LAT

许多患者在CAR T细胞治疗后复发，原因是癌细胞表达的相关抗原低于CAR T细胞有效反应所需的阈值，即使同时靶向不同抗原的CAR T细胞试验也出现了类似的复发情况，如靶向CD19和CD22。需要开发更有效的CAR T细胞疗法，以提高对抗原低表达细胞的敏感性和持久性。3月10日，科罗拉多大学在《Cancer Cell》期刊上发表了一篇文章，研究开发了一种新的ALA-CAR-T，通过恢复LAT活性，增强了CAR-T细胞的抗原敏感性、疗效和持久性，从而克服了CAR-T细胞治疗后复发的多种机制。在体外和体内均表现出更强的细胞毒性、增殖能力和抗肿瘤活性，有望改善CAR-T细胞疗法的长期疗效，并拓展其在实体肿瘤等领域的应用。CD22抗原低表达的癌细胞通过削弱CAR T细胞远端信号传导逃避免疫攻击。尽管CD22BBz CAR T细胞对CD22-low（22Low）和野生型（WT）NALM6细胞的体外杀伤能力无显著差异，但在小鼠模型中无法有效控制22Low-NALM6的生长，与T细胞体内扩增能力显著下降相关。蛋白质组学分析显示，22Low-NALM6刺激导致CAR T细胞中与细胞骨架重组（如ACTN1、TLN1）和MAPK信号通路（如MAPK1、MAPK3）相关的磷酸化位点显著减少。这种信号抑制可能源于CAR受体在低抗原密度下无法有效聚集，导致T细胞免疫突触形成障碍，进而影响远端信号传导的持续性和强度，最终削弱CAR T细胞的体内持久性和抗白血病活性。低抗原刺激导致CAR T细胞中ERK/MAPK信号通路激活不足。与野生型NALM6刺激相比，CD22-low NALM6（22Low-NALM6）刺激的CAR-Jurkat细胞中磷酸化ERK（pERK）水平显著降低，这一现象在健康供体来源的CD4+和CD8+ CAR T细胞中一致出现。低抗原刺激通过抑制LAT磷酸化阻断下游信号传导。近端信号分析显示，ZAP70激活位点Y319的磷酸化仅轻微下降，可能与CAR的scFv结构域自二聚化引发的抗原非依赖性激活有关。健康供体来源的CAR T细胞在低抗原刺激下同样表现为LAT-Y226和PLCγ-Y783磷酸化减弱，但ZAP70-Y319磷酸化无显著变化。双靶向ALA-CART平台通过强制激活LAT信号逆转低抗原刺激下的功能缺陷。设计了双顺反子载体22x19ALA-CART，共表达CD22BBz CAR和含LAT胞内域的CD19靶向辅助CAR。该设计使22x19ALA-CART在受到WT或22Low-NALM6刺激时，LAT-CAR的磷酸化水平显著高于传统CD22BBz CAR，进而增强下游PLCγ的磷酸化，通过补偿LAT信号缺陷克服了抗原密度限制。ALA-CART在体内完全清除CD22-low白血病并依赖CD4+ T细胞扩增。在NSG小鼠模型中，传统CD22BBz CAR T细胞对22Low-NALM6的控制效果有限，而22x19ALA-CART实现白血病完全清除并显著延长生存期。进一步分析显示，22x19ALA-CART的疗效与骨髓中CD4+ T细胞在第7天和第15天的显著扩增相关。双CAR结构在ALA-CART平台中独立且叠加发挥抗白血病作用。当靶细胞仅表达CD22（CD22+）或CD19（CD19+）时，22x19ALA-CART分别通过CD22BBz CAR或19LAT-CAR单独激活即可有效杀伤，且两种CAR独立激活时均能诱导IL-2和IFNγ分泌。在低剂量治疗实验中，22x19ALA-CART不仅完全清除野生型NALM6，还能根除仅表达CD22或CD19的白血病细胞，表明两种CAR独立激活即可实现治疗效果，且未观察到CAR激活模式对T细胞持久性的影响。CD22靶向ALA-CART通过优化scFv组合与信号强化实现低抗原白血病清除。将ALA-CART平台改造为单一靶向CD22的22ALA-CART，其体外杀伤能力显著增强，并在小鼠模型中完全清除22Low-NALM6，而传统CD22BBz CAR T细胞治疗组白血病持续进展。