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-01-引言淋巴系统的运输维持健康的稳态，也是免疫监测所必需的，但淋巴生长通常与实体瘤的发展和扩散有关。肿瘤相关的淋巴管为淋巴结转移提供了必要的途径，淋巴管密度通常随着淋巴管增殖过程的进展而增加，称为淋巴管生成。人们最初认为肿瘤相关的淋巴重塑和生长只是扩大了区域转移的被动途径。然而，最近的临床数据未能证明立即完全淋巴结切除对总生存率的益处，并且在淋巴结清扫前给予的新辅助治疗对多种肿瘤类型具有效果。此外，新出现的临床前研究表明，肿瘤引流淋巴结是肿瘤特异性免疫的蓄水池，当其被转移抑制，会削弱系统免疫监视。这些数据共同表明，有必要重新思考区域疾病管理及其对免疫疗法患者结果的影响。这些研究表明，淋巴系统已成为宿主对癌症反应的关键功能组成部分，它积极调节液体、抗原、白细胞和肿瘤细胞向引流淋巴结的输送。因此，系统地了解淋巴功能在恶性肿瘤期间是如何协同作用的以辅助免疫监测，对于当前免疫治疗时代的癌症治疗至关重要。-02-一、淋巴系统的结构和稳态功能淋巴系统调节液体和细胞从外周组织单向缓慢流动，通过淋巴结（LNs）和胸导管流回血液，淋巴系统对于去除由毛细管滤液产生的间质液至关重要。淋巴毛细血管是钝端薄壁血管，是液体摄取和白细胞进入的部位。毛细血管中的淋巴内皮细胞（LECs）在叉指状皮瓣处形成特殊的不连续的内皮间连接，称为“Button”，由粘附物（血管内皮钙粘蛋白）和紧密连接分子（claudin-5，JAM-A， ESAM和occludin）组成，通过支架蛋白，如ZO1和β-连环蛋白，锚定在肌动蛋白细胞骨架上。锚定丝将LEC连接到细胞外基质（ECM），并在组织肿胀时打开LEC连接，从而形成淋巴液。淋巴液被转移到收集血管中，通过基底膜、肌肉细胞、连接和瓣膜运动将液体和白细胞定向输送进入LN包膜下窦。淋巴管平时处于稳定状态，在炎症的情况下，是将外周组织状态传达给引流淋巴管的关键通道。这些淋巴管协调单向流体、大分子和细胞摄取、运输和LN内的分选，从而直接调节免疫监测从启动到分辨和记忆的周期性阶段。淋巴管还表现出重要的组织特异性功能，例如淋巴管对于胃中的膳食脂质吸收、皮肤中的电解质清除、棕色脂肪组织中的产热和肺的膨胀是非常必要的。此外，淋巴管分泌因子通过调节干细胞周期来调节心脏、皮肤和骨骼中的组织再生。-03- 二、肿瘤相关淋巴管生成肿瘤微环境（TME）中淋巴管密度的增加是由淋巴管生成过程驱动的，TME中的淋巴血管生成足以增强LN转移。两种关键的淋巴管生成生长因子VEGFC和VEGFD通过VEGFR3及其共受体neuropilin-2发出信号，促进LEC增殖、迁移和存活以及LN转移。肿瘤表达的VEGFC驱动淋巴管生成和LN转移，同时也促进巨噬细胞的募集。在骨肉瘤小鼠模型中，表达VEGFC的巨噬细胞和肿瘤相关淋巴管生成呈正相关，抑制巨噬细胞集落刺激因子（CSF1）减少肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）可有效抑制病理性淋巴管生成。因此，LECs和髓系细胞似乎参与双向串扰，这种串扰机制表明，局部炎症会随着时间的推移加剧淋巴重塑，这可能会前馈影响正在进行的先天和适应性免疫反应。此外，VEGFC或VEGFD驱动局部生长的程度可能取决于局部细胞因子环境中的其他因素。LECs表达多种细胞因子和趋化因子受体，通过这些受体感知炎症并对其作出反应，与炎症环境发生动态串扰。1型细胞因子如IL-1β、IL-12和肿瘤坏死因子（TNF）以及某些趋化因子，如CXCL12，具有促淋巴管生成作用；而2型细胞因子，如IL-4和IL-13，似乎是淋巴管生成的负调节因子。最后，对发育和病理性淋巴管生成的机制研究产生了新的治疗靶点。然而，尽管阻断VEGFC–VEGFD–VEGFR3信号传导的几种治疗方法显示出良好的安全性，但迄今为止在患者中仅观察到微弱的疗效。