Intussusception

Viral infections trigger more cases of intussusception, the common cause of bowel blockages in young children, than previously thought, according to a new study. Viral infections trigger more cases of intussusception, the common cause of bowel blockages in young children, than previously thought, according to a new study. The research, led by Murdoch Children's Research Institute (MCRI) and published in Clinical Infectious Diseases, found during the COVID-19 lockdowns hospital admissions for intussusception, a medical emergency involving obstruction of the intestine, among young children significantly decreased. For the study, 12 years of data was analysed across Victoria, NSW and Queensland. A total of 5,589 intussusception cases were recorded between January, 2010 and April, 2022. Of those, 3,179 were children under the age of two. During the lockdown periods, Victoria and NSW experienced a decline in hospital admissions for intussusception among children under two by 62.7 per cent and 40.1 per cent, respectively. The rate of intussusception cases has now returned to normal levels. MCRI and Monash University researcher Dr Ben Townley said the magnitude of the decline supported that common respiratory diseases such as colds, the flu and respiratory syncytial virus (RSV), were behind a significant proportion of intussusception cases. "Reductions in intussusception hospital admissions were seen in all age groups, however most occurred in children less than two years of age," he said. "Intussusception is the leading cause of acute bowel obstruction in infants and young children and without prompt diagnosis and management, can be fatal. "Countries with prolonged COVID-19 lockdowns and