CPTX-2309

CD3/CD8/CD7/CD5靶向配体｜双层靶头深度解析 双层靶头 递送载体T细胞靶向配体(CD3/CD8/CD7/CD5)×CAR肿瘤靶向域(CD19/BCMA/CD70/DLL3)[1][2][4][5] Capstan Science 2023(Rurik等,DOI:10.1126/science.add2635)为anti-CD8靶向LNP(CD8+ T细胞选择性转导,心脏纤维化模型);临床候选CPTX2309(CellSeeker™)靶向CD8+ T细胞[20], 也在早期试验中尝试CD5等靶头。 格局 Umoja(CD3慢病毒,UB-VV111+VV400) ｜ Capstan(CD8-LNP) ｜ Kelonia(CD3-BCMA,100% MRD阴性) ｜ Interius(CD3-CD19)[7][11][16][21][22] 判断 CD3"广度优先"临床验证,CD8/CD7"选择性优先"差异化——先跑出注册级数据的将是"靶头组合最优化"平台[1][5][11] 一、引言:In vivo CAR-T的"靶头"——被低估的战略支点 In vivo CAR-T(体内CAR-T)的叙事焦点长期在"递送载体"(LNP/慢病毒)与"制造革命"(免体外制造)上,但决定其成败的隐藏变量是"靶头"(targeting domain)选择——实际上In vivo CAR-T拥有"双层靶头":第一层是递送载体表面的T细胞靶向配体(如anti-CD3/CD8/CD7),决定"载体选择性进入T细胞";第二层是CAR本身的肿瘤靶向域(如CD19/BCMA/CD70的scFv或VHH),决定"工程化T细胞识别并杀伤肿瘤"[1][2][4][5]。2026年,这一"双层靶头"格局已清晰:Umoja UB-VV111(CD3靶向慢病毒,2024年全球首个获FDA IND清除的in vivo CAR-T,Ph1 NCT06528301,Fast Track)+UB-VV400(CD22,2026 IND清除)是T细胞靶向配体的临床标杆;Capstan(CD8-LNP)、Kelonia(CD3-BCMA,FDA IND清除)、Interius(CD3-CD19,欧洲首个)分别定义不同靶头路线[1][5][7][9][11][16][17][21][22]。Nature旗下STTT 2026综述《The in vivo revolution in CAR-T therapy medicinal products》系统梳理了该领域"无需单采/体外处理"的临床简化价值[19]。 如果你是一名患者或家属:体内CAR-T的"靶头"决定治疗的精准度与副作用——理解载体靶向T细胞的配体与CAR靶向肿瘤的抗原,是评估临床试验的关键[1][2]。 如果你是一名临床医生:In vivo CAR-T的靶头选择影响转导效率、on-target off-tumor毒性与疗效深度——CD3泛T靶向vs CD8选择性靶向的临床差异是转介评估要点[1][5][7]。 如果你在biotech新药研发:In vivo CAR-T的靶头是"递送×肿瘤"双维决策——载体配体(CD3/CD8/CD7)与CAR抗原(CD19/BCMA/CD70/DLL3)的每个组合都是独立的技术栈,也是FTO与差异化的战场[2][4][5]。 二、"双层靶头"概念:In vivo CAR-T的独特工程维度 与传统CAR-T只有一个"靶头"(CAR的肿瘤抗原结合域)不同,In vivo CAR-T必须同时优化两个靶头[1][2][3][4]:(1)递送靶头(载体→T细胞)——慢病毒表面/包膜修饰(anti-CD3等)或LNP表面偶联抗体(Ab-LNP),实现载体对循环T细胞的选择性转导;(2)治疗靶头(CAR→肿瘤)——CAR胞外域识别肿瘤抗原,触发杀伤。这两个靶头的选择相互耦合:载体靶向的T细胞亚群(CD3泛T vs CD8 T/NK)决定体内生成CAR-T的组成与持久性;CAR靶点决定适应症与毒性谱[1][2][3][4][5]。 