进一步验证显示，仅完整包含LAT信号域的22ALA-CART能清除低抗原白血病，而高亲和力CD22BBz或缺失LAT域的22Null CAR均无效。ALA-CART平台具有广谱抗原适用性并显著提升低抗原阈值下的疗效。在患者来源的B-ALL异种移植模型（PDX）中，当CD22密度低于1,500分子/细胞时，传统CD22BBz CAR T细胞治疗组外周血仍可检测到白血病细胞，而22ALA-CART实现完全清除，且脾脏肿瘤负荷显著降低。此外，研究扩展至CD19靶向的19ALA-CART，其对CD19-low NALM6的体外杀伤能力增强，并在体内显著延长小鼠生存期。这些结果表明，ALA-CART通过强制激活LAT信号，可在不依赖抗原密度的情况下提升CAR T细胞敏感性，为单靶点低抗原逃逸提供了通用解决方案。ALA-CART细胞增强的体内疗效未伴随毒性增加。在高负荷白血病小鼠模型中，22ALA-CART对野生型NALM6的清除速度显著快于传统CD22BBz CAR T细胞，但两组小鼠体重下降程度无显著差异。22ALA-CART组小鼠TNFα水平升高，而CD22BBz组IL-2水平较高，但与细胞因子释放综合征（CRS）密切相关的IL-6水平在两组间无显著差异。ALA-CART的体内扩增能力依赖于LAT-CAR，而效应功能由第二代CAR主导。通过拆分双CAR结构发现，单独表达22BBz-HA CAR的T细胞在应对22Low-NALM6时扩增能力显著受限，而LAT-CAR的共表达通过促进T干细胞记忆（TSCM）和中央记忆（TCM）表型的形成，显著提升ALA-CART的体内持久性。双CAR协同实现增殖与效应功能的平衡以应对抗原异质性。体外实验表明，22BBz-HA CAR单独可介导对WT-NALM6的杀伤，但对22Low-NALM6的清除需依赖LAT-CAR的协同作用。LAT-CAR通过增强T细胞增殖支持效应分子（如颗粒酶A/B）的分泌，而22BBz-HA CAR则负责直接触发细胞毒性功能。这种功能互补机制使ALA-CART在提升疗效的同时维持安全性，为克服抗原逃逸提供了动态调控策略。ALA-CART平台通过转录组重编程维持T细胞未分化状态。转录组显示，未受刺激的22ALA-CART细胞呈现初始T细胞特征，而传统CD22BBz CAR T细胞富集效应分化和干扰素应答通路。22ALA-CART中与长寿命T细胞相关的基因（如SELL、CD27、IL7RA）表达显著上调，表型分析证实其T干细胞记忆（TSCM）比例高达53%，远高于CD22BBz组的13.4%，同时效应记忆（TEM）和中央记忆（TCM）亚群比例显著降低。LAT-CAR在制造阶段抑制分化，但体内疗效需双CAR协同。体外重复刺激实验显示，22LAT-CAR单独可维持较低CD39表达和较高增殖能力，但其TOX和TCF1表达水平介于22ALA-CART与22BBz-HA之间。过表达野生型LAT（LAT-OE）虽能模拟22ALA-CART的TSCM优势表型和体外杀伤能力，却无法在体内清除CD22-low白血病。这表明，ALA-CART的体内疗效不仅依赖LAT-CAR对分化的抑制，还需第二代CAR在遭遇肿瘤时的主动信号协同。ALA-CART细胞通过维持中央记忆表型显著提升体内持久性。在清除野生型NALM6白血病的小鼠模型中，22ALA-CART的CD4+ T细胞在骨髓中持续存在长达35天，且中央记忆T细胞（TCM）比例显著高于传统CD22BBz CAR T细胞。双靶向22x19ALA-CART的CD4+亚群也富集TCM表型，且持久性与CD39低表达相关。LAT-CAR通过抑制终末分化维持T细胞持久性。拆分双CAR结构发现，单独表达22LAT-CAR或完整22ALA-CART的T细胞在清除白血病后持久性显著优于仅表达22BBz-HA CAR的T细胞，这与其更高的TSCM比例和更低的TEMRA分化相关。