suppression strategies saw reductions in common respiratory viruses, which influenced the drop in intussusception admissions." Victoria experienced the greatest lockdown duration, with Melbourne having six lockdown periods, for a total of 263 days. Greater Sydney had 159 days and Brisbane had 18 days in lockdown. MCRI Professor Jim Buttery said the decrease in intussusception cases was greater than expected given previous research into the causes of the condition. "Our analysis found commons viruses play a larger role than previously recognised in triggering intussusception," he said. Infectious triggers were thought to comprise only a minority, about 30 per cent, of cases." Professor Buttery said the findings raised the possibility that emerging vaccines like the new RSV vaccines may help prevent intussusception. "When a new vaccine against common childhood respiratory viruses is introduced, we may find there are some unexpected benefits, like protecting more children from intussusception," he said. We last saw this in 2007, when introducing the rotavirus vaccine against gastroenteritis, also reduced febrile convulsions in young children." Researchers fromSydney Children's Hospital Network, University of Melbourne and Queensland Health also contributed to the findings.

当5次手术和3次化疗后肿瘤仍在不断进展时，M女士陷入了绝境。幸运的是，医生让她加入了一项创新免疫疗法的临床试验，令她感到惊喜的是，治疗后仅一个月肿瘤开始迅速缩小，并且截至目前为止没有长出任何新的肿瘤，在抗癌6年后她终于重新回到了正常的生活！ 5次手术无法切除的恶性肿瘤，创新免疫疗法1个月快速起效！ 2017年10月，M女士突然感到胃部剧烈疼痛，她马上去了医院的急诊接受治疗，在进行详细的检查后，医生最初的诊断结果是肠套叠，建议她去权威的医院进行紧急手术。然而命运却给她开了个更大的玩笑，当护理团队准备将她送上直升机飞往匹兹堡的 UPMC Presbyterian 医院做手术时，医生说一她的一项新检验结果显示她腹部左侧有一个大肿块，医生怀疑这是 癌症 。 版权图片，请勿转载 肠套叠手术后的第二天，医生告诉她已确认肿块是癌症，并且是一种非常罕见的恶性程度很高的癌症-- 平滑肌肉瘤 ，更糟的是，她的癌症已经到了晚期，肿瘤已经从腹部转移到了肝脏。 M女士简直不敢相信自己的耳朵，这一切发生的太快了。