ABX-1100

偶联技术有多火？仅ADC（抗体偶联药物）领域，2017年之后就有超过10款新药获FDA批准上市，时至今日，全球进入临床阶段的ADC药物更是超过500余款，而万物偶联趋势下，这个数字还在无限扩大。 偶联药物有多卷？随着DS-8201获批上市，其突出的优势为ADC药物开发提出了更高的标准，也让“差异化偶联创新药”成为主要趋势，部分入局较晚的企业产品还在研就已丧失优势，不得不思考“偶联药物未来又将如何发展”？ 其实，与最初“魔术子弹概念”时代并没有太大的变化，尽管蛋白质基因工程、化学偶联等技术的持续进步，但偶联药物的发展方向仍主要围绕新的靶抗原、新作用机制的有效载荷、新的抗体和载体形式等方面进行，而最大的不同就在于，偶联药物方向更偏向于了靶向性，即更多具有特异定向作用的结构被用作了小分子毒素等有效载荷的载体。 数据来源：公开数据整理 在此环境之下，组合用药、精确递药的理念和应用场景进一步扩大，多种新兴偶联技术概念相继涌现，业界也掀起了新兴偶联技术药物研发热潮。 差异化之路 非抗体蛋白偶联的出现 原则上来讲，偶联药物或许并不存在最优组合。 “万物皆可偶联”的核心理念之下，对最优组合的不断探索反而促进了更多创新技术的出现，继ADC爆火之后，PDC、FDC、SMDC、ISAC、RDC、ARC等多种技术如雨后春笋般不断冒出。 多样化策略之下，各种创新偶联技术相较传统ADC技术，或多或少都存在自身的核心优势，如PDC较强肿瘤穿透性、更低的免疫原性与更低的生产成本；SMDC工艺简单、安全性较好与安全性较高。而除了抗体、多肽与小分子等常规的靶向分子，近来出现的“非抗体蛋白”也逐渐全新的研究领域。 非抗体蛋白偶联药物，即将靶向性蛋白分子与发挥药效的效应分子（比如细胞毒分子，siRNA等）连接在一起，递送效应分子到特定疾病部位发挥作用。其原理上与ADC的机理类似，最大区别就是靶向分子的不同，但相较前者却有着核心的四大优势： 免疫副作用更小：蛋白偶联药物的蛋白部分大都来源于人类蛋白，例如重组人甲胎蛋白、重组人转铁蛋白等，相较于抗体、多肽能对人产生较小的免疫副作用。 靶点灵活：对靶点的选择相对灵活，很多企业在蛋白部分做了很多创新，例如Aro Biotherapeutics的Centyrins蛋白经过设计后可以与不同肿瘤抗原相结合。原则上可以避开偶联药物较集中的hear2等领域，去尝试更新、更小众的靶点方向。 高效：如外泌体偶联药物，可控的、模块化的药物装载与递送，突破了抗体偶联药物（ADC）载药率低、安全性有限的瓶颈，实现了更高效的提升效率。 稳定：蛋白偶联药物的结构稳定性一般较高，且具有高效、可控的制药载荷数量。 依从性高：可以通过在蛋白中引入半胱氨酸来提高药物的结合率，提高了药物的依从性和便利性。 不过，由于蛋白偶联技术总体上处于研究早期阶段，某种程度上其优势性与局限性都尚未研究透彻，后续或可能存在系列变化，但无论如何，从目前市面上相继出现的非抗体蛋白偶联技术来看，其临床优势也可初见端倪。 外泌体+转铁蛋白 蛋白偶联的两大典型技术路线 外泌体偶联药物（EDC） 2021年7月26日，Nature子刊Nature Biomedical Engineering在线刊发了中科院魏炜教授团队联合首都医科大学陶勇教授团队和昆士兰大学余迪教授团队共同署名文章，开发出外泌体偶联VEGF单抗，利用Treg来源的外泌体（rEXS）为载体，通过基质金属蛋白酶（MMP）敏感肽段（cL）连接VEGF抗体（aV)，创建了rEXS-cL-aV体系。 后续通过外泌体化学偶联技术，在外泌体上进行可控、可调节的多功能化改造，如构建融合表达特定蛋白和外泌体膜蛋白的质粒，通过转染等方式，让该融合蛋白在外泌体来源细胞中大量表达，使得这些细胞分泌的外泌体能够会携目标融合蛋白。 