此外，22BBz-HA CAR持久性差的T细胞高表达耗竭标志物KLRG1，而LAT-CAR通过抑制效应分化程序，维持T细胞的长期存活能力。CD4+ ALA-CART亚群主导持久性与效应功能的平衡。无论抗原密度如何，CD4+ 22ALA-CART细胞在体内扩增优势显著，其TCM比例更高，IL7RA表达上调，并富集多功能性T细胞。CD4+细胞在低抗原刺激下虽减少细胞因子分泌，但其持续增殖能力和效应功能足以清除白血病，揭示了ALA-CART通过CD4+主导的持久性与CD8+效应功能的协同实现长期疾病控制。总之，这种新型ALA-CART通过恢复LAT活性，提高CAR T细胞对低抗原急性淋巴细胞白血病（ALL）细胞的敏感性和持久性，从而克服了传统CAR T细胞疗法在治疗抗原低表达癌症细胞时面临的挑战，这种新型的设计应该对实体瘤同样有效。推文用于传递知识，如因版权等有疑问，请于本文刊发30日内联系医药速览。原创内容未经授权，禁止转载至其他平台。有问题可发邮件至yong_wang@pku.edu.cn获取更多信息。©2021 医药速览 保留所有权利往期链接“小小疫苗”养成记 | 医药公司管线盘点 人人学懂免疫学| 人人学懂免疫学（语音版）综述文章解读 | 文献略读 | 医学科普|医药前沿笔记PROTAC技术| 抗体药物| 抗体药物偶联-ADC核酸疫苗 | CAR技术| 化学生物学温馨提示医药速览公众号目前已经有近12个交流群（好学，有趣且奔波于医药圈人才聚集于此）。进群加作者微信（yiyaoxueshu666）或者扫描公众号二维码添加作者，备注“姓名/昵称-企业/高校-具体研究领域/专业”，此群仅为科研交流群，非诚勿扰。简单操作即可星标⭐️医药速览，第一时间收到我们的推送①点击标题下方“医药速览”  ②至右上角“...”  ③点击“设为星标

关注小药说药，一起成长！ 前言 基于T细胞的免疫疗法的出现显著改变了癌症患者的治疗模式。尽管取得了成功，但目前批准的免疫治疗方案仍然存在局限性。因此，需要对T细胞活化和抑制的分子机制有更深入的了解，以合理地扩大改善免疫治疗的靶点和可能性。 免疫信号通路下游的蛋白质泛素化对于几乎所有免疫反应，特别是T细胞激活的正调节和负调节至关重要。大量研究表明，泛素化通过控制蛋白质的功能、定位和稳定性发挥多种细胞和分子作用，对泛素依赖性通路的调节可以显著改变T细胞的活化并增强抗肿瘤反应。因此，人们正在积极开发有选择性地利用泛素相关酶用于癌症治疗的技术，靶向泛素化为推进T细胞免疫治疗提供了巨大的可能性。 蛋白质泛素化 泛素化是一种翻译后修饰，泛素是一种由76个氨基酸组成的小蛋白质，通常由一条泛素链与底物蛋白质内的赖氨酸残基共价连接。泛素化通过各种方式影响蛋白质功能，例如通过影响蛋白质稳定性、周转率、细胞定位，以及诱导影响与其他蛋白质相互作用的构象变化。 该过程由E1泛素激活酶启动，该酶使用ATP激活，然后将泛素单体转移到E2泛素结合酶。泛素最终在E3泛素连接酶的作用下从E2转移到底物。 泛素化是多方面的，底物蛋白可以仅用一个泛素（单泛素化）、多个单泛素（多个单泛素化）或多泛素链（多泛素化）标记。由于泛素本身有七个赖氨酸（Lys6、Lys11、Lys27、Lys29、Lys33、Lys48和Lys63）和一个N端甲硫氨酸残基（M1），可以进行泛素化，因此可以形成几种结构不同的同质/同型、混合/异型和分支多泛素链。 泛素化除了是通过蛋白质体降解蛋白质的主要调节器外，实际上是几乎所有细胞信号级联的多功能调节器。泛素化蛋白质的命运取决于添加的泛素数量和形成泛素连接的泛素氨基酸。通过这种方式，并且由于拓扑结构不同链的多种可能性，泛素构成了一种高度通用的信号。 单泛素化和多泛素化参与膜受体的内吞作用，以及蛋白质降解、定位和蛋白质-蛋白质相互作用，这些类型的链也与TGF-β信号传导有关。在同型多泛素链中， Lys48和Lys63连接的链是最丰富，它们分别驱动蛋白酶体降解和调节多种细胞信号事件。