更新于：2024-05-01

CD14

单核细胞分化抗原CD14

更新于：2024-05-01

基本信息

别名

CD14、CD14 antigen、CD14 molecule

+ [4]

简介

Coreceptor for bacterial lipopolysaccharide (PubMed:1698311, PubMed:23264655). In concert with LBP, binds to monomeric lipopolysaccharide and delivers it to the LY96/TLR4 complex, thereby mediating the innate immune response to bacterial lipopolysaccharide (LPS) (PubMed:20133493, PubMed:23264655, PubMed:22265692). Acts via MyD88, TIRAP and TRAF6, leading to NF-kappa-B activation, cytokine secretion and the inflammatory response (PubMed:8612135). Acts as a coreceptor for TLR2:TLR6 heterodimer in response to diacylated lipopeptides and for TLR2:TLR1 heterodimer in response to triacylated lipopeptides, these clusters trigger signaling from the cell surface and subsequently are targeted to the Golgi in a lipid-raft dependent pathway (PubMed:16880211). Binds electronegative LDL (LDL(-)) and mediates the cytokine release induced by LDL(-) (PubMed:23880187).

关联

项与 CD14 相关的药物

Atibuclimab

靶点

CD14

作用机制

CD14抑制剂

在研机构

Implicit Bioscience Ltd.

原研机构

ICOS Corp.

在研适应症

家族性致心律失常性右室发育不良1 [+1]

非在研适应症

急性肺损伤 [+6]

最高研发阶段临床1/2期

首次获批国家/地区-

首次获批日期1800-01-20

Diakine-DK4 10 (CD14) (Deka Biosciences)

靶点

CD14 x IL-10 x IL-4

作用机制

CD14抑制剂 [+2]

在研机构

Deka Biosciences, Inc.

原研机构

Deka Biosciences, Inc.

在研适应症

脓毒症

非在研适应症-

最高研发阶段临床前

首次获批国家/地区-

首次获批日期1800-01-20

PL-054

靶点-

作用机制

CD14抑制剂 [+1]

在研机构

湖南九典制药股份有限公司 [+1]

原研机构

湖南中晟全肽生化有限公司初创企业

在研适应症

细菌感染 [+1]

非在研适应症-

最高研发阶段临床前

首次获批国家/地区-

首次获批日期1800-01-20

项与 CD14 相关的临床试验

NCT06275893 / Recruiting临床1/2期

Phase 1b Study of IC14 in Arrhythmogenic Cardiomyopathy

The goal of this clinical trial is to test IC14 (atibuclimab) in patients with arrhythmogenic cardiomyopathy (ACM) and who have an implantable cardoverter/defibrillator in place. ACM is also called arrhythmogenic right ventricular dysplasia (ARV) or arrhythmogenic right ventricular cardiomyopathy (ARVC). The main questions the study aims to answer are the effect of treatment on blood markers of inflammation, safety, and pharmacokinetics. There will also be measurements of myocardial imaging of C-C chemokine receptor type 2 (CCR2+) immune cells (optional), monitoring of cardiac arrhythmias using the patient's pre-existing intracardiac cardioverter/defibrillator (ICD) and a Holter monitor, electrocardiogram (ECG), echocardiogram (ECHO), and blood tests. Results will be compared to baseline; there is no inactive placebo treatment group.
Participants will be asked to undergo screening and baseline testing, then receive 4 intravenous infusions with blood measurements before and after the infusion (including 24, 48, and 72 hours and 7, 14, and 28 days). Participants will be offered specialized scanning of the heart muscle, and will be asked to provide recordings from their ICD, undergo Holter monitoring twice, and have electrocardiograms (ECG), echocardiograms (ECHO) and blood tests.

开始日期2024-03-29

申办/合作机构

Implicit Bioscience Ltd.

NCT04391309 / Terminated临床2期IIT

Phase 2, Randomized, Double-Blind, Placebo-Controlled Study of the Effect of Anti-CD14 Treatment in Hospitalized Patients With COVID-19

This study aims to address the following objectives:
1. To determine the efficacy of IC14, an anti-CD14 chimeric monoclonal antibody, in patients hospitalized with respiratory disease and hypoxemia due to SARS-CoV-2, in terms of improving the time to resolution of disease.
2. To determine the efficacy of IC14 in reducing the severity of respiratory disease in patients hospitalized with respiratory disease due to SARS-CoV-2.
3. To determine the safety of IC14 in patients hospitalized with respiratory disease due to SARS-CoV-2.

开始日期2021-04-12

申办/合作机构

National Institute of Allergy & Infectious Diseases

[+4]

NCT03474263 / Withdrawn临床2期

A Phase 2a, Open-Label Biomarker Study of IC14 for the Treatment of Patients With

Patients with rapidly progressive ALS will be assigned to IC14 intravenously on Day 1-4. This 4-day course will be repeated on Days 8-11. Patients will all undergo MR-PET scans at two time points: before treatment onset and after the last treatment cycle. This scan will measure areas of ALS disease activity and assess response to IC14 treatment. MR-PET scans will be compared to historical controls.

开始日期2019-09-01

申办/合作机构

Implicit Bioscience Ltd.

100 项与 CD14 相关的临床结果

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100 项与 CD14 相关的转化医学

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0 项与 CD14 相关的专利（医药）

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15,963

项与 CD14 相关的文献（医药）

2024-03-01·European journal of gastroenterology & hepatology

Intestinal barrier biomarkers in clinical evaluation of patients with inflammatory bowel disease.

