ACKR3

动物模型实验是药物研发和生物医学研究不可或缺的手段，在新药试验、疾病诊断、药物与医疗器械安全性研究等领域被广泛使用，通过动物实验，可取得真实可靠的研究数据。 传统的动物模型实验方法存在一定局限性和不足，特别是需要大量的动物分组和在不同时间点解剖获取数据, 得到多个时间点的实验结果，存在工作量大和组间差异问题。相比之下，活体成像技术通过对同一组实验对象在不同时间点进行成像，跟踪同一观察目标（标记细胞和标记分子）的移动及变化，不存在常见的组间差异，工作量和实验动物消耗可大为减少，所得的数据也更加真实可信。此外, 活体成像技术不涉及放射性物质，具有操作简单，所得结果直观，灵敏度高等特点，可用于追踪靶细胞数量，体积变化和体内分布，从分子和细胞水平对药物疗效进行评估。 下单好礼 活动时间：24年8.28-9.30 1.活动期间购买示踪细胞，可享8折优惠！ 2.下单时备注“示踪有礼”，即可获赠科佰生物送出的惊喜好礼！ 示踪细胞的构建与使用 在活体成像技术的应用过程中，示踪细胞选择和标记非常关键，对于示踪细胞构建过程主要为以下几个步骤： 1. 选择符合实验需求和成瘤性指标的母细胞，需要采用来源正确，成瘤性良好，传代次数较低，状态保持良好的细胞株作为母细胞； 2. 选择适合的标记蛋白，常用的标记蛋白有Firefly Luciferase，GFP，EGFP, RFP, YFP等； 3. 选择标记蛋白表达载体和基因导入方式（常用慢病毒方式），筛选稳定细胞株； 4. 示踪细胞体外发光测试，测定发光信号强度和细胞传代信号稳定性，确保示踪细胞在体外和体内都能稳定高水平表达标记蛋白，以科佰生物A549-Luc细胞为例： Figure 2. Detect Luciferase assay by Promega Bright-Glo Luciferase Assay System.The number of Luminescence signal is 524±9(Mean±SD) on A549 cells while 898951±21097(Mean±SD) on A549-Luc cells.  Figure 3. Stablity test results. A549-Luc cells showed at least 32 passage stability with similar luminescence unit. 5. 根据实验需要通过尾静脉注射、皮下移植、原位移植等方法在动物体内接种已标记的示踪细胞。 6. 活体成像：动物经麻醉（气麻/针麻）后放入成像暗箱平台，开启照明灯（明场）拍摄背景图。关闭照明灯，在没有外界光源的条件下（暗场）拍摄由小鼠体内发出的特异性光子。明场与暗场的背景图叠加后可以直观的显示动物体内特异光子的部位和强度，完成成像操作。值得注意的是荧光成像需要选择合适的激发光和发射光滤光片，生物发光则需要成像前注射luciferase底物。 7. 数据处理：动物活体成像图像处理软件除了提供含有光子强度标尺的成像图片外，还能计算分析发光面积、总光子数、光子强度的相关参数供实验者参考。 科佰助力文献发表 在示踪细胞的构建方面，科佰生物有着多年丰富经验以及多株示踪细胞现货，进一步助力客户发表高分文献。以下是7篇高分文章精选，总计IF:71.6，其中最高 IF为15.1。 01 | Glioma261-Luc 文献标题：Reversing T Cell Dysfunction to Boost Glioblastoma Immunotherapy by Paroxetine-Mediated GRK2 Inhibition and Blockade of Multiple Checkpoints through Biomimetic Nanoparticles 第一作者：Tingting Wang 单位：苏州大学放射医学与辐射防护国家重点实验室 发表期刊:  Advanced Science   影响因子:  15.1 发表日期:  2023-01-25 DOI: 10.1002/advs.202204961 文章主题：T细胞功能障碍诱导的肿瘤免疫逃逸在胶质母细胞瘤（GBM）中尤为严重，并显著影响免疫治疗的疗效。创新性地逆转T细胞功能障碍对改善GBM免疫治疗至关重要。在此，通过重新利用美国食品和药物管理局批准的抗抑郁药物帕罗西汀（PX）与仿生纳米颗粒（CS-J@CM/6 NPs），T细胞功能障碍被显著逆转，并促进了GBM的免疫治疗。PX成功应用于消除GBM小鼠骨髓中的T细胞隔离，并增加它们在肿瘤中的浸润。仿生NPs由超小的Cu2−xSeNPs、JQ1和CD6修饰的肿瘤细胞膜组成，通过CD6与活化的白细胞粘附分子的特异性相互作用有效地进入肿瘤。它们通过负载JQ1的双重作用改善T细胞功能障碍，同时降低T细胞和T细胞上PD-1的表达和PD-L1的表达。NP还能诱导肿瘤细胞的免疫原性细胞死亡，从而激活免疫反应。PX和仿生CS-J@CM/6 NPs的协同作用显著提高了GBM携带小鼠的存活率。这项工作通过重新利用晚期NPs的“旧药物”，为肿瘤免疫治疗提供了新的见解。 Cobioer合作产品:  Glioma261-Luc  货号：CBP30157L 02 | NCI-N87-Luc 文献标题：Engineering Bifunctional Calcium Alendronate Gene-Delivery Nanoneedle for Synergistic Chemo/Immuno-Therapy Against HER2 Positive Ovarian Cancer. 