关注小药说药，一起成长！前言由于有效载荷、连接子和偶联方法的改进，抗体偶联药物（ADC）的发展在过去十年中取得了显著进展。特别是，连接子设计在调节ADC在体循环中的稳定性和肿瘤中的有效载荷释放效率方面起着关键作用，从而影响ADC的药代动力学（PK）、疗效和毒性特征。一些关键的连接子参数，如偶联化学、连接子长度和连接子空间位阻都会对ADC药物的PK和功效产生影响。因此，在ADC药物的设计中，正确调整连接子的这些重要参数，从而实现ADC稳定性和有效载荷释放效率之间的平衡，才能达到ADC药物预期的效果。连接子设计调节ADC稳定性 ADC在体循环和组织细胞中进行生物转化，除了抗体代谢和分解代谢外，连接子去偶联、连接子降解和有效载荷代谢被认为是典型的主要生物转化途径。理想情况下，ADC希望在进入靶细胞之前在循环中保持完整和稳定，已经开发出许多涉及偶联位点选择和连接子修饰的方法来增强ADC稳定性。通常，可以出于这种目的对每个组件（包括抗体、连接子和有效载荷）进行修改，然而研究表明，调节偶联位点、连接子长度和连接子空间位阻是更有效的通用方法。通过选择更具空间位阻的偶联或附着位点，可以实现由抗体提供的空间屏蔽。另一方面，已经证明，在连接子上引入近端空间位阻的替代化学修饰是提高稳定性的有效方法。抗体提供的空间屏蔽有助于减少连接子裂解以及有效载荷代谢。例如，位点HC-A118、LC-K149和HC-A140提供了增强的ADC稳定性，降低了部分溶剂可及性（FSA），对应于偶联位点周围增加的空间屏蔽。在此基础上，通过改变另一个主要因素，即连接子长度，可以通过抗体和有效载荷之间的距离对空间屏蔽的影响来调节ADC稳定性。研究发现，较短的连接子相对于较长的连接子，通过将有效载荷进一步固定在抗体的空间屏蔽内，通常会导致更好的ADC稳定性。此外，偶联化学也是影响ADC稳定性的重要因素，马来酰亚胺和二硫键代表两种主要类型的偶联化学。马来酰亚胺已被广泛用作抗体偶联方式，并与可切割或不可切割的连接子一起使用。因此，根据有效载荷的作用机制，药理有效成分可以是有效载荷本身或具有部分或全长连接子的有效载荷。对于可切割或不可切割的连接子，有效释放活性成分可以通过最佳连接子设计实现。基于二硫键的抗体偶联最近被开发为一种生成可切割连接子的新策略。对于马来酰亚胺和二硫键可裂解的连接子而言，裂解位点附近产生的空间位阻非常关键，可以通过化学修饰来调节偶联物的稳定性。连接子设计调节ADC有效载荷释放有效载荷释放可能是ADC内化到细胞后的限速步骤。对于不可切割的连接子，在溶酶体中，抗体被蛋白酶分解或水解为肽或氨基酸（AA）。在这些情况下，产生生物活性分解代谢产物，其中有效载荷在其结构中保留某种类型的肽或AA，有效载荷溶酶体释放可能需要一种转运体。相反，可切割连接子被设计通过酶或化学方式，在连接基团断裂后自降解，以释放附着的有效载荷。因此，在这些情况下，有效载荷释放的速率取决于连接子裂解和随后的固定步骤。在相同的连接子化学条件下，结合位点会影响有效载荷释放的动力学。例如，对于连接到LC-V205、HC-A118、HC-A140和LC-K149位点的连接子，观察到一系列从快到慢的有效载荷释放动力学。特别是，HC-A118C位点的吡咯[2,1-c]苯二氮卓二聚体（PBD）有效载荷释放（15分钟）比LC-K149C位点（60分钟）快。结合位点直接影响释放动力学，与单克隆抗体无关。在裂解位点引入空间位阻的化学修饰有助于提高ADC稳定性。此外，空间位阻也可能导致有效载荷的缓慢或无效释放。一个很好的例子是环丁基与环丙基二硫化物连接子之间的比较，环丁基类似物对小鼠有效，而环丙基类似物对小鼠无效。深入研究表明，含有环丁基的分子能够有效释放活性PBD二聚体，然而，在环丙基类似物中未观察到二硫键连接子断裂后的自降解，因此，有效载荷并没有得到有效释放发挥生物活性。连接子集成设计获得最佳疗效总体而言，想要获得最佳的ADC需要集成连接子的设计方法。如前所述，这种方法应包括多个参数，包括偶联位点、连接子长度、连接子化学、可切割/不可切割连接和近端连接空间位阻。如上图所示，相对稳定性排名为A1∼ A2