INT-2106

▎亮亮（本文作者） 2025年8月吉利德公司旗下的Kite宣布已达成最终协议，以3.5亿美元收购开发in vivo CAR-T疗法生物技术公司Interius；该公司1款CD20产品获得了澳大利亚的临床批件，进入临床一期； 2025年3 月阿斯利康以总交易额为10亿美元收购EsoBiotec。 该公司发表了1位MM患者的IIT数据，没有产品进入到临床。 这样的收购价格差异的原因是什么？ 正如我之前所言，巨头们已经跑步进入到了体内CAR-T赛道，相信该领域后续的BD/收购事件还会持续发生。如果对这几笔的收购进行分析的话，还是可以从中探寻到一些奥秘。 Interius公司介绍：成立背景与创立：2019年Interius于美国宾夕法尼亚州成立，由Bruce Peacock 和Saar Gill共同创立，该公司是从宾夕法尼亚大学分拆出来的，致力于利用工程慢病毒载体开发体内细胞疗法。融资情况：2021年5月，公司完7600万美元 A 轮融资，由Cormorant和Fairmount共同领投，贝恩资本生命科学、辉瑞风险投资、RA      Capital、Longwood、Logos      Capital、Osage University Partners和Quan Capital跟投。核心管线研发进展：公司的核心管线包括 INT2104 及 INT2106；INT2104  是一种装载CAR20转基因的载体，该基因编码全人源化抗CD20单链抗体片段包装于采用Gen 2.1融合蛋白和CD7结合剂假型化的非复制病毒，从而在体内直接生成效应 CAR-T细胞和 CAR-NK细胞，用于治疗 B 细胞恶性肿瘤；该产品于2024年10月在澳大利亚完成了首例患者给药，成为全球首个进入人体临床试验的体内CAR-T疗法。随后在2025年，该试验扩展到了欧洲，获得了德国监管机构的批准。      INT2106 在患者体内生成靶向 CD19 的 CAR-T/NK 细胞，清除致病性CD19+B 细胞，拟用于严重自身免疫疾病。临床前研究表明，在人源化小鼠模型中可完全清除人B细胞，GLP毒理学数据也支持该候选药物的安全性INT2106针对自免疾病开发，目前处于临床前开发阶段。 在研管线 Interius的平台介绍： 通过上篇的文章《当谈论IN VIVO CAR-T的时候，到底在讨论什么》，我们知道IN VIVO的慢病毒载体改造通常是3个模块：1.去泛嗜性，但保留膜融合能力；2.特异性T细胞靶向及激活；3.病毒载体的稳定性；按照这3个模块及临床前的数据我们来好好拆解一下Interius公司，及其价值到底如何？ 通过上图，我们可以得知:Interiu的慢病毒平台采用模块化设计，主要包括三个部分： 1.Binder：存在于慢病毒表面，用于识别体内的靶细胞，INT2104采用CD7 binder，用于识别CD7+细胞； 2.Fusogen:采用经过改造的去靶向化的VSV-G,其突变位点为I182E/T214N/T352A；有数据表明I182E突变可显著降低LDL-R的结合活性，T214N/T352A突变体可显著提高人血清稳定性； 3.Gargo：INT2104采用自失活的CAR基因，可编码全人源的CD20分子。 平台价值分析： 1.Gen 2.1融合蛋白的合理设计实现了载体的重定向： 为实现遗传药物的体内特异性递送，研究人员利用VSV-G蛋白“结合”与“融合”功能相互独立的特性，基于其与天然受体LDL-R的晶体结构，通过计算机模拟识别出Q10和I182关键位点，并假设引入相反电荷突变（如Q10K或I182E）可破坏LDL-R结合而不影响融合活性（如下图）。 为了验证这一假设，研究者构建了包膜为不同突变型VSV-G的慢病毒载体，并检测其对SupT1细胞的转导能力。为确认这些突变仅影响LDL-R结合，而不破坏融合能力，研究者在部分载体中加入了CD7结合子，并评估其是否能转导CD7阳性SupT1细胞。结果显示，Q10突变并不能有效屏蔽LDL-R结合，而带有I182D或I182E突变的载体表现出低水平的转导活性，表明成功“去靶向”了LDL-R。引入CD7结合蛋白后，可恢复其对CD7+细胞的剂量依赖性转导能力，且转导效率接近WT VSV-G。进一步对比发现，I182E比I182D在高滴度下表现出更低的非特异转导，因而被选为最终的“去靶向”突变位点。（下图） 设计慢病毒载体实现靶向递送 这种结合了I182E、T214N和T352A替换的优化融合蛋白，被公司命名为第二代改进型（Gen 2.1）融合蛋白 2.由Gen 2.1融合蛋白与CD7结合子包膜的载体可实现目标细胞的特异性转导： 为验证优化后的CD7结合蛋白的靶向性，研究人员使用CRISPR技术敲除SupT1细胞中的CD7基因，并对其进行转导实验。结果显示，携带Gen 2.1融合蛋白和CD7结合蛋白的载体无法转导CD7缺失细胞，而野生型VSV-G包膜的载体仍可高效转导，说明该平台的转导依赖于CD7的特异识别（图F）。此外，该平台还展现出良好的通用性。研究人员构建了靶向CD7、CD4和CD8的scFv结合蛋白，并用于转导来自不同供体的PBMCs（外周血单个核细胞，免疫细胞）。结果显示，CD4结合蛋白选择性转导CD4+细胞，CD8结合蛋白转导CD8+细胞，而CD7结合蛋白可同时转导CD4+和CD8+细胞中的CD7+亚群（图G、H） 3.INT2104特异性转导T/NK细胞并产生功能性CAR+细胞： 研究人员基于CD7在T细胞和NK细胞中的特异性表达，开发了携带CD20 CAR的慢病毒载体INT2104，通过Gen 2.1融合蛋白与CD7结合蛋白的协同作用，实现对体内T细胞和NK细胞的精准转导（图A）。 体外实验表明，INT2104可有效转导激活的人PBMCs中的CD4+、CD8+ T细胞及NK细胞（图B），转导效率与传统体外制备的CAR T产品相当；转导后的细胞与CD20阳性B细胞系（Raji、Daudi，图C、D）共培养时，展现出强效的剂量依赖性杀伤活性，且该活性完全依赖CD20抗原的存在，证实了CAR介导的特异性识别（图E） INT2104转导过程中生成具有功能性的CAR+细胞 4.评估INT2104对B细胞的转导风险： 无论CAR T细胞产品通过体外制备还是INT2104体内生成，B细胞非预期转导均会有安全性风险。为评估该风险，研究人员在健康供体分离的原代B细胞、套细胞淋巴瘤（MCL）/滤泡性淋巴瘤（FL）/慢性淋巴细胞白血病（CLL）患者PBMCs及B细胞肿瘤系中测试INT2104转导潜力。结果显示：即使在高感染复数（MOI）下，健康供体原代B细胞也未发生转导（图A）；测试的B细胞系（Nalmö, DB, VL51, JVM13, Recl）仅在超生理水平MOI时检测到微弱阳性（图B），与GFP载体无法转导B细胞系的数据一致；MCL/FL/CLL患者的B细胞样本同样未见转导迹象（图C） 5. INT2104转导的PBMCs可杀伤表达CAR20的B细胞： 进一步研究非预期转导的CAR20+ B细胞是否仍可被INT2104转导的PBMCs杀伤。研究人员采用WT VSV-G转导人B淋巴瘤细胞系DB，使其表达CAR20和GFP或单独的GFP。将四名供体的INT2104转导PBMCs与上述DB细胞系共培养后，评估CAR介导的细胞毒性（图D）。结果显示：INT2104转导PBMCs能剂量依赖性杀伤DB细胞，无论其表达CAR20和GFP或单独GFP（图E）；共培养组存活的DB细胞中CAR+GFP+细胞比例较对照组有升高趋势（图F），表明表达CAR20的B细胞仍可被INT2104生成的CAR20效应细胞杀伤。 评估INT2104转导B细胞的风险 6. 单次INT2104静脉注射可清除小鼠体内的B细胞肿瘤： 为验证体内生成的CAR细胞是否具备真实杀瘤能力，研究团队在携带Raji B细胞瘤的NSG MHC I/II双敲小鼠模型中开展了功能验证。该模型具备极高免疫缺陷性，可稳定支持人PBMC移植且延迟GVHD发生。 研究分阶段进行：先通过注入表达荧光素酶的Raji细胞建立系统性肿瘤负荷，随后注入1 × 10⁷活化PBMC，并在第二天给予单次INT2104静脉输注（低剂量6 ×10⁵或高剂量1×10⁷ TU/只）。结果显示，高剂量INT2104组在治疗后22天内实现肿瘤完全清除，低剂量组在26天内亦达成相同效果，而对照组肿瘤持续进展。流式分析显示，CAR+细胞自第14天起出现在高剂量组外周血中，并与B细胞消失时间高度一致。低剂量组中CAR+细胞检出率较低，但仍观察到肿瘤清除。 活化PBMC即先在体外用磁珠把PBMC激活后再回输小鼠体内。  7. 食蟹猴静脉注射INT2104可实现T细胞与NK细胞的特异性转导： 在人源化小鼠模型中确认了INT2104的有效性后，研究人员进一步在更具临床相关性的非人灵长类模型-食蟹猴中展开了剂量探索性研究。然而，作为临床候选产品的INT2104依赖野生型HIV-1 gag-pol进行病毒包装，而食蟹猴细胞对HIV存在先天免疫屏障（如TRIM5α介导的限制），可能影响转导效率。为解决这一挑战，研究团队采用HIV与SIV序列拼接构建了嵌合型gag-pol（xHIV），从而制备出结构上仅在衣壳编码区有所不同的“INT2104替代载体”。 实验共纳入2只食蟹猴，给予替代载体2×10^9TU（3.5 × 10^8 TU/kg）。结果显示，2只动物均成功产生CAR阳性细胞，且表达在脾脏、肝脏和肺中。CD20+B细胞在第4天观察到>50%的下降。CAR+ T细胞占CD3+群体的，CAR+ NK细胞占比则高达，远高于此前在小鼠中的检测水平。同时，CD4+与CD8+ T细胞均可转导，但以CD8+为主。整个研究过程中，所有动物均表现出良好耐受性，体重、体温、血压等生命体征稳定，未见任何INT2104相关不良反应。 单次静脉注射后第4天进行解剖（图B）以规避适应性免疫干扰。ddPCR结果显示原病毒DNA在脾/肝/骨髓等高CD7+组织富集，免疫荧光证实CAR蛋白仅表达于脾脏CD3+ T细胞（图D）和NKG2A+ NK细胞（图E）以及肝脏CD3+ T细胞（图F），而肝细胞（HNF4α+, 图G）、肺组织及巨噬细胞均无表达（表），同时外周血CD20+ B细胞显著减少53-84%（图6），证明该载体突破物种限制后仍严格靶向T/NK细胞并介导早期抗肿瘤活性，为临床安全性提供关键证据 静脉注射INT2104至食蟹猴体内可导致T细胞和NK细胞的特异性转导 组织学检测第4天脾脏、肝脏和肺中CAR蛋白表达详情 8. 巨噬细胞摄取： 巨噬细胞作为已知能吞噬颗粒物质的清道夫细胞，既往研究报道其可摄取慢病毒。本研究中，无论经处理的动物脾脏或肝脏中。与先前报告一致，通过RNAscope检测在治疗动物肝脏巨噬细胞中观察到慢病毒颗粒摄取迹象。两只载体处理的非人灵长类动物肺部切片中均未检测到表达CAR蛋白的细胞。在载体给药后第4天进行尸检前，两只载体处理动物均未出现载体相关毒性或安全性信号。 平台价值总结： 清晰的VSV-G突变位点知识产权保护，突变位点的数据充分详实。 通过文中红色字体的临床前数据数据，可能提示：CD7的T细胞靶向/激活模块可能对于T细胞的转染及激活效力不足，后续如何持续优化T细胞的转染及激活，可能都是CD7靶向策略公司的需要解决的重大问题。同样，可以发现市场中更多的公司选择TCR-CD3的T细胞靶向/激活模块策略，我想可能也是基于以上这个问题。 平台的安全性得到的初步验证，不管是细胞因子的释放，还是非CD3+ T细胞和非NKG2A+ NK细胞的转染，以及肝、肺及巨噬细胞的摄取等方面都表现IN VIVO CAR-T的安全性在可控范围内。 估值价值的差异： Interius处于临床阶段3.5亿美元被收购，ESO处于临床前阶段10亿美元被收购，为什么处于更后期阶段的Interius的估值反而只有ESO的约1/3呢？考虑到Kite作为自体CAR-T细胞主要玩家，必须要进入到IN VIVO CAR-T赛道，是自研还是完整的收购一个平台技术？ 在上篇《当谈论IN VIVO CAR-T的时候，到底在讨论什么》的文章提到靶向T细胞的策略有VSV-G和其他假型包膜蛋白，因为VSV-G和LDL-R的结合位点非常有限，可突变的氨基酸几乎都已经都保护，所以： 有没一种可能Interius这个估值定价原因就是：仅仅是有着完整知识产权和详实数据的VSV-G突变体的价格，和分子、平台、IND及团队等没有关系？ 《百年孤独》里说“我们趋行在人生这个亘古的旅途，在坎坷中奔跑，在挫折里涅槃，忧愁缠满全身，痛苦飘洒一地。我们累，却无从止歇；我们苦，却无法回避。”，这样的经历，哪个做药人没有体验过呢？成药前的痛苦可能正如《百年孤独》里所描述的这样。让我们祝福所有的做药人! 时间有限，ESO的深度解读，留在下篇，尽情期待。 参考： 1.Targeted in vivo delivery of genetic medicines utilizing an engineered lentiviral vector platform results in CAR T and NK cell generation. 2.同写意 3.津津药道 4.Interius官网 5.劲帆生物 6.医麦客 7.细胞知聊 8.药研共进社 注：开了赞赏，因为作者没有赞赏账号，上篇文章有人说想要打赏作者，这次我开了我的，如果有打赏，我会把打赏费用给到作者。 欢迎加入我的知识星球，可提供专业的免费咨询，同时可以获得Antibody Research生物药随谈回放视频。 公众号已经建立读者实名讨论微信群，可以添加微信（zhuisu2210）后进群，添加时请主动注明姓名、企业、职位。