第一作者：Guochuang Chen 单位：深圳新诺微环生物科技有限公司和广东中山大学附属第七医院精准医学研究中心 发表期刊:Advanced science 影响因子:  15.1 发表日期: 2023-03-18 DOI: 10.1002/advs.202204654 文章主题：卵巢癌是最致命的妇科恶性肿瘤。大多数患者在晚期被诊断出，伴有广泛的腹膜扩散和腹水。双特异性T细胞衔接器（BiTEs）在血液恶性肿瘤中表现出了令人印象深刻的抗肿瘤疗效，但在实体肿瘤中的临床疗效受到限制，原因包括半衰期短、需要持续静脉输注以及相关治疗水平下的严重毒性。为了解决这些问题，本研究报道了一种基于阿仑膦酸钙（CaALN）的基因传递系统设计，用于表达治疗水平的BiTE（HER2×CD3），以实现高效的卵巢癌免疫治疗。通过简单的绿色配位反应实现了CaALN纳米球和纳米针的可控构建，具有高长宽比的纳米针状阿仑膦酸（CaALN-N）在体内无系统毒性的情况下实现了高效的基因传递至腹膜。特别是，CaALN-N通过下调HER2信号通路诱导SKOV3-luc细胞凋亡，并与HER2×CD3协同作用产生高抗肿瘤反应。在体内给药CaALN-N/minicircle DNA编码HER2×CD3（MC-HER2×CD3）可产生持续的治疗水平的BiTE，并抑制人类卵巢癌异种移植模型中的肿瘤生长。总的来说，工程阿仑膦酸钠钙纳米针是一种高效和协同治疗卵巢癌的双功能基因传递平台。 Cobioer合作产品:   NCI-N87-Luc   货号：CBP30122L 03 | 4T1-Luc 文献标题：Reducing PD-L1 expression with a self-assembled nanodrug: an alternative to PD-L1 antibody for enhanced chemo-immunotherapy 第一作者：Shuxian Cai 单位：福州大学食品安全与生物分析教育部重点实验室发表期刊:Theranostics 影响因子: 12.4 发表日期:2021-01-01 DOI:10.7150/thno.45777 文章主题：免疫检查点、程序性细胞死亡配体 1（PD-L1） 和程序性细胞死亡1（PD-1） 之间的结合会损害 T 细胞介导的免疫监视。使用免疫检查点抑制剂（ICI）阻断癌细胞膜上的PD-L1或活化T细胞膜上的PD-1的免疫检查点治疗可以恢复T细胞的抗肿瘤功能。然而，PD-L1 的细胞内表达及其在癌细胞膜上的活性再分布可能会损害 ICI 的治疗益处。为了解决这个问题，我们开发了一种能够降低PD-L1表达和增强抗肿瘤作用的纳米药物（MS NPs）。该纳米药物由免疫佐剂二甲双胍（Met，一种老药）和抗癌剂7-乙基-10-羟基喜树碱（SN38）通过氢键和静电相互作用自组装而成。开展了一系列实验，包括MS NPs的表征、MS NPs介导的PD-L1表达下调和治疗效果的验证、MS NPs介导的化学免疫治疗和肿瘤转移抑制。与构象阻断癌细胞膜PD-L1的ICIs不同，MS NPs通过二甲双胍直接降低PD-L1水平，实现免疫治疗。因此，MS NPs显示出比同类产品更强的化学免疫治疗效果。MS NPs还通过重塑细胞外基质和恢复免疫监视来有效抑制肿瘤转移。此外，MS NPs治疗小鼠的主要器官未观察到明显毒性，MS NPs治疗后小鼠存活率高。我们通过免疫佐剂Met和抗癌剂SN38的自组装设计了纳米药物MS NPs，用于免疫治疗和化疗的联合治疗。MS NPs可能会打破免疫治疗中基于抗体的ICIs的僵局，而重新利用旧药可能为新型ICI的开发提供新的视角。 Cobioer合作产品:   4T1-Luc   货号：CBP30102L 04 | HepG2-Luc 文献标题：Modified ASO conjugates encapsulated with cytidinyl/cationic lipids exhibit more potent and longer-lasting anti-HCC effects 第一作者：Yufei Pan 单位：北京大学天然药物及仿生药物国家重点实验室 发表期刊: Molecular Therapy-Nucleic Acids 影响因子:  8.8 发表日期 :2023-05-04 DOI:10.1016/j.omtn.2023.04.028 文章主题：反义寡核苷酸（ASOs）是一类以mrna或基因为靶点的治疗方法。然而，在体内靶组织的有效传递和最佳积累仍然是一个具有挑战性的问题。CT102是一种靶向IGF1R mRNA并诱导细胞凋亡的ASO。本文对脂质体传递的ASOs的组织分布进行了详细的探索。基于DCP（胞苷基/阳离子脂质DNCA/CLD和DSPE-PEG）和寡核苷酸之间的多种分子间相互作用，包括氢键、p-p堆积和静电相互作用，确定了一种导致肝脏积累增加的配方。结构优化的ct102为肝癌的治疗提供了一种新的策略。gapmer CT102MOE5和偶联物Glu-CT102MOE5在体外100 nM时表现出良好的抗增殖和IGF1R mRNA抑制作用，在体内较低的剂量和给药频率下具有更高的疗效。结合转录组和蛋白质组分析显示，在ASO治疗中可能同时存在额外的相关靶点和功能调控。这些结果表明，脂质包封和结构优化结合在寡核苷酸药物的传递中具有良好的临床应用前景。 