Optimal conditions for determination of bacitracin, bacitracin zinc and bacitracin methylene disalicylate in animal feed by ultra-performance liquid tandem mass spectrometry

Article

作者: Xu, Feng ; Yu, Jiayong ; Wu, Yinliang

An integrated method combining solid-phase extraction (SPE) with ultra-performance liquid tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) has been established for quantifying bacitracin (BTC), bacitracin zinc (BZ), and bacitracin methylene disalicylate (BMD) in animal feed. A pretreatment procedure that can effectively, quickly, and simultaneously extract and purify BTC, BZ, or BMD in feed was developed for the first time through the optimization of extraction and SPE conditions. After extraction with acetonitrile + methanol + 15 % ammonia solution (1:1:1, v:v:v) and dilution with EDTA solution (1.5 mmol/L, pH 7.0), a SPE procedure was carried out with C₁₈ cartridge. Following LC-MS/MS analysis utilized a Waters Peptide BEH C₁₈ column with a gradient elution of 0.1 % formic acid in water/acetonitrile with. This method demonstrated a strong linear correlation (R² > 0.9980) across a 0.01-1.0 mg/L concentration span, based on a matrix-matched standard curve. Satisfactory recoveries of BTC (bacitracin A, B₁, B₂, and B₃), BZ, and BMD in different feeds were obtained from 80.7 % to 108.4 %, with relative standard deviations below 15.7 %. Low limits of quantification ranging within 7.2-20 μg/kg were achieved for bacitracin A, B₁, B₂, and B₃. This method provided an effective and reliable detection method to prevent the addition of BTC and different BTC formulations in feeds.

2023-12-01·Clinical Nutrition

A nutritional supplement during preconception and pregnancy increases human milk vitamin D but not B-vitamin concentrations

Article

作者: Costello, Paula ; Albert, Benjamin B. ; Taylor, Rachael ; Cooper, Cyrus ; Tham, Elizabeth ; Depczynski, Marysia ; Han, Zhang ; Nield, Heidi ; Titcombe, Philip ; Binia, Aristea ; Cutfield, Wayne S. ; Creagh, Christine ; Tay, Vicky ; Campos-Giménez, Esther ; Vickers, Mark H. ; Kenealy, Timothy ; O'Sullivan, Justin M. ; Cox, Vanessa ; Woon, Gladys ; Godfrey, Keith M. ; Cavanagh, Mary ; Redeuil, Karine ; Huang, Fang ; Harvey, Nicholas C. ; Chong, Yap Seng ; Wong, Ray ; Hammond, Judith ; Satianegara, Gernalia ; Devaraj, Surabhi ; Han, Soo Min ; Thakkar, Sagar K. ; Chan, Shiao-Yng ; Soh, Shu E. ; Chang, Hsin Fang ; Pang, Wei Wei ; Silva-Zolezz, Irma ; Conlon, Cathryn ; Jagtap, Mrunalini ; Derraik, José G.B. ; Barton, Shelia J. ; Wall, Clare ; Chong, Mary F. ; El-Heis, Sarah

BACKGROUND & AIMSOptimal maternal vitamin status during pregnancy and lactation is essential to support maternal and infant health. For instance, vitamin D₃ is involved in infant bone development, and B-vitamins are involved in various metabolic processes, including energy production. Through a double-blind randomised controlled trial, we investigated the effects of maternal supplementation from preconception throughout pregnancy until birth on human milk (HM) concentrations of vitamin D₃ and B-vitamins. In addition, we aimed to characterise longitudinal changes in milk concentrations of these vitamins.METHODSBoth control and intervention supplements contained calcium, iodine, iron, β-carotene, and folic acid, while the intervention also contained zinc, vitamins B₂, B₆, B₁₂, and D₃, probiotics, and myo-inositol. HM samples were collected across 4 time points from 1 week to 3 months post-delivery from 158 mothers in Singapore, and 7 time points from 1 week to 12 months from 180 mothers in New Zealand. HM vitamin D was quantified using supercritical fluid chromatography and B-vitamins with mass spectrometry. Potential intervention effects on HM vitamins D₃, B₂, B₆, and B₉, as well as other B-vitamin (B₁ and B₃) concentrations were assessed using linear mixed models with a repeated measures design.RESULTSOver the first 3 months of lactation, HM 25-hydroxyvitamin D₃ concentrations were 20% (95% CI 8%, 33%, P = 0.001) higher in the intervention group, with more marked effects in New Zealand. There were no observed intervention effects on HM concentrations of vitamins B₁, B₂, B₃, B₆, and B₉. In New Zealand mothers, longitudinally, vitamin D₃ concentrations gradually increased from early lactation up to 12 months, while vitamins B₁ and B₂ peaked at 6 weeks, B₃ at 3 weeks, and B₆ and B₉ at 3 months.CONCLUSIONSMaternal supplementation during preconception and pregnancy increased HM vitamin D, but not B-vitamin concentrations in lactation. Further studies are required to examine the discrete benefits of vitamin D supplementation starting preconception vs during pregnancy, and to further characterise the effects of supplementation on later offspring health outcomes.CLINICAL TRIAL REGISTRATIONRegistered at ClinicalTrials.gov on the 16 July 2015 (identifier NCT02509988); Universal Trial Number U1111-1171-8056. This study was academic-led by the EpiGen Global Research Consortium.

