进行PCA分析计算微生物相对丰度的相似性。使用线性判别分析效应大小（LEfSe）进行物种分类分析的生物标志物发现。通过STAMP V2.1.3软件使用未观察状态群落重建系统发育调查（PICRUSt）分析。 2.11. 细菌培养 双歧杆菌（B. bifidum，ATCC 29521）在BBL肉汤培养基（山东拓普生物工程有限公司，Cat# M1409，中国）中厌氧条件下（10% H₂、10% CO₂、80% N₂，37℃）培养。 2.12. 体外厌氧培养 按描述收集PE组小鼠粪便进行培养（Gu等，2018；Li等，2021；Sun等，2023）。将粪便样品（1.0 g）重悬于10 mL无菌厌氧PBS中，通过离心获得细菌沉淀，并重悬于无菌厌氧PBS中。随后，在厌氧条件下（37℃，140 rpm）孵育以激活细菌。接下来，将粪便接种物在培养基中（含或不含5 mg/mL VA）厌氧条件下孵育。孵育0、12和24小时后，培养样品4℃8000 rpm离心10分钟，收集离心沉淀用于DNA提取和检测。 2.13. 统计分析 使用IBM SPSS Statistics 25进行统计分析。数据以均值±标准差表示。使用Student's t检验评估组间均值差异。多重比较采用单因素方差分析（ANOVA）后进行Bonferroni事后检验。显著性水平为p<0.05，p<0.01和p<0.001。 3. 结果 结果1. WOA灌胃缓解PE小鼠PE症状和不良妊娠结局 为研究WOA缓解PE的功效，我们用低、中、高剂量WOA干预L-NAME诱导的PE小鼠模型（图1A）。L-NAME干预后，与NP组相比，PE组小鼠SBP显著进行性升高（图1B），GD18尿蛋白浓度显著升高（图1C），表明PE小鼠模型成功建立。与PE组相比，WOA-L、WOA-M、WOA-H和Labetalol治疗后SBP和尿蛋白显著降低，尤其是WOA-H干预效果最佳（图1B和C）。这表明WOA以剂量依赖性方式降低SBP和尿蛋白水平。此外，使用胎盘重量和胎儿重量评估PE小鼠的不良妊娠结局。与NP组小鼠相比，PE组小鼠胎盘和胎儿重量较低，表明PE导致不良妊娠结局（图1E和F）。然而，经WOA-L、WOA-M、WOA-H和Labetalol治疗后，胎盘重量显著高于PE组（图1E）。WOA-M和WOA-H组干预后能显著增加胎儿重量，恢复到与NP组相同水平（图1D-F）。胎儿-胎盘重量比用于反映胎盘效率。PE组该比值明显低于NP组，表明PE导致胎盘效率低下（图1G），这种低效率可通过WOA-H干预逆转，恢复到与健康妊娠小鼠相当的胎盘效率水平。综上所述，我们发现高剂量WOA在缓解PE小鼠PE症状和不良妊娠结局方面效果最佳。因此，后续实验评估WOA-H。 结果2. WOA缓解PE小鼠血管生成失衡 胎盘功能障碍与血管生成失衡相关（Burwick和Rodriguez，2024）。为探讨WOA对PE小鼠胎盘和血管状态的影响，我们分析了胎盘的结构改变以及胎盘和血清中的血管生成因子。首先，观察胎盘组织形态学变化（图2A）。与NP组胎盘相比，PE组胎盘的迷路区和结合区比例更高。然而，WOA-H干预后这种增加的比例被抵消，从而证明WOA-H减轻PE对胎盘结构的损伤（图2B）。然后，评估关键促血管生成因子如血管内皮生长因子（VEGF）和胎盘生长因子（PlGF），以及抗血管生成因子如可溶性fms样酪氨酸激酶-1（sFlt-1）以评估血管状态。与NP组相比，PE组小鼠胎盘Vegf和Plgf mRNA水平显著失调，而sFlt-1水平显著升高（图2C）。