图片来源：参考资料1 最终，将外源性小分子化学药物或生物大分子药物与外泌体偶联结合，形成外泌体偶联药物（EDC），实现高效、稳定、广谱、可控的外泌体模块化药物装载与递送，突破了抗体偶联药物（ADC）载药率低、安全性有限的瓶颈。 在该领域上，天津外泌体科技有限公司是国内掌握该技术商业化的领先公司，根据其以往公布的数据显示，其EDC药物装载率可达到92.3%、溶解性提高71.4倍、半衰期提高36.2倍、药峰浓度提高3倍、 口服相对生物利用度提升2.6倍；装载Herceptin抗体的外泌体呈现靶向效果相比对照组提升174.5倍，数据着实惊人。 至少就目前而言，EDC技术是外泌体领域最具商业化前景的技术，也是最为经典的非抗体蛋白偶联技术。 重组人转铁蛋白偶联药物 铁蛋白作为一种脱铁蛋白组成的具有大分子结构的糖蛋白，通常情况下是由蛋白质外壳和铁内核两部分组成，在维持机体铁代谢平衡和细胞抗氧化过程中起着关键作用，并且与炎症、血管增生和肿瘤有关。 而人工条件下的铁蛋白是具有空腔结构的笼形结构，外部的蛋白质外壳可通过基因和化学修饰增加靶向性，以达到提高递送效率的目的，而空腔机构则可以用于装载药物，实现药物的包载荷递送。 图片来源：参考资料2 2005年铁蛋白被成功用于包载递送阿霉素，开启药物递送领域新篇章，之后铁蛋白药物载体（FDC）的概念得以面世，相较ADC等常规偶联药物，其在安全性、渗透性、稳定性与靶向性等方面具有天然优势，尤其是靶向性方面。 安全性：铁蛋白是来自生物体内的天然存在蛋白质，毒性低，具有良好的生物降解性和生物相容性，不容易引起排异反应。 渗透和滞留性：由于铁蛋白粒径较小，使其易于逃脱网状内皮系统的吞噬，半衰期较长，可在病变部位形成蓄积，增强药效。 稳定性：铁蛋白的环境要求低，部分情况分解成亚基后仍能重组恢复笼状结构，在制备和储存工艺上要求简便很多。 靶向性：该领域铁蛋白主要优势主要有两者，一者是肿瘤靶向性的基本要求，即肿瘤细胞对铁离子的需求远大于正常细胞，使得肿瘤细胞表面的转铁蛋白受体过度表达；二者是其脑靶向性，由于铁蛋白可跨越血脑屏障，同时转铁蛋白受体在血脑屏障中的表达水平明显高于正常细胞组织，被寄希望于多种中枢神经疾病的药物载体。 很明显，就算同属于蛋白偶联药物，在较EDC药物高效、稳定与免疫副作用等相同的优势，不同技术路线的蛋白偶联药物也有着差异化的优势（如FDC的脑靶向性），而随着生物医药基础研究水平的上升，未来也有望诞生更多非抗体蛋白偶联药物，进一步丰富领域优势性的同时，也可以拉高整个市场的天花板。 国内空白 蛋白偶联药物的蓝海市场 就蛋白偶联药物市场而言，尽管近年来受ADC大火所带动，但目前国内外对于该类型药物的研究尚不完善，领域内多项技术仍处于临床早期阶段，相关性报道并不多。 数据显示，全球活跃蛋白偶联类临床药物仅有20款，且绝大多数均处于临床前阶段，FutureChe的镥[177Lu]Ludotadipep是目前临床进度最快的管线产品。 而就在研药物适应症来看，实体瘤、肺癌、乳腺癌等热门疾病类型的集中度明显更高，但同时部分蛋白偶联药物管线也选择了自免、脓毒症、代谢疾病与神经系统疾病为主要突破点。 其中，Aro Biotheraputics的「ABX1100」与Alpha Cancer Technologies的「ACT-903」是目前在研药物中信息披露较全面的品种，也是蛋白偶联药物中具有代表意义的品种。 「ABX1100」 ABX1100由ARO利用其Centyrins专利平台技术开发的核心产品，其特色的Centyrin蛋白FF0C具有优异的稳定性和溶解度、包括体积较小、可大肠杆菌生产，免疫原性较低，化学偶联方法与生产方式相对比较简单等优势，特别适合靶向递送寡核苷酸。 图片来源：ARO官网 与抗体相比，Centyrins在早期内体中含量更高递送速度更快，这可能Centyrins分子量小具有强渗透性优势， 这样更多的药物分子能够实现内涵体逃逸从而发挥其作用。 