This study was evaluated the effect of dimethyl sulfoxide pretreatment on tensile bond strength and nanoleakage of resin composite bonded to aged dentin.

开始日期2025-09-01

申办/合作机构

Al-Azhar University

NCT06635382

/ Not yet recruitingN/AIIT

Clinical Evaluation of Dimethyl Sulfoxide Wet Bonding Technique: A Randomized Controlled Trial

Dimethyl sulfoxide (DMSO) wet bonding has shown promising results in several in vitro studies. However, there are a lack of clinical trials which prove the advantages of this technique. The aim of the study is to clinically assess the effect of DMSO wet bonding on composite restoration in non carious cervical lesions.

开始日期2024-10-20

申办/合作机构-

CTR20230607

/ SuspendedN/A

评价二甲基亚砜冲洗液膀胱内灌注治疗间质性膀胱炎（Hunner型）有效性和安全性的一项多中心、随机、双盲、安慰剂平行对照验证性临床研究

主要研究目的：评价膀胱内灌注二甲基亚砜冲洗液治疗间质性膀胱炎（Hunner型）的有效性。次要研究目的：评价膀胱内灌注二甲基亚砜冲洗液治疗间质性膀胱炎（Hunner型）的安全性。

开始日期2023-07-26

申办/合作机构

江苏朗研生命科技控股有限公司

100 项与二甲亚砜相关的临床结果

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100 项与二甲亚砜相关的转化医学

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项与二甲亚砜相关的文献（医药）

2026-06-01·CRYOBIOLOGY

Developing a cryopreservation protocol for the forest-forming seaweed Phyllospora comosa as a tool for restoration

Article

作者: Marzinelli, Ezequiel M ; Musrri, Catalina A ; Vergés, Adriana ; Venhuizen, Rachel ; Daly, Jonathan ; Wood, Georgina V ; O'Brien, Justine K

Global declines in seaweed forests are reducing genetic diversity and, consequently, the resilience of these habitats to changing environmental conditions. To conserve genetic diversity and secure these important coastal habitats, new preservation strategies are needed, such as cryopreservation. We aimed to develop a cryopreservation protocol for sperm and germlings of the fucoid seaweed Phyllospora comosa, a species highly vulnerable to anthropogenic stressors. We tested the cytotoxicity of cryoprotectant agents commonly used in seaweed cryopreservation (dimethyl sulfoxide, ethylene glycol, glycerol, methanol and propylene glycol). Non-lethal cytotoxic effects of cryoprotectants on germlings and sperm were observed, including a reduction in length (germlings), motility and concentration (sperm). Freezing trials resulted in post-thaw sperm survival. Best results were observed with 10% glycerol (final, v/v) under a freezing rate of -42.4 ± 5.7 °C/min, displaying 18.7% post-thaw motility and 1.5 × 10⁶ sperm/mL, compared to an initial motility of 44.9% and 6.4 × 10⁶ sperm/mL in untreated sperm samples. Germlings could not be revived after thawing, despite testing several freezing rates, cryoprotectant concentrations (5-30%), equilibration times (10-60 min) and added sugars. Our results demonstrate that live Phyllospora sperm can be recovered following cryopreservation, providing an opportunity to store diverse genotypes for breeding and enhancing genetic diversity in distant populations. However, further work is required to improve the efficiency of cryopreservation protocols and apply them in conservation practices. Our findings provide guidelines for future trials with Phyllospora and other fucoid species to incorporate cryopreservation techniques that help secure genetic diversity in the face of climate change.

2026-05-01·ANIMAL REPRODUCTION SCIENCE

Comparing the cryoprotective effects of glycerol and DMSO, with or without Equex, on Asian elephant (Elephas maximus) spermatozoa

Article

作者: Mahasawangkul, Sittidet ; Negus, Cameron ; Pinyopummin, Anuchai ; Bathgate, Roslyn ; Hobbs, Rebecca

Cryopreservation of Asian elephant semen remains problematic with respect to maintenance of both adequate semen quality and fertility post-thaw. The present study compared the effects of the penetrating cryoprotectants glycerol and dimethyl sulfoxide (DMSO) in the freezing extender, in conjunction with the surfactant Equex STM paste, on Asian elephant spermatozoa during freezing and thawing. Eight ejaculates from three mature bulls were used for this study. Semen was diluted with Tris egg yolk-based extender which contained either glycerol or DMSO, either with or without Equex, and frozen over liquid nitrogen in straws. Sperm motility, membrane, acrosome, and DNA parameters were assessed over 2 h incubation post-thaw to evaluate the cryoprotective capabilities of each freezing extender. Spermatozoa frozen with glycerol resulted in higher total (P < 0.001) and progressive (P < 0.05) motility compared to spermatozoa diluted with DMSO, regardless of Equex inclusion in the freezing extender. When in the presence of Equex, Asian elephant spermatozoa demonstrated higher proportions of viability (P < 0.001) and intact acrosomes (P < 0.001) post-thaw, regardless of the type of cryoprotectant. A large variance between individual bulls was noticed when assessing sperm DNA integrity, nevertheless freezing extender with glycerol plus Equex showed the highest proportion of spermatozoa with intact DNA after 2 h post-thaw (P < 0.05). Altogether, these results indicate a Tris egg yolk-based freezing extender containing cryoprotectants glycerol and Equex should be integrated into current Asian elephant semen cryopreservation protocols to yield the best sperm quality post-thaw and thus improve fertilising potential.

2026-05-01·AQUATIC TOXICOLOGY

Transgenerational effects of maternal exposure to diethyl phthalate (DEP) and dimethyl sulfoxide (DMSO) in zebrafish (Danio rerio)

Article

作者: Wu, Su-Mei ; Chuang, Hsin-Ju ; Huang, Chih-Jui ; Chiu, Ling

The diethyl phthalate (DEP) is a known disruptor of craniofacial chondrogenesis, and dimethyl sulfoxide (DMSO) is widely used as a co-solvent. However, whether there is an interaction between DMSO and DEP in the toxicological experiments warrants further investigation. The present study investigated the transgenerational effects on females (F0) exposed to aerated water (blank), DMSO (control), and DEP dissolved in DMSO (treatment) and employed RNA-Seq to analyze transcriptional changes in the F0 ovaries and in 24-hour post-fertilization (hpf) embryos from the F1 and F2 generations. In the ovary, compared between the control and treatment group, Cyp19a1a mRNA expression was upregulated by DMSO exposure and decreased through DEP exposure, which may be related to alterations in the methylation levels of the Cyp19a1a promoter. Either DEP or DMSO induced abnormal craniofacial cartilage development in the early larvae of the F2 generation. During oocyte maturation, DEP exposure markedly disrupted follicle activation and vitellogenin steps. Gene Ontology (GO) enrichment and the number of differentially expressed genes (DEGs) revealed that the F2 had higher influence levels than the F1. The influence on larval biological processes reveals that the DEP might modulate rather than exacerbate DMSO-induced changes. These findings suggest that DEP has transgenerational effects on aquatic vertebrates, while also highlighting that the influences of DMSO should not be overlooked in experimental designs.

