CYP1A1

要点速览 1 生物信息学分析和免疫组化染色显示，特应性皮炎（AD）皮损中CLDN1、CLDN4和OCLN的表达显著下调。 2 体外实验表明，IL-4和IL-13通过Jak/STAT6信号通路下调人永生化角质细胞（HaCaT）和正常人表皮角质形成细胞（NHEKs）中的CLDN1、CLDN4和OCLN表达，并增加细胞旁葡聚糖的通透性。 3 本维莫德通过激活芳基烃受体/芳烃受体核转位蛋白（AHR/ARNT）通路上调CLDN4和OCLN的表达，并诱导NRF2核转位减少角质形成细胞（KC）中的活性氧（ROS），从而抑制IL-4/IL-13诱导的CLDN1下调和STAT6磷酸化。 研究背景 AD是一种慢性炎症性皮肤病，病因涉及遗传易感性、皮肤屏障损伤和免疫失调。AD病变的特征包括表皮海绵状病变（细胞间隙增大）和T细胞浸润，特别是T辅助细胞2（Th2），Th1、Th17和Th22细胞也有参与。 紧密连接（TJ）封闭细胞间隙，是维持皮肤屏障功能稳定的重要结构。TJ蛋白包括claudins（CLDNs）、occludin（OCLN）、JAM-A、tricellulin、zonula occludens（ZO）和angulins等。既往研究发现，在AD中，这些TJ蛋白的表达往往下调，导致皮肤屏障功能受损，进而促进AD的发展和炎症反应的加剧。 AHR是一种细胞内转录因子，近年来其在AD发病机制和治疗中的作用引起了广泛关注。既往研究表明，AHR参与了TJ的调控。在AD病变中，AHR蛋白的表达增加。也有报道称，IL-4可以在信号转导子和转录激活子6 (STAT6) 依赖的方式下诱导和激活B细胞中的AHR。 我国自主研发的创新药物——本维莫德，已被证明对银屑病和AD有效。作为一种AHR激动剂，本维莫德可促进KC分化，并通过其内在特性和部分诱导NRF2通路基因来降低ROS水平，显示出抗氧化活性。北京大学人民医院张建中教授团队进一步分析了Th2细胞因子（IL-4/IL-13）和本维莫德对TJ调控的影响，为AD的治疗提供新的策略。该研究成果于2024年3月表于《Journal of Investigative Dermatology》杂志，（IF=5.7）[1]。 研究结果 1 在AD皮损中，TJ蛋白的表达水平普遍下降 通过生物信息学分析，基于多个基因表达数据集（GSE130588、GSE133477、GSE32924和GSE133385）发现：在AD皮损中，CLDN1和CLDN4的mRNA水平显著低于非病变皮肤，而OCLN的mRNA水平在AD皮损和非皮损中均比正常皮肤显著降低，但在皮损和非皮损之间无显著差异（图1a,b,c）。免疫组化染色进一步证实，AD皮损中的CLDN1蛋白表达显著低于正常皮肤，而CLDN4和OCLN的蛋白表达虽有下降，但差异不显著（图1d）。 图1：生物信息学分析及免疫组化染色评估AD皮损中CLDN1、CLDN4和OCLN的表达水平； 注：*P < .05, **P < .01, ***P < .001, ****P < .0001 2 IL-4、IL-13和IFN-γ能够单独下调TJ蛋白的表达 使用不同浓度的细胞因子（IL-4、IL-13、TNF-α、IFN-γ和IL-17A）处理HaCaT和NHEKs，结果显示，IL-4、IL-13和IFN-γ显著下调了HaCaT中TJ蛋白（CLDN1、CLDN4和OCLN）的mRNA和蛋白水平，而TNF-α和IL-17A则没有显著影响（图2a,b,c），且IL-4/IL-13之间没有协同效应。在NHEKs中，IL-4/IL-13处理显著降低了CLDN4和OCLN的蛋白水平，但对CLDN1的蛋白水平影响不显著（图2d,e）。 