2023-01-01·Biomedicine & Pharmacotherapy

Melatonin inhibits ferroptosis and delays age-related cataract by regulating SIRT6/p-Nrf2/GPX4 and SIRT6/NCOA4/FTH1 pathways

Article

作者: Ge, Hongyan ; Luo, Jialin ; Yu, Xiaohan ; Liu, Ping ; Sun, Liyao ; He, Jie ; Wei, Chaoqun ; Liu, Huirui ; Zhang, Jiayue ; Mi, Yu

BACKGROUNDCataracts are the main cause of reversible blindness worldwide. The ageing of the lens caused by ultraviolet B (UVB) radiation is mostly related to oxidative stress (OS). Little is known about whether OS induced by UVB enhances the sensitivity of lens epithelial cells to ferroptotic stress, which may be a new mechanism leading to age-related cataracts (ARCs).METHODSFerroptosis was detected by transmission electron microscopy (TEM), iron assay, lipid peroxidation (MDA) assay, real-time PCR, western blotting, and immunofluorescence. Genetic engineering technology was used to investigate the regulatory relationship among Sirtuin 6 (SIRT6), nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (Nrf2), nuclear receptor coactivator 4 (NCOA4), glutathione peroxidase 4 (GPX4) and ferritin heavy chain (FTH1). Knockdown and overexpression of SIRT6 locally in vivo in rats were performed to probe the regulatory mechanism of SIRT6 in ferroptosis in ARCs.FINDINGSHere, we observed that UVB can drastically induce ferroptosis in lens epithelial cells in vivo and in vitro. Surprisingly, inhibition of ferroptosis was the direct reason that melatonin rescued B-3, SRA01/04 and HEK-293 T cells survival; the pan-caspase inhibitor Z-Vad-FMK did not significantly reverse the death of UVB-irradiated cells compared with that in the UVB+DMSO group. SIRT6 was an upstream regulator of phosphorylated Nrf2 (p-Nrf2) and NCOA4 in B-3, SRA01/04 and HEK-293 T cells. Melatonin inhibited ferroptosis through the SIRT6/p-Nrf2/GPX4 and SIRT6/COA4/FTH1 pathways to neutralize lipid peroxidation toxicity, which protected cells against ferroptotic stress in vitro and delayed cataract formation caused by UVB exposure in rats.INTERPRETATIONOur findings reveal a novel causal role of melatonin in the pathogenesis of ARCs, which raises the possibility of selectively targeting the activation of SIRT6 and ferroptotic resistance as a latent antioxidative therapeutic strategy for ARCs.