Article

作者: Tamara Mogilevski ; Anke L Nguyen ; Mary Ajamian ; Rebecca Smith ; Sam Rosella ; Miles P Sparrow ; Gregory T Moore ; Peter R Gibson

BACKGROUND:

Inflammatory bowel disease (IBD) is associated with chronic intestinal barrier dysfunction, though its non-invasive assessment remains challenging. This study aimed to determine how four putative circulating markers vary across differing states of intestinal inflammation and with therapy in patients with IBD.

METHODS:

Plasma samples from one prospective cross-sectional and four longitudinal studies, including healthy controls, were analysed for markers of lipopolysaccharide translocation, lipopolysaccharide-binding protein (LBP) and soluble-CD14 (sCD14), and markers of epithelial injury, syndecan-1 and intestinal-type fatty acid-binding protein (IFABP). Inflammatory activity was determined using objective measures.

RESULTS:

Compared with healthy subjects, concentrations of LBP and sCD14 were higher in patients with active (P < 0.001) and severe ulcerative colitis (UC) (P < 0.0001) and active Crohn's disease (CD) (P < 0.001). In UC in remission, LBP was less than in active disease (P = 0.011) LBP levels decreased longitudinally before and after induction of medical therapy in patients with IBD (P = 0.030) and as severe UC was brought into remission at weeks 2 and 12 (P ≤ 0.022). Response to treatment was associated with higher baseline levels of LBP (P = 0.019) and soluble-CD14 (P = 0.014). Concentrations of syndecan-1 and IFABP were or tended to be lower in UC and CD in active disease and did not change with successful therapy.

CONCLUSION:

While markers of epithelial injury were subnormal with active disease and did not change with therapy, markers of lipopolysaccharide translocation directly reflected intestinal inflammation, reduced with successful therapy and predicted treatment response.

2024-03-01·Neurology(R) neuroimmunology & neuroinflammation

HLA-DRB1*15:01 and the MERTK Gene Interact to Selectively Influence the Profile of MERTK-Expressing Monocytes in Both Health and MS.

Article

作者: Michele D Binder ; Eze C Nwoke ; Ellen Morwitch ; Chris Dwyer ; Vivien Li ; Alexandre Xavier ; Rodney A Lea ; Jeannette Lechner-Scott ; Bruce V Taylor ; Anne-Louise Ponsonby ; Trevor J Kilpatrick ; Ausimmune Investigator Group

BACKGROUND AND OBJECTIVES:

HLA-DRB1*15:01 (DR15) and MERTK are 2 risk genes for multiple sclerosis (MS). The variant rs7422195 is an expression quantitative trait locus for MERTK in CD14⁺ monocytes; cells with phagocytic and immunomodulatory potential. We aimed to understand how drivers of disease risk and pathogenesis vary with HLA and MERTK genotype and disease activity.

METHODS:

We investigated how proportions of monocytes vary with HLA and MERTK genotype and disease activity in MS. CD14⁺ monocytes were isolated from patients with MS at relapse (n = 40) and 3 months later (n = 23). Healthy controls (HCs) underwent 2 blood collections 3 months apart. Immunophenotypic profiling of monocytes was performed by flow cytometry. Methylation of 35 CpG sites within and near the MERTK gene was assessed in whole blood samples of individuals experiencing their first episode of clinical CNS demyelination (n = 204) and matched HCs (n = 345) using an Illumina EPIC array.

RESULTS:

DR15-positive patients had lower proportions of CD14⁺ MERTK+ monocytes than DR15-negative patients, independent of genotype at the MERTK SNP rs7422195. Proportions of CD14⁺ MERTK+ monocytes were further reduced during relapse in DR15-positive but not DR15-negative patients. Patients homozygous for the major G allele at rs7422195 exhibited higher proportions of CD14⁺ MERTK+ monocytes at both relapse and remission compared with controls. We observed that increased methylation of the MERTK gene was significantly associated with the presence of DR15.

DISCUSSION:

DR15 and MERTK genotype independently influence proportions of CD14⁺ MERTK+ monocytes in MS. We confirmed previous observations that the MERTK risk SNP rs7422195 is associated with altered MERTK expression in monocytes. We identified that expression of MERTK is stratified by disease in people homozygous for the major G allele of rs7422195. The finding that the proportion of CD14⁺ MERTK+ monocytes is reduced in DR15-positive individuals supports prior data identifying genetic links between these 2 loci in influencing MS risk. DR15 genotype-dependent alterations in methylation of the MERTK gene provides a molecular link between these loci and identifies a potential mechanism by which MERTK expression is influenced by DR15. This links DR15 haplotype to MS susceptibility beyond direct influence on antigen presentation and suggests the need for HLA-based stratification of approaches to MERTK as a therapeutic target.

2024-02-23·Science advances

Spontaneous, persistent, T cell-dependent IFN-γ release in patients who progress to Long Covid.

Article

作者: Benjamin A Krishna ; Eleanor Y Lim ; Marina Metaxaki ; Sarah Jackson ; Lenette Mactavous ; NIHR BioResource ; Paul A Lyons ; Rainer Doffinger ; John R Bradley ; Kenneth G C Smith ; John Sinclair ; Nicholas J Matheson ; Paul J Lehner ; Nyaradzai Sithole ; Mark R Wills

After acute infection with severe acute respiratory syndrome coronavirus-2 (SARS-CoV-2), a proportion of patients experience persistent symptoms beyond 12 weeks, termed Long Covid. Understanding the mechanisms that cause this debilitating disease and identifying biomarkers for diagnostic, therapeutic, and monitoring purposes are urgently required. We detected persistently high levels of interferon-γ (IFN-γ) from peripheral blood mononuclear cells of patients with Long Covid using highly sensitive FluoroSpot assays. This IFN-γ release was seen in the absence of ex vivo peptide stimulation and remains persistently elevated in patients with Long Covid, unlike the resolution seen in patients recovering from acute SARS-CoV-2 infection. The IFN-γ release was CD8⁺ T cell-mediated and dependent on antigen presentation by CD14⁺ cells. Longitudinal follow-up of our study cohort showed that symptom improvement and resolution correlated with a decrease in IFN-γ production to baseline levels. Our study highlights a potential mechanism underlying Long Covid, enabling the search for biomarkers and therapeutics in patients with Long Covid.