图2：IL-4/IL-13对HaCaT及NHEKs中TJ蛋白表达的影响； 注：*P < .05, **P < .01, ***P < .001, ****P < .0001 3 IL-4/IL-13和IFN-γ诱导的HaCaT中TJ蛋白表达下调是通过Jak/STAT6信号通路介导的 使用Jak1/2抑制剂芦可替尼、STAT6抑制剂AS1517499和STAT1抑制剂氟达拉滨预处理HaCaT。结果显示，芦可替尼剂量依赖性地抑制了IL-4/IL-13和IFN-γ诱导对TJ蛋白（CLDN1、CLDN4和OCLN）mRNA表达的影响（图3a），而STAT6和STAT1抑制剂也有效抑制了以上细胞因子诱导的TJ蛋白下调（图3b）。 此外，单独使用IL-4、IL-13或IFN-γ处理KCs会增加细胞旁葡聚糖通量，而同时使用IL-4/IL-13处理则导致更显著的葡聚糖通量增加。用1 mM 芦可替尼预处理HaCaT，可以有效抑制由IL-4/IL-13或IFN-γ诱导增加的葡聚糖通量（图3c）。 图3：Jak/STAT通路参与IL-4/IL-13/IFN-γ诱导的HaCa中的TJ蛋白下调； 注：*P < .05, **P < .01, ***P < .001, ****P < .0001 4 AHR通路和ROS在IL-4/IL-13诱导的TJ蛋白表达下调中起重要作用 IL-4/IL-13能够上调HaCaT和NHEKs中的AHR（图8a），使用Jak抑制剂芦可替尼、STAT6抑制剂AS1517499和ROS抑制剂二苯乙烯碘化物预处理后可以消除这种上调效应。IL-4/IL-13对典型的AHR通路产物CYP1A1或AHR抑制因子的表达没有影响（图4b）。沉默AHR mRNA的表达可以恢复IL-4/IL-13诱导下调的HaCaT中CLDN1的表达并减少CLDN4和OCLN的表达（图4c），同时增加了磷酸化的STAT6（图4d）。ROS抑制剂二苯乙烯碘化物抑制了IL-4/IL-13诱导的CLDN1下调，但不影响CLDN4或OCLN（图4e）；同时抑制了IL-4/IL-13诱导的磷酸化的STAT6及AHR上调（图4f和g）。 图4：AHR通路和ROS参与IL-4/IL-13诱导CLDN1、CLDN4和OCLN表达下调； 注：*P < .05, **P < .01, ***P < .001, ****P < .0001 5 本维莫德通过激活AHR/ARNT通路来上调CLDN4和OCLN表达，并阻断IL-4/IL-13或IFN-γ诱导的细胞旁葡聚糖通量增加 本维莫德依赖性地上调HaCaT和NHEKs中的CLDN4和OCLN表达，但不影响CLDN1的表达（图5a）。500 nM的本维莫德抑制了由IL-4/IL-13或IFN-γ诱导的跨细胞葡聚糖通量增加（图5b），且不影响细胞增殖（图5c）。本维莫德促进了AHR的核转位（图5d）并上调了CYP1A1和CYP1B1的表达（图5e），而敲除AHR或AHR核转位因子，或用AHR拮抗剂CH-223191预处理，可阻断本维莫德对HaCaT和NHEKs中CLDN4和OCLN表达的影响，同时，本维莫德处理后AHR蛋白水平也有所下降，但AHR mRNA的表达没有明显改变(图5f、g）。 图5：本维莫德通过AHR/ARNT通路上调CLDN4和OCLN的表达，并阻断IL-4/IL-13e或IFN基因诱导的细胞旁葡聚糖通量； 注：*P < .05, **P < .01, ***P < .001, ****P < .0001 6 本维莫德可抑制IL-4/IL-13诱导的STAT6磷酸化、TJ蛋白表达下调 本维莫德促进NHEKs中NRF2的核转位（图6a），并上调NQO1的表达；并能抑制IL-4/IL-13诱导的NHEKs中ROS的产生（图6b）和HaCaT中STAT6的磷酸化（图6c）。