A new strategy for the preparation of distinct N‐substituted muropeptides is described. Different orthogonally N‐protected disaccharide thioglycosides were designed and synthesized. Among them, compound 4, qualified as a key intermediate, was utilized for further chemical transformations to develop a series of diverse N‐substituted‐glucosaminyl N‐substituted‐muramyl dipeptides (GMDPs). These unique muropeptides were applied for the study of human NOD2 stimulation. Intriguingly, structural modification of the MurNAc residue to N‐non‐substituted muramic acid (MurNH2) in GMDP dramatically impaired NOD2 stimulatory activity, but GMDPs possessing the glucosamine residue with a free amino group retained NOD2 stimulation activity. This work is the first study to illustrate the impact of both N‐substituents of GMDPs on immunostimulatory activities of human NOD2.

2021-04-28·ACS central science1区 · 化学

Bacterial Peptidoglycan Fragments Differentially Regulate Innate Immune Signaling

1区 · 化学

ArticleOA

作者: Wodzanowski, Kimberly A. ; Chen, Shuyuan ; Bersch, Klare L. ; Liu, Shuzhen ; Grimes, Catherine L. ; DeMeester, Kristen E. ; Reinecker, Hans-Christian ; Mashayekh, Siavash ; Zagani, Rachid

The human innate immune system responds to both pathogen and commensal bacteria at the molecular level using bacterial peptidoglycan (PG) recognition elements. Traditionally, synthetic and commercially accessible PG monosaccharide units known as muramyl dipeptide (MDP) and N-glycolyl MDP (ng-MDP) have been used to probe the mechanism of innate immune activation of pattern recognition receptors, such as NOD-like receptors. However, bacterial PG is a dynamic and complex structure, with various chemical modifications and trimming mechanisms that result in the production of disaccharide-containing elements. These molecules pose as attractive targets for immunostimulatory screening; however, studies are limited because of their synthetic accessibility. Inspired by disaccharide-containing compounds produced from the gut microbe Lactobacillus acidophilus, a robust and scalable chemical synthesis of PG-based disaccharide ligands was implemented. Together with a monosaccharide PG library, compounds were screened for their ability to stimulate proinflammatory genes in bone-marrow-derived macrophages. The data reveal distinct gene induction patterns for monosaccharide and disaccharide PG units, suggesting that PG innate immune signaling is more complex than a one activator-one pathway program, as biologically relevant fragments induce transcriptional programs to different degrees. These disaccharide molecules will serve as critical immunostimulatory tools to more precisely define specialized innate immune regulatory mechanisms that distinguish between commensal and pathogenic bacteria residing in the microbiome.

2020-12-01·Biomedical chromatography : BMC

Determination of the immunostimulatory drug—glucosoaminyl‐muramyl‐dipeptide—in human plasma using HPLC–MS/MS and its application to a pharmacokinetic study

Article

作者: Kuznetsov, Roman M. ; Markin, Pavel A. ; Andronova, Tatiana M. ; Appolonova, Svetlana A. ; Moskaleva, Natalia E.

Abstract:

GMDP (glucosoaminyl‐muramyl‐dipeptide), a synthetic analog of the peptidoglycan fragment of the bacterial cell wall, is an active component of the immunomodulatory drug Licopid. But the pharmacokinetic parameters of GMDP in humans after oral administration have not been investigated yet. The present study aimed at developing and validating a sensitive LC–MS/MS method for the analysis of GMDP in human plasma. The sample was prepared by solid‐phase extraction using Strata‐X 33 μm polymeric reversed‐phase 60 mg/3 mL cartridges Phenomenex (Torrance, CA, USA). The analytes were separated using an Acquity UPLC BEN C18 column, 1.7 μm 2.1 × 50 mm Waters (Milford, USA). GMDP and internal standard growth hormone releasing peptide‐2 (pralmorelin) were ionized in positive electrospray ionization mode and detected in multiple reaction monitoring mode. The developed method was validated within a linear range of 50–3000 pg/mL for GMDP. Accuracy for all analytes, given as the deviation between the nominal and measured concentration and assay variability , ranged from 1.61 to 3.02% and from 0.89 to 1.79%, respectively, for both within‐ and between‐run variabilities. The developed and validated HPLC–MS/MS method was successfully used to obtain the plasma pharmacokinetic profiles of GMDP distribution in human plasma.

