qPCR突破传统检测局限，一技通用，细胞基因治疗产品细菌、真菌、支原体检测全覆盖

2024-04-23

细胞疗法基因疗法上市批准

细胞基因治疗利用细胞和基因技术治疗疾病，其独特之处在于使用活细胞作为载体或工具，将治疗基因导入患者体内。这些活细胞可以来自患者自身或经过基因改造。通过调控细胞的生长、分化、代谢等过程，细胞基因治疗能够精确治疗疾病，同时避免对正常细胞的损害，因此有更高的特异性和更强的靶向性。此外，它还可以根据个体差异进行个性化治疗，提高治疗效果。目前，已经有多款细胞基因治疗产品获批上市，其中包括11款造血干细胞产品、10款间充质干细胞产品、10款免疫细胞产品、3款DC细胞产品，以及3款其他干细胞产品。此外，还有40多种基因治疗产品。这些产品的出现为医学领域带来了革命性的变革，为患者带来了新的希望。近年来，细胞基因治疗技术的兴起为医学领域带来了革命性的变革。随着科技的不断进步和研究的深入，细胞基因治疗逐渐成为治疗各种疾病的有效手段，为患者带来了新的希望。本文福利：文末有赠书活动细胞基因治疗产品质量控制细胞基因疗法在医学领域应用广泛，但作为复杂且高风险的治疗手段，其产品的质量控制至关重要。由于“活细胞”的特殊性，细胞基因治疗在监管、质量控制和放行检测等方面面临挑战。因此，我们需要细致严谨地对待质量控制工作，确保患者的安全和治疗效果。在质量控制过程中，我们需要严格监控整个治疗过程，包括细胞来源选择、培养条件确定、基因编辑技术实施和生产流程监控等环节。同时，我们需要确保细胞来源可靠、细胞性质和健康状况已知，并控制最佳培养条件。基因编辑技术准确性是关键环节之一，我们需要评估编辑效率、验证编辑准确性并评估安全性。此外，建立严格的生产流程管理制度也是必要的，确保每个环节操作规范可靠，从而保证产品的质量和安全性。但最终，为了确细胞治疗产品是否符合相关法规和质量标准的要求，我们还需要对产品进行严格的放行检测。放行检测则是治疗产品最终的评估环节，通过对产品的全面检测和评估，确保其符合相关法规和标准的要求，能够安全地应用于临床治疗。传统生物药的无菌检测根据2020版中国药典（ChP）1101无菌检查法，无菌检查法包括薄膜过滤法和直接接种法。薄膜过滤法通常适用于粒径较小、形状规则的颗粒，而对于较大或形状不规则的颗粒，如细胞、病毒等，薄膜过滤法的过滤效果可能不佳。因此，在细胞基因治疗产品中，如果存在较大或形状不规则的颗粒，薄膜过滤法也可能无法满足过滤要求。直接接种法简单易行，是行业金标准，且不需特殊仪器，仅使用基本实验室设备和材料（如培养皿、培养基、接种环等），成本低，适合小型实验室或个人研究项目。操作简单，只需将微生物或细胞接种到适宜培养基，保持适宜温度和湿度即可促进细胞生长繁殖。但依据1101无菌检查法规定，供试品须在在药典规定的条件（培养基、温度）下培养不得少于14天，这使得活细胞药物可能无法在有效期内完成实验。快速无菌检查法虽然传统检测方法有其自身的优点，但是实验周期长，效率低且单次处理样品量有限，对于细胞基因治疗这类“活细胞”药物显然是不适用的。由于活细胞的限制性，细胞基因治疗产品的有效期通常很短，干细胞制剂放行规范要求干细胞制剂应在6小时内完成放行检验。因此需要更加快速、准确和灵敏的检测方法来确保产品的安全性和有效性。为了解决细胞基因治疗产品效期短与传统无菌检测周期长之间的矛盾，一系列快检方法应运而生。国家药典委员会在2021年10月26日公示了《细胞类制品微生物检查法通则》草案（并于2022年第二次公示），填补了我国在细胞类制品快速微生物检测领域的空白。此外，2022年1月，国家药品监督管理局公布了《药品生产质量管理规范-细胞治疗产品附录（征求意见稿）》。