Cobioer合作产品:   HepG2-Luc   货号：CBP30043L 05 | A549-Luc 文献标题：Okicamelliaside targets the N-terminal chaperone pocket of HSP90 disrupts the chaperone protein interaction of HSP90-CDC37 and exerts antitumor activity 第一作者：Chuan-jing Cheng 单位：南开大学药物化学生物学全国重点实验室和天津市分子药物研究重点实验室 发表期刊: Acta Pharmacologica Sinica 影响因子: 8.2 发表日期: 2021-07-29 DOl: 10.1038/s41401-021-00737-x 文章主题：热休克蛋白90（HSP90）已被公认为癌细胞的关键靶标。然而，靶向 HSP90 的 ATP 结合位点的各种毒性反应可能不是 HSP90 抑制剂的最佳选择。在本文中，发现了一种具有抗肿瘤作用的鞣花酸衍生物，即okicamelliside（OCS）。为了确定潜在的抗癌机制，将OCS光敏探针应用于靶点钓鱼和追踪。化学蛋白质组学和蛋白-药物相互作用实验表明，HSP90是OCS的关键靶点，具有很强的结合亲和力（K = 6.45 μM）。靶蛋白突变分析和分子动力学模拟表明，OCS可以竞争性作用于HSP47 N端伴侣口袋的关键Glu-90位点，其中共伴侣CDC37与HSP90结合，影响其稳定性并降低HSP90-CDC37的∆G。结果表明，OCS破坏了HSP90-CDC37的蛋白质-蛋白质相互作用;选择性影响 HSP90 下游激酶客户端蛋白，包括 CDK4、P-AKT 和 P-ERK1/2;并对A549细胞发挥抗肿瘤作用。此外，肿瘤异种移植实验以同样的方式证明了OCS的高抗肿瘤活性和低毒性。我们的研究结果发现了一种新型的 HSP90 N 末端伴侣口袋天然抑制剂，即OCS，它选择性地抑制 HSP90-CDC37 蛋白复合物的形成，并为 HSP90 抑制剂用于抗癌候选药物提供了进一步的见解。 Cobioer合作产品:  A549-Luc  货号：CBP30021L 06 | U87/DK_Luc 文献标题：Blockade of the forward Na+ /Ca2+ exchanger suppresses the growth of glioblastoma cells through Ca2+‐mediated cell death 第一作者：Hui-Jie Hu 单位：上海交通大学医学院基础医学院药理学与化学生物学系 发表期刊:British Journal of  Pharmacology 影响因子:  7.3 发表日期: 2019-06-17 DOI : 10.1111/bph.14692 文章主题：Na+/Ca2+交换器（NCX）以正向或反向模式工作，参与维持细胞内Ca2+（[Ca2+]i）稳态，这对决定细胞命运至关重要。此前，许多针对反向或正向NCX的阻滞剂已经被开发和研究在缺血组织损伤中，但很少在胶质母细胞瘤中被检测到，用于抗肿瘤治疗。我们评估了NCX阻滞剂对胶质母细胞瘤生长的影响，以及NCX是否可以成为治疗的靶点。 NCX的低表达使胶质母细胞瘤细胞对[Ca2+]i的干扰敏感。旨在阻断正向NCX的干预措施可导致ca2+介导的胶质母细胞瘤损伤，从而具有治疗潜力。贝普利地尔可能是开发新的抗肿瘤药物的先导化合物。 Cobioer合作产品:  U87/DK-Luc  货号：CBP30189L 07 | 4T1-Luc 文献标题：Saikosaponin A Inhibits Triple-Negative Breast Cancer Growth and Metastasis Through Downregulation of CXCR4  第一作者：Ying Wang 单位：上海中医药大学药学院 发表期刊:Frontiers in oncology 影响因子: 4.7 发表日期:2020-01-28 DOI:10.3389/fonc.2019.01487 文章主题：由于缺乏公认的治疗分子靶点，与其他乳腺癌亚型不同，三阴性乳腺癌 （TNBC） 患者通常没有从靶向药物的进展中受益。CXCR4/SDF-1轴参与TNBC的肿瘤生长和转移。因此，下调癌细胞中CXCR4的表达是抑制原发肿瘤生长和TNBC转移的潜在治疗策略。为了鉴定中药中抑制CXCR4表达的生物活性化合物，我们研究了柴胡皂苷A（SSA）对TNBC细胞中CXCR4表达和功能的影响能力。对细胞生长、迁移、侵袭和蛋白表达进行分析。还使用了小干扰RNA（siRNA）和非侵入性生物发光的敲低。SSA 减少了 SUM149 和 MDA-MB-231 细胞的增殖和集落形成。SSA抑制TNBC细胞的迁移和侵袭。对于小鼠，SSA抑制原发肿瘤生长并减少高度转移性三阴性4T1-luc细胞的肺转移。SSA 抑制CXCR4 表达，但不调控 CXCR7 表达，并且 .CXCR4表达下调逆转了对TNBC细胞迁移和侵袭的抑制作用。此外，SSA使Akt/mTOR信号通路失活，抑制MMP-9和MMP-2表达。结果表明，SSA通过抑制CXCR4表达发挥抗TNBC作用，因此有可能成为TNBC患者的候选治疗剂。 Cobioer合作产品:  4T1-Luc   货号：CBP30102L 科佰生物 科佰生物示踪细胞具备优良的信号和严格QC，是活体成像实验的好帮手。 1. 优质母细胞，具备STR验证数据 2. 