Lys11连接链调节细胞周期和线粒体自噬，M1连接链对炎症固有反应至关重要，特别是调节NF-κB信号。 由Lys6-、Lys27-、Lys29-、Lys33泛素连接链调节的细胞过程仍然不太清楚。Lys27连接链似乎对调节先天免疫、细胞周期和线粒体功能非常重要。Lys6链似乎参与DNA修复和线粒体自噬，而Lys29链与Wnt信号以及蛋白毒性应激和细胞周期相关。Lys33链在高尔基体后转运和T细胞受体（TCR）调节中起着关键作用。 此外，非常重要的是，泛素在底物上的组装可以通过去泛素化酶（DUB）的作用逆转，去泛素化酶水解并从底物上去除泛素，使泛素化成为一种瞬时修饰，DUB对于维持生理性泛素平衡是必不可少的。这种平衡的失调与人类疾病的发病机制有关，特别是癌症、感染、神经退行性变和免疫紊乱，因此，DUB已开始作为基于抑制剂的治疗成为有吸引力的药物靶点。 TCR/CD3激活中的泛素途径 E3连接酶 E3泛素连接酶Casitas B系淋巴瘤（Cbl-B）是最具特征的E3连接酶，是T细胞活化的主要参与者。在T细胞激活时，它在免疫突触处被招募到TCR中，在TCR下游发挥多种抑制机制。 Cbl-b通过其多个蛋白质相互作用结构域与关键TCR信号体分子（如LCK、SLP76、ZAP70、Vav1、PKCθ和PI3K）相互作用。Cbl-b与E3连接酶Itch协同作用，能够介导TCR-ζ的Lys33连接的多泛素化，其不针对TCR受体进行降解或内吞，而是阻止其磷酸化并进一步与下游ZAP70激酶结合。通过这些相互作用，以及一些信号体成分的泛素化，Cbl-b强烈抑制T细胞活化。Cbl-b敲除小鼠具有过度活跃的T细胞，其激活不需要CD28，此外，Cbl-b基因敲除小鼠中从未描述过自身免疫损伤。因此，Cbl-b具有多个检查点抑制作用和极小的自身免疫毒性，是未来靶向癌症免疫治疗的有力候选。 与淋巴细胞无能相关的基因（GRAIL）是一种跨膜E3连接酶，定位于内体，也对T细胞活化起负调节作用。TCR介导的T细胞活化促进GRAIL的表达，而GRAIL反过来又阻碍T细胞活化。机制上，GRAIL通过非降解泛素链稳定和激活Rho-鸟嘌呤解离抑制剂（RhoGDI），导致细胞骨架重排和IL-2分泌缺陷。 NRDP1是另一种损害TCR信号的E3连接酶。T细胞激活后，NRDP1将Lys33多聚泛素非降解链添加到ZAP70激酶。Lys33连接的泛素链有助于招募Sts1和Sts2磷酸酶，最终使ZAP70去磷酸化和失活。 除了作用于近端信号体外，E3连接酶还通过进一步作用于下游抑制T细胞活化，控制导致T细胞活化转录因子核易位的关键转导事件。例如，在TCR/CD28连接后，E3连接酶Pellino1（PELI1）通过用Lys48多泛素链标记c-Rel来阻止NF-κB通路，导致其蛋白酶体降解。 DUBs 去泛素化酶A20和CYLD，在调节天然免疫细胞中的NF-κB信号中具有重要作用，也能显著改变T细胞功能。外周T细胞中A20的条件性缺失导致CD8+T细胞具有增强的NF-κB信号，即使在低抗原剂量下也能更有效地被激活，以产生更高水平的IL-2和IFN-γ。 CYLD可以通过NF-κB损害T细胞活化，它是通过将CBM复合物下游TAK1激酶的Lys63泛素链进行去泛素化。CYLD缺陷小鼠出现结肠炎，T细胞频率和活化增加。 使用类似的作用机制，去泛素酶USP18对TAK1的去泛素化抑制TCR。USP18的基因缺失导致T细胞中NF-κB和NFAT的过度激活和IL-2的过度产生。相反，去泛素酶USP9X和USP12通过从BCL10中去除抑制性泛素链来积极调节NF-κB通路，从而阻断CBM信号复合物的组装。因此，缺乏USP9X或USP12的T细胞在TCR激活时表现出较低水平的NF-κB激活，以及增殖和细胞因子生成减少。 TCR内化 TCR信号幅度和持续时间由细胞膜受体的内化、再循环和降解的平衡决定。