作者: Wang, Michael ; Volkin, David B ; Zabaleta, Nerea ; Joshi, Sangeeta B ; Kumar, Prashant ; Sanmiguel, Julio ; Hickey, John M ; Kumru, Ozan S ; Vandenberghe, Luk H

Recombinant adeno-associated viruses (rAAVs) are a preferred vector system in clinical gene transfer. A fundamental challenge to formulate and deliver rAAVs as stable and efficacious vaccines is to elucidate interrelationships between the vector's physicochemical properties and biological potency. To this end, we evaluated an rAAV-based coronavirus disease 2019 (COVID-19) vaccine candidate that encodes the Spike antigen (AC3) and is produced by a commercially viable process. First, state-of-the-art analytical techniques were employed to determine key structural attributes of AC3, including primary and higher-order structures, particle size, empty/full capsid ratios, aggregates, and multi-step thermal degradation pathway analysis. Next, several quantitative potency measures for AC3 were implemented, and data were correlated with the physicochemical analyses on thermally stressed and control samples. Results demonstrate links between decreasing AC3 physical stability profiles, in vitro transduction efficiency in a cell-based assay, and, importantly, in vivo immunogenicity in a mouse model. These findings are discussed in the general context of future development of rAAV-based vaccine candidates as well as specifically for the rAAV vaccine application under study.

2004-09-01·Gene Therapy3区 · 医学

Recombinant adeno-associated virus-mediated kallikrein gene therapy reduces hypertension and attenuates its cardiovascular injuries

3区 · 医学

Article

作者: J Li ; C Chen ; L Chao ; C Zhao ; J Chao ; T Wang ; X Xiao ; H Li ; D W Wang

Gene therapy of hypertension requires long-term expression of a therapeutic gene to achieve stable reduction of blood pressure. Human tissue kallikrein (HK) cleaves kininogen to produce a potent vasoactive peptide kinin, which plays an important role in the regulation of the cardiovascular and renal functions. In the present study, we have delivered human kallikrein cDNA with an rAAV vector to explore the potential therapeutic effects of kallikrein on hypertension and related secondary complications. A single tail vein injection of the rAAV-HK vector into the adult spontaneously hypertensive rats resulted in a significant reduction (12.0+/-2.55 mmHg, P<0.05, n=6, ANOVA) of the systolic blood pressure from 2 weeks after vector injection, when compared with the control rAAV-lacZ vector-injected rats. Weekly blood pressure monitoring showed stable hypertension-reduction effect throughout the course of the 20-week experiments. In addition, total urine microalbumin contents decreased as a result of rAAV-HK treatment. Histological analysis of various tissues showed remarkable amelioration of cardiovascular hypertrophy, renal injury and collagen depositions in the rAAV-treated group. Finally, persistent expression of the transgene product HK was confirmed by the enzyme-linked immunosorbent assay and reverse transcription-polymerase chain reaction. We conclude that rAAV-mediated HK delivery rendered a long-term and stable reduction of hypertension and protected against renal injury, cardiac remodeling in the spontaneously hypertensive rat model. Further studies are warranted for the development of a gene therapy strategy for human hypertension.

2003-02-01·Transplantation2区 · 医学

Long-term liver allograft survival induced by combined treatment with rAAV-hCTLA4Ig gene transfer and low-dose FK5061

2区 · 医学

Article

作者: Luk, John M. ; Tsui, Tung-Yu ; Hou, Yunde ; Fan, Sheung-Tat ; Wu, Xiaobing ; Yang, Zhenfan

BACKGROUNDRecombinant adeno-associated virus vector (rAAV) is a promising vehicle for gene delivery, but few reports have documented its application in solid organ transplantation. In a rat orthotopic liver transplantation model, we investigated the efficacy of rAAV-mediated human cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen 4 and immunoglobulin G (hCTLA4Ig) gene transfer to induce long-term allograft survival.METHODSDark Agouti and Lewis rats were used as donors and recipients, respectively, in six experimental groups: (a) syngeneic control, (b) no treatment, (c) rAAV-green fluorescent protein, (d) rAAV-hCTLA4Ig, (e) low-dose FK506 for 7 days, and (f) rAAV-hCTLA4Ig and low-dose FK506 for 7 days.RESULTSThe liver allografts were rejected within 10 days when no treatment was given or rAAV-green fluorescent protein was delivered. rAAV-hCTLA4Ig transduction slightly prolonged the survival time to 11 days. Long-term survival was achieved using the combined treatment of rAAV-hCTLA4Ig and low-dose FK506, whereas grafts were rejected on day 33 in the low-dose FK506 group. A sustained hCTLA4 level in plasma was detected in the combined treatment group from day 5 to day 180. On postoperative day 5, combined treatment significantly decreased the interleukin-2 and interferon-gamma protein levels in the grafts and the number of infiltrating B, T, CD25+, CD4+, CD8+, and NK cells.CONCLUSIONSThis study shows that rAAV-hCTLA4Ig gene transfer combined with low-dose FK506 can achieve long-term liver allograft survival.

