学习推荐 | HCP检测方法建立考虑要点
2024-01-03
临床3期诊断试剂
宿胞残留蛋白及其危害宿主细胞残留蛋白（Host Cell Protein，HCP）是指宿主细胞生产或者编码产生的非目标蛋白，由于细胞凋亡、死亡、裂解等过程会释放到细胞培养上清中，构成生物制品生产工艺过程中相关杂质的主要组成部分。作为生物制品中的非目标成分，HCP即使处在较低的水平上，也可能引发机体未知的免疫应答从而影响生物制品的功效。某些具有蛋白水解活性的HCP如果未充分去除或失活，也会影响药品的稳定性和功效，如脂肪酶家族的HCP(LPL, LPLA2, PLBL2等)。另外已有文献报道HCP也会导致生物制品的聚集和片段化等。宿主细胞残留蛋白检测法规要求美国药典、欧洲药药典以及中国药典等都有关于HCP控制的详细内容。美国药典USP <1132>章节中规定HCP的残留量应该控制在100ppm以下，该章节也阐述了电泳法、酶联免疫吸附法（ELISA）和LC-MS/MS等方法在HCP检测中的应用，并基于ELISA方法操作简便、快速、高灵敏、高通量等特点推荐使用ELISA方法检测HCP。表1. 不同HCP检测方法的比较生物制品项目开发所处的不同阶段，会使用不同类型的ELISA试剂盒作为HCP的检测策略。根据USP的建议，在临床前以及临床Ⅰ期和Ⅱ期的阶段，通常使用商业化的HCP检测试剂盒，而在临床Ⅲ期以及NDA阶段，由于商业化的通用HCP检测试剂盒抗体的覆盖率往往不足等局限性，需要考虑结合细胞类型及工艺特异性等因素来开发项目专属HCP检测试剂盒或平台型HCP检测试剂盒。图1. USP <1132>章节关于不同阶段使用HCP试剂盒类型的建议表2. 不同试剂盒类型的比较检测方法关键要点及法规趋势作为HCP残留检测的行业金标准，ELISA方法已被广泛使用，但该方法也有一定的局限性，容易造成一些HCP的漏检，所以建立HCP检测的ELISA方法时需要考虑其抗体覆盖率数据。同时随着研究的不断深入，越来越越多的文献报道某些高风险蛋白相比其它HCP更应该关注和研究其残留情况对产品的影响，如PLBL2蛋白。目前许多药典建议采用LC-MS等方法进行高风险蛋白的分析，对HCP残留情况进行正交分析，2023年5月USP也在最新一期的药典论坛中发布了质谱法在HCP检测中的应用通则（1132.1：Residual Host Cell Protein Measurement in Biopharmaceuticals by Mass Spectrometry），其中介绍了质谱法检测HCP的方法建立和验证相关内容。表3. 文献报道的常见高风险HCP针对宿主残留检测存在的难点、痛点，2023年1月9日（周二）19:00-20:30依科赛将携手生物制品圈，以“生物制品HCP质量控制法规和策略探讨”为题，从美国药典生物制品宿主细胞残留杂质标准、生物制品HCP残留商品化试剂盒选择策略以及HCP残留检测定制化开发的关键策略 三个方面探讨目前宿主检测技术发展现状和未来趋势，届时欢迎各位在线交流学习！识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入生物制品微信群！请注明：姓名+研究方向！版权声明本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。
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