本维莫德还抑制了IL-4/IL-13诱导的HaCaT和NHEKs中TJ蛋白表达下调（图6d,e）。另外，本维莫德对IFN-γ诱导的STAT1激活或CLDN1下调没有影响，可恢复CLDN4和OCLN的表达（图6f）。 图6：本维莫德抑制IL-4/IL-13诱导的STAT6磷酸化、TJ蛋白表达下调； 注：*P < .05, **P < .01, ***P < .001, ****P < .0001 研究结论 该研究证实，IL-4/IL-13通过Jak/STAT6信号通路下调TJ蛋白（CLDN1、CLDN4和OCLN）的表达，从而导致KCs中TJ功能损害，促进AD发展。而本维莫德可以激活AHR/ARNT通路，上调CLDN4和OCLN表达，并诱导NRF2核转位减少ROS产生，从而抑制IL-4/IL-13引起的TJ损伤和STAT6磷酸化（图6g）。研究结果显示，本维莫德在保护表皮屏障功能中有潜在作用，为其用于AD治疗提供了新的理论依据，并为开发AD治疗药物提供了重要方向。 更多精彩 参考文献： [1]Wang X, Mao D, Jia J, Zhang J. Benvitimod Inhibits IL-4- and IL-13-Induced Tight Junction Impairment by Activating AHR/ARNT Pathway and Inhibiting STAT6 Phosphorylation in Human Keratinocytes. J Invest Dermatol. 2024 Mar;144(3):509-519.e7. doi: 10.1016/j.jid.2023.07.027. Epub 2023 Sep 20. PMID: 37734479. 免责声明 本微信文章中的信息仅供向医疗卫生专业人士提供科学信息，不可直接作为决策内容，中昊药业不对任何主体因使用本文内容而导致的任何损失承担责任。以上内容如涉版权请联系删除。

提到益生菌，相信大家对此并不陌生。生活中最常见的莫过于酸奶、乳酸菌饮品等，甚至有些人会主动去购买一些益生菌补剂。但一直以来，对益生菌的看法两极分化严重——有些观点极端地吹捧益生菌能“包治百病”，防腹泻便秘、防治高血压、降低胆固醇、增强抵抗力等等，听上去神乎其神；但此前，首医校长饶毅曾声称“全中国现在推广的益生菌无一不是假药”，在他看来现在市面上推出的益生菌多少有些“一无是处”了。客观来讲，益生菌无用论和万能论都有些“偏激”。益生菌，从其名字便可以看出，是一类有益于宿主健康的菌群。更详细来看，依据《益生菌于健康专家共识》中给出的定义，益生菌是指当给予一定数量时，能够给宿主带来健康益处的活的微生物。它们具有预防和改善腹泻、促进肠蠕动和营养物质吸收、调节免疫力等多种功能。所以，饶毅校长怒踩的并非是益生菌“本身”，而是市售益生菌产品。但近日来自多伦多大学的研究团队却颠覆性地发现，常见益生菌之一的乳杆菌能将膳食中的色氨酸代谢为吲哚，增加肿瘤相关巨噬细胞的活性，从而抑制肿瘤免疫，促进胰腺导管腺肿瘤的生长。该研究发表在Cell子刊Immunity上。万万没想到，鼎鼎大名的益生菌乳杆菌，竟成了肿瘤的帮凶？这其中有何缘由呢？https://doi.org/10.1016/j.immuni.2022.01.006微生物能够促进或抑制癌症，并非新闻。先前的人群试验显示，长期胰腺导管腺癌（PDAC）的幸存者中，微生物群多样性的增加，与存活率以及肿瘤微环境（TME）的免疫学特征有关。