三、T细胞靶向配体选择:CD3/CD8/CD7的生物学逻辑 T细胞靶向配体是In vivo CAR-T的第一层靶头,主流选择有三种:(1)anti-CD3(泛T细胞)——CD3是TCR复合体组分,在所有T细胞表达:Umoja VivoVec(UB-VV111,Ph1)[1][7]、Kelonia KLN-1010[11]、Interius INT2104(欧洲首个)[11]均采用——优势:覆盖全部T细胞,转导池最大;短板:可能影响正常T细胞功能、剂量敏感;(2)anti-CD8(细胞毒性T细胞)——Capstan Ab-LNP采用:Science 2023论文(Rurik等,Science 381:316-322,DOI:10.1126/science.add2635)以anti-CD8抗体靶向LNP递送CD19-CAR mRNA,选择性转导CD8+细胞毒性T细胞,在心脏纤维化模型中体内生成CAR-T并逆转纤维化;临床候选CPTX2309(CellSeeker™技术)继续靶向CD8+ T细胞——优势:直接工程化效应T细胞,亚群选择性;短板:CD8+T细胞耗竭/持久性依赖体内环境,部分NK亚群亦表达CD8[5][11][20];(3)anti-CD7(T/NK,临床前)——Mitchell团队Ab-LNP验证CD7靶向递送CAR mRNA,高比例CAR阳性细胞+有效B细胞清除——CD7在T-ALL肿瘤细胞也表达,选择时需权衡[5]。判断:CD3是"广度优先"的临床验证路线,CD8/CD7是"选择性优先"的差异化路线——未来或出现双配体/可切换靶头[1][5][7][20]。 四、肿瘤靶点选择:从CD19主导到实体瘤矩阵 In vivo CAR-T的肿瘤靶点选择遵循"先血液瘤后实体瘤"的节奏:(1)CD19(主导)——CD19靶点在体内CAR-T中占绝对主导(UB-VV111/ORN-252/INT2104/Capstan均CD19),映射自体CAR-T的临床验证路径[1][5][7][11];(2)BCMA(骨髓瘤)——Kelonia KLN-1010(CD3-BCMA),Ph1 100% MRD阴性缓解——体内CAR-T在骨髓瘤的首次强信号[11];(3)CD70(实体瘤靶点,非in vivo管线)——Allogene ALLO-316为通用(异体)AlloCAR T(Dagger®平台),在RCC验证CD70靶点(31%确认响应率,JCO 2026)——CD70作为实体瘤CAR-T靶点由异体CAR-T确立,in vivo CAR-T的CD70管线仍在探索阶段[9][10][23];(4)DLL3(SCLC)——ASCO 2026呈现DLL3靶向CAR-T进展,小细胞肺癌体内CAR-T探索中[9];(5)CLDN18.2/GPC3/MSLN(消化道/肝癌/间皮瘤)——实体瘤靶点矩阵延伸[9][10];(6)CD22(新靶点)——2026年ScienceDirect研究:CD8靶向载体体内重编程CD22 CAR-T,拓展B细胞肿瘤靶点矩阵(抗原逃逸防线)[18];(7)双靶点/逻辑门控CAR(2026趋势)——ASCO 2026竞争格局分析指出:logic-gated CAR与双靶点抗原识别是下一代方向,可克服肿瘤异质性与on-target off-tumor毒性[13];(7)瞬时CAR-T表达(自免场景)——mRNA-LNP体内CAR-T的瞬时表达特性,在自免(B细胞暂时清除)中反而是优势——"表达时长"成为靶头设计的新维度[14]。 五、靶头格式比较:scFv vs VHH vs 配体融合 表2|In vivo CAR-T靶头格式与T细胞靶向配体比较 靶头类型 分子 优势 短板 代表应用 scFv 单链可变区片段(~25kDa)非IgG 最成熟;特异性好;临床验证多 尺寸较大;易聚集(aggregation);疏水界面暴露;免疫原性;体内稳定性需优化 传统CAR胞外域;T细胞靶向配体[2][4] VHH/纳米抗体 重链单域抗体(~15kDa) 小尺寸;深层组织穿透;低免疫原性;不易聚集(稳定性好);易多聚化 表位选择受限;人源化需求 新一代CAR靶头;实体瘤体内递送[4][10] 配体融合 天然配体(如CD70L等) 低免疫原性;生理信号 亲和力/特异性有限 靶点探索期[10] anti-CD3 抗CD3抗体/单域 T细胞泛靶向;Umoja/Kelonia临床验证 可能清除/激活正常T细胞;剂量敏感 VivoVec/KLN-1010/INT2104[1][7][11] anti-CD8 抗CD8抗体 CD8+细胞毒性T细胞选择性;Capstan Science 2023验证+CPTX2309临床推进 CD8+T细胞为效应主力,耗竭/持久性依赖体内环境;部分NK亚群亦表达 Capstan Ab-LNP[5][11][20] anti-CD7 抗CD7抗体 T/NK细胞靶向;Mitchell临床前验证 CD7在T-ALL肿瘤表达,需谨慎 学术Ab-LNP[5] 