她麻木的的听着医生跟她说，她的癌症很严重，但还可以治疗。 为了尽快控制病情，她即刻开始了全身性的化疗，之后又做了手术尽可能多的切除肿瘤，但不幸的是，尽管医生切除了她腹部和肝脏的肿瘤，但肝脏的肿瘤却不断复发，在2017-2020年间她进行了3轮化疗和4次手术仍然无法组织癌症的疯狂生长。 医生开始进行第5次手术希望尽可能多的切除肝脏上的肿瘤并在周围追加化疗清除残存的肿瘤，然而情况比预计更糟，手术过程中医生发现她的肿瘤太大了，只能放弃原计划。 就在M女士认为自己病情过重，没有救的时候，医生告诉她可以尝试一项新型的免疫疗法临床实验-- TIL疗法 。 肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL) 是来自免疫系统的特殊 T 细胞，可识别并深入到肿瘤中。它们可以精准的杀死癌细胞。 医生告诉她，这项疗法的独特之处在于，TIL是患者 自身的免疫细胞 ，我们提取并激活它们并将它们培养到令人难以置信的数量，然后我们使用这些细胞作为武器，回到体内消灭癌细胞。 TIL 疗法在治疗黑色素瘤方面显示出卓越的临床效果，即将 获批上市 。目前的临床试验正在其他类型的转移性癌症（已扩散的晚期癌症）患者中测试 。 2021年2月，M女士顺利入组接受了TIL治疗。外科医生切除了部分肿瘤，研究团队开始识别和培养 TIL 细胞。他们确定她的 TIL 细胞足够强大来对抗癌症，并将这些细胞培养到数10亿级别。 1个月后，医生将培养好的 TIL 细胞输回M女士体内。 2021年3月，M女士顺利康复回家，她感觉自己的状态明显好转；3月底的复查结果显示她的肿瘤已经 显著缩小 ；5月的检查结果显示肿瘤仍然在持续的缩小；更令M女士欣慰的是，自治疗以来她再 没有长出任何新的肿瘤 。之前癌症反复发作，疯狂生长的噩梦再也没出现。 TIL疗法究竟是如何清除肿瘤的？ TIL是 肿瘤组织中的一小部分免疫细胞，这些淋巴细胞中有部分是针对肿瘤特异性突变抗原的T细胞，是机体淋巴细胞侵入到肿瘤组织中，并对肿瘤起识别、抵抗和攻击作用的细胞群体， 它们才是深入到敌军内部打击能力最强的免疫细胞，也是深藏在肿瘤中的宝藏！ TIL细胞虽然珍贵，但却是每个肿瘤患者体内都存在的，然而， 肿瘤患者体内的氧气和重要的营养物质都被肿瘤剥夺，导致最有杀伤能力的TIL细胞进入衰竭状态 ，无法再有效的识别和攻击肿瘤细胞。 值得振奋的是，科学家已经成功从肿瘤附近组织中分离出TIL细胞，加入生长因子IL-2进行体外大量扩增，再回输到患者体内，从而扩大免疫“敢死队”的数量和攻击能力。这样一来，就意味着我们可以使用自己的免疫细胞来杀死肿瘤，这是一种更安全，更有效的新型免疫疗法，这就是大名鼎鼎的TILs细胞疗法。 近80%患者肿瘤缩小或消失！全球首款实体瘤TIL疗法上市在即！ 在2022过去的癌症免疫治疗学会(SITC)年会上，基于TILS细胞的创新型疗法LN-144(Lifileucel）更新了黑色素瘤的临床结果，这是目前最大的黑色素瘤的细胞疗法 2 期研究，再次引起了轰动。 153例接受过PD-1或靶向治疗进展后的极晚期黑色素瘤患者接受TILs治疗后，结果显示： 疾病控制率（DCR）高达77.8％； 客观缓解率达到31.4%。 更引人注目的是，患有PD-L1阴性的患者也有响应 ，这说明对免疫检查点抑制剂无效的患者仍能获益于TIL疗法。对于PD-1治疗后进展的患者，几乎没有其他治疗选择，这种治疗方案的效果几乎无与伦比。 2023 年 3 月 24 日,美国Iovance生物公司宣布，已正式完成 肿瘤浸润淋巴细胞（ TIL ）疗法-- lifileucel 向 FDA 提交的滚动生物技术许可申请（BLA），用于PD-1/L1和靶向治疗进展后的晚期（不可切除或转移性）黑色素瘤患者。这是 全球首款向FDA正式提交上市申请的实体瘤TIL疗法 ，这意味着大名鼎鼎的TIL疗法距离上市的脚步越来越近啦！ 喜讯！中国成功研发TIL疗法，肺癌、乳腺癌、宫颈癌等实体瘤患者可申请 需要告诉国内病友的好消息是，近两年，中国的研究人员也研发出多种新型TIL疗法，救命新疗法不再遥不可及！ 