当将长期存活者的粪便微生物移植到小鼠模型中，能够减少其肿瘤的大小。基于这些发现，研究者开始思考：在PDAC的发生过程中，是否有微生物发挥了作用？为了回答上述问题，第一步需要探明的是：PDAC究竟是如何发生的。通常来看，巨噬细胞属于免疫细胞的一种，参与先天性免疫和细胞免疫。但肿瘤相关的巨噬细胞（TAM）则是另一回事，先前的研究发现，肿瘤组织中浸润的巨噬细胞是PDAC免疫浸润的主要组成部分，为肿瘤生长提供了基质支持，甚至能发挥抵抗化疗的作用。具体来说，研究者使用RNAseq比较了肿瘤内巨噬细胞和普通巨噬细胞的转录组差异后，发现：与正常巨噬细胞相比，PDAC TAM有880个基因的表达出现了增加，包括原肿瘤基因Arg1、Nos2和Cd274等。除此之外，多组学基因富集分析（iGSEA）显示，TAM中芳香烃受体（AhR）活性明显增加，其中AhR响应基因Cyp1b1的表达也有所增加。AhR是色氨酸代谢产物的传感器，也是一种有效的免疫调节剂。巨噬细胞中敲除AhR导致PDAC TME中TAM和CD8+ T细胞的炎症极化研究者定位到了在PDAC的发生过程中发挥着极为重要作用的一员大将——AhR。AhR是TAM前肿瘤表型的关键驱动因素，具有免疫调控作用，是抑制肿瘤免疫、促进腺癌生长的关键因素。相反，在AhR缺陷小鼠中，有416个基因的表达出现了变化，包括Arg1和Ido1的表达减少，即免疫调节转录特征下降；Il1b、Gzb和MHCII基因表达的增加，意味着更高的促炎性。此外，当TAM缺乏AhR的情况下，T细胞激活增加，小鼠的肿瘤重量和侵袭性腺癌程度均出现了下降。由此可见，TMA缺乏AhR能够有效减少多个PDAC肿瘤模型的负担，生存曲线也显示AhR缺陷小鼠具有更好的存活情况。AhR的药物抑制促进了TME的炎症，改善了对免疫治疗的反应定位到AhR之后，下一件更重要的是，便是找到TME中激活AhR的源头。由于AhR是哺乳动物和细菌代谢氨基酸Trp所产生配体的受体，于是研究者重点探究了这些途径，试图从其中找到一丝端倪。考虑到乳酸杆菌是肠道共生菌，具有通过Trp代谢产生吲哚的能力，那么乳杆菌是否会在AhR发挥作用的过程中发挥特定的作用呢？有意思的是，研究者发现，在使用抗生素氨苄西林（Amp）的情况下，乳杆菌受到明显抑制；与此同时，小鼠体内的肿瘤重量也有所减轻。具体来说，Amp处理下，TAM中AhR反应基因（Cyp1a1、Cyp1b1和Cyp1a2）表达明显减少，即AhR转录活性受到抑制。简而言之，使用Amp抑制乳杆菌后，有效提高了细胞中的免疫应答效果，从而抑制了肿瘤的生长。产生吲哚的微生物群驱动TME中的免疫抑制（1）紧接着，研究者测试了4种常见乳杆菌促肿瘤生长的作用力。结果显示，L. reuteri和L. murinus能够产生吲哚乙酸（IAA）和吲哚乳酸（ILA），这两种产物均能激活AhR，发挥促肿瘤的作用。其中，L. murinus的效果更为明显。于是，研究者在植入PDAC肿瘤前采用L. murinus灌胃了无菌小鼠。结果不出所料，与对照组相比，灌胃L. murinus的小鼠有着更大的肿瘤，可见L. murinus促进了PDAC肿瘤的生长。深层原因在于，L. murinus的存在增加了AhR活性，甚至促进了促癌基因Arg1、Ido1和Il10的表达。产生吲哚的微生物群驱动TME中的免疫抑制（2）总结来说，肿瘤相关巨噬细胞的AhR活性主要依赖于吲哚，而乳杆菌能将膳食中的色氨酸代谢为吲哚。比如，常见的乳杆菌L. murinus不仅会促进肿瘤生长和抑制肿瘤免疫，甚至还会增加部分促癌基因的表达。当然，也不必把益生菌一棒子打死。