项与 CD14 相关的新闻（医药）

2024-04-02

·佰傲谷BioValley

自身免疫性疾病“微环境”

不少自身免疫病都伴有皮肤病变（简述26种自身免疫性疾病）。作为免疫系统的第一道屏障，皮肤也存在影响疾病进展的免疫微环境。人类和小鼠皮肤中的免疫细胞类型Mucosal Immunol 15, 551–561 (2022)皮肤中的先天免疫细胞群皮肤中的APC包括：肥大细胞，尤其是在肢端部位。皮肤巨噬细胞：包括胚胎来源和招募的单核细胞衍生亚群。先天淋巴细胞(ILC)：1型(如NK细胞)，2型和3型ILC都存在于皮肤中，但ILC2尤其普遍。虽然皮肤ILC与其他粘膜组织中的ILC一样，主要是局部维持和扩张的组织驻留型细胞，但它们表达独特的受体模式，并且特别依赖于IL-18和TSLP的激活和功能。Immunity. 2021 Oct 12;54(10):2305-2320.e11.真皮中的其他DC亚群包括：经典树突状细胞(cDC)：cDC1型：在人皮肤中表达CD141，在小鼠皮肤中表达CD103；cDC2型：在人皮肤中表达CD1c，在小鼠皮肤中表达CD11b。在小鼠真皮中，也有CD103- CD11b-的“双阴性”DC细胞亚群。CD123+浆细胞样DC：在健康皮肤中的含量很少，但在各种疾病的情况下可以显着增加。单核细胞来源的DC细胞(moDCs)：经典单核细胞在进入组织后经过获得II类表达分化而来。人皮肤中表达CD14,小鼠皮肤中表达CD11b和CD64。朗格汉斯细胞(LCs)：主要存在于表皮中，通过延伸其树突以捕获皮肤表面附近的抗原。最近的研究表明，LC实际上是胚胎来源的组织驻留巨噬细胞的一个子集。其特点包括：在皮肤炎症期间，骨髓来源的单核细胞有助于增强朗格汉斯细胞的免疫特性。朗格汉斯细胞已被证明可以促进皮肤中的效应和调节性T细胞反应。最近研究鉴定了两个人类皮肤中的朗格汉斯细胞亚群LC1和LC2，二者的主要分化调节途径之一是EGR1和Notch信号。LC1在炎症微环境下保持稳定，而LC2容易被激活并表现出免疫抑制分子的表达升高。皮肤淋巴细胞：皮肤也是T细胞的密集储存库，整个表皮中约含有2×10^10个。以组织驻留的记忆亚型居多。在小鼠皮肤中，Vγ5Vδ1树突状表皮T细胞（DETC）在妊娠晚期就驻留在表皮中，与朗格汉斯细胞形成稳定的相互作用并产生细胞因子，有助于角质形成细胞的稳态增殖和伤口愈合。人类表皮缺乏DETC，但含有更多的CD8+CD103+ αβ T细胞群，这些细胞可能执行类似的功能。CD4+T细胞占人和小鼠皮肤中αβ T细胞的大部分。这些细胞优先存在于真皮中，但也可以存在于表皮和皮下。具有驻留记忆表型的Tregs占健康成人皮肤CD4+T细胞群的10-30%。皮肤Tregs中可能包含相当比例的胸腺来源Tregs。真皮中还含有丰富的非经典淋巴细胞亚群：真皮γδ T细胞群(小鼠皮肤中比例较人更高）、粘膜相关的不变性T(MAIT)细胞等。在稳定状态下，少量中性粒细胞，单核细胞和αβ T细胞负责检查真皮中的病原体；在炎症刺激下，皮肤驻留DC、巨噬细胞前体细胞、中性粒细胞、T细胞等免疫细胞收到招募，在细胞外基质(ECM)中迅速积聚。γδ T细胞、MAIT细胞和CD4+ Th17细胞则是皮肤IL-17A的主要来源。不同于肠道免疫微环境，使用靶向生物制剂的IL-17与上皮完整性的损害无关。抗IL-17疗法现在是治疗银屑病的主要手段。角质形成细胞则在表皮免疫微环境中表达几种不同的模式识别受体，并在炎症时产生多种细胞因子，包括胸腺基质淋巴生成素(TSLP)、TNF和IL-33等IL-1家族成员。这些细胞因子是激活皮肤免疫细胞和免疫细胞募集到皮肤所必需的。自身免疫病的表皮免疫微环境影响皮肤炎症伴有皮肤先天免疫细胞的显着变化，包括：巨噬细胞、树突状细胞、肥大细胞和ILC显著扩张；新细胞亚群募集，例如嗜酸性粒细胞和中性粒细胞；细胞活化，导致关键表面标志物表达模式改变。在不同类型的自身免疫病中，皮肤中可能存在的APC也有所不同。接触性超敏反应(CHS)：皮肤DC细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞、血液内皮细胞、抗辐射细胞或朗格汉斯细胞；移植物宿主病(GvHD)：朗格汉斯细胞或角质细胞；银屑病：皮肤DC或朗格汉斯细胞。CHS：在CHS的诱发中，真皮DC是其中最重要的APC。真皮DC捕获的半抗原被呈现给皮肤中的效应T细胞。活化的效应T细胞产生IFNγ并引起皮肤炎症。同时，角质形成细胞收到诱导产生IL-1α，从而激活位于毛细血管后小静脉周围的M2型巨噬细胞。活化的巨噬细胞产生CXCL2，促进真皮DC的积累。银屑病：近期研究发现，表皮免疫微环境(epidermal immune microenvironment)在银屑病的发展中起主导作用。银屑病真皮中，表达CD1c和CD11b的DC2s在预启动阶段迁移到病灶周围皮肤区域，迅速取代EpCAM+++++CD11c low LC细胞，并引发炎症。表皮CD141 cDC1、CD1c cDC2、CD14 moDC和BDCA2 pDC可协调银屑病炎症。CCR2+ CD11c+hi LC在银屑病表皮中释放IL-23。CD5 T细胞在银屑病表皮和真皮中产生IL-17A和TNF-α的能力增强。CD4+CD25+Foxp3+Treg被认为在维持免疫稳态和通过抑制免疫应答调节局部组织炎症方面起重要作用。在银屑病中，Treg抑制功能受损导致辅助性T17/Treg平衡改变。不过Tregs在银屑病发病机制中的确切功能仍不清楚。Cell Mol Immunol (2022)参考文献：1.Zhang, C., Merana, G.R., Harris-Tryon, T. et al. Skin immunity: dissecting the complex biology of our body’s outer barrier. Mucosal Immunol 15, 551–561 (2022). https://doi.org/10.1038/s41385-022-00505-y2.Zhou, Y., Xu, F., Chen, XY. et al. The epidermal immune microenvironment plays a dominant role in psoriasis development, as revealed by mass cytometry. Cell Mol Immunol (2022). https://doi.org/10.1038/s41423-022-00940-83.Kabashima, K., Honda, T., Ginhoux, F. et al. The immunological anatomy of the skin. Nat Rev Immunol 19, 19–30 (2019). https://doi.org/10.1038/s41577-018-0084-54.Liu X, Zhu R, Luo Y, Wang S, Zhao Y, Qiu Z, Zhang Y, Liu X, Yao X, Li X, Li W. Distinct human Langerhans cell subsets orchestrate reciprocal functions and require different developmental regulation. Immunity. 2021 Oct 12;54(10):2305-2320.e11. doi: 10.1016/j.immuni.2021.08.012. Epub 2021 Sep 10. PMID: 34508661.本周好文推荐如需转载请联系佰傲谷并在醒目位置注明出处···