项与 B03 相关的新闻（医药）

2024-07-09

·米内网

【关注】院士、监管、企业100+专家，邀您参加第三届MAH合作与创新大会

扫下方二维码报名免费报名中邀请辞在这个全球医疗健康行业日新月异的时代，创新与合作成为了推动医药领域跨越发展的双引擎。随着药品上市许可持有人制度的深入实施，不仅加速了新药的研发进程，也极大地促进了国内外医药资源的优化配置与协同创新。 2022、2023年，由浙江省药品MAH转化平台主办的两届国际MAH合作与创新高峰论坛盛况空前，上百位行业顶级专家，包括毕井泉局长、陈时飞局长、孔繁圃主任、孙咸泽理事长等等莅临大会做主题报告，现场多达3000名参会嘉宾，为整个行业带来一场饕餮盛宴。 2024年7月25-26日，第三届MAH合作与创新大会暨浙江省医药产业博览会将在杭州钱塘区再续辉煌。本次大会旨在搭建一个高规格、国际化、多元化的交流平台，汇聚全球医药行业的精英、学者、政策制定者及投资者，围绕MAH制度的最新实践、医药产业的创新发展趋势、国际合作的新机遇与挑战等核心议题展开深入探讨。往届规模 /PREVIOUS SCALE 前两届MAH大会平均每届参会人员达1500人+ 汇集行业专家近100人，参与企业1000+家超过60家媒体全程报道，影响行业人群（从业者）400万 ▼往届国际MAH合作与创新高峰论坛回顾 #1 大会信息 CONVENTION INFORMATION 会议时间 | 7月25-26日（周四、周五）会议地点 | 杭州市钱塘区大江东温德姆酒店（杭州市钱塘区大江东产业集聚区义蓬街义隆路288号) 指导单位 | 中国医药企业管理协会、中国医药物资协会、中华全国工商业联合会医药业商会、杭州市经济和信息化局、杭州钱塘新区管理委员会主办单位 | 浙江省药学会、浙江省医药行业协会、浙江省药品MAH转化平台承办单位 | 杭州市钱塘区药品上市许可持有人研究院、浙江省药学会MAH服务与协作专委会协办单位 | 长三角数字驱动创新生物医药产业链联盟、药闻天下、杭州医药港管理办公室、药交天下、允咨医药培训中心战略合作媒体 | 赛柏蓝、E药经理人、药闻天下媒体支持 | 米内网、北京商报、科技日报、人民日报、制药在线、中国医药报、21世纪经济报道、浙江日报、财联社、CCMTV、贝壳学社、中国报道等（排名不分先后）扫描下方二维码报名 #2 大会议程 CONVENTION AGENDA #3 大会主题 CONVENTION THEME 主席：孔繁圃清华大学医学院首席研究员，国家药品监督管理局药品审评中心原主任主持人：邵元昌浙江省药学会理事长主题报告主持人：娄小娥浙江药科职业大学校长、浙江省药学会副理事长 9:00—9:30 大会开幕式 9:30—10:30 1. 营造鼓励生物医药创新的生态环境重磅嘉宾 10:30—10:45 茶歇 10:45—11:25 2. 主题待定孔繁圃清华大学医学院首席研究员、国家药品监督管理局药品审评中心原主任 11:25—12:05 3. 我国未来生物医药产业发展的思考院士报告主持人：邵蓉中国药科大学药品监管科学研究院执行院长 13:00—13:50 抗肿瘤药物附条件批准的科学考量陈晓媛清华大学医学院教授、北京清华长庚医院临床机构办公室主任、国家药品监督管理局药品审评中心原临床审评专家 13:50—14:30 浙江省药品监督管理局专家 14:30—15:10 B证企业高质量发展，监管的要点和难点上海市药品监督管理局专家 15:10—15:20 茶歇 15:20—16:00 MAH制度江苏监管实践与思考江苏省药品监督管理局专家 16:00—16:40 委托生产监管发展与思考安徽省药品监督管理局专家 16:40—17:20 圆桌讨论：科学监管助推生物医药新质生产力发展主持人：邵蓉中国药科大学药品监管科学研究院执行院长嘉宾：何如意荣昌生物首席医学官，国投招商医药健康首席科学家、中国药品评审中心前首席科学家浙江省药品监督管理局专家上海市药品监督管理局专家江苏省药品监督管理局专家安徽省药品监督管理局专家主办：浙江省海外高层次人才联谊会生物医药分会协办单位：海邦投资主持人：舒特俊海邦投资高级投资总监拟邀请100个融资项目展览+50家资本机构 13:00—14:00 主题报告： 1. 2024全球生物医药医疗行业资本市场发展趋势与机遇前瞻茹涛华泰联合证券执行总经理、生命科学组联席负责人 14:00—15:00 2. 行业巨变下的医药投资新逻辑蔡大庆夏尔巴投资创始人、管理合伙人 15:00—15:15 茶歇 15:15—16:15 圆桌讨论1：穿越周期，未来3年中国的生物医药投融资方向与趋势几何？