CPTX-2309

ESO-T01是第三代非复制型自失活慢病毒载体，可表达PRG1801 BCMA 靶向嵌合抗原受体（CAR），受T细胞特异性合成启动子调控；为规避慢病毒对哺乳动物细胞的广泛嗜性，研究人员对水疱性口炎病毒糖蛋白G（VSVG）的关键残基进行了突变。 该载体经工程改造的包膜不含MHC I（主要组织相容性复合体I类），以降低免疫原性；展示人CD47，从而抑制单核巨噬细胞的吞噬作用；同时表达一种llama源膜锚定单域抗体（该抗体靶向T细胞αβ受体（TCR）链的恒定区），以实现T细胞靶向。 ESO-T01通过将三种辅助质粒瞬时转染至MHC I KO/CD47 hi /TCR VHH 293T生产细胞制备而成：这三种辅助质粒包括编码Gag-Pol多蛋白的Gag/Pol质粒、编码Rev蛋白的Rev质粒，以及编码靶向缺陷型VSV-G突变体包膜蛋白的ENV质粒；此外，还需转入一种转导质粒，该质粒携带受 T 细胞特异性合成启动子调控的PRG1801 BCMA CAR基因。 Figure S1: CAR construct and design mechanisms (A) CAR construct of ESO-T01. (B) Design mechanisms of ESO-T01. ESO-T01的生产流程为连续过程，原料药（DS）与制剂（DP）之间无实质性步骤。原料药属于过渡阶段产品，在此阶段，ESO-T01载体经配制、无菌过滤后，灌装至最终容器密封系统以待冷冻。 ESO-T01的上游制造流程始于一支MHC I KO/CD47 hi /TCR ab VHH 293T B619-38主细胞库（MCB）。细胞在培养基中逐步扩增：从T225规格培养瓶扩大至3个CellStack® 10细胞工厂；随后，扩增后的细胞接种至30m²Scale-X™Carbo固定床生物反应器，进一步扩增后用于接种 30 m²或200 m² Scale-X™ Carbo/Nitro生物反应器。 在生产生物反应器中，以优化的细胞密度，通过GMP级聚乙烯亚胺将GMP级Gag/Pol、Rev质粒以及高质量（HQ）ENV、转导质粒转染至细胞。转染后24、48和60小时，批量收获组分，经澄清装置澄清后，通过切向流过滤浓缩；随后，使用Mustang™ QXT 5000层析柱通过阴离子交换层析纯化病毒，再经0.2μm聚醚砜滤器进行中间过滤灭菌，最终灌装至最终容器密封系统。 所有产品灌装至最终容器后，由一名操作员对所有容器进行100%目视检查，随后放入保护性铝制盒中，立即冷冻以满足长期≤-65°C的预定储存条件。制剂需符合预设的放行标准，方可放行用于临床。 Reference: Supplement to: Xu J, Liu L, Parone P, et al. In-vivo B-cell maturation antigen CAR T-cell therapy for relapsed or refractory multiple myeloma. Lancet 2025; published online July 2.  https://doi.org/10.1016/S0140-6736(25)01030-X. TONACEA 01 慢病毒载体在in vivo CAR-T中的设计逻辑与局限 01 核心设计特征 慢病毒作为传统整合型载体，其在CAR-T中的应用依赖于病毒包膜工程化和靶向性改造。文献中提到的第三代自失活慢病毒（如 ESO-T01）通过以下设计优化 in vivo递送： 包膜修饰：删除MHC I以降低免疫原性，表达人CD47抑制单核吞噬系统的清除，同时展示抗TCR单域抗体实现T细胞靶向（避免泛嗜性）。 启动子调控：采用T细胞特异性合成启动子，限制CAR在T细胞中表达，减少脱靶效应。 安全性改进：通过自失活设计（LTR缺失）降低病毒复制风险，但仍存在插入突变隐患（偏好整合至活跃转录区）。 