150

项与二甲亚砜相关的新闻（医药）

2026-04-24

·精神障碍学习笔记

探索中医治疗双相障碍的规律

摘要研究目的：中医的整体诊疗模式可为双相障碍治疗提供辅助效益，但其临床案例高度分散，为转化研究带来挑战。本研究采用新型数据挖掘方法，旨在识别这些临床案例中的治疗规律及活性代谢物相互作用。材料与方法：通过DisGeNET和GeneCards数据库确定双相障碍相关靶点，从BATMAN-TCM 2.0数据库提取活性中药材。所有药材与疾病术语均依据《中华人民共和国药典（2020年版）》及医学主题词表进行标准化。利用Cytoscape构建网络模型，基于Python进行数据分析，并采用MTT细胞活性检测与qRT-PCR技术对SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞开展体外实验。结果：研究发现甘草、茯苓、黄连、柴胡、远志为双相障碍方剂中的核心药材。构建“药材-代谢物-靶点”互作网络，体外实验表明棕榈酸（PA）与硬脂酸（SA）对SH-SY5Y细胞的活力及基因表达具有剂量依赖性调节作用，qRT-PCR分析揭示二者对GABRA1与ESR1基因存在双向调控。结论：甘草、茯苓、黄连、柴胡、远志是治疗双相障碍的核心药材，其作用机制主要与调节γ-氨基丁酸A型受体及ESR1相关。注：ESR1是什么 ESR1 指的是雌激素受体α（Estrogen Receptor Alpha）基因。你可以把它简单理解为细胞里专门负责接收雌激素信号并指挥细胞活动的“指挥官”。1. 核心身份：基因与受体全称：Estrogen Receptor 1（基因名），编码产物为雌激素受体α（ERα）。功能：它是一种核受体。当体内的雌激素（如雌二醇）与其结合后，它会进入细胞核，像“开关”一样调控特定基因的表达，从而控制细胞的生长、分化和功能。2. 在双相障碍（BD）研究中的角色在你提供的文本中，ESR1 被鉴定为关键的药物靶点，这揭示了中医药治疗双相障碍的一种潜在机制：情绪调节的关键：大脑中的雌激素信号通路与情绪、认知功能密切相关。ESR1 的表达水平变化会直接影响神经递质的平衡，从而参与抑郁症和双相障碍的发病过程。中药的作用机制：研究发现棕榈酸（PA）和硬脂酸（SA）能显著上调 SH-SY5Y 细胞中的 ESR1 表达。这表明这些中药活性成分可能通过激活 ESR1 通路，发挥神经调节（Neuroregulatory）作用，帮助稳定情绪。3. 其他重要背景除了精神疾病，ESR1 在医学上最广为人知的应用是在乳腺癌领域：乳腺癌标志物：大约 70% 的乳腺癌细胞依赖雌激素生长，这类癌症被称为“ER阳性（ER+）”。治疗靶点：针对 ESR1 的拮抗剂（如他莫昔芬）是乳腺癌内分泌治疗的核心药物，通过阻断雌激素信号来抑制肿瘤生长。 1 引言双相障碍（BD）是一种慢性、复发性情感精神疾病，以躁狂与抑郁极端情绪波动为特征，严重影响患者的日常生活与整体健康（Smith 等，2012）。1990年至2019年间，全球双相障碍患者人数增长了59.3%，已超过3900万（Lai 等，2024）。此外，出生队列效应显示年轻群体患病率更高（Lai 等，2024），为疾病管理带来日益严峻的挑战。目前双相障碍的临床治疗手段包括心境稳定剂（锂盐、丙戊酸盐等）、抗精神病药（奥氮平、喹硫平等）、抗抑郁药（帕罗西汀、西酞普兰等）及心理治疗，但均有其局限性。丙戊酸盐易加重肝脏负担（Zhu 等，2024），锂盐可能导致肾毒性及甲状腺功能抑制（Phelps 与 Coskey，2024）。由于需密切监测剂量并长期用药，患者依从性常受影响（Chen 等，2022）。抗精神病药可能引发代谢紊乱（如体重增加、糖脂异常）及认知副作用（Solmi 等，2024；Wong 等，2024），在老年与儿童群体中耐受性有限。抗抑郁药仅适用于双相障碍抑郁发作期，且疗效尚存争议（Gottlieb 与 Young，2024）。心理治疗起效缓慢，通常需长期密集干预（Miklowitz 等，2021）。临床实践亟需开发安全、长效、温和且能多维调节功能的辅助疗法——中医药在此领域展现出显著潜力。中医药凝聚了数千年积累的独特知识与临床实践体系（Dong，2013）。其强调整体平衡的健康观，为应对双相障碍的复杂性提供了新思路（Zhang 等，1994）。中医认为双相障碍病机源于情志失调、气血失和、阴阳失衡及脏腑功能紊乱，将情绪波动视为身心失衡的外在表现，而非孤立的神经生化异常（Chen 等，2024）。中医药治疗具有多靶点作用（Lo 等，2023）、整体调节（Xi 等，2025）、辨证论治个体化（Li 等，2021）等特点，可同步调节神经递质、内分泌与免疫功能，且副作用较小（Deng 等，2022）。这些优势使其在改善情绪稳定性、提高治疗依从性及减轻副作用方面具有独特价值，尤其适用于维持期干预与长期情绪稳定治疗。因此，借鉴中医临床经验为双相障碍新药研发提供了重要启示。然而，将中医实践转化为有效临床干预仍面临多重障碍。首要挑战在于中西医之间的理念差异（Dong，2013）。中医从系统平衡角度理解心理健康，其在循证医学框架中的有效性常受质疑（Zhao 等，2023）。此外，中医诊疗方法的多样性（包括诊断标准与治疗策略的差异）导致临床实践不一，标准化治疗方案难以建立（Che 等，2024）。尽管存在挑战，中医文献中仍记载了大量宝贵的临床经验，尤其在中药复方与案例治疗双相障碍方面。然而，由于缺乏系统化分析整合这些数据的方法，其潜力未能充分发挥（Chen 等，2024）。本研究旨在运用生物信息学、机器学习与网络药理学，构建数据挖掘驱动的研究方法，系统整合中医知识用于双相障碍治疗，并通过靶点实验验证筛选结果，为开发新型治疗方案奠定基础。通过融合传统智慧与现代科学技术，本研究致力于弥合经验认知与临床应用之间的鸿沟，最终为双相障碍药物研发开辟新视角。 2 材料与方法 2.1 试剂 Dulbecco改良 Eagle 培养基（DMEM）与胎牛血清（FBS）购自 Gibco（美国）。青霉素/链霉素（P/S）、二甲基亚砜（DMSO）及 MTT 试剂购自 Sigma-Aldrich（美国）。棕榈酸（PA）与硬脂酸（SA）购自成都 Must 生物科技有限公司。TRIzol 与 qRT-PCR 相关试剂（逆转录酶、SYBR Green）购自 Thermo Fisher Scientific（美国）。 2.2 方剂与药材筛选方剂筛选通过文献综述完成，具体筛选标准见图1。为符合本研究旨在评估口服中药治疗双相障碍疗效的目的，我们仅纳入报告阳性结果的对照临床研究。非口服干预（如针灸、熏蒸、中医心理治疗）、综述、数据挖掘分析、临床前研究（如细胞或动物实验）以及结果阴性的试验均被排除。根据筛选标准，共纳入34首方剂。依据《中华人民共和国药典（2020年版）》，所有方剂中的药材成分均统一为标准拉丁学名。 2.3 方剂组方规律分析使用 Python 分析各味药材的出现频次，以及不同方剂中药味数量的分布情况。选取出现频次排名前20的药材进行层次聚类分析。为揭示药材间的配伍规律，采用 Apriori 算法对这些药材进行关联分析，并筛选出核心药材用于后续研究。层次聚类用于识别临床常用的药材组合，以揭示中医实践中常见的处方模式。