WOA-H组观察到胎盘Vegf和Plgf表达显著增加，sFlt-1表达显著降低（图2C）。血清样品中也观察到血管生成失衡，但可通过WOA-H干预逆转（图2D-F）。此外，与NP组相比，PE组sFlt-1与PlGF比值升高，该比值临床上用于评估PE风险。有趣的是，WOA-H干预显著降低该比值，与NP组无显著差异（图2G）。这些发现证明WOA-H减轻PE对胎盘结构的损伤和PE小鼠的血管生成失衡。 结果3. WOA抑制PE小鼠胎盘铁死亡 铁死亡导致胎盘功能障碍，可能促进PE的发病机制（Shan等，2023）。为评估WOA的预防作用是否与胎盘铁死亡相关，我们研究了胎盘组织中铁死亡相关标志物。与NP组相比，PE组胎盘Fpn1、Fth1、Xct和Gpx4 mRNA水平显著失调，提示PE小鼠胎盘铁死亡被激活。然而，WOA-H给药显著逆转了铁死亡相关因子的下调（图3A-D）。有趣的是，血清中VEGF、PlGF和sFlt-1与胎盘中铁死亡相关因子（Fpn1、Fth1、Xct和Gpx4）呈显著正相关（图3E-G），提示胎盘铁死亡与PE小鼠血管生成失衡密切相关。此外，与NP组相比，PE组小鼠胎盘FPN1、FTH1、xCT和GPX4蛋白水平显著降低，但这些蛋白经WOA-H干预后显著逆转（图3H和I）。铁死亡的特征是Fe²⁺促进的脂质过氧化增加。与NP小鼠相比，PE小鼠胎盘Fe²⁺浓度更高，WOA-H干预可将其降低至健康妊娠水平（图3J）。还评估了胎盘和血清中的谷胱甘肽（GSH）和脂质过氧化标志物丙二醛（MDA）水平。与NP组小鼠相比，PE组小鼠胎盘和血清中MDA水平显著升高，GSH水平显著降低。然而，WOA-H治疗显著降低MDA水平，显著增加血清和胎盘GSH表达（图3K-N）。值得注意的是，WOA-H组血清和胎盘中GSH水平高于NP组（图3M和N）。这些数据表明WOA-H改善紊乱的铁稳态，逆转细胞内抗氧化剂耗竭并抑制PE小鼠脂质过氧化。总之，WOA-H抑制胎盘铁死亡以保护PE小鼠胎盘功能。 结果4. WOA增强PE小鼠胎盘和肠道屏障 胎盘是连接母体和胎儿的重要器官，具有交换营养物质和抵抗母体有害物质的功能。在PE的病理过程中，异常胎盘形成导致炎症反应；反过来，胎盘炎症通过破坏紧密连接导致胎盘屏障功能丧失（Fisher，2015a；Tossetta等，2014a；Ward等，2023）。为验证WOA对PE的保护作用是否与胎盘屏障相关，我们检测了胎盘中的炎症和紧密连接蛋白。首先，与NP组相比，PE组胎盘中促炎细胞因子（Il-1β、Il-6和Tnf-α）mRNA水平更高。然而，WOA-H补充显著降低这些水平（图4A）。与NP组相比，PE组血清中TNF-α和IL-6水平显著升高，而WOA给药抑制了这种升高（图4B，图S2A）。这些结果表明WOA-H补充可改善PE小鼠的胎盘炎症。然后，我们评估了胎盘中紧密连接蛋白（ZO-1、Occludin和Claudin-1）的含量。与NP组相比，PE组紧密连接蛋白mRNA水平显著降低，表明PE损害胎盘屏障完整性，然而WOA-H修复了这种损伤（图4C）。此外，免疫组织化学分析呈现相同结果（图4E和F）。总之，这些发现表明WOA-H增加胎盘屏障完整性以保护胎盘结构。 母体营养物质通过肠道吸收，进入循环并通过胎盘输送给胎儿。然后，我们评估了WOA-H对PE小鼠肠道的影响。与NP组相比，我们观察到PE组结肠中Il-1β、Il-6和Tnf-α mRNA水平显著增加，表明PE小鼠发生肠道炎症。