据全球肿瘤医生网医学部了解，国内的TILs疗法是在美国的肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）疗法基础上经过改良，提升其克服肿瘤微环境和增加自我扩增的能力，在前期的概念验证临床研究中已取得了非常积极的疗效和安全性验证， 目前已获得批准正式开展人体临床试验 ，包括以下实体肿瘤类型 ：肺癌,,宫颈癌，头颈部肿瘤、黑色素瘤、胆道肿瘤等实体肿瘤 。想寻求TILs及其他国内外新抗癌治疗帮助，且经济条件允许的情况下，患者可以先将病历提交至全球肿瘤医生网医学部进行初步评估。 随着更多治疗方案的发展，晚期肿瘤患者将迎来更多治疗选择和希望，我们期待人类攻克癌症的那一天早日到来。 参考资料： https://share.upmc.com/2021/08/debras-cancer-story/

中文摘要轮状病毒是全球范围内引起婴幼儿腹泻的主要病原体，接种轮状病毒疫苗为目前最经济、有效的预防手段，很大程度上缓解了轮状病毒导致的疾病负担，但目前上市疫苗都为减毒活疫苗，存在毒力回复以及肠道不良反应等风险。因此，优化的传统活疫苗、灭活疫苗以及病毒样颗粒等亚单位疫苗成为潜在的候选疫苗，以提高轮状病毒疫苗的安全性和有效性。此文总结了市面上主要轮状病毒疫苗的应用现状以及进入临床试验新疫苗的研究情况，为后续的疫苗开发奠定基础。正文轮状病毒（rotavirus，RV）是导致婴幼儿腹泻的主要病原体，感染途径为粪-口传播，临床表现为急性胃肠炎，呈渗透性腹泻病，是引起全球5岁以下儿童严重腹泻病的最常见病原，每年导致约20万名儿童死亡[1]。RV主要侵犯的部位是小肠上皮细胞，导致细胞损伤，从而引起腹泻。在未引入RV疫苗的国家中，每年在急性胃肠炎住院患者中检测到RV的比例为38.0%，而在已开展疫苗接种的国家，在急性胃肠炎住院患者中检测到RV的比例为23.0% [2]。RV的基因组主要编码6个结构蛋白(VP1—VP4、VP6和VP7）和6个非结构蛋白（NSP1—NSP6）。VP2为内层核心蛋白，VP6为中间层蛋白，VP7和VP4为最外层衣壳蛋白，诱导机体产生主要的中和抗体。依据RV VP6可将其分为A—H 8个不同的组。其中，感染人类的主要是A组，在世界范围内最占优势的是A组G型RV。根据VP7和VP4抗原性不同，在人类和动物中共发现了36个G血清型和51个P血清型[3]。常见的G血清型有G1、G2、G3、G4，血清型G9也日渐增多；常见P血清型有P[4]和P[8]。其中G9P[8]、G1P[8]和G3P[8]在我国最为常见，分别占39.5%、16.8%和9.9%，近年来G9P[8]逐渐成为了我国最主要的流行株[4]。1RV疫苗的应用现状目前WHO对4种RV疫苗进行了预认证：Rotarix疫苗（英国葛兰素史克公司生产，2009年预认证）、RotaTeq疫苗（美国默沙东公司生产，2008年预认证）、Rotavac疫苗（印度巴拉特生物技术公司生产，2018年预认证）和Rotasiil疫苗（印度血清研究所生产，2018年预认证）[5]。单价人RV疫苗Rotarix和五价牛-人重组RV疫苗RotaTeq供全球范围内使用，而Rotavac和Rotasiil疫苗使用范围仅在印度和巴勒斯坦。在我国获批上市使用的是兰州生物制品研究所有限责任公司生产的口服RV活疫苗LLR。这些RV疫苗的推广，大大降低了RV感染的重症和死亡率。1.1Rotarix疫苗Rotarix疫苗为英国葛兰素史克公司研发的口服人RV减毒活疫苗，含有G1P[8]型毒株，来源于89-12亲本候选株，对G3、G4、G9型毒株均有交叉保护作用。Rotarix疫苗于2005年在墨西哥获得批准上市，并在2009年通过了WHO的预认证。2008年4月被许可用于美国的婴儿，在2月龄和4月龄以2个剂量口服给药，第1剂应在6~14周，两次间隔4周，所有剂量应在8月龄前完成给药[6]。Rotarix疫苗对预防RV感染具有一定的效果，但这种有效性是不均衡的，疫苗在发达国家的保护率明显高于发展中国家。