临床研究免疫疗法细胞疗法

2024-03-17

·生物制品圈

虽不能“治”，心向往之~慢性乙肝免疫研究又有新进展！

今天小编给大家解读一篇2月发表在Journal of Hepatology杂志（IF：25.7/Q1）的文章“Single cell landscape of functionally cured chronic hepatitis B patients reveals activation of innate and altered CD4-CTL-driven adaptive immunity”。在本文中作者结合单细胞数据、流式细胞术和免疫荧光，阐明与慢性乙型肝炎（CHB）和功能治愈（FC）患者相关的免疫病理细胞状态。背景慢性乙型肝炎(CHB)病毒感染影响2.57亿人，主要在亚太地区和非洲地区，每年估计有80万人死于肝硬化和肝癌。慢性乙型肝炎患者很难彻底治愈和清除病毒感染，在患者血清中出现或不出现抗HBs抗体的情况下，病毒表面抗原(HBsAg)的丧失，也叫功能治愈(FC)。病毒感染的清除在很大程度上取决于强大和持久的适应性免疫反应。病毒特异性CD8 T细胞参与急性乙肝病毒感染。然在慢性乙肝患者中，乙肝病毒特异的CD8 T细胞最终耗尽。最近的研究表明，适应性免疫反应的损害除了高抗原负荷外，还与暴露于病毒抗原的时间有关。先天免疫反应在慢性乙型病毒性肝炎中的具体作用仍存在争议，且相对知之甚少。先天免疫反应通常被认为是慢性乙肝患者的功能受损。最近一项研究发现了一种特定的Kupffer细胞(KC)亚群，该细胞在IL2的存在下重新激活了乙肝病毒特异性CD8 T细胞的抗病毒功能。此外，其他研究表明，NK细胞细胞毒活性的增强与肝脏炎症之间存在正相关关系，尤其是在核苷类似物(NA)治疗后清除乙肝表面抗原的患者中。这些研究暗示了先天免疫细胞在慢性乙肝的解决中的潜在功能。尽管最近的研究已经通过不同测序方法探索了CHB不同阶段的肝脏环境的动态情况，但FC患者的疾病相关细胞状态(DAC)仍然难以捉摸。在本文中，作者主要目的是探索持续控制乙肝表面抗原丢失的机制基础。同时用scRNA-seq和多参数流式细胞术检测了每例肝穿刺活检的核心细胞和匹配的PBMCs，并分离了CHB患者或已实现功能性治愈的患者。通过对转录组谱、推断的细胞间相互作用和基于流式细胞术的验证研究的系统分析，作者发现了不同的免疫和上皮细胞状态，如CD4-CTL、NK细胞、中性粒细胞和表达MHC-II类分子的肝细胞，这些细胞可能在FC患者实现和维持HBsAg持续丢失中发挥重要功能。此外，作者首次提供了FC患者中存在cccDNA的直接证据。结果CHB和FC患者肝脏和PBMCs的单细胞图谱作者将CHB患者分为治疗组(n=29)和未治疗组(n=29)，其中检测到病毒HBsAg, CHB患者达到FC (n=9)。FC患者在治疗后(n=7)或自发(n=2)显示病毒HBsAg清除，并在HBsAg消失后7 ~ 84个月进行分析。作者对肝脏活检和患者匹配的PBMCs中分离出的细胞进行了scRNA-seq，以及多参数流式细胞术。并利用多重免疫荧光(mIF)染色和图像分析对来自同一肝活检的组织切片进行了验证研究（图1A）。为了重点分析免疫细胞亚群和HBV特异性T细胞的表型，CHB患者根据其定量HBsAg (qHBsAg)进行分层，高(>10000 IU/ml)，中(1000-10000 IU/ml)，和低(0.05-1000 IU/ml)（表1）。表1：样本的EASL指南图1 CHB和FC患者的肝脏单细胞转录组图谱和匹配的PBMCs肝脏中适应性和固有免疫细胞的组成有明显的变化CHB (n=15)和FC (n=8)患者的单细胞转录组分析在肝内捕获了47109个细胞，包括26种不同的主要细胞类型/状态，分别是上皮细胞(肝细胞和胆管细胞)、免疫细胞(T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、中性粒细胞和肥大细胞)、内皮细胞和星状细胞(图1B)。PBMCs主要由17种不同免疫细胞亚型(主要包括T、NK、单核细胞、DCs和B细胞以及干细胞和中性粒细胞)构成(图1E)。FC患者肝内环境中T细胞显著减少，同时NK细胞和中性粒细胞增加(图1D)。而这一现象在PBMCs种并未观察到(图1G)。流式细胞术(图1H)也证实FC患者肝活检中T细胞的减少和NK/NK T细胞群的增加，而外周血则没有这种类似的改变(图1-I)。总体而言，这些观察结果提示，功能治愈的患者肝脏内的免疫细胞组成可能存在特定变化，而这些变化可能并不总是准确地反映在PBMCs中。FC患者表现为CD8 T细胞耗竭减少并出现CD4相关的适应性免疫应答接下来作者细分了主要的T细胞和NK细胞簇，然后对这些细胞类型进行重新聚类(图2A-A’)。确定了不同的细胞亚型，包括CD4辅助性T细胞、CD4细胞毒性T细胞或CD4-CTLs 、CD8效应T细胞、耗竭的CD8 T细胞、CD8记忆T细胞、Treg 细胞、肝脏常驻NK或LR-NK、常规NK或cNK 细胞以及NK T细胞。