IL-10

▎药明康德内容团队编辑近年来，双特异性抗体（bsAbs）在医药领域引起了广泛关注，特别是在癌症治疗方面，bsAbs取得了显著的进展，仅在2021年到2023年间就有9种bsAbs获批用于治疗癌症。其取得成功的关键，在于bsAbs可以同时利用多种作用机制，提供了超越传统单克隆抗体的治疗潜力。近日，《自然》杂志子刊Nature Reviews Drug Discovery发表了一篇综述文章，深度剖析了bsAbs的发展现状与未来前景。在今天的文章里，药明康德内容团队将与读者分享其中的精彩内容。双特异性抗体的获批与临床开发现状bsAbs具备两个不同的抗原结合域，能够同时与两种不同的抗原或同一抗原的两个不同表位结合。这种独特的结构使得bsAbs能够同时针对多个靶点或表位，激发一系列的生理或抗肿瘤反应，这些反应既可以是相互独立的，也可能是相互关联的。这类疗法类似于由两种单克隆抗体混合而成的“鸡尾酒”，但对药物开发人员来说，他们只需开发一种分子，而患者也可能只需接受一种治疗就能取得预期的疗效。更重要的是，bsAbs的协同作用可能会带来更加显著的治疗效果。截至2023年底，共有14种bsAbs获批上市，其中11种用于癌症治疗，3种用于其他非肿瘤性疾病。▲癌症领域已获批上市的双特异性抗体（药明康德内容团队制作，数据来源：参考资料[1]）据统计，目前有200多种bsAbs在超过300个临床试验中进行评估，其中约73%的试验针对实体瘤，另外27%旨在治疗血液恶性肿瘤。值得一提的是，目前大约有50%处于临床开发阶段的bsAbs已经进入了后期阶段（2期和3期）或者已经获得批准。从作用机制来看，治疗实体瘤的bsAbs主要为免疫调节剂，其中包括双特异性免疫检查点抑制剂（CPIs，约45%）和双特异性T细胞接合剂（TCEs，约33%），其次是针对双重信号通路的bsAbs、免疫细胞接合剂（ICEs）和双特异性抗体偶联药物（ADCs）。而在治疗血液恶性肿瘤方面，TCEs占主导地位（约75%），其次是ICEs、双CPIs和自然杀伤细胞接合剂（NKCEs）。▲处于临床开发阶段的双特异性抗体在癌症治疗中的应用（图片来源：参考资料[1]）进入后期临床开发阶段的bsAbs概况截至2023年底，众多针对癌症治疗的bsAbs正在进行关键的后期临床试验（2期、2/3期以及3期试验），这些bsAbs靶向多种不同的靶点并采用多样的作用机制。随着这些临床试验的深入，预计其中一些新药有望获得监管部门的批准，从而为癌症患者提供更多的治疗选择。接下来，我们将针对一些已提交监管申请的bsAbs疗法展开介绍。▲处于后期临床开发阶段的双特异性抗体（药明康德内容团队制作，数据来源：参考资料[1]）Odronextamab（再生元）Odronextamab是一款靶向CD20和CD3的双特异性抗体，通过将表达CD3的T细胞募集到表达CD20的肿瘤细胞附近，激活T细胞杀伤肿瘤细胞。2023年9月，美国FDA接受了再生元为odronextamab递交的生物制品许可申请（BLA），用于治疗复发/难治性滤泡性淋巴瘤和弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL），FDA同时授予其优先审评资格。该BLA得到了1期临床试验和关键性2期临床试验（ELM-1和ELM-2）数据的支持。试验数据显示，在经前期大量治疗但未曾接受过CAR-T疗法的患者中，odronextamab治疗达到49%的客观缓解率（ORR），并有31%达成完全缓解（CR）。而在曾接受过CAR-T疗法的患者中，亦达到48%的ORR。此外，在临床1期的剂量扩增试验当中，可观察到32%的CR。Linvoseltamab（再生元）Linvoseltamab是一种旨在将多发性骨髓瘤细胞上的B细胞成熟抗原（BCMA）与表达CD3的T细胞桥接，以促进T细胞活化和癌细胞杀伤的双特异性抗体。去年12月，再生元向美国FDA递交linvoseltamab的BLA申请，FDA授予了该疗法优先审评资格，用以治疗患有复发/难治性多发性骨髓瘤的成年患者，患者在接受至少三种既往疗法后发生疾病进展。该申请的PDUFA日期为2024年8月22日。这一申请的递交是基于关键性1/2期临床试验LINKER-MM1的结果。去年12月公布的试验结果显示，中位随访时间为11个月时，在1/2期临床试验（n=117）中接受剂量为200 mg的linvoseltamab治疗的患者中观察到客观缓解率为71%，46%达到完全缓解或更佳。Tarlatamab（安进）Tarlatamab是一款可同时结合T细胞上的CD3和肿瘤细胞上的DLL3的双特异性抗体，使患者自身的T细胞与肿瘤细胞非常接近，从而导致免疫突触的形成和肿瘤细胞的裂解。