CX-072

01 引言 单克隆抗体已在肿瘤学、免疫学等领域彻底改变了治疗格局，但其疗效常常受限于在健康组织中的靶上毒性。条件性激活抗体平台旨在通过使抗体(及相关生物制剂)在遇到特定触发因素(如肿瘤相关蛋白酶、酸性pH、氧化还原环境、光或小分子)之前处于惰性状态来克服这一局限性。遇到触发因素后，抗体的治疗功能在期望位置被“开启”，从而提高肿瘤选择性并扩大治疗窗口。过去十年间，此类可激活模式的多样化工具集已经出现——从在肿瘤微环境中揭示其抗原结合位点的掩蔽抗体，到可由外部刺激控制的光开关和化学遗传学结合剂，再到需要双输入激活的逻辑门控双特异性抗体。这些技术有望实现更精确的癌症疗法和免疫调节策略，以及新型诊疗一体化应用。 在本综述中，我们总结了条件性激活抗体平台的关键机制和设计原则。表1总结了本综述讨论的主要条件性激活抗体平台的关键特征、优势和局限性，图1按触发因素概述了条件性激活抗体模式。"基于抗体的策略"部分讨论了基于抗体的策略，包括蛋白酶敏感的"Pro-antibody"、光或化学可切换格式以及多价逻辑门控构建体。"纳米抗体和支架"部分涵盖了通过光学或化学遗传学融合模块实现条件激活的纳米抗体和替代支架系统。"药物递送平台"部分探讨了可激活药物递送载体——具有刺激响应连接子的抗体-药物偶联物、智能脂质体、水凝胶和点击激活纳米载体——它们按需释放有效载荷。"条件性免疫疗法"部分强调了使用可切换的免疫检查点抑制剂、具有可控"开/关"开关的嵌合抗原受体T细胞及其自然杀伤细胞衍生物的条件性免疫治疗方法。"成像与诊疗一体化"部分探讨了成像和诊疗一体化整合，包括实时激活监测以及按需将成像剂转化为治疗剂的系统。"条件激活抗体治疗剂的当前临床状态"部分讨论了在疾病模型(如癌症)中的临床应用。 区分条件激活抗体平台的多种机制对于讨论该领域的基本原理和潜在应用至关重要，本综述重点介绍了分子设计原理、代表性实例、激活机制、优势/局限性以及临床转化的前景。 表1. 条件活化抗体平台的比较概述 02 基于抗体的策略 2.1 蛋白酶敏感的掩蔽抗体 在使用蛋白酶作为触发因素的策略中，研究最广泛的方法之一是将掩蔽肽或聚合物通过可被肿瘤特异性蛋白酶切割的连接子连接到抗体的抗原结合位点，从而仅在TME中诱导抗体活性。此类策略可大致分为两类：(1) 基于亲和力肽的抗体锁，其利用对抗体互补位具有结合亲和力的抗原衍生或合成肽；(2) 基于空间位阻的抗体锁，其依赖于肽、蛋白质结构域或聚合物等空间位阻来物理性封闭抗原结合位点。 基于亲和力肽的抗体锁利用了掩蔽物与抗体互补位之间的特异性相互作用。2009年，Williams及其同事首次通过用部分靶抗原(使用表皮生长因子受体的结构域III作为掩蔽肽)掩蔽抗体的抗原结合位点互补决定区，并通过可被基质金属蛋白酶-9(MMP-9)切割的连接子连接，设计了一种在TME中选择性激活的抗体。基于此概念，CytomX Therapeutics开发了Probody平台，其中从噬菌体展示库中鉴定的掩蔽肽通过蛋白酶可切割连接子连接到抗体上。Lowman及其同事开发了基于西妥昔单抗cetuximab的靶向EGFR的Probody，并首次证明其保持了亲本抗体的疗效，同时显著降低了脱靶毒性，从而提高了治疗指数。低亲和力掩蔽肽通过基因融合到轻链的N端，并且连接子经过优化，不仅可被MMPs切割，也可被尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)、蛋白裂解酶(matriptase)和其他肿瘤相关蛋白酶切割，从而能够在广泛的TME中激活。 相比之下，基于空间位阻的抗体锁依赖于抗原结合位点的空间阻断，而不要求掩蔽物与互补位之间存在亲和力。Oller-Salvia及其同事选择性地将一个小聚合物掩蔽物(通过可切割的连接子连接)缀合到抗癌单链抗体可变片段上靠近CDR的特定位点，他们通过结构建模在最佳位置引入了人工半胱氨酸残基，并连接了大小约为5-10kDa的掩蔽物(聚乙二醇或肽)，将抗原亲和力降低了多达20倍。当暴露于触发因素(根据连接子设计，为MMP-2/9或紫外光)时，掩蔽物被切割，完全恢复了结合亲和力。Tao等也开发了抗细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)抗体的掩蔽版本伊匹木单抗，在CDR内的Tyr49位置引入了半胱氨酸，并通过钯介导的S-芳基化化学反应缀合了基于PEG的肽掩蔽物。在"关闭"状态下，约5kDa的PEG掩蔽物阻断了CTLA-4的结合，从而抑制了抗体的活性。在肿瘤内部，掩蔽物被基质蛋白酶移除，这是一种在某些癌症中上调的蛋白酶，暴露出核心酪氨酸类似物羟苯基半胱氨酸，恢复了完全的结合和免疫检查点阻断活性(图2)。这种掩蔽以CDR为中心的残基的方法比简单的N端掩蔽允许更精确的控制，并且可以推广到其他抗体和蛋白酶。 最近，有研究利用异源二聚卷曲螺旋掩蔽结构域。Levengood及其同事将卷曲螺旋掩蔽结构域通过基因融合到利妥昔单抗(抗CD20)的抗体N端，曲妥珠单抗trastuzumab(抗人表皮生长因子受体2[抗HER2]), h15H3(抗v6)和145-2C11(抗CD3)，通过MMP-2/9切割序列将它们连接起来。这些融合的线圈状掩蔽显著降低了多种抗体的抗原结合，其结合活性在蛋白酶裂解后恢复。传统的“Probody”策略需要抗体特异性的设计和优化过程，因此在可扩展性上受到限制，而该平台通过在不同的抗体上应用相同的异二聚体线圈结构域，展示了多功能性的优势。 基于铰链的立体掩蔽也被用于提高治疗性抗体的安全性和有效性。Cheng等通过基因融合一个自身的基于链接的空间障碍结构域到英菲昔单抗infiximab的N端(抗肿瘤坏死因子α[抗TNF-α]抗体)，并将其与MMP-2/9切割序列连接，开发出了pro-infiximab。这种掩蔽策略使抗原结合减少了约395倍，抗独特型抗体结合减少了108倍，从而防止了全身免疫抑制，而蛋白酶裂解完全恢复了TNF-α中和活性。pro-infiximab维持了正常的药代动力学和生物分布，并在类风湿关节炎小鼠模型中选择性激活，达到了与英菲昔单抗infiximab相当的治疗效果。重要的是，通过避免全身TNF-α抑制，pro-infiximab保留了对李斯特菌感染的免疫力，并将生存率提高到71%。由于使用自体铰链进行空间阻碍，该平台在通用性和降低免疫致原性方面具有明显的优势。类似的基于铰链的掩膜已应用于其他治疗环境中处理抗原吸收效应和肿瘤毒性。Lin及其同事设计了一种前酶激活的抗Lewis Y抗体(L-HKM4)，其中通过MMP底物连接的铰链型掩膜选择性地在胃和结直肠肿瘤环境中被揭开，从而降低了胃肠道毒性。Cheng等对canakinumab采用了类似的方法，通过将免疫球蛋白G1 (IgG1)铰链衍生的掩膜连接到MMP-9底物，产生pro-canakinumab，从而在恶名组织中选择性激活自身炎症性疾病。同样，Ho等开发了pro-urelumab，这是一种4-1BB超级激动剂抗体urelumab的工程版本，通过基因融合一个自体基于链接的空间障碍域到抗体N-末端，并通过MMP-2/9切割序列将其连接起来。这种掩蔽策略将抗原结合亲和力降低了约389倍，从而阻止了系统性T细胞活化，而蛋白酶介导的裂解完全恢复了其激动剂活性。在人源化小鼠模型中，pro-urelumab成功避免了抗原沉淀效应和肝毒性，但引发了强大的肿瘤内T细胞活化，实现了77%的肿瘤生长抑制。虽然基于聚乙二醇的空间掩膜相对简单且广泛适用，但潜在的缺点包括免疫原性和体内不完全去除。 图1. 按触发因素分类的条件性激活抗体模式概览。 Ab 抗体，ATP 三磷酸腺苷，CAB 条件性激活抗体，IgG 免疫球蛋白G，LOV 光-氧-电压结构域，MMAE 一甲基奥瑞他汀E，MMP 基质金属蛋白酶，Nb 纳米抗体，NPE 1-(2-硝基苯基)乙醇，OptoNB 光遗传学纳米抗体，PDC Probody药物偶联物 蛋白酶激活的抗体已在临床前模型中显示出前景，甚至已进入临床试验。掩蔽的抗程序性死亡配体1(anti-PD-L1) (CX-072)和掩蔽的抗CTLA-4抗体就是试图减轻检查点阻断的免疫相关副作用的例子。虽然Probody概念已证明具有肿瘤局部活性，但必须考虑肿瘤异质性：并非所有肿瘤都表达足够水平的激活蛋白酶。实际上，给定掩蔽抗体的疗效和安全性可能强烈依赖于蛋白酶表达模式，而这些模式在患者或肿瘤部位之间可能存在差异。