FC患者中，耗竭的PDCD1+CD8 T细胞显著减少，FOXP3+Treg几乎完全缺失(图2A-D)。耗竭标志物如TIGIT、LAG3和PDCD1在FC患者中显著降低(图2C-D)。而且这种图变化主要反映在肝脏而非PBMCs。与CHB患者相比，FC患者的FOXP3+ Treg频率下降，在肝脏中更明显(图2C)。对肝脏CD8 T细胞进行流式细胞术分析也显示，在FC患者中，PD1+和TIM3+耗竭CD8 T细胞的频率显著较低(图2E)。这不仅体现在CD69+组织驻留CD8 T细胞中，也体现在转运CD69- T细胞中。根据qHBsAg水平对CHB患者进行分层表明，耗竭CD8 T细胞的减少与qHBsAg的减少相关(图2E)。FC的患者中伴随着耗竭的CD8 T细胞和Treg细胞的丢失，CD4-CTL细胞数量增加（表达效应毒性淋巴细胞相关标志物PRF1、GZMA、GZMK、TNF、NCR3）(图2 F-F’)。此外，这些CD4-CTLs表达与终末分化、抗原敏感的CD4 T细胞(IL7R, KLRG1)相关的标记物，这些标记物显示出独特的炎症和细胞毒性效应细胞特征，包括肿瘤坏死因子(TNF)。同时它们也表达NCR3基因，类似于NK样细胞的特征（图2F, F）。流式细胞术分析显示，在组织驻留(CD69+)和转化(CD69-) T细胞中，KLRG1+ CD4 T细胞的频率均增加(图2F”)。低qHBsAg组CHB患者外周血中CD4+KLRG1+细胞比例显著高于高qHBsAg组。如图2G-G'所示，与高qHBsAg患者相比，低qHBsAg患者KLRG1+ CD4细胞中颗粒酶B和穿孔素的表达增加约2-3倍，进一步证实了qHBsAg的丢失可能与CD4-CTL的出现有关。RNA velocity 分析表明，FC患者CD4-CTL的出现和增加很可能是由naïve CD4细胞分化而来(图2H)。轨迹分析也揭示了CD4-CTL和传统CD8 T细胞之间存在明确界限。作者鉴定了两种CD8 T细胞亚群：一种细胞主要在CHB中，也产生耗竭的CD8 T细胞，以PDCD1、LAG3和TIGIT的表达为标志(图2C, D)。FC的标志是耗竭的CD8 T细胞簇明显消失。剩余的CD8 T细胞亚群向NKT和cNK细胞转变。在CMV暴露的情况下也观察到类似的观察结果，CD8 T细胞表现出先天样特征，这归因于BCL11B表达缺失。cNK和NKT细胞簇在FC患者的LR-NK细胞中增加，这表明从CD8到NKT或cNK到LR-NK的转变可能促进固有免疫激活状态。总之，这些数据表明存在与CD4-CTL表达效应蛋白(PRF1, GZMA, IFNG, TNF)和通路(如IL2, STAT5)相关的适应性免疫应答改变。也强调了T细胞的可塑性以获得先天样特征功能。图2 FC患者表现出Tregs缺失、CD8 T细胞耗竭以及cd4相关适应性免疫反应的出现抗原特异性CD4 T细胞在FC患者中作为病毒清除的关键调节因子接下来，作者利用流式细胞术全面表征并比较了在CHB患者(n=17)和FC患者(n=6)肝脏和PBMCs中发现的CD8和CD4 T细胞群的表型。HBV DNA水平和qHBsAg水平之间有很强的正相关。组织驻留(CD69+) CD4和CD8 T细胞显示了记忆样T细胞(CD127+)频率的增加，以及衰老(CD57+)和终末分化(HLADR+)标志物的丧失。这些观察结果再次表明，不仅在免疫表型变化的稳健性方面，而且在两种组织类型(肝脏与PBMCs)之间观察到的模式方面存在显著差异。耗竭和衰老的丧失，加上记忆样T细胞的增加，提示FC患者在缺乏病毒抗原的情况下，CD4和CD8 T细胞的效应表型和增殖能力增加（补充图1C-E）。这些观察结果表明，FC患者耗竭和衰老的丧失，加上记忆样T细胞的增加，提示FC患者在缺乏病毒抗原的情况下，CD4和CD8 T细胞的效应表型和增殖能力增加。补充图1在HBV感染的自然史中，HBV特异性T细胞，尤其是CD8 T细胞与病毒控制相关。作者询问HBV特异性T细胞应答在CHB和FC患者之间是否有差异。利用酶联免疫斑点技术（Enzyme Linked Immunospot Assay, ELISpot）对HBV特异性T细胞进行去卷积，发现慢性乙型肝炎患者和FC患者的HBV特异性T细胞应答均具有肽-特异性（peptide-specific）。通过细胞内细胞因子染色进行的进一步分析表明，在出现FC的患者中，HBV特异性T细胞主要包含在CD4 T细胞群中，而HBs-特异性CD4 T细胞的出现频率高于相应的CD8 T细胞(图2I)。在所有CHB患者中均发现了核心和HBx-特异性CD8 T细胞，但频率较低(无论qHBsAg水平如何，图2I)。FC患者的pol和HBs特异性CD8 T细胞明显增加。