FDA已于2023年12月接受了tarlatamab的BLA申请并授予优先审评资格，具体适应症为治疗铂类化疗期间或之后疾病进展的晚期小细胞肺癌（SCLC）成年患者。新闻稿指出，如果获得批准，tarlatamab将成为首款用于治疗实体肿瘤的双特异性T细胞接合剂疗法，PDUFA目标日期为2024年6月12日。该BLA是基于一项全球性2期临床试验DeLLphi-301的结果。试验结果显示，tarlatamab在铂类化疗期间或之后疾病进展的晚期SCLC患者中具有持久的抗肿瘤活性。在中位随访期为10.6个月时，包含100例接受选定10 mg剂量tarlatamab治疗患者的意向治疗分析显示客观缓解率为40%（97.5% CI：29，52）。在对10 mg剂量tarlatamab治疗有应答的患者中，58%的患者在数据截止时至少维持6个月的缓解，55%的缓解仍在进行中。Zanidatamab（Zymeworks，Jazz Pharmaceuticals）Zanidatamab是一款靶向HER2蛋白上两个不重复的抗原表位的双特异性抗体。Zanidatamab与HER2的结合可以阻断其信号传递、促进HER2自细胞表面移除，并已显示在几种表达HER2的癌症中具抗肿瘤活性，无论是作为单药还是与化疗或其他药物联合使用。这个月，Jazz Pharmaceuticals和Zymeworks共同向美国FDA滚动提交BLA，寻求加速批准zanidatamab上市，用以治疗经治、不可切除、局部晚期或转移性HER2阳性胆道癌（BTC）患者。新闻稿指出，如果获得批准，zanidatamab将成为FDA批准用于BTC治疗的首个HER2靶向药物。该BLA的申请主要包括HERIZON-BTC-01临床2b期试验的数据。截至2022年10月，来自该队列1的80名HER2阳性BTC患者的数据表明，独立中央审评（ICR）所评估的确认客观缓解率为41.3%（95% CI：30.4，52.8），而Kaplan-Meier曲线分析显示患者的中位缓解持续时间为12.9个月（95% CI：6.0-不可估计）。过往研究显示，BTC患者接受2线标准护理化疗的历史缓解率为5-15%。新一代双特异性抗体双特异性抗体技术自问世以来发展迅速，已在癌症治疗中确立了其关键作用。目前，研究者们正积极探索新的技术和应用领域，旨在克服现有bsAbs疗法的局限。在这个过程中，一些创新的bsAbs形式正在被开发，这些新型bsAbs具有推进癌症治疗新界限的巨大潜力。以下针对几类创新bsAbs药物形式展开介绍。▲双特异性抗体领域的新兴药物形式（图片来源：参考资料[1]）1. 三特异性T细胞接合剂共刺激信号与双特异性T细胞接合剂（TCEs）的结合能够有效激活T细胞，这一过程既可以通过联合应用双特异性TCEs和共刺激bsAbs实现，也可通过在TCE中引入针对共刺激受体的第三个结合位点，从而创造出三特异性抗体来达成。目前，有2种三特异性TCEs正在临床试验中接受检验，分别是SAR443216和SAR442257。SAR443216是一款针对HER2、CD3及CD28的三特异性抗体，这款抗体能够激活原始CD4及CD8 T细胞，诱导T细胞增殖细胞因子和颗粒酶B的释放，以及介导针对HER2阳性肿瘤细胞的T细胞杀伤作用，包括那些HER2表达较低的细胞。另一种三特异性抗体SAR442257，其靶点为CD38（在多发性骨髓瘤中过表达）。该抗体不仅能与CD38结合，还能结合CD3受体，并且带有与共刺激受体CD28结合的蛋白域，激活CD28信号通路可以增强活化后T细胞的存活以及形成“T细胞记忆”。目前这两款疗法都处于1期临床开发阶段。2. bsAb前体药物其中一种前体药物在达到肿瘤部位时通过环境触发因子，如与肿瘤相关的蛋白酶，被选择性地激活转化为功能性bsAbs，展示出显著的肿瘤特异性。另一策略包括采用两种设计为在未组装状态下非活性的bsAbs，这些bsAbs仅在与肿瘤抗原结合并在原位完成组装后转变为活性状态。这种策略要求分子在未达到靶点之前防止任何预期外的组装行为发生。特别值得关注的是，最近研发的一种ATP依赖性开关被引入至抗4-1BB抗体的结合位点中，这一开关利用肿瘤中升高的ATP水平作为触发机制，旨在增强针对肿瘤的选择性并降低对非肿瘤组织的毒性作用。这种方法有望被推广应用于其他的靶点分子。3. 双特异性抗体PROTAC最近，一种新兴概念被提出，即通过使用bsAbs靶向降解增殖相关蛋白，从而抑制其活性。这一策略借鉴了多特异性小分子蛋白酶靶向嵌合体（PROTACs）的原理，通过设计bsAbs以诱导癌症相关表面蛋白的内吞作用和随后的降解。