Hepatitis C

▎药明康德内容团队编辑丙型肝炎病毒（HCV）是一种常见的血源性病原体，其主要感染部位是肝脏。尽管与乙肝相比，丙肝的知名度并不高，但其潜在危害却同样不容忽视。HCV可能引发急性或慢性肝炎，并增加感染者发展为肝硬化、肝功能衰竭和肝细胞癌（肝癌）的风险，且迄今为止尚未有针对性的疫苗被成功研发出来。但好消息是，2013年年底，首款无需干扰素就能高效治愈丙肝的直接抗病毒药物NS5B抑制剂索非布韦（sofosbuvir）获FDA批准上市，彻底变革了丙肝的治疗格局。在临床试验中，索非布韦展示出了对丙肝2型和3型患者100%的治愈率，其诞生是科学家在丙肝攻坚史上树立的一座里程碑。在索非布韦诞生的背后，除了有历代科学家们为HCV治疗药物的开发奠定了坚实的前期研究基础，还有一名药物研究科学家在其中发挥了关键的推动作用。他凭借扎实的化学功底、灵活的头脑、勇于挑战的个性和坚定的信念最终导致了这款被《细胞》杂志称为“这一代人在公共卫生领域取得的最重要成就之一”的疗法的诞生。在今天的文章中，药明康德内容团队将结合公开资料，为大家讲述这位开创了治愈丙肝的新时代的关键科学家迈克尔·索菲亚（Michael J. Sofia）博士的故事。▲Michael J. Sofia博士（图片来源：药明康德内容团队制作）挑战攻克一种难防难治的棘手疾病故事要从2005年索菲亚博士决定离开大型医药公司，加入一家只有15人的小型生物技术公司准备“从头再来”开始说起。在加入这家名为Pharmasset的小公司之前，索菲亚博士已在大型医药公司里贡献了自己20年的青春。很多人到了像他这样的年纪，年轻时的抱负和梦想都已在时光中被渐渐掩埋，但他却越来越按不下心中的那股冲动。索菲亚博士从博士后阶段开始就对黄病毒研究十分感兴趣，自1989年科学家首次鉴定出属于黄病毒科的丙肝病毒后，他就开始对这种与进行性肝病和癌症相关的新型人类病毒进行了小规模的研究。起初，他没想过要寻找能够治疗HCV感染的方法，只是单纯想要更好地了解这种病毒。但几年后发生的一件事改变了他的想法。那时，一名丙肝小患者的家人联系到他想向他寻求治疗丙肝的新疗法。多年来，这个家庭为了给女儿治病四处求医，在标准治疗无效的情况下，他们唯一的选择只有无奈地期盼新药的出现。当时，索菲亚博士只能对他们表示遗憾，但他想为丙肝患者做点什么的想法已经种下。当然，基于对丙肝病毒的了解，他知道这不是一件易事。▲HCV感染的自然史（图片来源：参考资料[5]）HCV是一种高度多样化的病毒，具有多种亚型，这使得科学家们不管是想要制造出一种提供广泛保护作用的疫苗还是开发一款能够全面覆盖多种亚型的疗法都十分困难。因此，最初被用于治疗丙肝的“标准方案”里的两种药物——干扰素（一种具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节特性的多效性细胞因子）和利巴韦林（一种广谱抗病毒药物）都不是专门用来治疗丙肝的。这种标准方案需要连续使用6至12个月，总体治愈率却只有40%左右。并且由于干扰素会产生流感样症状、抑郁和骨髓抑制等严重的副作用，许多患者根本无法坚持完整个疗程。但对丙肝患者来说，他们没有更好的选择了。时间来到了20世纪末，随着丙肝病毒体外培养的难题被攻克，转机出现了。科学家们终于有了能用来筛选丙肝药物的工具，这为开发直接抗病毒药物（direct-acting antiviral agents，DAAs）奠定了基础。索菲亚博士知道，他实现理想的机会来了。作为一名新药开发工作者，没有什么比亲手开发出一款能够造福广大无药可用的患者的有效药物更能令人感到欣慰和满足的了。