HBV特异性CD4 T细胞(主要是pol和HBs特异性)只在出现FC的患者中观察到(图2I)，这提示在功能性治愈的长期维持中，某些肽-特异性（peptide-specific）T细胞的稳健效应功能具有重要意义。肝内NK细胞在FC患者中表现为启动状态除了CD4-CTLs的增加外，FC患者还表现出经典固有免疫应答的增加。肝脏scRNA-seq数据的分析显示，LR-NK细胞显著增加(图3A-A′)，这些细胞被认为通过分泌细胞因子和参与与各种类型细胞的信号相互作用(如招募DCs到炎症部位，促进抗原交叉呈递，从而重塑肝脏环境。FCGR3A+传统NK (cNK)细胞直接参与抗体依赖性细胞毒性(ADCC)，并且可促进抗病毒T细胞应答，在FC患者中也显示出轻度增加(图3A-A′)。LR-NK细胞和cNK细胞的免疫效应功能均增加，并具有细胞因子-趋化因子分泌特异性（图3B-C）。此外，肝脏中流式细胞术分析显示，随着qHBsAg水平的下降，CXCR6+ CD69+ NK簇逐渐富集(图3D)。在FC患者中，这些细胞中激活性受体(NKp46、CD38、NKG2D和TRAIL)的表达升高和抑制性受体(如PD1和TIM3)表达降低(图3D’-D’’)。在早期的研究中已经报道过CXCR6+ CD69+ NK细胞是scRNA-seq分析中确定的LR-NK细胞的代表。也就是说，部分FC患者的LR-NK细胞还表现出其他抑制性受体的中高表达，如PD1和LAG3(图3D’-D’’)。基于这些标志物，作者确定了CD69+ CXCR6high CD16-(图3D' )和CD69+ CXCR6low CD16+(图3D' )细胞亚群，这些细胞随着HBsAg水平下降而出现，并在FC中富集。作者还发现了另一个由CD69+CXCR6- CD16-标记的细胞群，该细胞中qHBsAg水平较低(图3D'-3D'')。总之，多参数流式细胞术数据表明，组织驻留的NK细胞的效应细胞毒性功能必须被活化和抑制受体的平衡表达仔细调节。图3 FC患者表现出肝内NK细胞的预激状态FC患者肝内髓样环境重塑为免疫活跃状态以上数据表明FC患者的肝脏逐渐向免疫激活状态转变。为了了解患者的全身免疫反应，作者通过Luminex分析了血浆细胞因子、趋化因子和可溶性受体。血浆分析显示，促炎细胞因子和趋化因子如IL -1 β， ENA-78 (CXCL5)， BAFF和MCP-1 (CCL2)逐渐增加，而qHBsAg水平降低。其中，ENA-78是一种上皮中性粒细胞吸引蛋白，已知由内皮细胞产生，募集中性粒细胞、T细胞、B细胞和嗜酸性粒细胞到肝脏，这表明FC患者的低度炎症。中性粒细胞是构成抵御病原体第一道防线的肝内髓系细胞群的关键组成部分。越来越多的证据表明，中性粒细胞可作为固有免疫的长期调节剂，并在病毒感染和消退期间改变免疫环境中发挥作用。因此，作者探索了中性粒细胞的性质和组成在CHB和FC患者的全血和肝室中的变化。如图4A和A'所示，FC患者的全血总体中性粒细胞频率较低。然而，cluster 4(图4A和A′′cl4)显示的成熟亚群似乎在FC患者中频率增加。在不同的全血中性粒细胞亚群中， FC患者的中性粒细胞募集标志物(如CXCR2、CXCL8、CEBPB、NCF和NAMPT)总体下降。然而，在FC患者中，全血cl4中性粒细胞显示出高水平的DUSP1、PTGS2、CEBPB、ISG15、IFIT3、IFITM1和IFITM3的表达(图4B)。与CHB患者相比，FC患者上调的通路显示了通过NFkB、干扰素应答、细胞因子产生的调节、对病毒和模式识别受体通路的应答增加(图4B'和B')。FC患者的肝室中中性粒细胞数量高于CHB患者(图4C-C”)。中性粒细胞的富集可能是由于在肺部疾病和其他组织中经常观察到的中性粒细胞浸润和边集现。此外，中性粒细胞和内皮细胞的CXCR4-CXCL12相互作用增加，CXCR1/2-CXCL2相互作用减少(图4D)，这意味着在功能治愈的患者中，中性粒细胞运输增加，并且它们长期驻留在肝脏内。FC中性粒细胞中干扰素刺激基因(ISG)的减少表明，它们可能不再积极地参与诱导先天应答(图4E)。然而，这些细胞在病毒再激活过程中反复暴露的情况下，仍有能力分泌关键细胞因子给信号效应细胞(CD4/CD8 T细胞，NK细胞)以清除病毒。此外，作者还分析了MacParland等人整合的健康肝脏中的髓系细胞中炎症基因的表达，并将其与作者自己的scRNA-seq数据进行了比较。FC患者的髓系细胞显示出不同水平的促炎和免疫活性基因(IL1B, TNF, IFNG, TGFB1, NFKB1, IL6和CD80)，而抗炎基因，如IL10的表达似乎在FC患者中比CHB和健康肝脏低得多。此外，髓系细胞的单细胞谱也提示，FC患者的肝脏环境发生了明显的重塑，转变为免疫活动状态。流式细胞术分析证实，FC患者肝脏内的CD14+促炎单核细胞增加，表明存在低级别免疫应答的生态系统。