Karafillakis等[7]通过分析RV有关的报道数据，得出Rotarix疫苗在欧洲的保护率为80.0%～98.3%，而在非洲的保护率为 56%～64%，这可能与发展中国家较差的生活环境有关[8-12]。此外，就成本而言，跨国疫苗制造商进行大规模试验需要巨大的资金成本支持，导致所出售的疫苗价格也不会太低，这对RV感染更加严重的发展中国家而言显然是无法负担的。因此，定价机制和分级价格水平也是至关重要的一个环节。2010年3月22日，美国FDA因发现Rotarix疫苗中存在猪圆环病毒1型DNA的污染而宣布暂停该疫苗的使用，随后在 RotaTeq疫苗中也发现了此病毒[13]。对此，葛兰素史克公司决定重建Rotarix疫苗生产所用的细胞库和毒种库，以确保后期生产的疫苗不含猪圆环病毒[14]。1.2RotaTeq疫苗RotaTeq疫苗为默沙东公司研发的五价牛-人RV重组疫苗，2009年被WHO向全世界儿童推荐使用，包含G1、G2、G3、G4、P1A［8］型5种人-牛RV重配株，可有效预防G1—G4以及G9型RV引起的RV胃肠炎（RV gastroenteritis，RVGE）。RotaTeq疫苗适用人群为1.5~8月龄的婴幼儿，接种方式为口服，分3次接种，每两剂之间的服用间隔为4~10周[15]。与Rotarix疫苗类似，RotaTeq疫苗在发达国家的有效性明显高于非洲等落后地区，据统计在欧洲和北美地区，接种RotaTeq疫苗后的第1年和第2年的保护率分别为73%和62%[16-17]；在非洲（加纳、肯尼亚、马里）及亚洲（孟加拉国、越南），接种该疫苗后对RVGE保护效力分别为33.9%、42.5%[18]。RotaTeq与Rotarix疫苗均为减毒活疫苗，其作用机制为刺激肠道产生免疫应答，这可能会给胃肠道带来不良反应。除肠套叠外，RotaTeq疫苗还伴有一些罕见的不良反应，包括腹泻、呕吐、烦躁不安、中耳炎、鼻咽炎和支气管痉挛等[19]。1.3Rotavac疫苗Rotavac疫苗是印度巴拉特生物技术公司生产的液体冷冻单价RV活疫苗，于2014年获得许可在印度上市，并在2018年通过了WHO预认证。Rotavac疫苗由天然减毒的人RV G9P[11]毒株分离而得，以冷冻形式储存，在-20 ℃最长可保存5年，在2~8 ℃之间最长保存6个月，可以反复冻融6次[20]。Bhandari等[21]通过随机、双盲、安慰剂对照试验得出，Rotavac疫苗对严重RVGE的疫苗效力为53.6%，对Ⅲ期临床试验极严重RVGE的疫苗效力为54.4%，对所有RVGE的疫苗效力为34.6%，且疫苗组和安慰剂组每年严重RVGE的发病率分别为1.5%和3.2%。此试验证明Rotavac疫苗对不同严重程度的RVGE均有保护作用。然而相关研究显示这种保护作用是不均衡的：与在中等、高等收入国家的临床试验有效性相比，在非洲、拉丁美洲和亚洲中低收入国家的有效性显著降低[22-23]。另外经济成本也是一个值得考虑的因素，尤其是对于低收入国家。虽然Rotavac冷冻疫苗可以提供较低的成本和较长的保质期，但冷链运输依然是个不容小觑的经济问题，可能会产生额外的成本。1.4Rotasiil疫苗 Rotasiil疫苗是由印度血清研究所生产的冻干五价RV疫苗，是在Vero细胞中由天然减毒的人-牛RV毒株G1、G2、G3、G4和G9分离而得。该疫苗在2017年获得许可在印度上市，并于2018年通过WHO预认证。冻干形式的Rotasiil疫苗在2~8 ℃冷藏条件下可储存30个月[20]。Kulkarni等[24]进行了1项随机、双盲、安慰剂对照Ⅲ期临床试验，其中3 749名婴儿接受疫苗为疫苗组，3 751名婴儿接受安慰剂为对照组，经过2年随访后，结果得出疫苗组的严重RVGE的发病率与安慰剂组相比显著降低。此外，Zade等[25]对60名健康婴儿进行II期临床研究，疫苗组与安慰剂组以1:1的比例分3次给药，每次给药间隔至少4周。研究发现疫苗组和安慰剂组第2次给药后血清转化率分别为36.00%和7.14%，第3次给药后血清转化率分别为48.00%和21.43%。