为了让自己的学识和多年积累下的药物开发经验能更好地发挥其价值，也为了实现自己的一腔抱负，他毅然离开了稳定的工作环境，选择加入了一家专注于抗病毒药物开发的小公司，从搭建新的研发团队开始，尝试走一条前途未卜的路。毕竟，以前从没人能成功过。初到公司就面临棘手难题当时，许多生物技术和医药公司正竞相开发DAAs，最重要的目标就是要摆脱对干扰素的依赖。其中，研究进展最快的要数HCV蛋白酶抑制剂类药物，但这类药物并没能达到研究人员的预期。首先，这些抑制剂也需要与干扰素和利巴韦林联合使用。其次，这类药物也会产生许多不良副作用。不仅如此，它们也无法覆盖多种不同的HCV亚型，并且患者也会迅速对其产生耐药性。▲HCV的基因组结构和DAAs的作用靶点（图片来源：参考资料[4]）那时，索菲亚博士选择加入的生物技术公司正在开发的候选丙肝药物PSI-6130采取的是另一种治疗策略。PSI-6130是一种核苷类似物，靶向NS5B RNA聚合酶。这类药物可以作为DNA或RNA合成的替代物，被引入到新合成的DNA或RNA链中，从而干扰核酸的合成过程，阻止病毒的复制。索菲亚博士刚到公司就面临着一个棘手的问题。尽管PSI-6130在细胞实验中的表现非常突出——它耐受性良好，并且能显著抑制HCV RNA的合成，但该候选分子也有一个硬伤，它在口服时很难被吸收，还会产生一大堆没有活性的尿苷代谢物。为了解决这个问题，索菲亚博士带领团队尝试开发了PSI-6130的前药。简单地说，前药就好比是一种药物的“特洛伊木马”，它们通过对目标药物分子进行修饰，隐藏了目标药物的真实面目。这样一来，药物就能够通过一些原本无法通过的障碍（比如无法进入细胞），更容易被身体吸收。当前药进入体内后，外部的伪装会被解除，目标药物就能够显示出真正的功效。索菲亚博士团队开发的这款名为RG7128的前药的早期临床数据确实相当令人鼓舞。RG7128在单独给药或与干扰素+利巴韦林联合给药时都能抑制HCV的复制。尤其是在不使用干扰素的情况下，RG7128联用HCV蛋白酶抑制剂也能发挥作用，这让研究人员看到了开发出一款能够完全摆脱干扰素的丙肝疗法的希望。但这种前药依然存在局限性，丙肝患者需要每天多次服用以克为单位的药物才能看到临床效果，并且这种前药同样会产生大量无活性的尿苷代谢物。在这样的情况下，Pharmasset公司的一些工作人员认为，如果要开发出一款最终能够上市的丙肝疗法，他们可能需要找到一种更好的药物。索菲亚博士深以为然。救回“垃圾桶”里的药物分子，开启治愈丙肝的新时代索菲亚博士知道，自己所需要解决的问题很多，包括在保持药物良好特性（如HCV亚型覆盖广、不易耐药和具有高选择性）的同时，提高其药效并减少给药频率。此外，这种药物最好还能选择性地靶向HCV所在的肝脏。问题是，要如何找到这样一种药物呢？索菲亚博士的团队随后进行了大量药物结构改造的探索，但始终没能找到比最初发现的PSI-6130更好的候选分子。于是，他们决定重新以原本想要放弃开发的PSI-6130为突破口，继续开展研究。幸运的是，在他同事菲尔·弗曼（Phil Furman）及其团队的帮助下，索菲亚博士理出了一些继续开发的方向。通过研究PSI-6130的代谢过程和作用机制，他们发现PSI-6130的一种尿苷三磷酸（uridine triphosphate）代谢产物正好符合他们理想中的HCV聚合酶抑制剂的特性——它的半衰期更长，可能具有更好的效力并有望实现一天一次的给药频率。接下来的问题就在于，如何让这种活性代谢产物能特异性地在肝脏细胞中生成并发挥作用呢？索菲亚博士想到了肝脏的首过代谢。首过代谢是指，所有药物在消化道被吸收后，首先会通过门静脉系统直接输送到肝脏被代谢和清除。基于这个想法，索菲亚博士及其同事设计了一种磷酰胺前药，该药物是PSI-6130的衍生物，在进入肝细胞后会因首过代谢脱去药物中的磷酸基团，然后代谢为其单磷酸衍生物，并进一步代谢为他们找到的那种有效的HCV聚合酶抑制剂。