作为ARO针对庞贝病的一种全新潜在治疗方法，ABX1100由结合CD71受体的Centyrin与特异性干扰Gys1 mRNA表达的小干扰RNA（siRNA）结合而成，从而降低肌肉组织中Gys1酶的水平和整体活性。在GLP毒理学研究中显示出良好的安全性，肌肉中Gys1 mRNA的持久减少，支持每月或每季度给药的潜力，目前已获得美国食品药品监督管理局颁发的孤儿药资格认定和儿科罕见病资格认定。 「ACT-903」 Alpha Cancer Technologies Inc. (ACT）是一家生物制药公司，专注于其特有的重组人α胎蛋白（AFP）平台开发和商业化靶向免疫肿瘤学和免疫调节疗法。 图片来源：ACT官网 ACT-903作为ACT公司下一代ADC技术靶向α胎蛋白受体治疗癌症新方法的重要管线，其在2023 ASCO大会上首次亮相，是一种新型甲胎蛋白（AFP)-美坦氨酸偶联物，在一项卵巢异种移植模型试验中，ACT-903四种给药方案下的临床数据进行了对照，并观察其细胞毒性，目前所有治疗组体积缩小与生存期增加上均有明显统计学意义。 ACT-903结合物对肿瘤体积的影响 图片来源：ACT官网 总研究结果显示，ACT-903在卵巢异种移植模型中的安全性和有效性，以及在患者来源的癌症类器官中观察到的细胞毒性，支持ACT-903进入临床研究。目前ACT已计划在2024年提交ACT-903的研究新药（IND）申请。 小结 随着ADC药物的越来越火、越来越卷，就连PDC、FDC、SMDC、ISAC、RDC等领域的竞争格局也同样开始不容乐观，稀有标的属性正在逐渐消失，如何在偶联领域形成更差异化的竞争成为行业后续主要的思考方向。 但同时，药物研发虽不能盲目跟风，但也不能为了差异化而差异化，应着重考虑临床优势与产业优势，而对于蛋白偶联药物而言，尽管目前各项研究都尚处于早期阶段，但其高效、稳定与特殊靶向性等特点也足够吸引人。 或许，随着未来研究的深入，蛋白偶联药物还真有望成为下一代更具潜力的ADC技术。 路漫漫其修远兮，吾等仍将上下而求索。 参考资料： 外泌体的五大商业应用（三）：外泌体偶联药物，精致颜容， 2024年01月14日 药物递送（八）——铁蛋白技术， 药物递送，2021年10月08日 双靶向Centyrin-siRNA偶联物ABX300及其siRNA平台分析， 洞见conjugates 2022年06月19日 ALPHA CANCER TECHNOLOGIES PRESENTS NEW DATA FROM ACT-903, AN AFP-MAYTANSINE CONJUGATE, IN ONLINE PUBLICATION AT THE 2023 AMERICAN SOCIETY OF CLINICAL ONCOLOGY (ASCO) ANNUAL MEETING，ACT官网 来源 | 博药（药智网获取授权转载） 撰稿 | 头孢 责任编辑 | 八角 声明：本文系药智网转载内容，图片、文字版权归原作者所有，转载目的在于传递更多信息，并不代表本平台观点。如涉及作品内容、版权和其它问题，请在本平台留言，我们将在第一时间删除。 商务合作 | 王存星 19922864877（同微信）  阅读原文，是昨天最受欢迎的文章哦

作者｜小鱼 据Maximize Market Research统计，到2029年，siRNA治疗市场预计将从127亿美元大幅增长至392亿美元，年复合增长率高达25.3%。 在如此庞大又持续性增长的市场中，siRNA公司如雨后春笋般涌现，投资者如何快速寻找到优质标的？新入局者或观望者如何确定siRNA药物开发方向？或许能从这8家siRNA风向标公司中得到答案。 概览：siRNA行业全景分析  目前，已经有6款siRNA药物批准上市，根据智慧芽新药情报库统计，至少有115款处于临床试验中。 