Anil等[26]纳入20名健康成人作为受试者接受疫苗接种，随访后发现，研究期间没有出现任何非预期的不良事件。由于Rotasiil疫苗的使用范围有限，仅在印度和巴勒斯坦使用，因此对疫苗潜在的安全性问题还需进一步评估，且冷链储存和运输方面存在的问题及较高的经济成本还需进一步改善。1.5国产口服RV活疫苗在我国主要使用兰州生物所研制的国产口服RV活疫苗LLR。LLR是由1985年首次从羔羊体内分离的RV株G10P[15]制备的单价口服减毒活疫苗，于2000年获得许可上市，目前只在中国使用，适用于2个月~3岁的婴幼儿。在LLR上市后进行的几项基于人群的病例对照试验表明，LLR疫苗对RVGE的保护率为35.0%~73.3%，并且对于G3血清型引起的中度RVGE具有更高的保护作用[27-28]。张潮等[29]以随机招募100名接种LLR疫苗者为疫苗组，100名未接种疫苗者为对照组，通过比较2组间RV的感染情况、外周血中抗RV IgA抗体和IgG抗体的差异，发现疫苗组粪便RV抗原检出率明显降低，表明LLR疫苗可显著减少RVGE发生率；且疫苗组的外周血IgA与IgG水平显著高于对照组，推测外周血的抗RV IgA和抗RV IgG抗体水平对LLR疫苗接种效果有一定预测价值。此外，疫苗接种效果还与首剂接种时间、接种次数等因素有关，接种时间早，且选择母乳喂养者，并完成全部疫苗接种程序，粪便中RV抗原的检出率更低，表明疫苗接种效果更好[27]。然而该疫苗尚未纳入我国国家免疫计划，免疫覆盖率相对较低[30]。2RV疫苗的研究进展目前，获批上市的RV疫苗基本都为减毒活疫苗，作用机制是将病毒减毒后在肠道中复制，诱导肠道产生免疫应答，但有可能带来肠套叠等胃肠道不良反应。因此，继续优化RV减毒活疫苗，或者开发替代RV减毒活疫苗的其他疫苗，包括灭活疫苗、重组亚单位疫苗等，对进一步降低RV导致的发病率和死亡率具有重要意义。2.1三价RV基因重组疫苗三价RV基因重组疫苗（LLR3）是在原已上市销售的单价羔羊P[12]G10 RV疫苗的基础上，通过基因重配技术采用G2、G3和G4型人RV分别与LLR进行基因重配，获得3个分别含有G2、G3和G4型人RV的VP7基因的人-羊RV重配株，并用该3个毒株研制了三价RV重组疫苗[31]。疫苗接种方式为口服。该疫苗覆盖了几种常见的RV血清型（G2、G3、G4型），能够更好地刺激机体产生免疫应答，有效预防RV感染[31]。Xia等[32]在中国河南的健康婴儿中进行了1项随机、双盲、安慰剂对照III期临床试验，以评估LLR3对RVGE的预防效果。试验将9 998名6~13周龄健康儿童纳入临床研究，LLR3疫苗组和安慰剂组受试者各4 999名，按照0、1、2个月的免疫程序随机服用3剂次口服LLR3或安慰剂。在接种疫苗后的2个流行季节中，分析了LLR3对RVGE的疫苗效力。结果发现LLR3疫苗对于所有RVGE和严重RVGE的疫苗效力分别为56.6%和70.3%，其中第1个流行季节疫苗效力分别为75.2%和59.3%，第2个流行季节疫苗效力分别为68.8%和55.1%，表明第2个流行季节的疫苗效力呈现些许下降的趋势。此外，LLR3抗原是G2、G3、G4血清型，缺乏G9、G1和P[8]型，但在近万名受试者中，对G9、G1和P[8]型仍显示出良好的免疫原性、有效性和安全性。2.2口服六价重配RV活疫苗六价牛-人重组RV减毒活疫苗含有6种流行株血清G1、G2、G3、G4、G8及G9，涵盖了A群RV 99.6%的G血清型病毒，由武汉生物制品研究所有限责任公司研发，被证明在动物中安全且具有良好的免疫原性，并已被国家药品监督管理局批准进行临床试验。Wu等[33]在中国河北省正定县进行了1项随机、双盲、安慰剂对照的Ⅰ期临床试验，纳入了120名6~12周龄的健康婴儿，分为疫苗组和安慰剂对照组。受试婴儿接种了高、中、低剂量的疫苗或安慰剂，每隔4周口服接种1次，采用ELISA测定抗RV IgA抗体的几何平均浓度（geometric mean concentration，GMC）和血清转化率以评估免疫应答。