为了从大量前药类似物中筛选出最佳候选药物，索菲亚博士团队还建立了全新的体外和体内筛选系统。经过一系列全面的筛选，他们最终选择了一种名为PSI-7851的分子作为临床候选药物。在1期临床试验中，这种疗法被证明是安全有效的，且每天只需服用一次。不过PSI-7851实际上是两种异构体分子的混合物，其中一种形式比另一种形式更有效。经过进一步的优化研究，索菲亚博士团队开发了一种新的化学合成方法来制造PSI-7851中疗效更佳的那种异构体，该单一分子被命名为PSI-7977，也就是后来的索非布韦。▲索非布韦的分子结构（图片来源：参考资料[4]）2012年初，吉利德科学公司（Gilead Sciences）收购了Pharmasset公司，并继续开发索非布韦。尽管此前索非布韦就在临床试验中展现了不俗的实力，但2013年1月公布的一项临床试验结果才最终奠定了其在丙肝治疗中的重要地位。在这项针对丙肝2型和3型患者的临床试验中，索非布韦联用利巴韦林在没有干扰素的情况下，只需给药12周，患者的治愈率为100%！这意味着，索非布韦是首款无需干扰素就能高效治愈丙肝的直接抗病毒药物，彻底变革了丙肝的治疗，让患者不再受干扰素副作用的困扰。2013年12月6日，美国FDA批准了索非布韦（Sovaldi）方案用于某些HCV类型患者的治疗。在它获批后，慢性HCV感染者开启了无干扰素治愈丙肝的新时代。而继索非布韦之后，国内外更多DAAs药物被研发上市，让全球丙肝患者看到了治愈的希望。后记在医学史上，只有屈指可数的慢性疾病能够被治愈，丙肝正是其中的一种。2016年，索菲亚博士因其在丙肝药物开发中做出的突出贡献与另外两位优秀科学家共同获得了拉斯克临床医学研究奖。▲2016拉斯克临床医学研究奖获得者（图片来源：拉斯克奖官网）对于索菲亚博士来说，获奖固然令人兴奋，但最令他感到开心的是，他实现了自己的理想，同时改变了许多丙肝患者的人生。在得知他即将获得拉斯克奖后，当年那位找他求药的小患者家属向他发来了祝贺，并告诉他，他们女儿的病已经治愈并过上了幸福的生活。对于一个基础科学家来说，没有什么是比这更好的奖励了。根据《内科学年鉴》上发表的一项新的研究，基于现有的筛查和治疗手段，到2036年，曾经在世界传染病中排名前列的丙肝将成为罕见病，世界卫生组织更是把2030年消灭丙肝作为目标。▲现有的丙肝疗法已能在短短2-3个月内，以90%以上的成功率治愈所有主要类型的丙肝！（图片来源：世界卫生组织）如今，与丙肝的斗争似乎已经进入了尾声，但科学家的努力还没有结束。期待有效的乙肝疫苗被开发出来那一天，人类能够正真消灭这种疾病。大家都在看▲欲了解更多前沿技术在生物医药产业中的应用，请长按扫描上方二维码，即可访问“药明直播间”，观看相关话题的直播讨论与精彩回放参考资料：[1] Hepatitis C replicon system and drug development. 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Enter Sofosbuvir: The Path to Curing HCV. Cell. 2016 Sep 22;167(1):25-29. doi: 10.1016/j.cell.2016.08.044. Epub 2016 Sep 13. PMID: 27634323.免责声明：药明康德内容团队专注介绍全球生物医药健康研究进展。本文仅作信息交流之目的，文中观点不代表药明康德立场，亦不代表药明康德支持或反对文中观点。本文也不是治疗方案推荐。如需获得治疗方案指导，请前往正规医院就诊。版权说明：本文来自药明康德内容团队，欢迎个人转发至朋友圈，谢绝媒体或机构未经授权以任何形式转载至其他平台。转载授权请在「药明康德」微信公众号回复“转载”，获取转载须知。分享，点赞，在看，聚焦全球生物医药健康创新