重要的是，WOA-H治疗后肠道炎症可缓解（图4A）。肠道炎症导致屏障损伤以增加屏障通透性，导致肠道微生物产生的有害物质进入循环。我们发现与NP组相比，PE组血清脂多糖（LPS，肠道屏障完整性的重要标志物）持续升高，然而WOA-H干预将其逆转至正常妊娠水平（图4D）。这一发现表明WOA-H降低肠道屏障通透性以保持肠道屏障功能（图4D）。在结肠中，与NP组相比，PE组Zo-1、Occludin和Claudin-1 mRNA水平确实降低，但在WOA-H组中增加（图4C）。免疫组织化学分析揭示相同结果（图4G和H），这在胎盘中也观察到。值得注意的是，胎盘和结肠中的ZO-1、Occludin和Claudin-1呈显著正相关，提示肠-胎盘轴可能参与PE的改善（图S3A-C）。总之，WOA-H给药增强胎盘和肠道屏障并减轻PE小鼠的炎症反应。 结果5. WOA改善PE小鼠肠道菌群失调 PE患者的肠道微生物组处于菌群失调状态并促进疾病发病。为探讨WOA对PE小鼠肠道微生物的影响，我们进行了16S rRNA基因测序分析。首先，我们分析α多样性以评估物种丰富度和多样性。反映物种丰富度的Chao指数和Ace指数显示，与NP组相比，PE组显著增加，但在WOA-H组中降低（图S4A-B）。包括Shannon指数和Simpson指数在内的物种多样性显示，与NP和PE组相比，WOA-H组显著降低（图5A和B）。然后，主坐标分析（PCA）显示PE组肠道菌群构建与NP组和WOA组显著偏离（图5C）。为阐明各组肠道菌群的组成和结构，我们在门和属水平进行了进一步分析。在门分类水平，小鼠中前5位的微生物为芽孢杆菌门、放线菌门、脱硫杆菌门、拟杆菌门和疣微菌门（图5D）。在属分类水平，与NP组相比，PE组葡萄球菌和Lachnoclostridium相对丰度更高；PE组双歧杆菌和Akkermansia相对丰度显著降低，然而WOA-H治疗显著将其丰度恢复至NP组水平（图5E）。我们进一步进行线性判别分析效应大小（LEfSe）分析，通过在属水平识别微生物生物标志物来区分不同组（图5F）。Christensenellaceae_R-7_group和Candidatus_Stoquefichus作为病原体或条件致病菌，在PE组中确实更高（图S4C-D）。然而，补充WOA-H导致双歧杆菌和Akkermansia（被认为是产SCFA细菌）增加（图5G和H）。接下来，我们整合表征每组的8个最相关分类群计算微生物菌群失调指数（MDI），用于评估微生物菌群失调程度。与NP组相比，PE组MDI显著升高，但这种效应被WOA-H补充逆转（图S4E），提示PE小鼠发生肠道微生物菌群失调，然而WOA干预逆转这种菌群失调。 进行Spearman相关分析以评估肠道微生物丰度与PE相关参数（包括PE症状、血管生成因素和胎盘肠道屏障特征）之间的关联（图5J）。Christensenellaceae_R-7_group和Candidatus_Stoquefichus与SBP、sFlt-1/PlGF比值和LPS呈显著正相关。然而，双歧杆菌和Akkermansia与SBP和sFlt-1/PlGF比值呈负相关。这些发现表明WOA在PE小鼠中的增强作用与有益菌的存在相关，而与有害菌的存在呈负相关（图5J）。肠道菌群组成的变化总是伴随着生理功能的变化。因此，我们进行PICRUSt分析预测基因组水平的微生物生理功能。使用京都基因与基因组百科全书（KEGG）注释和功能富集，我们鉴定了18个在PE和WOA-H组间富集水平不同的功能类别（图5I）。