The study will evaluate the consistency of 3 lots of inactivated VZV vaccine for safety, tolerability, and immunogenicity in healthy adults. The primary hypothesis of the study is that the 3 lots of inactivated vaccine will demonstrate similar immunogenicity at 28 days after the fourth dose.

开始日期2014-07-01

申办/合作机构

Merck Sharp & Dohme Corp.

NCT01527383 / Completed临床2期

A Phase II Randomized, Placebo-Controlled Clinical Trial to Study the Safety and Immunogenicity of V212 in Adult Patients With Autoimmune Disease

This is a study to evaluate the safety and immunogenicity of V212 vaccine in adults with autoimmune disease, including participants with rheumatoid arthritis, psoriatic arthritis, psoriasis, inflammatory bowel disease, systemic lupus erythematosus, multiple sclerosis, and other similar diseases. The primary hypothesis is that vaccination with V212 vaccine will elicit significant VZV-specific immune responses at approximately 28 days after vaccination 4. The statistical criterion for significance requires that the lower bound of the 2-sided 95% confidence interval of the geometric mean fold rise in vaccine recipients is >1.0.

开始日期2012-02-21

申办/合作机构

Merck Sharp & Dohme Corp.

NCT01460719 / Completed临床1期

A Phase I, Open-Label, Multicenter Clinical Trial to Evaluate the Safety and Immunogenicity of V212/Inactivated Varicella-Zoster Virus (VZV) Vaccine in Adults With Hematologic Malignancies Receiving Treatment With Anti-CD20 Monoclonal Antibodies

An open-label, multicenter study to evaluate the safety and immunogenicity of inactivated VZV vaccine (V212) in participants with hematologic malignancies (HM) who are currently receiving anti-CD20 monoclonal antibodies. The primary hypothesis is that vaccination with V212 vaccine will elicit significant VZV-specific immune responses at
28 days after vaccination 4. The statistical criterion for significance requires that the lower bound of the 2-sided 90% confidence interval of the geometric mean fold rise in immune response in V212 recipients is >1.0.

开始日期2012-01-24

申办/合作机构

Merck Sharp & Dohme Corp.

100 项与 VZV vaccine(Merck Sharp & Dohme Corp.) 相关的临床结果

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238

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2024-12-31·Emerging Microbes & Infections

Herpes zoster mRNA vaccine induces superior vaccine immunity over licensed vaccine in mice and rhesus macaques

Article

作者: Zeng, Xianhuan ; Zhao, Huajun ; Bu, Lingling ; Dai, Qinsheng ; Loré, Karin ; Wang, Guan ; Shao, Andong ; Di, Zhenhua ; Weng, Changzhen ; Yang, Yong ; Huang, Lulu ; Hu, Jiesen ; Sun, Shiyu ; Shi, Leilei ; Zhao, Weijun ; Fang, Shentong ; Gong, Yingfei ; Sun, Minhui ; Zhang, Cheng ; Ma, Wenxuan ; Lin, Ang ; Wang, Limei ; Zhao, Tongyi ; Liu, Zhenguang ; Zhang, Jian

Herpes zoster remains an important global health issue and mainly occurs in aged and immunocompromised individuals with an early exposure history to Varicella Zoster Virus (VZV). Although the licensed vaccine Shingrix has remarkably high efficacy, undesired reactogenicity and increasing global demand causing vaccine shortage urged the development of improved or novel VZV vaccines. In this study, we developed a novel VZV mRNA vaccine candidate (named as ZOSAL) containing sequence-optimized mRNAs encoding full-length glycoprotein E encapsulated in an ionizable lipid nanoparticle. In mice and rhesus macaques, ZOSAL demonstrated superior immunogenicity and safety in multiple aspects over Shingrix, especially in the induction of strong T-cell immunity. Transcriptomic analysis revealed that both ZOSAL and Shingrix could robustly activate innate immune compartments, especially Type-I IFN signalling and antigen processing/presentation. Multivariate correlation analysis further identified several early factors of innate compartments that can predict the magnitude of T-cell responses, which further increased our understanding of the mode of action of two different VZV vaccine modalities. Collectively, our data demonstrated the superiority of VZV mRNA vaccine over licensed subunit vaccine. The mRNA platform therefore holds prospects for further investigations in next-generation VZV vaccine development.

2024-12-31·Human Vaccines & Immunotherapeutics

Immunogenicity and safety of live attenuated and recombinant/inactivated varicella zoster vaccines in people living with HIV: A systematic review

Review

作者: De Francesco, Maria Antonia ; Carta, Valentina ; Focà, Emanuele ; Tiecco, Giorgio ; Mangeri, Lucia ; Quiros-Roldan, Eugenia

Few papers focus their attention on VZV vaccination effectiveness among people living with HIV (PLWH). Flanking the live attenuated vaccine (VZL) available, a newly recombinant vaccine (RZV) was recently introduced and approved for HZ prevention among adults. PLWH represents a population on which a particular attention should be applied, in order to guarantee the vaccine efficacy and safety. We performed a literature search in USNLM, PubMed, PubMed Central, PMC and Cochrane Library. From all the publications found eligible, data were extracted and processed per population, vaccine type, immunogenicity and ADRs. The review of the 13 included studies shows that both RZV and VZL are immunogenic and have an acceptable safety profile in adults and children living with HIV. However, given the lack of research available about vaccine efficacy in preventing VZV and HZ in PLWH, additional studies need to be performed, in order to achieve a full completeness of data.

2024-08-16·The Journal of Infectious Diseases

Varicella Zoster Virus Downregulates Expression of the Nonclassical Antigen Presentation Molecule CD1d

Article

作者: Traves, Renee ; Opadchy, Tara ; Slobedman, Barry ; Abendroth, Allison

AbstractBackgroundThe nonclassical antigen presentation molecule CD1d presents lipid antigens to invariant natural killer T (iNKT) cells. Activation of these cells triggers a rapid cytokine response providing an interface between innate and adaptive immune responses. The importance of CD1d and iNKT cells in varicella zoster virus (VZV) infection has been emphasized by clinical reports of individuals with CD1d or iNKT cell deficiencies experiencing severe, disseminated varicella postvaccination.MethodsThree strains of VZV (VZV-S, rOka, and VZV rOka-66S) were used to infect Jurkat cells. Flow cytometry of VZV- and mock-infected cells assessed the modulatory impact of VZV on CD1d protein. Infected cell supernatant and transwell co-culture experiments explored the role of soluble factors in VZV-mediated immunomodulation. CD1d transcripts were assessed by reverse-transcription polymerase chain reaction.ResultsSurface and intracellular flow cytometry demonstrated that CD1d was strikingly downregulated by VZV-S and rOka in both infected and VZV antigen-negative cells compared to mock. CD1d downregulation is cell-contact dependent and CD1d transcripts are targeted by VZV. Mechanistic investigations using rOka-66S (unable to express the viral kinase ORF66) implicate this protein in CD1d modulation in infected cells.ConclusionsVZV implements multiple mechanisms targeting both CD1d transcript and protein. This provides evidence of VZV interaction with and manipulation of the CD1d–iNKT cell axis.