02 临床转化瓶颈 生产复杂性：依赖瞬时转染293T细胞，需严格GMP条件，规模化生产难度高，成本昂贵。 免疫原性：病毒蛋白（如 VSV-G）可能引发中和抗体，限制重复给药。 靶向精度不足：即使经过包膜改造，仍难以完全避免对非T细胞的感染（如肝细胞、单核细胞），增加毒副作用风险。 TONACEA 02 LNP-mRNA/miniCircDNA的非病毒递送策略与技术细节 01 LNP的结构设计与靶向机制 核心组成：由可离子化脂质（促进内体逃逸）、胆固醇（稳定结构）、PEG-脂质（减少蛋白冠形成）和辅助脂质组成，通过微流控技术实现mRNA的高效包裹。 靶向修饰： 主动靶向：表面偶联抗CD3、CD4、CD5等T细胞特异性抗体（如CD5靶向LNP 在小鼠模型中实现CAR-T体内生成，且心脏毒性降低）。 被动靶向：通过调整脂质组成（如C14-4离子化脂质）实现脾脏富集（T细胞富集器官），结合主动靶向提升T细胞占比（文献中CD3靶向LNP的T细胞转染效率较非靶向提高3-5倍）。 02 mRNA与miniCircDNA的选择逻辑 mRNA优势：非整合型递送，表达周期短（2-7天），降低插入突变风险，适合短期抗肿瘤响应（如急性白血病）。文献中CD19-CAR mRNA通过CD8靶向LNP递送，在人源化小鼠中实现90% B细胞清除。 miniCircDNA潜力：作为非病毒整合型载体（需结合转座酶如PiggyBac），通过 LNP 递送可实现长期表达。例如，PBAE纳米颗粒携带miniCircDNA（含CAR和转座酶基因），在小鼠白血病模型中实现持续6个月的肿瘤控制，且无明显毒性。 03 关键技术挑战的解决方案 内体逃逸：LNP中可离子化脂质在酸性内体中质子化，与膜融合释放cargo；或通过引入融合肽（如HA2）增强逃逸效率。 蛋白冠干扰：通过PEG化或聚谷氨酸涂层减少血清蛋白吸附，文献中CD3靶向LNP经聚谷氨酸修饰后，脱靶细胞摄入降低40%。 TONACEA 03 核心差异与应用场景适配性 TONACEA 04 非病毒递送的突破性设计思路 多靶点协同靶向：文献中LNP通过同时偶联CD3和CD28 抗体，既实现 T 细胞靶向，又通过共刺激信号增强T细胞活化，提升CAR表达效率（较单靶点靶向提高 2-3 倍）。 时空控制表达：结合T细胞特异性启动子（如CD3ε启动子）与可诱导系统（如 tet-on），仅在肿瘤微环境（TME）中激活CAR表达，减少全身毒性。 联合递送策略：LNP同时携带CAR mRNA和免疫检查点抑制剂siRNA（如 PD-1 siRNA），在小鼠模型中实现CAR-T功能增强和肿瘤微环境重塑的协同效应。 TONACEA 05 临床转化的核心挑战对比 慢病毒：需解决免疫清除（抗VSV-G抗体）和插入突变长期风险，目前仅少数临床前研究（如Umoja的UB-VV111和EsoBiotec的ESO-T01）探索in vivo应用。 LNP系统：需提升体内转染效率（目前小鼠模型中约10-20% T细胞阳性，人类临床需≥30%）和长期表达稳定性（miniCircDNA转座效率仍需优化）。 文献指出，LNP-mRNA因其安全性和可扩展性，更可能率先实现临床转化（如 Capstan的CPTX2309已进入I期临床），而慢病毒在需长期表达的场景中仍具不可替代性，但需依赖更精准的靶向递送技术突破。

2025年9月23日，Arcturus 在加州南区联邦地区法院起诉 AbbVie 和 Capstan 等，指控 Arcturus 的前员工 Priya Karmali 与顾问 Steven Tanis 将 Arcturus 专有的 LNP 相关商业秘密转移至 Capstan 和 AbbVie，开发了递送系统并获得了专利保护。 Arcturus 起诉 AbbVie 和 Capstan 侵犯其 LNP 相关的商业秘密 by TiPLab 木桃 2025年6月，AbbVie 宣布拟以约 21 亿美元收购 Capstan Therapeutics，其中包括 CPTX2309 ， CPTX2309 是一款潜在的同类首创体内 tLNP 抗 CD19 CAR-T 候选疗法，当时正处于 I 期临床试验。