高信噪比 Figure 13. Detect Luciferase assay by Promega Bright-Glo Luciferase Assay System..The number of Luminescence signal is 552±24(Mean±SD) on KLN 205 cells while 636872±35212(Mean±SD) on KLN 205-Luc cells.  3.体外高稳定性 Figure 14. Stablity test results. KLN 205-Luc cells showed at least 32 passage stability with similar luminescence unit. 下单好礼 活动时间：24年8.28-9.30 1.活动期间购买示踪细胞，可享8折优惠！ 2.下单时备注“示踪有礼”，即可获赠科佰生物送出的惊喜好礼！ 药物靶点模型 科佰生物公司十分重视研发创新，凭借细胞功能改造技术、高精度和灵活的基因编辑工具平台，提供包括激酶，GPCR，示踪，免疫治疗，耐药等多类疾病靶点的药物检测细胞模型。目前已覆盖四百多株现货细胞模型，同时提供高质量的Cell-base生物测活服务。 关注科佰生物 了解更多资讯 电话：4008-750-250 全国销售经理：18066071954华东销售经理：18240630236 邮箱：sales@cobioer.com 网站：www.cobioer.com

已批准药物的靶标的三分之一是G 蛋白偶联受体 (GPCR，)；然而，这些药物仅针对人类 GPCR 库的大约八分之一。GPCR 调节多种关键生理过程，包括器官发育、心血管功能、情绪、认知、多细胞性、细胞运动、免疫反应以及光感、味觉和气味。然而，许多GPCR表达较低，并且很大一部分具有未知的配体和不清楚的信号通路。由于小分子发现面临诸如成药性、选择性和分布等挑战，GPCR 可能更适合单克隆抗体 (mAb) 的靶向。单克隆抗体在这些方面具有更好的类似药物的特性。在此，回顾了之前发现的针对临床和/或开发中的 GPCR 的单克隆抗体，同时回顾了生物物理学方面的考虑因素，这些因素使得 GPCR 的使用极具挑战性，但也为生物成药性提供了机会。 1、背景介绍 人类基因组包含超过 800 个 GPCR，其中近 400 个是嗅觉受体。虽然嗅觉受体的表达主要限于嗅觉上皮，但一些嗅觉受体在其他组织中表达，针对它们可能具有治疗益处。GPCR 根据其序列同源性和进化的系统发育分析进行分类。A 类或视紫红质样家族包含所有嗅觉受体和许多临床靶向受体，包括趋化因子、胺和肽受体。B1 类受体共享一个大的细胞外 N 末端（ 图1 ) 和 B2 类属于粘附 GPCR 家族。粘附 GPCR 因其独特的延伸胞外结构域而成为特别令人感兴趣的抗体靶点。C 类 GPCR 被认为以二聚体的形式发挥作用，T 类味觉受体也是如此。最后，F 类受体包含 Frizzled 和 Smoothened两个调节生物体发育的 GPCR。 图 1. G 蛋白偶联受体胞外拓扑和配体结合模式。 生物制剂具有许多小分子药物无法实现的独特特性。许多生物制剂利用抗体的特性，特别是可以对 Fc（可结晶片段）区域进行改造，以延长药物半衰期并诱导抗体依赖性细胞毒性（或完全避免细胞毒性）。通常，抗体通过血液、组织间隙和淋巴系统扩散，并被排除在中枢神经系统之外。与小分子不同，抗体不会被肾脏清除，而是通过 Fc 受体介导的内吞作用降解。正如我们将在本次综述中详细介绍的那样，生物制剂的另一个优点是抗体可以融合在一起以创建针对两种不同受体的双特异性分子，或针对同一受体上的两个表位的双互补位分子。最后，由于其生物学性质，可以应用合成生物学方法（例如定向进化）来设计具有所需药物样特性的抗体、抗体片段和肽。 尽管 GPCR 具有新型治疗方式的潜力，但对于生物制剂药物的开发仍然难以捉摸。部分原因在于质膜中 GPCR 的结构。GPCR 的细胞外表面遵循常见的拓扑结构（ 图1A)：一个胞外 N 端结构域和三个胞外环。GPCR 的胞外环往往非常短，但大小变化很大，从 5 个氨基酸到超过 170 个氨基酸不等。正位结合口袋是配体结合的地方，位于跨膜结构域内。大多数细胞外环参与配体结合，尽管对于小分子来说，这些相互作用对配体结合的贡献微弱。视紫质是一种对激活状态进行了高度详细研究的 GPCR，其正位结合袋完全被细胞外环封闭，并且配体（视网膜）通过质膜横向扩散。 通常，GPCR 具有较短的 N 端结构域，但许多 GPCR 也具有具有多种功能的扩展 N 端结构域（ 图1B），包括形成双位和变构配体的第二个结合位点。GPCR 的 N 末端通常很容易生产为可溶性肽，并且这些肽经常被用作抗体发现活动的抗原。然而，此类抗体无法结合细胞外环。基于抗体的 GPCR 生物制剂面临的最大挑战之一是生成能够真正与埋藏在跨膜结构域深处的正位结合袋结合的抗体。 表 1. G 蛋白偶联受体靶向的生物类药物。包括激活剂（激动剂和正变构调节剂）、阻断剂（拮抗剂、反向激动剂和负变构调节剂）以及靶向 GPCR 的下一代分子。只有三种分子获得批准（dulaglutide、erenumab 和 mogamulizumab），只有一个分子在 3 期临床阶段（talquetamab）。 2. 针对G蛋白偶联受体的生物制剂的功能活性2.1. 激活 G 蛋白偶联受体的生物制剂 B1 类GPCR 的促胰液素家族已成为治疗糖尿病和肥胖症的激动剂抗体的靶标。临床批准的胰高血糖素样肽 1 受体 (GLP-1 R) 激动剂度拉鲁肽 (Trulicity) 由礼来公司设计，作为 GLP-1 肽与 IgG4 Fc（片段可结晶区）的融合体。