这些bsAbs具备同时结合目标蛋白以及促进该蛋白内吞及降解的因子（例如E3泛素连接酶或转铁蛋白受体）的能力。这一技术目前仍处于早期开发阶段，目前还未有相关研究进入临床试验。4. bsAb的局部递送另一新兴的bsAb研发策略强调在治疗部位产生和递送bsAbs。这一策略涉及使用脂质纳米粒子递送mRNA、溶瘤病毒或其他基因治疗方法（包括CAR-T细胞技术），以实现bsAb的局部化治疗。这种方法的优势在于能够提高治疗效果，同时减少全身性副作用。5. 细胞因子模拟物双特异性抗体在医药领域的又一应用是充当细胞因子模拟物或合成细胞因子激动剂。它们通过模仿IL-2、IL-15、IL-18、I型干扰素和IL-10等细胞因子的信号传导，有效触发相应的生物反应。这类抗体衍生的细胞因子模拟物在癌症免疫治疗中的潜在应用前景广阔。大家都在看▲欲了解更多前沿技术在生物医药产业中的应用，请长按扫描上方二维码，即可访问“药明直播间”，观看相关话题的直播讨论与精彩回放参考资料：[1] Klein, C., Brinkmann, U., Reichert, J.M. et al. The present and future of bispecific antibodies for cancer therapy. Nat Rev Drug Discov (2024). https://doi.org/10.1038/s41573-024-00896-6[2] ODRONEXTAMAB BLA FOR TREATMENT OF RELAPSED/REFRACTORY FOLLICULAR LYMPHOMA (FL) AND DIFFUSE LARGE B-CELL LYMPHOMA (DLBCL) ACCEPTED FOR FDA PRIORITY REVIEW，Retrieved April 3, 2024 from https://investor.regeneron.com/news-releases/news-release-details/odronextamab-bla-treatment-relapsedrefractory-follicular[3] LINVOSELTAMAB BLA FOR TREATMENT OF RELAPSED/REFRACTORY MULTIPLE MYELOMA ACCEPTED FOR FDA PRIORITY REVIEW，Retrieved April 3, 2024 from https://investor.regeneron.com/news-releases/news-release-details/linvoseltamab-bla-treatment-relapsedrefractory-multiple-myeloma[4] FDA GRANTS PRIORITY REVIEW TO AMGEN'S TARLATAMAB APPLICATION FOR ADVANCED SMALL CELL LUNG CANCER，Retrieved April 3, 2024 from https://www.amgen.com/newsroom/press-releases/2023/12/fda-grants-priority-review-to-amgens-tarlatamab-application-for-advanced-small-cell-lung-cancer[5] Jazz Pharmaceuticals Completes Zanidatamab Biologics License Application for Previously Treated HER2-Positive Metastatic Biliary Tract Cancer. Retrieved April 3, 2024 from https://www.prnewswire.com/news-releases/jazz-pharmaceuticals-completes-zanidatamab-biologics-license-application-for-previously-treated-her2-positive-metastatic-biliary-tract-cancer-302105018.html免责声明：药明康德内容团队专注介绍全球生物医药健康研究进展。本文仅作信息交流之目的，文中观点不代表药明康德立场，亦不代表药明康德支持或反对文中观点。本文也不是治疗方案推荐。如需获得治疗方案指导，请前往正规医院就诊。版权说明：本文来自药明康德内容团队，欢迎个人转发至朋友圈，谢绝媒体或机构未经授权以任何形式转载至其他平台。转载授权请在「药明康德」微信公众号回复“转载”，获取转载须知。分享，点赞，在看，聚焦全球生物医药健康创新