特别是，与PE病理相关的铁死亡功能通路在PE组中显著增强。此外，WOA-H组显著增强与营养代谢相关的微生物功能，如嘌呤代谢、淀粉和蔗糖代谢以及赖氨酸生物合成（图5I）。总之，这些结果支持WOA改善PE小鼠肠道菌群失调，WOA的作用可能与其益生元功能相关。 结果6. WOA小鼠肠道菌群移植缓解PE小鼠症状和血管失衡 进行粪菌移植以确认WOA对PE的有益作用是否通过肠道菌群介导（图6A）。与PE组相比，FMT-WOA-H组小鼠SBP和尿蛋白显著降低（图6B和C），胎盘重量、胎儿重量、胎儿-胎盘重量比显著增加（图6D-G）。这些结果表明FMT干预改善了母体PE症状，促进胎儿生长，提高胎盘效率。同时，在FMT组中，与PE组相比，胎盘迷路区与结合区的比值增加（图6H和I），提示FMT干预减轻PE引起的胎盘结构损伤。然后，我们探讨WOA调节的微生物群对PE小鼠血管生成因子的影响。与PE组相比，FMT-WOA-H组血清VEGF和PlGF水平显著增加，血清sFlt-1和sFlt-1与PlGF比值显著降低（图6J-M），证明FMT缓解PE小鼠血管生成失衡。此外，与PE组相比，FMT-WOA-H组血清LPS水平显著降低（图6N），表明FMT有效降低肠道通透性。总之，FMT干预减轻PE小鼠表型，改善不良妊娠结局，减轻胎盘损伤并逆转PE小鼠血管生成失衡。这些结果表明肠道菌群在WOA缓解PE的过程中发挥显著的上游作用。 结果7. 补充双歧杆菌缓解PE小鼠症状 我们观察到WOA干预后益生菌双歧杆菌显著富集。此外，我们确定是双歧杆菌（B. bifidum）在WOA-H组小鼠胎儿中富集（图7A）。然后，为研究双歧杆菌对PE的缓解作用，我们给L-NAME诱导的PE小鼠补充双歧杆菌（图7B）。与PE组相比，补充双歧杆菌确实降低SBP和尿蛋白水平（图7C和D），显著增加胎盘重量、胎儿重量和胎儿-胎盘重量比，提示双歧杆菌可减轻PE表型、不良妊娠结局并提高胎盘效率（图7E-H）。与PE组相比，双歧杆菌组胎盘迷路区与结合区的比值降低，从而证明双歧杆菌可逆转PE对胎盘结构的损伤（图7I和J）。评估关键血管生成因子以评估胎盘血管状态。与PE组相比，双歧杆菌组胎盘Vegf和Plgf表达显著上调，sFlt-1表达显著下调（图7K），支持双歧杆菌干预恢复胎盘血管生成失衡。我们还发现与PE组相比，双歧杆菌组小鼠胎盘中铁死亡相关标志物（Fpn1、Fth1、Xct和Gpx4）mRNA水平显著上调（图7K）。此外，与NP组相比，PE组胎盘中Fe²⁺增加、GSH降低，补充双歧杆菌后这些指标被逆转（图7L和M）。这些发现提示双歧杆菌抑制胎盘铁死亡以保护PE小鼠胎盘功能。因此，补充双歧杆菌通过缓解母体症状、改善不良妊娠结局、减轻胎盘损伤、逆转血管生成失衡和抑制胎盘铁死亡来缓解PE小鼠PE。 结果8. 香草酸富集双歧杆菌缓解PE小鼠症状 为研究WOA的哪种成分发挥抗PE保护作用，我们分析了WOA的成分（图S1和补充表2）。其中，香草酸（VA）是最重要的成分（含量11.73 mg/mL）。首先，我们通过将PE组小鼠新鲜粪便与VA在厌氧条件下共培养，证实VA促进双歧杆菌体外生长（图8A）。体外共培养12小时后，与单独在培养基中培养的肠道微生物相比，VA共培养的肠道微生物中双歧杆菌表达确实上调（图8B）。补充VA后（图8C），正常妊娠小鼠未观察到不良影响；但PE小鼠与PE组相比SBP和尿蛋白更低（图8D和E），胎盘重量、胎儿重量和胎儿-胎盘重量比更高（图8F-I），提示VA可缓解PE症状并减轻不良妊娠结局和胎盘效率低下。