图1:siRNA药物全球最高研发状态的分布情况 表1:处于临床3期、申请上市、批准上市阶段的siRNA药物 重点siRNA药物： ●Patisiran：作为首个获得FDA批准的siRNA药物，用于治疗家族性激素神经病，其上市标志着siRNA技术在药物开发领域的里程碑。 ● Inclisiran：由Novartis开发，已上市用于治疗高胆固醇血症。通过降低LDL胆固醇的siRNA药物，为高胆固醇患者提供了新的治疗选择。 ● AB-729、ARO-HBV：目前均处于临床2期阶段，该药物对于乙型肝炎的治疗具有重要意义。作为RNA干扰抗病毒药物，它代表了siRNA在传染病领域的潜在应用。 ● Mivelsiran：目前处于临床2期阶段，通过降解APP mRNA来治疗阿尔茨海默症，其开发可能为阿尔茨海默症患者带来新的希望。   01   Alnylam Pharmaceuticals： 小核酸龙头企业 Alnylam是RNAi领域的领导者，BIG不止一次报道过这家非凡的小核酸龙头企业（详见：Alnylam: 引领RNAi二十年，目标成为TOP5 Biotech）。 Alnylam在siRNA领域拥有5种商业化产品，融资近40亿美元。 表2： Alnylam研发的上市小核酸药物 1.1 Alnylam主流小核酸平台LNP和GalNAc共轭偶联技术 ①LNP技术：脂质纳米颗粒（LNP）是化学合成的多组分脂质配方（~100 nm），包封siRNA递送到靶组织。在到达目的地的途中，LNP保护siRNA免受无处不在的核酸酶降解。 图2 LNP递送 ②GalNAc共轭偶联技术：修饰后的siRNA与靶向配体偶联，帮助siRNA找到途径进入体内特定细胞或组织。这像是一种“钥匙和锁”系统，其中锁是靶细胞上的受体，钥匙是附着在siRNA上的配体。整体可以分为3部分：GalNAc靶头、连接臂、小核酸分子。GalNAc是ASGPR的高亲和力靶向配体，可以快速被细胞吞入，而ASGPR主要在肝实质细胞表面高表达，实现siRNA的肝靶向。 图3 GalNAc递送 ③C16偶联平台：2’-O-十六烷基（C16）是一种连接到siRNA的短脂质链，其亲脂性得以与细胞膜或膜蛋白相互作用，被多种细胞吸收，包括中枢神经系统（CNS）、肺和眼睛细胞。基于此平台研发的ALN-APP针对淀粉样蛋白前体蛋白，用于治疗阿尔兹海默症（AD）和脑淀粉样血管病（CAA）。 图4 ALN-APP示意图 ④siRNA设计平台：IKARIA可以实现年度给药；Reversir能够迅速并且特异性逆转RNAi的基因沉默效果；GEMINI可以同时靶向两个基因；Rheostat用于可滴定的AAV基因治疗。 图5 Alnylam siRNA设计平台 1.2 Alnylam的Pipeline：四大领域推进、每年2-4个IND Alnylam正在四个治疗领域推进基于RNAi的创新药物深度管线：遗传病，心脏代谢疾病，传染病，中枢神经系统（CNS）和眼部疾病。借助RNAi治疗平台和药物开发方法旨在每年申请2-4个研究性新药(IND)。 表3：Alnylam 临床开发管线 Alnylam正持续扩大管线，进行新适应症的临床试验。最近宣布了Zilebesiran治疗高血压的2期临床试验结果，所有患者在接受Zilebesiran治疗3个月时收缩压均降低，且在第6个月时，收缩压仍维持降低状态，从平均降低≥15mmHg（第3个月）到平均降低≥14mmHg（第6个月），且安全性和耐受性良好。 表4：24小时平均动态收缩压从基线到第3个月或第6个月的变化 表5：不良事件总结 02   Aro Biotherapeutics Aro Biotherapeutics成立于2017年，总部位于费城，Aro专注开发靶向组织的基因药物。 