TAVO-412

AbAnalyzer Pro — 抗体序列分析平台已经重磅上线了《AbAnalyzer Pro  ：让抗体设计更高效！》，九大核心功能，解决抗体一线研发中的痛点，助力抗体药物开发。 三阴性乳腺癌（TNBC）是乳腺癌中治疗选项最有限的亚型，缺乏ER、PR和HER2靶点，占所有乳腺癌的10–15%，进展快、早期复发率高。TNBC的耐药机制根植于其分子异质性：单靶点抑制往往在靶点丢失、突变或旁路通路激活后失效。在TNBC中，EGFR过表达驱动增殖与VEGF分泌，cMet激活协同促进侵袭和对EGFR靶向治疗的耐药，VEGF-A介导的高度血管化则进一步支撑肿瘤生存。同时覆盖这三条通路的单一抗体，理论上可避免各自单药的耐药漏洞——拓创生物设计的三抗TAVO412正是针对这一逻辑的尝试，其临床前相关数据最近在线发表。 TAVO412的结构设计与细胞结合 TAVO412是一款四价三特异性抗体，结构上将四个功能模块集成于单一分子：靶向cMet的抗原结合片段（Fab，紫色）、识别EGFR两个不同表位的串联纳米抗体（双表位，天蓝色+桃色）、靶向VEGF的单链可变区抗体（scFv，绿色），以及携带knob-in-hole和LPLIL（F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L）突变的IgG1 Fc（蓝色）。 流式结合实验（C-E）测得TAVO412在MDA-MB-231细胞（MSL亚型，高cMet）、HCC70细胞（BL亚型，高EGFR）和BT-20细胞（低受体密度）上的细胞亲和力（avidity）EC₅₀分别为0.367 nM、0.832 nM和0.114 nM，全面优于双特异性对照JNJ-61186372类似物（分别为1.37 nM、2.54 nM、0.636 nM），后者仅含单个EGFR结合臂和单个cMet结合臂。这种3–5倍的亲和力优势来自双表位EGFR设计带来的多价接触，而非简单叠加各靶点的单体亲和力——TAVO412对cMet的单体亲和力（Kd = 13.36 nM）实际上弱于JNJ-61186372类似物（Kd = 1.29 nM），仍能在细胞表面实现更强结合，说明双表位设计的"协同抓取"效应是关键。 TAVO412对EGFR、cMet和VEGFR信号通路的抑制 细胞水平的信号抑制能力是功能验证的核心环节。研究采用TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）测定受体磷酸化抑制，以VEGFR报告基因系统测定VEGF诱导的下游信号。在高EGFR密度的MDA-MB-468细胞中，TAVO412对EGF诱导的EGFR Y1063磷酸化的抑制IC₅₀ = 8.5 nM，明显优于JNJ-61186372类似物（IC₅₀ = 25.2 nM）（Figure 2A）。在高cMet密度的MDA-MB-231细胞中，TAVO412抑制cMet Y1234/Y1235磷酸化IC₅₀ = 0.453 nM，与JNJ-61186372类似物（IC₅₀ = 0.134 nM）相当（Figure 2B）。对于VEGF-VEGFR信号，TAVO412 IC₅₀ = 4.75 nM，而贝伐珠单抗类似物为0.35 nM（Figure 2C）——后者的优势来自其二价VEGF结合臂，而TAVO412的抗VEGF臂为单价。三条通路均被有效覆盖，且VEGF抑制的效力差异有结构上的合理解释，不是设计缺陷 TAVO412介导的Fc效应功能：ADCC、ADCP和CDC TAVO412的Fc段通过LPLIL氨基酸突变强化了对FcγRIIIa（CD16A）、FcγRIIa（CD32A）和C1q的结合能力。结合实验确认，TAVO412对FcγRIIa（EC₅₀ = 2.90 nM）的结合显著强于JNJ-61186372类似物（EC₅₀ = 10.3 nM），预示更强的ADCP驱动能力。 