与PE组相比，PEVA组胎盘迷路区与结合区的比例更低（图8J和K），证明VA可逆转PE对胎盘结构的损伤。特别是，我们在PEVA组小鼠粪便中检测到双歧杆菌高表达（图8L）。 总之，VA富集双歧杆菌以缓解PE小鼠症状。 4. 讨论 PE是一种严重危害孕妇和围产儿生命健康的妊娠相关疾病。目前，由于病因不明，缺乏有效的预测、预防和治疗PE的方法（Brown等，2018）。中药具有多通路、多成分、多靶点的独特优势，在PE的防治方面取得了成就（Jin等，2022；Liu等，2021；Yang等，2023）。由于其有益的药理特性，挥发油已被广泛研究（Commission，2020）。然而，据我们所知，关于AVL非挥发性成分的研究有限。水煎是中药常用的制备方法。因此，在本研究中，我们制备了砂仁水提物（WOA）并评估其对PE的作用。我们证明WOA抗PE是通过恢复血管生成失衡、抑制胎盘铁死亡和增强肠-胎盘屏障实现的。值得注意的是，WOA通过香草酸活性诱导双歧杆菌富集，减轻模型小鼠PE。我们的结果支持妊娠期间补充AVL作为预防和治疗PE的潜在安全有效方法。 胎盘作为母体和胎儿之间的桥梁，负责营养转运和防御有害物质。健康的胎盘促进胎儿生长，而功能不良的胎盘可导致胎儿生长受限（Fisher，2015b；Tossetta等，2014b；Ward等，2023）。越来越多的临床研究报告PE患者总铁浓度显著增加，关键是胎盘发生铁死亡（Liu等，2019b；Yang等，2022；Yang等，2022；Zhang等，2020b）。铁死亡是一种以铁过载和脂质过氧化为特征的细胞死亡形式（Lee等，2024）。在我们的研究中，除PE小鼠胎盘铁浓度过度外，FPN1（用于铁输出）和FTH1（用于铁储存）蛋白表达显著下调，进一步证实铁稳态失衡。此外，PE小鼠胎盘铁死亡相关蛋白表达改变，xCT、GSH和GPX4蛋白水平显著下调，表明细胞内抗氧化剂耗竭。这些发现是PE小鼠胎盘铁死亡的特点。值得注意的是，WOA干预后铁死亡相关蛋白水平和胎盘Fe²⁺显著恢复至正常水平，表明WOA改善紊乱的铁稳态并逆转细胞内抗氧化剂耗竭以抑制PE小鼠胎盘铁死亡。 升高的铁诱导肠道上皮细胞铁死亡，破坏肠道黏液层，导致紧密连接蛋白丢失，促进肠道炎症，导致肠道屏障损伤（Chen等，2020c；Fang等，2018；Jaeggi等，2015；Luo等，2021；Qi等，2020）。此外，据报道过量铁破坏肠道有益菌和有害菌之间的平衡。PE与肠道菌群失调相关，可加剧病理过程，提示肠-胎盘轴的参与（Chen等，2020a）。特定肠道细菌（如机会致病菌梭杆菌）易位进入胎盘，最终触发炎症和胎盘形成和生长不良（Hampton，2020）。Zhang等（2024）的早期研究揭示调节肠-胎盘轴可有效缓解肠道来源的胎盘损伤或胎儿生长受限。我们课题组此前证明葛根（PLR）通过保护肠道和胎盘屏障改善PE小鼠症状（Huang等，2022）。在我们的研究中，WOA通过多种途径有效修复PE小鼠肠道屏障，如减轻肠道炎症、增强肠道紧密连接蛋白表达和维持肠道屏障通透性。修复的肠道屏障可抑制病原菌和LPS易位，从而减少胎盘炎症并增强保护胎盘的能力。在胎盘中，WOA干预减少炎症同时增加紧密连接蛋白表达，进一步证实其对胎盘屏障的保护作用。相关分析揭示肠道和胎盘屏障的一致变化，进一步支持肠道与胎盘之间的关联。此外，根据将WOA处理小鼠粪菌移植至PE小鼠获得的数据，肠道菌群被证实为WOA影响的关键上游调节因子。