随后，2022年6月28日，全国团体信息平台发布了由上海市食品药品检验研究院、上海药监局上海药品审评核查中心和上海医药行业协会等共同起草的《细胞和基因治疗产品快速无菌检查法的验证技术要求》（T/SHPPA 012—2022）团体标准，弥补了国内细胞和基因治疗产品对快速无菌检查法的验证要求。无菌快速检测技术的出现是为了弥补药典现行无菌检查法的不足，它可以缩短检验时间，提高检测灵敏度、准确度、自动化程度，这种方法为细胞基因治疗产品的质量控制提供了更加准确和可靠的方法。快速无菌检查法的出现为细胞基因治疗产品的研发和生产带来了革命性的变革，为细胞基因治疗产业的快速发展提供了更加可靠的技术保障。qPCR快速检测逐渐完善的新指南文件及标准进一步凸显了快速无菌检查法在细胞基因治疗领域的重要性和必要性。目前，在细胞基因治疗领域，qPCR快检技术是应用较为广泛的快速无菌检查法之一。qPCR，即实时荧光定量PCR，是一种在PCR反应过程中通过荧光信号实时监测产物量的技术。其原理是利用荧光染料或荧光探针标记的特异性检测试剂，对PCR产物进行实时监测。当PCR产物通过荧光检测系统时，荧光染料或荧光探针会发出荧光信号，通过荧光信号的强度可以实时判断PCR产物的量。上图以miRNA为例的qPCR过程（图片来源：Vautrot, V., & Behm-Ansmant, I. (2020). Enhanced Probe-Based RT-qPCR Quantification of MicroRNAs Using Poly (A) Tailing and 5′ Adaptor Ligation. Quantitative Real-Time PCR: Methods and Protocols, 39-54.）qPCR技术通过实时监测PCR反应过程，利用特定的荧光染料或荧光探针提高了检测的灵敏度，能够准确检测到极低浓度的DNA或RNA。此外，qPCR中的特异性探针能够准确识别目标基因，确保了检测的特异性，避免了传统方法中由于培养基选择性或其他因素导致的假阳性结果。最重要的是，qPCR技术的定量范围广泛，通过对起始材料进行准确定量，可以对细胞基因治疗产品中的微生物污染进行准确定量。这为企业更好地了解产品中微生物的数量和动态变化提供了科学依据，为产品的质量控制和优化提供了支持。qPCR技术具有显著的优势，成为细胞类产品无菌放行检测的理想方法。首先，该技术能够快速完成大量样本的检测，显著缩短了检测时间。其次，该技术具有极高的准确性和灵敏度，能够准确检测细胞类产品中的微生物污染情况，确保产品的安全性和有效性。此外，qPCR技术的操作相对简单，不需要复杂的实验步骤和繁琐的仪器设备，降低了实验难度和成本。同时，该技术具有良好的可重复性，能够保证实验结果的稳定性和可靠性。因此，qPCR技术是一种快速、准确、操作简便且可重复性好的无菌放行检测方法，适用于细胞类产品的质量控制。在细胞类产品的无菌放行检测中，qPCR技术已成功应用于支原体、真菌、细菌这三大最主要的微生物的检测。武汉珈创生物技术股份有限公司，创建于2011年，是一家集生物技术服务与研发为一体的高新技术企业，专注于为生物药品/制品的生产企业及研发机构提供各类细胞（含重组细胞、干细胞、免疫细胞等）及原辅料的质量检测、病毒清除工艺验证技术服务。珈创生物自研开发的qPCR检测试剂盒处于行业领先地位，同时也是国内首家开发出qPCR真菌、细菌检测试剂盒的企业。01qPCR支原体检测珈创生物研发的细菌、真菌和支原体q-PCR检测试剂盒经过充分验证（包括与药典方法的可比性验证），可在6小时内完成对细胞治疗产品的快检放行检测，满足某些应用场景，尤其是新鲜细胞制剂产品的放行检测需求。