项与 rAAV-based gene therapy (Baker IDI Heart & Diabetes Institute/Monash University/University of Melbourne) 相关的新闻（医药）

2023-08-04

·生物制药小编

AAV在悬浮HEK293细胞中的培养表达与优化

病毒载体越来越多地应用于基因治疗领域，重组腺相关病毒 (rAAV) 是基因传递系统中最常用的载体之一。对于rAAV病毒目前更多以HEK293细胞培养表达为主，并且HEK293细胞由贴壁培养转向悬浮培养已成为一个趋势。本文分享一则使用WAVE 25培养悬浮HEK293细胞生产rAAV病毒的应用案例，主要开发了一种培养悬浮HEK293细胞表达AAV病毒多种血清型的工艺，并应用于WAVE 25生物反应器中表现出较好的病毒收获率。具体包括细胞培养、转染、收获的生产过程（图1）。图1：从摇瓶到WAVE 25生物反应器的rAAV5生产过程一细胞培养HEK293T (CRL-3216 ATCC) 细胞悬浮培养在HyClone的HyCell转染培养基中，培养基中添加4 mM L-谷氨酰胺和0.1% Pluronic F-68。细胞在摇瓶 (1-3 L) 中开始培养，以0.4×106个细胞/mL的细胞密度接种到WAVE 25中。WAVE 25波浪式生物反应器拥有3种规格托盘，适配不同体积的反应袋规格，可轻松实现10倍体积放大培养，还拥有精准稳定的温控、高效混合的性能以及操作灵活性，同一托盘可进行单培养或双培养。接种前，用空气充气细胞培养袋，并添加5 L无菌培养基到WAVE 25中，在37 ºC和5 % CO2下平衡过夜。平衡期间的搅拌转速设置为15 rpm。细胞在WAVE 25中扩增培养48 h，转速增加到20 rpm，角度为6°。转染时稀释至1×106个细胞/mL（±0.2×106个细胞/mL），体积至20 L。传统的线速度运动模式，当摇摆到最大或最小设定角度时，瞬间抖动产生的较大剪切力会影响HEK293细胞生长。而WAVE 25独创钟摆式运动模式，当摇摆到最大或最小设定角度时，会紧急刹车，柔和地控制，在不影响混合效果的前提下，减少抖动，降低剪切力对HEK293细胞的损伤（图2）。图2：WAVE 25的运动模式二转染使用三质粒转染系统（Rep/cap：helper：转基因GFP）和转染试剂聚乙烯亚胺 (PEI)（图3），将通过瞬时转染至HEK293T细胞以生产病毒载体。转染参数：细胞密度：1×106个细胞/mLDNA (µg/mL) ：0.75PEI/DNA比值 (µL/µg) ：2转染体积 (占总量的百分比) ：5孵育时间：15 min温度：室温 (RT)DNA比值 (rep/cap:helper:转基因GFP) ：1:1:2图3：通过三质粒转染系统瞬时转染HEK293T细胞产生rAAV病毒三收获转染HEK293T细胞72小时后，使用0.5% Tween裂解细胞进行收获。收获的料液在分析前进行DNA酶处理。用qPCR评估病毒基因组 (VG) /L，用ELISA定量病毒颗粒 (VP) /L分析粗收获材料。通过VG/L和VP/L之间的比值来计算完整衣壳的百分比。研究的目标是在还未纯化的收获料液中达到1013 VG/L和1014 VP/L，完整衣壳的百分比至少10%。四结果为了验证该工艺的重复性，在WAVE 25生物反应器中以10至20 L的规模进行了三个生产批次。以生产rAAV5病毒为例（图4）。实验数据分析表明，在三次的批次生产中，获得了相似的病毒滴度，都达到了大约1013 VG/L和1014 VP/L，完整衣壳的百分比都大于10%（图5）。图4：（左）WAVE 25生物反应器中rAAV5的三次生产过程。接种细胞后48小时，稀释细胞并转染，转染后72小时进行收获。（右）通过显微镜和荧光显微镜观察转染效果。图5：WAVE 25生物反应器中三次rAAV5生产的病毒颗粒、病毒基因组全衣壳百分比。AAV其他血清型的生产使用以上相同工艺生产rAAV血清型2、8和9，在摇瓶、XDR-10和WAVE 25不同规格和生物反应器中进行了生产，都获得了与rAAV5相似的病毒滴度。这也证实了这种工艺表明适用于其他AAV血清型，并具有可转移性（图6）。图6：在不同规模和生物反应器系统中生产rAAV血清型2、5、8和9的VP/mL。五讨论文章案例开发了一种强大的生产rAAV病毒多种血清型的工艺，在WAVE 25生物反应器中经过三次的批次生产，都表现出一致的良好结果。并且将该工艺应用转移到XDR10中也取得了成功。因此，对于较小规模的病毒生产，可以使用WAVE 25生物反应器，体积最高可达25 L。对于更大规模的培养，可以使用Xcellerex XDR系列生物反应器，同等工艺可放大高达2000 L。想了解更多详细内容或者免费申请试用Cytiva生物反应器Demo，欢迎扫码！声明：本文为作者原创首发，严禁私自转发或抄袭，如需转载请联系并注明转载来源，否则将追究法律责任点击“阅读原文”即刻前往Cytiva官网了解更多资讯点亮与，传递信息 ↓ ↓

临床结果临床研究基因疗法

2023-04-23

·BioBAY

研发动态丨方拓生物：AAV基因疗法IND获受理，针对血友病B

近日，据国家药品监督管理局药品审评中心（CDE）官网公示，BioBAY园内企业方拓生物的AAV基因治疗药物“FT-004注射液”的临床试验申请获得受理，适应症为血友病B（内源性FIX活性≤2%）。FT-004注射液是一款新型重组腺相关病毒载体基因治疗药物。非临床数据显示，FT-004注射后可高效转染肝细胞，使其持续、稳定地表达和分泌具有活性的hFIX（人凝血因子9）蛋白，提高凝血功能。同时，基因疗法的持续表达有望实现一次注射、长期有效。方拓生物于2019年成立，致力于研发和生产重组腺相关病毒（rAAV）基因治疗产品，以治疗遗传性疾病以及慢性疾病。其AAV载体构建平台能够基于组织特异性、转导效率、安全性和生产工艺的可扩展性，筛选出最佳AAV衣壳，实现以相对低剂量的AAV载体达到足够高水平的目的基因表达。目前，方拓生物已经建立了多条研发管线，涵盖了罕见病、眼科血液、神经和代谢疾病。▲ 在研管线（图片来源：官网）今年2月16日，方拓生物自主研发的First-in-class基因治疗产品FT-002注射液完成首例患者给药。FT-002注射液是一款rAAV基因治疗药物，拟用于治疗由RPGR基因变异导致的 X连锁视网膜色素变性（XLRP）患者，其利用rAAV递送目的基因使视网膜细胞可以表达有活性的功能蛋白，通过一次注射可以有效延缓患者的疾病进展或者恢复患者的视功能。这也是国内首个针对XLRP患者开展人体试验的rAAV基因治疗药物。（相关阅读：临床进展丨方拓生物：中国首个治疗XLRP的基因疗法！国内完成首例患者给药） ▌文章来源：方拓生物责编：何文正审核：任旭推荐阅读研发动态丨新芽基因：首款DMD药物的Pre-IND申请获得美国FDA受理研发动态丨纽福斯：全球唯一在研疗法！第二款眼科基因治疗药物国内IND获批研发动态丨捷思英达：Aurora A激酶抑制剂VIC-1911与奥希替尼联用的中国临床1b期完成首例受试者给药

临床申请基因疗法临床1期

2023-04-23

·药创客

药进展 | 方拓生物AAV基因治疗药物IND获受理，方拓生物

近日，据国家药品监督管理局药品审评中心（CDE）官网公示，方拓生物的AAV基因治疗药物“FT-004注射液”的临床试验申请获得受理，适应症为血友病B（内源性FIX活性≤2%）。FT-004注射液是一款新型重组腺相关病毒载体基因治疗药物。非临床数据显示，FT-004注射后可高效转染肝细胞，使其持续、稳定地表达和分泌具有活性的hFIX（人凝血因子9）蛋白，提高凝血功能。同时，基因疗法的持续表达有望实现一次注射、长期有效。方拓生物于2019年成立，致力于研发和生产重组腺相关病毒（rAAV）基因治疗产品，以治疗遗传性疾病以及慢性疾病。其AAV载体构建平台能够基于组织特异性、转导效率、安全性和生产工艺的可扩展性，筛选出最佳AAV衣壳，实现以相对低剂量的AAV载体达到足够高水平的目的基因表达。目前，方拓生物已经建立了多条研发管线，涵盖了罕见病、眼科血液、神经和代谢疾病。▲ 在研管线（图片来源：官网）今年2月16日，方拓生物自主研发的First-in-class基因治疗产品FT-002注射液完成首例患者给药。FT-002注射液是一款rAAV基因治疗药物，拟用于治疗由RPGR基因变异导致的 X连锁视网膜色素变性（XLRP）患者，其利用rAAV递送目的基因使视网膜细胞可以表达有活性的功能蛋白，通过一次注射可以有效延缓患者的疾病进展或者恢复患者的视功能。这也是国内首个针对XLRP患者开展人体试验的rAAV基因治疗药物。目前全球已上市的AAV基因疗法有6款。识别微信二维码，添加小编，符合条件者即可申请加入微信群！请注明：姓名+研究方向！声明：本文旨在传递更多信息，版权归原作者所有。原创文章转载均需经过授权并注明来源，如涉及内容、版权或其他问题请时联系小编删除！文章仅代表作者个人观点，并不代表公众号立场。本公众号拥有对此声明的最终解释权！投稿邮箱：yck19876@163.com

基因疗法临床申请

100 项与 rAAV-based gene therapy (Baker IDI Heart & Diabetes Institute/Monash University/University of Melbourne) 相关的药物交易

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研发状态

10 条进展最快的记录,

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适应症	最高研发状态	国家/地区	公司	日期
恶病质	临床前	澳大利亚	Baker Heart & Diabetes Institute	-
恶病质	临床前	澳大利亚	Monash University	-
恶病质	临床前	澳大利亚	University of Melbourne	-