因此，我们推断WOA通过调节肠-胎盘轴保护胎盘。 肠-胎盘轴在PE中至关重要，诱导肠道微生物组成改变可产生有益作用（Ahmadian等，2020；Chen等，2020a）。在我们的研究中，我们观察到Akkermansia和双歧杆菌丰度与收缩压以及sFlt-1/PlGF比值呈负相关，提示Akkermansia和双歧杆菌可能参与PE血压和血管生成的调节。有趣的是，WOA处理的PE小鼠中Akkermansia和双歧杆菌相对水平同时显著上调。在2型糖尿病小鼠接受葛根抗性淀粉给药后也检测到Akkermansia和双歧杆菌富集（Song等，2021）。与我们之前的发现相似，葛根抗性淀粉（PLR-RS）补充增加缺血性卒中大鼠Akkermansia和双歧杆菌含量，突出这两种细菌之间的共生关系（Lian等，2023）。Akkermansia muciniphila是一种定植于黏膜层的肠道共生菌，据报道通过其衍生的细胞外囊泡和短链脂肪酸代谢产物减轻PE症状，促进滋养细胞侵袭从而改善螺旋动脉重构（Chen等，2023；Jin等，2022）。肠道微生物组是一个复杂的生态系统，成员之间的相互作用负责肠道微生态的稳定性，影响宿主健康和疾病（Wu等，2021）。我们推测Akkermansia将肠道黏液层厚度增加至有益程度以维持肠道完整性（Derrien等，2008；Yan等，2021），这可能为双歧杆菌的定植和生长提供适宜的肠道环境。双歧杆菌是一种公认的肠道益生菌，通过增强紧密连接蛋白表达对肠道屏障发挥保护作用（Tang等，2023），表明其对防止有害细菌和内毒素易位的保护作用。母体妊娠期双歧杆菌治疗促进胎盘形态发生、营养转运和胎儿生长（Lopez-Tello等，2022）。此外，在后代中，双歧杆菌塑造肠道微生物组并促进免疫系统发育（Cheng等，2022）。双歧杆菌在早期两样本孟德尔随机化研究中与PE相关（Li等，2022）。在我们的研究中，在WOA处理的PE小鼠胎儿中检测到四种优势双歧杆菌（B. bifidum、B. longum、B. breve和B. animalis），其中B. bifidum被确定为最关键的菌株。我们发现补充B. bifidum的PE小鼠母体高血压和尿蛋白水平降低，胎儿重量和胎盘效率增加，胎盘损伤减轻。我们的发现首次表明双歧杆菌富集在PE改善中发挥作用。此外，肠道菌群组成的改变可显著影响其代谢产物。短链脂肪酸（SCFAs）是肠道菌群的重要代谢产物，与胎盘功能密切相关（Husso等，2023）。例如，肠道菌群产生的SCFAs促进巨噬细胞分化并抑制胎盘炎症，抵抗PE的发展（Huang等，2023）。此外，在我们的研究中，WOA富集的益生菌如Akkermansia和双歧杆菌可产生SCFAs。Akkermansia可通过SCFAs调节胎盘巨噬细胞极化和螺旋动脉重构，从而缓解PE（Jin等，2022）。一项临床研究显示，补充双歧杆菌和长双歧杆菌显著增加血液透析患者SCFAs水平（Wang等，2022）。高水平的SCFAs可减少肠道炎症并增强肠道屏障完整性，从而防止病原菌入侵（Pertiwi等，2024）。除了在肠道的保护作用外，SCFAs还可被吸收进入血液循环（Doan等，2024）。SCFAs在结肠的吸收涉及载体介导机制和简单扩散。参与SCFAs摄取的转运蛋白包括钠耦合单羧酸转运蛋白（SMCTs）和单羧酸转运蛋白（MCTs），位于肠道上皮和基底外侧膜（Hsu等，2024）。