TAVO412在TNBC异种移植模型中的体内抗肿瘤活性 体外活性验证之后，核心问题是这些多机制效应能否在体内整合为实质性的肿瘤抑制。研究选取了三株分别代表MSL亚型（MDA-MB-231，高VEGF/cMet）和BL亚型（HCC70、BT-20，高EGFR）的CDX裸鼠模型，覆盖受体表达的高中低三个层次。 在MDA-MB-231模型中，10 mg/kg TAVO412的14天肿瘤生长抑制率（TGI）达62%，优于同剂量JNJ-61186372类似物（40% TGI），且与4 mg/kg阿霉素的疗效相当，但无体重减轻毒性。 在HCC70模型中，TAVO412单药TGI 26%，与JNJ-61186372类似物（21%）相当，联合阿霉素后提升至61%（Figure 4C-D）。 BT-20模型（低EGFR/cMet密度）提供了最鲜明的对比：10 mg/kg TAVO412单药TGI达74%，而JNJ-61186372类似物仅13%、贝伐珠单抗类似物39%，甚至两者组合也仅47% TGI（Figure 4E-F，4I）。这一结果的关键在于：即便EGFR/cMet受体密度较低弱化了Fc效应功能，VEGF臂对血管化的抑制仍维持了整体疗效，三特异性设计实现了对低靶点密度细胞系的"超越性"覆盖。 各功能臂的必要性由臂失活变体实验定量验证（Figure 4I-L）：移除VEGF臂使TGI从74%降至17%（损失最大）；移除EGFR臂降至65%；移除cMet臂降至66%；引入Fc沉默LALA突变降至47%。四个功能模块各自不可或缺，且VEGF臂在BT-20模型中贡献最为突出。 Western blot分析（Figure 4G-H）进一步确认，TAVO412处理的MDA-MB-231肿瘤中EGFR和cMet蛋白水平在两次给药后显著下降，与多价接触介导的受体内化降解机制一致。 总结 1） 双表位EGFR设计是细胞结合优势的核心来源：尽管TAVO412对cMet的单体亲和力弱于JNJ-61186372类似物，但双表位EGFR纳米抗体在细胞表面产生多价接触，使整体avidity EC₅₀提升3–5倍，并在低受体密度细胞系（BT-20）中体现为更强的体外磷酸化抑制和体内TGI。 2） LPLIL突变的Fc工程化带来了可量化的CDC收益：相同C1q亲和力下，TAVO412的C1q结合效能更高，是JNJ-61186372类似物完全无CDC响应与TAVO412有效裂解MDA-MB-231细胞之间差异的直接原因。 30 VEGF臂是BT-20模型中疗效超越对照组的关键：移除VEGF臂使TGI从74%跌至17%，说明在EGFR/cMet低表达背景下，抗血管化机制承担了主要抗肿瘤作用，而这一作用对JNJ-61186372类似物（无VEGF臂）完全缺失。 40 三靶点覆盖在体内表现出"大于组合"的效果：TAVO412单药TGI 74%超越了贝伐珠单抗类似物+JNJ-61186372类似物联合的47%，提示单分子三功能设计在体内的协同效应不简单等于各靶向机制的线性叠加，可能与更高效的受体共聚集、更同步的信号截断有关。 我们已经建立抗体密码读者交流群，有兴趣的可以扫描下方二维码添加微信进群，请主动备注姓名-公司-职位（高校-专业），非诚勿扰！ 往期精彩回顾 抗体密码文章合集 双特异抗体平台 靶点相关 双特异抗体作用机制 综述，行业概览 抗体筛选技术 相关公司技术汇总 医药资讯 因为你的分享、点赞、在看 我足足的精气神儿！ 声明 本公众号所发表文章以宣传知识为目的，因此不构成投资，病人用药等建议。如果文章侵您的权益及时联系小编进行删除！ 欢迎扫码交流/咨询/合作= 参考文献 1、https://doi.org/10.1016/j.jbc.2026.113100 2、https://doi.org/10.3389/fonc.2025.1533059