主持人：黄利海邦投资合伙人嘉宾：黄潇云锋基金董事总经理陈文涌铧投资合伙人茹涛华泰联合生命科学组联席主管蔡大庆夏尔巴投资创始人、管理合伙人张亮约印医疗基金创始合伙人 16:15—17:15 圆桌讨论2：创新药出海与商业合作，新趋势与策略主持人：张普文汉鼎医药CEO、原中肽新药总经理嘉宾：夏明德英诺湖董事长/CEO 盛晓霞领业医药创始人/总经理潘海先为达生物创始人/CEO 李安虎葆元生物医药科技(杭州)有限公司企业负责人兼首席科学家周思翔思诺金医药商务拓展副总裁主办单位：康恩贝、和泽远志主持人：谷满仓教授浙江中医药大学药学院副院长 13:00—13:30 1.真实世界证据支持临床评价王雯教授四川大学华西医院 13:30—14:00 2.中药卓越监管体系下中药保护对中药企业发展的促进作用周亚伟教授全国医药技术市场协会会长 14:00—14:30 3. 创新驱动中药高质量发展的体会与思考王志安浙江省药学会秘书长 14:30—15:00 4.数智赋能中医药研究洪燕龙教授上海中医药大学 15:00—15:15 茶歇 15:15—15:45 5.中药临床价值的战略突围实践李磊中国中药协会中西医结合药物研究发展工作委员会副主任 15:45—16:15 6.重新认识临床数据对药品生命周期管理的关键作用万马江苏认识智能科技有限公司认识康复CEO 16:15—16:45 7.基于高效煎制和质量数据全程溯源的智慧共享中药房建设张贻超浙江厚达智能科技股份有限公司产品总监 16:45—17:30 圆桌论坛:中药院内制剂的开发与转化路径嘉宾：杨苏蓓教授浙江省中医药大健康联合体秘书长王雯教授四川大学华西医院洪燕龙教授上海中医药大学周亚伟教授全国医药技术市场协会会长李磊中国中药协会中西医结合药物研究发展工作委员会副主任万马江苏认识智能科技有限公司认识康复CEO 陈鸿翔和泽远志董事长主席：丁列明浙江省医药行业协会会长、贝达药业董事长主持人：武滨中国医药企业管理协会专家委员会委员、中国医药物资协会高级顾问、中国医药商业协会原常务副会长 9:00—9:30 1.全球视野下，中国生物医药创新的确定性和挑战丁列明浙江省医药行业协会会长、贝达药业董事长 9:30—10:00 2. 国际多中心临床开发与创新药出海策略张丹俄罗斯工程院外籍院士，江苏谱新生物医药有限公司联合创始人/联席董事长 10:00—10:30 3.主题待定来茂德德国科学院院士、中国药科大学原校长 10:30—10:45 茶歇 10:45—11:15 4.新周期下国内仿制药行业发展与产业链创新倪晟浙江省医药行业协会副会长、和泽医药董事长 11:15—12:10 圆桌讨论：对话生物医药发展新周期主持人：武滨中国医药企业管理协会专家委员会委员、中国医药物资协会高级顾问、中国医药商业协会原常务副会长嘉宾：丁列明浙江省医药行业协会会长、贝达药业董事长胡季强康恩贝集团有限公司董事长曹晓春泰格医药联合创始人、执行董事、总裁何春普洛药业总经理主办单位：泰格医药 13:00—13:30 1. 主题待定泰格医药 13:30—14:00 2.集采下半场仿制药剩下的选项机会与产品线调整策略王立峰北京沣瑞医药科技有限公司总经理 14:00—14:30 3.改良型新药的申报、审批状况分析及立项布局策略考量杨劲中国药科大学教授 14:30—15:00 4. 从临床优势谈复杂注射剂的开发何仲贵沈阳药科大学教授 15:00—15:15 茶歇 15:15—15:35 路演 15:35—16:05 主题待定沈曦和泽医药立项储备中心总经理 16:05—16:30 6.经典名方指导原则新政解读及案例研究分享黄能听盈科瑞中药事业部总经理 16:30—17:30 圆桌论坛：CRO企业如何打破内卷，实现高质量发展？主持人：程增江同写意董事长嘉宾：倪晟和泽医药董事长丁劲松晶易医药董事长利虔阳光诺和董事长焦培想南京华威总经理欧阳冬生都正生物董事长、总经理主持人：盛晓霞领业医药创始人/总经理 9:00—9:30 1.委托生产：MAH制度下药品委托生产现状与管理对策唐民皓上海市食品药品安全研究会会长，上海市药监局原副局长 9:30—9:55 2.技术转移：MAH制度下受托产品技术转移的要点及技术难点分析毕瑞凤著名GMP专家，赛诺菲原质量授权人 9:55—10:20 3.药品研发中相容性研究技术要点和趋势分析常红微谱生物医药研发及实验室服务、相容性研究技术专家 10:20—10:45 4.质量保证：MAH制度下CDMO企业的生产质量保证张胜药明生物副总裁 10:45—11:10 5.连续反应技术在原料药及中间体智能制造中的应用郭金海天津凯莱英医药科技发展有限公司副总经理 11:10—11:20 主题报告正帆和泰 11:20—11:50 6.口服固体制剂连续制造技术苗启义山东新马制药装备有限公司工艺设备总监 11:50—12:15 7.