Apriori 算法进一步挖掘具有统计学意义的药对，从而突显治疗策略中潜在的协同作用关系。两种方法结合，共同揭示了常用药材在统计上的共现规律，有助于识别实际方剂中潜在的协同关系，从而筛选出最具代表性的治疗双相障碍的核心药材。图1 文献筛选流程图本图汇总了在五大数据库中筛选中医临床研究的标准流程。经逐步排除不相关文献、非口服干预及无明确疗效记录的研究后，从1,510篇文献中最终确定34个治疗双相障碍的口服中药复方纳入分析。 2.4 双相障碍相关生物信息学靶点筛选采用两个基因-疾病关联数据库，即DisGeNET（Pinero等，2020）和GeneCards（Stelzer等，2016）进行双相障碍相关靶点筛选。双相障碍的标准化术语依据医学主题词表（MeSH）（Baumann，2016）定义，具体检索词详见附表S1。将这些术语依次输入两个数据库，检索相关基因与蛋白质。在各自数据库内，将不同检索词获得的结果取并集合并。两数据库结果的交集被确定为双相障碍相关基因/蛋白质靶点。 2.5 核心药材的生物信息学功能分析为深入理解这些核心药材治疗双相障碍的生物学机制，我们通过BATMAN-TCM 2.0数据库（Kong等，2024）分别检索各核心药材的活性代谢物及其作用靶点。将双相障碍相关靶点与各药材代谢物靶点取交集，作为该药材的潜在作用靶点。随后，对这些潜在作用靶点进行基因本体（GO）功能和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。 2.6 核心药材的网络药理学分析为精准识别核心药材的关键互作代谢物与潜在作用靶点，并揭示其多靶点作用特性，我们对核心药材进行了网络药理学分析。构建了完整的“药材-代谢物-靶点”网络，并突出显示了关键代谢物与核心靶点。本研究所有网络可视化分析均通过Cytoscape 3.10.2软件完成。 2.7 细胞培养 SH-SY5Y细胞（一种人神经母细胞瘤细胞系）于含10%胎牛血清、1%青霉素/链霉素及1% L-谷氨酰胺的DMEM（葡萄糖浓度4.5 g/L）培养基中培养。细胞置于37°C、湿度适宜、含5% CO₂的培养箱中培养，每2-3天更换一次培养基。使用0.25%胰蛋白酶-EDTA以1:3至1:5的比例进行细胞传代。图2 中药组成统计 A. 单方药味数量分布：多数方剂包含10-13味药材，最高达17味。 B. 药材使用频次统计：甘草、茯苓、黄连、柴胡、远志为最常用药材，提示其在中医治疗双相障碍中可能具有核心作用。 2.8 MTT细胞活性测定将SH-SY5Y细胞以每孔1×10⁴个的密度接种于96孔板，贴壁培养24小时。分别用不同浓度的PA（0、10、20、40、80、100 μM）或SA（0、10、20、40、80 μM）处理细胞24小时。每孔加入10 μL MTT溶液（5 mg/mL），避光孵育4小时。弃去培养基，每孔加入100 μL DMSO溶解甲瓒晶体，轻轻振荡10分钟。使用酶标仪在570 nm波长处测定吸光度。细胞活性以对照组为100%进行计算。 2.9 qRT-PCR分析使用TRIzol试剂提取总RNA；取1 μg RNA采用高容量cDNA逆转录试剂盒进行逆转录；使用SYBR Green预混液及以下引物进行扩增：GABRA1反应程序：95°C预变性10分钟，随后进行40个循环（95°C 15秒，60°C 1分钟）。采用2(-ΔΔCt)法分析数据。 2.10 统计分析药材频次分析采用Python的Pandas和Counter模块，统计各药材在所选方剂中的出现次数。层次聚类分析使用SciPy库，采用Ward连接法和欧氏距离。利用Seaborn绘制热图以可视化药材共现模式。关联分析中的Apriori算法通过Mlxtend Python模块实现，设定支持度≥15%、置信度≥80%、提升度≥1.2作为有意义关联的阈值。数据库筛选中，GeneCards仅选取关联评分前1000的靶点；DisGeNET设定基因-疾病关联评分>0.5为阈值。BATMAN-TCM数据库的药材-靶点预测以评分≥0.84、校正p值<0.05为筛选标准。GO与KEGG富集分析采用clusterProfiler R包完成，校正p值<0.05的条目视为显著富集。实验数据均以均值±标准误表示。多组间比较采用单因素方差分析与Dunnett多重比较检验，通过GraphPad Prism 10.0软件（美国）完成。p值<0.05视为具有统计学显著性。 3 结果 3.1 方剂统计与组方规律分析结果各方剂药材数量分布见图2A，前三高频区间已高亮标出。使用频次前五的药材为甘草、茯苓、黄连、柴胡、远志。方剂药材数量分布详见图2B。层次聚类分析中，具体聚类过程与距离阈值选择见图3A、B。药材关联分析中，前10味药材的关联热图如图4A所示。多数药材在共现关系中呈微弱负相关，可能反映了一定的相互替代效应。然而，石菖蒲与远志等组合表现出强正相关，形成了药对协同关系。为进一步探索方剂规律并确定核心药材，我们进行了Apriori关联分析。Apriori关联分析可视化结果见图4B。在该网络中，五个节点处于核心位置，即甘草、茯苓、黄连、柴胡、远志，这也是此前识别出的前五位高频药材。这五味药材的紧密互作与高频出现构成了绝对核心。图3 常用药材聚类分析 A. 基于方剂中前20味药材共现模式的层次聚类树状图聚类结果以色标区分，可观察到明显的分组模式，其中包括甘草与茯苓、远志与石菖蒲形成的紧密聚类。 B. 不同距离阈值下的聚类数量变化当距离阈值设定为2.5时，可识别出五个明显聚类：聚类1：甘草、茯苓聚类2：柴胡、栀子、黄连聚类3：大黄、当归聚类4：石菖蒲、远志聚类5：其余药材（含黄芩、白芍等） 3.2 双相障碍潜在药物靶点鉴定 DisGeNET与GeneCards数据库靶点的交集构成双相障碍相关靶点集。将该靶点集与药材代谢物靶点集取交集后，得到140个可作用靶点。 3.3 潜在靶点的功能富集分析 GO与KEGG富集分析结果分别见图5、图6。GO富集结果显示，这些靶点主要参与大脑神经元间信号传递与调节机制，尤其与学习、记忆、认知等功能相关。KEGG通路富集结果表明靶点涉及多种脑内神经递质系统与信号机制，重点关注情绪调节、学习记忆及成瘾相关通路。这揭示了五种核心药材的活性代谢物如何影响脑功能，也是其治疗双相障碍的主要作用机制。 3.4 综合网络分析结果网络药理学分析表明，在众多代谢物中作用最广泛、最核心的代谢物为组胺、棕榈酸、硬脂酸与桦木醇。最关键的可作用靶点为ESR1、GABRB3、GABRB1、GABRB2、GABRA5与GABRA1。大量多来源代谢物体现了中药复方的协同作用特性，具体网络见图7。 3.5 PA与SA对SH-SY5Y细胞活性的影响 MTT实验显示，PA（10、20、40、80 μM）与SA（10、20、40 μM）对SH-SY5Y细胞活性无显著影响（图8A）。而100 μM PA显著降低细胞活性，80 μM SA亦表现出抑制作用（p < 0.01，图8A）。 3.6 PA与SA调控GABRA1与ESR1表达 qRT-PCR结果表明，PA对GABRA1基因表达具有双向调节作用：低浓度（10、20 μM）可上调其表达，高浓度（80 μM）则下调表达（p < 0.01，图8B），同时上调ESR1表达（20、40 μM）（p < 0.01，图8C）。