在没有持续刺激的情况下，成人组织中淋巴增生的代偿性信号机制和持续性可能是导致临床缺乏成功的原因。因此，淋巴管生长、维持和存活的额外机制，例如血管生成素-2、成纤维细胞生长因子2（FGF2）、胰岛素样生长因子（IGFs）和代谢途径，可能成为淋巴管靶向治疗的替代策略。-04-三、淋巴管生成与免疫治疗最早在十多年前就报道了第一批测试淋巴管生成对肿瘤相关炎症和免疫监测影响的实验。这些初步研究表明，VEGFC在B16-F10黑色素瘤中的过表达增强了LN转移，并诱导了几种免疫逃逸机制。这些数据似乎表明，扩张的淋巴管系统可能会限制正在进行的抗肿瘤免疫反应。然而，也有人提出淋巴管生成在免疫治疗中可能是有益的。在黑色素瘤和脑癌的小鼠模型中使用VEGFC诱导淋巴生长确实导致了对多种免疫治疗剂的增强反应，包括疫苗、过继性T细胞转移和免疫检查点阻断（ICB）。淋巴管生成与肿瘤免疫治疗之间似乎存在着矛盾。因此，与其说淋巴管是好是坏，不如说是淋巴管生长、转运及其表型和转录状态的调节决定了肿瘤免疫监测的最佳环境。与时间相关的变化限制了系统免疫监测和对免疫疗法的反应。现有证据表明：（1）肿瘤相关淋巴管是新生适应性免疫所必需的，可促进抗原传播；（2） 用VEGFC驱动肿瘤内淋巴生长可以促进抗原呈递，但其益处被局部炎症加剧、进行性免疫功能障碍和转移所抵消；（3） 淋巴管促进淋巴细胞从肿瘤微环境中再循环，并促进免疫消解；（4）淋巴转运，最终转移本身使LN微环境具有更强的抑制作用，从而损害系统免疫监测。基于这些证据，我们不能对肿瘤相关淋巴管生成作用的进行简单的二元化，这是一个与时间相关的框架，通过该框架，淋巴管系统的渐进激活和生长可以将TME内的平衡转向慢性炎症、驱动免疫消解的淋巴流出和转移。因此，淋巴管生成本身可能不是正确的靶点。相反，也许我们应该考虑如何开启淋巴管用于促进主动免疫监测的特定机制，或者将对淋巴转运何时何地起作用的机制理解作为当前临床免疫疗法的设计原则。-05-结语长期以来，肿瘤相关淋巴管系统一直被视为一组功能失调的血管，它们只允许肿瘤细胞从原发肿瘤被动迁移到引流LN。在十多年的时间里，这种观点发生了明显的变化。现在，淋巴管开始因其对组织稳态、再生和免疫监测的动态和积极贡献而受到重视。正在进行的机制研究开始转向淋巴管及其运输如何促进适应性免疫反应，增强主动免疫监视。未来的工作必须继续深入理解这些淋巴管的位点特异性功能，同时整合淋巴转运和外周组织的系统效应。这些努力不仅将提高我们对这一对人类健康至关重要的系统的基本理解，还将为治疗干预开辟新的途径，为癌症患者带来新的治疗手段。参考资料：1.Lymphatic vessels in the age of cancer immunotherapy. Nat Rev Cancer. 2024 Apr 11公众号内回复“ADC”或扫描下方图片中的二维码免费下载《抗体偶联药物：从基础到临床》的PDF格式电子书！公众号已建立“小药说药专业交流群”微信行业交流群以及读者交流群，扫描下方小编二维码加入，入行业群请主动告知姓名、工作单位和职务。

要点速览 1 生物信息学分析和免疫组化染色显示，特应性皮炎（AD）皮损中CLDN1、CLDN4和OCLN的表达显著下调。 2 体外实验表明，IL-4和IL-13通过Jak/STAT6信号通路下调人永生化角质细胞（HaCaT）和正常人表皮角质形成细胞（NHEKs）中的CLDN1、CLDN4和OCLN表达，并增加细胞旁葡聚糖的通透性。 3 本维莫德通过激活芳基烃受体/芳烃受体核转位蛋白（AHR/ARNT）通路上调CLDN4和OCLN的表达，并诱导NRF2核转位减少角质形成细胞（KC）中的活性氧（ROS），从而抑制IL-4/IL-13诱导的CLDN1下调和STAT6磷酸化。 研究背景 AD是一种慢性炎症性皮肤病，病因涉及遗传易感性、皮肤屏障损伤和免疫失调。