CellPhoneDB分析显示，DC2和FOLR2/VSIG4 KC群体与CD4-CTLs和记忆样CD8细胞均显示出稳健的相互作用(补充图2E-E”)，因此提示它们在诱导主动免疫应答方面的假定功能。总之，这些数据强调了髓系细胞在调节从抗炎环境向免疫活性环境的转变方面的重要功能，其机制可能是通过FOLR2/VSIG4 KCs调节增加的病毒抗原呈递和效应细胞的再教育。重要的是，这些结果强调了中性粒细胞作为FC患者持续病毒清除的重要介质的重要作用，并进一步支持增强的固有免疫反应可能在实现功能性治愈中发挥重要作用的假设。补充图2图4 FC患者肝脏内存在边缘中性粒细胞图5 功能性治愈患者肝细胞中MHC II类分子表达增加FC患者肝细胞表达MHC-IIFC患者肝脏中的免疫细胞谱显示肝脏环境中存在促炎开关，通过LR-NK，cNK和中性粒细胞增加固有免疫应答；通过特异性KCs促进CD4和CD8 T细胞的抗原呈递；以及CD4-CTLs的出现，这些CTL可以被促炎刺激(IL2, TNF, IFNG)激活，并由KC培养。目前的关键问题是，在功能性治愈患者中，CD4-CTL或HBV特异性T细胞如何有效靶向呈递病毒抗原的肝细胞。在这项研究中，作者成功地从15例CHB和8例FC患者中提取了足够数量的肝细胞(n~1850)。肝细胞亚群(图5A-A′′)似乎与FC患者特异性相关。除了HLA-A、HLAB和HLA-C表达外，MHC Il类分子(包括HLA-DPA1、HLA-DPB1、HLA-DRA、HLA-DRB1、CD74和CTSS)也高表达(图5B、C)。总体而言，与CHB患者相比，FC患者中MHC I/MHC ll值较低的肝细胞数量较多。据报道，干扰素治疗可在体外肝细胞(HepG2-NTCP和PHH)和体内小鼠模型中诱导MHC Il类分子表达。通路分析显示，在MHC ll高的肝细胞中，细胞质翻译、抗原呈递和处理、凋亡、白细胞分化信号和淋巴细胞活化等增加(图5D)。在CellPhoneDB分析中，与CHB患者相比，FC患者中肝细胞与LR-NK或CD4-CTLs之间的HLA-C-FAM3C、EGFR-MIF、EGFR-COPA的相互作用减少，而XCR1-XCL1/2、HLA-DPA1-TNFSF9、CD74-COPA、CD74-MIF的相互作用增加(图5E-F)。即使在NUC+/-IFNa治疗后HBsAg仍然为阳性的患者(表1)，与FC (Sloss)患者相比，MHC Il基因(HLA-DRA、HLADRB1、HLA-DPB1)的表达显著减少(图5G)。与此同时，与FC患者相比，接受治疗的非sloss (NSLoss)患者还表现出功能障碍、耗竭的CD4-CTL其效应蛋白(如GZMA、PRF1和TNF)的表达水平较低(图5H)，同时检查点基因(包括PDCD1)的表达水平显著较高(图5H’)。总之，MHC ll高的肝细胞与LR-NKs细胞和活化的CD4-CTL之间的相互作用增强，可能触发靶向免疫应答，从而维持对CHB的长期控制。作者猜想是否有低水平的残留HBsAg由整合DNA合成，或极低水平的残留活性cccDNA可能被anti-HBs抗体掩盖，因此不容易被qHBsAg检测法检出。通过数字微流控PCR对FC患者进行的病毒学研究显示，与CHB相比，FC患者的肝活检中cccDNA水平低50倍，但持续存在(图6A)。此外，尽管FC患者的cccDNA、HBV DNA(图6B)和3.5kb HBV RNA水平较低，但FC患者的3.5kb HBV RNA与cccDNA的比值与CHB患者相似(图6 C-D)。此外，利用HBV-bait捕获富集的病毒序列的单细胞cDNA扩增(sccDNA)证实了数字微流控PCR的结果(图6E-H)。具体来说，在映射到与患者匹配的病毒基因型(图6E-H)后，病毒转录本在CHB(图6E, F)和FC(图6G,H)肝细胞中均有表达。正如预期的那样，从FC样本分离的肝细胞中病毒转录水平比CHB低100-1000倍。总之，这些数据表明，FC患者的残留cccDNA可被积极转录，以支持少量肝细胞内低水平的持续病毒复制。图6 FC患者肝细胞内存在低水平的cccDNA和病毒转录物总结在这项工作中，作者使用了多种方法包括单细胞测序、流式细胞术、ELISpot、细胞内细胞因子染色等等，主要研究了乙肝患者不同治疗结局中的免疫病理标志以及潜在的机制。文章的亮点之一就是数据，作者的患者数据非常丰富,不仅有不同乙肝患者而且测了肝脏组织以及样本匹配的PBMCs。通过单细胞分析肝组织和相匹配患者的PBMCs中疾病相关细胞状态研究，以此来为非功能性治愈患者的潜在机制提供新的见解。另外的一个亮点是，虽然文章以生物信息分析为主，但使用了非常多的湿实验手段，来证明生信分析的结果。识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入生物制品微信群！请注明：姓名+研究方向！版权声明本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。