【引言】具有可编程响应功能的蛋白开关在生物过程监测与控制中发挥着重要作用。CRISPR-Cas系统因其RNA引导Cas蛋白对靶标核酸的可编程结合与处理能力，广泛应用于基因编辑、生物成像和分子诊断。然而，目前缺乏对Cas蛋白功能的有效控制，特别是脱靶活性的风险，这凸显了开发可控CRISPR-Cas系统的必要性。在自然界中，噬菌体与细菌的进化军备竞赛孕育了抗CRISPR（Acr）蛋白，用于抑制Cas蛋白活性以避免CRISPR-Cas免疫系统的攻击。这些天然Acr蛋白为直接控制Cas蛋白功能提供了工具，但其在构建响应型Cas蛋白中的应用受到固有缺陷（如易于二聚化、高结合亲和力、酶催化不可逆抑制等）的限制。【成果简介】本课题组利用计算化学指导的理性蛋白质工程，以抗CRISPR（Acr）蛋白为模块，设计与构建Cas蛋白开关（CasPSs）。通过分子指纹分析、静电势映射和结合自由能计算，精准改造Cas12a与AcrVA4、AcrVA5间的相互作用界面，获得正交的蛋白酶响应型CasPSs。这些CasPSs可将特定蛋白水解事件转化为Cas12a功能激活，实现了哺乳动物细胞中蛋白水解诱导的基因组编辑及病毒感染中病毒蛋白酶活性的灵敏检测。该研究为开发用于可控基因操纵与临床诊断的CRISPR-Cas工具提供了新策略。近日，该成果以“Engineering Anti-CRISPR Proteins to Create CRISPR-Cas Protein Switches for Activatable Genome Editing and Viral Protease Detection”为题发表在《Angew. Chem. Int. Ed.》上，文章第一作者为课题组已毕业博士研究生康文渊。【图文解读】Scheme 1.  计算化学指导的CasPS理性设计示意图以AcrVA4为模型，基于对Cas12a和Acr蛋白分子相互作用界面的综合分析与调控，融合这两个模块构建了CasPS，实现了可激活的基因组编辑和病毒蛋白酶检测 Fig 1. 融合AcrVA4、TEV蛋白酶识别序列与Cas12a构建CasPS并探究其基本性质基于Cas12a与AcrVA4的相互作用，构建了模仿天然酶原激活机制的Cas蛋白开关（CasPS）。通过理性融合Cas蛋白与Acr蛋白，实现了蛋白酶响应型CasPS的构建（图1A）。针对AcrVA4的二聚化倾向可能干扰CasPS激活的问题，截短了AcrVA4（1-133位），这既保留了其抑制活性又避免了二聚现象（图1B）。以Cas12a/AcrVA4配合物的晶体结构作为参考，分析了空间取向并确定了融合方式。通过分子动力学模拟，验证了融合操作对蛋白稳定性的影响，确保融合后的CasPS稳定性不变（图1C和D）。进一步表达纯化了CasPSTEV，并对其开关功能进行了评估。实验结果显示，CasPSTEV能有效抑制Cas12a的活性，而在TEV蛋白酶的作用下，通过特异性切割识别序列，实现了Cas12a活性由关到开的转换，开关比率为6.5（图1G和H）。Fig 2. 计算化学指导的蛋白质工程提高CasPS的开关比率为提升CasPS的开关比率，在计算化学指导下微调了ΔAcrVA4与Cas12a的分子相互作用界面，以精细调控其亲和力（图2A）。基于已知的晶体结构（PDB ID：6OMV），利用分子动力学模拟深入探究了两者间的相互作用，并细致分析了模拟轨迹的分子指纹。分析结果显示，ΔAcrVA4中的E184、R187、E204和R206在与Cas12a的相互作用中呈现出高频接触（≥90%），对亲和力具有显著影响（图2B和C）。