相反，SA（10、20 μM）能显著提升GABRA1（p < 0.01，图8B）与ESR1（10、20 μM）的表达水平（p < 0.01，图8C）。 4 讨论中医药积累了丰富的临床经验，但由于辨证论治缺乏标准化，这些知识难以有效转化为药物研发思路。传统方法导致临床数据存在大量重复与干扰。中医师根据个人经验与临床风格对方剂进行调整，进一步增加了复杂性（Zhuang等，2021）。中医药在整体调节双相障碍方面具有潜在优势，如改善睡眠、情绪波动及减轻代谢副作用，特别适用于辅助缓解锂盐、抗精神病药等标准药物的副作用（如失眠、认知损害），但存在起效慢、缺乏标准化等问题。虽然标准药物治疗能快速控制急性发作、降低自杀风险，但长期使用可能导致肾脏损害、尿崩症、锂中毒及体重增加等副作用。未来需要通过多中心随机对照试验验证中西医结合的协同疗效，延长缓解期，并运用组学技术分析中药的多靶点机制，推动循证医学与传统医学的融合，实现个体化分层治疗。尽管已有一些关于中医药治疗双相障碍的研究，但此前缺乏涉及多临床项目的系统性数据挖掘研究。我们的工作填补了这一空白。我们采用多种统计方法与机器学习算法进行数据挖掘驱动的整体分析，揭示了中医药治疗双相障碍的用药规律。本研究基于数百例临床有效病例数据，显著提升了研究结论的可靠性。这凸显了数据挖掘方法利用大样本数据减少个体实验随机性或偏倚的优势。图4 关键药材的相关性与关联分析（A）相关性热图展示了前10味高频使用药材的两两共现关系，多数药材对呈现微弱或负相关，而石菖蒲与远志等组合显示出强正相关。（B）Apriori关联网络揭示了具有统计学意义的药对规则，其中甘草、茯苓等核心药材在方剂设计中处于枢纽地位。图5 基因本体（GO）富集分析（A–C）可作用靶点富集GO条目的网络图，按生物过程、细胞组成、分子功能分类展示；（D）三类富集中排名前列GO条目的柱状图，包括与突触传递、认知功能及膜电位调节相关的条目。图6 潜在药物靶点的KEGG通路富集分析 (A) 弦图：展示了核心KEGG通路及其涉及的、与双相障碍相关神经过程有关的基因。(B) 气泡图：展示了富集的通路，其中气泡大小代表涉及的基因数量，颜色深浅代表统计学显著性（p值）。图7 核心药材、活性代谢物与双相障碍相关靶点的网络药理学图谱本网络图可视化呈现了五种核心药材（黄色五边形）、其活性代谢物（不同颜色圆形）与双相障碍相关可作用靶点（红色三角形）之间的相互作用关系。源于多味药材的多来源代谢物以大尺寸圆形突出显示于图中心位置。红色三角形靶点的大小与其度中心性成正比，节点越大提示其潜在治疗意义越显著。其中GABRA1、GABRB2、ESR1等核心靶点占据显著位置且连接密集，而棕榈酸、硬脂酸、桦木醇、组胺等主要生物活性成分则在多通路中呈现广泛相互作用。整体网络拓扑结构展现出多层次调控模式，体现了中药复方治疗双相障碍复杂、多靶点的药理作用机制。图8 棕榈酸（PA）与硬脂酸（SA）对SH-SY5Y细胞的作用（A）MTT实验显示，除高浓度（PA 100 μM，SA 80 μM）外，PA与SA对SH-SY5Y细胞活性均无显著抑制作用；（B）GABRA1相对mRNA表达水平变化，表现为PA的双向调节（低浓度上调、高浓度下调）与SA的持续上调作用；（C）中低浓度PA与SA均可显著上调ESR1表达，提示其可能通过受体介导发挥神经调节作用。图中“##”表示与对照组相比具有统计学显著下调，“pp”表示显著上调。本研究通过系统分析过去十年间治疗双相障碍的34首不同方剂，利用数据挖掘驱动分析方法发现其普遍遵循以五类核心药材为基础的配伍规律。频次分析显示这五类药材存在显著富集现象，聚类分析可将其与其他药材明显区分，关联分析进一步凸显了它们在方剂网络中的核心地位及其相互作用关系。这些核心药材可能成为未来提取活性代谢物与开发新药的关键基础。本研究识别出的甘草、茯苓、黄连、柴胡、远志这五味核心药材，体现了中医辨证论治与药证对应的传统理论。中医认为双相障碍病机主要责之于心肝失调、痰火扰神、阴阳失衡、神志不宁，常见证型包括肝气郁结、痰火扰心、心脾两虚、阴虚内热、心肾不交等。柴胡长于疏肝解郁（Zhong等，2024）；黄连清心泻火、安神定志，适用于痰火内扰及阴虚热亢所致的躁扰不宁（Wang等，2018）；茯苓健脾利湿、宁心安神，常用于认知功能减退及情绪不稳（Hao等，2021）；远志既能交通心肾又可开窍醒神，对心肾不交相关的认知与情绪症状具有改善作用（Liu等，2021）；甘草则能调和诸药、缓急和中，增强方剂协同效应（Li等，2019）。这些药材共同作用于心、肝、脾、肾等关键脏腑系统，发挥安神、调志、清热、化痰等多维度治疗作用。需特别说明的是，本研究采用数据挖掘驱动分析方法而非严格遵循传统中医理论框架，因此如甘草、茯苓等虽在传统理论中主要起调和或辅助作用而非直接治疗情志疾病，仍因其在实际方剂中的高频出现而被保留，以真实反映临床用药规律。利用数据库筛选疾病相关靶点与代谢物是药物研发的常规技术，而本研究构建的数据挖掘分析流程突破了现有生物信息学方法的若干局限。这种综合分析方法帮助我们锁定了高置信度的疾病靶点，为后续研究奠定坚实基础。例如在双相障碍相关基因分析中，我们识别出关键模块与枢纽基因，其重要性已获既往研究佐证。同时，本研究为药物研发提供了临床视角的启示。以GABRB2在情绪稳定中的作用争议为例（Gao等，2022），早期研究认为其作用不显著，而后继研究显示丙戊酸等代谢物可通过GABRB2相关通路改善双相障碍症状（Chen等，2009）。我们基于大样本数据的挖掘分析进一步确认了GABRB2在双相障碍病理机制中的关键作用。为验证生物信息学预测结果，我们采用SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞系（研究神经元功能与药物反应的经典模型）开展体外实验。根据网络药理学分析中与核心靶点（GABRA1与ESR1）的高相互作用评分，我们选取棕榈酸与硬脂酸进行实验。剂量效应研究表明，在模拟生理浓度的剂量范围内，棕榈酸与硬脂酸可依据浓度差异对GABRA1与ESR1产生双向调节作用。这种双向调节特性对双相障碍治疗尤为重要，因为GABA活性的精准调控至关重要：较低剂量可能增强GABA活性产生镇静效果，较高剂量则可抑制过度活跃的GABA能防止情绪抑郁。这些发现不仅印证了网络预测的中药代谢物协同效应，揭示了核心药材调控神经精神关键靶点的作用机制，也为基于中医药的双相障碍精细化管理提供了新思路，同时凸显了中药复方剂量优化的重要性。本研究也存在一定局限。数据挖掘分析基于中文文献记载的临床案例，虽然中医药在亚洲具有悠久广泛的应用历史，但其在不同人群中的适用性仍待验证。疾病相关基因筛选依赖DisGeNET与GeneCards数据库，虽然两者均为权威综合数据库，但未提供基因/靶点来源的人群学信息。此外，数据挖掘与网络分析本质上具有高预测性，其结果需审慎解读。因此，尽管本研究提供了细胞水平验证，其在不同人群特征群体中的疗效仍需谨慎评估。未来研究将通过动物实验及不同表观遗传条件下的药代动力学分析，全面评估研究结果的可靠性与普适性。 5 结论中医治疗双相障碍以甘草、茯苓、黄连、柴胡、远志五味核心药材为基础，其治疗作用主要通过调控GABRA1与ESR1实现。