临床研究免疫疗法

2024-03-11

·今日头条

单细胞RNA测序助力分析！浙江大学刘夏/方维佳/冯新华发现可提高肝细胞癌患者免疫检查点阻断治疗疗效的联合免疫治疗策略

本文为转化医学网原创，转载请注明出处作者：Rainbow 导读：随着免疫治疗的广泛应用，缺乏可靠的生物标志物来预测晚期肝细胞癌(HCC)患者的免疫治疗效果已经成为一个日益关注的问题。 3月8日，浙江大学刘夏、方维佳、冯新华共同通讯在期刊《Journal of Experimental & Clinical Cancer Research》上在线发表题为“S100A9 + CD14 + monocytes contribute to anti-PD-1 immunotherapy resistance in advanced hepatocellular carcinoma by attenuating T cell-mediated antitumor function”的研究论文，研究强调了S100A9 + CD14 + 单核细胞在预测对ICB治疗反应不足方面的重要性，并为单核细胞对ICB治疗耐药的内在机制提供了见解。研究还提出了一种靶向S100A9的联合治疗方法来提高ICB的疗效。 https://jeccr.biomedcentral.com/articles/10.1186/s13046-024-02985-1 研究背景 01 近年来，免疫检查点阻断（ICB）已经成为一种突破性的治疗模式，预示着晚期肝细胞癌(HCC)患者治疗模式的转变。然而，尽管ICB在HCC中的应用迅速，但没有一种可靠的候选生物标志物可以指导ICB在HCC中的应用。ICB治疗在晚期HCC患者中的效果有限，这强调了对可靠生物标志物的迫切需求，这些生物标志物能够准确预测治疗效果，并破译对ICB治疗的潜在耐药机制。由于外周血易获取且能够反映动态和全身免疫炎症反应，外周血被广泛认为是非侵入性采样的理想来源。最近的研究已经在各种癌症中确定了几种ICB治疗反应的外周生物标志物。然而，迄今为止，大多数外周生物标志物研究都集中在T细胞亚群上，忽视了更丰富且多功能的髓系细胞。此外，极少有研究探讨了HCC患者对ICB治疗的循环生物标志物。总体而言，在ICB治疗之前确定可靠的生物标志物以优化晚期HCC患者选择仍存在需求。研究发现 02 在这项研究中，研究人员使用单细胞RNA测序（scRNA-seq）探索了晚期HCC患者中与ICB治疗反应相关的外周生物标志物和潜在耐药机制。分析发现，在对ICB不响应的患者血液中，S100A9 + CD14 + 单核细胞更为丰富，这在不同癌症患者队列中得到了进一步验证。此外，S100A9 + CD14 + 单核细胞表达PD-L1较高，使其能够与T细胞上的PD-1发生相互作用，并随后抑制T细胞增殖和细胞毒性。这项研究为先前未被认识的循环单核细胞亚群的存在提供了新的见解，强调了其作为预测性生物标志物或治疗靶点来增强HCC患者的ICB治疗疗效的潜力。研究结论 03 综上所述，研究强调了S100A9 + CD14 + 单核细胞在预测对ICB治疗反应不足方面的重要性，并为单核细胞对ICB治疗耐药的内在机制提供了见解。研究还提出了一种靶向S100A9的联合治疗方法来提高ICB的疗效。参考资料： https://jeccr.biomedcentral.com/articles/10.1186/s13046-024-02985-1 注：本文旨在介绍医学研究进展，不能作为治疗方案参考。如需获得健康指导，请至正规医院就诊。热门·直播/活动 🕓 上海｜06月14日-16日 ▶ 第六届上海国际癌症大会将于6月14-16日在上海举办，学科交叉，共同推进肿瘤研究与诊治多模态！ 🕓 北京｜09月20日-21日 ▶ 第五届单细胞技术应用研讨会暨空间组学前沿研讨会欢迎您的参与！点击对应文字查看详情

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