项与 Glycopin 相关的新闻（医药）

2026-02-02

·循规药正

PIC/S 国际合作（三）

Other Organisations其他合作组织 Without having institutionalised its relations, PIC/S co-operates with an increasing number of other Organisations, which are also active in the field of GMDP. 除建立制度化合作关系的组织外，PIC/S 正与越来越多同样深耕药品生产与流通质量管理规范（GMDP）领域的机构开展合作。 Association of South East Asian Nations (ASEAN) 东南亚国家联盟（东盟，ASEAN） As a number of PIC/S Participating Authorities are also Competent Authorities in the field of GMDP under the Association of South East Asian Nations (ASEAN), PIC/S is regularly meeting representatives of ASEAN Competent Authorities as well as of the ASEAN Secretariat. The third PIC/S-ASEAN Forum took place in the margins of the 2015 Annual Training Seminar in Nusa Dua (Bali, Indonesia) during which PIC/S has proposed to ASEAN to sign a Memorandum of Understanding. In addition to these meetings, one of the ASEAN Participating Authority of PIC/S acts as “Liaison Officer” between PIC/S and ASEAN and regularly reports on the latest meetings of the Pharmaceutical Product Working Group (PPWG) of ASEAN Member States and the Joint Sectoral Committee (JSC) on GMP Inspection of Manufacturers of Medicinal Products (JSC GMP MRA). 因多个PIC/S参与机构同时为东盟框架下药品生产与流通质量管理规范（GMDP）领域的主管部门，PIC/S常年与东盟各主管部门代表及东盟秘书处开展会晤。第三届PIC/S-东盟论坛于2015年在印度尼西亚巴厘岛努沙杜瓦举办的年度培训研讨会期间同期召开，本次论坛上PIC/S向东盟提出签署谅解备忘录的提议。除常规会晤外，一名同时隶属于东盟的PIC/S参与机构代表担任PIC/S与东盟的联络官，定期向PIC/S汇报东盟成员国药品工作组（PPWG）、药品生产企业GMP检查联合部门委员会（JSC GMP MRA）的最新会议情况。 In 2019, an exchange of letters was signed between PIC/S and the ASEAN Pharmaceutical Product Working Group (PPWG) related to co-operation on GMP related matters. A similar exchange of letters with the ASEAN Traditional Medicines Health Supplements Product Working Group (TMHS PWG) is envisioned for the future. 2019 年，PIC/S与东盟药品工作组（PPWG）就GMP相关事宜的合作签署换文；未来，PIC/S还计划与东盟传统药物与健康补充剂工作组（TMHS PWG）签署同类换文。 PIC/S Membership has been defined as one of the essential criteria for the establishment of a Sectoral MRA by ASEAN in the field of GMP inspections. The scope of the ASEAN MRA is, however, limited to medicinal products in finished dosage forms (Modern Medicines); Active Pharmaceutical Ingredients, Biologicals, Radiopharmaceuticals, Investigational Medicinal Products and Traditional Medicines are excluded. To become an ASEAN listed authority under the ASEAN MRA on GMP, a Competent GMP Authority of ASEAN must either be a PIC/S Participating Authority or lodge an official application with the ASEAN Secretariat to be a “Listed Inspection Service” under the ASEAN Sectoral MRA on GMP Inspection. 东盟将PIC/S成员资格列为其GMP检查领域部门互认安排（Sectoral MRA）设立的核心标准之一。但东盟该互认安排的适用范围存在限定，仅覆盖现代药品制剂，活性药物成分（API）、生物制品、放射性药品、临床试验用药品及传统药物均未纳入。东盟成员国的GMP主管部门若想成为东盟GMP互认安排下的备案机构，需满足两项条件之一：一是本身为PIC/S参与机构，二是向东盟秘书处正式提交申请，成为东盟GMP检查部门互认安排下的备案检查机构（Listed Inspection Service）。 Heads of Medicines Agencies of the European Economic Area (EEA HMA) 欧洲经济区药品管理机构负责人联盟（EEA HMA） Under the framework of a letter of agreement between PIC/S and EU/EEA Heads of Medicines Agencies (HMA), which entered into force on 15 August 2016, PIC/S and HMA co-operate in exchanging information in the context of the EEA Joint Audit Programme (JAP) of GMP Inspectorates and the PIC/S Joint Reassessment Programme (JRP) of PAs, which ensures that both new and current PIC/S PAs meet the same requirements. PIC/S and HMA also recognise that in the EEA context the EEA JAP and the PIC/S JRP are deemed equivalent. Audit schedules are also exchanged between the two parties with a view to avoid any duplication and foster mutual acceptance and recognition of audits as well as maintain equivalent auditing tools and programmes, including joint training of auditors. In 2021, PIC/S and EMA continued to shared audit reports as well as information on upcoming (re)assessments. PIC/S与欧盟/欧洲经济区药品管理机构负责人联盟（HMA）签订的协议函于2016年8月15日正式生效，双方在该协议函框架下，围绕欧洲经济区GMP检查机构联合审计计划（JAP）与PIC/S参与机构联合复评计划（JRP）开展信息互通合作。其中PIC/S联合复评计划的核心作用，是确保新加入及现有PIC/S参与机构均满足统一的准入与存续要求。PIC/S与HMA双方一致认可，在欧洲经济区框架内，欧洲经济区联合审计计划与PIC/S联合复评计划具备等效性。双方亦会互通审计计划表，此举旨在避免审计工作重复开展，推动审计结果的相互认可与接受，同时维持审计工具和审计计划的等效性，相关合作还包括为审计人员开展联合培训。2021年，PIC/S与欧洲药品管理局（EMA）进一步深化协作，持续互通审计报告，以及各项即将开展的（复）评估工作相关信息。 