AbbVie 还将收购 Capstan 用于体内递送RNA的 tLNP 平台技术。AbbVie 于 2025 年 8 月完成了该交易。 Arcturus 的诉状称，Capstan 借助其对 Arcturus 商业秘密的滥用，促成了自身被 AbbVie 收购。Arcturus指控的内容包括：禁止进一步使用或披露商业秘密、请求损害赔偿、确立发明人身份等。 Arcturus 长期致力于开发可电离脂质，使其能够兼容不同尺寸的有效载荷（siRNA或mRNA）。2020年，Arcturus 员工 Kumar Rajappan开始与Tanis共同开发一种新的生物可降解脂质，具有高效力和高降解性等优势。 2020年12月，Rajappan 和 Tanis在往来邮件中描述了一系列 Group 2 脂质，其特征之一是具有酸性核心结构，这些内容从未被公开。 这些脂质结构包含在2021年递交的一份美国临时申请中并随后衍生为PCT国际申请PCT/US2022/049607。 2022 年 1 月，Capstan 聘请 Priya Karmali（长期在 Arcturus 工作的员工）担任首席技术官。同时，Capstan 还聘用了 Steven Tanis（当时正以顾问身份为 Arcturus 开发LNP中使用的新型脂质）。 在 Karmali 入职仅三个月后，Capstan 就递交了一项与 LNP 相关的美国临时申请并在之后转换为PCT专利申请（PCT/US2023/017647，WO2023196444A1，’444申请），其仅将 Karmali 与 Tanis 列为发明人。 Arcturus 声称在 ’444申请中，Karmali 和 Tanis 描述了来自 Arcturus 脂质库的脂质商业秘密的轻微改动版本。例如，’444 申请中的脂质结构 A-11 和 A-12 是对邮件往来中提到 Group 2 脂质的近似修改，其中有一个分子仅改变了一个原子。 来源：WO2023196444A1 Capstan 在后续的专利申请中将脂质结构 A-11 重命名为 “CICL1”，并衍生了其他专利（申请），包括已授权专利US12,311,033、PCT/US2024/049627和US18/904,951等。 Capstan 的 CPTX2309 中使用A-11/CICL1 作为关键组成部分。 Arcturus 直到 2023 年底得知 Capstan 的专利申请已公开才发现这些不当行为，此时距 Karmali 离开 Arcturus 已近两年。 与此同时，Tanis 仍然在向 Arcturus 报账并提供服务。2024 年 4 月，Arcturus 就当时所获知的 Tanis 的不当行为致函 Capstan并终止了与 Tanis 的顾问协议。 我们将跟进后期的案件进展。 * 以上文字仅为促进讨论与交流，不构成法律意见或咨询建议。 © 作为一家专业服务公司，TiPLab坚持原创的系统的研究，注重系统性知识积累与专业影响力。欢迎读者个人分享转发，各专业平台媒体如需转载请联系TiPLab获得授权。  TiPLab提供基于研究的核心知识产权服务 FTO：技术商业化实施的侵权风险防范 TiPLab通过对细分技术领域内核心技术和重要专利的长期研究，结合自身在数据检索和分析方面的专长，致力于帮助客户深入了解、积极应对潜在的专利侵权风险。 Due Diligence：商业活动中的知识产权尽职调查 在企业许可交易、融资、并购、上市等过程中，TiPLab帮助企业和投资方了解目标技术/产品的专利保护强度及产品商业化过程中潜在的专利侵权风险，从而为商业谈判和决策提供支持依据。 Patenting：全球范围内高价值专利资产的创设 TiPLab熟知全球主要国家和地区的法律实践和细分领域内的前沿技术进展情况，通过前瞻性的专利布局策略，帮助客户通过创设有价值的专利资产而获取、保持和巩固独特的竞争优势。