靶头格式的工程趋势:(1)scFv仍是主流——最成熟、临床验证最多,但大尺寸与免疫原性在体内递送场景(尤其LNP的mRNA编码)是短板[2][4];(2)VHH/纳米抗体上升——15kDa小尺寸、深层组织穿透、低免疫原性、易多聚化,尤其适合实体瘤体内CAR-T与慢病毒包膜修饰(可多拷贝展示)[4][10];(3)配体融合——低免疫原性但特异性有限,探索期[10];(4)KIR-CAR(新格式)——Penn Medicine:基于杀伤免疫球蛋白样受体的新型CAR,在多种实体瘤中安全性良好+剂量依赖疗效(2026)[15];(5)判断:In vivo CAR-T的载体靶向配体(anti-CD3等)将率先向VHH/单域格式迁移(小尺寸利于包膜/LNP表面修饰密度),CAR肿瘤靶头则scFv与VHH并存[2][4][5]。 六、递送平台与靶头的耦合:LNP/慢病毒/AAV 递送平台决定靶头呈现方式:(1)慢病毒(包膜修饰)——Umoja/Kelonia/Interius:在病毒包膜表面展示anti-CD3等配体,实现T细胞选择性转导——配体密度/取向/亲和力的精确控制是工艺核心[1][7][11];(2)LNP(表面偶联Ab)——Capstan/Orna/学术:抗体偶联LNP(Ab-LNP)递送CAR mRNA/oRNA——偶联化学(click/PEG-脂质)与抗体密度决定靶向效率[5];(3)AAV——衣壳工程(如AAV9突变体)天然靶向,但T细胞靶向性弱于配体修饰,LNP/慢病毒占优[1][2];(4)cssDNA(C4DNA™,Circio×Full Circles)——非病毒新载体,脾脏富集天然靶向T/B细胞,靶头策略待披露[12]。核心规律:慢病毒与LNP是"配体靶头"的主战场,AAV走"衣壳靶头",cssDNA走"器官天然靶向"[1][2][5][12]。 七、全球管线"双层靶头"全景 表1|全球In vivo CAR-T管线"双层靶头"全景(2026.8) 平台/公司 载体 T细胞靶向配体 肿瘤靶点 阶段 关键信息 Umoja 慢病毒(VivoVec) anti-CD3 CD19(UB-VV111) Ph1(NCT06528301) UB-VV111:2024年全球首个获FDA IND清除的in vivo CAR-T;获Fast Track(R/R B细胞恶性肿瘤)——T细胞靶向配体的临床标杆[1][7][16][21] Umoja(扩展管线) 慢病毒(VivoVec) anti-CD3 CD22(UB-VV400) IND清除(FDA,2026) UB-VV400:首个CD22定向in vivo CAR-T获FDA IND清除;UB-VV500计划2026底进Ph1[16][22] Kelonia(礼来$70亿) 慢病毒 anti-CD3(包膜修饰) BCMA(KLN-1010) Ph1(FDA IND 2026初) ASCO 2026:100% ORR+MRD阴性(1个月);FDA清除IND(Targeted Oncology确认)[11][13][17] Capstan(艾伯维$21亿) LNP(Ab-LNP) anti-CD8(CellSeeker™) CD19 Ph1推进 CD8靶向LNP递送CAR mRNA,选择性转导CD8+细胞毒性T细胞;Science 2023验证(心脏纤维化模型)[5][11][20] Orna(礼来$24亿) LNP(oRNA,免疫嗜性) 未披露(免疫嗜性LNP) CD19(ORN-252) Ph1/2 环状RNA-LNP;体内生成CAR-T/CAR-NK/CAR-Mac[11] Interius(吉利德$3.5亿) 慢病毒(ENaBL) anti-CD3 CD19(INT2104) Ph1(欧洲首个) 2025.1欧洲首个进入临床的体内CAR-T[11] Allogene(注:非in vivo) 体外制造(AlloCAR T) — CD70(ALLO-316) Ph1(RCC,TRAVERSE) ALLO-316为通用(异体)AlloCAR T而非in vivo CAR-T——CD70实体瘤靶点由异体CAR-T验证(31%确认响应率,JCO 2026);in vivo CAR-T的CD70管线仍在探索[9][10][23] Circio×Full Circles cssDNA(C4DNA™) 待定(脾脏靶向) CD19等(计划) 研究合作 非病毒+非整合+可重复给药;脾脏富集表达[12] 管线格局判断:(1)T细胞靶向配体:CD3垄断临床,CD8/CD7差异化——Umoja(CD3)、Kelonia(CD3)、Interius(CD3)已临床;Capstan(CD8)差异化;Mitchell(CD7)临床前[1][5][7][11];(2)肿瘤靶点:CD19为主、BCMA/CD70/DLL3扩展——映射自体CAR-T的适应症优先级[9][10][11];(3)并购锚点——Kelonia(礼来$70亿)/Orna(礼来$24亿)/Capstan(艾伯维$21亿)/Interius(吉利德$3.5亿)——MNC对"递送×靶头"组合的估值溢价明显[11][12]。 