项与 VZV vaccine(Merck Sharp & Dohme Corp.) 相关的新闻（医药）

2024-08-27

·生物制品圈

病毒学中的细胞培养：可用性、优势和前景

摘要：在自然和临床样本中检测病毒是研究和诊断中的一个复杂问题。存在不同的病毒分离和鉴定方法，包括PCR、CRISPR/Cas技术、NGS、免疫分析和基于细胞的检测。随着基因工程方法的发展，利用细胞培养的方法已成为有用且信息丰富的手段。分子生物学方法可以提高细胞培养对特定病毒的敏感性和特异性，并可用于生成报告基因细胞系。这些细胞系在病毒感染后表达特定的报告蛋白（例如，GFP、荧光素酶和CAT），可以在实验室环境中被检测。基因组编辑和合成生物学方法的发展为设计细胞培养中的病毒报告系统提供了新的视角。本综述旨在描述病毒学方法的一般情况以及目前存在的基于细胞的方法的开发实例。 1.引言病毒是人类群体中许多疾病的病因，其中一些疾病可能导致流行病和大流行。为了防止这类事件，需要从患者和自然样本中快速检测出分离的病原体，以及研究分离物的属性。目前，有几种病毒检测方法。与PCR、CRISPR/Cas技术、NGS（下一代测序）、免疫分析和基于细胞的检测方法相关的检测方法（表1）。所有这些方法都有优点和局限性，必须用于解决特定问题，以便全面研究病毒。有些方法只允许检测病毒核酸或蛋白质，而其他方法允许检测活病毒颗粒，并且可以用来确定感染的剂量和时间以及生命周期的机制。最广泛使用的病毒检测方法是基于病毒基因组材料的扩增。除了基于PCR的检测外，还有基于扩增的其他方法（例如，SDA—链置换扩增，NASBA—基于核酸序列的扩增，3SR—自我维持序列复制，以及LAMP—环介导的等温扩增）。这些方法不仅可以在研究中应用，也可以在临床检测中应用。这些方法允许直接检测病毒DNA，但在病毒RNA的情况下，PCR之前必须进行反转录。基于PCR的方法由于扩增而足够敏感，允许检测样本中的少量分子。然而，一些作者指出，基于PCR的方法在检测某些病毒（如人类肠道病毒）方面的灵敏度低于基于细胞的方法。此外，使用基于PCR的方法可能与假阳性结果有关。此外，基于PCR的方法只允许检测病毒基因组而不是活病毒。然而，目前正在开发与下一代测序相关的改进病毒检测方法。这些方法主要被用来检测纯化和浓缩的病毒（即来自细胞培养），使用这种方法在临床样本中检测病毒的问题是病毒与宿主基因组的比例不足。为了解决这个问题，通过详细比较现代方法来纯化和富集临床材料中的病毒颗粒，设计了一种可以有效增加病毒基因组相对于宿主基因组数量的方法。这导致测序样品准备成本的降低以及随后生物信息学分析的改进。CRISPR-Dx病毒检测方法基于导向性内切酶：CRISPR相关蛋白（Cas）。这种方法使用Cas13家族的蛋白质，它们对RNA表现出“附带的”，非特异性的切割活性。考虑到这种效果，建立了一种名为SHERLOCK（特异性高灵敏度酶报告解锁）的方法。这种具有高灵敏度的核酸检测工具涉及病毒基因组材料的扩增和Cas13蛋白间接切割荧光标记的RNA探针，允许样本中病毒材料的定量。这种方法的灵敏度来自于即使是生物材料中微量的病毒核酸也经过重组酶聚合酶扩增（RPA），对于RNA病毒检测，还有一个额外的反转录步骤。然后使用DNA依赖性RNA聚合酶T7将放大的病毒DNA副本转换回RNA。此后，使用gRNA，Cas13蛋白识别病毒核苷酸序列，导致标记的核苷酸的附带切割，从而允许定量确定样本中的病毒含量。这个方向系统正在不断发展，以提高其灵敏度并改善登革热病毒或寨卡病毒（ZIKV）的检测。另一种流行的病毒检测方法是使用基于抗原的检测。这种方法既可以在研究中使用，也可以在临床诊断中使用。使用针对病毒的抗体的标准方法包括病毒中和试验、血凝抑制、补体固定和间接免疫荧光。这些方法仅用于诊断已知病毒，其衣壳结构已被研究。使用终点稀释分析评估病毒滴度是基于细胞培养上清的血凝试验。然而，正如观察到的流感病毒由于病毒基因组编码血凝素的序列中突变的快速积累导致氨基酸替代，使用这种方法研究病毒的抗原特性是复杂的。这种方法应用的一个问题是病毒在标准细胞系中的复制能力较差，例如MDCK细胞。也许这种检测将随着新敏感系的使用而得到改进。在这方面，使用基于检测病毒核蛋白的基于抗原的检测来改进病毒循环的监测将有助于测量临床样本中的病毒滴度。已经为IgG（免疫球蛋白G）和IgM（免疫球蛋白M）蛋白开发了这种技术，允许监测人群中的疾病。在与黄病毒相关的疾病的情况下，IgM通常在疾病表现后的几天内产生，并且通常可以在几个月内检测到。然而，在黄病毒感染的情况下，抗体的交叉反应是可能的。此外，IgG在IgM抗体发展后的几天内被检测到，并且可以检测到几个月。使用这种方法，已经提供了许多病毒的检测方法，例如ZIKV和戊型肝炎病毒。有一组使用细胞培养检测活病毒的方法。这些方法的斑点检测始于1950年。与细胞培养相关的病毒检测方法已经开发出来，并显示出巨大的潜力，因为它们提供了许多优点。使用这些方法，不仅可以确定病毒颗粒的存在，还可以表征病毒属性，这在开发新病毒引起的疾病的治疗方法时极为重要。此外，从细胞培养中获得的病毒颗粒可以通过电子显微镜进行研究，以检查病毒形态。所有使用细胞培养识别和研究病毒的方法可以分为两类。第一种方法利用病毒感染的细胞病变效应（CPE），这意味着细胞在病毒释放后死亡，可以在显微镜下检测和定量。然而，基于CPE的方法繁琐且灵敏度低，无法检测非细胞病变性病毒。可以使用不同的细胞系进行病毒检测，例如NSK、MDCK、UMNSAH/DF1、BS-C-1、Vero、A549、HEK293或HeLa细胞，它们可以作为培养和检测具有不同效率和特异性的病毒的基质。第二种方法与产生报告细胞系有关，其中特定细胞被修改以在病毒感染时产生报告蛋白。这种报告器的特性应该非常特定于病毒，以允许研究人员特别检测感兴趣的病毒。在病毒感染的情况下，病毒蛋白识别报告结构作为病毒基因组或具有特定切割位点的嵌合蛋白，从而产生可量化的信号，研究人员可以检测到。根据它们的基因组结构和生命周期，不同病毒的检测有不同的原理。一些RNA病毒的载体中的病毒结构的转激活可以通过病毒感染、蛋白质的切割和病毒蛋白酶释放报告器来发生，具有核复制周期的负链RNA病毒可以被minigenome模拟病毒检测。总之，基于细胞的方法是当前可用的病毒检测和表征方法的重要类别之一。这些策略都有优缺点，这些在本节中进行了描述，但主要的区别特征是，基于细胞的方法可以用来分离和研究活的病毒颗粒；然而，在应用这些方法时存在一个问题，与细胞培养中的低敏感性（病毒进入细胞的能力）和许可性（病毒在细胞中复制的能力）有关。由于细胞系的这两个属性共同促进了细胞方法的发展，除非报告中提到了具体差异，否则它们通常可以统称为“灵敏度”。为了解决这个问题，正在开发新的方法。细胞系对特定病毒的敏感性取决于病毒附着在细胞膜受体上以及与细胞抗病毒反应相关的宿主基因。现代分子生物学方法已经允许开发遗传修饰的细胞，这些细胞增加了病毒的产生。本综述旨在描述一般的病毒学方法和今天使用的基于细胞的方法的具体发展示例。 2.CPE检测和敏感细胞系为了提高活病毒颗粒研究方法的灵敏度，正在开发提高细胞培养灵敏度的技术。为了研究病毒的生物学特性，例如决定它们宿主物种特异性和增殖率的因素，以及产生活病毒颗粒，需要允许病毒传播的细胞系。病毒的一个基本特性是其进入细胞并产生病毒后代的能力。病毒复制后是宿主细胞的形态和生化变化，最终导致细胞破坏。根据病毒种类，这些变化有几种形式，例如合胞体形成、细胞变圆或细胞溶解。这种可见的细胞变化通常称为细胞病变效应。基于这一特性，开发了许多病毒感染性测定方法（例如，组织培养感染剂量（TCID50）、半数致死剂量（LD50）、痘和斑点测定），以及其他生物/化学测定方法（例如，检测血吸附、血凝和总蛋白）和通过电子显微镜直接计数病毒颗粒。在病毒研究技术的发展中，胚鸡卵（ECE）方法是细胞基础病毒研究技术的替代品。对于一些病毒，ECE仍然经常用于病毒分离。尽管ECE可以支持各种流感病毒分离株的生长，但它们有几个限制，这些限制与胚胎中连续繁殖可能导致血凝素糖蛋白的改变有关，这导致产生与原始分离株不同的卵适应病毒。研究通过血凝试验比较这两种方法，比较不同的细胞系，并使用关于CPE和TCID50/mL的信息。注意到低致病性禽流感病毒在所有细胞系中的复制效率都低于胚胎。然而，作者强调，使用MDCK、CEK和CEF等细胞系可以节省时间和资源，因为它允许处理更多的样本量，尽管病毒复制效率较低，但可能仍然有益。现在，使用CPE作为主要工具之一的细胞方法也已经应用于其他类型的病毒。例如，这种方法被用来研究与天花病毒在系统发育上密切相关的马铃薯痘病毒。使用这种方法可以区分马铃薯痘病毒和密切相关的鼠疫和牛痘病毒，因为它们在细胞病变效应上的差异。此外，基于细胞的方法也被用来研究几种ZIKV分离株之间的差异。在这些研究中，Vero细胞系上的细胞病变效应被用来估计感染滴度，作为研究病毒株的一种方法。发现两种寨卡病毒分离株，NR-50244和NR-50241，可以有效感染HEK293细胞，这很快导致明显的CPE和细胞普遍溶解。现代方法不仅可以寻找特定的细胞系，还可以确定观察到的效应背后的机制，这与不同的细胞受体有关。因此，进行了系统研究ZIKV对各种细胞系的趋向性等研究。ZIKV已被证明对来自不同组织（如肌肉、胎盘和肝脏）的七种以上细胞系具有趋向性。广泛的趋向性可以通过潜在的ZIKV受体在各种器官中的广泛分布来解释。以前曾显示，在人类上皮细胞系中，这种病毒积极复制，导致IFN-β（干扰素β）的抗病毒效应。这些研究报告了一系列有用的细胞系，用于在病毒学实验室中培养ZIKV。从所有上述方法中，我们可以得出结论，基于CPE的策略在不同病毒的研究中广泛使用。然而，这些方法通常耗时，选择一种对特定类型的病毒敏感且理想选择性的细胞系并不总是容易的。此外，提高细胞培养的灵敏度对于开发使用报告器结构检测病毒颗粒的方法很重要，这将有助于改进基于细胞的技术。这个问题可以通过两种方式解决。可以增加细胞培养对特定感兴趣病毒的灵敏度，或者创建一种对所有病毒高度敏感的细胞系，以解决与检测来自患者样本的未知病毒代理有关的问题。这个话题仍然相关，因为有时需要使用几种标准细胞系来检测病毒。如果不使用病毒特异性细胞系，则应使用多个细胞系进行病毒检测。例如，在涉及从16个样本中分离呼吸道病毒的实验中，包括流感样本，3个样本仅在Mv1 Lu细胞中显示CPE；3个仅在MDCK细胞中显示CPE；其余样本在两个细胞系中都显示CPE。已经有许多增加细胞培养对某些病毒的敏感性和许可性的示例。获得的细胞系MDCK-SIAT1对人类流感病毒的敏感性高于对禽流感病毒的敏感性。增加参与细胞表面受体合成的酶表达的方法是有希望的，以创建对不同病毒敏感的细胞系。例如，目前还没有适当的系统来传播诺如病毒（HuNoV）。尽管如此，已知HuNoV与位于细胞膜中的组织血型抗原受体相互作用。这些受体的成熟是一个多阶段过程。然而，有证据表明特定的糖基转移酶等酶参与了这些途径。因此，这些酶的过度表达可能会增加细胞培养对诺如病毒的灵敏度。在另一项与流感病毒有关的研究中，通过对人呼吸道跨膜蛋白酶（TMPRSS2或MSPL）的过度表达来修改MDCK细胞系。在没有胰蛋白酶的情况下，这些细胞支持了基于致病性禽流感病毒的三种重组疫苗的生长。以下作为示例的研究与细胞系对广泛dsDNA基因组病毒—单纯疱疹病毒（HSV）的增加许可性有关。最早生产的敏感细胞系之一用于HSV检测。为了细胞转染，产生了包含病毒反激活蛋白VP16（称为α-TIF或Vmw65）与Moloney白血病病毒的长末端重复（LTR）序列的构建物。VP16的产生使细胞对HSV更敏感，并增加了病毒产量200倍，这适用于CPE测定。为了创建用于病毒学研究的报告器细胞系，需要增加细胞对病毒的敏感性和病毒基因组在细胞中的复制率。解决了这个问题，就可以生成高分辨率的报告器细胞系，并增加疫苗株的生产。已经证明，使用RNA干扰，减少与免疫反应相关的哺乳动物细胞中某些基因的活性，可以增加EV71（脊髓灰质炎病毒和肠病毒71）的增长高达80倍。发现通过使用CRISPR基因编辑技术敲除EP300（组蛋白乙酰转移酶p300）和ZNF205（锌指蛋白205）等基因，可以增加病毒颗粒的产量。类似的研究描述了通过敲除单个Vero细胞宿主基因实现轮状病毒增长18倍的增加。通过敲除BST-2（骨髓基质抗原2）基因，阻断病毒从细胞中的释放，获得了有希望的结果。一些具有脂质包膜的病毒，如MHV68（小鼠γ疱疹病毒68）、猪流行性腹泻病毒、流感病毒和牛痘病毒的释放，在BST-2基因敲除的动物细胞系中显著增加。这项研究的结果显示，这种方法可以增加许多病毒的生产。许多病毒的复制与细胞破坏有关。例如，腺病毒科的成员通过p53非依赖机制启动细胞死亡。在这方面，增加细胞培养的灵敏度的一个有趣的方法是生成抗凋亡的细胞培养。凋亡是一个多组分机制，涉及半胱氨酸蛋白酶或AIF1（同种异体炎症因子1）在半胱氨酸蛋白酶非依赖途径中。敲除所有这些基因是必要的，以抑制这种机制。这个问题通过CRISPR/Cas9技术解决了，其中使用了几个sgRNA，导致这些基因从HEK293T细胞系中移除。进一步的分析表明，携带促凋亡蛋白的病毒颗粒比在标准细胞系中更有效地产生。