AD病变的特征包括表皮海绵状病变（细胞间隙增大）和T细胞浸润，特别是T辅助细胞2（Th2），Th1、Th17和Th22细胞也有参与。 紧密连接（TJ）封闭细胞间隙，是维持皮肤屏障功能稳定的重要结构。TJ蛋白包括claudins（CLDNs）、occludin（OCLN）、JAM-A、tricellulin、zonula occludens（ZO）和angulins等。既往研究发现，在AD中，这些TJ蛋白的表达往往下调，导致皮肤屏障功能受损，进而促进AD的发展和炎症反应的加剧。 AHR是一种细胞内转录因子，近年来其在AD发病机制和治疗中的作用引起了广泛关注。既往研究表明，AHR参与了TJ的调控。在AD病变中，AHR蛋白的表达增加。也有报道称，IL-4可以在信号转导子和转录激活子6 (STAT6) 依赖的方式下诱导和激活B细胞中的AHR。 我国自主研发的创新药物——本维莫德，已被证明对银屑病和AD有效。作为一种AHR激动剂，本维莫德可促进KC分化，并通过其内在特性和部分诱导NRF2通路基因来降低ROS水平，显示出抗氧化活性。北京大学人民医院张建中教授团队进一步分析了Th2细胞因子（IL-4/IL-13）和本维莫德对TJ调控的影响，为AD的治疗提供新的策略。该研究成果于2024年3月表于《Journal of Investigative Dermatology》杂志，（IF=5.7）[1]。 研究结果 1 在AD皮损中，TJ蛋白的表达水平普遍下降 通过生物信息学分析，基于多个基因表达数据集（GSE130588、GSE133477、GSE32924和GSE133385）发现：在AD皮损中，CLDN1和CLDN4的mRNA水平显著低于非病变皮肤，而OCLN的mRNA水平在AD皮损和非皮损中均比正常皮肤显著降低，但在皮损和非皮损之间无显著差异（图1a,b,c）。免疫组化染色进一步证实，AD皮损中的CLDN1蛋白表达显著低于正常皮肤，而CLDN4和OCLN的蛋白表达虽有下降，但差异不显著（图1d）。 图1：生物信息学分析及免疫组化染色评估AD皮损中CLDN1、CLDN4和OCLN的表达水平； 注：*P < .05, **P < .01, ***P < .001, ****P < .0001 2 IL-4、IL-13和IFN-γ能够单独下调TJ蛋白的表达 使用不同浓度的细胞因子（IL-4、IL-13、TNF-α、IFN-γ和IL-17A）处理HaCaT和NHEKs，结果显示，IL-4、IL-13和IFN-γ显著下调了HaCaT中TJ蛋白（CLDN1、CLDN4和OCLN）的mRNA和蛋白水平，而TNF-α和IL-17A则没有显著影响（图2a,b,c），且IL-4/IL-13之间没有协同效应。在NHEKs中，IL-4/IL-13处理显著降低了CLDN4和OCLN的蛋白水平，但对CLDN1的蛋白水平影响不显著（图2d,e）。 图2：IL-4/IL-13对HaCaT及NHEKs中TJ蛋白表达的影响； 注：*P < .05, **P < .01, ***P < .001, ****P < .0001 3 IL-4/IL-13和IFN-γ诱导的HaCaT中TJ蛋白表达下调是通过Jak/STAT6信号通路介导的 使用Jak1/2抑制剂芦可替尼、STAT6抑制剂AS1517499和STAT1抑制剂氟达拉滨预处理HaCaT。结果显示，芦可替尼剂量依赖性地抑制了IL-4/IL-13和IFN-γ诱导对TJ蛋白（CLDN1、CLDN4和OCLN）mRNA表达的影响（图3a），而STAT6和STAT1抑制剂也有效抑制了以上细胞因子诱导的TJ蛋白下调（图3b）。 此外，单独使用IL-4、IL-13或IFN-γ处理KCs会增加细胞旁葡聚糖通量，而同时使用IL-4/IL-13处理则导致更显著的葡聚糖通量增加。