八、科学维度:靶头的精细调控 In vivo CAR-T靶头的科学调控比体外CAR-T更精细[3][6]:(1)亲和力滴定——载体靶向配体的亲和力需平衡"转导效率vs正常T细胞占位":过高亲和力导致载体被非靶T细胞清除、过低则转导不足——Umoja等通过配体工程实现"低亲和力高特异性"[1][7];(2)表位选择——CD3的ε亚基表位(非TCR结合位点)避免干扰TCR信号[7];(3)CAR靶头的内化动力学——抗原结合后CAR内化速度影响信号持久性,VHH的小尺寸可能改变内化行为[4][10];(4)双靶头协同——"载体靶向T细胞亚群(如CD8→T/NK)×CAR靶向肿瘤"的组合决定体内生成的细胞组成[5]。 九、医学与临床维度:靶头选择的患者价值 靶头选择的临床意义:(1)转导效率→疗效深度——载体对T细胞的选择性转导率决定体内CAR-T数量:UB-VV111(CD3)与KLN-1010(CD3-BCMA,100% MRD阴性)证明CD3路线疗效可行性[1][7][11];(2)毒性谱——CD3泛T靶向可能影响正常T细胞(感染风险),CD8/CD7亚群选择性可能降低该风险但牺牲转导池[5];(3)实体瘤可及性——in vivo CAR-T实体瘤靶头仍处探索期:CD70靶点由异体CAR-T(ALLO-316,RCC)验证,DLL3(SCLC)等in vivo管线在研[9][10];(4)无需清淋——In vivo CAR-T有望免除淋巴清除化疗(ISCT 2025综述),靶头选择影响这一目标的实现[1][2];(5)疗效数据锚点——KLN-1010(CD3-BCMA)ASCO 2026中期数据:100% ORR+1个月MRD阴性——CD3靶向慢病毒路线疗效可行性的最强证据[11][13]。 十、药学与CMC维度:靶头偶联的制造挑战 靶头的CMC是In vivo CAR-T制造的核心壁垒:(1)慢病毒包膜配体——anti-CD3在包膜上的密度/取向/糖基化的一致性控制,配体与包膜蛋白(如VSV-G)的共表达优化[1][7];(2)Ab-LNP偶联化学——抗体与脂质偶联(click chemistry/PEG-lipid anchor)的效率与批次一致性,偶联后抗体活性保持[5];(3)靶头质控——配体密度(每颗粒抗体数)、结合活性(ELISA/BLI)、转导选择性(体外T细胞vs非T细胞)是放行关键[1][5];(4)mRNA编码CAR的靶头——LNP递送mRNA时,CAR的scFv/VHH序列优化(密码子/稳定性)直接影响体内表达[5]。 十一、安全性维度:on-target off-tumor的靶头解法 In vivo CAR-T的安全风险与靶头选择直接相关:(1)载体靶头的脱靶——CD3泛T靶向若配体脱落/非特异结合,可能转导非T细胞(如肝细胞)——配体亲和力/稳定性是防线[1][7];(2)CAR靶点的on-target off-tumor——CD19在正常B细胞表达(B细胞发育不全可管理)、CD70在活化淋巴细胞/肾小管表达(RCC剂量管理)、DLL3在正常组织低表达(安全性好)——靶点选择决定毒性谱[9][10];(3)免疫原性——外源抗体配体(鼠源scFv/配体)可能引发抗药抗体,人源化VHH降低风险[2][4];(4)长期存续——体内生成CAR-T的持久性与靶头信号强度相关,需平衡[1][2]。 十二、全球市场空间:靶头选择的TAM影响 In vivo CAR-T市场规模与靶头格局:(1)市场基线——2025年全球in vivo CAR-T市场$6.5亿,2026年预计$8.6亿,2030年有望$50-100亿(随CD19/BCMA适应症获批)[8][11];(2)靶点驱动TAM——CD19(血液瘤,65%+管线占比)先行,BCMA(骨髓瘤)$10-20亿,CD70/DLL3/CLDN18.2(实体瘤)$20-40亿——实体瘤靶头是TAM跃迁关键[8][9][10];(3)递送平台价值——"T细胞靶向配体"是平台资产(可配任意CAR靶点),慢病毒(CD3)与LNP(CD8)两大体系的MNC估值锚(礼来$70亿+$24亿/艾伯维$21亿/吉利德$3.5亿)已确立[11][12]。 