可能存在蛋白酶表达低导致不完全激活(从而降低疗效)的情况，或者相反，正常组织中存在意外的蛋白酶活性导致脱靶激活。研究人员正在通过选择高度肿瘤特异性的蛋白酶靶点、设计多个掩蔽位点或双锁机制以及开发伴随诊断来测量患者蛋白酶活性来解决这些问题。尽管存在这些挑战，蛋白酶敏感的掩蔽抗体仍然是条件性激活的主要方法，有可能将强效治疗局部递送至肿瘤同时保护正常组织——这是临床转化的关键优势。 图2. 掩蔽的ipilimumab前药通过安装在互补决定区(CDR) Tyr49上的~ 5-kDa聚乙二醇(PEG)-肽掩蔽物阻断处于“关闭”状态的细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4 (CTLA-4)结合；肿瘤微环境中基质酶介导的蛋白酶去除暴露了羟基苯基半胱氨酸(HPC)，并恢复了完全结合和免疫检查点阻断活性。这种位点特异性CDR掩蔽策略比N端掩蔽具有更高的精度，并且可以推广到其他抗体和肿瘤相关蛋白酶。 2.2 光笼蔽和化学可切换抗体 除了蛋白酶，抗体还可以被改造以响应物理或化学触发因素，如光或小分子。在光笼蔽抗体中，引入光敏基团或结构域，使得抗体功能可以用特定波长的光来切换。Thompson等在1995年首次进行了这项研究，开发了一种使用1-(2-硝基苯基)乙醇保护抗体表面随机亲核侧链的方法。随后，研究人员将光不稳定的邻硝基苄基基团引入抗原结合位点残基，创建了仅在通过紫外照射移除"笼子"后才能结合抗原的抗体或抗体片段。 另一种模式使用光开关蛋白结构域，光开关抗体不是永久性地切割笼蔽基团，而是在不同波长下可逆地在活性和非活性状态之间切换。例如，与光传感结构域(如Dronpa)融合的工程化抗体片段可以在蓝光下发生构象变化，从而阻断或暴露抗原结合位点。这种方法提供了可重复的光控开/关切换，但由于结构遮挡不完全("渗漏"结合)，实现完全的"关闭"状态(无残留结合)可能很困难。尽管如此，光学控制在时间和定位上提供了无与伦比的精确度——这种时空控制水平对于研究很有价值，并可在临床上加以利用(例如，仅在肿瘤床的手术过程中激活抗体)。 除了光，化学开关可以控制抗体活性。Tang及其同事开发了一个系统，其中重组抗体或细胞因子与一个结合B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)的肽融合。这种融合疗法与可溶性的Bcl-2蛋白结构域一起给药，该结构域通过空间位阻在体内形成非活性复合物。当临床医生给予小分子维奈托克时，它会竞争性地取代治疗分子的Bcl-2结合肽，导致复合物解离，从而使抗体/细胞因子从Bcl-2"陷阱"中释放出来从而被激活。本质上，维奈托克充当化学开关：在其不存在时，治疗分子大部分被隔离且无活性(关闭)；给予维奈托克后，治疗分子被释放以执行其功能(开启)。Tang表明，这种方法可以通过切换维奈托克的给药，可逆地控制HER2抗体、CTLA-4抗体和IL-15超级激动剂的活性。这种化学遗传学控制——使用药物来调节生物工程化的依赖性——对于临床使用非常有吸引力，因为触发因素(小分子)已经是批准的药物且具有良好的组织渗透性。一个潜在的缺点是需要用结合肽对每个治疗分子进行生物工程改造(这可能增加免疫原性或改变药代动力学)，并确保小分子触发因素没有脱靶效应。尽管如此，这一概念验证为生物制剂展示了一种通用的"按需关闭开关"。 总之，光笼蔽和化学可切换抗体为临床医生的工具箱增加了外部控制模式。光激活抗体提供了超快速和局灶性的激活，适用于局部肿瘤消融或治疗期间减少全身暴露等情况。化学可切换设计允许抗体前药的全身给药，可以通过给予的试剂系统地激活或失活，有效地为临床医生提供了调节治疗强度的变阻器。这些方法的主要优势是对时间的精确控制(特别是对于光)以及停止或逆转活性的潜力(特别是对于小分子开关，因为其效果可以重复或撤销)；其局限性包括需要特殊设备(如光源)、光的激活深度有限以及设计蛋白质-小分子界面的复杂性。随着光遗传学和化学遗传学研究的进展，我们预计会出现更强大和临床友好的开关，甚至可能是组合(例如，一种既需要小分子又需要光的抗体-双重保护-才能发挥作用)。这些策略拓宽了条件激活的概念，超越了肿瘤的生化环境，允许用户定义的激活线索补充肿瘤定义的线索。 2.3 pH/离子/三磷酸腺苷激活系统 TME的弱酸性pH(∼6.0-6.8)可作为抗体活性的开/关门，其核心是组氨酸开关：由于pKa接近6，组氨酸在酸性微环境中被质子化，重新配置电荷和氢键网络。根据组氨酸部署的位置，这种微观变化会产生不同的宏观结果——当放置在互补位-表位界面内或附近时，在酸性条件下稳定/加速结合(活性开启)，或者削弱外部掩蔽物使其在酸性条件下解离并恢复抗体的功能(掩蔽物关闭)。结果是可逆的、位置依赖性的激活——在肿瘤外中性pH下关闭，在酸性TME下开启——有助于减少脱靶毒性、改善渗透/分布和更好的耐受性。在此框架内，Liu等通过结构引导的工程方法开发了pH依赖性抗EGFR抗体，使用人非免疫抗体库，分离出了在酸性条件下具有选择性结合的候选抗体。由此，他们鉴定出了14C07，这是一种先导抗体，其结合依赖于EGFR结构域III中的组氨酸，赋予了pH依赖性。随后的亲和力成熟产生了G5V2，其对人和小鼠EGFR均具有交叉反应性。在结构建模的指导下，团队引入了特定突变以增强质子敏感的相互作用，最终生成了G532。这种工程化抗体在酸性pH下的结合力比中性pH下高约13倍，而对照变体则失去了这种选择性。一种互补的策略可以在不改变抗体序列的情况下实现可逆的开-关控制。Merkx及其同事通过在人IgG界面引入八个组氨酸，重新设计了蛋白质M。这种掩蔽物在中性pH下紧密结合以保持抗体在正常组织中处于关闭状态，但在酸性条件下解离，被动地暴露互补位并在TME内开启活性。与此同时，Lee等重新设计了抗体可变区，创建了一种酸性选择性结合剂，该结合剂在pH约6.0时与其抗原强烈结合，但在pH 7.4时显著减弱。这种格式在循环和正常组织中基本上保持无活性，但在酸性肿瘤微生态中恢复强效结合和功能，从而通过将疗效与肿瘤外暴露解耦来提高治疗指数。Sulea等通过计算优先的工作流程系统化了酸开启原理，双pH组氨酸扫描产生了诸如bH1-P5P8等变体，其在肿瘤相关的酸性pH下的结合选择性比生理pH下高约25倍。作为完整IgG，这些抗体仅在酸性条件下保留了稳健的抗肿瘤活性，定量证明了模块化、合理设计可以赋予肿瘤限制性的激活。作为背景，Igawa等先前已证实，内体酸驱动的解离和新生儿Fc受体介导的再循环可以延长中和作用，从而验证了pH作为抗体设计中可控轴的观点。虽然机制上与此处关注的TME激活有所不同，但这项工作为酸开启策略的发展提供了重要的历史和概念基础。 离子梯度，特别是钙离子梯度，也可以调控抗体活性。简而言之，游离钙离子在血浆中相对较高，但随着抗体进入内体等细胞内区室而降低。这种差异可以转化为结合自由能的浅阱，因此在中性、高钙条件下抗体捕获其靶标，而在内体、低钙/酸性条件下通过设计适当的亲和力窗口释放靶标。Igawa及其同事将钙离子结合基序引入抗体互补位，以证明这种"捕获与释放"行为，并描述了一种清扫机制，其中抗体在内体中脱落抗原并通过FcRn途径被回收。值得注意的是，与pH开关不同，离子开关直接利用静电相互作用和水合壳层的变化。因此，即使在同一内体环境中，pH和钙离子也可以被视为正交轴，它们的组合允许更精细地调节解离速率和亲和力曲线的斜率。这一原理最近已在脱唾液酸糖蛋白受体1系统中得到扩展，Devanaboyina等设计了一种对pH和钙离子具有双重依赖性的结合曲线，在中性/高钙条件下稳定结合，同时在酸性/低钙条件下加速解离。因此，体内抗原清除率增加，脱靶组织中的滞留受到抑制，实现了动态暴露管理。与单参数设计相比，这种双开关更具抗噪性：当一个轴表现不佳时，另一个可以补偿门控的开/关。从转化角度来看，双开关拓宽了优化剂量、方案、组织分布和再循环效率的设计空间。一个有吸引力的替代方案是通过将离子开关嵌入外部掩蔽物/适配器模块来避免直接修饰抗体本身——一种模块化掩蔽策略。Hober及其同事将EF-手型钙离子结合环嫁接到一个小的、抗体结合蛋白质G变体上。在没有钙离子时，该结构域是无序且不结合的(关闭)；存在钙离子时，它经历从无序到有序的转变并发生结合(开启)，实现了协同折叠和结合。用作掩蔽物时，该模块可以在基线组织条件下保持Fv被遮挡和无活性，仅在特定微环境中，钙离子诱导的开启解蔽恢复结合和功能。