本检测试剂盒采用荧光探针q-PCR法，用于定性检测细胞库、病毒种子库、细胞及基因治疗产品、其他生物制品中间产品及终产品中是否有支原体污染。本试剂盒严格按照EP2.6.7和JP XVII支原体检测相关指南和要求进行了验证。使用的引物探针可以检测>132种支原体，专属性强，不会与细菌、真菌、人类及动物细胞、常见病毒发生交叉反应。核酸检测限1~5 genome copies/reaction ，灵敏度高。支原体灵敏度10 CFU/ml以下，耐用性强，抗基质干扰，可经受反复冻融，与药典方法具有可比性。02qPCR真菌检测珈创生物研发的细菌、真菌和支原体q-PCR检测试剂盒经过充分验证（包括与药典方法的可比性验证），可在6小时内完成对细胞治疗产品的快检放行检测，满足某些应用场景，尤其是新鲜细胞制剂产品的放行检测需求。本试剂盒主要适用于效期短、批量小，无法保证在产品使用前完成放行检查的细胞类制品，也可用于检测主细胞库、工作细胞库、病毒种子批是否有常见病原性真菌的污染。可检测超过700种真菌，如常见致病性真菌如念珠菌属、曲霉属、链格孢属、枝孢菌属、青霉属、酵母属等。与非真菌有无交叉反应验证，核酸检测限低至 1 copy/μl。灵敏度高，抗基质干扰性强，可经受反复冻融，人员重现性好，仪器适配性广，与药典方法具有可比性。03qPCR细菌检测珈创生物研发的细菌、真菌和支原体q-PCR检测试剂盒经过充分验证（包括与药典方法的可比性验证），可在6小时内完成对细胞治疗产品的快检放行检测，满足某些应用场景，尤其是新鲜细胞制剂产品的放行检测需求。本试剂盒用于定性检测细胞、细胞及基因治疗产品以及其他生物制品中是否有细菌的污染。检测范围广，参照中国药典qPCR方法检测相关要求进行验证。检测体系与人类及动物细胞（猪源细胞除外）、真菌、支原体基因组均无交叉反应，特异性良好。核酸检测限1~5 genome copies/reaction，检测灵敏度高，检测体系抗基质干扰性强。操作简单，可批量完成检测。好书申领，免费赠书活动《PCR仪质量控制指南》一书系统介绍了PCR仪质量控制相关技术。其主要内容包括PCR技术的基本原理、现状及发展趋势和应用领域，PCR仪的常见分类、系统组成、操作及注意事项、维护保养与维修，影响PCR扩增质量因素分析，PCR仪期间核查，PCR仪的计量特性和校准。该书内容全面，图文并茂，将PCR仪的选购、管理、使用、维护、计量校准、期间核查、PCR实验方法优化等内容进行了有机融合，并对工作中遇到的知识难点和常见问题进行了讲解，针对性、指导性和可操作性强，具有较高的实用价值。参与方式：扫描下方二维码或点击“阅读原文”，登记信息即表示报名参与本次赠书活动，我们会从中抽选出10名幸运读者，赠送《PCR仪质量控制指南》一本。参考资料：[1]Vautrot, V., & Behm-Ansmant, I. (2020). Enhanced Probe-Based RT-qPCR Quantification of MicroRNAs Using Poly (A) Tailing and 5′ Adaptor Ligation. Quantitative Real-Time PCR: Methods and Protocols, 39-54.[2]干货丨支原体NAT（Q-PCR）快速检测方法的验证.珈创生物.2023-01-05.[3]2020版中国药典（ChP）、国家药品监督管理局、全国团体标准信息平台等.识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入生物制品微信群！请注明：姓名+研究方向！版权声明本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。