高难度杂质问题解决平台及小规格无菌原料药CDMO 冯胜昔广州艾奇西医药科技有限公司董事长主办单位：麦池书院上午：主持人：史录文教授北京大学医药管理国际研究中心 9:00—9:30 1. 我国医疗保障制度的发展演进与未来展望段政明国家医保局基金监管司原副司长 9:30—10:00 2. 药品上市后综合评价与国家基药准入史录文北京大学医药管理国际研究中心主任、研究员 10:00—10:15 茶歇 10:15—10:45 3. 临床路径与DRP/DIP双轮驱动路径与实践林丽开武汉大学中南医院/武汉大学医院管理研究所常务副所长 10:45—11:15 4. 从资本市场看中国医药新趋势金祖成浙江康恩贝制药股份有限公司副总裁、董事会秘书 11:15—12:15 圆桌论坛：医保政策及价格治理主持人：黄诚荣太传播董事长嘉宾：段政明国家医保局基金监管司原副司长史录文北京大学医药管理国际研究中心主任、研究员林丽开武汉大学中南医院/武汉大学医院管理研究所常务副所长下午：主持人：陈一进麦池书院理事长、和泽医药MAH事业部总经理 13:00—13:30 1.B证公司立项思路与未来发展专家待定 13:30—14:00 2.医药零售行业的境遇与发展趋势徐郁平中国医药物资协会监事长 14:00—14:30 3.医药营销管理的数字化建设与迭代王孝顺上海正也科技总经理 14:30—15:00 4.后集采时代企业产品立项选择张廷杰风云药谈创始人 15:00—15:15 茶歇 15:15—15:30 路演 15:30—16:00 5.浅谈医药电商，从客户到用户谢宏伟知原药业总经理 16:00—16:30 6.处方药全渠道的营销与价值链管理王晓飞深圳星银医药零售市场总经理 16:30—16:50 7.药交天下MAH全产业链信息交互与资源配置平台介绍周宇药交天下平台负责人 16:50—17:50 圆桌讨论：高度竞争环境下的仿制药出路在哪里？嘉宾：徐郁平中国医药物资协会监事长张廷杰风云药谈创始人谢宏伟知原药业总经理许金灿药闻康策创始人主办单位：四星玻璃主持人：鲍康德浙江理工大学教授 13:00—13:30 1. 四星玻璃医药产业链国产化智能制造基地项目张岩河北沧润制药有限公司总经理 13:30—14:00 2. 国际医药形势及原料药选药浅谈孙登学华海药业国际销售中心总经办主任 14:00—14:30 3. 高活性原料药与药物递送剂的研究与开发薛吉军博士原兰州大学教授、甘肃皓天董事长 14:30—15:00 4. 二维液相色谱-高分辨质谱及其在原料药杂质谱研究中的应用王建和泽医药(分析)首席科学家 15:00—15:15 茶歇 15:15—15:30 路演 15:30—16:10 5. 主题待定施国强博士江苏诺泰副总、澳赛诺副总裁 16:10—16:50 6. 辅料供应链里的问题和挑战张高博湖北葛店人福药用辅料有限责任公司市场总监 16:50—17:30 7.通过一致性评价产品生产过程质量和疗效持续一致问题探讨肖文森江苏西典药用辅料有限公司董事长展商一览展位号企业 B01 产业园 B02 广州锐嘉工业股份有限公司 B03 深圳晶泰科技有限公司 B04 艾奇西 B05 盈科瑞 B06 科思致药 B07 美药星 B08 华益药业 B09 国标医药 B10 鼎泰 B11 广州海博特 B12 皓天 B13 科伦药业 B14 四星玻璃 B15 上海微谱检测科技集团股份有限公司 B16 莎普爱思 B17 华威医药 B18 杭州诺丁 B19 上海众林机电设备有限公司 B21 美药星（南京）制药有限公司 B23 石家庄凯瑞德医药科技发展有限公司 B24 山东齐都 B25 济南辰宇环保科技有限公司 B26 药智网 B27 斯坦德科创医药科技（青岛）有限公司 B28 则正 B29 珀金埃尔默企业管理（上海）有限公司 B30 依利特（苏州）分析仪器有限公司 B31 和泽 B32 南京科默 B33 腾宇新材料 B35 重庆莱美 B36 海南海灵 A01 河北中材检测 A10 融智飞天 A11 领业医药 A12 福建基诺厚普生物科技有限公司 A13 和康药业 A14 京新药业 A15 普利 A16 浙江厚达智能科技股份有限公司 A17 正帆合泰 A18 贝达梦工厂 A19 美诺华 A20 上海锐锝科学仪器有限公司 A29 普洛药业 A30 昂利康 A31 万邦德 A32 福瑞喜药业 A33 澳亚 A34 浙江仙琚制药股份有限公司 A36 众成 A39 连云港众维生物上下滑动查看更多长按识别二维码免费参会展位/协办等商务合作请联系陈老师：18767102132 媒体合作请联系何老师：18368633695 宦老师：13092630170 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抗体药物偶联物专利到期