由于掩蔽是外部化的，该模块可以"插入"各种抗体格式，并可能减轻与直接CDR编辑相关的免疫原性和开发风险。 细胞外三磷酸腺苷梯度代表了另一种可利用的环境触发因素，用于条件性抗体激活。肿瘤组织通常表现出数十至数百微摩尔的细胞外ATP，而正常细胞外液通常处于亚微摩尔范围，创造了一个可作为选择性激活线索的生化微环境。Kamata-Sakurai等开发了STA551，这是一种仅在细胞外ATP水平升高时才结合其抗原的抗CD137开关抗体，从而利用富含ATP的TME实现组织选择性激活，同时在低ATP的正常组织中保持功能静息。在临床前研究中，相对于传统的激动剂抗体，STA551显示出强效的抗肿瘤活性和降低的全身免疫激活。为了在体内验证开关概念，Sugyo等在人CD137敲入小鼠中使用111In标记的鼠类替代物进行了单光子发射计算机断层扫描/计算机断层扫描生物分布研究，开关抗体Sta-MB显示出较高的肿瘤摄取，而在淋巴结和脾脏中的积累非常低。因此，开关抗体的肿瘤-淋巴结和肿瘤-脾脏比值分别比Ure-MB高约9.5倍和8.5倍，定量证明了ATP依赖性、组织选择性的靶向作用。与通常利用内体区室化的pH或离子开关不同，ATP触发的激活在组织水平的细胞外运作，利用肿瘤和正常组织之间的代谢差异来实现空间选择性，而无需细胞内存作用。 利用多样化环境触发因素(pH、离子和ATP)的激活系统通过不同的机制实现肿瘤选择性激活，基于组氨酸质子化的pH开关调节跨细胞内和细胞外区室的选择性结合；钙离子梯度利用静电相互作用和水合壳层的变化来设计捕获与释放行为；而ATP触发的开关则利用细胞外代谢差异来实现空间选择性，无需细胞内存作用。总的来说，这些策略共享共同的目标：最小化脱靶毒性、控制药物暴露并提高治疗指数，同时实现模块化设计和可扩展性。 2.4 多价、逻辑门控或双特异性格式 多价和双特异性抗体也可以通过要求同时结合多个抗原或亚基组装工程化为条件激活。逻辑门控抗体的目标是实现结合中的布尔逻辑——最常见的是"与"门，其中仅当两个(或更多)不同抗原同时存在于同一细胞上时，才会产生治疗效果，这可以大大增加对靶细胞(例如，表达独特抗原A和B组合的肿瘤细胞)的选择性。 Baker实验室从头设计的蛋白质开关——LOCKR和共定位依赖的Co-LOCKR——在细胞表面实现布尔逻辑。在这些系统中，单独的"笼子"和"钥匙"组件可以融合到针对不同抗原的scFv或纳米抗体上；只有当两个抗原共表达时，组件才会共定位，开关解锁以暴露效应子招募基序，从而实现单细胞分辨率的"与"门控。这种抗体可引导的蛋白质开关策略是对完全基于抗体的逻辑设计(如HexElect)的补充，在HexElect中，工程化的Fc-Fc界面偏向于六聚体化和C1q招募，仅当两个IgG在同一细胞上共结合时——功能上是一个"与"门，提高了相对于单抗原靶向的选择性。总之，这些方法说明了免疫治疗中实现逻辑门控的正交途径：可由抗体引导的从头设计的蛋白质逻辑，以及以双抗原共表达为条件的效应子激活的抗体固有格式。 除了明确的逻辑门控设计之外，还存在为位点特异性有效载荷安装而设计的多结构域抗体格式。Zeglis及其同事开发了一种双可变区免疫球蛋白支架，该支架针对位点特异性有效载荷安装而非逻辑门控进行了优化。通过将h38C2(其深口袋中含有独特的亲核Lys99)的催化可变结构域与肿瘤靶向结构域配对，DVD-IgG能够在温和条件下实现螯合剂/探针的化学选择性、重链限制性偶联，产生均质的放射免疫偶联物。使用经PODS-CHX-A"-DTPA修饰并用[177Lu]标记的HER2靶向DVD-IgG，研究人员通过质谱和SDS-PAGE电泳验证了位点特异性，并显示其在HER2阳性异种移植物中的体内性能与[177Lu]-曲妥珠单抗对照相当，尽管DVD的尺寸更大。从概念上讲，这种方法在不引入其制造复杂性的情况下，捕捉了非天然氨基酸策略的许多优势，为成像和诊疗一体化提供了模块化、抗体固有的位点特异性放射免疫偶联物途径。 在一些情况下，调控的不是传统的可激活抗体(其掩蔽抗体自身的抗原结合活性以在特定条件下实现激活)，而是bsAb复合物的"组装"阶段受特定条件(蛋白酶)调控。Howarth及其同事创建了SpyMask平台，该平台能够高效组装双特异性结合剂。SpyMask由一个支架(DoubleCatcher)组成，该支架由SpyTag和两个SpyCatcher结构域构成。SpyTag连接到要用于bsAb的每个抗体上，每个SpyTag与DoubleCatcher形成强而稳定的键。在本研究中，两个SpyCatcher中的一个被蛋白酶激活以结合SpyTag，这使得bsAb能够条件性地形成。 另一种逻辑门控形式是将抗体的功能物理分割成两个必须在靶细胞上组装的组件，这在某些"半抗体"前药或模块化CAR-T适配器系统中可见。例如，抗体的Fab可以被分割成两半，仅在两种不同抗原存在时才重新结合；或者可以将双特异性T细胞衔接器分割开来，使得CD3结合部分仅在肿瘤抗原部分结合到细胞上时才被招募，这种多组分系统本质上像逻辑"与"门一样工作。 在双特异性格式的情况下，一种抗体通常由结合T细胞上CD3的抗CD3组成。然而，现有的TCEs可以在正常组织中激活T细胞，引起副作用。因此，Panchal等开发了COBRA™，它仅在TME中激活，抗CD3 scFv被掩蔽结构域的空间位阻所阻断，但当掩蔽结构域被TME中丰富的蛋白酶移除时被激活，从而实现T细胞接合。该研究证实，COBRA™仅在临床前模型中抗原和蛋白酶同时存在时才被激活，COBRA™平台被认为是TCE条件性激活领域的首次研究。 在COBRA™的情况下，始终激活的TCE部分被掩蔽结构域覆盖，也有TCE部分仅在结合仅存在于TME中的抗原时才被激活的情况。Jeong等开发了一种双特异性抗体ABL503，它将IgG1骨架融合到PD-L1结合位点，并在C端融合了一个4-1BB特异性scFv。ABL503必须先结合TME中表达的PD-L1，才能通过聚集4-1BB来激活T细胞，从而将其刺激活性限制在肿瘤内。在人源化PD-L1/4-1BB双转基因小鼠的PD-L1+ MC38肿瘤模型中，每3天静脉注射一次ABL503，剂量分别为0.4、2和10 mg/kg，共四次，导致>80%的肿瘤生长抑制，在10 mg/kg组观察到完全缓解。当完全缓解的小鼠在40天后重新接种相同肿瘤细胞时，肿瘤未复发，证实了持久的免疫记忆。此外，该药物在猕猴中表现出优异的安全性，尽管与PD-L1和4-1BB发生交叉反应，但未观察到肝毒性。虽然这项研究与现有双特异性抗体相比降低了肿瘤外风险，但其局限性在于如果正常细胞表达PD-L1，该平台也可能被激活。 多价/逻辑门控格式的优势是超精确性——通过要求两个(或更多)信号来激活，如果正常组织缺乏完整的信号组合，则击中正常组织的几率会显著降低。实际上，通过将作用限制在双阳性细胞上，即使对于像TCEs或细胞因子这样非常强效的模式，也可以改善治疗指数。缺点在于，如此复杂的结合要求可能会降低整体效力(如果一个抗原表达低，整个复合物可能无法完全激活)并增加药物格式的复杂性(两个或更多组件，潜在的免疫原性连接子如SpyCatcher等)。此外，一些组装的不可逆性(SpyTag/Catcher形成不可逆的共价键)可能会限制在患者体内的控制，尽管它确保了双特异性在体内的稳定性。尽管如此，逻辑门控抗体的早期研究表明，它们可以实现传统单特异性药物无法达到的肿瘤选择性，指向一个未来，其中抗体疗法表现得像生物逻辑电路，仅在存在正确的疾病分子"代码"时才响应。 03 纳米抗体与支架 3.1 光反应性纳米抗体系统 单域抗体和其他小结合剂因其紧凑的尺寸和易于工程化而特别适合光遗传学控制，一个开创性的例子是通过插入光-氧-电压传感结构域来开发光开关纳米抗体。LOV2在蓝光下发生构象变化，可用于空间阻断或解阻断结合位点。Zhou及其同事设计了嵌入LOV2结构域的纳米抗体，创建了两个变体"Moondody"和"Sunbody"，它们对光的反应相反。在Moondody设计中，黑暗状态下的LOV2结构域使纳米抗体保持允许抗原结合的构象；蓝光照射导致LOV2解离一个肽段，部分遮挡CDR并降低抗原亲和力("关闭开关")。相比之下，Sunbody经过设计使得在黑暗状态下其结合界面被阻断，蓝光增加其结合亲和力("开启开关")。这两者相辅相成：一个用光关闭，另一个用光开启，展示了双向光学控制(图3)。