十三、风险与挑战:靶头选择的"四重不确定性" In vivo CAR-T靶头选择面临四重不确定性:(1)转导效率坎——体内T细胞转导率普遍低于体外(体外>50% vs 体内个体差异大),靶头亲和力与载体剂量需精细优化[1][2];(2)亚群组成坎——CD3泛靶向生成"混合CAR-T"(CD4/CD8/Treg),CD8/CD7选择性生成特定亚群——哪种组成最优尚无定论[5][7];(3)实体瘤递送坎——实体瘤中载体到达T细胞(血液)容易,但CAR-T进入肿瘤组织仍需VHH等小尺寸靶头+浸润增强[4][10];(4)监管坎——"载体靶头+CAR靶头"双新分子的CMC/非临床评价无先例,IND审评不确定性高[1][2]。核心判断:靶头选择是In vivo CAR-T"最后一公里"的科学与工程问题——先跑出注册级数据的将是"靶头组合最优化"的平台,而非单一载体叙事[1][5][11]。 十四、给各方建议(三类读者全覆盖) 14.1 给患者与家庭 (1)In vivo CAR-T试验评估时关注"载体靶向什么细胞+CAR靶向什么肿瘤"——CD19/BCMA(血液瘤)证据最成熟,CD70/DLL3(实体瘤)在探索[1][9][11];(2)体内CAR-T有望免除清淋化疗与2-4周等待,但转导效率个体差异大,与医生确认筛选标准[1][2]。 14.2 给临床医生 (1)关注Umoja UB-VV111(CD3-CD19,Ph1 NCT06528301,Fast Track)与Kelonia KLN-1010(CD3-BCMA,100% MRD阴性)的临床数据——T细胞靶向配体的疗效/毒性基准[1][7][11][21];(2)CD70(ALLO-316)为异体CAR-T实体瘤靶点验证,DLL3(SCLC)等in vivo实体瘤靶头仍在探索[9][10][23];(3)监测载体脱靶转导(肝毒性)与on-target off-tumor毒性的临床信号[1][9]。 14.3 给biotech新药研发从业者 (1)靶头组合决策——"载体配体(CD3/CD8/CD7)×CAR抗原(CD19/BCMA/CD70/DLL3)"是独立技术栈,每个组合都有FTO与差异化空间[2][5];(2)格式趋势——VHH/单域向载体配体与CAR靶头双向渗透(小尺寸+低免疫原性)[4][10];(3)中国机会——石药SYS6055(2026.1 IND)打开监管路径,靶头未披露留下差异化空间;Ab-LNP与VHH靶头是中国公司可追赶的技术方向[5][12];(4)估值锚——MNC并购价(礼来$70亿+$24亿/艾伯维$21亿/吉利德$3.5亿)为"递送×靶头"平台提供参照[11][12]。 十五、结语:靶头决定In vivo CAR-T的"精度" In vivo CAR-T的"双层靶头"——载体表面的T细胞靶向配体(CD3/CD8/CD7)与CAR的肿瘤靶向域(CD19/BCMA/CD70/DLL3)——是这门技术区别于一切既往细胞治疗的独特工程维度[1][2][4][5]。Umoja(CD3-CD19)、Kelonia(CD3-BCMA)、Capstan(CD8-CD19)、Interius(CD3-CD19)正在用临床数据定义"靶头组合"的最优解[1][5][7][11][16][21]。 In vivo CAR-T的终局不是"某一种载体"的胜利,而是"载体靶头(递送精度)×CAR靶头(肿瘤精度)×适应症(血液瘤→实体瘤)"三维矩阵的持续优化。当CD3/BCMA证明体内CAR-T可行,当CD8/VHH带来选择性,当CD70/DLL3打开实体瘤——靶头选择的每一次演进,都在重新定义"打一针生成抗癌细胞"的精度与边界[1][2][4][5][11]。 希望加入“全球GCT行业交流群”的读者，请加以下二维码联系工作人员 参考文献 [1]PMC 12857126(Gao Y等,2026):In vivo engineering 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2025年6月，Capstan Therapeutics 与 Carl June 团队在 Science 上发表了里程碑式研究，首次系统验证了靶向脂质纳米颗粒（tLNP）在体内直接重编程T细胞生成功能性CAR-T的技术路径（1）。同年6月11日，核心管线CPTX2309进入I期临床，艾伯维随即以21亿美元完成对 Capstan Therapeutics 的收购，标志着 In Vivo CAR-T 时代的正式开启。近期接踵而至的巨额交易，使得该赛道的热度持续攀升。