研究发现疫苗组中抗每种RV血清型IgA抗体的血清转化率显著高于安慰剂组，高剂量组抗RV IgA血清转化率约为90.00%，中剂量组所有RV血清型的血清转化率为45.45%，低剂量组的血清转化率为42.11%~63.16%；高剂量组的GMC，除G3血清型外，均高于153.46 U/ml；中剂量组的GMC，最低为G3血清型的31.23 U/ml，最高为G4血清型的49.46 U/ml；低剂量组的GMC，最低为G3血清型的25.90 U/ml，最高为G9血清型的41.88 U/ml；安慰剂组的GMC约为10.00 U/ml[33]。综上表明，高剂量组的IgA抗体血清转化率高于低剂量组和中剂量组，疫苗接种者在第3次给药后GMC也普遍高于安慰剂接种者，六价重配RV活疫苗初步显示了良好的免疫原性。目前，新型六价RV疫苗的Ⅲ期临床试验正在进行中，以进一步评估其安全性、免疫原性和免疫保护效力。2.3RV亚单位疫苗2.3.1  RV病毒样颗粒（virus-like particle，VLP）疫苗   VLP是具有自我组装能力的多亚单位蛋白质结构，与天然病毒相比，不含遗传物质，不具传染性，但模拟了天然病毒的整体结构，通常比单体蛋白质结构更具免疫原性[34]。VLP的颗粒大小范围为20~100 nm，这恰好是树突状细胞吸收纳米颗粒和激活T细胞产生免疫应答的最佳范围[35]。RV-VLP的生产首次报告于20世纪80年代[36]。20世纪90年代，Crawford等[35]通过昆虫杆状病毒表达系统以不同组合分别表达了RV-VP2/VP6/VP7的3层VLP和RV-VP6/7的双层VLP，并在小鼠中评估了其免疫原性：在同样使用佐剂QS-21的情况下，3层VP2/6/7-VLP产生的抗体GMC比双层VP6/7-VLP的更高。此外，Li等[38]通过大肠埃希菌表达RV衣壳蛋白VP2和VP6，纯化后组装成单层VP6-VLP或双层VP2/6-VLP，并在小鼠中进行了免疫原性的比较，发现双层VP2/6-VLP对RV诱导小鼠腹泻的保护率显著高于单层VP6-VLP。综上2个研究显示，3层RV-VLP对小鼠产生的保护率高于双层RV-VLP，双层RV-VLP对小鼠产生的保护率显著高于单层RV-VLP。并且证实了VP6在形成RV-VLP的过程中发挥着关键作用。之前关于RV-VLP的免疫原性评估尚停留在实验室阶段，而近期Kurokawa等[39]在澳大利亚婴儿中进行了1项植物源性VP2/6/7-VLP的Ⅰ期临床试验，试验分为疫苗组（按剂量递增的方式接种疫苗）和安慰剂组。结果显示，第2次和第3次注射后4周，RV-VLP疫苗诱导婴儿产生了抗G1P[8] IgG应答，第3次给药4周后，所有RV VLP婴儿组对同源G1P[8]RV的中和抗体应答均高于安慰剂组。且注射RV VLP疫苗后，没有出现安全性或耐受性问题。另外婴儿受试者的免疫反应并没有根据剂量的差异而出现明显的变化，所以有必要进一步研究剂量-反应关系，以探索植物源性RV VLP疫苗的最佳剂量。2.3.2  P2-VP8-P[8]重组亚单位疫苗   P2-VP8-P[8]重组亚单位疫苗由截短的RV-VP8（由RV衣壳蛋白VP4经胰蛋白酶裂解而来）与破伤风毒素的P2表位融合，在大肠埃希菌中表达所得[40-41]。此疫苗诱导的对P[8]毒株的中和抗体应答最为强烈，对P[4]毒株中等，对P[6]毒株却相当有限，基于此1种三价疫苗得以开发，包括来自P[4]、P[6]和P[8]毒株的抗原，该疫苗诱导的对这3种P型毒株的应答更为平衡。Groome等[40]在南非开展了1项双盲、随机、安慰剂对照、剂量递增的Ⅰ/Ⅱ期临床研究，发现实验组（15、30和90 µg）在第3次注射后4周对P[4]、P[6]和P[8]抗原产生的IgG和IgA抗体滴度是注射前的5倍，产生的中和抗体滴度是注射前的3.7倍，且各剂量组诱导的对P[4]、P[6]和P[8]的IgG和IgA抗体滴度和中和抗体应答均显著高于安慰剂组。此外，30 μg组有58%~83%的婴儿出现抗P2-VP8 IgG抗体应答，而 90 μg组有高达83%~92%的婴儿出现IgG抗体应答；30 μg组只有50%~83%的婴儿出现IgA抗体应答，而90 μg组有高达67%~92%的婴儿出现抗P2-VP8 IgA抗体应答[40]。