用1 mM 芦可替尼预处理HaCaT，可以有效抑制由IL-4/IL-13或IFN-γ诱导增加的葡聚糖通量（图3c）。 图3：Jak/STAT通路参与IL-4/IL-13/IFN-γ诱导的HaCa中的TJ蛋白下调； 注：*P < .05, **P < .01, ***P < .001, ****P < .0001 4 AHR通路和ROS在IL-4/IL-13诱导的TJ蛋白表达下调中起重要作用 IL-4/IL-13能够上调HaCaT和NHEKs中的AHR（图8a），使用Jak抑制剂芦可替尼、STAT6抑制剂AS1517499和ROS抑制剂二苯乙烯碘化物预处理后可以消除这种上调效应。IL-4/IL-13对典型的AHR通路产物CYP1A1或AHR抑制因子的表达没有影响（图4b）。沉默AHR mRNA的表达可以恢复IL-4/IL-13诱导下调的HaCaT中CLDN1的表达并减少CLDN4和OCLN的表达（图4c），同时增加了磷酸化的STAT6（图4d）。ROS抑制剂二苯乙烯碘化物抑制了IL-4/IL-13诱导的CLDN1下调，但不影响CLDN4或OCLN（图4e）；同时抑制了IL-4/IL-13诱导的磷酸化的STAT6及AHR上调（图4f和g）。 图4：AHR通路和ROS参与IL-4/IL-13诱导CLDN1、CLDN4和OCLN表达下调； 注：*P < .05, **P < .01, ***P < .001, ****P < .0001 5 本维莫德通过激活AHR/ARNT通路来上调CLDN4和OCLN表达，并阻断IL-4/IL-13或IFN-γ诱导的细胞旁葡聚糖通量增加 本维莫德依赖性地上调HaCaT和NHEKs中的CLDN4和OCLN表达，但不影响CLDN1的表达（图5a）。500 nM的本维莫德抑制了由IL-4/IL-13或IFN-γ诱导的跨细胞葡聚糖通量增加（图5b），且不影响细胞增殖（图5c）。本维莫德促进了AHR的核转位（图5d）并上调了CYP1A1和CYP1B1的表达（图5e），而敲除AHR或AHR核转位因子，或用AHR拮抗剂CH-223191预处理，可阻断本维莫德对HaCaT和NHEKs中CLDN4和OCLN表达的影响，同时，本维莫德处理后AHR蛋白水平也有所下降，但AHR mRNA的表达没有明显改变(图5f、g）。 图5：本维莫德通过AHR/ARNT通路上调CLDN4和OCLN的表达，并阻断IL-4/IL-13e或IFN基因诱导的细胞旁葡聚糖通量； 注：*P < .05, **P < .01, ***P < .001, ****P < .0001 6 本维莫德可抑制IL-4/IL-13诱导的STAT6磷酸化、TJ蛋白表达下调 本维莫德促进NHEKs中NRF2的核转位（图6a），并上调NQO1的表达；并能抑制IL-4/IL-13诱导的NHEKs中ROS的产生（图6b）和HaCaT中STAT6的磷酸化（图6c）。本维莫德还抑制了IL-4/IL-13诱导的HaCaT和NHEKs中TJ蛋白表达下调（图6d,e）。另外，本维莫德对IFN-γ诱导的STAT1激活或CLDN1下调没有影响，可恢复CLDN4和OCLN的表达（图6f）。 图6：本维莫德抑制IL-4/IL-13诱导的STAT6磷酸化、TJ蛋白表达下调； 注：*P < .05, **P < .01, ***P < .001, ****P < .0001 研究结论 该研究证实，IL-4/IL-13通过Jak/STAT6信号通路下调TJ蛋白（CLDN1、CLDN4和OCLN）的表达，从而导致KCs中TJ功能损害，促进AD发展。而本维莫德可以激活AHR/ARNT通路，上调CLDN4和OCLN表达，并诱导NRF2核转位减少ROS产生，从而抑制IL-4/IL-13引起的TJ损伤和STAT6磷酸化（图6g）。研究结果显示，本维莫德在保护表皮屏障功能中有潜在作用，为其用于AD治疗提供了新的理论依据，并为开发AD治疗药物提供了重要方向。 