已知 IgG4 与 FcRn 受体结合，通过回收延长抗体半衰期，事实上，度拉鲁肽在人体中的血清半衰期超过 12 小时，而艾塞那肽和其他 GLP-1 肽模拟物 的血清半衰期不到 2-5 小时。重要的是，IgG4 不会激活补体级联，从而导致抗体依赖性补体依赖性细胞毒性 (ADCC)。此外，F234A 和 L235A 突变被引入度拉鲁肽的 IgG4 Fc 区，以减少 ADCC 的可能性。总之，度拉鲁肽是一种独特的肽激动剂，与惰性 Fc 区融合以激活 GLP-1 R。此外，Gmax Biopharm 还开发了 glutazumab，一种 GLP-1 肽与抗 GLP-1R 抗体 轻链的融合物。Glutazumab 目前正在进行治疗糖尿病的临床试验。另一种与 GLP-1 肽融合以产生激动作用的抗 GLP-1 R 抗体 Everestmab 已被描述。Everestmab 是一种介于白蛋白结合域和突变 GLP-1 肽之间的双特异性纳米抗体。 同样，最近描述了 GLP-1 肽与GLP-1 R 抗体轻链的融合，称为 TB-059-002。安进 (Amgen) 最近报道了与葡萄糖依赖性促胰岛素多肽受体 (GIPR) 抗体 AMG-133融合的 GLP-1 肽的阳性数据，该抗体可作为双重 GLP-1 R 激动剂/GIPR 拮抗剂。将 GLP-1 肽与抗 GIPR 抗体连接具有延长 GLP-1 肽半衰期的优点，并且被证明可以增强该分子在胰腺中的定位。AMG-133 作为 GLP-1 R 激动剂/GIPR 拮抗剂，最近有报道显示在肥胖方面显示出有效的 1 期临床数据。 与 GLP-1 R、GIPR 和 PTHR1 一样，许多 GPCR 可以具有大的、扩展的细胞外结构域，通常位于其 N 末端（图1）。一种称为促甲状腺素受体或促甲状腺激素受体 (TSHR)的GPCR，具有大量富含亮氨酸的重复细胞外 N 末端结构域，并且已发现自身抗体可通过与该细胞外结构域结合来激活 TSHR，从而导致格雷夫斯病(又名毒性弥漫性甲状腺肿，是一种自身免疫性疾病)。与 TSHR 一样，C 类代谢型谷氨酸受体 (mGluR) 具有较大的 N 末端结构域，远端具有捕蝇草结构，并且已开发出骆驼单域抗体（纳米抗体）DN10 和 DN13 来激活 mGluR。mGluR 受体家族需要胞外域二聚化，DN10 和 DN13 均识别桥接两个二聚化胞外域的独特表位。有趣的是，DN10 识别 mGluR2 同二聚体，而 DN13 与 mGluR2 同二聚体和 mGluR2/mGluR4 异二聚体发生交叉反应。这种独特的药理学被证明可以有效增强 mGluR2 激动剂对神经元和 DN13 小鼠恐惧调节受损的抑制作用。最近，DN10 和 DN13 还被用于使用标记纳米抗体的时间分辨 FRET 传感器在体内检测 mGluR2 同二聚体和 mGluR2/mGluR4 异二聚体。 虽然这些是通过大的 N 末端胞外结构域激活受体的变构调节抗体的例子，但许多 GPCR 的胞外表面积有限，尤其是 A 类视紫红质样 GPCR 家族(图1A）。一些抗体已被证明可以通过直接结合短胞外环并且有时进入正位配体结合袋来激活 GPCR。安进 (Amgen) 最近报道了一种新型 apelin 受体 (APJR，apelin receptor ) 激动剂纳米抗体的设计。抗体 JN241 被发现可以阻断 APJR 激活，并且 CDR3 延伸到正构结合袋中。作者利用结构分析和构效关系信息设计成激动型抗体，通过在 CDR3 区域引入突变，将 JN241 转化为激动剂。此外，β1-肾上腺素能受体 (β1AR) 抗体被证明是偏向激动剂，可激活 G 蛋白，但不激活作为变构调节剂的 β-arrestin 信号传导。 2.2. 阻断 G 蛋白偶联受体的生物制剂 许多抗体已被描述为 G 蛋白偶联受体拮抗剂。促胰液素家族(B1 亚类)受体具有一个大的 N 末端结构域，可与形成 α 螺旋杆的激动剂结合（图1B）。 最近描述了一种针对 GLP-1 R 的竞争性拮抗抗体TB-001-003，GLP-1 R 是 B1 类或促胰液素家族 GPCR。TB-001-003 能够以与肽拮抗剂 avexitide (exendin-(9-39)) 类似的方式从 GLP-1R 中取代 GLP-1。相比之下，GLP-1 R 拮抗剂抗体 Fab 3F52 是针对 GLP-1R 大 N 末端产生的，X 射线晶体学显示可通过变构抑制机制抑制 GLP-1 结合。与 TB-001-003 类似，一种名为 Gipg013 的 GIPR 拮抗剂抗体被证明可以取代 GIPR N 末端结构域的 α 螺旋 GIP 肽。Regeneron 将 crotedumab （另一种称为胰高血糖素受体 (GCGR) 的促胰液素家族 GPCR 拮抗剂抗体）推进到了针对心脏代谢疾病的 1 期临床试验，但进一步的开发已停止。Crotedumab 是使用 GCGR 的人源化小鼠免疫产生的。 REMD Biotherapeutics 已将另一种 GCGR 拮抗剂抗体 volagidemab 推进到治疗糖尿病的 2 期试验。最后，还开发了针对 GCGR 的纳米抗体拮抗剂。一款称为erenumab，用于治疗偏头痛。Erenumab 与降钙素基因相关肽 1 型受体 (CALRL) 结合，并与受体活性修饰蛋白 1 (RAMP1) 接合。CALRL 和 RAMP1 的复合物称为降钙素基因相关肽受体 (CGRPR)，erenumab 是针对 RAMP1 和 CALRL 胞外结构域的不对称 Fc 融合而产生的。 