可以得出结论，细胞培养后的病毒分离和CPE测定是生物样本中病毒鉴定最常用的方法，提高细胞培养灵敏度的现代方法非常有希望。然而，值得讨论的是这种方法目前存在的不足。基于CPE的斑点形成单位（PFUs）的定量是量化不同病毒水平的广泛方法，但这种方法是费力的；例如，大多数病毒家族需要长时间的复制（长达一周），细胞培养在特定条件下进行（湿度、介质的pH值）。此外，病毒的培养需要在处理病原体时采取某些安全预防措施。此外，大多数标准病毒检测协议包括在感染后几天的细胞固定免疫染色。此外，这种方法基于使用合适的细胞系和应用其他病毒检测方法，例如使用抗体检测病毒。由于样本中病毒颗粒计数通常很低，抗原检测抗体并不总是可用的，隔离和生产病毒颗粒需要多次尝试，并且需要开发对病毒感染具有增加灵敏度的细胞系。因此，这种方法不提供快速结果。此外，一些病毒（即拉沙病毒）显示出非常低的PFU值，因此CPE方法的应用无用。即使在广泛的细胞系中相对容易生长的病毒也可能耗时且昂贵。 3.报告器细胞系为了使基于细胞培养的方法更简单、更具信息性和更方便，已经开发了报告器细胞系。报告器细胞系包括在病毒感染后产生报告蛋白的特定细胞。报告器应对感兴趣的病毒非常特定，以允许研究人员检测特定病毒。病毒感染后，病毒蛋白识别报告构建物作为病毒基因组或嵌合蛋白，并产生可检测的信号。报告器细胞系对病毒学研究和疫苗制造非常有用。尽管基于报告器的方法可能需要生长活病原体病毒，因此限于具有特定生物安全级别的实验室，但它们易于扩大规模，比标准病毒学方法劳动强度小，从而大大增加了传染性病毒的检测。这种方法导致了快速、客观的病毒定量研究，包括评估病毒滴度、抗病毒敏感性和中和滴度。使用报告器细胞系与传统基于活病毒的方法相比具有几个相当大的优势。首先，该方法比其他基于活病毒的方法更快。在这种方法中，不需要耗时的培养和免疫染色技术，结果可以在12-48小时内获得。另一个优势是报告器细胞系可以检测少量感染的细胞。例如，显示水痘-带状疱疹病毒荧光素酶活性的报告器细胞系可用于检测每个样本少于10个感染的细胞。报告构建物的关键特征是报告基因。荧光蛋白和酶如β-半乳糖苷酶或荧光素酶可以作为报告基因。值得注意的是，根据它们的基因组结构和生命周期，用于检测不同病毒家族的报告活性的研究中使用了各种元素。在宿主核中复制的负链RNA病毒（正黏病毒，丝状病毒）已使用称为minigenome的构建物进行检测。具有（+）RNA基因组的病毒（阿尔法病毒或丙型肝炎病毒）的报告系统也涉及可以被病毒蛋白识别的minigenome构建物。然而，这组病毒使用了不同的方法。一些具有RNA（+）基因组的病毒（黄病毒和小肠病毒）编码一个包含结构和非结构蛋白的大多肽。这个多肽通过宿主和病毒蛋白酶进一步加工成单个蛋白。当报告器在病毒蛋白酶切割肽的特定位点时被激活，可以检测到病毒感染。逆转录病毒和具有DNA基因组的病毒（疱疹病毒）可以通过带有病毒启动子调节的报告构建物的质粒稳定细胞转染来检测。报告盒的转录是由病毒进入启动的。下面，我们将考虑一些目前在病毒学中用于检测不同病毒家族的报告器细胞系的发展。这些研究可以为基于先前表征的属于同一类别的病毒的报告构建物组装方法的相似性，为新型病毒的检测系统的发展提供基础。 3.1.用于ssRNA(-)基因组病毒检测的报告器细胞系 3.1.1.正黏病毒科，流感病毒流感A和B是广泛传播的病毒，负责人类年度流行病，并与巨大的经济损失有关。流感根据其神经氨酸酶和血凝素类型分为不同的亚型和株。在生物样本中准确和快速地检测这些病毒对于病毒感染诊断和疫苗制造至关重要。报告器细胞系概念首次应用于流感病毒。几年后，李等人为流感A和B病毒开发了报告盒。流感病毒激活的报告器细胞系技术用于研究包括生成一个可以在病毒复制响应中产生任何信号的报告系统。流感A和B病毒的基因组分为八个片段。在感染期间，病毒聚合酶复合体的蛋白和NP核蛋白参与产生RNA(+)链和病毒基因组复制。为了激活这些过程，需要顺式作用元素，这些元素是非翻译的保守区域，在基因组流感病毒RNA序列的末端（50 -和30 -UTR）。用于细胞中的流感病毒A的报告构建物包含位于NP基因组片段的50 -和30 -UTR之间的荧光素酶或GFP（绿色荧光蛋白）编码区域。该构建物克隆到质粒DNA（pDNA）中，并由聚合酶I启动子和终止子元件驱动，生成RNA在50 -或30 -末端没有额外的核苷酸。线性化的pDNA整合到宿主细胞基因组中（图1）。这个构建物在感染期间模仿病毒基因组片段，报告基因表达是使用病毒聚合酶复合体实现的。通过类似方法生成了流感B病毒的报告系统。从HEK293T、BHK-21和MDCK细胞中获得了报告器细胞系。使用一组呼吸道病毒，评估了报告蛋白的激活特异性。特异性诱导很高，流感A和B病毒之间有轻微的交叉激活。尽管在报告器细胞系和MDCK细胞中确定的TCID50相似，但报告器细胞系在获得结果的时间减少（从六天到两天）、增强的客观性和减少繁琐的实验程序方面有明显的优势。这些报告器细胞系已成功用于抗体中和和抗病毒敏感性实验。图1. 用于ssRNA（-）基因组病毒检测的分子报告器系统。报告器系统的原理基于不带有帽子和polyA尾的mRNA的产生。这样的RNA模仿病毒基因组。核糖酶水解RNA或RNA聚合酶I启动子。这个转录物模仿（-）病毒RNA，允许它使用病毒蛋白进行复制。报告蛋白的转录发生在以这种方式获得的（+）RNA上。3.1.2.丝状病毒科，埃博拉病毒埃博拉病毒是一种丝状病毒，它在中非广泛传播，并在西非和欧洲出现。埃博拉病毒感染以急性发热为特征，死亡率约为50%。如前所述，分子方法非常有用，但结果不允许检测感染性病毒。这使得评估特定病毒分离株的致病性并预测对埃博拉病毒研究非常重要的爆发变得困难。标准基于细胞的方法在埃博拉病毒研究中也存在限制，包括在获得结果之前的14天期限。所有这些特征是开发报告器细胞系的关键先决条件。基于负义minigenome的埃博拉病毒检测的报告器细胞系得到了发展，该minigenome由细胞RNA聚合酶II转录的组成型巨细胞病毒（CMV）启动子调控（图1）。添加锤头核糖酶（对应于核糖酶A的一些修改）使mRNA模仿埃博拉病毒基因组。因此，目标转录物没有帽子或聚腺苷酸化。因此，组装了一个由以下顺序排列的功能组件组成的嵌合minigenome：最小病毒启动子、埃博拉病毒RNA的50-UTR、绿色荧光蛋白序列和病毒RNA的30-UTR。该构建物两侧是两个核糖酶。构建的盒式结构通过PiggiBac转座子整合到VERO-E6细胞系基因组中。minigenome的转录由病毒复制复合体介导，产生报告蛋白。该系统对不同种类的埃博拉病毒有效，不与密切相关的马尔堡病毒发生交叉反应。将这种基于细胞的方法与用于病毒定量的免疫荧光测定法进行比较，表明它们具有相同的效率。此外，测试了临床样本，该测定法在报告细胞中产生了阳性结果。 3.2.用于ssRNA(+)基因组病毒检测的报告器细胞系 3.2.1.甲病毒科，阿尔法病毒阿尔法病毒亚科包括辛德比斯病毒，它会导致人类严重发热。病毒的非分段基因组由两个功能区域组成。多聚蛋白的直接翻译，随后被病毒蛋白酶进一步加工，从ssRNA(+)的第一部分开始。这些蛋白对晚期蛋白的转录和病毒基因组的复制是必需的。晚期或结构蛋白由ssRNA(-)转录的亚基因组RNA编码。辛德比斯病毒基因组的cDNA克隆是报告器细胞系发展的第一步。报告构建物基于辛德比斯病毒亚基因组RNA的cDNA。报告盒在Rous肉瘤病毒长末端重复（LTR）启动子的控制下，克隆到质粒中，可以在细胞中恒定表达。这个转录物模仿ssRNA(+)，由晚期启动子和萤火虫荧光素酶ORF组成，两侧是病毒顺式作用元素（图2）。当细胞被病毒感染时，产生识别顺式元素的非结构病毒蛋白，合成ssRNA(-)。这个RNA是合成亚基因组RNA的模板。这些过程模仿病毒生命周期阶段。荧光素酶的翻译从人工亚基因组RNA的晚期启动子开始。表达这个报告盒的质粒转移到BHK细胞中，并获得了对G418有抵抗力的稳定转化体。在辛德比斯病毒复制水平高的情况下，报告蛋白活性在长达4小时的时间内被检测到。此外，应注意，荧光素酶测定与CPE测定等效且同样敏感。然而，在感染后26小时检测到荧光素酶活性时，没有观察到CPE。尽管辛德比斯病毒不被认为是严重的人类病原体，其他与阿尔法病毒更密切相关的病毒（东部/西部马脑炎病毒）和更远亲的病毒（风疹病毒）是重要的病原体，并且对于检测这些病原体，开发特定和准确的技术非常感兴趣。报告系统方案基于这些病毒从亚基因组(+)RNA合成结构蛋白作为病毒复制产物的能力。在第一阶段，细胞中会产生模仿病毒(+)RNA的mRNA。在感染期间，(+)RNA被病毒蛋白识别并复制形成(-)RNA副本。在下一步中，这个(-)RNA作为亚基因组(+)RNA转录的模板链；晚期启动子被病毒蛋白激活，可以合成报告蛋白。图 2. 针对具有亚基因组RNA检测的正义单链RNA病毒的分子报告系统。 3.2.2.甲病毒科，风疹病毒风疹是一种严重的传染性病毒感染。尽管这种病毒引起的疾病在儿童和成人中大多是轻微的，但在怀孕期间，它可能导致死产或胎儿畸形。因此，当怀疑感染风疹时，需要准确诊断。目前，风疹病原体的诊断基于血清学方法和逆转录PCR（RT-PCR）和基于PCR的方法。然而，由于风疹病毒在细胞培养中没有明显的细胞病变效应，因此在细胞培养中分离活病毒进行进一步研究是一种非常费力的方法。因此，这种病毒的检测方法基于风疹病毒和肠道病毒（例如，柯萨奇病毒，回声病毒的成员）的共感染10天，有明显的CPE。当这些病毒共同培养时，由于风疹病毒诱导的干扰素的产生，细胞病变效应和肠道病毒的复制会减少，这表明宿主细胞中存在这种病原体。已经开发了一种具有特定报告器的风疹病毒细胞系，以便于使用基于细胞的方法进行研究，而无需添加辅助病毒。与其他甲病毒一样，风疹病毒基因组由ssRNA(+)组成，分为两部分。第一部分编码病毒RNA复制所需的早期蛋白，第二部分编码病毒粒子的结构蛋白。报告构建物基于基因工程亚基因组RNA（图2）。这个RNA在非结构蛋白领域有一个600 bp的缺失，以防止在没有野生型病毒的情况下合成报告器。结构蛋白区域被完全替换为报告蛋白（氯霉素乙酰转移酶（CAT）或绿色荧光蛋白（GFP））。ssRNA(-)转录成亚基因组RNA已经在体外合成，并通过转染到VERO细胞系。报告蛋白表达仅在对特定病毒感染有反应时发生。这种方法已经证明对实验室株和临床样本中的病毒都敏感。 3.2.3.黄病毒科，丙型肝炎病毒丙型肝炎病毒（HCV）引起严重的急性或慢性肝损伤。HCV感染发展为慢性肝炎，与肝细胞癌高度相关。估计有7100万人患有慢性丙型肝炎病毒感染。丙型肝炎在临床样本中使用基于PCR和免疫学方法进行检测，提供足够的诊断精度。然而，为了研究活病毒的性质，需要基于持续细胞系的方法。由于丙型肝炎病毒在标准细胞培养中难以复制，因此开发了基于基因工程构建物和细胞系的各种方法，模拟不同的病毒生命周期阶段。其中一种方法是通过细胞系中的报告盒来响应病毒进入和感染。此外，有必要为HCV研究和抗病毒药物开发研究开发一种新的基于细胞的方法。许多基于HCV的报告系统基于特定的病毒蛋白酶活性。病毒基因组是一个翻译成多聚蛋白的序列。为了处理成熟的病毒蛋白，多聚蛋白被病毒和细胞蛋白酶切割。下面提供了为丙型肝炎病毒开发的双报告系统的描述。由人巨细胞病毒（CMV）启动子驱动的报告构建物由绿色荧光蛋白（GFP）组成，与分泌型碱性磷酸酶（SEAP）通过HCV NS3/4A蛋白酶的NS4A/B连接位点相连。将开发的报告系统传递到肝癌Huh-7细胞和来自Huh-7细胞的Ava5细胞中，使用慢病毒转导。几周后，选择稳定转化体。在病毒感染期间，病毒表达HCV NS3/4A蛋白酶，并将报告蛋白分开，这些蛋白被检测到（图3）。通过荧光检测、磷酸酶活性分析和西方印迹分析确认了这两种蛋白的存在。在其他研究中，SEAP基因被荧光素酶基因替换。图3. 用于带有基因组多聚蛋白检测的ssRNA(+)基因组病毒的分子报告器系统。报告器系统基于特定病毒蛋白酶在处理原始病毒多聚蛋白以产生最终蛋白中的蛋白酶切割。报告蛋白在病毒蛋白酶的切割位点与病毒蛋白结合，并在感染后释放。另一种基于细胞的报告器方法涉及构建一个模仿病毒基因组的minigenome，该基因组被NS5B RNA依赖性RNA聚合酶(RdRP)识别，这是抗病毒治疗的共同靶标。报告构建物受CMV启动子控制。报告系统模仿病毒ssRNA(-)，由带有IRES序列的50病毒UTR、30病毒UTR和由核糖酶用于从宿主细胞合成的mRNA切割的反义方向的荧光素酶组成（图4）。在HCV感染期间，NS5B RNA聚合酶识别minigenome构建物中的未加工区域并合成ssRNA(+)，以IRES依赖的方式翻译成荧光素酶蛋白。该系统已转移到BHK-21和Ava5细胞中，并用于评估RdRp活性和研究RdRp抑制剂的有效性。因此，HCV报告细胞系可以成为研究HCV性质和寻找HCV治疗新化合物的有用工具。图4. 模仿用于丙型肝炎病毒(HCV)检测的基因组的分子报告器系统。携带报告构建物所有元素的mRNA转录后，末端片段被核糖酶自我掐断。这样的mRNA模仿(-)RNA病毒基因组。病毒蛋白在感染期间识别此RNA并复制它。在(+)RNA链上，有一个用于报告蛋白合成的内部核糖体进入位点。 