表明随着剂量的增加，出现抗体应答的效果越好。目前P2-VP8-P[8]疫苗已在Ⅲ期临床试验中对安全性、免疫原性和有效性进行了评估，但具体结果还未公布。2.4RV灭活疫苗（inactivted RV vaccine，IRV）美国CDC研发的一种可进行肠外给药的IRV CDC-9是一种单基因重配疫苗，VP3基因来自G2P4毒株，其他基因来自G1P[8]毒株[42]，在Vero细胞中培养，经热处理灭活。在临床前研究中，Resch等[43]通过肌内注射（intramuscular，IM）或使用微针贴片（microneedle，MN）进行疫苗接种，后对CDC-9 IRV的免疫应答进行评估。研究发现以MN贴片方式接种疫苗后，诱导了相当水平的体液免疫，但与MN接种方式相比，IM接种方式可诱导更高水平的体液免疫[41]。需要关注的是，IM接种时是配制Al(OH)3佐剂使用的[42]。考虑到口服病毒活疫苗所带来的不良反应以及肠道微环境对疫苗有效性的干扰，通过IM给药或MN贴片注射IRV有望成为口服RV疫苗的一种替代和改进的方法。Shahrudin等[45]在小鼠体内测试了用50 kGy辐照的γ射线灭活RV的免疫原性，发现与活RV诱导的体液免疫应答相当，特别是可诱导高水平的IgG2c。中国医学科学院医学生物所研制的IRV使用Vero细胞培养的G1P[8]人RV经热处理灭活，并与Al(OH)3佐剂配伍制成。以小鼠为动物模型，发现灭活疫苗可以诱发血清IgG和IgA、肠道IgG和IgA及中和抗体等全身和局部体液免疫应答，且中和抗体在体外可以中和同型感染性Wa株(G1型)RV和异型感染性SA11 株（G3型）RV，显示出一定的交叉保护作用[46]。已有1项针对此IRV（Vero细胞）在健康人群中接种的安全性及初步观察免疫原性的随机、双盲、安慰剂对照Ⅰ期临床试验，受试者为18~49岁的成人、6~17岁的青少年、2~6月龄和7~71月龄的婴幼儿；试验分为疫苗组和对照组，其中疫苗组分为3组，每组每人每次剂量为0.5 ml，分别含RV灭活抗原80、160、320 EU，接种3剂，每次注射间隔28 d[47]。该试验于2021年11月完成，对受试者的安全性和初步免疫原性进行了评估，目前结果尚未公布。3结论与展望减毒活疫苗的推广一定程度上缓解了由RV带来的疾病负担，但仍有一些问题亟待解决，如安全问题（肠道不良反应等）、国家间的疗效差异问题（发达国家的疗效高于发展中国家的疗效等）以及高成本问题（冷链运输问题等）。为此，在继续改进减毒活疫苗的同时还需要考虑其他疫苗研发平台来进行RV疫苗的研发。在改进减毒活疫苗方面，三价RV基因重组疫苗（LLR3）和六价牛-人重组RV减毒活疫苗实现了覆盖多种血清型，从而对RV引起的胃肠炎发挥了更好的保护作用，当前已经进入了临床试验阶段；除活疫苗外，还考虑了如灭活疫苗和亚单位疫苗等疫苗研发平台：灭活疫苗使用物理或化学方法将具有感染性的病毒杀死但同时保持其抗原颗粒的完整性，使其失去致病力而保留抗原性，保证了疫苗使用的安全性，但在有效性方面还需进一步提升；亚单位疫苗筛选具有免疫活性的病毒蛋白质结构，不含核酸，结构模拟原病毒，常配制佐剂使用，在使用安全的基础上更好地刺激了机体产生免疫应答，但如何提高蛋白的表达量、优化纯化条件是亚单位疫苗研发的重点。当前无论是RV灭活疫苗还是重组亚单位疫苗都尚处于前期研发或者临床研究阶段，对实验动物显示了一定的保护效果，但其人体的免疫保护效果还需进一步研究，应用前景值得期待。作者孙建鑫1 综述    周旭2 审校1上海生物制品研究所有限责任公司第二研究室，上海 200051；2上海生物制品研究所有限责任公司，上海 200051通信作者：周旭，Email：kathzhou@sina.com引用本文：孙建鑫, 周旭. 轮状病毒疫苗的研究现状及进展 [J]. 国际生物制品学杂志, 2022, 45(5)：290-296.  DOI: 10.3760/cma.j.cn311962-20220107-00002