在抗原刺激下，TCR/CD3复合物是泛素化的，而泛素化对于表面受体的内化至关重要。据报道，Cbl-b可单独或与E3连接酶c-Cbl联合促进TCR的内化，Cbl-b还干扰激活和聚集，从而破坏免疫突触的稳定性，进一步减弱TCR信号。 类似地，E3连接酶GRAIL可以通过蛋白酶体多泛素化和降解CD3ζ分子来下调表面TCR/CD3复合物的表达。最近的研究表明，用于CAR-T治疗的CAR受体的表面表达也受到泛素介导的内吞和降解的影响。注入患者体内的CAR-T细胞持续性差是这种肿瘤免疫疗法的主要限制。最近的一项研究能够通过对细胞质结构域的所有赖氨酸残基进行突变来提高CAR的稳定性，这有效地绕过了CARs的泛素化依赖性溶酶体降解，因此，这些CAR-T细胞改善了CAR的持久性和来自内体的信号传导，同时增强了效应器功能，从而在小鼠模型中产生持久的抗肿瘤免疫反应。 共刺激受体下游的泛素途径 CD28 E3连接酶Cbl-b是CD28介导的信号传导的主要抑制剂，从机制上讲，E3连接酶Cbl-b通过结合和泛素化PI3K的p85β亚单位来抑制CD28依赖的PI3K途径。 E3连接酶不仅能阻碍CD28信号传导，而且能促进CD28信号传导。例如，TCR/CD28激活NFAT涉及E3连接酶TRAF6。TRAF6被招募到免疫突触与支架蛋白LAT相互作用，并通过Lys63泛素化增强LAT磷酸化和TCR信号。 为了充分激活T细胞，CD28共受体必须克服Cbl-b抑制。CD28信号通过触发Cbl-b的翻译后修饰来阻断Cbl-b抑制途径，最终导致其蛋白酶体降解。其中E3连接酶NEDD4发挥着重要作用，据报道NEDD4在CD28共刺激下结合并泛素化Cbl-b进行蛋白酶体降解。 其他共刺激受体 与CD28类似，肿瘤坏死因子受体（TNFR）家族成员的共刺激受体4-1BB、CD40L、OX40和GITR与TCR协同促进T细胞活化，尤其是增殖和细胞因子的产生。作为TNFRs，它们缺乏内在的酶功能，依赖于几种E3连接酶，包括TRAF（TRAF1/2/3）、cIAP1/2和LUBAC，在导致NF-κB活化的信号转导级联中引导大量Lys63、Lys48和线性泛素化事件。去泛素酶A20、CYLD和OTULIN可以清除这些泛素化事件以阻止NF-κB的活化。 抑制性受体下游泛素途径 CTLA-4 到目前为止，没有任何E3直接泛素化CTLA-4的报道，也没有CTLA-4中泛素化位点的记录。然而，CTLA-4缺陷型T细胞的泛素修饰总体上显著减少，这有力地表明了泛素化事件在CTLA-4途径中的重要性。此外，实验证据表明，主要CTLA-4抑制功能由关键的T细胞抑制性E3连接酶介导，该连接酶也调节T细胞活化，即Cbl-b、ITCH和GRAIL。 此外，Cbl-b、ITCH和GRAIL是T细胞无能的基本驱动因素，而且这三种E3连接酶还通过调节Treg的发育和功能发挥重要的免疫抑制作用。Cbl-b和ITCH参与TGF-β介导的Foxp3调节，缺乏这两种E3连接酶都会损害TGF-β诱导的Foxp3+Tregs（iTreg）的发育，导致iTreg低表达，功能缺陷。 PD-1 与CTLA-4不同，一些报告强调了泛素化在PD-1/PD-L1系统中的关键作用。对于T细胞上的PD-1受体，Cbl-b也作为PD-1抑制途径的关键介质显著参与，缺乏Cbl-b的T细胞对PD-1抑制具有抵抗力。没有Cbl-b，PD-1在抑制IFN-γ产生或诱导T细胞活化后的细胞死亡方面效率低下。 另一种Cbl E3连接酶c-Cbl也影响PD-1，但与Cbl-b相反，它是一种负性调节因子。c-Cbl与PD-1的胞质尾部结合，并作为E3连接酶，泛素化PD-1进行蛋白酶体降解。因此，c-Cbl减少提高了CD8+T细胞和巨噬细胞中PD-1的表达。 同样，E3连接酶FBXO38通过介导PD-1降解来控制T细胞抗肿瘤反应。从机理上讲，FBXO38通过在Lys233处添加Lys48多聚泛素链来标记PD-1进行降解。缺乏FBXO38的黑色素瘤和结直肠癌小鼠模型具有更高的肿瘤负荷，这与肿瘤浸润性T细胞中PD-1的高表达有关。 PD-L1 PD-L1的肿瘤水平是肿瘤免疫的重要决定因素。几项研究已确定癌细胞利用EGFR信号稳定PD-L1表达以逃避T细胞免疫。E3连接酶识别并泛素标记PD-L1进行蛋白水解，主要依赖于糖原合成酶激酶3（GSK3α/β）。GSK3β磷酸化PD-L1的C端结构域，以招募E3连接酶β-TrCP用于PD-L1泛素依赖性降解。而EGFR信号通过诱导GSK3β磷酸化位点附近的PD-L1大量糖基化来对抗GSK3β/β-TrCP/PD-L1降解途径。 另一项研究进一步表明GSK3α/ARIH1是另一种诱导PD-L1蛋白水解的激酶/E3连接酶对。E3连接酶ARIH1识别S279/S283处PD-L1的GSK3α依赖性磷酸化，随后PD-L1 Lys48泛素化和降解。最近，还发现EGFR通过额外干扰膜结合MARCH8 E3连接酶增加PD-L1水平，该连接酶也以PD-L1为降解靶点。最后，c-Cbl过表达，单独或与Cbl-b联合，也可以降低STAT3/AKT/ERK磷酸化，从而下调PD-L1表达并增加抗肿瘤反应。 Cullin3 SPOP和TRIM21E3连接酶通过泛素化依赖性降解进一步破坏PD-L1的稳定性，它们的作用再次依赖于激酶，特别是细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4和CDK5。然而，CDK4通过稳定Cullin3 SPOP协助PD-L1降解，而CDK5则消极干扰TRIM21对PD-L1的作用。 此外，PD-L1也因其他几种去泛素化酶而稳定，即OTUB1、USP9X、USP7。这些研究具有潜在的治疗意义，因为它们证明，抑制或清除这些DUB中的任何一种都可以重新激发小鼠的抗肿瘤反应，并使癌细胞对T细胞杀伤敏感。 泛素依赖途径肿瘤药物的开发 到目前为止，针对泛素依赖的途径主要是基于小分子抑制剂，这些小分子可以通过直接结合或变构作用阻断泛素相关酶的催化结构域，或阻止其与底物或其他调节蛋白结合。目前，已经开发了200多种化合物，其中许多化合物正在进行癌症治疗的临床前和临床试验。 大多数基于泛素的小分子化合物被设计成靶向癌细胞中必需的泛素途径。随着以T细胞为基础的肿瘤免疫治疗的出现，针对选择性E3和DUB的靶向抑制已有研究，其中关键的细胞内检查点T细胞抑制剂Cbl-b具有巨大的潜力。已有研究利用RNA干扰成功地下调了T细胞中的Cbl-b水平，这在不同的过继性T细胞转移肿瘤模型中产生了出色的体外和临床前结果，并且癌症患者对其耐受性良好，目前已进入临床试验（NCT02166255和NCT03087591）。此外，针对IAPs、MDM2和USP7的小分子已经进行了临床前试验，并证明单独使用或联合使用时，至少部分增强体内抗肿瘤免疫。 调节癌细胞中PD-L1降解的泛素化依赖途径也正在进行测试。例如，一种竞争性棕榈酰化抑制剂（CPP-S1），以防止PD-L1棕榈酰化，进而促进PD-L1泛素介导的降解。控制PD-L1泛素化和降解的EGFR信号通路也通过不同的方式在体内被有效阻断，包括EGFR小分子抑制剂、铜螯合剂和靶向CSN5的小分子，都显著增强T细胞抗肿瘤反应。 基于邻近性的治疗方法，包括PROTAC或分子胶技术，也正在迅速发展，以针对几种特定肿瘤蛋白质的蛋白酶体降解，目前有十几项临床试验正在验证这些基于泛素化技术的治疗潜力。 小结 数据表明，调节几种泛素依赖性途径，特别是所涉及的泛素依赖性酶，可以释放强烈、持久和靶向的抗肿瘤反应。目前，泛素领域也取得了巨大进展，开发出了多种新技术和新方法，可以专门针对几乎所有泛素依赖的酶，或者利用它们针对感兴趣的底物蛋白，包括肿瘤蛋白。展望未来，相信这些重要的泛素依赖途径的调节很快将成为改善靶向肿瘤免疫治疗的可行替代方案。 参考文献： 1.Ubiquitination in T-Cell Activation andCheckpoint Inhibition: New Avenues for Targeted Cancer Immunotherapy. Int J MolSci. 2021 Oct; 22(19): 10800. 公众号内回复“疫苗篇”或扫描下方图片中的二维码免费下载《小药说药疫苗篇》的PDF格式电子书！ 公众号已建立“小药说药专业交流群”微信行业交流群以及读者交流群，扫描下方小编二维码加入，入行业群请主动告知姓名、工作单位和职务。

关注并星标CPHI制药在线 2024 年 10 月 28 日，诺华（Novartis）宣布收购Monte Rosa Therapeutics公司一款处于临床阶段的分子胶，MRT-6160，这笔交易的包括预付款1.5亿美元，总价值超过22亿美元。诺华将获得该药的全部全球权利，该药物目前正处于免疫介导疾病的健康志愿者1期研究中，诺华将从2期开始承担开发责任。Monte Rosa公司负责1期的所有工作。 MRT-6160有效的高选择性、口服生物可利用的VAV1靶向分子胶降解剂（VAV1 MGD）。MRT-6160的体内临床前研究表明，MRT-6160能够抑制自免模型的疾病进展。体外研究中，显示出对靶标的深度降解，导致于免疫介导条件相关的细胞因子显著减少，对其他蛋白质没有可检测的影响。 VAV1：自免潜力靶点 VAV1 是 Rho 家族鸟嘌呤核苷酸交换因子，表达仅限于血液和免疫细胞，它位于T细胞受体（TCR）和B细胞受体（BCR）下游，能够介导T细胞和B细胞的激活、增殖、分化、迁移和存活。它能够激活多种转录因子，如NFAT、NF-κB、AP-1等，从而诱导多种与免疫反应相关的基因的表达。它能够与其他信号分子，如ZAP70、LAT、SLP76、ITK等相互作用，形成一个复杂的信号网络，从而调节T细胞和B细胞的功能。 VAV1在一些自身免疫性疾病中发挥重要作用，从而成为治疗这些疾病的潜在靶点。例如，在类风湿关节炎（RA）、系统性红斑狼疮（SLE）、多发性硬化（MS）等自身免疫性疾病中，VAV1被发现参与T细胞和B细胞的异常激活和功能 。因此，VAV1是一个具有重要生物学功能和临床意义的靶点，它为未来开发新型抗肿瘤或抗自身免疫性疾病药物提供了新机会。 今年8月，Monte Rosa在《Trends in Immunology》上发表研究 "VAV1 as a putative therapeutic target in autoimmune and chronic inflammatory diseases"，探讨转录因子VAV1在免疫系统中的作用。研究表明，VAV1作为一种“undruggable”蛋白，是原代人CD4+和CD8+ T细胞中TCR活化和细胞因子产生的重要正调节剂。此外，数据表明，VAV1的缺失或抑制能够调节自身免疫反应和炎症反应。基于T细胞和T/B细胞介导的关节炎和结肠炎模型的临床前数据显示，通过蛋白质降解选择性靶向VAV1具有潜在的有效性。 诺华分子胶布局 由于VAV1没有明确的结合口袋，开发小分子抑制剂存在诸多挑战。那么哪种药物形式可以靶向VAV1的表达或功能呢？其中基于硫唑嘌呤的活性，去设计更特异性的硫嘌呤类似物，可能为VAV1/Rac1途径阻断提供新的途径，但尚未在临床试验中进行测试；另一种新兴的模式是利用体内的泛素-蛋白酶体系统，去靶向VAV1蛋白降解。PROTAC降解剂需要能够通过不同的结合口袋同时结合靶蛋白和E3泛素连接酶的部分，导致前者的泛素化及其随后从细胞中去除。虽然有效，但这种方式对缺乏明显结合口袋的蛋白质如VAV1提出了挑战。 另一种解决方案是使用分子胶，这些小分子可以黏附在酶上并改变其表面形状，从而将目标蛋白质与酶结合在一起。与PROTAC不同，分子胶不需要蛋白质中的可药用口袋，这意味着可以针对那些难以成药的蛋白质靶标进行靶向治疗。