3.2.4.黄病毒科，黄病毒登革病毒(DENV)和寨卡病毒ZIKV是人类病原体，能够引起大规模爆发。登革病毒感染的机制尚未完全了解。研究ZIKV和DENV感染对细胞过程的影响是必要的，以预测疾病的严重程度并开发针对性和有效的治疗方法。对这些感染的实验室研究存在与其他病毒家族相似的限制。通常使用免疫分析或基于扩增的方法检测DENV感染的细胞反应。例如，已经开发了一种用于感染细胞培养中DENV的免疫染色程序。然而，由于DENV蛋白不在细胞表面暴露，因此需要前固定和渗透细胞以准确检测病毒感染；因此，这种方法不允许观察活细胞中的感染。同样，识别细胞中ZIKV感染的基本方法依赖于带有固定和渗透的免疫染色程序。使用基于扩增的方法和测序的限制与其他病毒相同，不允许我们使用活病毒进行研究。为了实时观察DENV感染，开发了一种基于病毒蛋白酶活性的报告构建物的Vero细胞系。报告系统与丙型肝炎病毒的蛋白酶诱导报告盒高度相似（图3）；然而，报告蛋白通过NS3病毒丝氨酸蛋白酶识别位点与病毒蛋白NS4B的部分连接。所得到的细胞系被四种DENV血清型感染。检测到GFP表达，从而相应地检测到病毒感染的开始。因此，可以使用此报告器在不破坏细胞的情况下检测DENV感染。然而，这种方法存在一个问题：报告细胞系中编码的NS4B片段据报道会影响细胞功能（例如，抑制I型IFN信号）。已经使用了类似的方法来研究ZIKV感染。病毒NS4B蛋白编码序列和病毒蛋白酶切割位点与绿色荧光蛋白在组成型启动子的控制下克隆在同一开放阅读框中。肝细胞癌（Huh7细胞系）和腺癌细胞（A549细胞系）通过表达报告器的慢病毒颗粒进行转导。在生产寨卡病毒的感染细胞中，病毒蛋白酶NS2B和NS3与其切割位点相互作用，可以使用荧光显微镜检测GFP的表达。所描述的报告系统可以检测ZIKV的非洲和亚洲株，但相同的构建物不会被DENV激活。这个系统对ZIKV感染的研究非常重要。 3.2.5.小核糖核酸病毒科，肠病毒肠病毒是包括许多种类病毒的属，如柯萨奇A和B病毒、回声病毒（肠病毒A和B）、脊髓灰质炎病毒（肠病毒C）和肠病毒68或72。这些病毒是人类病毒病原体中最普遍的。肠病毒是许多严重人类疾病的原因，如无菌性脑膜炎、脑炎、心肌炎、心包炎和手足口病(HFMD)。水环境被肠病毒污染是肠病毒传播的主要原因，因为这种病毒在水中非常稳定，并且感染剂量低。肠病毒感染的大规模爆发使得有必要开发一个快速可靠的病毒监测系统。传统的肠病毒检测和定量方法基于细胞培养中CPE的观察。然而，这种类型的测定非常费力，不能产生快速结果；因此，它不适用于常规应用。依赖逆转录PCR的分子方法对于检测病毒基因组等价物来说更加快速和准确。这种方法的限制在于它被认为是对病毒传染性能力的间接评估。基于细胞的报告系统的发展代表了快速实验程序和揭示病毒性质及病毒感染细节的研究之间的折衷。肠病毒以及其他带有ssRNA(+)基因组的病毒产生特定蛋白酶，这些蛋白酶对成熟病毒蛋白的处理是必需的。其中之一是高度选择性和高效性的蛋白酶2A(2Apro)。因此，肠病毒的报告构建物基于使用这种蛋白酶特异性切割融合蛋白（图3）。该系统通过荧光共振能量转移(FRET)使用受体荧光蛋白EYFP(增强型黄色荧光蛋白)和供体ECFP(增强型青色荧光蛋白)之间的相互作用，它们由包含2Apro切割位点的短肽序列连接。编码供体和受体蛋白的盒式结构由组成型真核启动子驱动，克隆到表达质粒中。BGMK细胞转染了构建的表达报告系统的质粒，并获得了对G418有抵抗力的稳定转化体。在肠病毒感染期间，2Apro被表达并切割了其自身的特定位点。此后，两种荧光蛋白之间的相互作用被破坏，导致ECFP荧光强度增加。因此，可以在感染后大约7.5小时内检测到少量的病毒病原体。所得到的报告细胞系对三种肠病毒感染显示ECFP荧光，并且不被不产生2Apro的甲型肝炎病毒(HAV)激活。据推测，这样的报告系统可以用于研究基于抗蛋白酶活性的抗病毒药物的开发。 3.3.用于逆转录病毒检测的报告细胞系 Retroviridae，慢病毒慢病毒属的主要传染性病原体是牛免疫缺陷病毒（BIV）和人类免疫缺陷病毒（HIV）。HIV会导致获得性免疫缺陷综合征（AIDS）。AIDS会导致免疫系统逐渐功能障碍，并引发严重的感染和多器官功能障碍。BIV是一种与HIV在关键遗传和结构特征上相似的慢病毒。此外，BIV还是感染牛免疫系统功能障碍相关病理过程的原因。确定病毒库中感染性颗粒的数量对于研究病毒生命周期阶段、开发病毒药物疗法以及在病毒基因组中寻找突变至关重要。可以从病毒的终点稀释中确定HIV库的定量滴度，但这些检测对于大量样本来说非常费力。因此，进行了专注于报告细胞系开发的研究。在HIV研究中，细胞对HIV的敏感性是由细胞表面存在CD4（分化群4）受体所赋予的。第一条HIV报告细胞系是在20世纪80年代末开发的，基于转染的淋巴细胞系中的转录激活。CAT报告基因在HIV-1的LTR启动子的控制下克隆，并且可以被HIV Tat转录激活因子诱导（图5）。这些报告细胞被HIV激活，并且在较小程度上被人类T细胞白血病病毒4型和猴免疫缺陷病毒（SIV）激活。报告细胞系没有被马传染性贫血病毒、人类T细胞白血病病毒1型和2型，或单纯疱疹病毒1（HSV1）激活。另一种携带β-半乳糖苷酶基因的细胞系，作为HIV检测的报告基因，依赖于HeLa细胞。同样的方法被用来从人胶质母细胞瘤和猕猴乳腺肿瘤中产生HIV报告细胞系。此后，由HIV LTR驱动的GFP被用来生成改良的HeLa CD4细胞，用于检测HIV-1感染。图5. 用于逆转录病毒和双链DNA基因组病毒检测的分子报告器系统。在未感染的细胞中，病毒启动子没有mRNA合成。当细胞感染发生后，病毒蛋白存在下开始转录和翻译报告蛋白。然而，基于HIV LTR的报告系统有一些缺点。首先，这种系统在没有Tat的情况下表现出一定的基础表达水平。第二，它可能被细胞转录因子、细胞因子、增殖素甚至病毒包膜蛋白非特异性激活。有人提出，通过使用另一种调控蛋白Rev作为转录激活因子，可以解决这些问题。产生了一个新的含有GFP的构建物。使用荧光蛋白报告系统的优点在于其简单性，以及使用广泛可用的仪器检测和感染活细胞的能力。虽然GFP荧光信号在甲醛固定下是稳定的，但它也可以在未固定的活细胞中轻易检测到。GFP检测可以使用常规荧光显微镜和荧光素滤光片组合进行。此外，表达GFP报告蛋白的活细胞可以通过常规流式细胞术进行计数和排序。基于RT-PCR的BIV检测方法已经推出。虽然这种病毒检测方法敏感且快速，但不能用于评估感染性病毒滴度，这是该方法的一个相当大的局限性。因此，采用了与HIV相同的方法来生产BIV的报告细胞系。报告细胞系基于可以被BIV感染的牛、犬和兔组织培养。CAT基因被用作报告基因，由BIV的LTR启动子驱动。在可检测到CAT基因基础表达的牛和犬细胞系中，细胞因子在LTR表达中起作用。然而，感染导致表达增加（50至80倍）。牛白血病病毒或牛合胞体病毒仅导致表达增加2至3倍。在BIV报告细胞系的进一步开发中，研究人员转而使用GFP作为报告基因，仍然由BIV LTR驱动。所得到的细胞系作为与BIV非常密切相关的病毒Jembrana病病毒的报告线发挥作用，但不是牛泡沫病毒的报告器。目前正在使用基于细胞系的方法研究的另一种逆转录病毒是猿泡沫病毒（SFV）。基于BHK-21细胞构建了SFV的报告细胞系。获得了由SFV LTR驱动的β-半乳糖苷酶基因的报告细胞系。在这项研究中，使用了几种SFV菌株作为实验室适应菌株，并且还使用了来自两只黑猩猩、两只大猩猩和一只猕猴的血液中的天然菌株。在感染自体菌株后72小时内启动报告基因表达。另一种SFV菌株获得了相同的结果。细胞被证明是量化不同菌株的有效工具。作者表明，不同SFV菌株的复制速率在不同细胞中是不同的。 3.4.双链DNA基因组病毒 3.4.1.疱疹病毒科，单纯疱疹病毒 HSV-1型和2型感染在全球普遍存在。由疱疹病毒感染引起的发病率是一个重要问题。HSV感染可以引起一系列疾病，并改变感染者的免疫状态。此外，免疫功能低下的患者（AIDS患者、器官移植受者、白血病患者）的HSV感染会导致严重疾病。尽管HSV在哺乳动物细胞培养中繁殖良好，但由于必须对感染细胞进行免疫染色以识别抗原，因此病毒感染的检测是一个繁琐的过程，以便进行准确诊断。使用这种方法，在大多数情况下，可以在24至48小时内获得结果。在1990年代初开发了一种报告细胞系，允许更快地检测这种病毒。双链DNA病毒的报告系统与逆转录病毒的报告构建物类似（图5）。在这个盒式结构中，大肠杆菌LacZ基因被用作报告基因，克隆在HSV ICP6（HSV核糖核苷酸还原酶大亚基）启动子的控制下，进入一个表达真核载体。然后，使用设计好的报告构建物和携带新霉素抗性基因的质粒转化BHK细胞。为了获得稳定的报告细胞系，BHK细胞在含有选择性抗生素的培养基中培养。这种涉及病毒启动子的报告系统的便利性在于，HSV ICP6启动子在未感染的细胞中没有被激活，HSV的激活非常具体；因此，在同一培养物中容易区分感染和未感染的细胞。使用所描述的报告系统，通过β-半乳糖苷酶活性在接种后几小时内（最多6小时）发生感染检测。使用这种报告细胞系进行病毒检测的有效性与在病毒学研究中使用的标凈基于细胞的方法相当，例如斑点分析。两种类型的HSV都激活了所开发的报告盒，而其他Herpesviridae成员（人巨细胞病毒（HCMV）、带状疱疹病毒（VZV））的非特异性激活则没有发生。因此，指示细胞系可以为在细胞培养中快速观察HSV感染提供有用的方法。 3.4.2.疱疹病毒科，γ-疱疹病毒最重要的γ-疱疹病毒种类之一是与卡波西肉瘤相关的疱疹病毒（KSHV或人疱疹病毒8（HHV8））。这种病毒可以引起卡波西肉瘤，这是一种经常在AIDS患者中发展的癌症。通过基于细胞的方法研究病毒生命周期特征的一个障碍与病毒在大多数细胞系中难以培养的事实有关。因此，使用诸如确定病毒滴度这样的标准方法具有挑战性。因此，报告细胞系的开发基于至少在低水平上允许的细胞（HEK293T细胞、永生化内皮细胞、一些癌细胞系等。）。如前所述，基于PCR或基于ELISA的基因组等价物测量的分子生物学方法不能反映病毒的传染性能力。用于指示细胞系开发的方法是使用以下方法。HH8基因组编码主要调节剂Rta，它激活一系列宿主和病毒启动子，并调节病毒生命周期中裂解程序的激活。Rta调节的启动子之一是多聚腺苷酸化核（PAN）RNA的细胞启动子。这个启动子片段可以被野生型病毒激活，并且lacZ基因被克隆到报告质粒中。然后，稳定转染HEK293T细胞。研究表明，HHV8病毒感染激活了报告盒，并且β-半乳糖苷酶活性水平是病毒剂量依赖性的。 3.4.3.疱疹病毒科，水痘-带状疱疹病毒水痘-带状疱疹病毒（VZV）是水痘的原因，可能由于初次感染或感染细胞中病毒的再激活而出现严重并发症。可用的、快速的、针对性强的方法允许检测VZV是耗时和费力的，这使得开发针对性的病毒治疗和耐药菌株鉴定变得复杂。基于病毒启动子特异性激活的VZV报告细胞系已经开发出来。测试了几个VZV启动子序列，最好的序列被证明是ORF9启动子，因为它具有特异性、强烈的激活。荧光素酶基因位于ORF9启动子的下游。质粒组装后，MeWo细胞和BSC40细胞被转染，并使用G418筛选稳定转化体。所获得的细胞克隆之一被用于进一步研究，因为它在对VZV的反应中显示出高荧光素酶活性，并且在没有VZV的情况下背景活性水平低。此外，在感染细胞和未感染细胞与报告盒共培养的情况下，报告器被激活。为了检测非特异性报告器再激活，细胞系被HCMV、人疱疹病毒6（Z29）和人疱疹病毒7（SB）感染。在所有这些情况下，都没有发现荧光素酶活性。然而，HSV1感染的指示细胞激活了荧光素酶活性，与VZV感染后24小时观察到的水平相似。然而，HSV1感染的细胞在感染后48小时表现出强烈的细胞病变效应；因此，荧光素酶活性降低，这使得区分HSV1感染和VZV感染变得可行。 4.结论病毒检测方法包括一系列分子和细胞方法。基于细胞的方法在病毒学研究中占有相当大的部分。任何用于病毒检测的细胞系都必须具有灵敏度特征，这指的是易感性和许可性。通常，灵敏度是细胞被少量病毒独立于物种感染的能力。在实验室中，可以通过敲除细胞抗病毒反应基因或通过简单地在实验室收藏的不同培养物中选择敏感细胞系来实现许可性。易感性是细胞系被特定病毒种类感染的属性。在实验室中，可以通过增加病毒结合细胞受体的表达来增加易感性。改善这两个属性可以使细胞系成为病毒分离和研究的便捷工具。传统上，病毒感染的研究是基于CPE的基础上进行的，但这种方法并不适用于每种病毒，在这种情况下需要额外的耗时研究。这个问题已经通过使用携带分子传感器系统的细胞系来解决，这些系统允许通过存在容易检测的报告蛋白来检测感染性病毒代理。这种方法可以用于定量研究，作为CPE方法的更快的类似物。通过整合分子技术来提高分子报告器构建的灵敏度，可以实现病毒学中基于细胞方法的优化。识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入生物制品微信群！请注明：姓名+研究方向！版权声明本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。