2.1 Centyrin技术可以将siRNA药物精准地传递到特定组织 图6:Centyrin技术平台示意图（图片来源：Aro Biotherapeutics官网） Aro正在开创一类全新的疗法——Centyrin-siRNA偶联物。Centyrins是源自人类蛋白质Tenascin C的小型工程蛋白，存在于各种组织的细胞外基质中。选择Centyrin框架是为了赋予其卓越的稳定性和生物物理特性，这是在细胞内环境中有效递送治疗药物的重要考虑因素。通过在Centyrin框架的选定区域内改变氨基酸，Aro创建了包含数万亿个Centyrin变体的文库，并且可以快速识别与目标抗原具有高特异性和亲和力结合的Centyrin克隆。 Aro绘制了Centyrin框架图以鉴定特定的氨基酸残基。Aro可以化学偶联药物有效载荷，而不影响Centyrin的潜在稳定性、溶解度或抗原结合特性。为了实现细胞特异性药物递送，Aro根据需要以单、双或多特异性形式选择对细胞表面受体具有特异性的Centyrins，以优化偶联药物有效载荷（如寡核苷酸）的结合和内化。 图7 Centyrin框架图 总之，Centyrin是一种小而稳定的蛋白质，能够以很高的特异性和亲和力结合特定细胞表面受体，内化进入细胞内。理论上将Centyrin蛋白和siRNA或者其它寡核苷酸进行偶联，偶联物可以靶向到特定的体内组织，在靶向组织中进行强有力的基因调控，而在非靶向组织里的影响很低，这是传统的肝靶向siRNA疗法很难达到的。 2.2 管线中关注庞贝病siRNA疗法开始首次人体临床研究 图8:Aro Biotherapeutics的管线布局 Aro主要候选药物ABX1100是一种针对庞贝病的Centyrin-siRNA偶联物。 图9:溶酶体糖原积累引起庞贝病的发病机制 庞贝病是一种由GAA基因突变引起的罕见遗传性代谢疾病。GAA基因突变导致人体缺乏酶酸-葡萄糖苷酶，使得糖原无法分解为葡萄糖，积累在溶酶体中，造成全身肌肉和神经细胞的进行性损伤。 ABX1100通过靶向肌肉组织中的糖原合成酶1（Gys1）mRNA，减少有毒糖原积累。ABX1100目前正处于1期临床试验阶段，已获得FDA颁发的孤儿药资格认定和儿科罕见病资格认定。 2023年11月，Aro在B轮融资中筹集了4150万美元，有充足的资金进行ABX1100的首次人体临床试验，预计将在2024年公布初步研究结果。   03   Arrowhead Pharmaceuticals Arrowhead的基本情况在小核酸专题系列中已介绍（详见：Arrowhead小核酸技术平台：RNAi布局紧凑，如箭在弦）。 Arrowhead的TRiM平台也能使siRNA分子精确地传递到特定组织。TRiM平台采用模块化的方法，允许不同的化学成分进行交换，以期达到最好的治疗效果。Arrowhead与武田、安进和GSK等制药巨头合作，共同开发和商业化RNAi疗法。 3.1 Arrowhead的TRiM技术平台：优化药物，实现精准靶向 TRiM平台根据需要为每个候选药物优化4个组件：具有序列特异性稳定化学性质的高效RNAi trigger；高亲和力靶向配体；各种接头和化学成分；增强药代动力学的结构。 图10: TRiM技术平台示意图 3.2 Arrowhead的Pipeline：“20 in 25”发展战略 Arrowhead的产品靶向肝、肺、肌肉，适应症覆盖乙肝、代谢、心血管疾病等领域。Arrowhead制定了一个大胆的目标，在2025年将有20种合作或全资拥有的药物进入临床试验或者上市。目前Arrowhead拥有14款产品管线，3款已进入临床III期。 表6:研发管线 Arrowhead管线方面主要关注Plozasiran药物的临床进展。今年6月4日，Arrowhead宣布了Plozasiran的关键性3期临床试验PALISADE结果，数据显示，在混合型高脂血症成人患者中，plozasiran成功达到了降低甘油三酯的主要终点，第12个月时患者甘油三酯最高可减少99%。 