基因疗法

2026-04-23

·华测医药

聚焦CRO丨不容忽视的细节：hERG体外电生理安全评价中溶媒的选择与考量

hERG 钾通道抑制活性评估是新药心脏安全性评价的关键环节。在体外电生理研究中，溶媒的选择直接影响电流记录的准确性与结果的可靠性。本文在系统回顾常用溶媒类型及其对 hERG 电流影响的基础上，结合苏州华测生物（以下简称本中心）近三年开展的 hERG 评价实验数据与已发表文献证据，重点分析了 DMSO、HP-β-CD 及 Tween 80 等溶媒在实际操作中的干扰特征、耐受浓度与化合物结合遮蔽风险。本中心数据显示： 0.3% DMSO 对 hERG 电流的平均抑制率为（3.8±1.2）%，1.0% DMSO 上升至（9.2±2.1）%； HP-β-CD在≤10 mg/ml 时抑制率＜5%，且对高疏水化合物的增溶效果优于 DMSO，但高浓度 HP-β-CD（＞60 mg/ml）会与药物形成包合物、显著降低 hERG 抑制检测灵敏度； Tween 80 在 0.001% 时即产生（15.4±3.2）% 的抑制，不推荐使用。药物诱导的QT间期延长是导致尖端扭转型室性心动过速的重要风险因素，而hERG钾通道的抑制被认为是药物致QT间期延长的主要机制。ICH S7B指导原则明确要求对新化学实体进行hERG通道阻断作用的体外评价。全细胞膜片钳技术是评估hERG电流抑制活性的金标准方法，但许多新化学实体存在水溶性不足的问题，需要借助溶媒增溶。尽管已有文献报道了常用溶媒对 hERG 电流的影响特征，但不同实验室采用的细胞系、记录温度、膜片钳系统（手动或自动）差异较大，文献中的安全浓度范围难以直接套用。同时，环糊精类溶媒除直接抑制电流外，还可与药物形成包合物、降低游离药物浓度，造成 hERG 抑制效力低估与假阴性风险，这一关键风险在常规实践中易被忽视。为此，本中心基于近三年积累的 120 多个受试化合物、涉及 6 种溶媒的 hERG 评价数据，结合最新文献证据，对溶媒的实际干扰规律进行了系统总结。本文旨在结合这些内部数据与外部关键证据，对溶媒选择的核心考量因素进行优化阐述，并提供更具操作性的实验建议。常用溶媒的类型及对hERG电流的影响文献与内部数据对比 01 水溶性有机共溶剂：以DMSO为例文献已知：Himmel（2007）报道DMSO在HEK293细胞中对hERG电流的IC₂₀约为1.2%（体积比），Du等（2006）发现通过内外液等量添加DMSO可补偿渗透压效应，将耐受浓度提升至2%。本中心数据：本中心采用手动膜片钳全细胞模式（HEK293-hERG稳转细胞株，记录温度：室温），对不同浓度DMSO在细胞外液中的影响进行了系统测定（n=8~12个细胞/浓度）。结果显示：当采用Du等（2006）的内外液等量添加策略（即细胞外液和电极内液均含相同浓度DMSO）后，2% DMSO对尾电流的抑制率降至8.3%±2.0%，封接失败率下降至8%。这表明渗透压补偿策略在本中心同样有效，且可将安全DMSO浓度上限从常规的0.3%~0.5%扩展至1%~2%。实践建议：对于常规溶解性较好的化合物，优先使用0.1%~0.3% DMSO；对于需更高浓度的难溶化合物，建议采用内外液同步添加等渗策略，并将DMSO浓度控制在1%以内（抑制率＜10%）。 02 复合载体： HP-β-CD与BSA 文献已知：Himmel（2007）报道 HP-β-CD 的 IC₂₀为 11 mg/ml，BSA 的 IC₂₀为 50 mg/ml；Mikhail 等（2007）证实，HP-β-CD（1%~6%）可直接抑制 hERG 电流、加速尾电流失活，并与特非那定、西沙必利、E-4031 等 hERG 抑制剂形成包合物，导致 IC₅₀显著右移（最高达 266 倍），造成 hERG 抑制效力严重低估与假阴性。本中心数据：本中心对HP-β-CD（Sigma，≥98%）进行了剂量-效应验证（n=6~10）。结果如下：在评价一个高疏水性化合物（logP > 5）时，我们发现使用 0.5% DMSO 无法完全溶解10 μM 浓度的该化合物（出现沉淀），而改用 5 mg/ml HP-β-CD 后，药物完全溶解且 hERG 抑制率测定结果与采用更高浓度 DMSO（2% 等渗）测得的结果高度一致（IC₅₀相差≤1.5 倍）。但需警惕：高浓度 HP-β-CD（＞60 mg/ml）会通过包合作用降低游离药物浓度，使得 hERG 抑制效力被低估，可能遗漏潜在心脏风险。因此，对于极端疏水化合物，HP-β-CD 可作为 DMSO 的有效替代或补充，但必须严格控制浓度≤10 mg/ml，并建议用 LC-MS/MS 检测实际药物浓度。 BSA数据：本中心在含0.1%、0.5%、1% BSA的细胞外液中进行对照实验，发现BSA对hERG电流抑制率均＜2%，且能减少某些高蛋白结合化合物的非特异性吸附，推荐在模拟生理条件的研究中使用0.1%~0.5% BSA。 03 表面活性剂：应避免使用文献已知：Cremophor EL、Tween 20、Tween 80在极低浓度（0.001%~0.07%）即可显著抑制hERG电流。本中心曾对3个早期化合物尝试使用0.001% Tween 80作为助溶剂，结果发现： Tween 80 0.001%单独作用下，hERG尾电流抑制率达15.4%±3.2%（n=6）；含0.001% Tween 80的受试化合物溶液所测得的IC₅₀值，比改用0.3% DMSO溶解时偏低约3~5倍；进一步实验证实该差异来源于Tween 80本身的抑制，而非化合物效力的真正提高。