本研究是给大家提了个醒，非必要情况下不用补充益生菌。益生菌不一定等价于健康，可别聪明反被聪明误啦！参考资料：[1] Hezaveh K, Shinde RS, Klötgen A, Halaby MJ, Lamorte S, Ciudad MT, Quevedo R, Neufeld L, Liu ZQ, Jin R, Grünwald BT, Foerster EG, Chaharlangi D, Guo M, Makhijani P, Zhang X, Pugh TJ, Pinto DM, Co IL, McGuigan AP, Jang GH, Khokha R, Ohashi PS, O'Kane GM, Gallinger S, Navarre WW, Maughan H, Philpott DJ, Brooks DG, McGaha TL. Tryptophan-derived microbial metabolites activate the aryl hydrocarbon receptor in tumor-associated macrophages to suppress anti-tumor immunity. Immunity. 2022 Feb 8;55(2):324-340.e8. doi: 10.1016/j.immuni.2022.01.006. PMID: 35139353; PMCID: PMC8888129.撰文 | Swagpp编辑 | Swagpp来源 | 梅斯医学精彩推荐：1、吃对东西多活十年！Nature子刊：英国多个学术机构研究共同证实饮食结构与寿命密切相关！2、亲妈鉴定系统开启！Science新发现：怀孕可刺激神经干细胞分化，有利于母亲识别亲生幼崽！3、久坐伤身不用怕！《英国运动医学杂志》发现每天只需这样运动22分钟即可抵消久坐带来的死亡风险4、喝酸奶防抑郁！新研究揭示益生菌调节情绪新机制，有助于改善心理健康！5、Cell重磅：成功构建全球首个多腔室心脏类器官平台研究心脏发育和疾病本文仅用于学术分享，转载请注明出处。若有侵权，请联系微信：bioonSir 删除或修改！

口服生物可利用的、可逆的FXIa抑制剂作为新型抗凝血药物，具有较高的安全性和效果，特别适合慢性血栓性疾病的治疗。拜耳公司公开了开发口服FXIa抑制剂Asundexian的优化过程。该化合物首先通过基于结构的设计获得初始Hit化合物3经过替代高能量水分子、优化亲和力、预组织构象、填充额外亲脂口袋、减少代谢软点、掩盖极性氢等方式调整亲和力和每日一次口服给药所需的DMPK，最终获得临床候选化合物Asundexian。Asundexian目前已进入多个III期临床试验，用以治疗房颤和缺血性卒中，展现出广阔的应用前景。本文梳理了Asundexian的设计策略与优化路线，可为类似项目结构优化提供宝贵经验。Fig1. Asundexian的优化过程心脑血管疾病的发病率不断上升，临床上对药物的需求也日益增长。相较于现有药物，FXIa抑制剂能够通过靶向作用体内的凝血途径，从而避免对止血功能产生影响，可是更为安全有效的抗凝血剂。根据中国药物临床试验登记与信息公示平台官网公示，拜耳（Bayer）已登记两项关于口服FXIa抑制剂Asundexian（BAY2433334）的国际多中心（含中国）III期临床研究，针对的适应症分别为预防房颤患者卒中或体循环栓塞，以及预防患有急性非心源性栓塞型缺血性脑卒中或高风险短暂性脑缺血发作患者的缺血性脑卒中。近日JMC报道了有关Asundexian发现工作。研究人员通过基于蛋白质结构的从头设计确定了微摩尔级别的Hit。