深度聚焦多肽、多肽偶联药物研发、质控、工艺开发，7月相约苏州，联系电话18116036798目前，治疗肿瘤的主要手段有手术切除、放射治疗和化学药物治疗。化疗药物不仅杀伤肿瘤细胞，同时也作用于广泛的正常细胞，产生各种各样的毒副作用。而化疗药物的耐药性也是其不能有效治疗肿瘤的原因。因此，研制高效、低毒副作用的抗肿瘤药物显得尤为重要。与传统化疗药物相比，多肽类药物具有分子量小、对肿瘤敏感、不易耐药、成本低等特点，这使得多肽类药物受到了国内外的积极研究与开发，此外，多肽也是肿瘤抗原中起作用的主要成分，多肽疫苗的研发也将为肿瘤患者带来希望。本文就多肽药物抗肿瘤的作用机制及多肽作为免疫检查点阻断剂的最新研究进展进行总结，一起来看看吧！一、多肽药物的抗肿瘤机制多肽是以氨基酸为基本单位组成的分子，分子量一般在10 KDa以下，介于化学小分子与生物制品之间，其主要特点是选择性高、作用浓度低。1、调节免疫功能 肿瘤免疫治疗是通过人体自身免疫系统对肿瘤做出反应，从而达到治疗癌症的目的。作为一种生物疗法，免疫治疗已成为除了手术治疗和放化疗之外的第4种重要的肿瘤治疗手段。免疫应答可以分为特异性免疫应答和非特异性免疫应答。非特异性免疫又称固有免疫，固有免疫细胞包括巨噬细胞、树突状细胞、NK细胞等，通过模式识别受体或有限多样性抗原识别受体对病原体等识别结合产生非特异性抗肿瘤等作用。Sun 等[18] 研究表明不同浓度的杏鲍菇菌丝体（PEMP）多肽能够刺激巨噬细胞释放NO、H2O2和TNF-α等抑制癌细胞的增殖，增强巨噬细胞的吞噬能力从而发挥抗肿瘤的作用。 特异性免疫应答可以分为T淋巴细胞介导的适应性免疫即细胞免疫和B淋巴细胞介导的体液免疫2种。T细胞可以分为CD4+T细胞和CD8+T细胞，在 特异性抗原部位发挥效应功能的主要是细胞毒性T 淋巴细胞（CTL）。CTL 是细胞免疫的主要效应细胞，特异性地杀伤胞内病原体感染细胞和肿瘤细胞等。Sun等研究开发人类磷脂酰乙醇胺结合蛋白4（hPEBP4）衍生的免疫原性肽来诱导针对乳腺癌的抗原特异性CTL，并鉴定了一种新的免疫原性肽 P40-48（TLFCQGLEV），其能够在 HLA-A2.1/Kb 转基因小鼠以及来自乳腺癌患者的外周血淋巴细胞中引发特异性CTL应答。用2种类似物接种诱导的CTL的继承性转移比天然肽更有效地抑制肿瘤生长。Xie等通过HLA结合预测算法搜索来自Eps8蛋白的新型人类白细胞抗原（HLA）-A*2402 限制性表位，来自 Eps8 的新的 HLA-A*2402 限制性表 的肽327（EFLDCFQKF）、534（KYAKSKYDF）和755（LFSLNKDEL）诱导肽特异性CTL分泌更高水平的IFN-γ并显示出增强的抗恶性癌细胞的细胞毒活性，通过抑制Eps8/EGFR相互作用，肽327和TAT327可以作为新的肽抑制剂，这可以提供治疗各种癌症的创新方法。B细胞作为体液免疫的主要细胞，其对肿瘤具有双重作用，即促进抗肿瘤反应和诱导免疫耐受。根据功能的不同，B细胞可分为效应性B细胞和调节性B细胞。其中调节性B细胞（Bregs）与肿瘤的关系十分密切，其肿瘤免疫中的作用机制主要有以下几个方面：一方面，Bregs可以通过分泌IL-10，减少Th1细胞和Th17等T细胞的分化，减少肿瘤抑制性细胞因子的表达从而促进肿瘤的生长；另一方面，Bregs可以通过分泌TGF-β、协同共刺激分子和IL-10一同诱导 Tregs的产生，从而通过Tregs抑制免疫效应细胞的功能以此保护肿瘤细胞。效应性B细胞分又1型和2型2种亚型。其中1型效应性B细胞（Be1）主要产生TNF-α、IFN-γ和IL-12等促炎细胞因子发挥抗肿瘤的作用；而2型效应性B细胞（Be2）主要产生IL-4、IL-13等细胞因子，Th2细胞反应有关。Huang等研究表明单独CpG足以抑制BRAF抑制剂诱导的抗肿瘤反应，表明在接受基于CpG的肽疫苗的小鼠中观察到的BRAF抑制剂的抗肿瘤活性受损主要取决于使用CpG。CpG增加了循环B细胞的数量，这产生了增加量的TNF-α，这有助于BRAF抑制剂对肿瘤的抗性增加。常旭、欧红利对美洲大蠊的抗肿瘤作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响等方面进行了研究，表明了美洲大蠊多肽是通过提高荷瘤小鼠免疫功能来实现抗 肿瘤作用的机制。