研究人员表明，通过将LOV2插入CDR环内部或末端，它们可以在黑暗和光照状态之间调节约十倍的结合力。重要的是，切换快速且可逆，并且该通用方法适用于不同的纳米抗体靶点，纳米抗体的结构简单性使得在不破坏折叠的情况下实现这一点成为可能。一个值得注意的限制是，在"关闭"状态下可能存在残留(渗漏)结合；观察到Moonbody在光照下并未完全消除靶标结合，因此仍存在一些靶标结合。这种渗漏行为意味着，虽然光可以调节活性，但要实现真正的零活性状态具有挑战性，并且必须确保残留活性对于手头的应用足够低。 图3. 光开关纳米抗体系统(Moonbody和Sunbody)通过光-氧-电压传感结构域2的构象变化实现抗原结合的双向控制。在Moonbody设计中，蓝光照射使Ja螺旋从LOV2上解离，空间上遮挡互补决定区并将抗原结合"关闭"；在Sunbody设计中，LOV2在黑暗状态下阻断结合界面，蓝光恢复CDR。 Avalos及其同事通过插入LOV2创建了光遗传学纳米抗体平台，证明它可以控制细胞内的蛋白质-蛋白质相互作用。在他们的设计中，靶向目标蛋白质的纳米抗体经历光敏构象变化，在蓝光下，LOV2的结构变化以变构方式降低结合亲和力。因此，可以可逆地调节靶蛋白在细胞内的位置或活性。他们展示了在活细胞中精确控制结合的能力，强调了非侵入性、光诱导抗体功能调节的潜力。 Mootz等开发了一种光笼蔽的ALFA标记纳米抗体平台，了解到抗体-抗原结合可以通过光来调节。在他们的设计中，将一个邻硝基苄基酪氨酸作为遗传密码扩展插入到ALFA纳米抗体的互补位中心，ONBY的掩蔽使结合力减弱了9.2×103−1×105倍。经过几秒365nm光照后，ONBY被解蔽并恢复为原始的酪氨酸，重建了超高亲和力。在HeLa细胞表面ALFA标记表达模型中，UV照射前没有结合，为"开启"开关提供了可及性。这对互补对允许对纳米抗体-抗原相互作用进行快速可逆的光学调制，通过改变LOV2插入位点和多环工程来调整动态范围和残留活性。仅在照射后才发生特异性结合，证明了对抗体功能的非侵入性和可逆控制。 Greiss及其同事提出了一个结合了遗传密码扩展和计算蛋白质工程的平台，用于控制秀丽隐杆线虫体内光诱导的纳米抗体结合。在他们的设计中，通过计算丙氨酸扫描预测了抗绿色荧光蛋白纳米抗体的抗原结合界面的关键残基，并将这些残基替换为光笼蔽的酪氨酸以阻断结合。热点残基进一步用丙氨酸修饰以进一步减少残留结合，然后通过365nm光照射移除光笼蔽，允许抗原结合恢复。通过以这种方式改进两种抗GFP纳米抗体，研究人员在秀丽隐杆线虫细胞中展示了GFP-纳米抗体结合的光侵入性和可逆控制。 总之，LOV2连接的纳米抗体代表了强大的研究工具和光激活治疗剂的概念验证，它们说明了单个基因融合如何能够赋予抗体片段一种新的调节模式(光响应性)。未来的优化旨在提高开/关比(减少渗漏结合)，并可能开发其他光响应结构域(例如，受不同波长控制或通过光解离而非去折叠控制的结构域)。这些系统提供的抗体活性快速、按需控制是大多数化学或生物触发因素无法比拟的，突显了光遗传学在治疗性抗体领域的激动潜力。这些光遗传学设计共同确立了通用规则——在何处放置光传感器以及如何调节残留结合——我们可以将这些规则重用于其他支架类别。 3.2 化学和化学遗传学可切换纳米抗体系统 纳米抗体也被用于创建可响应内源性生化刺激或小分子的化学激活系统。一类涉及环境响应的纳米抗体，例如氧化还原激活或pH激活的结合剂。例如，Jia及其同事开发了荧光纳米抗体D-Body，它们在还原条件下被激活用于成像。他们使用抗EGFR纳米抗体，通过醛基化学连接将二聚体尼罗蓝染料连接到其C端。该染料通过基于二聚体间H聚集的二聚化诱导猝灭保持非荧光状态，并且二聚化的纳米抗体处于"关闭"状态，甚至在还原前不结合EGFR。然而，只有在具有高浓度谷胱甘肽的还原环境中，二硫键连接子被切割，单体化的尼罗蓝释放DCQ，荧光开启。因此，纳米抗体仅在具有高浓度GSH的还原性细胞内环境中(例如细胞溶胶、溶酶体)发射荧光，允许对靶标细胞内分布进行高对比度成像，这个D-Body示例说明了简单的化学触发因素(还原电位)如何激活纳米抗体的功能输出(荧光)。虽然这个特定设计是用于成像的，但类似的逻辑可以应用于治疗性有效载荷——例如，纳米抗体可以携带一种在靶细胞内还原时变得活跃的猝灭毒素。研究者强调，他们的策略需要最少的抗体工程改造，并避免了庞大或复杂的修饰，从而产生了一种模块化、高效的方法来赋予刺激响应性。肿瘤细胞相对于正常细胞外空间的高GSH水平提供了一个有效的触发因素，实现了在癌组织中的选择性激活。局限性在于确保触发因素对肿瘤细胞足够特异；一些正常组织或炎症部位也可能具有还原性。一般来说，肿瘤和正常组织之间的氧化还原或pH差异是有用的，但不是绝对的区分因素，因此这些系统可能最适合用于成像或与其他靶向机制结合使用。 Johnsson及其同事开发了配体调节的抗体片段，它允许纳米抗体的靶标结合受到化学遗传学控制。他们将环状排列的二氢叶酸还原酶插入到GFP结合纳米抗体的CDR3环中，当结合烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸和临床抗生素甲氧苄啶时，折叠的cpDHFR结构域阻断靶标结合位点，将GFP结合急剧抑制到"关闭"水平。移除TMP并加入野生型DHFR后，cpDHFR在几分钟内再次被置换，纳米抗体-GFP结合状态恢复。该系统扩展到其他纳米抗体，包括人类免疫缺陷病毒1型p24和ALFA标签，证明它可以可逆地化学遗传学控制GFP融合蛋白的亚细胞定位以及细胞周期蛋白Mad2L1的功能。 另一种化学遗传学方法涉及与Probody类似的策略，即在纳米抗体中使用掩蔽肽。Chen及其同事开发了一种名为前药膜蛋白降解剂的可激活纳米抗体，两个抗PD-L1纳米抗体被连接起来，并与一个细胞穿膜肽融合，可以诱导PD-L1的细胞内摄取和降解。为了增强该系统的选择性，CPP被一个负电荷肽掩蔽，该肽通过蛋白酶可切割连接子连接。在正常情况下，掩蔽肽中和了CPP，阻止融合蛋白进入细胞。因此，纳米抗体仅结合PD-L1，不发生细胞内摄取。然而，在TME中，肿瘤蛋白酶切割连接子，释放CPP，然后允许PD-L1纳米抗体进入靶细胞并降解PD-L1，从而诱导免疫激活。由于PD-L1免疫检查点仅在存在肿瘤蛋白酶时被移除，这防止了体内其他T细胞的过度激活。值得注意的是，Pro-MPD在体内表现出优于现有PD-L1纳米抗体药物的肿瘤抑制作用。这表明它可能不仅提供改善的安全性，还具有功能优势。然而，作者也指出了几个局限性，包括不完全掩蔽可能导致非靶点部位产生一些CPP活性，以及需要仔细评估CPP本身的潜在细胞毒性。 总之，化学遗传学纳米抗体系统利用了纳米抗体的稳定性和可工程化性，引入了对生化线索或外源试剂的敏感性。它们表明，即使没有Fc结构域或大尺寸，抗体也可以被"武装"以具有条件行为。纳米抗体的小尺寸通常意味着更快的组织渗透和清除，这对于避免持续的脱靶暴露是一个优势——但也意味着任何修饰都必须非常精心设计，以免破坏分子的稳定性。迄今为止，像D-Body和Pro-MPD这样的例子表明，纳米抗体可以对创造性的修饰相当耐受，从而产生复杂的智能治疗和诊断方法。随着这些方法的发展，我们可能会看到“Pro-nanobody”成为与Pro-antibody平行的东西，在不需要全抗体或组织渗透至关重要的应用中(成像、穿越血脑屏障等)尤其有价值。 3.3 非免疫球蛋白G支架 条件激活不仅限于抗体和纳米抗体；其他非IgG蛋白支架——如亲和体、设计的锚蛋白重复蛋白、单抗体甚至肽适体——也可以通过类似的开关特性进行工程化。这些抗体模拟物通常在稳定性、尺寸或组织渗透性方面具有优势，增加条件控制可能使它们成为治疗剂和诊疗一体化的优秀候选者。 一个显著的例子是光开关亲和体的开发，也有将光激活控制方法应用于亲和体的案例。Woolley及其同事通过互斥折叠方法，将蓝光下发生结构变化的光活性黄色蛋白融合到Z结构域的Loop2环上。在黑暗状态下，PYP折叠，Z结构域去折叠，将靶标结合降低了约30倍。当暴露于蓝光时，PYP去折叠，允许Z结构域折叠并实现结合。这项研究提出了一个能够进行遗传编码的平台，不同于现有的不可逆光激活和基于合成开关的控制方法。然而，为了显著改变光照前后的结合亲和力，需要进行额外的筛选和结构预测。 