继续优化平衡效价和吸收，改善代谢稳定性、细胞色素P450相互作用谱和临床DMPK，验证了其药理学功能。整体设计方案贯穿了化合物构象行为和官能团行为的设计思想，保证官能团与目标蛋白的强相互作用，刚化FXIa预组织构象保持重要氢键作用，优化合适的低极性表面，实现效价和吸收的平衡。设计和优化过程总结如下part.01Hit发现研究人员最初对Bayer AG内部包含430万种化合物的数据库进行高通量筛选未得到有效Hit，转而采用SBDD方法进行从头设计可逆，靶向活性位点的化合物。受BMS2007年发表的四氮唑化合物启发，定义口服FXIa抑制剂重要相互作用：（1）亲脂性芳香基团（最好是氯芳基取代基）占据S1口袋；（2）羰基占据氧阴离子孔（OAH），并可与Lys192和Gly193的主链NH基团形成一个或两个强氢键；（3）强氢键受体作用于S1口袋边缘Gly216的主链NH；（4）强氢键供体（如NH基团）作用于捕获水分子（位于Leu39和Ser195之间）；（5）Linker携带中性或酸性官能团，能够接受两个氢键（来自Tyr143和另一捕获水分子）（6）由于这个设计概念涉及相对较多的极性官能团，期望使用亲脂性Linker连接。Fig2. FXIa口服抑制剂的重要相互作用以杂芳香核为中心进行枚举，经过对接、能量评价，获得化合物3，具有微摩尔效价，对其他丝氨酸蛋白酶（如凝血酶、FXa、胰蛋白酶）具有良好的选择性（所有IC50均大于50μM）。Fig3. 苗头化合物3及其作用模式part.02Lead寻找使用表征配体结合口袋内容纳估计结构和能量的分子动力学方法watermap，计算底物结合口袋中的水分子的作用能和熵变，寻找能量贡献位点（S1>S2>S1`>S1边缘>EBP）。为了提高化合物3的效力，邻位取代P1氯芳基额外填充EBP和S1`。并通过预组织吡啶酮和氯芳基环之间的二面角来进一步提高药效。研究人员提出，这个由FXIa共晶的3的这个二面角理想角度为-66°。目标设定为探索由一个或两个非氢原子组成的相对较小的，极性不太强的取代基占据EBP，经枚举对接排序，结果表明o-CN为局部最优。S1`口袋的能量不利的水分子，以亲脂性基团取代，化合物效力增加了10倍以上。探索C5取代基，旨在与主链Gly216形成相互作用，枚举各种取代基与EBP组合，计算排序。Cl取代物通过构象限制效价提高6倍。通过引入OCH3提供与Gly216主链形成氢键，效价提高29倍。化合物24，FXIa效价IC50为2nM，clogD7.5为1.6，性质良好，接下来优化人血浆抗凝活性。进一步探索P1`基团，引入甲氧乙基取代基，醚氧与Ser195捕获水分子的额外氢键作用，抗凝血活性有所增加，整合入环醚，提高了溶解度。在这个过程中化合物34被认为是综合性质最好的化合物，被用于首次人体研究评估，然而，化合物34口服暴露量和人类半衰期的不达预期。推测需要修改其羧酸部分。part.03P2`的调整由于中心酰胺键NH与Leu39通过水介导形成的相互作用必不可少，必须保持此苯胺结构；为了避免潜在毒性，需使用Ames阴性苯胺；并保证同时与His38、Arg37D和Tyr143形成氢键。枚举一系列非酸性P2`基团。用FEP+计算结合自由能，化合物43二氢吲唑啉酮满足条件，但tPSA高，Caco-2实验中几乎没有渗透性，并且显示高外排。将二氢吲唑啉酮改成氨基甲酰基（其中NH2一个氢参与分子内氢键，掩盖极性）或其他非酸性P2`衍生物提高了渗透性，但大鼠体内清除率较高，需要改善。part.04再次调整P1`调节代谢稳定性研究分子在大鼠和人肝细胞中的代谢发现，P1`是代谢软点，采用保持P1`小，减少代谢位点的策略优化得到乙基取代。