基因疗法核酸药物

2024-06-28

·生物制品圈

疱疹病毒治疗新策略：探索治疗性疫苗

综述：疱疹病毒建立潜伏感染，并且大多数频繁复发，在健康个体中导致症状和病毒脱落。在免疫受损的患者中，复活的病毒可能导致严重疾病。持续的EB病毒与免疫受损和非免疫受损人群中的几种恶性肿瘤有关。尽管在血液中测量到了强大的病毒特异性抗体和T细胞免疫，但大多数疱疹病毒仍然会发生复发和脱落。治疗性疫苗的批准用于减少带状疱疹表明，为其他疱疹病毒开发有效的治疗性疫苗应该是可行的。然而，水痘-带状疱疹病毒与其他人类疱疹病毒不同，因为它通常只在水痘和带状疱疹期间脱落。与预防性疫苗不同，其中免疫的相关性是抗体功能，T细胞免疫是唯一有效的治疗性疱疹病毒疫苗——带状疱疹疫苗的免疫相关性。尽管大多数治疗性疫苗的研究都测量了血液中的免疫，但对于某些病毒，复发部位的细胞免疫对于有效的治疗性疫苗至关重要。这篇综述总结了针对单纯疱疹病毒、巨细胞病毒和Epstein-Barr病毒的治疗性疫苗的现状，并提出了未来发展的方法。摘要：疱疹病毒会导致潜伏性感染，并且大多数会频繁复发，在健康个体中引起症状和病毒脱落。在免疫受损的患者中，病毒的复活可能导致严重疾病。持续的EB病毒与免疫受损和非免疫受损个体中的多种恶性肿瘤有关。尽管血液中检测到了强大的病毒特异性抗体和T细胞免疫，但大多数疱疹病毒仍会发生复发和脱落。批准用于减少带状疱疹的治疗性疫苗表明，为其他疱疹病毒开发有效的治疗性疫苗是可行的。然而，水痘-带状疱疹病毒与其他人类疱疹病毒不同，因为它通常只在水痘和带状疱疹期间脱落。与预防性疫苗不同，在预防性疫苗中，免疫的相关性是抗体功能，而T细胞免疫是唯一有效的治疗性疱疹病毒疫苗——带状疱疹疫苗的免疫相关性。虽然大多数治疗性疫苗的研究都测量了血液中的免疫反应，但对于某些病毒，复发部位的细胞免疫对于有效的治疗性疫苗至关重要。本综述总结了针对单纯疱疹病毒、巨细胞病毒和Epstein-Barr病毒的治疗性疫苗的现状，并提出了未来发展的方法。引言疱疹病毒感染会持续个体一生，并可能在复发或与恶性肿瘤相关时带来显著的发病率（见表1）。单纯疱疹病毒（HSV）的复发会导致生殖器或口腔HSV的复发和免疫受损患者的内脏疾病。水痘-带状疱疹病毒（VZV）的复发会导致带状疱疹和免疫受损患者的器官疾病。巨细胞病毒（CMV）的复发可在移植受者中引起严重的器官疾病。Epstein-Barr病毒（EBV）与多种上皮细胞癌和B细胞淋巴瘤有关；在这些癌症中，至少有一个病毒基因在每个肿瘤细胞中表达。已经为HSV、CMV和EBV进行了多次预防复发的治疗性疫苗的临床试验，但尚未有疫苗获得许可。治疗性疱疹病毒疫苗可能除了预防病毒复发或在EBV的情况下治疗与病毒相关的恶性肿瘤之外，还有额外的好处。慢性病毒感染可能会扰乱免疫系统，导致自身免疫疾病的风险增加。EBV是多发性硬化症的危险因素。慢性病毒感染还与持续炎症有关；一些研究报告称，患有慢性疱疹病毒感染的患者患痴呆症的风险增加。接种减毒带状疱疹疫苗病毒的人被报告患痴呆症的风险较低。本综述评估了人类疱疹病毒治疗性疫苗的历史，并提出了疫苗开发的原则。表 1. 与复发性和持续性选定疱疹病毒感染相关的疾病原则证明：治疗性疱疹病毒疫苗的可行性两种治疗性疫苗对带状疱疹的成功证明了治疗性疫苗对疱疹病毒是可能的。虽然抗体功能是预防初次感染的许可病毒疫苗的保护相关性，包括水痘疫苗，但VZV特异性CD4细胞被认为是VZV的保护机制相关性。减毒活带状疱疹疫苗（Zostavax）和亚单位带状疱疹疫苗（VZV糖蛋白E与AS01b佐剂配方，Shingrix）均降低了带状疱疹的发病率。这两种疫苗都诱导了针对VZV的病毒特异性CD4+和CD8+ T细胞反应以及介导抗体依赖性细胞毒性（ADCC）的抗体，这两者对杀死病毒感染的细胞都很重要。此外，VZV糖蛋白E作为病毒Fc受体，针对糖蛋白E的抗体可能阻断病毒Fc受体活性，从而增强ADCC。尚未为HSV、CMV或EBV批准治疗性疫苗。然而，HLA匹配的病毒特异性T细胞输注在减少CMV和EBV复发相关的病毒血症和治疗疾病方面的成功表明，如果疫苗能够诱导类似的病毒特异性T细胞反应，那么它应该是有效的。病毒特异性T细胞的几个特性被认为对其活性很重要，这些特性可能对治疗性疫苗也很重要。首先，应存在CD4+和CD8+效应T细胞，以确保最佳抗病毒活性。其次，应识别不止一种病毒表位，以减少因病毒抗原突变或多态性而导致效力受损的风险。第三，病毒特异性T细胞必须识别与I类和II类MHC抗原相关的病毒抗原。基于病毒特异性T细胞在减少与CMV和EBV相关的疾病方面的成功，疫苗诱导这些细胞应是治疗性疫苗的重要目标。 HSV、CMV和EBV治疗性疫苗的困难两种疫苗在预防带状疱疹方面的有效性表明，其他疱疹病毒的治疗性疫苗可能也是可能的。然而，VZV与其他人类疱疹病毒有几个不同之处，这些病毒的治疗性疫苗尚未获得批准。与其他人类疱疹病毒不同，VZV从没有症状的疾病（水痘或带状疱疹）的病毒感染者那里脱落和传播的频率要低得多。在没有接种疫苗的情况下，大约50%的80岁或以上的人一生中会有一次带状疱疹发作。因此，在没有重新接触VZV的老年未接种疫苗的个体中，免疫系统可能在初次感染后超过50年没有接触到VZV。因此，带状疱疹的治疗性疫苗可能在成人中诱导大量增加的VZV特异性免疫。 HSV、CMV和EBV在唾液中非常频繁地脱落，因此，免疫系统经常接触到复制病毒。在一项研究中，主要是无症状HSV患者的患者每天四次擦拭他们的口腔和生殖器粘膜，20.5%的生殖器拭子和11.6%的口腔拭子HSV检测呈阳性。因此，尽管HSV经常复发并使免疫系统接触到病毒蛋白，但免疫系统通常无法防止复发。CMV和EBV也经常在唾液中脱落。因此，这些病毒的治疗性疫苗可能需要诱导比自然免疫时更强大的免疫反应。 HSV、CMV和EBV与VZV不共有的一个共同特征是它们表达大量免疫逃逸基因，这些基因可能允许尽管有强大的免疫反应仍然发生复发。这些病毒编码的蛋白质能够抑制干扰素、抗体和补体功能、病毒抗原呈现给MHC I类和II类，以及NK细胞活性。相比之下，VZV是人体疱疹病毒中最小的，尽管它有一些免疫逃逸基因，但它缺乏其他疱疹病毒编码的许多免疫逃逸基因的同源物。因此，对于免疫系统和疫苗来说，预防VZV的复发可能比预防其他人体疱疹病毒的复发更容易。为疱疹病毒治疗性疫苗选择靶点从使用病毒特异性T细胞治疗中学到的教训，我们可能会选择相同的表位作为CMV和EBV治疗性疫苗的靶点表位。Psouleucel T细胞针对CMV的即刻早期1（IE1）和pp65的包裹蛋白，EBV的IE BZLF1，以及EBNA1和LMP2潜伏蛋白。已经使用了几种方法来选择治疗性疱疹病毒疫苗的靶点（表2）。表2. 选择治疗性疫苗病毒靶点的选项第一种方法是确定大多数人经常识别为T细胞靶标的病毒蛋白。早期研究表明，外周血液中HSV-2特异性CD8+ T细胞最频繁的靶标（按降序排列）是UL39（核苷酸还原酶的大亚基）、UL25衣壳蛋白、糖蛋白B（gB）、IE蛋白ICP0，以及包裹蛋白（UL46和UL47）。HSV糖蛋白（gD、gB）、包裹蛋白和IE蛋白一直是HSV治疗候选疫苗的主要焦点（图1A）。CMV的类似研究表明，病毒特异性CD8+ T细胞最频繁的靶标（按降序排列）是UL48和pp65包裹蛋白以及IE1和IE2蛋白，而最常见的CD4+ T细胞靶标（按降序排列）是gB、pp65、UL86衣壳蛋白、UL99包裹蛋白和IE2蛋白。pp65、IE1和IE2蛋白以及gB一直是CMV疫苗治疗试验中使用的主要免疫原（图1B）。对EBV的研究表明，CD8细胞最常见的靶标是IE蛋白BZLF1和BRLF1、BMRF1蛋白（聚合酶的一个组成部分）和EBNA3潜伏蛋白。EBV CD4细胞最常见的靶标是EBNA1、EBNA2和EBNA3潜伏蛋白。EBNA1和LMP2一直是治疗性EBV疫苗的主要靶标（图1C）。图 1. 受感染细胞上治疗性疫苗的病毒组分。(A) 单纯疱疹病毒（糖蛋白D [gD]、gB、即刻早期 [IE] ICP4、UL46 和 UL49 包裹蛋白），(B) 巨细胞病毒（IE1、IE2、pp65 包裹蛋白、gB），以及 (C) EB病毒感染的细胞（即刻早期 BZLF1 蛋白、LMP2、EBNA1）。根据它们在受感染细胞中的位置显示蛋白质，但病毒肽段通过MHC I类或II类呈现在细胞表面。另一种方法是观察免疫血清阴性者的T细胞靶标。这些个体已经接触过病毒并对病毒蛋白有T细胞反应，但他们没有被感染，因为他们没有病毒抗体，并且在血液或分泌物中没有检测到病毒。已经描述了免疫血清阴性的个体在接触HIV、HSV和EBV但未被感染的人中。目前尚不确定免疫血清阴性的个体是否真的受到感染的保护，如果是，这种保护能持续多久。一项研究中，免疫血清阴性个体中HSV特异性T细胞最常见的靶标是UL39，其次是IE ICP4和ICP0蛋白和UL29（主要的DNA结合蛋白）。已经对HSV进行了额外的分析，研究了有症状复发频率不同的人；由于在健康人中复发几乎总是无症状的，因此尚未对CMV和EBV进行类似的分析。更好地了解为什么有些人只有无症状的HSV复发，而其他人有频繁的症状复发，可能为开发HSV治疗性疫苗提供重要线索。对HSV-2蛋白的T细胞反应的分析组合包括（a）血清阳性个体中T细胞反应的总体频率，（b）无症状与有症状感染者的响应，（c）免疫血清阴性与有症状个体中更高的反应，以及（d）受保护与未受保护个体中更高的反应（基于他们在已知暴露后抵抗感染的能力、有无症状感染或没有复发疾病）。利用这些分析，ICP4、UL2（尿嘧啶DNA糖基化酶）、UL11（一种包裹蛋白）和UL40（核苷酸激酶的小亚基）是CD4+和CD8+ T细胞最常针对的HSV蛋白。针对IE和包裹蛋白的病毒蛋白的大量可能反映了它们在感染期间的早期表达或它们在感染细胞的病毒粒子中的存在，导致它们在病毒免疫逃逸分子能够阻止病毒蛋白的识别之前暴露给T细胞。治疗性疫苗的另一种方法是针对免疫逃逸分子。如上所述，许多疱疹病毒编码抑制免疫反应的蛋白质。一种编码抑制抗体和补体活性的gE和gC的HSV mRNA疫苗正在进行I期临床试验（ClinicalTrials.gov NCT05432583）。除了病毒特异性T细胞外，抗体效应功能也可能对杀死病毒感染的细胞很重要（表3）。ADCC、补体介导的细胞毒性和抗体依赖性细胞吞噬作用可能除了T细胞外，还有助于杀死疱疹病毒感染的细胞。目前，尚不确定抗体效应功能与病毒特异性T细胞在预防病毒复发方面的相对贡献是多少。表3. 治疗性疱疹病毒疫苗的目标病毒特异性T细胞在HSV中的位置重要性为了使疫苗减少生殖器或口腔HSV的复发，病毒特异性CD8+ T细胞应该存在于复发部位或其附近。HSV-2特异性细胞，包括CD8组织驻留记忆T细胞，在生殖器粘膜中存在，并在复发期间数量增加。几乎所有关于T细胞识别的病毒蛋白的研究都是使用来自外周血液的细胞进行的。在复发期间，HSV-2特异性记忆T细胞从循环系统进入组织，并补充组织记忆T细胞反应。