2023-11-09

·生物制品圈

国产原创艾滋病DNA疫苗在恒河猴模型中显示高保护性

迄今为止，针对暴露前预防（PrEP）和暴露后预防（PEP）的抗逆转录病毒联合治疗（cART）有效地减少了艾滋病死亡和HIV-1传播。然而，尽管具有有效的cART，但由于HIV-1潜伏的持续存在，自20世纪80年代发现艾滋病及其病原体HIV-1以来，针对HIV-1感染的完整或无底物的病毒学控制依旧是一个巨大的挑战。此外，HIV-1遗传多样性促进了抵抗cART药物的突变逃逸变异体的形成，导致临床上病毒控制的失败，大量的病毒变异体也阻碍了艾滋病疫苗的开发。确定新的疫苗接种策略，包括诱导广谱中和抗体和强大的交叉反应性T细胞反应，将有效对抗HIV/艾滋病大流行。本研究将基于PD-1的DNA疫苗策略应用于恒河猴上，结果显示成功抑制HIV病毒，若深入临床研究，将有希望开拓在人群达到功能性治愈的创新疗法。数十种HIV-1候选疫苗目前正在进行临床前测试和试验。一些临床试验因其对人类的预防效果不佳而不得不停止。本文描述了一种基于程序性死亡-1（PD-1）的DNA疫苗策略的疫苗技术，即由DNA质粒载体编码，将表达目标抗原的重组抗原融合到可溶性PD-1结构域中。小鼠研究已经证明了重组PD-1融合抗原的树突状细胞靶向能力，基于PD-1的DNA疫苗对病毒感染和肿瘤发生的免疫原性和保护能力，并且能激发强大的多功能效应-记忆CD8+T细胞反应，优于传统疫苗设计。一项恒河猴研究评估了基于PD-1的抗猿人免疫缺陷病毒（SHIV）DNA疫苗的潜力。用编码恒河可溶PD-1融合SIV Gag-p27抗原（即pRhPD1-p27）的DNA疫苗接种恒河猴，通过强大的多功能疫苗诱导的效应记忆CD8+T反应，对致病性SHIVSF162P3CN感染进行持续的病毒血症控制。在这项研究中，作者对先前报道的pRhPD1-p27疫苗接种/SHIVSF162P3CN感染恒河猴在感染后6年的病毒血症水平和T细胞免疫反应进行了随访调查。在没有cART的情况下，4只感染SHIVSF162P3CN并接种pRhPD1-p27疫苗的恒河猴中，2只长时间出现无法检测到的病毒血症在关于pRhPD1-p27 DNA疫苗中，对三组中国恒河猴进行了研究：A组（A01-A04）的4只恒河猴每隔6-13周肌内电穿孔间隙4次pRhPD1-p27疫苗；B组（B01-B03）的3只恒河猴肌肉注射pRhPD1-p27疫苗4次，每隔6周一次；未接种组9只为对照组。恒河猴静脉注射5000 TCID50 CCR5-tropic，2级致病性SHIVSF162P3CN。随着时间的推移进行病毒学和免疫学分析。图1 恒河猴感染SHIV并接种pRhPD1-p27疫苗的血浆病毒血症抑制情况（之前发表的结果以灰色突出显示）（A）实验设计。（B-D）A组、B组和未接种疫苗组恒河猴在病毒感染后的血浆病毒载量。（E）接种pRhPD1-p27疫苗（A组、B组）和未接种疫苗的恒河猴在SHIVSF162P3CN感染后的长期生存分析。A组恒河猴在感染后17周接种抗CD8β消耗抗体，并在感染后103周再次接种pRhPD1-p27疫苗。直到实验结束时，A组的4只恒河猴在病毒感染后保持了长达2年的持续病毒血症抑制（图1B）。在最初的研究中，B组恒河猴在病毒感染后的20周观察期结束时未检测到病毒血症（图1C）。相比之下，在同一时期，大多数未接种疫苗的恒河猴的每毫升血浆病毒载量始终＞104copies RNA病毒，67%未接种疫苗的恒河猴由于临床状况不佳，出现体重明显减轻/持续腹泻现象，因此执行安乐死。对病毒感染后的恒河猴进行长达6年的连续观察，由于2只未接种疫苗的恒河猴被用于其他研究，从后续观察中移除。7只未接种疫苗的恒河猴中，只有1只在20周感染期间存活下来。随着时间的推移，这只恒河猴表现出低水平的病毒血症，在感染60周后无法存活（图1D）。在接种疫苗的B组中，所有恒河猴感染病毒后至少存活了49周（图1C）。由于临床状况恶化，B03、B02和B01恒河猴分别在感染后第49、77和121周时被安乐死。恒河猴B02、B03在安乐死时未检测到血浆病毒载量，推测临床病情恶化可能不是由SHIVSF162P3CN感染引起的。同样，在100周感染时采集的恒河猴B01血浆样本中未检测到病毒载量。在接种疫苗的A组中，由于身体健康状况不佳，A01、A03恒河猴在146和194周感染时被安乐死。A01在CD8+T细胞耗竭后和死亡前出现病毒复发，而A03在死亡前没有检测到病毒血症，不幸的是死于其他原因（图1B）。然而，A02、A04恒河猴至今仍存活，在没有任何cART的情况下，这两只恒河猴在病毒感染后的327周内血浆病毒载量均未检测出（图1B），同时CD4+T细胞和CD4+/CD8+比值在291至327周感染期之间呈上升趋势（图3C-D）。总的来说，与未接种疫苗的对照组相比，pRhPD1-p27疫苗组具有显著的生存优势。这些结果表明，在没有cART的情况下，基于PD-1的pRhPD1-p27 DNA疫苗通过抑制SHIVSF162P3CN病毒复制提高生存率。