图11: Plozasiran治疗与甘油三酯、胆固醇水平下降相关   04   Dicerna Pharmaceuticals （被诺和诺德收购） Dicerna的基本情况也在小核酸专题系列中介绍（详见：Dicerna小核酸技术平台：诺和诺德创新药版图重要组成）。 4.1 Dicerna的GalXC™和GalXC-Plus™技术平台有效降低RNAi技术的风险 ①GalXC™递送平台 图11: GalXC™递送平台 肝脏靶向的GalXC™递送平台采用皮下给药的方式，和Alnylam、Arrowhead同样，利用GalNAc较高的肝脏选择性，构建结构特异的siRNA。Dicer酶是人体细胞内RNAi天然起始点，Dicerna将GalNAc直接连接到专有Dicer底物短干扰RNA（DsiRNA）分子的延长区域，从而达到多种共轭转递结构，能够灵活、高效地结合目标配体，同时稳定RNAi双链，实现精准靶向。 ②GalXC-Plus™递送平台 图12: GalXC-Plus™递送平台 GalXC-Plus建立在GalXC良好的临床前和临床特性的基础上，包括可选择的核酸结构、各种配体，由此使得RNAi药物能够输送到多种组织，包括中枢神经系统、肌肉、脂肪组织、肿瘤等，为药物化学优化和扩展到新的治疗领域提供了额外的灵活性。  4.2 Dicerna的Pipeline：管线药物表现优异 Dicerna自从被Novo Nordisk收购后整体研发节奏放缓，其中1期临床数量最大，共有5个。 图13：Dicerna上市药物及临床管线数量 表7：Dicerna管线适应症分布 促使诺和诺德收购Dicerna的两个关键管线药物是Rivfloza和Belcesiran。Rivfloza治疗9岁以上儿童和肾功能相对保留的成人的原发性1型高草酸尿（PH1），已经于2023年10月获得FDA批准上市。Belcesiran目前在2期临床试验中，用于治疗α-1抗胰蛋白酶缺乏症（AATD）。在收购之前，Dicerna获得了4.2亿美元的巨额投资资金，被诺和诺德收购后，Dicerna的技术和管线已被整合到诺和诺德的治疗项目中，逐步扩大RNAi治疗的适应症，正向肿瘤方向挺进。   05   DTx Pharma（被诺华收购） DTx Pharma成立于2017年，总部位于圣地亚哥，基于FALCON（脂肪酸配体共轭寡核苷酸）平台开发针对神经系统疾病的siRNA疗法。2023年7月，诺华以5亿美元的预付款收购了DTx，潜在的里程碑式付款使总价值达到10亿美元。 5.1 FALCON平台探索向肝外组织输送药物的潜力 图14:FALCON技术平台 DTx Pharma公司专有的FALCON技术平台，可解决在肝脏以外RNA的治疗药物的递送挑战。FALCON平台利用脂肪酸作为RNA药物的靶向配体，既可以促进细胞摄取，又可以促进寡核苷酸疗法（如siRNA和ASO）的生物分布。  在临床前研究中，FALCON siRNA已证明对周围神经系统（PNS）、骨骼肌、心脏、皮肤和中枢神经系统（CNS）的目标基因有有效和持久的抑制。FALCON siRNA可以通过静脉注射、皮下注射和鞘内注射等途径给药，并且可以低成本生产。 5.2 为诺华带来腓骨肌萎缩症的候选治疗方法 FALCON技术平台可面向中枢神经系统、肌肉、周围神经系统、免疫学和肿瘤学等多个治疗领域。FALCON平台已在眼科临床前研究中获得验证，在视网膜神经元、视网膜色素上皮（RPE）和内皮细胞中具有强力、高效的活性。在RPE中，单次注射后，DTx siRNA基因表达抑制>90%。 图15：研发管线 DTx主要的候选药物DTx-125适应症为1A型腓骨肌萎缩症（CMT1A）。CMT1A是一种影响周围神经的遗传性疾病，DTx-125通过沉默在CMTIA患者中过表达的PMP22基因来发挥作用。