Monte Rosa Therapeutics因此开发了VAV1的分子胶MRT-6160，具有很好的药物特性。 Monte Rosa是一家明星分子胶降解剂开发公司，于2018年成立，于2021年登录纳斯达克上市。Monte Rosa公司将人工智能、结构生物学和蛋白质组学相结合，开发了一种QuEEN™平台，能够系统地识别可降解的蛋白质靶点，并开创了一种可预测、可重复的分子胶设计方法。 Monte Rosa公司的工作也吸引了罗氏的关注。2023年10月，罗氏与Monte Rosa达成战略合作和授权合作，以针对之前被认为不可成药的癌症和神经系统疾病靶点发现和开发分子胶降解剂（MGD）。 事实上，诺华自己开发了一款WIZ分子胶和一种靶向CDO1的VHL分子胶。2024年7月，诺华的WIZ分子胶见刊于Science正刊，报道了首个WIZ分子胶结构dWIZ1与dWIZ2，并介绍了相关生物学机制。在人源化小鼠与NHP模型中，dWIZ-2口服给药也能有效降解WIZ，并诱导HbF的表达，且未观察到明显的不良反应。表明口服WIZ分子胶可作为作为全球可使用的镰状细胞病（SCD）/地中海贫血症的治疗方法。众所周知，镰刀型细胞贫血症（SCD）是一种普遍的、危及生命的血液疾病，可归因于β-血红蛋白的遗传突变。虽然目前已有首 款获批的CRISPR/Cas9基因编辑疗法治疗该病，但该疗法涉及对DNA的基因编辑，且售价高达百万美元，SCD急需一种新的可及性更强的疗法。而WIZ分子胶作为小分子在成本和患者依从性上独具优势，有望解决全球SCD患者未满足的临床需求。目前诺华的WIZ分子胶处于IND-Enabling阶段。 目前主要开发的分子胶主要是依赖CRBN 泛素连接酶。其代表性药物则是IMIDs 三兄弟：Thalidomide, Lenalidomide以及Pomalidomide，其销售额常年超过百亿美元。而新进开发的基于CRBN的分子胶更多的集中在已经报道的可被降解的靶点。虽然针对CRBN分子胶水的研究目前如火如荼，分子胶水的发展对于新的E3泛素连接酶的需求也是与日俱增。 2024年1月，诺华公司在预印本网站bioRxiv上发表了题目为“A small molecule VHL molecular glue degrader for cysteine dioxygenase 1”的文章，介绍了一种靶向CDO1的VHL分子胶，这也是第一例报道的依赖VHL E3 泛素连接酶的分子胶，它能促进 VHL-配体-CDO1 三元复合物的组装，从而实现 VHL 依赖性降解内源性 CDO1。 参考来源 1.Markus F. Neurath and Leslie J. Berg, “VAV1 as a Putative Therapeutic Target in Autoimmune and Chronic Inflammatory Diseases,” Trends in Immunology 45, no. 8 (August 2024): 580–96, https://doi.org/10.1016/j.it.2024.06.004. 2.Ali A. Zarrin et al., “Kinase Inhibition in Autoimmunity and Inflammation,” Nature Reviews Drug Discovery 20, no. 1 (January 2021): 39–63, https://doi.org/10.1038/s41573-020-0082-8. END 【智药研习社线上研习会报名】 来源：CPHI制药在线 声明：本文仅代表作者观点，并不代表制药在线立场。本网站内容仅出于传递更多信息之目的。如需转载，请务必注明文章来源和作者。 投稿邮箱：Kelly.Xiao@imsinoexpo.com ▼更多制药资讯，请关注CPHI制药在线▼ 点击阅读原文，进入智药研习社~