在病毒感染后6年，2只感染SHIVSF162P3CN并接种pRhPD1-p27疫苗的恒河猴体内存在多功能效应记忆抗原特异性T细胞图2 在恒河猴感染SHIV并接种pRhPD1-p27疫苗后，存在持续的功能性p27特异性效应记忆T细胞反应（A）A组恒河猴在感染122周时的T细胞反应。（B）A组和未接种疫苗/未感染的健康恒河猴的T细胞反应。（C-D）CD4+T细胞（C）和CD8+T细胞（D）在体外单独使用培养基（图上部分）或p27肽池（图下部分）刺激后产生各种细胞因子。（E-F）p27肽池刺激后CD4+T细胞（E）和CD8+T细胞（F）产生IFN-γ、TNF-α和IL-2细胞因子不同组合的频率。（G）p27特异性CD4+（图上部分）和CD8+（图下部分）T细胞的表面表型。（H-I）在CD4+T细胞（H）和CD8+T细胞（I）群体中，总体细胞和产生IFN-γ的细胞的效应记忆T细胞的频率。研究表明，pRhPD1-p27疫苗诱导的CD8+T细胞反应是抑制SHIV复制所必需的步骤。通过IFN-γ ELISpot试验测定A组恒河猴感染122周的Gag-p27和Nef特异性T细胞情况（图2A）。除A01没有出现病毒特异性T细胞反应外，其他3只均检测到了Gag-p27和Nef特异性T细胞反应（图2A）。因此推断出病毒复发与抗病毒T细胞反应的消失有关。进一步测定A02、A04恒河猴在327周感染时的抗原特异性T细胞反应，与A04相比，A02中检测到的Gag-p27和Nef特异性T细胞的频率相对较高，而在未接种疫苗/未感染的健康恒河猴中几乎没有发现SHIV特异性T细胞应答（图2B）。值得注意的是，pRhPD1-p27疫苗中没有编码Nef抗原，因此，恒河猴A02、A04中诱导针对Nef的T细胞应答代表了对SHIVSF162P3CN感染的新生免疫应答。为了更清晰地了解恒河猴A02、A04体内的T细胞免疫应答，用细胞内细胞因子染色法（ICS）测定了IFN-γ、TNF-α和IL-2的表达。产生IFN-γ和TNF-α的双功能T细胞形成了大多数Gag-p27特异性CD8+和CD4+T细胞（图2C-F）。此外，在体外Gag-p27刺激后，仍有超过70%产生IFN-γ的CD8+或CD4+T细胞具有效应记忆T细胞表型（CD95hiCCR7loCD28hi/lo）（图2G-I）。综上所述，上述结果表明长期且多功能的效应记忆的抗原特异性T细胞在A02、A04两只存活的恒河猴体内存在。pRhPD1-p27免疫恒河猴在控制病毒血症和疫苗诱导的长期T细胞应答方面具有优势图3 在感染SHIV后接种pRhPD1-p27疫苗的恒河猴与在SHIV感染后1天接受双特异性中和抗体BiIA治疗的恒河猴病毒学和细胞免疫学比较。（A-B）接受pRhPD1-p27疫苗的A02、A04和C05、C06的血浆病毒载量(A)和原病毒载量(B)的比较。（C-D）恒河猴A02、A04和C05、C06 CD4+细胞占CD3+T细胞的百分比（C）和CD4+/CD8+ T细胞的比值(D)。（E-F）恒河猴诱导Gag -p27特异性(E) CD4+和CD8+T(F)细胞反应的多功能分析。（G-H）在恒河猴中诱导的Gag-p27特异性(G) CD4+和CD8+T(H)细胞的表型表明。由于感染SHIV并且未接种疫苗的对照组中没有存活恒河猴，因此，将上述两只恒河猴A02、A04与在感染后第1天接受双特异性中和抗体BiIA-SG治疗的两名恒河猴C05、C06作对比，C05、C06恒河猴在相同剂量的5000 TCID50 SHIVSF162P3CN感染后，存活了284周以上。在最近的采样时间点，A02、A04、C05和C06皆没有检测到血浆病毒载量（图3A）。就原病毒载量而言，A02的原病毒载量最低，为每1×106个单核细胞中0.05 copies，其他3只恒河猴的前病毒载量保持在每1×106单核细胞中0.25-0.81copies（图3B）。在最后的测量时间点，发现RhPD1-p27免疫恒河猴的CD4+T细胞改善和CD4+/CD8+T细胞比率比BiIA处理的恒河猴具有更好的趋势（图3C-D）。总体而言，与高效并广泛使用的中和抗体实验性治疗结果相比，pRhPD1-p27疫苗接种显示出类似甚至更好的病毒控制。恒河猴对病毒抗原的T细胞免疫原性结果表明，A02、A04显示出比C05、C06更高频率的p27特异性效应记忆CD4+和CD8+T细胞反应（图3E-F）。A02具有针对Gag-p27和Nef的多功能CD4+和CD8+T细胞的比例最高。与Gag-p27相比，A02中发现了相似水平的功能性Nef特异性效应记忆T细胞应答（图3E-F）。结果表明，A02、A04组在CD4+和CD8+T细胞亚群中的效应记忆Gag-p27特异性T细胞比例均高于C05、C06组（图3G-H）。因此，与BiIA-SG治疗相比，pRhPD1-p27疫苗接种呈现出更好的长期T细胞应答的趋势，有助于抑制病毒。图4 感染SHIV并接种pRhPD1-p27疫苗的恒河猴Gag-p27抗原的T细胞表位定位分析Gag特异性T细胞反应的广度与抑制HIV-1病毒血症有关。先前研究发现，pRhPD1-p27诱导的T细胞在免疫恒河猴中针对病毒Gag-p27衣壳抗原的不同区域。