进一步计算显示，E184A、R187A、E204A和R206A的突变分别引起了5.18±1.88、0.87±0.37、3.71±0.92和2.31±1.07 kcal/mol的相对结合自由能变化（图2D）。基于上述计算结果，选择变化最为显著的E184进行点突变。实验结果表明，相较于突变前的CasPS，构建的CasPSTEV（E184A）在保持相当背景信号的同时，显著增强了响应信号，从而将开关比率提升至34.0（图2E和F）Fig 3. 连接肽长度对CasPS的开关比率影响以及正交响应的CasPSs我们还探讨了连接肽对CasPS性能的影响（图3A），并测定了连接肽长度在20至40 aa范围内时CasPS的开关比率。尽管所有CasPS变体均显示显著的响应信号，但20 aa的连接肽显著增强了背景信号。AlphaFold2模型分析揭示，短连接肽阻碍了ΔAcrVA4与Cas12a的有效相互作用，削弱了其抑制效果。实验测定的开关比率分别为3.2、34.0和21.6（图3B）。因此，本研究选择30 aa作为优化连接肽长度，以推进后续实验。为验证策略的通用性，构建了基于丙型肝炎病毒（HCV）NS3/4A蛋白酶和人鼻病毒（HRV）14型3C蛋白酶底物序列的CasPSNS3/4A和CasPS3C。经蛋白酶处理后，这些CasPS展现出高开关比率及对相应蛋白酶的特异性响应（图3C-E），证实了该策略的广泛适用性。 Fig 4. 基于Cas12a与AcrVA5的CasPS及其性质研究进一步探索了其他Acr蛋白在构建Cas12a开关中的适用性。其中，AcrVA5通过乙酰化Cas12a的PAM结合位点，抑制其与DNA的结合活性，导致功能失活（图4A）。静电势能分析显示AcrVA5催化界面富含负电荷，而Cas12a的PAM结合区域则呈现显著正电荷，暗示两者间可能存在静电相互作用（图4B）。结合蛋白-蛋白对接和静电势能分析，构建了AcrVA5与Cas12a的相互作用模型，发现AcrVA5的疏水残基Y55和L88插入Cas12a内部，形成非极性联系，同时Y55、D80和D82与Cas12a存在氢键和静电作用（图4C）。结合自由能计算表明，AcrVA5/Cas12a复合物的亲和力略弱于AcrVA4（E184A）/Cas12a复合物，揭示了AcrVA5用于构建CasPS的潜力（图4D）。为了消除AcrVA5的不可逆抑制功能，突变Cas12a乙酰化位点（K595R），构建了基于AcrVA5的CasPS（图4E）。与基于AcrVA4的CasPS相比，基于AcrVA5的CasPSTEV的开关比率略低（13.3），但Cas12a活性恢复率较高（78.3%，图4F）。此外，通过替换底物识别位点，验证了开关良好的可拓展性与响应的特异性（图4G）。Fig 5. CasPS用于蛋白酶激活的基因编辑在体外验证特异性蛋白酶水解激活CasPS的有效性后，进一步探讨了其在哺乳动物细胞内的应用潜力。首先在HEK293-EGFP-TetOn细胞系中通过EGFP基因切割实验评估了CasPS在蛋白酶介导的基因组编辑中的应用潜力。实验结果显示，在缺乏蛋白酶激活时，EGFP基因只有微小的沉默效率；而在蛋白酶存在条件下，EGFP基因沉默效率效率与野生型Cas12a相近（图5A-C）。此外，进一步评估了CasPS在HeLa细胞系中对内源性HPRT1基因的编辑能力，采用标准的T7E1检测方法进行定量。结果表明，在蛋白酶激活条件下，CasPS的编辑效率与Cas12a相当，并展现出约10.1倍的开关比率（图5D和E）。综上所述，实验表明CasPS可实现特定蛋白酶触发的可激活基因编辑，为精准基因工程提供了一种新的策略。