皮肤淋巴细胞相关抗原（CLA）是一种在HSV特异性CD8+ T细胞上表达的归巢标记，它可能对他们到达皮肤的能力很重要。2003年，Koelle等人从10名HSV-2感染患者中分离出表达高水平CLA的HSV-2特异性CD8+ T细胞克隆。这些克隆识别病毒包裹蛋白（52%的克隆）、衣壳蛋白（17%）、IE蛋白（13%）、糖蛋白（3%）和其他蛋白（14%）。 T细胞靶向的病毒蛋白可能与血液中的和病毒复发部位的不同。2001年，Koelle等人研究了3名患者的生殖器病变中的病毒特异性T细胞反应，发现最常见的反应是针对包裹蛋白UL47、UL49和ICP0。对8名患者的生殖器组织进行的后续研究发现，最常见的T细胞反应是针对gD（6名患者）、gB和UL39（4名患者）以及UL23（病毒胸腺嘧啶激酶，3名患者）。在动物模型中，已经成功采用了诱导病毒特异性T细胞从外周血液流向生殖器粘膜的策略。这包括（a）用外周疫苗对动物进行初次免疫，以及（b）通过应用趋化因子或免疫刺激剂将T细胞吸引到生殖道。在小鼠中的初步研究使用了趋化因子CXCL9和CXCL10来选择性地招募CD8细胞到生殖器粘膜。在豚鼠中的一项研究使用了局部应用的伊马克莫德，招募了CD8和CD4细胞；生殖器粘膜中CD4细胞数量的增加可能会增加HIV感染的风险。另一种方法可能是使用检查点抑制剂来增强治疗性疫苗的效果。在动物模型中，将抗-PD-1抗体添加到治疗性人乳头瘤病毒疫苗中增强了疫苗的效果，在人类试验中也报告了有希望的结果。然而，抗-PD-1抗体可能引起严重的免疫介导的并发症，包括结肠炎、肺炎、肝炎和内分泌病；因此，在接种治疗性疫苗的健康人群中使用抗-PD-1抗体的风险可能大于其益处。大多数在感觉神经节中的效应CD8+ T细胞在HSV潜伏期表达高水平的PD-1，这与功能耗竭的表型和体外复发增加相关。 HSV的治疗性疫苗 HSV可以在口腔和生殖器部位复发，导致病变。2023年，NIH发布了一份名为“2023-2028单纯疱疹病毒研究战略计划”的文件，其中指出“治疗性疫苗将针对已有HSV感染的患者，以引发免疫反应，减少病毒复发和病变发作的频率，并减少病毒脱落。治疗性生殖器疱疹病毒疫苗还必须减少脱落；如果一种疫苗导致症状性复发减少，但不减少无症状脱落，它可能会导致病毒传播的增加。虽然目前许可的抗病毒药物的抑制性抗病毒治疗减少了生殖器HSV的复发，并在其他健康人群中减少了大约50%的传播，但它们必须每天服用才能有效。大多数HSV的预防性疫苗都集中在病毒糖蛋白gD、gB、gE和gC上。使用灭活HSV、从感染细胞中提取的病毒抗原、从感染细胞中提取的HSV糖蛋白、铝佐剂中的重组gD、MF-59中的重组gD和gB、删除UL39的减毒活HSV和删除gH的复制缺陷HSV的治疗性疫苗的安慰剂对照试验没有成功进入进一步的临床试验。最近，一种表达截短的泛素化gD和全长gD的DNA疫苗在增强免疫后与安慰剂接受者相比，病毒脱落减少了约50%，但与安慰剂相比没有减少平均发作次数。一项针对表达gD和UL46包裹蛋白的DNA疫苗的随机、双盲、安慰剂对照研究减少了57%的新生殖器病变，但没有减少脱落（ClinicalTrials.gov NCT02837575）。一种含有32个HSV-2肽和热休克蛋白的疫苗，用皂苷作为佐剂，诱导了50%以上的疫苗接受者的病毒特异性T细胞反应，并减少了15%的病毒脱落（Agenus；ClinicalTrials.gov NCT01687595）。最有希望的疫苗之一是由Genocea生产的，包含ICP4的一部分与gD（删除了其跨膜域）在Matrix-M中作为佐剂。该疫苗在几项临床试验中进行了测试，并诱导了中和抗体和多功能病毒特异性T细胞反应。在进行的最后一项研究中，当疫苗与两种不同剂量的Matrix-M一起给予时，与安慰剂相比，它将病变率降低了37%-51%，并将复发持续时间减少了1.2天。该疫苗与接种疫苗前的水平相比，在1年内显著减少了病毒脱落。作者得出结论，“仍然需要确定的是一种疫苗策略，它将复发性疾病和复发性病毒脱落减少了约50%，大约一年，是否是比每天必须服用的更有效的抗病毒药物的可行替代品。”该疫苗尚未进一步研究。目前，正在进行两项治疗性疫苗试验。一项是HSV mRNA的剂量范围研究（Moderna，ClinicalTrials.gov NCT06033261），另一项是成分未披露的疫苗（GSK，ClinicalTrials.gov NCT05298254）。治疗性疫苗对CMV CMV是导致出生缺陷的最常见感染原因，也是器官移植和造血干细胞移植（HSCT）接受者中最重要的病毒感染。虽然大多数预防性CMV疫苗针对gB和五聚体复合物（gH/gL/UL128-131），但大多数治疗性疫苗针对pp65、IE1或IE2蛋白，或gB。与主要针对健康或轻度免疫受损个体的HSV和VZV治疗性疫苗不同，CMV的治疗性疫苗主要针对免疫受损人群，如移植接受者。这些人通常对疫苗的反应较差，这可能使得开发成功的CMV治疗性疫苗特别困难。抑制性抗病毒疗法用于减少移植接受者中与CMV相关的复发和疾病。目前可用的CMV抗病毒药物存在问题，包括与其他药物的众多相互作用（来特莫韦）、骨髓毒性（更昔洛韦）或肾脏毒性（福斯卡尼特）。因此，有效的CMV治疗性疫苗可以避免使用具有严重副作用和药物相互作用问题的药物。最早进行临床试验的治疗性疫苗之一是减毒的CMV Towne株。对血清阳性的肾脏移植接受者的疫苗接种没有带来益处；然而，血清阴性接受者的CMV疾病较轻。更多的近期试验使用了CMV亚单位、DNA、肽和病毒载体疫苗。对CMV血清阳性和血清阴性的肾脏或肝脏移植接受者使用CMV gB在MF59佐剂中的疫苗接种，对CMV血清阳性器官移植接受者没有保护作用；然而，血清阴性接受者从血清阳性捐献者那里获得的器官有更短的病毒血症持续时间和需要较少天数的抗病毒治疗。在CMV血清阳性HSCT移植接受者中进行的表达gB和pp65的DNA疫苗的III期试验显示，对CMV最终器官疾病和全因死亡率（主要终点）、病毒血症率或抗病毒治疗的使用没有影响。一个表达gB和pp65的淋巴细胞性脉络膜炎病毒复制缺陷疫苗（ClinicalTrials.gov NCT02798692）在从CMV血清阳性捐献者那里接受肾脏的CMV血清阴性肾脏移植接受者中无效。在HSCT捐献者中测试了一种表达CMV pp65的痘病毒（canarypox）载体疫苗的II期试验（ClinicalTrials.gov NCT00353977），但结果尚未报告。一种表达CMV pp65、IE1和IE2的痘病毒（改良的安卡拉牛痘）载体在CMV血清阳性HSCT接受者的II期试验中诱导了病毒特异性T细胞，并减少了大约50%的累积事件（病毒复发、需要治疗的病毒血症或CMV器官疾病），尽管疫苗和安慰剂之间的差异不显著。这种疫苗目前正在进行几个额外的I/II期或II期试验：在CMV血清阳性儿童接受HSCT（ClinicalTrials.gov NCT03354728）、在CMV血清阳性成人进行HSCT（ClinicalTrials.gov NCT04060277）、在HSCT捐献者（ClinicalTrials.gov NCT06059391）、在CMV血清阴性肝脏移植接受者（ClinicalTrials.gov NCT06075745）和在HIV和CMV血清阳性成人（ClinicalTrials.gov NCT05099965）。一种由CMV pp65肽与破伤风毒素的一部分结合的疫苗，配以CpG寡核苷酸佐剂，在HLA-A0201阳性的CMV血清阳性HSCT接受者的Ib期试验中诱导了病毒特异性T细胞，并显著减少了CMV病毒血症，减少了预防性抗病毒治疗的持续时间，并增加了无复发生存期，与仅观察的患者相比。这种疫苗目前正在CMV血清阳性HSCT接受者中进行II期试验（ClinicalTrials.gov NCT02396134）。计划对CMV血清阳性HSCT接受者（ClinicalTrials.gov NCT05683457）和CMV血清阳性或血清阴性肝脏移植接受者（ClinicalTrials.gov NCT06133010）进行两项CMV mRNA疫苗试验；这些疫苗包含6个mRNA，编码gB和五聚体（gH/gL/UL128-131）复合物。治疗性疫苗对EBV EBV与包括鼻咽癌、胃癌、霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤和移植后淋巴瘤在内的几种恶性肿瘤有关。预防性疫苗一直集中在gp350，最近是gH/gL/gp42上。已经测试了治疗性疫苗用于治疗EBV恶性肿瘤，特别是鼻咽癌。不同的EBV相关癌症表达不同的病毒蛋白组；大多数EBV阳性鼻咽癌表达EBV EBNA1、LMP1和LMP2。一种表达EBV EBNA1羧基部分和EBV LMP2非活性形式的痘病毒（改良的安卡拉牛痘）载体被开发用于治疗鼻咽癌患者。该疫苗在英国和香港的鼻咽癌患者中分别诱导了针对EBNA1和LMP2的CD4+和CD8+ T细胞反应。该疫苗的II期临床试验已完成，但结果尚未公布（ClinicalTrials.gov NCT01094405）。针对各种EBV恶性肿瘤（胃癌、淋巴瘤、头颈癌、淋巴增殖性疾病）的疫苗I期临床试验也已完成，但尚未报告结果（ClinicalTrials.gov NCT01147991）。另一种治疗性EBV疫苗，一种表达LMP2的腺病毒载体，在中国的鼻咽癌患者中进行了I期临床试验；其对病毒特异性T细胞的影响尚未报告结果。含有两种不同的LMP2肽之一的肽疫苗，在Montanide ISA-51佐剂中进行了I期临床试验，试验对象为HLA-A1101或HLA-A2402的鼻咽癌患者；结果尚未报告（ClinicalTrials.gov NCT00078494）。一种使用EBV mRNA的疫苗，针对难治性EBV阳性恶性肿瘤患者，已在中国启动I期临床试验（ClinicalTrials.gov NCT05714748）。未来方向在第一个治疗性疱疹病毒疫苗——减毒带状疱疹疫苗获得许可18年后，以及带状疱疹亚单位疫苗获得许可6年后，尚无其他批准的治疗性疫苗用于其他疱疹病毒。除了与健康和免疫受损患者中病毒复发相关的发病率外，一些疱疹病毒的持续感染与恶性肿瘤有关。越来越多的证据表明，疱疹病毒可能是慢性炎症的重要原因，并且与自身免疫疾病和痴呆症有关，这强调了开发疫苗的重要性。疫苗开发的众多进展，包括病毒载体疫苗、mRNA疫苗、诱导CD4+和CD8+ T细胞反应的佐剂、用于识别病毒蛋白更具免疫原性的构象的结构生物学，以及新的粘膜疫苗方法，为我们提供了额外的治疗性疱疹病毒疫苗将取得成功的乐观态度。识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入生物制品微信群！请注明：姓名+研究方向！版权声明本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。