在收购前一个月，DTx-1252被FDA授予孤儿药称号，目前正在临床前开发中，并计划在不久的将来开始临床试验。   06   Eleven therapeutics Eleven therapeutics公司成立于2020年，在美国、英国、以色列都有分中心，专注于通过高通量组合化学和人工智能的结合来开发持久的siRNA疗法。2022年，Eleven获得了2200万美元的种子轮资金，其中包括来自比尔和梅琳达-盖茨基金会的400万美元捐款。 图16：TERA平台的构建-测量-学习轮次 Eleven的TERÅ微珠平台包括以下关键步骤： ①构建RNA分子库：将磁珠随机分成不同的合成柱，使用正交化学对RNA和DNA进行偶联。 图18:左列使用 2′-F 尿苷作为治疗性 RNA 寡核苷酸和 DNA 嘧啶核苷酸的第一个碱基，以表示添加 2'F-U 修饰。右列使用 2′-OMe 尿苷作为 RNA 寡核苷和 DNA 嘌呤核苷，以表示 RNA 的 2′-OMe 修饰。 合成后，所有色谱柱中的磁珠被汇集在一起，形成磁珠混合物。 图19：我们有两种类型的珠子的混合物：含有 2'F-尿苷的珠子和 2'-OMe-尿苷的珠子。根据化学修饰，这些珠子中的每一个都用DNA核苷酸标记。 将珠子的混合物进行额外的分裂。同样，在每个合成柱中，使用正交化学通过额外的修饰核苷来扩展治疗性RNA寡核苷酸，并通过在不同的反应中将适当的核苷与DNA条形码偶联来记录修饰的身份。 图20：左列偶联 2′-F-胞苷，右列偶联 2′-OMe-胞苷。同样，DNA吡啶核苷的偶联表示左列，嘌呤DNA核苷的偶联表示右列 经过两次分池循环后，拥有四种类型的珠子。每条合成路径都会为珠子上的RNA寡核苷酸创建独特的化学修饰模式，并在DNA条形码上创建记录珠子合成路径的独特序列。 继续进行分池操作，最终每个微珠都含有具有独特化学模式的治疗性RNA寡核苷酸和记录这些修饰身份的DNA条形码。 ②高通量测量：将磁珠与细胞一起孵育，从磁珠中释放修饰的RNA寡核苷酸和DNA条形码。这些分子进入细胞，RNA寡核苷酸对细胞产生影响。使用高通量测定法测量每个细胞中的这种效应。 ③人工智能学习：对细胞进行测序以揭示DNA条形码的身份，并解码化学修饰的模式，并将其与治疗性RNA寡核苷酸对细胞的影响联系起来。利用来自②收集的大量数据，训练一个深度学习框架来破译RNA修饰的构效关系（SAR），以改进SAR并进一步优化RNA治疗。   07   Switch therapeutics Switch therapeutics成立于2020年，总部设在巴西南部圣弗朗西斯科，专注于开发神经退行性疾病、中枢神经系统疾病的治疗方法。2023年3月，Switch正式启动了令人印象深刻的5200万美元的A轮融资，目前Switch的siRNA项目仍处于临床前阶段。 图21：CASi平台技术 Switch整合核酸纳米技术和RNAi，开发了新型CASi（条件激活siRNA）平台。CASi平台结合了单链的ASO和双链的siRNA特性，开发了新型的CASi分子，在双链的siRNA分子上添加了一个简单而紧凑的传感器。传感器上的单链Toehold部分赋予了其高效的自我递送能力。递送进入细胞后，只有当传感器检测到特定细胞的RNA生物标志物时，才会开启siRNA活性。此时，传感器与siRNA解偶联，siRNA开始进行基因沉默作用。 Switch公司表示，CASi分子，既能高效自我递送，实现细胞特异性靶向，又能更持久地沉默目标基因，有望为中枢神经系统和全身性疾病提供下一代精确RNAi疗法。   08   Wave Life Sciences Wave Life Sciences成立于2012年，总部位于马萨诸塞州的剑桥市，是一家专注于开发RNA靶向疗法的新锐生物技术公司。