Fig 6. 基于CasPS的蛋白酶分析新方法及其在生物样品中病毒蛋白酶高灵敏检测的应用CRISPR-Cas12a的反式切割活性在核酸分子诊断中显示出巨大潜力，但其在蛋白酶标志物检测中的应用尚未深入探索。鉴于病毒蛋白酶在病毒感染中的核心作用，系统研究了CasPS在病毒感染检测中的应用。通过病毒蛋白酶介导的CasPS切割，成功恢复了Cas12a的活性，并利用其持续切割单链DNA报告基因实现信号的高效放大，进而通过荧光或试纸条实现信号的快速读取（图6A）。实验结果显示，基于CasPS的3C蛋白酶检测限低于1×10-3 U/μL，相较于传统多肽探针方法，检测灵敏度提升了20倍以上，且信号强度显著增强，达到9.6-28倍（图6B-C）。此外，还通过市售抑制剂验证了CasPS在检测3C蛋白酶抑制方面的实用性（图6D）。我们进一步将CasPS系统成功应用于柯萨奇病毒B3（CVB3）感染细胞的检测，通过荧光和试纸条信号有效区分感染与未感染细胞。荧光信号与病毒载量和感染时间呈正相关（图6 F-J），在40个生物样本测试中，AUC值高达0.942，显示出优秀的敏感性与特异性（图6 K和L）。总之，这些数据有力证明了基于CasPS的检测方法在复杂生物样品中检测病毒感染的可行性和显著优势。【总结与展望】综上所述，本课题组借鉴酶原自抑制与激活机制，利用Acr蛋白作为模块化组件，成功开发出可编程的Cas蛋白开关。通过计算化学指导的蛋白质界面工程，克服了Acr在构建蛋白开关时面临的挑战，创建了具有可编程响应功能的正交CasPSs，无需繁琐的筛选过程。该方法实现了Cas12a蛋白开关的便捷模块化生成，具备可编程和可定制的特性。实验证明，这些CasPSs在哺乳动物细胞中展示了高效的可激活基因组编辑能力，并能对病毒感染期间的靶标蛋白酶活性进行灵敏分析。本研究策略基于Cas12a与Acr蛋白之间的分子界面相互作用，通过微调Cas-Acr蛋白对，有望扩展至其他第二类Cas蛋白。因此，本研究提出了一种基于计算化学指导的理性构建Cas蛋白开关的方法，为基因编辑、生物化学调控及临床诊断领域中的可控CRISPR-Cas工具开发提供了高效的策略。文章链接:https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/anie.202400599 本文仅用于学术分享，转载请注明出处。若有侵权，请联系微信：bioonSir 删除或修改！

一款存在17年的原研药，倏然间在中国市场消失了。近期，有患者亲属在互联网平台反映，礼来治疗注意缺陷多动障碍（ADHD）的药物择思达（盐酸托莫西汀胶囊，Strattera），逐渐停止了在中国市场的供应，并称全国各地多家医院门口贴有“断货”通知。有的患者亲属在互联网购物平台上下单，其订单审核也显示不通过，或官方会直接来电表示缺货。一份在患者群中流传的关于择思达撤网申请说明显示：因礼来产品线战略调整，目前由礼来公司国外工厂LILLY DEL CARIBE Inc生产、礼来贸易有限公司作为总代的产品将逐渐停止向中国市场供应，最终在2024年1月底终止供应。停止供应的剂型均为胶囊，包装规格系10mg、25mg和40mg三种。图片来源于网络对此，E药经理人在多个线上购药平台进行求证，不少药店客服称，暂未收到正式断供通知，但近期突然出现了“哄抢”现象，某药店甚至称“一位客户直接一次性购入了100盒”。有的药店表示择思达胶囊目前库存所剩无几。此外笔者发现，择思达胶囊价格现在五花八门，有的已经炒至千元高价，有药店也感叹：“近期的确一天一个价了。”不仅是择思达，另有不少人发现，与择思达具备同一适应证的进口药专注达（原研厂家为强生），在医院也贴有“断货”通知。