其他具有大 N 末端结构域的受体已成为抗体拮抗剂的靶标。OncoMed报道 vantictumab可阻断 Frizzled 受体家族 (FZD)，该受体具有 FZD1、FZD2、FZD5、FZD7 和 FZD8 的交叉反应拮抗剂活性，并阻断 Wnt 信号传导以发挥抗肿瘤活性。FZD 受体拥有一个大的 N 末端，其远端含有富含半胱氨酸的结构域。富含亮氨酸的重复 GPCR (LGR) 家族通过 FZD 增强 Wnt 信号传导，具有较大的 N 末端，LGR5 是 Kyowa Kirin 开发的名为 KM4056的拮抗剂抗体的目标。 已经描述了许多针对 A 类视紫红质 GPCR 家族的拮抗剂抗体。FDA 批准了 getagozumab的 IND 许可，getagozumab 是一种内皮素受体 A (ETA) 拮抗剂抗体，另一种名为 AG8的 ETA 拮抗剂抗体最近也得到了表征。MedImmune 描述了 Fpro0165的发现和优化，Fpro0165 是一种甲酰基肽受体 1 (FPR1) 拮抗剂抗体，通过将抗体与受体的结构对接，该抗体被证明可以与受体的细胞外环 2 结合。此外，一系列合成纳米抗体，包括称为 AT118i4 的优化抗体，已被描述为血管紧张素 II 1 型受体 (AT1R) 的拮抗剂。使用胆囊收缩素 B 受体 (CCK-BR) 胞外结构域片段免疫的小鼠文库中的核糖体展示来发现一种有效的拮抗抗体，称为 scFv 77-2。scFv 77-2 在神经性疼痛的临床前模型中有效。 GPCR 拮抗剂抗体已针对趋化因子受体（称为 CCR 和 CXCR）大量开发，以便在不同疾病状态下调节免疫系统。趋化因子受体属于 A 类视紫红质受体家族，具有有限的细胞外表面积。Mogamulizumab 是一种临床批准用于治疗白血病的 CCR4 抗体，但其作用机制是诱导抗原依赖性细胞毒性 (ADCC) 杀死肿瘤细胞，而不是直接拮抗 CCR4。另一种 CCR4 拮抗剂抗体已被描述为阻断 CCR4 功能，随后通过腺相关病毒介导的抗体表达递送至肿瘤。针对 CXC 趋化因子受体 4 (CXCR4) 的抗体拮抗剂已被大力开发用于治疗癌症，其中包括 LY2624587，一种有效的拮抗剂。此外，ulocuplumab 已被开发并被证明是 CXCR4 内源配体 CXCL12 的竞争性拮抗剂。其他 CXCR4 抗体已在正构结合袋和细胞外环 中靶向并显示可竞争 CXCL12。CXCL12 与 CXCR4 以及 CXCR7 结合，已描述了针对 CXCR4 和 CXCR7 的抑制性纳米抗体。CXCR2 是另一种重要的趋化因子受体，在癌症中失调。一种新型双互补位抗体被描述为将两种效力较弱的纳米抗体结合在一起，从而产生一种强反向激动剂分子。此外，已经使用噬菌体展示合成抗体库描述了针对 CXCR2 的单克隆抗体。CCR5 是一种经过充分验证的 HIV-1 侵入共受体，并且已经开发出大量抗体来阻断 CCR5 信号传导和 HIV-1 结合。最后，已经描述了 CCR2、CCR7 和 CCR9的抗体拮抗剂。病毒性 GPCR 也已成为人们感兴趣的治疗靶点，例如由巨细胞病毒编码的病毒趋化因子受体 US28。US28 的过度表达与胶质母细胞瘤有关，并且已经描述了 US28 的拮抗剂抗体可用于胶质母细胞瘤的潜在治疗。 2.3. 靶向 G 蛋白偶联受体的下一代生物制剂 Mogamulizumab 是一种临床批准的治疗白血病的 CCR4 抗体。Kyowa Kirin 首先开发了 mogamulizumab，其作用机制是诱导 ADCC，从而消耗 CCR4 表达细胞。Mogamulizumab 被设计为减少岩藻糖基化，从而增强 ADCC。与 CCR4 类似，CCR8 是 ADCC 耗竭的目标，因为 CCR8 特异性表达于肿瘤微环境中的免疫抑制调节性 T 细胞 (Treg)。一种名为 Nb-Fc1b 的新型四价纳米抗体靶向表达 CCR8 的 Tregs 并抑制肿瘤生长。吉利德已将 GS-1811 推进到实体瘤的 1 期试验，以在表达 CCR8 的 Tregs 中触发 ADCC。同样，百时美施贵宝 (Bristol-Myers Squibb) 有一种名为 BMS-986340 的抗 CCR8 抗体，处于实体瘤的 1 期试验中。然而，正如 CCR8 敲除小鼠中所证明的那样，CCR8 的靶向需要 ADCC 来消除 Tregs，因为阻断 CCR8 信号传导对 Treg 介导的免疫抑制没有影响。 许多分子利用双特异性结合，其中抗体的每个臂结合不同的抗原。最近通过筛选源自患者的类器官中的双特异性抗体库，发现了一种名为 MCLA-158 的 LGR5 和 EGFR 双特异性抗体。BsNb PX4 是一种双特异性抗体，由两种纳米抗体组成，一种靶向 CXCR4，另一种靶向 PD-L1。在对 PD-L1 抑制具有抗性的肿瘤类型中，BsNb PX4 比单独使用每个纳米抗体治疗小鼠模型更有效。Talquetamab 是一种双特异性抗体，处于多发性骨髓瘤 3 期临床试验中，靶向 CD3 和 GPRC5D，该靶点在多发性骨髓瘤细胞上高度表达。此外，还描述了 CXCR5 和 CD3 双特异性抗体。 抗体药物偶联物 (ADC) 已针对许多 GPCR 靶标开发。对于 CXCR4，使用非天然氨基酸掺入将表面残基引入抗 CXCR4 抗体中，从而可以与 auristatin（一种用于治疗癌症的抗有丝分裂剂）结合。后来，针对称为 ADC 713 的抗体，通过增加药物与抗体比率 (DAR) 改进了该策略，从而降低了毒性。