图片来源：摄图网2、抑制肿瘤新生血管形成 新生血管是肿瘤获取营养保证自身发展的重要途径，肿瘤血管生成是肿瘤诱导体内多种因子共同作用的结果，其中主要是促进因子和抑制因子共同作用的结果，正常情况下两者处于平衡状态。在多种的促进因子中血管内皮生成因子（VEGF）是血管生成的重要调节物，其受体（VEGFR）主要有VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3 3种。目前研究的抗肿瘤肽类药物在抑制血管生成方面的机制是多数学者研究的热点。例如，Qi等研究发现金属蛋白酶-3（TIMP-3）的组织抑制剂通过其阻断VEGF与其受体VEGFR-2的结合的能力，是VEGF介导的血管生成和新血管形成的有效抑制剂。Bracci 等研究的支链肽NT4结合HSPG并选择性靶向癌细胞和组织。NT4证明对内皮细胞增殖、迁移和管形成具有重要影响，特别是当由FGF2和凝血酶诱导时。此外，NT4对侵袭性肿瘤细胞迁移和侵袭具有重要作用。因此，抗肿瘤多肽类药物的抗血管生成机制为其成为肿瘤靶向药物的发展提供了线索。3、促进细胞凋亡 细胞凋亡又称细胞程序性死亡，是细胞正常死亡的主要方式，在清除细胞过程中起着重要的作用。当凋亡信号通路异常时就会出现多种疾病，其中就包括细胞癌变，细胞凋亡的抗性与肿瘤发生密切相关。在机体内，细胞凋亡有主要的2种途径：外源性通路，其主要是通过细胞表面的凋亡受体刺激激活的；内源性通路，除受凋亡信号激活外还有破坏线粒体膜完整性。与细胞凋亡密切相关的信号通路还有很多，比如Bcl-2家族和Fas/FasL途径。Bcl-2家族主要有2大类蛋白，一类为抗凋亡蛋白（Bcl-2），另一类为促凋亡蛋白（Bax），在肿瘤细胞中，抗凋亡蛋白（Bcl-2）过度表达导致细胞抗凋亡能力提高，肿瘤细胞的生长无法受到调控。多肽类药物诱导细胞凋亡可以通过影响Bcl-2家族蛋白。张丹等研究表明，美洲大蠊多肽可以通过上调Bax蛋白表达，下调Bcl-2蛋白表达，诱导人肝癌细胞SMMC-7721发生凋亡，从而抑制肿瘤细胞的增殖。因此，靶向调节Bcl-2家族成为治疗肿瘤的有效途径。另一个为 Fas/FasL 信号通路，是调节细胞凋亡的主要途径之一，Fas/FasL 信号通路的激活诱导细胞的凋亡。Kuo等研究表明从尼罗河罗非鱼中提取的低浓度海洋抗菌肽（AMP）MSP-4通过激活Fas/FasL信号通路诱导骨髓瘤MG63发生细胞凋亡从而发挥抗肿瘤作用。二、多肽作为免疫检查点抑制剂（一）单靶点多肽1、PD-1/PD-L1 多肽 高通量展示筛选技术在免疫检查点阻断肽的筛选中发挥着非常重要的作用。Tao等利用噬菌体展示技术筛选获得了靶向PD-1的多肽P-F4；Liu等利用同样的方法获得了靶向PD-L1的多肽CLP002；Li等首次利用细菌表面展示技术筛选获得了针对PD-L1的多肽TPP-1；Kamalinia等利用mRNA展示技术获得了PD-L1多肽SPAM。 然而，上述多肽均为L构型氨基酸组成的线性多肽，构象和抗酶解稳定性较差。为了获得构象更为稳定的多肽，环肽是一种较好的选择。2015 年，Maute 等利用酵母展示技术获得高亲和 PD-L1 的 PD-1 蛋白突变体，其亲和力是野生型 PD-1 的74000倍，该 PD-1 高亲和突变体已经被应用于靶向 PD-L1 多肽的设计。Jeong 等通过从上述 PD-1 蛋白突变体截取多肽片段，并利用树枝状大分子形成了多价的 PD-L1 多肽偶联物。无独有偶，Yin 等基于 PD-1 高亲和突变体，提出了 “多肽模拟设计”的概念，并设计了具有高亲和力和较 好抗肿瘤效果的 PD-L1 的大环肽 MOPD-1。PD-1/PD-L1 受配体相互作用是介导肿瘤免疫逃逸的关键因素之一，抑制其介导的负性信号通路能够打破机体已经建立的免疫耐受，并能使 PD-1 免疫细胞的功能耗竭得以改善。国内外已有多个课题组和公司也在研发 PD-1/PD-L1 的小分子药物，大多数小分子药物可以无障碍地进入细胞内部。与传统的放化疗相比，PD-1/PD-L1 的多肽阻断剂通常不会直接影响肿瘤细胞的增殖或迁移，而是通过调动免疫系统的功能而杀伤肿瘤细胞。此外，PD-1 主要在免疫耐受的维持阶段发挥作用，这意味着 PD-1/PD-L1 的阻断不会带来严重的不良反应。总之，PD-1/PDL1 的多肽阻断剂有望为肿瘤免疫治疗提供极具潜力的候选药物。2、其他免疫检查点多肽 以 PD-1/PD-L1 抗体为代表的基于免疫检查点阻断的肿瘤免疫治疗已经在临床治疗中取得了显著的效果。然而，在 PD-1 抗体治疗过程中，其他免疫检查点分子如 TIM-3 和 TIGIT 表达上调，会引起 PD-1 抗体治疗的适应性耐药。