基于此，本中心自2025年后hERG体外电生理评价中不使用任何非离子表面活性剂作为溶媒或助溶剂。若化合物溶解性极差，优先采用BSA或内外液等渗DMSO策略。结语与展望基于文献系统回顾与本中心120多项实验数据的整合分析，我们得出以下核心结论与优化建议： DMSO仍是首选的有机共溶剂，在0.1%~0.3%范围内安全可靠；当需要更高浓度时（1%~2%），内外液等量添加等渗策略可有效控制电流干扰，但需验证抑制率<10%。 HP-β-CD（5~10 mg/ml）是理想的替代或补充溶媒，尤其适用于极端疏水性化合物，其本底干扰低且与手动膜片钳兼容性良好。严禁使用＞60 mg/ml 的HP-β-CD，避免因直接电流抑制与药物包合双重作用导致结果误判。表面活性剂类（Tween、Cremophor EL）应完全避免用于hERG体外电生理评价。检测实际药物浓度（LC-MS/MS法）对于溶解性差的化合物至关重要，可显著提高IC₅₀测定的准确性，避免导致结果的误判。未来，随着 CiPA 策略的推广和体外最佳实践的要求，溶媒的规范化要求将进一步提高。本中心计划进一步积累不同溶媒在手动膜片钳系统中的干扰数据库，重点完善HP-β-CD 浓度-包合效应-检测偏差的定量关系，并探索新型环糊精衍生物（如磺丁基-β-环糊精）的应用潜力，以推动 hERG 安全评价更加准确、高效、标准化。往期推荐聚焦CRO丨非临床毒理学试验中全切片成像的应用：问答（行业指南）聚焦CRO丨浅谈抗Aβ淀粉样蛋白单克隆抗体的药物非临床研究聚焦CRO｜关注生物类似药：非临床安全性评价的设计思路与关键要素聚焦CRO｜细胞基因治疗产品安全药理学研究的考量业务咨询请扫码联系：丁博士 📞 138-6209-8946 📧 dingzhijia@cti-cert.com 参考文献： [1] Himmel H M. Suitability of commonly used excipients for electrophysiological in-vitro safety pharmacology assessment of effects on hERG potassium current and on rabbit Purkinje fiber action potential. J Pharmacol Toxicol Methods, 2007, 56(2): 145-158. [2] Du X, Lu D, Daharsh E D, et al. Dimethyl sulfoxide effects on hERG channels expressed in HEK293 cells. J Pharmacol Toxicol Methods, 2006, 54(2): 164-172. [3] Mikhail A, Fischer C, Patel A, et al. Hydroxypropyl β-Cyclodextrins: A Misleading Vehicle for the In Vitro hERG Current Assay. J Cardiovasc Pharmacol, 2007, 49(5): 269-274. 声明： 1、本文内容仅供技术交流学习，原创不易，欢迎转发至朋友圈； 2、如需转载请注明出处，或后台联系我们获得授权。 #hERG体外电生理 #溶媒 #DMSO #HP-β-CD #Tween 80 专题集锦关于华测医药华测医药是上市企业华测集团在医药及医学服务领域的重要布局，在医药领域，可提供从药物研发到商业化的全链条解决方案。包括临床前CMC研究、药代动力学研究、非临床GLP安全性评价研究、临床生物样本分析、药品检测及注册申报等服务。非临床药代动力学体外药代：代谢稳定性 (微粒体/S9/肝细胞/血浆/全血)、P450酶抑制 (包括TDI)、P450酶诱导、血浆蛋白结合率 (血浆/组织/微粒体)、红细胞/血浆分配比、Caco-2/MDCK渗透性、ABC和SLC转运体抑制试验、ABC和SLC转运体底物试验、P-gp/BCRP/OATs/OCTs/OATPs/MATEs/BSEP/MRPs、体外代谢产物鉴定体内药代：大、小动物体内吸收试验、组织分布、排泄研究、体内代谢产物鉴定体内药物相互作用、血脑屏障通透性（体内部分）、荷瘤鼠PK/PD GLP项目资质：单次给药毒性试验（啮齿类、非啮齿类）、多次给药毒性试验（啮齿类、非啮齿类）、生殖毒性试验（Ⅰ段，Ⅱ段，Ⅲ段）、遗传毒性试验（Ames/微核/染色体畸变）、局部毒性试验、免疫原性/免疫毒性试验、安全性药理试验、毒代动力学试验、致癌试验药学CMC研究服务合成研究制剂研究质量研究临床研究咨询及代持药品检测服务原辅料检测元素杂质研究微生物测试（无菌、微生物限度、内毒素、菌种鉴定、噬菌体、支原体）相容性研究/可提取物与浸出物研究大分子结构表征大分子纯度与杂质研究密封性研究无菌过滤器验证公用系统验证（洁净室验证、设备验证、水系统验证、消毒剂效力验证、软件验证）体外技术研发服务细胞库检定干细胞质量检定免疫细胞质量检定外泌体质量检定生物学活性检测生物安全性检测生物原辅料测试生物分析服务分子平台(PCR、NGS)：药物基因检测、预测性生物标志物检测病理平台：常规病理、免疫组化、FISH、组织特染ELISA、MSD平台：抗体、融合蛋白、多肽、ADC等检测免疫分析平台：免疫原性、标志物分析生化分析平台：安全性生物标志物检测微生物平台：细菌、真菌等检测质谱、色谱分析平台：PK/PD分析