Carrasco-Lopez等通过将燕麦LOV2结构域插入src同源2结合单抗体支架的保守环中，工程化了一种光控单抗体(“OptoMB”)。在黑暗中，LOV2的Ja螺旋保持单抗体结构，以纳摩尔级亲和力结合SH2靶标；蓝光诱导Ja解离和结合表面的变构破坏，导致SH2亲和力降低330倍(关闭)。这种开关是可逆的；回到黑暗后，Ja螺旋重新折叠，结合恢复(开启)。OptoMB能够在体外和活细胞中快速、可逆地控制SH2相互作用。这项研究确立了单抗体作为一种通用的非Ig支架，用于设计高精度的光遗传学蛋白质结合剂。 类似地，光开关DARPin也已被开发出来。Westberg等报道了一种设计，其中使用光解离二聚体Dronpa与DARPin融合，这种光开关DARPin采用三重模块排列构建，通过在DARPin的N端和C端都连接pdDronpa。在黑暗状态下，两个pdDronpa单体形成二聚体，物理性地覆盖并阻断中央DARPin的互补位。当用青色光照射时，pdDronpa二聚体解离成单体，暴露DARPin的结合位点。紫光或热弛豫重新形成二聚体，再次阻断结合位点，这使得能够通过光"开启"和"关闭"结合。这些psDARPins可以特异性调节细胞内源性蛋白质相互作用，如GFP、细胞外信号调节激酶和Ras，有效地作为靶蛋白的光控抑制剂。值得注意的是，在非Ig支架上实现这一功能是非常出色的。因为DARPin支架约为14 kDa且高度稳定，它能耐受与pdDronpa模块的融合。 扩展到蛋白酶输入，一种利用肿瘤相关蛋白酶的前-亲和体策略已被报道。Vorobyeva及其同事工程化了一种EGFR结合亲和体，它与一个抗独特型亲和体掩蔽结构域融合，通过一个包含基质蛋白酶/uPA切割基序的连接子连接，从而仅在蛋白水解后于TME内恢复靶标结合。加入了白蛋白结合结构域和C端EEE标签/半胱氨酸以延长系统半衰期、改善溶解性并减少肝脏摄取。切割前，与EGFR的结合被有效阻断；基质蛋白酶介导的切割后，结合亲和力恢复到与未掩蔽对照相当的水平。在体内，该构建体在H292异种移植瘤中显示出显著的肿瘤积累和降低的肝脏摄取。总体而言，该设计展示了同时减少肝脏暴露和蛋白酶依赖性肿瘤选择性的潜力，表明可能减轻EGFR靶向毒性并拓宽治疗指数。 正交于光和蛋白酶线索，Hober及其同事在链球菌蛋白质G的抗体结合结构域中工程化了一个钙离子依赖性分子开关，以创建一个可以用钙离子打开或关闭抗体-抗原相互作用的平台。他们删除了邻近Fab和Fc结合表面的天然环，并用一个EF-手样钙结合环替换，创建了一个组合库。利用负选择和正选择进行细胞表面展示，进化出了具有条件性结合的变体。原型C2Ca V3在没有钙离子时是无序的，无法结合Fab或Fc(关闭)，但当钙离子触发接枝环发生无序-有序转变时，通过耦合的折叠-结合机制恢复互补位，从而结合抗体(开启)。核磁共振和分子动力学显示，钙离子配位诱导环有序化和Fab结合表面的恢复，展示了一种模拟自然变构进化的协同折叠开关。 除了上述控制外，其他刺激也被用于替代支架。例如，适配体(DNA或RNA寡核苷酸结合剂)已通过二级结构变化变得可激活。非Ig支架通常缺乏Fc区，这意味着它们无法受益于Fc介导的免疫功能或长半衰期——但作为交换，它们能快速渗透组织，并且可以以多种形式生产。为它们增加条件激活可能使其更安全、更可控。 总之，非Ig支架平台将条件激活的工具箱扩展到了经典抗体之外。它们带来了独特的优势(小尺寸、稳定性、易于工程化多个位点)，实现了诸如完全可逆光开关等壮举，这在大型IgG中可能更难实现。所学到的原理——例如在哪里插入光传感器或如何用可逆结构域掩蔽结合位点——很可能也可以转化回较大的抗体。这些研究强调了一个关键点：条件激活是一个通用原则，不仅限于免疫球蛋白。理论上，任何配体结合蛋白只要分子设计得当，都可以配备条件开关。一方面，靶向HER2的亲和体平台目前主要作为成像诊断手段推进，尚无HER2亲和体治疗剂进入临床；另一方面，基于DARPin的药物正在肿瘤学中开发(例如，TME激活免疫调节剂，如MP0310和先前开发的靶向HER2的DARPin)。赋予这些蛋白质支架肿瘤特异性激活的策略目前正处于临床前研究阶段，如果成功开发，有可能在某些情况下补充或替代现有的抗体疗法。在证明了条件开关是支架不可知的后，我们接下来将相同的设计逻辑转化为在体内递送和激活有效载荷的载体。 04 药物递送平台 4.1 可激活抗体-有效载荷偶联物：药物、光敏剂及其他 ADC——装载了细胞毒性有效载荷的抗体——是一种成熟的治疗模式，但其全部潜力常常受到过早有效载荷释放导致的脱靶毒性的限制。因此，条件激活策略正被应用于ADC，以确保有效载荷仅在肿瘤中或在特定触发因素下释放。事实上，大多数现代ADC已经使用了刺激敏感连接子。然而，下一代可激活ADC更进一步，加入了如荧光报告基因、外部触发因素或新型酶特异性等特征，以增强时空控制。 一个有趣的例子是由近红外(NIR)光激活的ADC，它被开发用于提高光动力疗法(PDT)的选择性。Patsenker及其同事将光敏剂(mI2XCy-Ac)共价连接到靶向HER2的抗体(trastuzumab)上，光敏剂的羟基被乙酰基保护，阻断了其光毒性和荧光。然而，当肿瘤细胞内的酯酶移除保护基团后，暴露于NIR光下，光毒性和荧光被激活。在临床前模型中，这种诊疗一体化ADC成功地精确去除了肿瘤，同时最小化了对周围组织的损伤。然而，这项研究指出了一个实际挑战：由于偶联是非位点特异性的，产物均一性和重现性可能受到影响。尽管如此，"抗体诱导、可激活光敏剂"的概念提出了一种通过结合外部物理刺激和内部生化刺激实现双重门控激活药物的方法。 Zhang及其同事开发了一种名为光激活核糖核酸-抗体偶联物的偶联物(PARC)，它由靶向PD-L1的抗体和小干扰RNA通过邻硝基苯基光裂解连接子连接而成。在黑暗中，siRNA共价连接到抗体上，使siRNA失活，当肿瘤部位受到365nm UV光照射时，连接子中的硝基苄基基团吸收光并裂解，siRNA被释放并变得活跃。HER2抗体-siRNA偶联物与肿瘤细胞结合并被内化，siRNA在细胞内通过光刺激释放，靶向PD-L1 mRNA并发挥RNA干扰效应。PARC平台结合了抗体的靶向能力和光诱导的基因治疗，创造了一种称为光激活免疫基因疗法(图4)。这种方法具有高度的空间可控性，允许光仅定向照射肿瘤，将基因抑制限制在该区域。然而，正如论文所指出的，UV光的组织穿透性差，这对于深部肿瘤可能不切实际。此外，每个肿瘤细胞结合和内化抗体的速率不同，一些细胞可能仍有抗体-siRNA复合物在细胞外，需要进行药物和靶点特异性时机研究。该设计可推广到响应各种触发因素的连接子，除光刺激外，还包括酶和还原，使其可扩展到光疗之外。 图4.  用于癌症可激活免疫基因治疗的光响应抗体-siRNA偶联物。 除了外部触发的ADC，研究人员还在设计携带荧光或潜伏报告基因的ADC，以信号指示有效载荷释放。Pan及其同事创建了一种名为"组织蛋白酶B依赖性可激活触发荧光团"的ADC，在其连接子中整合了一个荧光前报告基因，他们将一个猝灭的荧光探针通过组织蛋白酶B可切割的连接子连接到曲妥珠单抗上。在血液中，ADC是惰性且不发荧光的。当内化到肿瘤细胞的溶酶体中后，组织蛋白酶B切割连接子，同时释放细胞毒性有效载荷和荧光部分。瞬间，原本猝灭的荧光团发光，表明药物已在那个位置释放，这提供了ADC作用的原位读出——本质上是亚细胞水平的药物递送实时可视化。内置信号的存在消除了对单独成像剂的需求；药物本身"报告"其成功部署。作者建议这可能会彻底改变我们验证ADC疗效的方式，让临床医生能够看到ADC是否功能性地到达并杀死肿瘤细胞。需要注意的是，添加荧光团可能会改变ADC的特性，如疏水性或有效载荷效力，详细的比较表明带探针的ADC具有类似的体外细胞毒性，但强调了需要进行详细的毒理学研究，以确保修饰不影响安全性。尽管如此，诊疗一体化ADC的概念因这种可激活设计而大大增强。 如组织蛋白酶和酯酶等常用作ADC连接子的酶在TME中丰富，但也存在于正常组织和炎症细胞中，导致脱靶释放问题。为了解决这个问题，Schroter及其同事开发了一种由α-L-艾杜糖醛酸酶(IDUA)切割的连接子，该酶在肿瘤中特异性过表达。他们合成了一种基于艾杜糖醛酸的连接子，并将其连接到细胞毒性有效载荷上，设计这个系统只在具有高IDUA活性的肿瘤或炎症组织中释放药物。事实上，IDUA-ADC在CEACAM5阳性细胞系中有效地释放了药物，并且其在正常肝细胞中的细胞毒性低于CatB-ADC。虽然这个平台可以表现出高肿瘤选择性，但如果特定肿瘤中IDUA不足，ADC可能效果较差，并且IDUA-ADC具有不适用于所有肿瘤的局限性。 可激活ADC的优势是显而易见的：改善的安全性(弹头在到达靶点之前更惰性)、潜在的疗效增益(如果脱靶效应减少，可以给予更高剂量)以及信息性监测(带有内置成像功能)。局限性包括增加了制造的复杂性(通常需要位点特异性偶联以确保一致性)、需要彻底验证激活机制在患者中确实均匀有效(酶表达的肿瘤异质性可能导致激活差异)，以及在某些情况下需要外部触发因素如光(这可能要求特殊设备或程序)。平衡连接子的稳定性(在血液中稳定但在肿瘤内高效切割)仍然是一个核心挑战，如果连接子太容易切割，就失去了优势；如果太难切割，药物可能根本不释放，降低疗效。总之，条件性可激活ADC代表了靶向化疗的复杂进化，将抗体的精确性与刺激敏感化学的条件逻辑相结合，并且它们正迅速走向临床现实。 4.2 刺激响应性脂质体与水凝胶 除了ADC，还设计了多种刺激响应性纳米载体和水凝胶来响应特定线索释放治疗剂，这些平台将抗体作为表面靶向配体整合，或者较不常见地作为有条件释放的包封生物有效载荷，它们还可以携带小分子药物、核酸或蛋白质。共同的主题是，有效载荷保持隔离或非活性状态，直到触发因素诱导在靶点释放。当与抗体靶向结合时，双门控将抗体介导的生物分布与触发依赖性释放耦合起来，为以抗体为中心的治疗提供了精确的时空控制。在实践中，抗体修饰的载体首先在疾病部位积累，然后仅在存在局部线索时释放其有效载荷。 Pang及其同事开发了一种基于聚(2-二异丙氨基乙基甲基丙烯酸酯)的纳米复合材料，该材料在酸性TME中特异性激活。在中性pH下，该平台稳定地维持抗PD-L1抗体和PEG涂层，但在TME的酸性环境中，PDPA质子化，有效释放抗体和PEG涂层。释放的抗PD-L1抗体对肿瘤细胞提供免疫检查点阻断效应，同时PDPA提高溶酶体内的pH，抑制自噬流，从而增加肿瘤细胞表面主要组织相容性复合物I类分子的表达，促进细胞毒性T细胞和树突状细胞向肿瘤的浸润。这突显了pH响应性载体可以传递协同免疫调节作用，而不仅仅是作为中性载体。面向临床的pH敏感脂质体/胶束正在积极评估中；抗体修饰的构建体是朝向条件性抗体治疗的自然延伸。在前列腺癌小鼠模型中，该系统表现出强效的抗癌和免疫活性、克服耐药性、优异的安全性，并且在治疗后复发模型中也证实了长期的免疫记忆效应。 温度响应性脂质体也是一种被广泛研究的方法，特别是，磁热敏脂质体可以利用外部磁场控制药物释放。Bakowsky及其同事将靶向跨膜金属蛋白酶-去整合素的抗体与装载阿霉素的磁热敏脂质体结合。当脂质体内钆基磁性颗粒的局部温度因外部磁场而升高时，该平台能够使原本稳定包封在脂质体内部的药物快速释放，导致膜的流动性和渗透性急剧增加。这种外部物理门控提供了时间控制，同时抗体赋予肿瘤特异性，有效地将生物分布与激活解耦。这种方法能够在肿瘤内期望的时间和位置释放药物，而脂质体表面的抗体可以通过过表达的受体(如ADAM8)在肿瘤部位特异性积累。因此，高浓度局部化疗成为可能，并且脱靶效应减少。磁场具有能够非侵入性地到达深部组织的优势；然而，确保均匀的热分布和脂质体稳定性(防止药物过早泄漏)仍然是重大挑战。 水凝胶是另一种方法。Luo及其同事开发了一种还原激活的水凝胶，靶向术后残留肿瘤。这种水凝胶设计为对谷胱甘肽敏感，GSH在TME中丰富。在还原条件下，超分子前药和水凝胶连接位点被降解和释放。此外，物理包埋在水凝胶基质中的抗PD-L1抗体在GSH环境中随水凝胶崩解而释放，与WA-cRGD协同促进免疫激活。因此，水凝胶作为局部储库，在切除床中持续释放抗体，符合术后免疫治疗的需求。该平台在动物模型中已证明能有效抑制肿瘤再生长，并显示了智能水凝胶作为响应肿瘤复发信号的局部药物储库的潜力。值得注意的是，观察到了长期免疫记忆的形成，强调了持久的获益。 Huang及其同事设计了超声诱导的纳米颗粒来靶向细菌生物膜，这些颗粒涂有液体全氟戊烷、抗生素和美罗培南。当对目标区域施加超声波时，纳米颗粒内部的PFP转化为气态并形成微泡。微泡产生的冲击波导致纳米颗粒破裂，释放抗生素，这代表了将抗体靶向与外部定时触发耦合的按需释放。与之前使用内部刺激作为药物释放触发因素的平台不同，该平台具有精确控制释放时间和位置的优势。重要的是，此类抗体集成的超声系统将条件激活扩展到肿瘤学之外的传染病领域。 总之，刺激响应性脂质体、纳米颗粒和水凝胶构成了一类多功能的条件性可激活递送系统，它们的独特优势在于双门控——抗体介导的积累加上触发依赖性释放——提供了紧密的时空控制。它们的优势包括能够使用外部物理触发因素实现精确的时空控制，并建立响应反复肿瘤刺激的长期药物储库。挑战涉及配方的复杂性、纳米颗粒的潜在免疫原性、确保触发因素能区分肿瘤与正常组织，以及多组分治疗剂的监管障碍。 4.3 自清除和点击激活纳米载体 化学创新催生了自清除连接子和生物正交"点击"反应，可用于以高度受控的方式激活药物载体。与环境触发因素相比，这些化学触发因素提供了正交控制，可以独立于生物分布进行定时。自清除连接子是一种分子连接体，一旦被触发(通过切割或还原事件)，就会发生自发分解，以活性形式释放药物。生物正交点击化学是指可以在体内发生而不干扰天然生物化学的反应，允许两个分别给药的组分找到彼此并发生反应。对于抗体，这实现了靶向(抗体先给药)和激活(触发物后给药)的实际分离。 这里有一个利用点击化学在体内激活药物递送的高级概念，这是一个将非活性前药在体内期望位置转化为活性药物的反应。Yuan及其同事设计了一个两步点击激活的化学免疫治疗系统，在这种方法中，PD-L1靶向抗体与四嗪偶联，阿霉素与乙烯基醚偶联作为掩蔽剂，并且DOX-VE被封装在可以在TME酸性条件下释放的纳米颗粒中。当偶联抗体结合PD-L1，阻断免疫通路并发挥肿瘤靶向作用时，在TME酸性条件下释放的DOX-VE和偶联抗体因点击化学反应将DOX-VE转化为活性DOX，杀死肿瘤细胞。这产生了双重作用——检查点阻断加局部化疗——且全身暴露最小，结果是在肿瘤内实现PD-L1阻断加局部毒性化疗的双重打击，而对身体其他组织的毒性暴露很小。 Sadowsky及其同事也将点击化学反应应用于激活药物释放，并将其扩展到诊断+诊疗一体化应用。首先通过注射带有单光子发射计算机断层扫描成像探针的抗体来识别肿瘤定位，该抗体与用含TCO的点击释放连接子掩蔽的吡咯并苯二氮杂卓药物连接，使药物失活。当随后将四嗪给予体内时，逆电子需求狄尔斯-阿尔德反应化学修饰含TCO的连接子，切割掩蔽药物的连接子，使药物变得活跃并对癌细胞有毒。这种"无反应，无毒性"的模式将治疗与影像引导的患者选择和时机结合起来，这种按需生物正交开关的概念——先注射抗体，然后用前药激活——最大限度地实现了时空控制。挑战在于点击反应必须在体内足够快速和高效，并且两个组分必须在肿瘤内适时相遇，但幸运的是，四嗪-TCO反应是最快的生物正交反应之一，并且已有许多成功的体内点击报道。 自清除连接子确保活性药物的干净释放(没有肽段残基或额外的原子附着在药物上，这可能会降低活性)。生物正交点击策略允许两个原本非活性的组分仅在结合时才变得高毒性，这是条件特异性的极致——理论上没有点击，就没有毒性。此外，时间分离——先给抗体，后给触发物——使临床医生在激活前有机会确认肿瘤积累，这对于我们希望限制在肿瘤内的高效细胞毒素或放射性核素非常有吸引力。总之，自清除和点击激活的纳米载体展示了叠加在抗体靶向之上的化学逻辑，以实现严格的条件性。最后，我们将这些分子开关从有效载荷递送扩展到免疫调节，其中条件性对于安全性至关重要。 05 条件性免疫治疗 5.1 可激活的免疫检查点阻断 免疫检查点抑制剂已经改变了癌症治疗格局，但由于全局免疫激活，它们可能导致严重的自身免疫副作用。因此，将条件激活应用于检查点阻断是一个高度优先的领域——目标是让这些强大的抗体仅在肿瘤内释放免疫细胞，而不在健康组织中释放。在"蛋白酶敏感的掩蔽抗体"部分讨论了PD-L1和CTLA-4抗体的Probody策略，这是这种方法的例证。回顾一下，Probody检查点抑制剂被一个肽段掩蔽，该肽段被肿瘤特异性蛋白酶移除。在正常组织中，抗体不能结合PD-L1或CTLA-4，因为掩蔽物阻断了互补位；在肿瘤中，蛋白水解切割释放抗体以结合其靶标。临床前模型显示，此类掩蔽的ICIs可以保留抗肿瘤疗效，同时减少全身T细胞激活。例如，Yanguas等使用非小细胞肺癌的定量系统药理学模型模拟了PD-L1 Probody，并预测其可以达到与常规抗PD-L1相当的肿瘤控制，且肿瘤外结合显著减少。 以前，开发了基因工程方法来实现肿瘤特异性激活，但可应用的抗体类型和调控机制有限。因此，Tang及其同事开发了一种基于化学工程的"可切换"免疫调节剂技术，该技术使用响应TME的化学连接子将免疫刺激性抗体/细胞因子与掩蔽分子连接起来。然而，一个显著的限制是掩蔽程度可能因每个免疫调节分子PEG连接到的残基而异。因此，研究团队优化了条件、用量和组成，以实现PEG的最大掩蔽，同时允许在TME环境中激活。体内实验证实，优化后的制剂表现出与母体药物相当的肿瘤抑制效果，同时减少了脱靶效应。 另一种方法是使用pH响应性纳米复合物的策略，这是Pang及其同事在"刺激响应性脂质体与水凝胶"部分介绍的基于PDPA的平台。由于抗PD-L1抗体仅在TME的低pH下释放的机制，这种方法实现了选择性的免疫检查点抑制。在小鼠模型中，显示这种方法不仅在治疗期间产生了暂时的肿瘤抑制效果，还诱导了基于T细胞的长期记忆免疫效应。 Zhang等开发了一种催化纳米免疫复合物，该复合物因TME的酸性pH和超声而被激活。该平台由三个组分——抗PD-L1、腺苷脱氨酶和血卟啉——共价结合到纳米颗粒上构成。在酸性pH和超声刺激下，化学键断裂，释放三个组分。在小鼠肿瘤模型中的体内实验证实，该平台能有效抑制肿瘤生长和转移，未观察到对主要器官的损伤或毒性，显著减少了脱靶效应。该平台是由TME酸性pH和超声触发激活的"与"逻辑结构，作为一个三联疗法纳米平台，可以克服现有疗法的局限性。 从临床角度看，条件性ICIs旨在保持抗肿瘤免疫，同时防止全身性自身免疫。早期临床试验数据(例如PD-L1 Probody CX-072)显示出一些毒性降低的证据，但其疗效必须与未掩蔽的ICIs仔细比较。如果一个可激活的ICI过于保守，它可能效果不佳。因此，选择在肿瘤中充分存在的触发因素至关重要。PD-L1 Probody选择了MMP-14切割，CTLA-4 Probody也选择了基质金属蛋白酶，这些蛋白酶在许多肿瘤中丰富，但并非所有肿瘤都如此。 总之，可激活的检查点阻断正在顺利进行，蛋白酶激活的PD-L1和CTLA-4抗体进入临床就是例证。早期建模和实验表明，这些可以在免疫治疗中强制执行肿瘤选择性，可能解决检查点抑制剂的致命弱点。如果成功，这可能允许更高剂量或安全地联合多种ICIs，从而可能提高治愈率。局限性围绕着确保"钥匙"存在于肿瘤中而非重要组织中——本质上是一个生物标志物问题。如果正确的策略与正确的肿瘤表型匹配，则有望成功。正在进行的试验和进一步的改进将揭示我们能在多大程度上将免疫激活特异性推向肿瘤并远离健康的自身组织。 5.2 可切换的嵌合抗原受体T细胞和自然杀伤细胞衔接器 细胞免疫疗法(如CAR-T和双特异性T/NK细胞衔接器)极其强效，但如果不能严格控制，可能会产生致命的副作用。因此，将条件激活引入这些活体药物是一个关键的创新领域。研究人员正在设计仅在特定条件信号存在时才激活的CAR-T，或仅在肿瘤特定条件下才发挥功能的双特异性衔接器，以使这些治疗更安全、更精确。 已有几种FDA批准的CAR-T疗法，它们与传统癌症治疗相比具有许多优势，包括靶点特异性、由于自体细胞基础导致的低免疫排斥以及长期持久性。然而，一旦在体内激活，CAR-T疗法可能导致严重的副作用，如细胞因子释放综合征和神经毒性，并且难以立即停用或移除注入的CAR-T。因此，Cao等开发了sCAR-T，它可以通过开关抗体从外部调节CAR-T的活性。开关抗体是一种连接到靶向癌细胞抗HER2上的特定小分子，sCAR-T被设计为结合开关抗体上的小分子标签，而不是识别靶抗原。换句话说，sCAR-T的活性受抗体开关的存在或浓度调节。在体外和体内，sCAR-T已被证明可以通过外部开关抗体调节活性，在低抗原表达的癌症中具有高反应性，并且副作用低。然而，缺点是需要持续给予开关抗体以维持CAR-T活性。 Lohmueler及其同事通过插入一个可被触发因素切割的化学连接子，开发了一个关闭开关适配器。使用通用CAR-T，这些CAR-T识别适配器的标签，结合靶细胞，并激活T细胞。在激活期间，外部刺激导致适配器标签切割，释放通用CAR-T与靶标之间的物理键，从而使CAR-T失活(图5)。这项研究代表了一个稳定CAR-T并调节其活性的强大平台。然而，使用紫外光可能导致非特异性细胞损伤，并且需要进一步研究评估小鼠模型和临床应用的可行性。 图5.通过可切割的OFF开关适配器条件控制通用嵌合抗原受体(CAR)-T细胞。 在NK细胞免疫治疗中，肿瘤特异性、条件性激活的策略也正在受到关注。最近，Sun及其同事开发了一个结合血小板膜和脂质体的生物-脂质体平台，该系统装载了抗癌药物和IgG，诱导血小板膜在肿瘤部位的特定靶向，并与肿瘤细胞膜融合。在此过程中，IgG被均匀地引入肿瘤细胞表面，通过NK细胞的Fc受体诱导强大的抗体依赖性细胞毒性和细胞焦亡，同时释放的抗癌剂表现出直接的细胞毒性并激活先天免疫反应。该平台有效克服了肿瘤抗原异质性问题，并在各种实体瘤小鼠模型中证明了肿瘤生长抑制、生存延长和免疫微环境编程效果。此外，它对正常组织的影响极小，显示出高安全性。这种基于膜融合/抗原均质化的NK诱导免疫疗法与现有的嵌合抗原受体自然杀伤细胞疗法不同，它可以同时在肿瘤内追求条件性免疫激活和精确靶向效果，而无需昂贵的细胞操作。然而，血小板膜脂质体的大规模生产、一致性和长期安全性等挑战仍有待未来解决。 另一种方法是在T细胞自身内部工程化逻辑门控CAR：例如，synNotch受体要求T细胞激活需要顺序信号。这些是细胞水平的逻辑门，而非蛋白质水平的门。例如，T细胞可以被工程化具有针对抗原A的synNotch受体，当被触发时，使细胞表达针对抗原B的CAR——因此，只有在A阳性细胞中，T细胞才会武装自己以攻击B阳性细胞。在实践中，如果A和B在同一肿瘤细胞类型上，但B也在一些健康细胞上，这确保了T细胞仅在存在A时攻击B靶细胞，并放过缺乏A的B阳性健康细胞。这种双抗原门控CAR-T已在临床前模型中进行了测试。 可切换CAR-T/NK和衔接器的优势是显而易见的：显著增强了细胞疗法和衔接器的安全性，这些疗法是最强效(也最危险)的疗法之一。通过要求满足一个或多个肿瘤特异性条件，可以避免可怕的细胞因子风暴或靶上脱肿瘤器官损伤。此外，一些条件性系统允许"关闭开关"或剂量调节——这是传统细胞疗法所缺乏的。局限性通常围绕复杂性：制造具有额外基因电路的CAR-T或提供单独的适配器药物增加了步骤和成本。还有免疫原性的考虑——例如，可切换CAR-T中的适配器分子可能是外来蛋白质片段，在重复给药后可能在患者体内诱导抗体反应。对于COBRA或掩蔽的衔接器，必须确保掩蔽不会过度降低疗效，或者所选的蛋白酶确实是肿瘤特异性的，以避免在伤口或炎症组织中意外激活T细胞。令人鼓舞的是，Panchal等的COBRA临床前数据表明了一个宽的治疗窗。 总之，条件性可激活细胞免疫疗法代表了过继性细胞转移和衔接器疗法的新一波复杂性。早期原型如可切换CAR-T和COBRA TCEs已经表明，逻辑门控可以强加于免疫细胞并产生巨大效果，有可能减轻这些疗法的最大风险，同时保留(甚至增强)其肿瘤杀伤效力。临床转化备受期待——如果这些方法取得成功，我们可能会看到诸如细胞因子风暴等副作用大幅减少，并可能将细胞疗法扩展到实体瘤，由于与正常组织共享抗原，实体瘤需要更高的精确度。执行和成本方面的挑战仍然存在，但趋势是明确的：智能T细胞和NK细胞只在它们应该的时间和地点发起攻击。 06 成像与诊疗一体化 条件性治疗中一个反复出现的主题是整合诊断信号——本质上是诊疗一体化，拥有一个能够报告自身激活或定位的药物对于临床医生实时监测治疗非常有帮助。可激活荧光团是实现这一目标最常见的方式之一，它们已被整合到抗体、ADC和其他系统中，以创建治疗作用的"信号开启"报告器。 有通过蛋白酶激活荧光信号的研究，Ryu及其同事开发了"cetux-probe"，它将溶酶体酶(组织蛋白酶B)响应的肽基猝灭荧光探针与西妥昔单抗结合。荧光保持猝灭状态，直到抗体结合EGFR并被内化到靶癌细胞中。然而，当抗体移动到细胞溶酶体且肽连接子被特定酶切割时，荧光信号切换到"开启"，实现了抗体-靶标复合物实际降解和激活位点的实时可视化。Cetux-probe在EGFR阴性细胞或蛋白酶抑制剂处理条件下产生最小的信号，具有低非特异性信号和高靶点特异性。该平台能够在癌症治疗前或治疗期间通过体内成像早期诊断药物成功/失败和耐药性，表明它可能是"精准医疗"的理想工具，以快速调整治疗策略。这种可激活的荧光抗体系统可以扩展到各种抗体疗法和靶蛋白，如HER2，为加速抗体疗法的临床转化和实现患者定制管理提供了新范式。 Vendrell及其同事开发了一种先进的荧光诱导连接子平台，能够实时、高分辨率地观察ADC中有效载荷释放的时机和位置。ADC内的连接子被溶酶体蛋白酶切割，而先前猝灭的荧光部分从关闭状态过渡到开启状态，发出强烈信号，指示药物释放的精确时空时刻(图6)。在这个连接子-荧光系统中，引入了涉及pH和酶活性的串联激活结构，要求同时存在酸性溶酶体环境和酶，信号才能激活，从而作为一个客观的诊断标志物。在实验中，该系统应用于各种ADC和抗体，并通过活体显微镜在主要癌症模型中确认了与药物释放一致的实时荧光表达。该系统不仅能够在ADC开发过程中验证连接子效率和追踪有效载荷释放位置，还有望用于内窥镜荧光诊断和手术中实时监测等临床应用。 图6. 用于实时成像抗体-药物偶联物(ADC)亚细胞有效载荷释放的荧光平台。 有研究通过用光激活光敏剂，同时产生荧光信号来实现诊疗一体化。Garcia-Guzman及其同事将光敏剂IR700共价连接到特异性结合肿瘤抗原的抗体上。在光照前，偶联物在体内处于"非活性"状态并在肿瘤中积累。仅在激光照射区域，光敏剂被激活，导致快速细胞死亡，释放损伤相关分子模式，并激活免疫细胞。IR700发射近红外荧光信号，使得在光照前后能够通过体内荧光成像可视偶联物在肿瘤内的积累、分布和激活时机。当荧光信号在肿瘤内被清晰检测到时，可以直观地确认抗体-光敏剂偶联物的精确靶向结合和条件性光激活的治疗成功。如果信号弱或缺失，则可以早期重新调整治疗策略。 诊疗一体化的一个迷人延伸是设计可以从成像模式切换到治疗模式的系统，有效地将癌症护理的两个步骤统一在一个平台中。使用初始成像程序来指导后续治疗干预的概念很常见，但这里的想法是，相同的试剂可以先作为诊断剂，然后转化为治疗剂。这是最终的条件激活——使用触发因素将诊断剂在肿瘤部位转变为药物。Sadowsky及其同事开发了一种基于生物正交点击反应的诊疗一体化系统，使用靶向淋巴细胞抗原6家族成员E的抗体，这些抗体与放射性同位素和TCO偶联用于SPECT成像。当给药后，抗体结合肿瘤靶标，实现SPECT成像。随后给予四嗪分子会诱导已经结合在抗体上的非活性药物激活。通过四嗪和TCO之间的特定IEDDA点击反应，放射性示踪剂被释放，同时抗癌药物从其结合形式释放为活性毒性剂，在肿瘤内发挥治疗作用。在这个系统中，抗体首先作为"靶标指示器"，然后作为"药物停靠平台"。实验结果表明，即使在成像确认后单独通过四嗪激活药物也显示出治疗效果。 可激活荧光团实时监测的优势在于能够清晰可视化作用机制并能够调整治疗，它提供了"靶上、到位"作用的证据。对于患者，这可能意味着更个性化的治疗：如果可激活信号低，也许可以更早地转向不同的疗法。它还可以帮助剂量优化——例如，成像可能显示第二次剂量导致更好的肿瘤渗透，指导我们如何安排剂量。局限性包括成像的物理限制：光学信号在组织中的穿透深度有限。因此，深部肿瘤成像可能需要外科或内窥镜方法，或其他模式。另一个问题是定量：由于散射和吸收，荧光在体内很难定量，因此虽然它对于"观察"事物很好，但将其作为药物浓度或活性的严格测量可能很棘手。在临床环境中，可能以比较的方式使用这些信号。 总之，通过可激活荧光团进行实时监测正成为智能治疗剂设计不可或缺的一部分，它将药物从一个黑箱转变为关于其位置和作用信息的即时来源。对于条件性系统，这种反馈尤其关键，以确保一切按预期工作。随着该领域向前发展，我们可以预期临床肿瘤学将越来越多地借鉴分子成像的工具，可能使用诸如手持式荧光相机甚至可穿戴探测器来监测可激活治疗剂工作的"发光"。最终结果应该是更具适应性、影像引导的疗法——个性化医疗长期设想的目标——现在正通过这些技术实现。 07 条件激活抗体治疗剂的当前临床状态 条件激活抗体平台进入临床被认为是过去十年精准医学最重要的进展之一。在本节中，我们按抗体激活的潜在机制，对临床发展现状进行了最新分析。鉴于该领域的广度，讨论集中在代表性药物和试验上，而非详尽无遗的综述。抗体自激活平台被认为是条件激活抗体概念最纯粹的体现，当前处于临床开发阶段的主要平台和代表性候选药物总结于表2。 如表2所示，目前处于临床阶段的抗体自激活平台主要由三家公司的不同技术方法构成。CytomX的Probody平台拥有最多的候选药物，但其主要项目已终止，目前专注于CX-2051。虽然CX-072达到了>95%的受体占有率并证实了肿瘤特异性激活，但由于瘤内激活不完全、蛋白酶活性变异性和试验设计限制，未能证明其相对于现有PD-L1抗体的差异化临床获益。Adagene的SAFEbody平台已为ADG126生成了有前景的临床数据，尤其对其在免疫检查点抑制剂耐药肿瘤中的活性感兴趣。ADG126在与帕博利珠单抗联合治疗微卫星稳定结直肠癌中达到了29%的客观缓解率，并且在高达20 mg/kg的剂量下耐受性良好。 表 2. 临床阶段的条件性激活抗体治疗剂 BioAtla的pH激活系统提供了不依赖于蛋白酶的独特优势，BA3071在I期试验中5例患者中有2例有反应，证实了其与纳武利尤单抗联合的潜力。该平台利用蛋白质相关化学开关技术，使用碳酸氢盐和硫化氢等生理化学物质实现pH依赖性结合。在条件性激活抗体平台的早期临床试验中，几个值得注意的例子已经开始生成人体数据。CX-2029(靶向CD71的Probody ADC)在45例晚期实体瘤患者中进行了首次人体I期研究。大多数循环CX-2029保持掩蔽形式，检测到的游离一甲基奥瑞他汀E<4.3%，支持了预期的肿瘤选择性激活。剂量递增显示了可控的安全性，在鳞状非小细胞肺癌和头颈癌中观察到部分缓解，表明Probody ADC可以为原本"不可成药"的靶点(如CD71)拓宽治疗窗。另一个Probody例子，CX-072，正在晚期实体瘤和淋巴瘤患者中进行I/II期评估。早期数据显示，解掩蔽发生在肿瘤组织内，并且CD8+ T细胞扩增与部分患者的反应相关，表明在TME中发生了靶上激活。SAFEbody平台也已进入临床测试。ADG126报告了中期Ib/II期结果，显示出良好的安全性：在重复给药高达10 mg/kg时未观察到剂量限制性毒性，约11%的患者发生3级治疗相关不良事件，未观察到4/5级治疗相关事件。 总之，这些早期人体数据支持了条件性激活抗体/ADC的转化可行性：它们显示了可控的安全性、肿瘤选择性激活的证据以及初步的疗效信号。尽管如此，挑战仍然存在，包括患者队列小、蛋白酶活性的患者间异质性以及临床前效力与临床获益之间持续存在的差距。 条件性激活抗体平台已成为一种强大的方法，通过将抗体类药物的活性限制在病理部位来提高其治疗指数。通过利用TME独特的生化和生物物理特征，这些系统旨在实现对抗原结合和效应功能的精确时空控制，从而最小化脱靶毒性。最近的创新涵盖了从掩蔽策略和刺激响应连接子到ADC中的结构重排和有效载荷激活，拓宽了可激活设计的范围，涵盖了单克隆、双特异性和免疫细胞衔接抗体。 尽管取得了这些进展，但由于肿瘤异质性、触发因素丰度的变异性以及对可扩展、可重复制造工艺的需求，转化为临床成功仍然具有挑战性。未来的进展可能取决于多输入激活系统的开发、整合系统生物学和计算模型的预测设计工具，以及与靶向细胞因子和检查点抑制剂等其他治疗模式的协同组合策略。此外，整合实时成像和生物标志物监测可以为体内激活动力学提供关键反馈，从而实现适应性治疗策略。随着该领域向前发展，抗体工程师、肿瘤生物学家和临床医生之间的紧密跨学科合作对于充分实现可激活抗体平台在精准肿瘤学及其他领域的潜力至关重要。 参考文献 Conditionally Activatable Antibody Platforms: Mechanisms, Modalities, andClinical Translation Potential. BioDrugs. 2026, 40(1):79-108. https://doi.org/10.1007/s40259-025-00752-y 免责声明：推文基于已公开的资料信息撰写，仅用于知识分享和传递，任何情况下本文的信息或所表述意见均不构成对任何人的建议。如因版权等存在疑问，请于本文刊发30日内联系本公众号删除，更多精彩内容欢迎关注和分享公众号。