此外，一种名为达沙替尼的 Lck 抑制剂与 CXCR4 抗体偶联，以抑制自身免疫性疾病中的 T 细胞功能（因为 Lck 表达仅限于 T 细胞）。最后，描述了一种名为 4M5.3X4 的分子，它是一种针对 HIV 蛋白的小干扰 RNA，与 CXCR4 纳米抗体缀合，可抑制 CXCR4 阳性 T 淋巴细胞中的 HIV 复制。 CAR T 细胞疗法是细胞重编程的一种高级形式，可将免疫细胞靶向肿瘤以治疗癌症。孤儿 GPRC5D 已被证明在骨髓瘤癌细胞中过度表达，并已成为称为 MCARH109 的嵌合抗原 T (CAR-T) 细胞疗法的靶标。溶瘤疱疹病毒 (oHSV) 被设计为通过将病毒与称为 oHSV/Nb-gD 的 CXCR4 纳米抗体融合来靶向 CXCR4+ 胶质母细胞瘤细胞。oHSV/Nb-gD 还可以诱导 TRAIL 的表达，TRAIL 是一种 TNF 家族配体，可诱导 CXCR4 阳性胶质母细胞瘤细胞凋亡，从而减少肿瘤生长。 3. G蛋白偶联受体生物制剂发现的机遇与挑战3.1. 许多 G 蛋白偶联受体都是孤儿 约 400 个非嗅觉 GPCR 中大约有 30% 是孤儿，没有已知的配体，信号转导特性知之甚少。如上所述，许多针对 GPCR 的抗体起到变构或正构激活剂的作用。因此，抗体配体可用于去孤儿化 GPCR 信号通路，使用诸如 TRUPATH、APEX或 PRESTO-TANGO等技术。例如，许多分子针对 CAR T 细胞的 GPRC5D，因为 GPRC5D 在骨髓瘤癌细胞中高表达。然而，目前对 GPRC5D 的配体或信号转导机制知之甚少。因此，GPRC5D 抗体可用于通过 APEX 标记来分析信号传导，从而为内源配体的去孤儿化提供筛选平台。3.2. 如何实现 G 蛋白偶联受体偏向性的激动 GPCR 能够通过各种 G 蛋白家族成员和 β-arrestins 传递多效性信号，在这种情况下，有可能使用所谓的偏向激动剂来靶向有益途径。正如 APJR 抗体 JN241-9 所证明的那样，可以通过进行点突变来改变抗体配体的功能特征（在这种情况下拮抗剂转变为激动剂）。因此，诱变可以用作生物制剂基于结构的药物发现的平台。此外，通过对每个 GPCR 信号通路进行并行测试，有可能捕获通过治疗有益的通路发出信号的偏向抗体配体，并避免副作用。DNA 的快速且可扩展的合成使得强大且多样化的抗体库的开发成为可能，这使得能够发现能够与 GPCR 中的神秘位点结合的抗体，例如正构配体结合口袋（ 图2A）。DNA 合成还允许对正配体结合抗体进行大规模诱变，这将是设计针对 GPCR 的偏向激动剂抗体的策略。此外，与受体胞内侧结合的纳米抗体可用于稳定不同的受体构象，从而加速药物发现策略。 图 2. G 蛋白偶联受体生物制剂发现的机遇和挑战。A. 抗体可以靶向配体结合（正构）位点或 GPCR 的其他变构区域。 B. 抗体可以稳定 GPCR 构象，从而实现复杂的药理学（正负调节剂、反向激动剂等） C. 抗体可以激活 GPCR 下游的多种信号，并被设计为选择性激活某些途径。 D. 抗体可以破坏同一细胞（反式）或顺式（不同细胞中）的蛋白质相互作用，包括阻止更高级 GPCR 寡聚物的形成。 这里详细介绍了一些抗体影响 GPCR 信号传导的分子机制，并将它们分为两大类：正构或变构结合剂（图2A）。此外，这些抗体能够稳定 GPCR 构象（图2B），这是驱动受体下游功能选择性的一种方法（图2C)。3.3. G 蛋白偶联受体的细胞类型特异性表达 作为药物，抗体具有细胞类型特异性靶向的独特特性。抗体不是全身作用并立即代谢，而是倾向于在具有高浓度抗原的组织中积累。GPCR 通常在特定组织类型中以非常低的水平表达。大规模数据集，例如人类蛋白质图谱 和人类细胞图谱正在阐明受体特异性表达谱。最近一个特别令人兴奋的例子是趋化因子受体 CCR8，它在肿瘤微环境中的 Tregs 中表达受限。因此，利用高亲和力抗体，可以特异性地消除肿瘤微环境中的免疫抑制性 CCR8 阳性 Tregs。这是将 GPCR 独特的表达谱与抗体疗法的特性相结合的一个例子。3.4. 细胞外 G 蛋白偶联受体相互作用 最后，由于其高亲和力、通过亲合力结合和大尺寸，抗体疗法特别适合破坏蛋白质/蛋白质相互作用。最近，人类基因组中的一些细胞外蛋白质的细胞外蛋白质/蛋白质相互作用图谱（相互作用组学）受到关注。检查点抑制剂疗法会破坏细胞外蛋白质/蛋白质相互作用，而 GPCR 的细胞外相互作用才刚刚开始被绘制出来。调节细胞外与抗体的相互作用将为进一步了解 GPCR 的生物学及其广泛的 N 末端结构域和其他蛋白质之间涉及的各种相互作用提供信息。 10.1080/17460441.2023.2193389 声明：发表/转载本文仅仅是出于传播信息的需要，并不意味着代表本公众号观点或证实其内容的真实性。据此内容作出的任何判断，后果自负。若有侵权，告知必删！ 长按关注本公众号  粉丝群/投稿/授权/广告等 请联系公众号助手 觉得本文好看，请点这里↓

