双CAR-T疗法CD20/19无病毒自杀基因完全根除肿瘤，Cellectis展现巨大潜力

CD19 CAR-T细胞疗法已显著推动了血液瘤治疗的进展，但仍存在抗原逃逸和治疗持久性不足等问题，导致部分患者在治疗后复发。此外，基于病毒载体的CAR-T细胞疗法面临高成本的挑战。一篇名为“Manufacturing CD20/CD19-targeted iCasp9 regulatable CAR-TSCM cells using a Quantum pBac-based CAR-T engineering system”的研究文章，报道了一种基于piggyBac转座子的无病毒载体Quantum pBac（qPB）系统，开发了一种新型细胞工程系统，用于生产多重CAR-T疗法。

研究人员通过将携带iCasp9、CD20scFv和CD19scFv的转座子微环和qPBase质粒递送到激活的T细胞中，并使用无血清CAR-T细胞培养补充物Quantum Booster（qBT），促进CAR-T细胞的增殖，同时保持干细胞特性。这种新的方法使得CD4+和CD8+T细胞群体中CD45RA+CD62L+CD95+TSCM细胞的比例显著提高。由此产生的CARiC9-20/19 CAR-T细胞在小鼠模型中展示了增强的抗肿瘤效果，并可通过iCasp9自杀基因实现安全控制。在高剂量组中，这些CAR-T细胞完全清除了肿瘤，小鼠在整个试验期间未出现复发。

进一步的研究在NCI-N87胃癌模型中评估了qPB系统生产的CAR-T细胞的抗肿瘤效果，结果显示，与对照组相比，qPB系统生产的CAR-T细胞显著抑制了肿瘤的生长，并在试验的第17天实现了肿瘤的完全清除。相比之下，使用传统病毒载体（如慢病毒）生产的CAR-T细胞未能在相同条件下完全清除肿瘤。

总体来看，这项研究展示了利用qPB系统制造CAR-TSCM细胞的潜力，为开发高效、持久的CAR-T细胞疗法提供了一种新策略。然而，这项研究也存在一些局限性，如仅在有限的小鼠模型中进行了体内实验。未来的研究需要在更大规模的动物模型和人类临床试验中进一步验证CAR-T SCM细胞的疗效和安全性。

该研究的亮点在于使用非病毒载体技术，结合双靶点设计，有效避免了肿瘤的抗原逃逸。同时，加入自杀基因iCasp9进一步增强了安全性。对CAR-T细胞疗法的多样化改造一直是业内关注的焦点。近期，另一家企业Cellectis也利用非病毒手段改造CAR-T细胞，在Molecular Therapy上发表了一篇文章，展示了TALEN基因编辑技术在设计双CAR靶向CAR-T细胞疗法中的应用。

TALEN是一类基于转录激活子样效应物（TALE）的蛋白质，这些蛋白质具有高度特异性的DNA结合能力。通过与DNA核酸酶FokI的催化结构域融合，产生了转录激活剂样效应核酸酶（TALEN），这种构建体具有高特异性和高活性，能够在预先选择的位点精确切割DNA序列。与CRISPR/Cas9技术不同，TALEN不受PAM位点的限制，可以靶向基因组中的任意序列，操作简单且精确。

Cellectis提出了一种创新的CAR-T细胞工程策略，称为同种异体“Smart CAR-T”，其能够表达构成型CAR，靶向实体瘤中的成纤维细胞激活蛋白（FAP）。FAP主要在癌症相关成纤维细胞（CAF）中表达，也在一些肿瘤细胞如肉瘤、间皮瘤和食管等上皮性肿瘤中表达。Smart CAR-T通过FAP CAR介导的CAF靶向，诱导间皮素CAR的表达，形成对双抗原的感应回路，有效靶向顽固性实体瘤，降低潜在的安全风险。

未来，随着更多的体内外实验和临床研究的深入，新型CAR-T细胞疗法有望在更大规模的患者中验证其疗效和安全性。同时，随着技术的不断进步和成本的降低，CAR-T细胞疗法将更加普及，惠及更多患者。与大型药企的合作也将加速这些创新疗法的研发与商业化进程，推动整个细胞与基因治疗领域的发展。

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