The International Council for Harmonisation of Technical Requirements for Pharmaceuticals for Human Use (ICH) 人用药品注册技术要求国际协调会（ICH） Relations with ICH date back to the 1990s. In 1996, PIC/S decided at a conference in Canberra (Australia) to develop a draft Guide on GMP for APIs. In 1998, PIC/S agreed to hand over the draft API Guide to what was called at the time the “International Conference on Harmonisation (ICH) of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use” in order to enable industry to become involved in the drafting process. The “Good Manufacturing Practice Guide for Active Pharmaceutical Ingredients” (ICH Q7A) was finalised in November 2000 after extensive public consultation. Most countries have adopted the ICH document as a GMP requirement for APIs. ICH Q7A has become Part II of the PIC/S GMP Guide. PIC/S与ICH的合作渊源可追溯至20世纪90年代。1996年，PIC/S在澳大利亚堪培拉召开的会议上决议编制原料药GMP指南草案；1998年，为推动制药行业参与指南起草工作，PIC/S同意将该草案移交彼时的人用药品注册技术要求国际协调会议（ICH）。经广泛公开征询意见后，《活性药物成分良好生产规范指南》（ICH Q7A）于2000年11月正式定稿，目前多数国家已将该文件列为原料药GMP的法定执行要求，ICH Q7A也被纳入PIC/S GMP指南，成为其第二部分内容。 Between 2010 and 2013, PIC/S developed a document on Questions and Answers (Q&A) relating to the implementation of Part II (ICH Q7) of the PIC/S GMP Guide. In 2013, in order to avoid duplication with a similar initiative undertaken by ICH, PIC/S agreed to hand over its Q&A document to ICH, provided ICH acknowledged the work carried out by PIC/S. PIC/S participated in the subsequent meetings of the ICH Working Group on the Q7 Q&A. The ICH Q7 Q&A has since been published. 2010年至2013年，PIC/S编制完成《PIC/S GMP指南第二部分（ICH Q7）实施问答文件》。2013年，为避免与ICH同期开展的同类工作产生重叠，PIC/S 在ICH认可其已开展工作成果的前提下，同意将该问答文件移交ICH，并后续参与了ICH Q7实施问答工作组的相关会议。目前，ICH版Q7实施问答文件已正式发布。 PIC/S is an Observer in ICH since 2017. Following a proposal by the ICH Management Committee (MC) for more routine engagement between PIC/S and ICH, a pilot was launched on 1 May 2020 covering co-operation in ICH Q9 (Quality Risk Management) and Q12 (Pharmaceutical Product Lifecycle Management). Training activities relating to ICH Q9 and Q12 are under development by PIC/S thanks to funding by ICH. PIC/S自2017年起成为ICH的观察员机构。基于ICH管理委员会（MC）提出的深化PIC/S与ICH常态化协作的提议，双方于2020年5月1日启动试点合作，合作范围聚焦于ICH Q9（质量风险管理）与ICH Q12（药品全生命周期管理）两大领域。依托ICH提供的资金支持，PIC/S目前正推进 ICH Q9、Q12相关的培训活动开发工作。 International Coalition of Medicines Regulatory Authorities (ICMRA) 国际药品监管机构联盟（ICMRA） The International Coalition of Medicines Regulatory Authorities (ICMRA) is an informal coalition of national and regional Medicines Regulatory Authorities (MRAs). 国际药品监管机构联盟（ICMRA）是由各国及地区药品监管机构（MRA）组成的非正式联盟组织。 The objective of ICMRA is for Heads of Medicines Agencies to have a common, strategic vision on issues of common interest such as on capacity building, information sharing, generic medicine, etc. GMP equivalence and the better sharing of GMP-related information are essential for ICMRA, which considers PIC/S membership as the main reference. Non-PIC/S Members of ICMRA have been encouraged to join PIC/S. ICMRA的核心宗旨，是推动各药品管理机构负责人在能力建设、信息共享、仿制药管理等共同关注的议题上形成统一的战略共识。其中，GMP 等效性认定及GMP相关信息的高效共享是ICMRA的核心工作方向，该组织将PIC/S成员资格作为相关工作的主要参考依据，同时鼓励其非PIC/S成员机构加入PIC/S。 PIC/S supports the ICMRA’s objectives, in particular the better use and sharing of resources globally. Close co-operation is in the mutual benefit of both organisations, in particular in the field of GMP. PIC/S regularly exchanges with ICMRA on regulatory collaboration. PIC/S始终支持ICMRA的各项宗旨，尤其认同并助力其推动全球监管资源的高效利用与共享。双方开展的紧密合作具备互利共赢的价值，在GMP领域的协作尤为深入；PIC/S与ICMRA也会就监管协作相关事宜保持常态化的信息互通。 As from 2016, this included PIC/S representation in the ICMRA “GMP reliance framework on equivalency” and taking over the ICMRA GMP project to adapt the ICMRA draft Guidance on Inspection Reliance for PIC/S purpose. The aim of this guidance is to maximise inspection resources by relying on other trusted Regulatory Authorities for the GMP compliance of overseas facilities. The PIC/S network provides a strong foundation for this process by ensuring the capability of PAs via the PIC/S accession process and Joint Reassessment Programme. The PIC/S Guidance on Inspection Reliance (PI 048-1) was adopted by the Committee in April 2018 with an entry into force on 1 June 2018. 2016年起，双方的协作内容进一步拓展，包括PIC/S派代表参与 ICMRA “基于等效性的GMP互认框架”相关工作，以及承接ICMRA的GMP专项项目，对 ICMRA《检查互认指南草案》进行适配修订，使其满足PIC/S的应用需求。该指南的制定初衷，是通过采信其他可信监管机构对境外生产场地的GMP合规性检查结果，实现检查资源的最大化利用。PIC/S的网络体系为这一工作的推进奠定了坚实基础——通过成员准入流程与联合复评计划（JRP），保障了各参与机构（PA）的专业能力达标。PIC/S《检查互认指南》（PI 048-1）于2018年4月经委员会审议通过，同年6月1日正式生效。 