在黑色素瘤患者中，即便部分患者有较高的肿瘤突变负荷和炎性肿瘤微环境，TIGIT/PVR 通路仍会介导 PD-1 抗体治疗的耐药性。考虑到免疫反应的动态变化以及免疫检查点表达调控的复杂性，难以依靠任何单一的靶点实现最佳的治疗效果，针对其他免疫检查点通路的单抗药物研究也在进行中，而相关的多肽阻断剂研究也逐渐受到关注。 TIGIT/PVR 通路在肿瘤免疫抑制中发挥着重要的作用，阻断 TIGIT/PVR 能够增强 PD-1/PD-L1 阻断的治疗效果，并有望克服 PD-1/PD-L1 抗体治疗耐药。免疫检查点多肽阻断剂图片来源：参考文献[1]（二）双功能多肽 双特异性抗体是当前抗体药物研发的热点，已有多个双特异性抗体获得FDA批准用于临床研究。与双特异性抗体的作用相同，双功能多肽是将针对两个功能相关或互补的靶点的多肽分子进行偶联，偶联后的多肽不仅能够保留单靶点多肽的功能活性，还可以增加多肽的稳定性和半衰期。与单靶点多肽相比，双功能多肽可以同时针对生物体内不同的信号传导发挥功能，将不同靶点多肽进行合理设计还能够起到 1+1>2 的效果。相较于 双特异性抗体，双功能多肽的设计和合成更为简便。 （三）自组装多肽 通过合理的设计，特定序列的多肽自身也能够自组装构建药物递送系统。Wang 等利用具有自组装功能的 G7 肽（GNNQQNY）将靶向 CD3 的多肽与靶向整合素 αvβ3 的RGD肽连接形成双功能多肽 anti-CD3-G7-RGD，该多肽在靶向 T 细胞的 CD3 受体的同时，利用 G7 肽原位自主装形成纳米寡聚物的特性，诱导 CD3 受体寡聚化进而激活 T 细胞。不仅如此， 双功能肽的 RGD 序列能够引导 T 细胞精准地识别并杀伤肿瘤细胞。Lv 等使 pep-20 在肿瘤组织中原位组装形成纳米纤维，打破肿瘤细胞高表达的 CD47 所介导的“不要吃我”信号，增强巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬效应，有效抑制了肿瘤生长。另外，也可以利用纳米载体将其他药物与免疫检查点阻断肽进行一体化设计，起到协同作用。Zhu 等将D PPA-1 肽用于与化疗药物阿霉素（DOX）通过基质金属蛋白酶 2（MMP2）的特异性底物序列进行偶联，自组装形成酶响应性的纳米颗 粒，通过胞吞作用促进药物在肿瘤的累积和渗透， D PPA-1 肽和 DOX 通过 MMP2 响应性的释放，不仅可以充分发挥化疗药物对肿瘤的杀伤作用，而且D PPA-1 肽能够增强 T 细胞功能。Cheng 等设计了由 3-二乙基氨基丙基异硫氰酸（DEAP）、MMP2 底物序列 和D PPA-1 组成的两亲性肽，该多肽与吲哚胺 2，3-双加氧酶 1（IDO1）的抑制剂 NLG919 通过疏水作用组装成纳米颗粒。该纳米颗粒在肿瘤微环境中具有双重刺激依次响应的优点：首先，通过 EPR 效应在肿瘤部位富集，DEAP 序列在弱酸环境下发生质子化使得纳米 结构膨胀；进而，高表达的 MMP2 识别底物序列并彻底崩解纳米颗粒，释放D PPA-1 肽和 NLG919。该设计充分结合多肽及小分子药物的性质和肿瘤微环境的特点，联合 PD-1/PD-L1 阻断和 IDO1 抑制剂，协同增强肿瘤组织 T 细胞的功能，诱导强大的抗肿瘤免疫反应。（四）核素标记多肽 阻断免疫检查点的肿瘤免疫治疗效果与免疫检查点的表达情况密切相关。通过检测免疫检查点的表达水平对患者进行筛选能够促进精准治疗。免疫组织 化学是目前检测免疫检查点表达的金标准。然而，该方法无法实时量化全身的表达水平。而在肿瘤发生、进展以及治疗过程中，检查点分子的表达是高度动态变化的。在特定的肿瘤类型或转移灶中，免疫检查点的表达也具有高度异质性。在患者选择和疗效监测方面，以高灵敏度和分辨率进行全身非侵入性免疫检查点表达检测非常重要。正电子发射断层扫描（PET）作为一种无创水平成像技术，可用于实时、重复和所有病灶的动态检测。极大方便了临床上筛选可能受益的患者、对免疫治疗进行疗效评价以及及时地进行治疗策略的调整。PET 成像已广泛用于多种免疫检查点的示踪，包括多种与放射性核素标记的 PD-1/PD-L1、TIGIT、LAG-3 和 TIM-3 抗体等。放射性核素标记的免疫检查点抗体组织渗透能力不足，而且由于抗体本身的半衰期较长，往往需要较长的时间才能实现较强的组织富集。低分子量的多肽因具有适当的半衰期和较强的实体瘤渗透能力成为 PET 成像探针的理想候选。靶向 PD-1 或 PD-L1 的高亲和力多肽，尤其是 TPP-1 和 WL12 已被用于各种放射性核素标记的 PET 成像。目前，放射性标记的免疫检查点抗体或多肽在 PET 成像和光学成像中的应用已经进行了广泛的临床前和初步临床研究，显示出其作为患者分层、疗效 的动态监测和预后工具的潜力。其中，低分子量多肽作为诊断探针具有实体瘤渗透能力强、不良反应小、半衰期适宜的良好特性，在 PET 成像中的应用已经崭露头角，也将为肿瘤患者的临床诊断和辅助治疗提供有力的工具。写在最后：近年来，全球多肽药物的市场销售额保持快速增长趋势，多肽药物成为中国“十四五”期间生物医药研究的重点方向之一。但多肽药物目前面临的困难依旧存在，仍需要致力于设计更为简便、有效的修饰策略来提高多肽的结构稳定性。另外，目前虽然在多肽药物口服方面取得了一些进展，但是在临床应用和递送技术方面仍未取得显著突破，这些问题亟需研究者们 设计更为巧妙的方法来解决，从而进一步推动多肽药物的临床应用。END参考文献：[1]牛潇爽, 胡争, 周秀曼, 高艳锋. 多肽药物在肿瘤免疫治疗中的研究进展[J]. 中国肿瘤临床, 2023, 50(6)：271-277. doi:10.12354/j.issn.1000-8179.2023.20221128[2]陈泽锋,白丽.抗肿瘤多肽类药物的来源及其机制的研究进展[J].免疫学杂志,2018,34(12):1099-1104.DOI:10.13431/j.cnki.immunol.j.20180171.[3]刘光照,张婕,殷润婷.抗肿瘤多肽的研究新进展[J].药学进展,2015,39(09):671-675.声明：本文出自医会宝编辑部，旨在为医疗专业人士传递更多医学信息。本文并不能取代医生的专业诊疗意见，如有罹患，需前往专业医院检查诊断。END深度聚焦多肽、多肽偶联药物研发、质控、工艺开发，7月相约苏州，联系电话18116036798戳“阅读原文”立即报名多肽药物论坛吧!

J Hematol Oncol.(一) 类花生酸(Eicosanoid)信号通路：二十烷基硫酸酯信号通路在生理过程和病理过程中都起着关键作用，通过类花生酸将炎症与癌症联系起来。二十碳多不饱和脂肪酸(PUFAs)是由20碳多不饱和脂肪酸(PUFAs)氧化而成的具有高度生物活性的衍生物，可通过环氧合酶(COX)、脂氧合酶(LOX)和细胞色素P450途径产生。COX途径产生前列腺素(PGs)和血栓素A(TXs)，而LOX途径则产生白三烯(LTs)和脂氧素(LXs)。COX信号通路COX家族中，COX-2的表达会受到早期炎症(proinflammatory)的上调，并被发现和调控多种肿瘤的进展相关。在炎症反应的早期阶段，COX-2衍生的PG被认为具有促炎功能。前列腺素D2、前列腺素E2、前列腺素F2α、前列腺素I2和血栓素A2是通过COX通路衍生的五种关键 PG。COX/PEG2COX-2/CSK3β信号还和上皮-间充质转化有关，通过抑制GSK3β来促进E-钙粘蛋白、β-连环蛋白和p120连环蛋白的蛋白质稳定性。抑制COX-2可以下调E-钙黏蛋白导致细胞死亡。PGE2通过其两种E-前列腺素受体EP2和EP4提供信号传导来塑造DC功能。EP4调节CD80、CD86、CD83、MHC II等激活标志物上调以及IL-10和IL-23的产生，引导cDC2成熟，促进T细胞扩增，形成抑制性而非促炎性T细胞群富集。PGE2还可能通过E2调节NK细胞合成IFN-γ来诱导免疫抑制，从而促进肿瘤的发生。肿瘤来源的前列腺素E2(PGE2)介导MDSC分化和获得促肿瘤特征。在PGE2暴露期间，EP2/4联合阻断M-MDSCs可防止这些抑制特征的发生。双重 EP2/EP4 PGE2受体拮抗剂增加了肿瘤微环境淋巴细胞浸润，并显着降低了多种肿瘤模型中的疾病负担。前列腺素D2则是COX-2的另一种代谢物，可能在慢性炎症和癌症中发挥双重作用。PGD2与其受体PTGDR2之间的相互作用抑制了胃癌细胞的自我更新，并减弱了胃癌的生长和转移。脂氧合酶(LOX)信号通路LOX通路负责将花生四烯酸代谢为白三烯，包括白三烯A4(LTA4)、LTB4和LTD4等。炎症细胞(包括白细胞、巨噬细胞和肥大细胞)是白三烯的主要来源。抑制LTB4受体可抑制炎症相关肿瘤的进展，LTD4则在肝细胞癌和慢性乙型肝炎患者的循环中上调。LOX途径主要包括5-LOX、12-LOX和15-LOX。5-LOX在上皮性癌和淋巴瘤中高度表达，具有促血管生成和促肿瘤活性。12-LOX通过激活整合素连接的激酶/NF-κB途径来促进肿瘤的生长。而15-LOX的代谢产物被发现能增强肿瘤相关炎症，既有促肿瘤作用又有抗肿瘤作用。另一种由LOX衍生的类花生酸脂毒素(lipoxins， LXs)则具有抗肿瘤作用。