2025年是 In Vivo CAR-T 的"交易丰收年"，MNC 密集布局。例如，阿斯利康以10亿美元收购 EsoBiotec，获得其 ENaBL 慢病毒平台及靶向BCMA的ESO-T01管线；艾伯维则以21亿美元收购 Capstan Therapeutics，锁定其 tLNP 平台及已进入临床的 CPTX2309（CD19）。两大交易分别代表了慢病毒和 LNP-mRNA 两大技术路线的标杆布局。2026年，In Vivo CAR-T 领域更是迎来了跨国药企（MNC）重金抢位与技术PoC（概念验证）落地的大爆发，交易重点从早期的技术平台预判转向具备临床数据和高靶向特异性的优质标的。其中，礼来以最高70亿美元重金收购Kelonia并揽入Orna，完成了慢病毒与环状RNA（oRNA）的双路径布局；强生则豪掷数十亿美元锁定Sail Biomedicines，将应用场景从血液肿瘤大幅延伸至自身免疫性疾病的“免疫重置”。整体交易呈现出规模更大、向临床突破看齐，以及在肿瘤和自免双赛道齐头并进的鲜明特征。然而，2026年8月，RiboX Therapeutics的体内CAR-T疗法RXIM002在IIT中报告了一例患者死亡，这也是近期国内该类（基因治疗、体内CAR-T）疗法中已知的第三起严重不良事件。接连发生的这些案例，提示行业在快速推进的同时，若能在临床前阶段建立更完善的动物模型评价体系用于药效和安全性评估，或有助于更早地识别潜在风险，为临床决策提供更多审慎依据。一、in vivo CAR-T两大技术路线：慢病毒 vs LNPIn vivo CAR-T 可以通过慢病毒或者LNP两种方式进行递送，从临床数据来看，两条技术路线均展现出令人振奋的疗效信号。虹信生物（LNP路线）开发的 HN2301 是一款基于 mRNA-LNP 的 in vivo CAR-T 候选药物，利用靶向 CD8⁺ T 细胞的 EnC-LNP 递送 CD19 CAR mRNA，用于治疗系统性红斑狼疮（SLE）。2025年9月，该研究成果发表于 New England Journal of Medicine，成为全球首个公布的基于 mRNA-LNP 技术的 in vivo CAR-T 临床数据，展现了良好的安全性和疗效信号（2）。此外，通过环状RNA（circRNA）等新技术延长mRNA的表达时间，也是该领域的热点方向。在慢病毒路线方面，Kelonia Therapeutics 开发的 KLN-1010（靶向BCMA）于2026年ASCO年会上公布了I期临床数据，客观缓解率（ORR）达到 100%，随后被礼来以最高70亿美元收购（3）。同期，传奇生物在2026年EHA年会上公布了其 CD19/CD20 双靶点 in vivo CAR-T 疗法 LB2501 在复发/难治性B细胞非霍奇金淋巴瘤中的I期临床数据，同样达到 100% ORR（4）。二、为什么 In Vivo CAR-T 需要靶点人源化小鼠？ tLNP 递送 in vivo CAR-T 的核心逻辑在于：通过静脉注射偶联靶向抗体的 LNP，将编码 CAR 的 mRNA 精准递送至体内特定免疫细胞，在体内直接完成"细胞工程化"过程。这一过程涉及两个关键的分子识别事件：普通小鼠的免疫靶点与人同源性仅约60%，人源抗体无法有效识别小鼠同源蛋白。因此，评价一款 tLNP-in vivo CAR-T 药物，必须同时确保上述两个识别事件均能走通——这需要构建双靶点乃至多靶点人源化小鼠模型。2.1细胞靶向层：tLNP 递送受体（第一步识别）2.2细胞杀伤层：CAR 识别靶点（第二步识别）2.3双/多靶点组合：一步配齐"递送+杀伤"南模药物靶点人源化小鼠平台覆盖以 T 细胞标记分子人源化为基底，搭配各类致病抗原，打造"递送+杀伤"一体化评价模型：三、 小鼠体内验证：CD8 VHH-tLNP 与 CD7 VHH-tLNP 的体内药效数据3.1 CD8 VHH-tLNP 在 hCD8A 小鼠上的验证实验一：实验设计：对比 CD8 VHH 偶联 tLNP 在 WT C57BL/6 小鼠与 HO hCD8A (NM-HU-242587) 小鼠体内的 eGFP-luc mRNA 递送效率。10 μg 与 30 μg 两个剂量梯度IVIS 全身成像 + 离体器官成像主要结果：图1. 在HO hCD8A小鼠中，经靶向hCD8A的LNP处理后各器官的体内生物发光成像。向野生型C57BL/6小鼠和HO hCD8A小鼠（n=3，7周龄，雄性）静脉注射包裹荧光素酶mRNA的10 µg或30 µg抗hCD8a VHH偶联LNP。