更多精彩 参考文献： [1]Wang X, Mao D, Jia J, Zhang J. Benvitimod Inhibits IL-4- and IL-13-Induced Tight Junction Impairment by Activating AHR/ARNT Pathway and Inhibiting STAT6 Phosphorylation in Human Keratinocytes. J Invest Dermatol. 2024 Mar;144(3):509-519.e7. doi: 10.1016/j.jid.2023.07.027. Epub 2023 Sep 20. PMID: 37734479. 免责声明 本微信文章中的信息仅供向医疗卫生专业人士提供科学信息，不可直接作为决策内容，中昊药业不对任何主体因使用本文内容而导致的任何损失承担责任。以上内容如涉版权请联系删除。

引言2024年3月1日，同济大学江华、李宇飞团队在Bioactive Materials （IF 18.9）发表题为“Bioinspired engineering ADSC nanovesicles thermosensitive hydrogel enhance autophagy of dermal papilla cells for androgenetic alopecia treatment”的研究论文，这是一篇关于治疗雄激素性脱发的研究论文。该研究通过仿生工程的方法，利用脂肪干细胞来源的纳米囊泡和热敏水凝胶，增强了皮肤乳头细胞的自噬作用，从而促进了脱发患者的头发再生。雄激素性脱发是一种常见的非瘢痕性脱发，但目前缺乏有效的治疗方法。干细胞外泌体具有与干细胞相似的修复效果，但成本高、产量低等问题限制了其应用。然而，通过机械挤压获得的细胞源性纳米囊泡具有类似外泌体的优势，能够高效地封装大量的治疗蛋白。研究观察到一种名为JAM-A的粘附蛋白可以显著增加皮肤乳头细胞的粘附性和韧性，从而形成对二氢睾酮和巨噬细胞损伤的快速修复结构，促进脱发患者的头发再生。为了解决JAM-A外泌体的半衰期短的限制，研究人员通过改造脂肪干细胞，使其过表达JAM-A，从而产生了工程化的JAM-A过表达纳米囊泡（JAM-AOE@NV）。将JAM-AOE@NV纳入热敏水凝胶基质（JAM-AOE@NV Gel）中，有效地解决了JAM-AOE@NV半衰期短的问题，并实现了JAM-AOE@NV的持续释放。对JAM-AOE@NV Gel的理化特性进行了分析，并评估了其在体内和体外促进头发再生的疗效。模式图（Credit: Bioactive Materials）这项研究为治疗雄激素性脱发提供了一种新的治疗方法。通过利用纳米囊泡和热敏水凝胶的特性，研究人员成功地增强了皮肤乳头细胞的自噬作用，促进了脱发患者的头发再生。然而，这项研究还需要进一步的实验和临床验证，以确保其安全性和有效性。总的来说，这项研究为治疗雄激素性脱发提供了一种新的治疗策略。通过生物启发工程的方法，利用纳米囊泡和热敏水凝胶，增强了皮肤乳头细胞的自噬作用，从而促进了脱发患者的头发再生。这项研究为进一步的研究和临床应用提供了理论基础，为脱发患者提供了新的治疗选择。原文链接https://doi.org/10.1016/j.bioactmat.2024.02.023责编|探索君排版|探索君文章来源|“iNature”End往期精选围观一文读透细胞死亡(Cell Death) | 24年Cell重磅综述（长文收藏版）热文Nature | 破除传统：为何我们需要重新思考肿瘤的命名方式热文Nature | 2024年值得关注的七项技术热文Nature | 自身免疫性疾病能被治愈吗？科学家们终于看到了希望热文CRISPR技术进化史 | 24年Cell综述