吸收后，SCFAs可通过循环系统延伸至许多远端器官系统（Sun等，2017）。因此，我们推测肠道菌群产生的有益代谢产物可通过血液循环到达胎盘并减轻PE引起的胎盘损伤。 除肠道微生物相互作用的影响外，WOA成分的直接作用也可能共同促进双歧杆菌的富集。我们发现VA干预增加体内外双歧杆菌丰度。目前，VA是食品、饮料、化妆品和制药工业中使用的重要的香料，表明其对孕妇应用的安全性（Lubbers等，2021）。在我们的研究中，通过HPLC对WOA成分定量显示香草酸（VA）、表儿茶素、虎杖苷和异槲皮苷为主要成分，其中VA含量最高。其中，VA分子量最小，提示其吸收速度更快，更容易进入血液循环系统。此外，VA是一种具有多种药理特性的酚酸化合物，包括抗高血压、抗炎和抗氧化活性（Ni等，2024）。据报道，VA通过上调L-NAME诱导的高血压大鼠主动脉内皮一氧化氮合酶（eNOS）表达使高血压正常化，突出其在高血压管理中的潜力（Kumar等，2014b）。此外，妊娠期间增加的铁需求最初通过动员母体储存满足，主要来自肝脏。随着这些储存耗尽，肠道成为铁吸收的主要来源，确保母体和后代供应充足（Millard等，2004）。据报道，VA通过限制肠道上皮细胞铁死亡抑制炎症并保护肠道屏障，提示其具有调节肠道铁吸收的潜力（Ni等，2024）。基于这些发现，我们推测WOA在PE小鼠中恢复血管生成、抗高血压和降低尿蛋白的作用可能与VA的生物活性密切相关。为验证这一假设，评估了口服VA对PE小鼠模型的作用。如预期，VA干预显著降低高血压，恢复尿蛋白水平，并逆转PE小鼠胎盘血管生成失衡（图S5）。有趣的是，VA在降低模型小鼠血压方面比WOA更有效（图S6）。此外，VA触发胎盘促血管生成因子（VEGF和PlGF）水平显著增加，同时抑制抗血管生成因子（sFlt-1），支持WOA通过VA调节保护PE模型小鼠血管功能的理论。据我们所知，迄今为止尚无关于AVL非挥发性成分对血管生成恢复贡献的研究。本研究数据支持基于其VA成分，AVL在缓解PE症状方面的新应用。然而，表儿茶素、虎杖苷和异槲皮苷干预PE的药效学研究也值得进一步研究。表儿茶素已被证明与NF-κB结合，提示其潜在抑制NF-κB磷酸化从而缓解PE内皮功能障碍（Rahayu等，2016）。据报道，表儿茶素还可降低精氨酸酶和NADPH（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸）氧化酶活性，提示其在抗高血压和抗氧化方面的潜力（González-Garrido Chem等，2013）。此外，异槲皮苷主要通过ACE抑制、增加缓激肽、PGI2（前列腺素I2）和一氧化氮（NO）生物利用度缓解自发性高血压大鼠高血压（Gasparotto Junior等，2011）。此外，据报道异槲皮苷减少自发性高血压大鼠ROS（Gasparotto Junior等，2011）。这些研究表明它们在改善PE方面的潜在价值，值得我们进一步研究。 在本研究中，我们首次证明WOA和VA均对PE具有保护作用。WOA主要通过抑制胎盘铁死亡、保护肠道和胎盘屏障、重塑肠道微生物群来缓解PE。我们的发现进一步支持肠-胎盘轴，并提示AVL有潜力被开发为孕妇安全有效的功能性食品。 5. 结论 我们的发现首次表明，AVL通过VA活性富集肠道B. bifidum含量以缓解PE小鼠症状。此外，AVL通过调节与肠-胎盘轴相关的多种通路预防流产。本研究为AVL作为PE治疗药的系统开发和临床应用提供了新方向，具有理论意义和实践价值。 点个在看你最好看