2026-04-19

·有驾

细胞保藏新标杆：SK-OV-3人卵巢腺癌细胞种子库建设指南

卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，其发病率位居妇科恶性肿瘤第三位，死亡率却高居首位，严重威胁女性生命健康。由于卵巢癌早期症状隐匿，约70%的患者确诊时已处于晚期，5年生存率仅为30%左右，因此深入探究卵巢癌的发病机制、开发早期诊断技术和高效治疗药物迫在眉睫。 SK-OV-3人卵巢腺癌细胞系是研究卵巢癌的经典细胞模型，该细胞系由Trempe G和Old LJ在1973年从一位64岁白人女性卵巢腺癌患者的腹腔积液分离得到，保留了卵巢腺癌细胞的恶性生物学特性，同时对肿瘤坏死因子和几种细胞毒性药物（包括白喉毒素、顺铂和阿霉素）耐受，在裸鼠中成瘤且形成与卵巢原位癌一致的中度分化腺癌。SK-OV-3细胞被广泛应用于卵巢癌发病机制研究、抗肿瘤药物筛选、耐药机制解析及肿瘤标志物鉴定等领域，为卵巢癌研究提供了重要的实验工具。细胞种子库的常年保种是保障SK-OV-3细胞资源持续、稳定供应的核心环节，对于维持细胞的生物学特性、确保实验结果的可靠性和可重复性至关重要。建立一套科学、完善的SK-OV-3 Cells人卵巢腺癌细胞种子库常年保种技术体系，不仅能为科研机构、制药企业和临床研究团队提供高质量的细胞资源，推动卵巢癌及相关疾病的研究进展，还能为卵巢癌的早期诊断、靶向治疗及药物研发等领域奠定坚实基础。 1.2 国内外研究现状在国外，美国典型培养物保藏中心（ATCC）、欧洲细胞培养物保藏中心（ECACC）、上海宾穗生物细胞库等知名细胞保藏机构，拥有先进的细胞保种技术和完善的质量管理体系，SK-OV-3细胞作为常用的卵巢癌研究模型，在这些机构中得到了规范的保藏和管理。这些机构通过严格的细胞鉴定、质量控制和标准化的保种流程，确保了SK-OV-3细胞的生物学特性稳定，为全球科研人员提供了可靠的细胞资源。此外，国外针对SK-OV-3细胞的基础研究较为深入，在肿瘤发病机制、药物筛选等方面取得了一系列成果，为细胞保种的技术优化提供了理论支撑。在国内，随着生命科学研究的快速发展，细胞保藏事业也取得了长足进步，部分科研机构和细胞库也保藏有SK-OV-3细胞，并建立了相应的保种技术流程。然而，与国外先进水平相比，国内在细胞保种技术的创新、质量管理体系的完善以及细胞资源的共享利用等方面仍存在一定差距。针对SK-OV-3细胞的专门保种研究相对较少，缺乏系统的保种技术体系和统一的质量标准，这在一定程度上限制了SK-OV-3细胞在国内科研和临床应用中的推广。 1.3 研究目的与内容本研究旨在建立一套科学、完善的SK-OV-3 Cells人卵巢腺癌细胞种子库常年保种技术体系，明确保种过程中的关键技术参数和质量控制标准，确保SK-OV-3细胞在长期保藏过程中保持其生物学特性稳定。具体研究内容包括：SK-OV-3细胞的生物学特性分析；细胞种子库保种的关键技术研究，包括培养基优化、冻存液配方筛选、冻存与复苏技术优化等；保种过程中的质量控制体系建立；以及SK-OV-3细胞种子库的应用价值评估。二、SK-OV-3 Cells人卵巢腺癌细胞的生物学特性 2.1 细胞来源与建系背景 SK-OV-3细胞系由Trempe G和Old LJ在1973年从一位64岁白人女性卵巢腺癌患者的腹腔积液分离得到。经过长期的体外培养和传代，SK-OV-3细胞成为永生化细胞系，能够在实验室中稳定传代培养，为卵巢癌的研究提供了理想的体外模型。目前，SK-OV-3细胞主要来源于ATCC、ECACC等国际知名细胞库，科研人员可通过复苏或冻存形式获取该细胞。 2.2 细胞形态与生长特性 SK-OV-3细胞呈上皮样形态，贴壁生长，显微镜下观察可见细胞呈多边形或不规则形，细胞排列紧密，边界清晰，常呈片状生长。该细胞系生长速度较快，在适宜的培养条件下，细胞倍增时间较短，当细胞密度达到80%-90%时需要进行传代，推荐传代比例为1:2-1:6，每周换液2-3次。 2.3 细胞功能与标志物表达 SK-OV-3细胞保留了卵巢腺癌细胞的恶性特征，具有无限增殖的能力，能够在体外长期传代培养，在裸鼠体内可形成中度分化的腺癌，模拟体内卵巢癌的发生发展过程。同时，SK-OV-3细胞对肿瘤坏死因子和几种细胞毒性药物（包括白喉毒素、顺铂和阿霉素）耐受，这一特性使其成为研究卵巢癌耐药机制的重要模型。在标志物表达方面，SK-OV-3细胞表达多种与卵巢癌相关的标志物，如癌抗原125（CA125）、人附睾蛋白4（HE4）等，这些标志物的表达能够反映细胞的起源和恶性特征，为细胞鉴定和研究提供重要依据。 2.4 细胞恶性特征与药物敏感性作为恶性肿瘤细胞系，SK-OV-3细胞具有较强的侵袭和迁移能力，在体外实验中能够表现出类似体内肿瘤细胞的侵袭行为。