近三年，“撤出”中国市场的原研药不算少，每一次撤出，意味着对应不同的中国患者群体失去了一种药物选择。全球唯一获批用于治疗黏多糖贮积症IVA型（MPS IVA）的特效药唯铭赞退出中国市场，再往前，2021年，默沙东250亿重磅药国内批文注销，艾伯维曾经的明星丙肝药宣布“撤市”……细究原研药退出中国市场背后，原因不尽相同，如公司产品线要作出战略调整，销售难以覆盖成本，产品在公司内部发生了迭代升级，专利挑战，又或是受到外部激烈仿制药竞争，承受了较大的集采压力。“消失”的择思达择思达是一种高度选择性去甲肾上腺素重摄取抑制剂（SNRI），2002年7月获美国FDA批准上市，是全球首个被批准用于治疗注意缺陷多动障碍（ADHD）的非兴奋型药物。自2002年择思达在美国上市以来，全球范围内关于ADHD药物的研发一度陷入停滞。而副作用较小，具备良好的安全性和有效性的择思达则顺利打进了全球诸多市场。2007年，择思达（胶囊）在中国获批上市，与再普乐、百优解及欣百达并称为礼来在中国中枢神经产品线中的四大核心药品。2018年，择思达的口服溶液剂型也在中国获批，但彼时，不管是择思达，还是其余三款中枢神经产品，核心专利均已过专利保护期。好在，择思达在中国上市后得到了广泛的认可，不仅是《中国注意缺陷多动障碍防治指南(第二版)》非中枢兴奋剂类主要推荐药物，也是中国儿童ADHD防治指南将择思达作为治疗ADHD的主要推荐药物。公开数据显示，2021-2022年，托莫西汀在中国城市公立医院、县级公立医院、城市社区中心及乡镇卫生院终端的销售额保持在3亿元左右的水平。实际上，在2017年，择思达使用方法专利（US-05658590）正式到期。这意味着，关于该产品的胶囊剂和口服溶液剂的仿制品种都会在短时间内充斥市场。果不其然，这一年国内天方药业和江苏正大丰海两家企业的盐酸托莫西汀胶囊仿制药相继获得了生产批文；而到了次年，又有6款仿制药上市。此外，盐酸托莫西汀口服溶液对应的多款仿制药也陆续获批生产。不过，象征市场“萎缩”的钟声在2023年才敲响。在第九批集采中，盐酸托莫西汀的胶囊与口服溶液剂型同时入选，并成为此轮集采中最“卷”的品种之一。近20家企业入围，仅有9家企业最终拿到中标资格。值得注意的是，参与竞标的多数还为“光脚”企业，结果可想而知。往前回溯，择思达今年撤出中国市场的命运实则早有预兆。从礼来在中国的发展路径来看，一个关键的时间节点不可忽视——2018年，礼来计划重整及优化业务，瞄准利润更大的领域以促进业绩增长。彼时，礼来拟准备出售在中国专利过期药业务、往“新药”靠拢的信号明显。前脚出售了两款抗生素药权益，后脚对已过专利保护期的产品重视度进行调整，甚至“裁撤”，一切都是在为引入创新药物让位。调整后的礼来，在全球和中国市场的业务重心早已发生更迭，但在中国一直受到集采的影响。礼来年报显示，2022年因受到胰岛素集采影响，礼来中国市场收入同比下滑10%。不过在2023年的年报中，礼来中国区收入已经回归到了11%的增速水平。目前，礼来中国除了对糖尿病领域药物十分重视外，其在肿瘤领域的CKD4/6抑制剂阿贝西利表现颇为亮眼，2023年在全球大卖近40亿美元，其在中国区业绩持续攀升。不仅仅是中国，早已专利到期的老药择思达，似乎已经结束了它的历史使命，在礼来全球的财报中不再见其踪影。那些年退出中国市场的明星药物礼来择思达退出中国市场并非个例。近年来，还有不少明星药物似乎完成阶段性使命般，最终选择了退出中国市场。背后原因梳理来看，无外乎“商业前景不及预期”、“仿制药群起”、“同类更优产品冲击既有优势”、“内部产品更新迭代”等关键词。默沙东明星降糖药西格列汀片算是一大典型案例。2006年，作为全球第一款DPP-4抑制剂，默沙东西格列汀获FDA批准上市，用于单药或与二甲双胍、噻唑烷二酮类药物联合使用用于改善II型糖尿+病的血糖控制。