随后收集脑、心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏及淋巴结等器官，并使用IVIS系统评估荧光素酶表达情况。（A）不同剂量组中各器官的代表性生物发光信号（以相对辐射度表示，例如光子/秒/平方厘米/球面度）。（B）IVIS信号进行定量分析。主要结论：CD8 VHH-tLNP 可在 hCD8A 人源化小鼠体内实现 T 细胞靶向递送，脾脏信号呈现明确的剂量依赖关系，是评价 CD8 靶向 in vivo CAR 的理想模型。实验二：实验设计：基于 HO hCD8A (NM-HU-242587) 小鼠，评估 CD8 VHH 偶联 tLNP体内递送 eGFP mRNA 的效果，并与人 PBMC 及小鼠脾脏细胞的体外递送情况进行对比分析。流式检测 TCRβ+CD4-T细胞上eGFP的表达实验所使用eGFP mRNA及CD8VHH偶联tLNP均由南京金斯瑞生物科技有限公司合成并提供主要结果：图2. CD8 VHH-tLNP 在人 PBMC 及 hCD8A 小鼠体内外 TCRβ+CD4- T 细胞上的 eGFP 递送效率。将人PBMC，hCD8A 小鼠脾脏细胞在体外使用 anti-CD3（1 μg/mL）、anti-CD28（1 μg/mL）及IL-2（300 IU/mL）刺激培养 48 小时（PBMC）或24小时（hCD8A脾细胞）。随后，未处理，或加入对照 LNPs 或抗 CD8 靶向 LNPs（anti-CD8 tLNP-eGFP）共同孵育24小时后进行流式检测。将 HO hCD8A 小鼠经静脉注射（i.v.）给予模拟对照组（mock control）、对照 LNPs 或抗 CD8 靶向 LNPs（anti-CD8 tLNP-eGFP），24小时后取小鼠外周血，脾脏及骨髓进行流式检测。主要结论：anti-CD8 tLNP 可以在人PBMC，hCD8A 小鼠脾脏细胞的TCRβ+CD4- T细胞中实现>80%的转染效率anti-CD8 tLNP 在注射后24h可以实现 hCD8A 小鼠体内各组织（脾脏、骨髓 、外周血 ）的TCRβ+CD4- T 上eEGP的高效递送和表达。3.2 CD7 VHH-tLNP 在 hCD7(V2) 小鼠上的验证实验一：实验设计：CD7 VHH 偶联 tLNP在hCD7(V2) 小鼠（NM-HU-232423）递送 Luc-mCherry mRNA，IVIS 成像追踪荧光素酶体内分布FACS 分析报告基因在各淋巴细胞亚群的表达情况实验所使用Luc-mCherry mRNA及CD7 VHH偶联tLNP均由南京金斯瑞生物科技有限公司合成并提供主要结果：图3. 在杂合型hCD7(V2)小鼠中，靶向hCD7的LNP体内生物发光成像。向HE hCD7(V2)小鼠静脉注射10 µg或25 µg的CD7 VHH偶联LNP，该LNP包封了编码荧光素酶-mCherry mRNA（LNP由GenScript提供）。（A）注射后第1天，从背侧和腹侧进行全身成像。（B）成像结果的定量分析。（C）在全身成像后，收集脑、心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏及淋巴结等器官，图中展示了不同剂量组中各器官的代表性生物发光信号以及（D）各组中每个器官的定量辐射度(photons/sec/cm²/sr) 。图4. 通过FACS检测HE hCD7小鼠脾脏中淋巴细胞亚群的mCherry表达。从静脉注射10 µg或25 µg LNP（由GenScript提供）的HE hCD7(V2)小鼠（雄性，18周龄）中收集脾细胞，并于注射后一天通过流式细胞术进行分析。主要结论：生物发光信号主要分布于肝脏、脾脏及淋巴结，呈现剂量依赖性CD7 靶向性导致细胞表面 CD7 表达下调——这是 VHH 特异性结合靶点并介导内化的直接证据CD7VHH tLNP的靶向递送能力和靶细胞表面CD7的表达值相关实验二：实验设计：4种CD7 VHH 偶联 tLNP及Control LNP静脉注射24小时后，在hCD7(V2) 小鼠（NM-HU-232423）体内递送检测FACS 检测多组织来源各淋巴细胞亚群的 hCD19-CAR (FMC63) 表达阳性率实验所使用 hCD19 CAR mRNA及CD7 VHH偶联tLNP均由南京金斯瑞生物科技有限公司合成并提供主要结果：图5. 通过FACS检测HO hCD7小鼠全血，脾脏，骨髓，肝脏淋巴细胞亚群上CAR表达。HO hCD7(V2)小鼠（雌性性，10周龄）从静脉注射4中不同CD7 VHH 偶联 tLNP （由GenScript提供）及Control LNP，并于注射后24小时通过流式细胞术分析小鼠全血，脾脏，骨髓及肝脏淋巴细胞亚群上CAR的表达阳性率。