part.05再次调整EBP提升效力根据体内药理学对单一立体异构体的效价目标为个位数纳摩尔级别，aPTT实验中延长血浆凝固时间，实验体积下，EC50<50μM。调节理化性质放弃了P2`羧酸，P1`烷基醚的扩展，再次调整效力的空间只剩EBP。选取五元杂芳基进行探索，希望通过调整C5，N4调整提高效力维持渗透。枚举组合，计算FEP+排序。测试后分析SAR，得出五元杂环以卤素原子取代后，卤素与Gly218主链NH形成氢键；杂芳环上邻三唑提升氢键强度。EBP最好的片段为1，2，3-三氮唑-1-基。part.06P2`再评价和candidate选择确定氯、三氟甲基或二氟甲基取代基的三唑为EBP首选，甲基或乙基小烷基是P1`的有利选项之后，再次优化P2`。尝试了不同取代考量CYP3A4抑制、Ames测试、外排、代谢稳定性等原因确定F取代的氨基甲酰基为最优片段。最后的修饰周期设计了3*3矩阵：CHF2、CF3、Cl；Me、Et、n-Pr；确定80（Asundexian）为候选化合物。临床候选物Asundexian的结合特征Fig4. Asundexian的结合特征P1氯芳基与Tyr228形成π-阳离子相互作用，取代能量不利的水分子；中心酰胺NH形成水介导的氢键；末端P2酰胺一个氢与Tyr143的酚羟基之间形成氢键；酰胺羰基与Arg37D形成一个氢键，与His414形成水介导的氢键；取代三氮唑的一个氟与Gly218形成氢键；乙基指向S1 '口袋形成亲脂作用；甲氧基氧和Gly216之间形成氢键；吡啶酮羰基与OAH中Gly193, Ser195形成氢键。Fig5. Asundexian的优化过程对Asundexian的深入评价显示，在缓冲液中测试IC50=1.0 nM和在人血浆中接触激活后测试IC50=0.14 μM，对FXIa具有有效的可逆抑制作用。Asundexian抑制FXIa最接近的同源物人血浆钾激肽，缓冲液中的IC50值为6.7 nM，人血浆中的IC50值为1.23 μM。Asundexian对与止血系统相关的丝氨酸蛋白酶，包括FVIIa、FIXa、FXa、FXIIa、凝血酶、尿激酶、组织纤溶酶原激活剂、活化蛋白C或纤溶蛋白，以及其他与口服给药途径相关的潜在重要蛋白酶，如胰蛋白酶、凝乳胰蛋白酶和钙脱蛋白（凝乳胰蛋白酶C），显示出超过1000倍的良好选择性。在人血浆中加入Asundexian后，aPTT实验的凝血时间延长，EC150为0.20 μM（以最终检测体积150 μL计算），以血浆浓度（50 μL）计算EC150为0.61 μM。家兔、犬、小型猪和豚鼠血浆样品的aPTT均有延长，EC150值分别为4.5、4.8、1.5和6.4 μM，而小鼠和大鼠血浆样品（EC150>30 μM）的凝血时间未见延长。在体内，通过多种血栓形成模型测定了Asundexian的抗血栓作用。在FeCl2诱导的兔颈动脉损伤模型中，与对照动物相比，剂量依赖性地减少血栓重量，在最高剂量下以预防方式静脉注射，几乎完全减少了血栓重量，ED50为380 mg/L。而在同时进行的耳出血时间测量中，未观察到影响。当Asundexian与抗血小板药物(阿司匹林和替格瑞洛)联用时，这种不增加出血时间的强抗血栓疗效得到了证实，并得到了静脉血管（FeCl2诱导的家兔颈静脉损伤）和动静脉分流模型研究的支持。当以PEG/乙醇/水溶液的10和30 mg/kg剂量家兔口服给药时，分别使血栓重量减少30%和91%。对于早期化合物，可逆的和时间依赖性的CYP抑制是一个至关重要的参数。Asundexian对CYP1A2、CYP2A6、CYP2B6、CYP2C19、CYP2E1、CYP2J2和CYP3A4活性的影响不超过最高测试浓度（IC50>41 μM）。