DONGTAN, KOREA, June 10, 2024 - iLeadBMS, a new drug R&D company under Ildong Pharmaceutical Group, announced on the 10th that it presented in vivo study results on its liver fibrosis treatment candidate 'IL1512' at the European Association for the Study of the Liver (EASL) 2024, held in Milan, Italy, from June 5th to the 8th. IL1512 is an oral CXCR7 agonist and is classified as a first-in-class drug, a type of drug that has never been developed for the same therapeutic indication previously. Last month, iLeadBMS presented the efficacy results of this drug for idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) at the American Thoracic Society (ATS 2024), and this time around it announced the anti-fibrotic effects of the drug in the liver. CXCR7 is a G protein-coupled receptor that binds to chemokine ligands CXCL11 and CXCL12, targeting various pathways related to fibrosis such as fibroblast activation, inflammation, tissue repair, and angiogenesis. This makes it an ideal therapeutic target for treating fibrotic diseases. Given that CXCR7 agonists exerts their anti-fibrotic properties through a novel mechanism, iLeadBMS plans to develop anti-fibrotic drugs to treat fibrosis in various organs including but not limited to the lungs, liver, heart, kidneys, and skin, and is also considering utilizing the expedited review and Orphan Drug Designation (ODD) pathways offered by the FDA. Based on the presentation at the conference, iLeadBMS has confirmed the anti-fibrotic effects of IL1512 in the well-established CCl4 (carbon tetrachloride) liver fibrosis model with oral administration of the test article. Significant improvements in various anti-fibrotic indicators (col 1a1, hydroxyproline content, TGF-beta) were observed compared to the placebo. The presentation emphasized that IL1512, with its novel mechanism targeting CXCR7, demonstrated direct anti-inflammatory effects on the liver and improvement in fibrosis. Additionally, it highlighted that IL1512 showed either superior or at minimum, comparable efficacy and safety profiles compared to Elafibranor, the comparator drug. Based on these research results, iLeadBMS has identified preclinical candidate molecules with even greater improvements over IL1512 and, plans to start GLP (Good Laboratory Practice) toxicology studies in the second half of this year. About iLeadBMS Established in 2020, iLeadBMS specializes in the discovery and development of novel drugs, with an R&D pipeline targeting fibrotic diseases, protease inhibitors, solid tumors, and neurodegenerative diseases. For more information on iLeadBMS, please visit: