ALKBH5

引言肥胖是男（雄）性生殖损伤的重要危险因素。然而，多代父体肥胖对子代生育力的影响及其机制尚不清楚。2024年2月14日，安徽医科大学王华教授等团队在Nature Communications（IF 16.6）在线发表题为“Multigenerational paternal obesity enhances the susceptibility to male subfertility in offspring via Wt1 N6-methyladenosine modification”的研究论文（王华教授、徐德祥教授和贺小进教授为本文共同通讯作者，公共卫生学院熊永伟博士、朱华龙博士、张进博士和耿浩博士为本文共同第一作者），该研究发现多代父体肥胖通过Wt1 N6-甲基腺苷修饰升高男性子代低生育力易感性。该研究在成功建立父源性不育症动物模型基础上，发现多代父体肥胖升高子代精子发生障碍易感性；基于m6A-mRNA&lncRNA表观转录组芯片、RNA测序以及生物信息学分析，发现多代父体肥胖降低子代睾丸Wt1表达和升高其m6A修饰水平；通过睾丸局部注射AAV9-Wt1，揭示Wt1下调介导的视黄酸信号受阻在多代父体肥胖加重子代精子发生障碍易感性中发挥关键作用；通过体内m6A修饰抑制剂STM2457处理和体外Mettl3 siRs，阐明精子源m6A修饰水平升高对多代父体肥胖下调子代睾丸Wt1表达的影响；最后，基于人群病例-对照研究验证精子m6A水平与体质指数存在正向关联，与精液质量存在负向关联。总之，多代父体肥胖通过下调Wt1 mRNA表达，逐渐升高子代精子发生障碍易感性，且METTL3介导的精子m6A修饰参与父体肥胖引起子代睾丸Wt1 mRNA稳定性降低。该研究结果为筛选父体不良因素暴露损害子代精子发生的表观遗传标志物提供实验证据，也为今后制定父源性不育症的早期防治策略提供重要参考。据WHO报道，不孕不育已成为继心血管疾病和肿瘤之后威胁人类健康的第三大疾病。国内外多项大样本调查发现，一般人群中男性不育症患病率高达9.0%~25.0%。已知，精子质量是评价男性生育能力的重要标志。然而，在过去45年间（1973至2018），全球男性精子质量下降已超过62.0%。肥胖是精子质量下降的重要危险因素，但过去研究更多关注当代肥胖对精子质量的影响。健康与疾病的父系起源（POHaD）理论认为，父体暴露不良因素导致成年后代慢性疾病的发生和发展。已有研究发现，父体肥胖损害子代睾丸生精小管结构，减少附睾精子数量。但是，多代父体肥胖对子代精子发生障碍易感性的影响及其机制尚不清楚。N6 -甲基腺苷（N6 -methyladenosine，m6A）是真核生物RNA上最为常见的修饰，其主要发生在RRACH（R=G/A；H=U/A/C）基序中，调节RNA剪接、降解、稳定性和翻译等转录后过程。在哺乳动物中，m6A修饰由RNA甲基化酶和去甲基化酶动态调控，甲基化酶主要包括METTL3、METTL14和WTAP等，去甲基化酶主要包括ALKBH5和FTO等。另外，m6A修饰转录本通过阅读蛋白影响RNA命运。众多研究结果表明，m6A修饰动态平衡在调控睾丸发育和精子发生过程中起关键作用。我们之前研究证明，高脂饮食显著升高小鼠睾丸m6A修饰水平。然而，多代父体肥胖对子代睾丸m6A修饰水平的影响知之甚少。众所周知，在父系获得性表型传递过程中，精子扮演着不可或缺的作用。前期研究发现，精子表观遗传修饰如非编码RNA、组蛋白修饰、DNA甲基化和RNA甲基化等，参与父系获得性疾病的代际传递。也有研究表明，从胚胎期至成年期，小鼠睾丸m6A修饰水平持续升高。但是，父代精子m6A修饰改变是否持续影响到子代睾丸，进而介导多代父体肥胖升高子代精子发生障碍易感性仍需进一步探讨。为了解决以上问题，研究通过动物实验、细胞研究以及人群调查相结合思路阐明多代父体肥胖对子代精子发生障碍易感性的影响及其m6A修饰机制。首先，建立多代父体高脂饮食小鼠模型，用于研究子代对镉（一种常见生殖毒性诱导剂）诱导精子发生障碍易感性的影响。结果发现，多代父体高脂饮食逐渐降低子代小鼠生育能力，并加重镉降低子代小鼠精子数量和精子活力。随着父体高脂饮食代数增加，子代小鼠睾丸成熟期生精小管数量以及睾丸生殖细胞标志物表达水平也逐渐减少。以上结果提示，多代父体肥胖升高子代小鼠精子发生障碍易感性。多代父体肥胖升高子代精子发生障碍易感性（Credit: Nature Communications）为了进一步探讨多代父体肥胖升高子代精子发生障碍易感性的原因，对子代睾丸进行RNA测序。结果提示，多代父体高脂饮食诱发的子代睾丸差异表达基因与视黄醇代谢过程有关。随着父体高脂饮食代数增加，子代睾丸视黄酸（RA）以及视黄酸合成酶Aldh1a1/2/3水平逐渐降低。通过ChEA3数据库预测视黄酸合成酶上游转录因子发现，WT1评分最高。随后研究结果显示，多代父体高脂饮食逐渐加重镉下调子代睾丸Wt1表达。此外，WT1过表达显著逆转父代高脂饮食减少子代精子数量，恢复父代高脂饮食降低子代睾丸RA水平和ALDH1A1蛋白表达水平。因此，上述结果表明多代父体肥胖通过抑制Wt1介导的视黄酸合成，逐渐升高子代睾丸精子发生障碍易感性。为了确定Wt1 mRNA下调机制，该研究进行m6A-mRNA&lncRNA表观转录组芯片及相关实验。结果发现，多代父体高脂饮食逐渐加重镉升高子代睾丸甲基化酶METTL3表达和Wt1 m6A修饰水平，加重镉下调子代睾丸阅读蛋白IGF2BP1表达。Mettl3 siR明显逆转镉升高支持细胞Wt1 m6A修饰水平，缓解镉降低支持细胞Wt1 mRNA和蛋白水平。Igf2bp1 siR显著加重镉升高支持细胞Wt1 mRNA降解率。荧光素酶报告基因结果显示，镉通过甲基化Wt1 site1位点下调其mRNA表达。IGF2BP1-RIP实验证实，镉暴露降低支持细胞IGF2BP1与Wt1 mRNA的结合能力。上述结果表明，多代父体肥胖以m6A依赖方式逐渐加重镉降低子代小鼠睾丸Wt1 mRNA稳定性。模式图（Credit: Nature Communications）该研究还发现，随着父体高脂饮食代数增加，精子Mettl3表达水平和m6A修饰水平逐渐升高。为了进一步探究精子m6A修饰水平降低在父代高脂饮食抑制子代睾丸WT1表达和精子发生中的作用，给予F0代雄鼠METTL3活性抑制剂STM2457处理。结果显示，STM2457处理缓解父代高脂饮食降低子代小鼠精子数量，逆转父代高脂饮食下调子代睾丸WT1表达，恢复父代高脂饮食升高子代睾丸Wt1 site1 m6A修饰水平和METTL3蛋白表达水平。STM2457处理也显著减弱高脂饮食增加精子m6A修饰水平和Mettl3 mRNA表达水平。最后，在人群病例-对照研究中也发现超重/肥胖患者精子m6A水平升高且精子浓度降低。所以，多代父体肥胖通过增加METTL3介导的精子m6A水平，逐渐加重镉诱导子代睾丸Wt1下调和精子发生障碍。原文链接https://www.nature.com/articles/s41467-024-45675-4责编|探索君排版|探索君文章来源|“iNature”End往期精选围观一文读透细胞死亡(Cell Death) | 24年Cell重磅综述（长文收藏版）热文Science最新发布：全世界最前沿的125个科学问题热文Nature | 2024年值得关注的七项技术热文Nature | 自身免疫性疾病能被治愈吗？科学家们终于看到了希望热文Nature | 癌症与神经系统的致命舞蹈

精彩内容作为创新国药领跑者，津药达仁堂拥有丰富及优质的中药品种资源，包括4个中华老字号品牌、122个独家中成药，涉及1个国家机密品种、1个国家秘密品种、5个中药保护品种等。其中，速效救心丸、京万红软膏、胃肠安丸、痹祺胶囊等“爆款”明星药近年来在中国三大终端六大市场销售额屡创新高。伴随中药大品种销售规模的扩容，津药达仁堂还积极推动营销平台的整合及改革，业绩提振效应愈发明显。2023年前三季度，公司营业总收入及净利润均实现双增，整体发展趋势稳步向好。122个独家品种！津药达仁堂中药成绩亮眼经过百年中医药精粹的传承，津药达仁堂现已拥有达仁堂、隆顺榕、乐仁堂、京万红4家中华老字号品牌；5个国家级非物质文化遗产项目、9个天津市级非物质文化遗产项目；6个中国驰名商标等。此外，在对传统中药的传承发展，及现代中药制剂技术的不断创新下，公司现已收获丰富的现代中药品种资源，如22个剂型、599个药品批准文号，122个独家品种，包括1个国家机密品种速效救心丸、1个国家秘密品种京万红软膏和5个中药保护品种，涉及心脑血管、呼吸、消化、儿科及补益等14个品类。“十四五”期间，津药达仁堂持续推进“1+5”战略规划，以品牌为引领，突出“三核九翼”，围绕心脑血管、皮肤创面修复、精品国药健康养生三大核心，构建以“速效救心丸”、“京万红软膏”和“达仁堂品牌养生健康品类”为代表的核心战力群，强化呼吸、消化、风湿骨痛、泌尿、妇儿科、肿瘤等九类产品线协调发展，致力于成为创新国药领跑者。对此，津药达仁堂已陆续推出了“中国心”、“中国脑”、“中国嗓”、“中国皮肤”等围绕健康中国的系列行动，开展将中医药贯穿全生命周期健康的预防、管理、治疗、康复等活动，进一步落实“三核九翼”产品战略，并把更多中医药精髓应用于临床。聚焦“三核九翼”产品战略，“爆款”中药大品种千帆竞发作为“三核”中的第一大核心产品，速效救心丸是津药达仁堂旗下的独家大品种。米内网数据显示，该药2022年在中国三大终端六大市场（统计范围见文末）合计销售额超过15亿元，同比增长约3%；2023年上半年销售规模突破9亿元，全年有望再创新高。其中，在城市实体药店终端及网上药店终端，速效救心丸分别为心脑血管中成药TOP4和TOP5产品。在大品种二次开发上，有最新研究指出，速效救心丸可通过miR-193a-3p/ALKBH5通路抑制过度自噬，减轻氧化应激和血管内皮损伤，减少心肌细胞的凋亡，进而改善心肌缺血再灌注损伤，为推动急性心肌梗死早期中西医结合诊疗提供新思路。不难窥见，公司将持续推进以速效救心丸为龙头，统筹舒脑欣滴丸、通脉养心丸和参附强心丸等产品矩阵的市场协同，进一步涵盖心脑血管疾病从急救到常服的多场景解决方案。近年来中国三大终端六大市场速效救心丸销售趋势（单位：万元）来源：米内网格局数据库第二大核心产品——京万红软膏为公司独家皮肤科中成药，功能主治为活血解毒、消肿止痛、去腐生肌，用于轻度水/火烫伤、疮疡肿痛、创面溃烂等，是2018版国家基药、2023版全国医保（甲类）药以及OTC（乙类）药。近年来，京万红软膏在网上药店终端的销售额增幅明显，2020-2021年均实现三位数的同比增长，2022-2023年上半年均实现两位数的同比增长。此外，考虑到该药为国家秘密品种，并已进入国家基药及医保目录，医院渠道仍具广阔空间；同时凭借其在烧烫伤领域积累的良好口碑，叠加在糖尿病足领域的增量需求，产品潜力值得期待。近年来京万红软膏销售额同比增幅情况来源：米内网格局数据库在“九翼”产品端，津药达仁堂在2023年通过“中国嗓”计划率先将清咽滴丸为代表的呼吸类产品进行推广，2023年上半年该药在中国公立医疗机构终端和网上药店终端销售额增幅分别达84%和102%。随着逐步深化“九翼”产品的推广，公司以胃肠安丸为代表的消化类产品、以痹祺胶囊为代表的风湿骨痛类产品、以癃清片为代表的泌尿类产品、以乌鸡白凤片为代表的妇儿类产品、以紫龙金片为代表的肿瘤类产品也有望实现销售提升。其中，在2023年上半年中国公立医疗机构终端，胃肠安丸、痹祺胶囊、癃清片、紫龙金片等产品销售额均实现正向增长。中药保护品种方面，津药达仁堂有5个品种尚处于保护期内，包括通脉养心丸、舒脑欣滴丸、治咳川贝枇杷滴丸、牙痛滴停丸、紫龙金片等，涉及抗肿瘤药、止咳祛痰平喘用药、脑血管疾病用药、心血管疾病用药及牙科用药等治疗亚类，产品品类覆盖面广、市场竞争力十足。津药达仁堂中药保护品种来源：米内网中药保护品种目录数据库营销优化提振业绩，为创新研发注入新动力除了中药大品种的销售佳绩保驾护航，近年来，津药达仁堂还积极通过整合营销平台，以有序的营销模式为抓手，对组织架构进行大刀阔斧的改革，为提振公司业绩添砖加瓦。具体来看，津药达仁堂以整合销售公司、营销公司、达仁堂销售团队、京万红销售团队，从而实现产销分离。此外，2022年公司成立商销事业部，运营普药产品；整合国际部负责海外市场，成立电商部发力第四终端。公司各销售平台主营公司旗下重点品种，营销网络加速覆盖全国。2023年初，公司成立津药达仁堂集团股份有限公司健康科技产业发展分公司，统揽各销售平台工作。据公司年报及季报显示，津药达仁堂2023年上半年实现营业总收入40.88亿元，同比增长8.31%，净利润7.22亿元，同比增长54.12%；2023年前三季度实现总营收57.93亿元，同比增长4.13%，净利润8.58亿元，同比增长17.73%，业绩接连实现双增，整体发展趋势向阳。近年来津药达仁堂营收及利润情况（单位：亿元）来源：公司年报及季报另一方面，从财务数据上看，公司2021年、2022年及2023年前三季度在研发方面的投入分别为1.61亿元，1.53亿元和0.86亿元，占公司营收的2.33%、1.85%、1.49%。随着公司一系列优化改革的推进及经营战略的调整，津药达仁堂营收及利润持续稳健增长，将为高质量产品的创新研发注入源源不断的动力。资料来源：米内网数据库、公司年报及官网注：米内网《中国三大终端六大市场药品竞争格局》，统计范围是：城市公立医院和县级公立医院、城市社区中心和乡镇卫生院、城市实体药店和网上药店，不含民营医院、私人诊所、村卫生室，不含县乡村药店；上述销售额以产品在终端的平均零售价计算。本文为原创稿件，转载请注明来源和作者，否则将追究侵权责任。投稿及报料请发邮件到872470254@qq.com稿件要求详询米内微信首页菜单栏商务及内容合作可联系QQ：412539092●温馨提示●因为微信公众号修改了推送规则，最近很多读者反映没有及时看到推文。把米内网设为“星标”，就能每天与我们不见不散啦，具体操作如下：【分享、点赞、在看】点一点不失联哦

肝转移是结直肠癌(CRC)患者死亡的主要原因。新出现的证据表明，环状RNA (circRNA)在癌症进展中起着关键作用。然而，其在结直肠癌肝转移中的作用在很大程度上仍然未知。2023年12月13日，中山大学潘志忠、林俊忠及周驰共同通讯在Molecular Cancer（IF=37）在线发表题为“A positive feedback circuit driven by m6A-modified circular RNA facilitates colorectal cancer liver metastasis”的研究论文，该研究证明，由m6 A修饰的环状RNA驱动的正反馈回路促进结直肠癌肝转移。Circ-YAP在伴有肝转移的结直肠癌中显著上调，与预后不良相关。Circ-YAP促进CRC细胞在体外的迁移和侵袭，并促进患者源性异种移植(PDX)模型体内的肝转移。从机制上讲，circ-YAP编码了一种含有220个氨基酸的新型截断蛋白，称为YAP-220aa，该蛋白与LATS1竞争性结合，导致YAP去磷酸化和核易位，从而激活一系列促进转移的基因。重要的是，N6-甲基腺苷(m6 A)修饰协调了circ-YAP翻译的有效起始，需要m6 A“读取器”YTHDF3和eIF4G2翻译起始复合物。有趣的是，circ-YAP被YAP/TEAD复合物转录增强，从而形成一个正调控前馈回路。总之，该研究揭示了circ-YAP编码的一个以前未被表征的癌蛋白，这意味着一个有希望的结直肠癌肝转移患者的生物标志物和治疗靶点。结直肠癌(Colorectal cancer, CRC)是消化道最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率在所有恶性肿瘤中分别排名第三和第二位。肿瘤转移是结直肠癌患者死亡的主要原因。临床上约有45-60%的结直肠癌患者存在肝转移，90%以上的肝转移不能初步切除。未经手术治疗的结直肠癌肝转移患者中位生存时间仅为6.9个月，5年生存率不足5%。因此，破解结直肠癌肝转移机制，发现预防和干预转移的新治疗靶点，提高患者生存率具有重要的临床意义。环状RNA (Circular RNA, circRNA)是一类特殊的内源性RNA分子，具有共价闭环结构，没有传统的5′端“帽状结构”和3′端聚A尾部。一些circRNA被确定为预测疾病进展和预后的可用生物标志物。最近的一些证据表明circRNA能够被翻译成功能性肽。此外，circRNAs编码的截断蛋白如E-Cad-254aa和ARHGAP35-1289aa分别被报道在胶质瘤和肝细胞癌中发挥关键作用。由于从头到尾的形状，circRNA以帽独立的方式编码蛋白质，由内部核糖体进入位点(IRES)或m6 A修饰驱动。m6 A是真核RNA中最丰富的内部修饰，具有动态可逆性，由m6 A写入器(METTL3/14和WTAP)催化，由m6 A“擦除器”(FTO和ALKBH5)去除，由m6 A读取器(YTHDF1/2/3和ythdc2 /2)识别。迄今为止，只有少数这些隐藏在环状RNAs中的小内源性蛋白被表征，绝大多数的功能相关性尚未被发现。机理模式图（图源自Molecular Cancer ）该研究发现circRNA circ-YAP是CRC肝转移的驱动因素。Circ-YAP包含一个220-aa的开放阅读框(ORF)，并以m6 A依赖的方式编码一种新的YAP蛋白异构体，称为YAP-220aa。此外，还发现YAP220aa通过阻止LATS1介导的YAP磷酸化和细胞质保留来激活YAP信号。该研究揭示了circ-YAP编码的一个以前未被表征的癌蛋白，这意味着一个有希望的结直肠癌肝转移患者的生物标志物和治疗靶点。参考文献：Zeng K, Peng J, Xing Y, Zhang L, Zeng P, Li W, Zhang W, Pan Z, Zhou C, Lin J. A positive feedback circuit driven by m6A-modified circular RNA facilitates colorectal cancer liver metastasis. Mol Cancer. 2023 Dec 13;22(1):202. doi: 10.1186/s12943-023-01848-1. PMID: 38087322; PMCID: PMC10717141.责编|探索君排版|探索君文章来源|“iNature”End往期精选围观王晓红教授团队：绘制单次冷冻囊胚移植成功的女性植入期外周血microRNA动态表达谱，开拓领域创新研究热文维生素B12在细胞重编程与组织再生中发挥关键作用！热文不孕症治疗新方向！又一导致女性不孕的关键因素被发现热文Let-7家族miRNA或为癌症潜在免疫治疗靶点热文一项最新发现或可用于阿尔茨海默病药物开发点击“阅读原文”，了解更多~