（A）小鼠全血淋巴细胞亚群上CAR的表达情况。（B）小鼠脾脏淋巴细胞亚群上CAR的表达情况。（C）小鼠骨髓淋巴细胞亚群上CAR的表达情况。（D）小鼠肝脏mCD45+, mCD45-及mCD3+细胞上CAR的表达情况。（n=2 or 3）。CD7VHH-LNP-2及CD7VHH3-LNP-2给药组给药后24小时内均有一只小鼠死亡。主要结论：CD7VHH偶联的tLNP在注射后24h 可以在小鼠脾脏和骨髓的CD8 T细胞中实现高于30%的CAR转染效率且在肝脏的非免疫细胞（CD45-）中脱靶表达极低小鼠全血，脾脏及骨髓上CAR的阳性表达率在表达hCD7的不同免疫细胞亚群上均有差异。不同LNP配方的CD7 VHH 偶联 tLNP的递送能力不同。hCD7小鼠可用于评价不同配方CD7 tLNP在不同组织来源淋巴细胞上的递送能力，同时可以用于安全性评价。四、 靶点人源化小鼠 + tLNP In Vivo CAR 标准方案（SMOC提供的实验服务）五、结语From bench to bedside——In Vivo CAR 正在以“现货+体内生产”的范式改写细胞治疗的产业逻辑。而临床前药效评价的核心，始终在于"模型是否模拟人体"。南模生物药物靶点人源化小鼠平台以其 1500+ 靶点人源化小鼠矩阵、成熟的 tLNP 验证经验和全流程 CRO 服务能力，致力于成为全球 in vivo 细胞治疗研发的临床前金标准。Refrence：1.Hunter TL, Bao Y, Zhang Y, Matsuda D, Riener R, Wang A, Li JJ, Soldevila F, Chu DSH, Nguyen DP, Yong QC, Ross B, Nguyen M, Vestal J, Roberts S, Galvan D, Vega JB, Jhung D, Butcher M, Nguyen J, Zhang S, Fernandez C, Chen J, Herrera C, Kuo Y, Pica EM, Mondal G, Mammen AL, Scholler J, Tanis SP, Sievers SA, Frantz AM, Adams GB, Shawver L, Farzaneh-Far R, Rosenzweig M, Karmali PP, Bot AI, June CH, Aghajanian H. In vivo CAR T cell generation to treat cancer and autoimmune disease. Science. 2025 Jun 19;388(6753):1311-1317. doi: 10.1126/science.ads8473. Epub 2025 Jun 19. PMID: 40536974.2.Wang Q, Xiao ZX, Zheng X, Wang G, Yang L, Shi L, Xiang N, Wang X, Zha GF, Schett G, Chen Z. In Vivo CD19 CAR T-Cell Therapy for Refractory Systemic Lupus Erythematosus. N Engl J Med. 2025 Oct 16;393(15):1542-1544. doi: 10.1056/NEJMc2509522. Epub 2025 Sep 17. PMID: 40961420..3.Kelonia Therapeutics (2026) 'KLN-1010 I期临床研究', ASCO 2026 Annual Meeting.4.传奇生物 (Legend Biotech) (2026) 'LB2501 CD19/CD20 双靶点 in vivo CAR-T I期临床研究', EHA 2026 Annual Meeting.相关阅读关于我们上海南方模式生物科技股份有限公司（Shanghai Model Organisms Center, Inc.，简称"南模生物"），成立于2000年9月，是一家上交所科创板上市高科技生物公司（股票代码：688265），始终以编辑基因、解码生命为己任，专注于模式生物领域，打造了以基因修饰动物模型研发为核心，涵盖多物种模型构建、饲养繁育、表型分析、药物临床前评价等多个技术平台，致力于为全球高校、科研院所、制药企业等客户提供全方位、一体化的基因修饰动物模型产品解决方案。