疫苗信使RNA

2024-05-02

·BioSpace

Moderna Reports First Quarter 2024 Financial Results and Provides Business Updates

Reports first quarter revenues of $167 million, GAAP net loss of $1.2 billion and GAAP diluted EPS of $(3.07) Prepares for launches of RSV vaccine and Spikevax® 2024-2025 formula; reaffirms 2024 expected product sales of approximately $4 billion Initiated three new clinical studies evaluating Moderna's investigational individualized neoantigen therapy in combination with Merck's Keytruda® for treatment of patients with bladder cancer, kidney cancer and cutaneous squamous cell carcinoma Advanced three new vaccine programs (Epstein-Barr virus, Varicella-Zoster virus, norovirus) toward Phase 3 clinical trials as announced at Vaccines Day investor event CAMBRIDGE, MA / ACCESSWIRE / May 2, 2024 / Moderna, Inc. (NASDAQ:MRNA) today reported financial results and provided business updates for the first quarter of 2024. "As we anticipate the launches of our Spikevax 2024-2025 formula and RSV vaccine, we are exercising financial discipline and have intensified our focus on building and utilizing AI technologies to further streamline operations and enhance productivity," said Stéphane Bancel, Chief Executive Officer of Moderna. "With 10 late-stage programs, and additional new programs advancing toward pivotal studies, we continue to expect numerous product milestones this year across our vaccines and therapeutics portfolio. This is the start of a banner year for our vaccine platform as we continue to advance mRNA medicines for patients. This is just the beginning." Recent progress includes: Commercial Updates COVID-19: The Company reported $167 million in Spikevax (COVID-19 vaccine) sales in the first quarter of 2024, which includes $100 million of U.S. sales and $67 million of international sales. In the U.S., the Company is reaffirming its 2024 product sales outlook as it enters the second year of the commercial endemic COVID market. Moderna's focus is on working with public health officials, health care providers and pharmacies to increase vaccination coverage rates to reduce the substantial burden of COVID-19. Moderna is also working with the U.S. FDA and regulators to align the timing of flu and COVID-19 vaccine approvals, which is expected to result in higher vaccination uptake if vaccines are available sooner and offered at the same time as the flu shot. In the European Union, Moderna is participating in the EU Health Emergency and Response Authority's tendering procedure for up to 36 million doses of mRNA COVID-19 vaccines per year for up to four years. In the Rest of World, the Company is prioritizing markets for greater commercial focus and in April announced a contract with the Ministry of Health in Brazil (Ministério da Saúde) to supply 12.5 million mRNA COVID-19 vaccines as an integral part of Brazil's 2024 national vaccination campaign against COVID-19. RSV: The Company anticipates initial regulatory approvals of its RSV vaccine (mRNA-1345) beginning in the first half of 2024. Moderna is targeting fall 2024 for its U.S. RSV vaccine launch, which will build upon the success of its commercial efforts in the fall COVID-19 market. The Company is encouraged by early indications of widespread consumer awareness and established demand in the RSV market, which Moderna will enter with a strong competitive pro robust clinical efficacy data, a well-established safety and tolerability pro its mRNA technology, and as the only pre-filled syringe (PFS) product available. The PFS ready-to-use formulation will save pharmacists and clinicians time, potentially alleviating wait times and reducing the burden on pharmacy staff. In a study funded by Moderna, the PFS presentation was three to four times more efficient than vaccines requiring reconstitution, measured in doses per hour and based on mean time of preparation. First Quarter 2024 Financial Results Revenue: Total revenue for the first quarter of 2024 was $167 million, compared to $1.9 billion in the same period in 2023. The decline was primarily due to reduced sales of the Company's COVID-19 vaccine. Net product sales for the first quarter of 2024 were $167 million, representing a 91% decline compared to the same period in 2023. This decline aligns with the anticipated transition to a seasonal COVID-19 vaccine market; in the prior year period, the Company recognized revenue primarily from delivered doses deferred from 2022. Cost of Sales: Cost of sales for the first quarter of 2024 totaled $96 million, which included third-party royalties of $8 million, inventory write-downs of $30 million, and unutilized manufacturing capacity and winddown costs of $27 million. Cost of sales for the first quarter of 2024 decreased by $696 million, or 88%, compared to the same period in 2023. Cost of sales as a percentage of net product sales was 58% for the first quarter of 2024, compared to 43% for the first quarter of 2023. The decrease in cost of sales in 2024 was primarily driven by lower sales volume coupled with reduced unutilized manufacturing capacity, inventory write-downs and losses on firm purchase commitments and related cancellation fees. Conversely, the increase in cost of sales as a percentage of net product sales in 2024 was driven by the lower sales level compared to the prior year. Research and Development Expenses: Research and development expenses for the first quarter of 2024 decreased by 6% to $1.1 billion, compared to the same quarter of 2023. This reduction was primarily due to the absence of upfront collaboration payments being made in 2024. The upfront payments made in the first quarter of 2023 were related to the Company's strategic collaborations with Generation Bio and Life Edit Therapeutics. Additionally, there was a decrease in clinical development and manufacturing expenses, driven by lower spending on clinical trials for the Company's COVID-19, RSV and seasonal flu programs, which aligns with its planned trial schedules. These decreases were partially offset by higher personnel-related costs, resulting from an increased headcount in the research and development functions. Selling, General and Administrative Expenses: Selling, general and administrative expenses for the first quarter of 2024 decreased by 10% to $274 million, compared to the first quarter of 2023. This decrease is a result of cost discipline and the efficiencies resulting from investments the Company made in foundational capabilities over the last year, which allowed for a significant reduction of purchased services and the use of external consultants. The Company continues to invest in digital and commercial capabilities and has intensified its focus on building and utilizing AI technologies to further streamline operations and enhance productivity. Income Taxes: Income tax expense for the first quarter of 2024 was $10 million, in contrast to an income tax benefit of $384 million in the same period last year. The shift primarily resulted from the continued application of a valuation allowance on the majority of the Company's deferred tax assets, first established in the third quarter of 2023. The Company only maintained a valuation allowance on certain state deferred tax assets prior to the third quarter of 2023. Net Income (Loss): Net loss was $(1.2) billion for the first quarter of 2024, compared to net income of $79 million for the first quarter of 2023. Earnings (Loss) Per Share: Diluted loss per share was $(3.07) for the first quarter of 2024, compared to diluted earnings per share of $0.19 for the first quarter of 2023. Cash Position: Cash, cash equivalents and investments as of March 31, 2024, were $12.2 billion, compared to $13.3 billion as of December 31, 2023. The decrease in the Company's cash position during the first quarter of 2024 was largely attributable to research and development expenses and operating activities. 2024 Financial Framework Expectations for full year 2024 remain consistent with prior expectations. Revenue: The Company reaffirms its 2024 expected revenue of approximately $4 billion from its respiratory franchise, and now expects approximately $0.3 billion in net sales in the first half of the year, reflecting the seasonality of the respiratory business. Cost of Sales: Cost of sales is expected to be approximately 35% of product sales for the year. Research and Development Expenses: Full-year 2024 research and development expenses are anticipated to be approximately $4.5 billion. Selling, General and Administrative Expenses: Selling, general and administrative expenses for 2024 are projected to be approximately $1.3 billion. Income Taxes: The Company continues to expect its full-year tax expense to be negligible. Capital Expenditures: Capital expenditures for 2024 are expected to be approximately $0.9 billion. Cash and Investments: Year-end cash and investments for 2024 are projected to be approximately $9 billion. Recent Progress and Upcoming Late-Stage Pipeline Milestones With 10 late-stage programs, and additional new programs advancing toward pivotal studies, Moderna continues to advance its pipeline and expects numerous product milestones in 2024 across its vaccines and therapeutics portfolio. Late-stage includes eight programs that have progressed to Phase 3 clinical studies and two rare disease programs that are moving toward registrational studies. Respiratory vaccines: Respiratory syncytial virus (RSV) vaccine: Moderna's RSV vaccine candidate (mRNA-1345) is in an ongoing Phase 2/3 clinical trial, ConquerRSV. Based on positive data from the study, Moderna has filed for regulatory approvals for the prevention of RSV-associated lower respiratory tract disease (RSV-LRTD) and acute respiratory disease (ARD) in adults over 60 years of age. As mentioned above, the Company is awaiting regulatory approvals and the U.S. ACIP recommendation in 2024. At its Vaccines Day event in March, Moderna announced the initiation of multiple Phase 3 expansion studies of its RSV vaccine in adults over 50 years of age to evaluate co-administration and revaccination. Additional trials (Phase 1 - Phase 3) have been initiated for high-risk adults, as well as maternal and pediatric populations. Interim data from these studies could be available as early as 2024. Seasonal flu vaccine: Moderna's seasonal flu vaccine (mRNA-1010) demonstrated consistently acceptable safety and tolerability across three Phase 3 trials. In the most recent Phase 3 trial (P303), mRNA-1010 met all immunogenicity endpoints, demonstrating higher titers compared to a currently licensed standard-dose flu vaccine. In an older adult extension study of P303, mRNA-1010 is being studied against high dose Fluzone HD®; the trial is fully enrolled. The Company is in ongoing discussions with regulators and intends to 2024. Next-generation COVID-19 vaccine: A recent announcement of positive interim results from the NEXTCove Phase 3 trial showed that Moderna's next-generation COVID-19 vaccine (mRNA-1283) elicited a higher immune response against both the Omicron BA.4/BA.5 and original virus strains of SARS-CoV-2 compared to Moderna's licensed COVID-19 vaccine (mRNA-1273.222). The next-generation vaccine is designed to be refrigerator-stable and paves the way for a combination vaccine against influenza and COVID-19 (mRNA-1083). This is Moderna's fourth infectious disease vaccine program with positive Phase 3 data. The Company is engaging with regulators on next steps. Seasonal flu + COVID vaccine: Moderna's Phase 3 trial of its combination vaccine against seasonal flu and COVID-19 (mRNA-1083) is fully enrolled. The Company anticipates data from the study in 2024. Latent and other vaccines: Cytomegalovirus (CMV) vaccine: The pivotal Phase 3 study of Moderna's CMV vaccine candidate (mRNA-1647) is fully enrolled and accruing cases, evaluating its efficacy, safety and immunogenicity in the prevention of primary infection in women of childbearing age. The first interim analysis for the evaluation of vaccine efficacy is expected as early as the end of 2024. Epstein-Barr virus (EBV) vaccine: Moderna's EBV vaccine candidate for the prevention of infectious mononucleosis (mRNA-1189) showed positive immunogenicity and safety data in a Phase 1 study. The Company is advancing this candidate toward pivotal development. Varicella-Zoster virus (VZV) vaccine: In a Phase 1/2 trial, Moderna's VZV vaccine candidate for the prevention of shingles (mRNA-1468) elicited comparable or higher T cell responses relative to Shingrix. The Company is advancing toward a pivotal Phase 3 trial. Herpes simplex virus (HSV) vaccine: The Phase 1/2 study of Moderna's HSV vaccine candidate (mRNA-1608) is fully enrolled. Norovirus vaccine: Moderna's vaccine candidate for the prevention of norovirus (mRNA-1403) showed positive immunogenicity and safety data in a Phase 1 study. The Company is advancing toward a pivotal Phase 3 trial. Oncology therapeutics: Individualized Neoantigen Therapy (INT): Moderna continues to demonstrate the potential clinical benefit of its INT program (mRNA-4157). In partnership with Merck, two Phase 3 trials in resected high-risk (stage III/IV) melanoma and completely resected stage II, IIIA or IIIB non-small cell lung cancer are ongoing. Moderna and Merck have initiated three new randomized clinical studies in additional tumor types in 2024, including a Phase 2 adjuvant treatment in patients with renal cell carcinoma, or kidney cancer; a Phase 2 adjuvant treatment in patients with high-risk muscle-invasive bladder cancer; and a Phase 2/3 neoadjuvant and adjuvant treatment in patients with cutaneous squamous cell carcinoma, the second most common form of skin cancer. Rare disease and other therapeutics: Propionic acidemia (PA) & methylmalonic acidemia (MMA) therapeutics: Interim data for a first-in-human, Phase 1/2, open-label, dose optimization study and extension study, evaluating the safety and efficacy of an investigational mRNA therapy for PA (mRNA-3927), was published in Nature. The Company expects to advance its PA and MMA (mRNA-3705) programs into registrational studies in 2024. PD-L1 therapeutic: Following a strategic review, and as a result of its decision to prioritize investments in other programs, Moderna is discontinuing development of its preclinical PD-L1 program (mRNA-6981), and is no longer evaluating other mRNA candidates in this area. Moderna Corporate Updates Announced the advancement of multiple vaccine programs to late-stage clinical trials at its fifth Vaccines Day Investor Event on March 27, 2024. Announced a development and commercialization funding agreement on March 27, 2024, with Blackstone Life Sciences for up to $750 million to advance Moderna's flu program. Announced a new collaboration with OpenAI to advance mRNA medicine using generative AI. Entered into a non-exclusive intellectual property licensing agreement with an upfront payment and low double-digit royalty on the net sales of a COVID-19 product from a pharmaceutical company in the territory of Japan. Agreed with Metagenomi to terminate gene editing collaboration as Moderna continues to strategically prioritize its research and development investments. The Moderna Annual Meeting of Shareholders will be held on May 6, 2024, at 8:00 a.m. ET. Company Accolade Moderna was named for the first time to the LinkedIn Top Companies list of the best workplaces to grow a career in the U.S. Key 2024 Investor and Analyst Event Dates ASCO Investor Event: June 3 R&D Day: September 12 Investor Call and Webcast Information Moderna will host a live conference call and webcast at 8:00 a.m. ET on May 2, 2024. To access the live conference call via telephone, please register at the link below. Once registered, dial-in numbers and a unique pin number will be provided. A live webcast of the call will also be available under "Events and Presentations" in the Investors section of the Moderna website. Telephone: Webcast: The archived webcast will be available on Moderna's website approximately two hours after the conference call and will be available for one year following the call. About Moderna Moderna is a leader in the creation of the field of mRNA medicine. Through the advancement of mRNA technology, Moderna is reimagining how medicines are made and transforming how we treat and prevent disease for everyone. By working at the intersection of science, technology and health for more than a decade, the company has developed medicines at unprecedented speed and efficiency, including one of the earliest and most effective COVID-19 vaccines. Moderna's mRNA platform has enabled the development of therapeutics and vaccines for infectious diseases, immuno-oncology, rare diseases and autoimmune diseases. With a unique culture and a global team driven by the Moderna values and mindsets to responsibly change the future of human health, Moderna strives to deliver the greatest possible impact to people through mRNA medicines. For more information about Moderna, please visit modernatx.com and connect with us on X (formerly Twitter), Facebook, Instagram, YouTube and LinkedIn. MODERNA, INC. CONDENSED CONSOLIDATED STATEMENTS OF OPERATIONS (Unaudited, in millions, except per share data) Three Months Ended March 31, 2024 2023 Revenue: Net product sales $ 167 $ 1,828 Other revenue1 - 34 Total revenue 167 1,862 Operating expenses: Cost of sales 96 792 Research and development 1,063 1,131 Selling, general and administrative 274 305 Total operating expenses 1,433 2,228 Loss from operations (1,266 ) (366 ) Interest income 120 109 Other expense, net (19 ) (48 ) Loss before income taxes (1,165 ) (305 ) Provision for (benefit from) income taxes 10 (384 ) Net (loss) income $ (1,175 ) $ 79 (Loss) earnings per share: Basic $ (3.07 ) $ 0.20 Diluted $ (3.07 ) $ 0.19 Weighted average common shares used in calculation of (loss) earnings per share: Basic 382 386 Diluted 382 405 _______ 1Includes grant revenue and collaboration revenue MODERNA, INC. CONDENSED CONSOLIDATED BALANCE SHEETS (Unaudited, in millions) March 31, December 31, 2024 2023 Assets Current assets: Cash and cash equivalents $ 2,051 $ 2,907 Investments 6,472 5,697 Accounts receivable, net 137 892 Inventory 295 202 Prepaid expenses and other current assets 645 627 Total current assets 9,600 10,325 Investments, non-current 3,638 4,677 Property, plant and equipment, net 2,063 1,945 Right-of-use assets, operating leases 697 713 Deferred tax assets 81 81 Other non-current assets 650 685 Total assets $ 16,729 $ 18,426 Liabilities and Stockholders' Equity Current liabilities: Accounts payable $ 183 $ 520 Accrued liabilities 1,396 1,798 Deferred revenue 559 568 Income taxes payable 52 63 Other current liabilities 190 66 Total current liabilities 2,380 3,015 Deferred revenue, non-current 58 83 Operating lease liabilities, non-current 637 643 Financing lease liabilities, non-current 575 575 Other non-current liabilities 262 256 Total liabilities 3,912 4,572 Stockholders' equity: Additional paid-in capital 487 371 Accumulated other comprehensive loss (101 ) (123 ) Retained earnings 12,431 13,606 Total stockholders' equity 12,817 13,854 Total liabilities and stockholders' equity $ 16,729 $ 18,426 MODERNA, INC. CONDENSED CONSOLIDATED STATEMENTS OF CASH FLOWS (Unaudited, in millions) Three Months Ended March 31, 2024 2023 Operating activities Net (loss) income $ (1,175 ) $ 79 Adjustments to reconcile net (loss) income to net cash used in operating activities: Stock-based compensation 101 75 Depreciation and amortization 36 78 Amortization/accretion of investments (27 ) (17 ) Loss on equity investments, net 13 18 Deferred income taxes - (310 ) Other non-cash items 3 (4 ) Changes in assets and liabilities, net of acquisition of business: Accounts receivable, net 755 272 Prepaid expenses and other assets 3 (212 ) Inventory (93 ) 216 Right-of-use assets, operating leases 16 4 Accounts payable (303 ) (117 ) Accrued liabilities (398 ) (495 ) Deferred revenue (33 ) (819 ) Income taxes payable (11 ) 18 Operating lease liabilities (6 ) 4 Other liabilities 130 (15 ) Net cash used in operating activities (989 ) (1,225 ) Investing activities Purchases of marketable securities (2,544 ) (1,085 ) Proceeds from maturities of marketable securities 1,573 1,360 Proceeds from sales of marketable securities 1,285 1,957 Purchases of property, plant and equipment (196 ) (113 ) Acquisition of business, net of cash acquired - (85 ) Investment in convertible notes and equity securities - (23 ) Net cash provided by investing activities 118 2,011 Financing activities Proceeds from issuance of common stock through equity plans 15 9 Repurchase of common stock, including excise tax - (526 ) Changes in financing lease liabilities (1 ) (25 ) Net cash provided by (used in) financing activities 14 (542 ) Net (decrease) increase in cash, cash equivalents and restricted cash (857 ) 244 Cash, cash equivalents and restricted cash, beginning of year 2,928 3,217 Cash, cash equivalents and restricted cash, end of period $ 2,071 $ 3,461 Spikevax® is a registered trademark of Moderna. Fluzone® is a registered trademark of Sanofi Pasteur. KEYTRUDA® is a registered trademark of Merck Sharp & Dohme Corp. Forward-Looking Statements This press release contains forward-looking statements within the meaning of the Private Securities Litigation Reform Act of 1995, as amended, including statements regarding: Moderna's anticipated approval and launch of its RSV vaccine, market dynamics, and its competitive profile; Moderna's 2024 financial framework and anticipated performance, including expected revenues; and anticipated milestones for Moderna's pipeline programs in 2024. In some cases, forward-looking statements can be identified by terminology such as "will," "may," "should," "could," "expects," "intends," "plans," "aims," "anticipates," "believes," "estimates," "predicts," "potential," "continue," or the negative of these terms or other comparable terminology, although not all forward-looking statements contain these words. The forward-looking statements in this press release are neither promises nor guarantees, and you should not place undue reliance on these forward-looking statements because they involve known and unknown risks, uncertainties, and other factors, many of which are beyond Moderna's control and which could cause actual results to differ materially from those expressed or implied by these forward-looking statements. These risks, uncertainties, and other factors include, among others, those risks and uncertainties described under the heading "Risk Factors" in Moderna's Annual Report on Form 10-K for the fiscal year ended December 31, 2023, filed with the U.S. Securities and Exchange Commission (SEC), and in subsequent filings made by Moderna with the SEC, which are available on the SEC's website at . Except as required by law, Moderna disclaims any intention or responsibility for updating or revising any forward-looking statements contained in this press release in the event of new information, future developments or otherwise. These forward-looking statements are based on Moderna's current expectations and speak only as of the date of this press release. ### Moderna Contacts Media: Chris Ridley Head of Global Media Relations +1 617-800-3651 Chris.Ridley@modernatx.com Investors: Lavina Talukdar Senior Vice President & Head of Investor Relations +1 617-209-5834 Lavina.Talukdar@modernatx.com SOURCE: Moderna, Inc. View the original press release on accesswire.com