根据ELISpot和ICS的联合分析，A02、A04在感染327周发现了3个最小的T细胞表位，小于免疫阶段检测表位，并且在两只恒河猴中都发现了匹配的T细胞表位。这些结果表明，以PD-1为基础的DNA疫苗诱导的T细胞应答在病毒感染后6年仍有反应。在这项后续研究中，证明了基于PD-1的pRhPD1-p27 DNA疫苗在恒河猴中具有长期的病毒抑制作用，恒河猴在SHIVSF162P3CN感染后存活期超过6年。基于PD-1的DNA疫苗接种在没有抗病毒药物或中和抗体治疗的情况下，通过激发强大的多功能效应记忆抗原特异性T细胞反应，在恒河猴中实现了无cART的病毒抑制。即使在接种疫苗后6年，恒河猴A02、A04依旧具有效应记忆表型的抗原特异性T细胞。此外，从疫苗接种阶段鉴定出的几个T细胞表位在SHIV感染后很长时间内仍保持免疫原性。与BiIA-SG抗体治疗的恒河猴C05、C06相比，A02、A04恒河猴的抗病毒T细胞免疫水平有更高的趋势。此外，恒河猴A02、A04在Gag-p27刺激后，超过70%的应答CD8+T细胞至少产生两种细胞因子，而来自恒河猴C05、C06的应答CD8+T细胞分别有0%和60%能够表达至少两种细胞因子，结果表明恒河猴A02、A04有更好的T细胞功能的趋势。基于PD-1的DNA疫苗的有利作用也表现在SHIV感染后抗Nef T细胞反应的重新产生和长期维持上，表明接种疫苗的恒河猴在病毒感染后保留了反应性T细胞。消除病毒感染的抗原、产生持久T细胞反应已被评估为治疗性HIV疫苗的主要策略。最近一项关于HIVACAT T细胞免疫原(HTI)疫苗方案的1期试验表明，在抗逆转录病毒治疗中断(ATI)期间，抗原特异性T细胞应答诱导疫苗接种的时间延长，并且在ATI结束时病毒血症水平较低，这结果证明基于PD-1的治疗性T细胞疫苗有利于HIV-1的临床开发。此项研究的一个局限性是接受基于PD-1的DNA疫苗的恒河猴数量较少。然而，对恒河猴的长期随访表明，使用基于PD-1的DNA疫苗有可能诱导病毒特异性T细胞反应，从而实现对HIV的无cART病毒抑制。在A组的4只感染SHIV并接种pRhPD1-p27疫苗的恒河猴中，A02、A04两只猴子继续存活，病毒载量未检测到。相比之下，A01、A03恒河猴需要安乐死。由于该事件发生在COVID-19大流行的封锁期间，因此无法进行病毒载量检查和尸体解剖。通过A组、B组结果推断pRhPD1-p27疫苗接种方案的差异可能影响长期临床结果。此外，A组的动物已接受抗CD8β抗体治疗以消耗CD8+T细胞，并在约2年后再次接种pRhPD1-p27疫苗。感染后2年的加强疫苗接种增强了抗Gag-p27 CD8+T细胞反应。这种加强疫苗接种旨在评估慢性阶段疫苗接种的结果，原则上可能会延长恒河猴的病毒血症，这一发现有助于指导治疗性疫苗剂量策略的设计。功能性治愈是当前艾滋病领域重大难题，目前全世界有限的几个细胞疗法成功的都是个案。本研究若能在人体中得到重现，将开拓一个有可能在人群达到功能性治愈的创新疗法。为了支持人类临床应用，已经开发了一种基于PD-1的DNA疫苗，编码PD-1连接的二价马赛克HIV-1 Gag抗原，即ICVAX。通过结合基于PD-1的DNA疫苗技术和该疫苗中使用的马赛克抗原设计策略，已经证明在临床前恒河猴研究中可以引起强烈的、广泛反应的、多功能的抗原-Gag T细胞反应。ICVAX疫苗目前正在进行1期临床试验，以评估这种新型治疗性疫苗平台对HIV患者的安全性和免疫原性。这项研究提供了进一步的证据，表明基于PD-1的DNA疫苗接种是一种可行策略，可以通过产生持久的病毒特异性T细胞反应来开发潜在的治疗性艾滋病疫苗，从而达到无cART的病毒学控制状态。文献来源：A follow-up study: 6-year cART-free virologic control of rhesus macaques after PD-1-based DNA vaccination against pathogenic SHIVSF162P3CN challenge医克生物是一家总部位于香港科学园的生物科技集团。该公司专注于由香港大学艾滋病研究所研发并授予专利之PD-1增强型DNA疫苗和抗-Δ42-PD1的癌症、炎症和传染病的疫苗和免疫疗法阻断抗体技术平台；其部分产品已经进入临床研究阶段。欲了解更多关于医克生物的信息，请浏览 http://www.immunocure.hk识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入生物制品微信群！请注明：姓名+研究方向！版权声明本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。

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急性髓性白血病	临床前	中国	皖南医学院	-
急性髓性白血病	临床前	中国	中国药科大学	-
急性髓性白血病	临床前	中国	中国科学院上海药物研究所	-