Wave Life Sciences与GSK有重要的合作伙伴关系，合作包括开发多达8个RNA靶向项目，Wave成功将项目带到了新药临床研究审批（IND）阶段。 8.1 PRISM平台跨多种治疗方式 Wave Life Sciences专有的PRISM平台集成了多种RNA技术，包括RNA干扰、编辑、剪接和反义沉默，采用与GalNAc偶联增强的siRNA结构，利用细胞的自然摄取途径，提高了siRNA治疗的精度和有效性。 PRISM平台的特点包括： 立体纯PN修饰：这种化学修饰能够显著增强siRNA的活性和持久性，例如，Wave公司展示的GalNAc-siRNA在体内研究中，通过PN修饰，在转基因小鼠的肝脏中将特定转录物持续沉默了三个月。 RNA靶向方式：PRISM平台能够实现不同类型的RNA靶向，包括RNA编辑、剪接和沉默，这为治疗不同的遗传性疾病提供了多样化的方法。 创新的结构设计：通过结合新的结构设计，PRISM平台可以优化治疗性寡核苷酸的药理学特性，提高其稳定性和疗效。 8.2 管线积极布局减肥疗法 表8：Wave Life Sciences的多元化、可持续的管线 其中Wave Life Sciences的INHBE项目针对包括肥胖在内的代谢紊乱。利用GalNAc-siRNA技术，INHBE项目已经显示出了良好的临床前结果，包括在动物模型中大幅度减轻体重和减少内脏脂肪。该项目预计将于2025年初进入临床试验阶段。 图22：靶向INHBE的RNAi在小鼠模型中，5周内将动物体重降低16%   写在最后   从以上这8家公司的平台和管线动态介绍中不难看出：siRNA在生物技术行业有着巨大的应用前景。siRNA作为RNAi途径的重要组成部分，通过降解所靶向的mRNA，从而阻止相应蛋白的翻译。基于此研究者设计出能够精准靶向和沉默特定基因的siRNA，使得siRNA拥有了治疗多种疾病的潜力，包括遗传疾病、癌症、病毒感染等。 RNAi技术的进步、siRNA在基因沉默方面的特异性以及几款siRNA药物的成功批准和商业化，推动siRNA治疗领域快速扩张。像Alnylam公司这样的关键参与者证明了siRNA的成药性，为后来的入局者铺平了道路。此外，生物技术公司与制药巨头之间的合作，如Wave Life Sciences和GSK之间的合作，彰显了siRNA疗法的魅力。 参考资料： https://www.labiotech.eu/best-biotech/sirna-companies/ https://eleventx.com/technology/ https://wavelifesciences.com/ https://www.switchthera.com/ https://www.novartis.com.cn/news/nuohuaxuanbushougou-dtx-pharmaqianghuashenjingkexuechanpinxianhe-xrna-jishupingtainengli https://www.arobiotx.com/   BiG 十周年预告   6月26-29日，苏州，将召开BiG十周年庆典，此次会议将首次分为国内和国际篇章，以原创科学和临床需求为出发点，讨论创新技术平台和创新疗法（PROTACT/分子胶、双抗/ADC、siRNA/ASO、CGT、AI制药）的重大进展和发展前景，十年一药曙光现，大浪淘沙始见金！ ▼ 公开会议报名参会  会议门票：审核制(免费)； 含主论坛+分论坛，不含餐；优先biotech/Pharma、临床、院校科学家、投资机构。 咨询BiG 商务合作：Lisa 18662346610（同微信） 参会/会员：Kathy 17621909690（同微信） 媒体合作：静 渝   18335445068（同微信） 秘书长：李 圆   18521514899（同微信） 共建Biomedical创新生态圈！ 如何加入BiG会员？