疫苗临床3期临床结果财报临床1期

100 项与 VZV vaccine(Merck Sharp & Dohme Corp.) 相关的药物交易

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研发状态

10 条进展最快的记录,

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适应症	最高研发状态	国家/地区	公司	日期
自身免疫性疾病	临床3期	-	Merck Sharp & Dohme Corp.	2012-02-21
血液肿瘤	临床3期	-	Merck Sharp & Dohme Corp.	2011-06-24
实体瘤	临床3期	-	Merck Sharp & Dohme Corp.	2011-06-24
带状疱疹	临床3期	-	Merck Sharp & Dohme Corp.	2010-11-30
高锌血症和高钙保护素血症	临床3期	-	Merck Sharp & Dohme Corp.	2010-11-30

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临床结果

适应症

分期

评价

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研究	分期	人群特征	评价人数	分组	结果	评价	发布日期


NCT00696709 (V212-004, CTgov)	临床1期	带状疱疹	290	Comparator: V212 (Part 1: Gamma- Irradiated VZV Vaccine A)	鹹糧窪襯鹽顧積鹹積構(構獵衊繭範艱蓋憲簾鏇) = 網膚窪襯衊鏇築鹹選餘繭遞窪鹹廠構鏇獵壓蓋 (築鏇繭憲鹽襯鏇蓋餘築, 壓糧繭簾範鏇鏇壓網鏇 ~ 鹽選餘鏇夢齋壓簾願簾) 更多	-	2019-11-08
				Comparator: V212 (Part 1: Heat-treated Varicella-Zoster Virus (VZV) Vaccine)	鹹選築願鬱艱觸膚艱窪(範簾鹽獵窪衊選壓窪襯) = 醖糧鑰遞衊獵觸鹹鏇顧構鹹膚糧鬱願築夢鬱壓 (餘餘蓋艱憲獵衊憲鹽獵, 網簾蓋壓築糧構蓋蓋廠 ~ 繭繭鏇壓憲餘艱製觸繭) 更多
NCT01460719 (CTgov)	临床1期	带状疱疹 \| 血液肿瘤	80	V212	醖憲簾衊齋鏇鹽膚壓製(膚壓範築廠壓築構繭廠) = 積網憲齋醖鏇醖襯膚廠齋壓夢鏇憲淵繭淵積鹽 (鏇顧觸齋糧簾鏇築憲鑰, 網廠簾鹹築選憲糧繭遞 ~ 夢齋選壓範網餘範蓋齋) 更多	-	2019-03-11
NCT01527383 (V212-009, CTgov)	临床2期	自身免疫性疾病 \| 带状疱疹	354	V212 (V212)	鬱選衊齋網簾製範簾構(範衊膚襯鏇糧憲選齋繭) = 夢衊窪醖遞築醖顧鏇淵膚鏇壓繭夢鬱壓範願鹹 (築遞蓋壓繭鑰蓋構獵鹹, 齋艱遞築遞醖蓋觸鹹膚 ~ 遞廠衊構獵製壓簾構齋) 更多	-	2019-01-14
				Placebo (Placebo)	構積淵選夢遞夢選鬱壓(繭襯衊襯遞網鏇範遞顧) = 鹹製鹽觸蓋糧糧範鬱鑰夢遞積衊鬱憲衊觸願築 (襯廠餘顧齋構選顧窪遞, 獵範醖艱範齋繭鹹鏇憲 ~ 製製艱鹹廠憲鹽鏇襯鬱) 更多
NCT01229267 (V212-001, CTgov)	临床3期	高锌血症和高钙保护素血症 \| 带状疱疹	1,257	Matching placebo	選襯壓觸繭願願鹹廠夢(醖夢鹽積製製網鑰鏇廠) = 鹽繭窪繭獵鏇襯鏇餘鏇選選餘構襯衊獵遞糧鹹 (積簾艱憲鏇夢遞壓製淵, 網鬱夢選築壓觸膚觸鹹 ~ 願獵淵範繭壓鹹糧壓廠) 更多	-	2018-07-02
NCT01254630 (V212-011, CTgov)	临床3期	实体瘤 \| 带状疱疹 \| 血液肿瘤	5,305	V212 (V212-STM)	壓夢範願膚網遞糧蓋選(衊積選願鏇範願鑰憲糧) = 繭鏇顧鑰糧範鏇遞簾夢窪繭築製積窪繭鏇遞淵 (簾觸餘鹹齋夢積顧積窪, 襯觸衊構窪鹽廠艱繭鑰 ~ 壓範鹽願憲夢憲願衊餘) 更多	-	2018-04-13
				Placebo (Placebo-STM)	壓夢範願膚網遞糧蓋選(衊積選願鏇範願鑰憲糧) = 顧衊窪構齋淵選淵積蓋窪繭築製積窪繭鏇遞淵 (簾觸餘鹹齋夢積顧積窪, 範網餘糧蓋壓鹽壓襯淵 ~ 衊壓淵繭襯壓選淵襯壓) 更多