In 2021, exchanges focused on the interaction between the ICMRA Working Group on distant assessment and the PIC/S Working Group on Distant Assessment with the aim to avoid a duplication of efforts. Since 2022, collaboration has started on the establishment of a Pharmaceutical Quality Knowledge Management System (PQ KMS), which could help to better inform both public and industry stakeholders on ICMRA’s efforts to improve global regulatory harmonisation and alignment. 2021年，双方的交流重点聚焦于ICMRA远程评估工作组与PIC/S远程评估工作组的协作衔接，核心目的是避免工作重叠。2022年起，PIC/S与ICMRA启动“药品质量知识管理体系（PQ KMS）”搭建的合作工作，该体系的建成将助力向公众及制药行业相关利益方，更清晰地传递ICMRA在推动全球监管协调统一方面的工作成果。 Organisation for Economic Co-operation and Development (OECD) 经济合作与发展组织（OECD） In 2015, the Organisation for Economic Co-operation and Development (OECD) invited PIC/S to participate in a survey on international regulatory co-operation, in which some PIC/S accomplishments, in particular in the field of training, were highlighted. PIC/S has also been invited to attend OECD meetings on international regulatory co-operation and further contribute to surveys in this field. 2015年，经济合作与发展组织（OECD）邀请PIC/S参与国际监管协作相关调研，PIC/S在该调研中展现了多项工作成果，检查员培训领域的成果尤为突出。此后，PIC/S还受邀出席经合组织举办的国际监管协作相关会议，并持续为该领域的调研工作提供专业支持。 Professional Organisations & Industry 专业组织与制药行业 Since the manufacturer is at the heart of the GMP process, it is essential for PIC/S to maintain good relations with industry and professional organisations, notably those more active in the field of regulation, guidance documents and training. The support of industry associations and professional organisations to the goals of PIC/S is a prerequisite for the latter’s successful expansion. 制药企业是GMP实施的核心主体，因此PIC/S与行业界及专业组织维持良好合作关系至关重要，尤其是在法规制定、指导文件编制及培训领域较为活跃的机构。行业协会与专业组织对PIC/S发展目标的支持，是PIC/S实现全球化拓展的重要前提。 As a matter of fact, industry is generally favourable to PIC/S’ expansion: the harmonisation of GMP facilitates trade and also means fewer inspections for manufacturers. The latter are increasingly worried by the multiplication and duplication of inspections, which means not only more fees but also more staff immobilised and possibly a lower-than-usual production output during these inspections. 事实上，制药行业整体对PIC/S的发展拓展持积极支持态度：GMP标准的全球协调统一不仅为药品贸易提供便利，也能减少制药企业接受的检查频次。当前，企业对于检查工作的增多与重复问题的担忧日益加剧——此类情况不仅会增加企业的检查费用，还会占用大量工作人员精力，甚至可能导致企业在检查期间的生产效率低于正常水平。 PIC/S mainly entertains privileged relations with three professional associations: the International Society for Pharmaceutical Engineering (ISPE); the Parenteral Drug Association (PDA) and the European Compliance Academy (ECA) These organisations provide valuable comments on draft PIC/S guidance documents and open their training courses to Regulatory Authorities, in particular to those of PIC/S. ECA, ISPE and PDA are sharing their technical guidelines with PIC/S Inspectors, which are much appreciated; and ISPE and PDA actively provide speakers to PIC/S Seminars. PDA has also worked with PIC/S in the field of training, in particular on APIs (see International Training Programme on APIs) and all three organisations have expressed interested in supporting the PIC/S Inspectorates’ Academy (PIA). PIC/S主要与三家专业协会建立了深度合作关系，分别为：国际制药工程协会（ISPE）、国际注射剂药品协会（PDA，原肠外药物协会）、欧洲合规研究院（ECA）。上述机构会为PIC/S指导文件草案提供专业且具有参考价值的意见，并向各药品监管机构开放旗下培训课程，PIC/S 成员机构为重点开放对象。欧洲合规研究院、国际制药工程协会及国际注射剂药品协会还会与PIC/S检查员共享其技术指南，该举措获得了检查员的高度认可；同时，国际制药工程协会与国际注射剂药品协会会积极为PIC/S研讨会指派行业专家担任讲师。其中，国际注射剂药品协会还与PIC/S在培训领域开展联合合作，原料药（API）领域为核心合作方向（详见《原料药国际培训项目》）。目前，三家机构均已表达支持PIC/S检查员学院（PIA）建设与发展的意愿。 PIC/S maintains relations with other industry and professional associations such as: PIC/S 亦与其他行业及专业协会保持着合作往来，包括： APIC (Active Pharmaceutical Ingredients Committee) 活性药物成分委员会（原料药委员会） ASTM International (American Society for Testing and Materials) 美国材料与试验协会 DIA (Drugs Information Association) 药物信息协会 EFPIA (European Federation of Pharmaceutical Industries and Associations) 欧洲制药工业协会联合会 Global Self-Care Federation 全球自我保健联盟 IFPMA (International Federation of Pharmaceutical Manufacturers Associations) 国际制药厂商协会联合会 ISCT (International Society for Cell & Gen Therapy) 国际细胞与基因治疗学会 RAPS (Regulatory Affairs Professionals Society) 国际药品监管事务协会 SQA (Society of Quality Assurance) 质量保证协会 VICH (International Cooperation on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Veterinary Medicinal Products) 兽用药品注册技术要求国际协调会

放射疗法

2025-12-17

·制药经理人

EMA、PIC/S发布：GMP附录3 放射性药品修订概念稿！

2025年12月16日，EMA与PIC/S联合发布概念文件，宣布启动《药品生产质量管理规范（GMP）指南》附录3《放射性药品的生产》的修订工作。作为适用于欧盟/欧洲经济区（EU/EEA）成员国及PIC/S参与机构的核心合规文件，现行附录3自2008年发布以来已沿用十余年，此次修订将全面适配监管更新、技术发展与行业实践需求，为放射性药品生产与质量控制提供更精准的指导。一、修订背景现行附录3的修订需求源于多重因素的叠加。一方面，自2008年以来，GMP指南、ICH质量系列指南、EMA放射性药品专项指南及欧盟相关法规已历经多次更新，引入了质量风险管理（Q9）、药品质量体系（Q10）、生命周期管理（Q12）等新概念，而这些内容在旧版附件中尚未体现。另一方面，放射性药品领域的技术革新显著，分析检测能力提升、辐射安全设备升级等新发展，需要在合规要求中得到响应。更为关键的是，EMA和PIC/S在多年GMP检查中发现，旧版附件部分条款存在解读不一致的问题，导致行业合规执行存在差异，影响了监管的统一性。此外，临床试验法规的更新及 investigational medicinal products的GMP要求细化，也需要附录3同步调整，以实现全链条合规衔接。二、核心更新方向此次修订围绕“补空白、清歧义、促统一、适配新”四大目标，明确了十大关键更新领域，全面覆盖放射性药品生产与监管的核心环节：在合规对齐方面，修订后的附件将同步最新GMP各章节及附件（如第1章、第4章、附件1、附件11等）的要求，并深度衔接ICH Q9、Q10、Q12等质量指南，同时参考EMA《放射性药品指南》《基于单克隆抗体的放射性药品指南》等专项文件，确保与现有监管体系无缝衔接。在关键要求澄清上，重点解决行业痛点：明确辐射防护与产品短保质期场景下的GMP要求应用边界；细化多步骤放行流程，厘清超标（OOS）及偏差评估对批次放行的影响；完善放射性药品进口管理要求，规范流通环节及产品召回流程。在创新与实践适配层面，将结合近十五年的行业经验，更新起始物料、活性物质及成品的GMP要求，支持新型放射性药品的生产技术创新与质量控制方法优化，同时考虑分析技术与辐射安全设备的最新发展成果。此外，修订还将完善术语表定义，并引用国际原子能机构（IAEA）等外部监管机构的辐射防护措施要求，增强合规指引的全面性与权威性。三、修订时间表与实施影响根据概念文件披露的时间表，此次修订将遵循公开透明的推进流程：2025年12月启动公众咨询，意见提交截止至2026年2月；2027年3月形成修订初稿供内部讨论，同年9月面向利益相关方二次咨询；最终版本预计于2028年11月获得EMA GMP/GDP检查员工作组与PIC/S委员会的正式认可。从影响来看，此次修订将为行业与监管机构带来双重利好：对企业而言，明确的合规指引将减少解读分歧，降低合规成本，同时为技术创新预留空间；对监管机构来说，统一的标准将提升检查一致性与效率，强化放射性药品全生命周期的质量安全管控。EMA与PIC/S明确表示，修订不会给行业带来额外的资源或成本负担，仅聚焦现有合规要求的优化与完善。四、多方参与此次修订由EMA GMP/GDP检查员工作组与PIC/S GMDP协调小组联合组建起草小组推进，工作主要通过电子邮件与电话会议开展，并将充分征求各方意见——包括EU/EEA成员国国家主管部门、PIC/S参与机构、制药行业及欧洲制药工业协会联合会（EFPIA）、国际制药工程学会（ISPE）、欧洲核医学协会（EANM）等专业组织。公众咨询阶段的意见收集将进一步确保修订内容贴合行业实际需求，实现合规要求与实践可行性的平衡。作为放射性药品领域的核心合规文件，附录3的修订不仅是对十余年行业发展的总结与适配，更是EMA与PIC/S推动全球药品监管协同、保障放射性药品质量安全与创新发展的重要举措。随着修订工作的推进，放射性药品行业将迎来更清晰、统一、适配性更强的合规框架，为临床用药安全与行业高质量发展奠定坚实基础。

2025-10-11

·抗体圈

Science重磅——首个大规模人类造血单细胞蛋白质组图谱问世

2025年8月，Science在线发表了哥本哈根大学生物技术研究创新中心联合慕尼黑工业大学生命科学学院等团队的重磅研究。这项研究首次将单细胞蛋白质组学与转录组学深度整合，构建了迄今最精细的人类早期造血细胞分化动态图谱。该工作不仅定位了关键祖细胞分叉点，更揭示了蛋白质与基因表达在分化过程中的解耦现象，为理解血液发育异常提供了全新视角。一、研究背景血细胞生成（造血）是生命科学的核心研究领域。传统认知将造血干细胞（HSC）视为所有血细胞的共同起源，其通过逐级分化为多谱系祖细胞，最终形成红细胞、免疫细胞等功能各异的成熟血细胞。然而，人类早期胚胎造血过程仍存在三大谜团： 1.起源之争：最早定型的造血祖细胞如何从主动脉-性腺-中肾区（AGM）产生； 2.路径模糊：淋系（淋巴细胞）与髓系（粒细胞/巨噬细胞）的分化轨迹是否存在更早的命运分叉点； 3.调控盲区：转录水平（mRNA）与翻译后水平（蛋白质）的动态协调机制尚未阐明。过往研究主要依赖单细胞转录组（scRNA-seq），但蛋白表达与mRNA丰度常存在显著差异。例如，关键转录因子可能在mRNA层面快速降解，而其蛋白产物仍在发挥调控作用。这种“分子时差效应”导致基于RNA的轨迹预测可能失真。尤其对于低丰度调控蛋白，传统流式细胞术因抗体通量限制难以全局捕获。二、研究思路与实验设计第一步通过双策略分选CD34+造血干祖细胞——富集策略（HSC/MPP/LMPP等经典亚群）与随机策略（无标记捕获异质性），结合实时质谱采集技术（RETICLE）和384孔板体系，在单细胞层面定量2900+种蛋白，数据缺失率控制在68%。第二步利用自研算法SCeptre校正批次效应，蛋白质UMAP图谱重现造血层级结构时发现：CMP群体实际包含嗜碱/嗜酸/肥大祖细胞（BaEoMa）亚群；部分低表达BAH-1的“MEP”实为GMP混杂细胞，经CD71/BAH-1双标记验证后可精准区分；经典标志物Endomucin（CD164）对长期造血干细胞富集效果有限。第三步整合CITE-seq转录组数据（9086个细胞），采用GLUE算法构建联合潜在空间：成功将转录组定义的“pre-mDC”状态映射至蛋白质MDP簇；早期祖细胞（Progenitor 1/2）细化为EMP（红系-巨核系祖细胞）和LMPP分支；CellRank轨迹分析表明多组学整合显著提升pre-pDC/pre-mDC等稀有分支的解析精度。第四步功能验证：基于蛋白动态筛选HSC维持关键因子（SOD1、TALDO1、H1F0），CRISPR/Cas9敲除证实TALDO1/H1F0缺失导致长期培养起始细胞（LTC-IC）频率下降3-6倍，SOD1/SOD2敲除则几乎完全阻断集落形成，揭示人HSPCs对氧化应激的高度敏感性（显著区别于小鼠模型）；进一步开发scProtVelo算法，通过建模mRNA-蛋白时滞效应成功预测红系和pre-mDC分化方向（AUC>0.8），克服了传统RNA velocity在造血轨迹中的回溯误差问题。三、研究主要结果 1、FACS分离人HSPC的单细胞蛋白质组学数据集研究者通过FACS分选6名健康供体的CD34⁺骨髓HSPC，结合基于384孔板的scp-MS技术（采用TMTpro多重标记、RETICLE质谱采集及SCeptre计算流程），构建了涵盖2500个细胞、定量2900余种蛋白质的数据集（图1B-C）。尽管存在68%的平均缺失值（与既往研究相当），UMAP分析显示蛋白质丰度数据成功重现HSPC分化层级结构（HSC→MPP→LMPP→GMP/MEP等）（图1D）。通过整合FACS参数进行回顾性计算分群（图1F），并结合CD71/CD110标志物细化传统MEP注释，区分出真实的巨核-红系祖细胞（EMP）与误纳入的粒系倾向细胞（图1H-J），揭示了低维表面标志组合在解析细胞异质性上的局限性。图1 FACS分离的人HSPC的单细胞蛋白质组学数据集 2、无监督聚类揭示了不同的细胞分化阶段和功能性蛋白质协方差基于scp-MS数据的无监督聚类识别出11个细胞簇（如将MEP更名为EMP），其命名依据FACS信息及蛋白表达模式（图2A）。通过伪批量（pseudobulk）蛋白表达变化与已发表批量蛋白质组数据的对比，验证了技术可靠性（图2B-C）。大部分簇在FACS门内定位明确，但早期祖细胞簇（Progenitor 1/2）及LMPP跨越多个FACS门，体现了分化连续性（图2D）。差异蛋白分析鉴定出： HSC：染色质结构蛋白H1F0高表达； BaEoMa：嗜酸颗粒蛋白PRG2/CLC特异性富集； GMDP：中性粒分化相关蛋白（AZU1/ELANE/MPO）显著升高（图2E-F）。蛋白质共变模块分析进一步揭示HSC中糖酵解通路与氧化应激响应蛋白的协同表达（图2G-H），凸显蛋白质功能网络的层次性。图2 无监督聚类揭示了不同的细胞分化阶段和功能性蛋白质协方差 3、人HSPC区室转录组学和蛋白质组学的单细胞多组学分析研究者额外生成了9086个人类HSPC的CITE-seq（转录组+表面蛋白）数据集（图3A），并通过totalVI模型进行批次校正与整合。利用GLUE（一种基于变分自编码器的工具）整合scp-MS（蛋白质）和CITE-seq（mRNA）数据集，构建了联合潜在空间（图3B）。该整合成功地将“mRNA细胞”的注释标签迁移至“蛋白质细胞”，轮廓系数为0.03（图3C）。整合后的UMAP显示更精细的细胞状态聚类（图3E），早期祖细胞簇（Progenitor 1和2）被细分为EMP谱系和LMPP谱系。关键差异包括：在LMPP及其后代中CD45RA（FACS）及GAPDH、LCP1等蛋白更高，而EMP中SOD2和ALDH1A1蛋白丰度更高（图3G）；在MDP簇内，基于LYZ等蛋白差异可区分出前体树突细胞（pre-mDC）（图3H）。这证实了多组学整合可精炼scp-MS数据的细胞注释。图3 人HSPC区室转录组学和蛋白质组学的单细胞多组学分析 4、联合潜在空间的轨迹分析概括了HSPC的分化在GLUE生成的联合潜在空间上，研究者应用CellRank进行轨迹推断（图4A）。使用伪时间（pseudotime）核构建k-NN图并计算状态转移矩阵，所得终末状态及细胞命运概率准确重现了预期的HSPC分化轨迹（图4A）。与单独基于CITE-seq或scp-MS的轨迹分析相比（图4B,C），联合空间模型显著改善了对谱系分支（尤其是CLP、pre-pDC、MDP、pre-mDC）的分辨率（正确分配率从RNA的86%和蛋白的65%提升至91%和95%）。基于此，研究者建立了一种相关分析方法：通过计算基因/蛋白表达与伪时间（反映HSC静息-分化进程）或特定谱系命运概率的相关性，实现在单细胞水平比较mRNA与蛋白质的动态变化（图4D），避免了传统聚类分析的局限。在mRNA层面验证了该方法的有效性（图4E-G），揭示了HSC静息相关基因（如ATF3、KLF2）和分化相关基因（如CDK6、SOX4），并通过预排序基因集富集分析（GSEA）识别出相关生物学通路（图4H）。图4 联合潜在空间的轨迹分析概括了HSPC分化 5、蛋白质水平信息揭示了造血干细胞静止和分化的更多见解通过比较早期HSC分化中蛋白质与mRNA的相关性（整体相关性r<0.25），研究发现蛋白质数据特异性揭示了： HSC静息维持：糖酵解通路蛋白富集（mRNA未检测到），且抗氧化蛋白（SOD1/2、PRDX1、TALDO1）在分化早期显著下降；染色质调控：HSC高丰度染色质结构蛋白（H1F0、HP1BP3等）的分化依赖性下降趋势在蛋白质层面更显著；功能验证：CRISPR敲除实验证实TALDO1/H1F0缺失显著降低HSC长期再生能力（LTC-IC频率降至1/42和1/80），而SOD1/2敲除几乎完全破坏集落形成能力（LTC-IC 1/153），凸显这些蛋白在人HSC中的关键作用及人鼠差异。图5 造血干细胞的静止和分化在蛋白质水平上有不同的见解 6、基于蛋白质组学的轨迹分析揭示了蛋白质水平特异性功能协变在谱系分化轨迹分析中，红系分化（Late Eryth）的mRNA-蛋白一致性较高（r≈0.7），但GMDP等髓系谱系存在显著差异： B2M蛋白在GMDP中丰度升高而mRNA降低，与MHC I伴侣分子HLA-A/B的蛋白变化协同，提示翻译后调控；对226个高变异蛋白的分析显示，mRNA-蛋白一致性低的蛋白（如ALDOA-GPI、MYL12B-MYH9）倾向于与同一KEGG通路内的功能相关蛋白共变，形成替代性调控网络；与乳腺癌细胞系多组学数据比较（r=0.35）证实此模式具有跨系统保守性。图6 蛋白质水平轨迹分析揭示了蛋白质水平特异性功能协变 7、scProtVelo在分化过程中对翻译动态进行建模受RNA Velocity（利用未剪接/已剪接mRNA时间差推断转录动力学）启发，研究者开发了 scProtVelo（图7A）。该模型利用分化过程中mRNA与对应蛋白丰度变化的时间延迟，通过隐变量建模推断基因特异的转录、翻译、mRNA降解及蛋白降解速率。在红系和前体树突细胞（pre-mDC）分化轨迹亚群中验证： scProtVelo推断的基因激活/抑制状态与早期/晚期细胞差异表达结果高度吻合（图7B）。模型预测的基因动态显著优于随机排列结果（图7C）。对Top 100基因的推断蛋白速度（protein velocity）进行聚合，可准确预测细胞沿分化轨迹的前进方向（图7D）。这表明单细胞多组学数据可成功捕获转录-翻译的时间延迟信息，scProtVelo为研究分化过程中的翻译动力学提供了有效工具。图7 scProtVelo对细胞分化中的翻译动力学进行建模四、总结这项研究不仅建立了首个大规模人类造血单细胞蛋白质组图谱，更通过多组学整合揭示了蛋白质层的生物学新机制。H1F0（染色质压缩）、SOD/TALDO1（抗氧化）等蛋白在HSC静息态高表达，其动态变化在转录层未被捕捉；红系分化中ALDH1A1蛋白持续高表达，GMDP路径中B2M-HLA复合体协同上调，体现翻译层级协调；SCeptre流程实现无需预设的批次校正；scProtVelo首次实现单细胞翻译动力学的定量推断。研究的临床意义深远：发现的人特异性靶点（如SOD1）为骨髓衰竭性疾病提供了新干预思路；多组学整合框架可推广至肿瘤微环境、器官发育等研究领域。未来需突破scp-MS通量限制，并在动态时间序列中验证scProtVelo的预测能力。参考文献 Furtwängler B, Üresin N, Richter S, Schuster MB, Barmpouri D, Holze H, Wenzel A, Grønbæk K, Theilgaard-Mönch K, Theis FJ, Schoof EM, Porse BT. Mapping early human blood cell differentiation using single-cell proteomics and transcriptomics. Science. 2025 Aug 21:eadr8785.

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适应症	国家/地区	公司	日期
结核	俄罗斯	-	1998-11-17
呼吸系统疾病	俄罗斯	-	1998-01-30
疱疹病毒感染	俄罗斯	Teva Pharmaceutical Industries Ltd.	1996-09-01
肺部疾病	俄罗斯	Teva Pharmaceutical Industries Ltd.	1996-09-01
银屑病	俄罗斯	Teva Pharmaceutical Industries Ltd.	1996-09-01
肺结核	俄罗斯	Teva Pharmaceutical Industries Ltd.	1996-09-01
手术伤口感染	俄罗斯	Teva Pharmaceutical Industries Ltd.	1996-09-01

未上市

10 条进展最快的记录,

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适应症	最高研发状态	国家/地区	公司	日期
中性粒细胞减少	临床2期	澳大利亚	-	-
中性粒细胞减少	临床2期	俄罗斯	-	-
脓皮症	临床2期	俄罗斯	-	-
过敏反应	临床前	俄罗斯	Peoples' Friendship University of Russia	2019-02-01
哮喘	临床前	俄罗斯	Peoples' Friendship University of Russia	2019-02-01
鼻炎	临床前	俄罗斯	Peoples' Friendship University of Russia	2019-02-01