对CYP2C8（IC50=3.6 μM）、CYP2C9（IC50=17 μM）、CYP1A1（IC50=13 μM）和CYP2D6（IC50=19 μM）有较弱抑制。此外，Asundexian与NADPH补充的人肝微粒体预孵育（30 min）后，仅对CYP3A4的抑制效力略有增加（IC50=17 μM）。在人肝细胞中进一步研究，未观察到对CYP3A4抑制剂量依赖性。在Caco-2细胞肠吸收模型中，Asundexian表现出高通透性[Papp(A−B)=143 nm/s]和中等流出比7。使用平衡透析法3H标记原药测定血浆中游离Asundexian，在大鼠（2.4%）、猴（6.2%）和人（6.4%）血浆中游离中等，犬（10%）和家兔（14%）血浆中游离率较高。雄性Wistar大鼠和雌性beagle犬经静脉（0.3 mg/kg）和口服（1.0 mg/kg）给药后，Asundexian显示低清除率（大鼠0.46 L/h/kg，犬0.19 L/h/kg），高分布体积（大鼠0.76 L/kg，犬1.80 L/kg），中高生物利用度（大鼠60%，犬97%）。part临床I期实验结果Asundexian显示出一致的PK/PD关系，药效学参数(如抗凝血活性（aPTT）和FXIa抑制活性呈剂量依赖性变化，而出血时间在所有剂量组中一致，与安慰剂相似。没有观察到临床相关的出血事件或对出血时间的影响。在单剂量和多剂量人体药代动力学研究中，Asundexian暴露量呈剂量依赖性，口服生物利用度高，经速释片给药后，几何平均消除半衰期约为14 - 17小时。因此，Asundexian是一种有潜力日给药一次的临床候选化合物，在房颤患者PACIFICAF18（NCT04218266）、非心源性卒中患者PACIFIC-STROKE19（NCT04304508）和急性心肌梗死患者PACIFIC-AMI 20（NCT04304534）三个II期剂量研究中研究了其有效性和安全性。目前，正在进行房颤患者以及非心源性缺血性卒中或高风险瞬时缺血性发作患者中预防卒两项OCEANIC III期研究，涉及多达30,000例患者（OCEANIC-AF和OCEANIC-STROKE），以验证Asundexian的有效性和安全性。美国食品和药物管理局（FDA）已批准Asundexian作为非心脏栓塞性缺血性中风患者二级预防的潜在治疗药物的快速通道资格。文章来源：doi.org/10.1021/acs.jmedchem.3c00795药渡cyber平台整合药物设计思想，挖掘了文献及专利报道的活性结构，通过cyber平台可以方便快速获得研发人员兴趣靶向结构，以供开拓思路，就FXIa抑制剂举例如下：1进入CyberSAR首页，在靶点下拉项中，输入“FA”，选中关联“FA11（Homo sapiens）”搜索FXIa相关靶点信息。2在靶点界面选中“化学空间”选项标签下级联“原始结构视图”选项卡，可以将CyberSAR平台收录的文献和专利具有关于FXIa相关实验测试活性的分子以“研发阶段时光轴“的形式展示。其中绿色字体高亮的”数据挖掘“即为潜力Hit。3可见FXIa抑制剂中处于早期研发的深度挖掘数据计408条。4单击分子结构，可见感兴趣分子进一步扩展信息。5单击“骨架相似“选项卡或者”预测靶点“选项卡，还可以进一步提供结构的衍生类型，可下载进行分子学习或者认知发散。登录方式CyberSAR在电脑浏览器端登录网址：https://data.pharmacodia.com/cybersar/，欢迎猛烈试用。如需进一步沟通，请扫码添加微信联系药渡赵博士或药渡CyberSAR沟通群。