由于长时间无竞争对手，西格列汀也算是风靡多年，销售额逐年攀升。该药进入中国市场则稍晚一些，直到2009年正式获批，成为国内市场上首个用于治疗2型糖尿病的DPP-4抑制剂。在国内甫一亮相，同样风光无两。转折发生在2020年，随着仿制药逐一登台亮相，占尽先发优势的西格列汀开始倍感压力。先是正大天晴首仿药率先进入市场，随后石药、东阳光西格列汀仿制药也相继获批，还有一众企业排队审批中……仿制药来势汹汹，西格列汀周遭销烟四起，面临的市场竞争也愈发激烈。这还仅是一击重锤，西格列汀原本引以为傲的“新”优势也逐渐减弱。随着更多的糖尿病新型疗法GLP-1受体激动剂、SGLT-2抑制剂陆续在国内获批上市并纳入医保，DPP-4抑制剂西格列汀除了被诸多仿制药“合围”外，还被更多糖尿病新疗法蚕食原本的市场空间，原有市场遭受挤压渐成定局。这逐渐演变成后来者所熟知的局面，默沙东适当调整企业战略，这款昔日明星药物选择退出中国，将资源给予更具竞争优势的产品。抛开竞争者来势汹汹，还有部分原因是“企业内部产品迭代”，从而自然演变至“淘汰更新”局面。艾伯维昔日明星丙肝药物奥比帕利退出中国市场这一案例或最为外界熟知。奥比帕利片联合达塞布韦钠片治疗方案于2017年首次在国内获批，2018年上市，作为一种全口服、无干扰素的治疗方案，用于治疗无肝硬化或伴代偿期肝硬化的基因1型慢性丙肝。虽然上市整体较为顺利，但遗憾的是，奥比帕利在2019年的医保谈判中失利。这还不算致命，更重要的是，该药物迭代产品也迅速上线了。2019年5月，艾伯维在中国市场推出了疗效更优的新一代丙肝产品——格卡瑞韦哌仑他韦片，用于治疗基因1、2、3、4、5或6型慢性丙型肝炎病毒感染的无肝硬化或代偿期肝硬化成人患者。这直接加速了奥比帕利在华的生命周期“衰退”，成为了2021年国内注销批文的重磅药物之一。彼时，艾伯维给出的官方回应同样验证了这一结局：新一代产品已在中国上市，奥比帕利的申请注销是全球同步。罕见病药物则面临着不一样的现实困境。拿全球唯一一款治疗黏多糖贮积症IVA型的药物“唯铭赞”为例，该药物将于今年5月退出中国市场，揭开了罕见病市场用药难的一角。退出原因从生产商百傲万里制药给患者的回复中可窥见一二：“复杂的市场准入规则使得药物的供应不可持续，特别是在罕见病治疗方面。尽管我们在过去几年中尽了最大努力，仍然没有促使药品进入医保报销体系，我们决定不再续签该产品的进口药品注册证。”它遇到的问题实则较为明确：一方面，患者本身数量少，国内黏多糖贮积症在患者组织处登记的人数约为400-500人。另一方面，根据病人症状和影像学表现的不同，该疾病有7种分型，一种分型的患者数量可能在100人左右。由此，患者人数少，加之药物价格高昂，患者负担不起，出于对市场前景考量、商业回报的不确定性权衡，企业战略性放弃部分市场似乎也在情理之中。就以2023年财报数据，百傲万里制药全年实现营收24.19亿美元，其中“唯铭赞”全球营收达7.01亿美元，却主要由美国和欧洲市场推动。对于这类罕见病药物，国内支付体系仍有不少需克服的挑战。随着同类产品层出不穷，仿制药陆续获批，原研药市场大不如前局面几乎无法逆转。由此，外资药企产品注销时有发生，命运相似者不在少数，还包括曾创下年销售15亿美金记录的诺华艾瑞宁。但无论这些明星药物是功成身退，还是被自然淘汰，或仅是暂时“出走”国内市场……都为时代留下了一笔鲜明的注脚。声明：本文3月27日首发于《E药经理人》（ID：eyjlr2013），经授权转载，如需二次转载请联系原作者。E药经理人媒体平台致力于成为医药行业意见领袖平台，记录和观察医药重大商业事件，展现行业的复杂与冲突，提供最前沿的思想洞见。 阅读原文，是昨天最受欢迎的文章哦