在前列腺癌中，LXA4通过抑制METTL3和或FPR2/IRF4途径，以促进巨噬细胞M2样极化。LXA4对炎性巨噬细胞极化的抑制作用与p-NF-κB p65和IRF5活性的下调有关，从而降低了LPS诱导的M1巨噬细胞通过FPR2/IRF5信号通路的表型和功能极化。 J Hematol Oncol.(二)JAK/STAT信号通路STAT3在炎症反应和肿瘤进展中发挥着广泛的作用。多种生长因子和细胞因子参与典型的STAT3通路，调节细胞分化、血管生成和肿瘤形成。IL-6和STAT3是启动肿瘤的肠上皮细胞生存和增殖所必需的。此外，在设计肠道的肿瘤如前列腺癌中，肠道生物失调增加了肠道通透性，肿瘤内的内毒素通过NF-κB/IL 6/STAT3轴促进了肿瘤的进展。Int Immunopharmacol.影响JAK/STAT通路的药物种类复杂，包括植物化学物质、合成药物和生物分子等等。Int Immunopharmacol.(三)金属代谢铁和ROS氧化还原铁代谢失调是肿瘤细胞的一个重要标志，在肿瘤细胞中，恶性肿瘤细胞需要大量的铁来生存和增殖。细胞色素P450酶、一氧化氮合酶、NADPH氧化酶和脂氧合酶等铁依赖性酶参与ROS的产生。同时，谷胱甘肽过氧化物酶GPX4是一种铁死亡的中枢抑制剂，GPX4利用还原性谷胱甘肽将活性的PUFA-PL-OOH还原为非活性和非致死性的PUFA-PL-OH。抑制Gpx4可通过诱导铁性死亡而增强治疗的抗肿瘤效应。十年铁死亡：双向调控与药物开发锌和NF-κB通路锌与许多炎症性细胞因子的产生和信号传递有关。当对应激刺激做出急性反应时，血浆锌浓度迅速下降。人体的锌代谢与ZIP8等锌转运蛋白的活性密切相关。在感染过程中，激活的NF-κB增加ZIP8的表达，ZIP8定位于细胞膜并调节锌的摄取。锌抑制了IKKβ的活性，从而减弱了炎症反应。参考文献：1.Wang M, Chen S, He X, Yuan Y, Wei X. Targeting inflammation as cancer therapy. J Hematol Oncol. 2024 Mar 22;17(1):13. doi: 10.1186/s13045-024-01528-7.2.Balamurugan K,et al.Stabilization of E-cadherin adhesions by COX-2/GSK3β signaling is a targetable pathway in metastatic breast cancer. JCI Insight. 2023 Mar 22;8(6):e156057. doi: 10.1172/jci.insight.156057.3.Cuenca-Escalona J,et al.PGE2-EP4 signaling steers cDC2 maturation toward the induction of suppressive T-cell responses. Eur J Immunol. 2024 Mar;54(3):e2350770. doi: 10.1002/eji.202350770.4.Francica BJ,et al.Dual Blockade of EP2 and EP4 Signaling is Required for Optimal Immune Activation and Antitumor Activity Against Prostaglandin-Expressing Tumors. Cancer Res Commun. 2023 Aug 8;3(8):1486-1500. doi: 10.1158/2767-9764.CRC-23-0249.5.Yuan J, et al. Lipoxin A4 regulates M1/M2 macrophage polarization via FPR2-IRF pathway. Inflammopharmacology. 2022 Apr;30(2):487-498. doi: 10.1007/s10787-022-00942-y.6.Wang Y,et al. Deciphering JAK/STAT signaling pathway: A multifaceted approach to tumorigenesis, progression and therapeutic interventions. Int Immunopharmacol. 2024 Mar 22;131:111846. doi: 10.1016/j.intimp.2024.111846.·····