此外，SK-OV-3细胞对部分化疗药物和靶向药物具有敏感性，常被用于抗肿瘤药物的筛选和药效评价，为卵巢癌的治疗药物研发提供实验基础。研究表明，一些新型靶向药物如PARP抑制剂、抗血管生成药物等能够有效抑制SK-OV-3细胞的增殖和侵袭，为卵巢癌的治疗带来了新的希望。三、SK-OV-3 Cells人卵巢腺癌细胞种子库保种关键技术 3.1 培养基优化培养基是细胞生长和增殖的基础，合适的培养基配方对于维持SK-OV-3细胞的生物学特性至关重要。目前，常用的SK-OV-3细胞培养基为McCoy's 5A Media (Modified with Tricine)添加10%胎牛血清（FBS），培养环境为37℃恒温、5%CO₂饱和湿度培养箱。不同批次的血清质量可能存在差异，会影响细胞的生长状态和生物学特性。因此，需要对血清进行筛选，选择优质的胎牛血清，确保血清的活性和无毒性，能够有效促进细胞的贴壁和增殖。除了基础培养基和血清外，还可以根据实验需求添加一些生长因子、细胞因子等，进一步优化培养基配方，满足不同研究目的的需求。例如，添加适量的表皮生长因子（EGF）能够促进SK-OV-3细胞的增殖和分化，为研究肿瘤细胞的生长机制提供更合适的模型。 3.2 冻存液配方筛选冻存液的配方直接影响细胞在低温冻存过程中的存活率和生物学特性稳定性。传统的细胞冻存液通常以甘油或二甲基亚砜（DMSO）作为保护剂，讲求“慢冻速溶”，其原理是提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。对于SK-OV-3细胞，常用的冻存液配方为基础培养基+5%DMSO+20%FBS。该配方经过实践验证，能够显著提高SK-OV-3细胞在冻存后的存活率。DMSO作为一种常用的冷冻保护剂，能够有效降低细胞内冰晶的形成概率，但DMSO对细胞具有一定的毒性，因此在冻存液中的浓度需要严格控制，同时在细胞复苏过程中，要及时去除冻存液，以减少其对细胞的伤害。此外，市场上也有多家成熟的无血清冻存液，这些试剂简单实用，极其便捷，对一些难复苏的细胞极其友好，但对于长期的细胞留库保种还是建议采用传统的含血清冻存液配方。 3.3 冻存与复苏技术优化 3.3.1 冻存技术细胞冻存过程中的降温速率是影响细胞存活率的关键因素之一。过快或过慢的降温速率都会导致细胞内冰晶的形成，损伤细胞膜和细胞器。目前，常用的冻存方法是程序降温法，具体步骤如下：预先配制冻存液：按基础培养基:DMSO:FBS = 75:5:20比例配制冻存液，注意DMSO溶于培养基会放热，应提前5-10分钟配置；取对数生长期的SK-OV-3细胞，用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来，1000rpm离心5分钟；去除胰蛋白酶及旧的培养液，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5×10⁶/mL～1×10⁷/mL；将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml，在冻存管上标明细胞的名称、冻存时间、细胞代数及操作者；往冻存盒中加入异丙醇（在-80℃冰箱中能以1℃/min的速度下降），放入-80℃冰箱，建议放置12小时以上，一般可在-80℃中保存半年至一年，长期保存要转移至液氮中。在冻存SK-OV-3细胞时，要确保细胞的生长状态良好，处于对数生长期，这样的细胞活力较强，冻存后存活率更高。同时，冻存管的密封性和质量也非常重要，建议选择质量可靠的冻存管，避免液氮渗入冻存管，导致细胞受损。 3.3.2 复苏技术细胞复苏是冻存的逆过程，快速、正确的复苏操作能够提高细胞的存活率。复苏SK-OV-3细胞时，具体操作步骤如下：快速将冻存管从液氮中取出，立即置于37℃水浴锅中快速解冻，整个复苏过程应尽可能在5-10分钟内完成，以确保细胞的高存活率，解冻过程中要不断晃动冻存管，确保细胞悬液快速均匀受热；解冻后，及时将细胞悬液转移至离心管中，加入适量的新鲜培养基，轻轻混匀后离心，1000rpm离心5分钟，吸出上清液，去除冻存液，避免DMSO对细胞的毒性作用；用新鲜的培养基重悬细胞，接种到培养瓶中，放置于37℃、5%CO₂培养箱中培养；在复苏后的培养过程中，要密切观察细胞的生长状态，及时更换培养基。一般在复苏后的24-48小时内，细胞开始贴壁生长，此时可以更换一次培养基，去除死亡细胞和残留的冻存液，待细胞密度达到80%-90%时，进行传代培养。为了提高复苏细胞的存活率，还可以在复苏后的培养基中添加一些抗氧化剂，如维生素C、谷胱甘肽等，减少细胞在复苏过程中受到的氧化损伤。同时，要注意在标准37℃培养条件下，健康贴壁细胞通常在解冻后4-6小时开始伸展伪足，24小时内完成贴壁过程，复苏超过24小时仍未贴壁的细胞，其存活率通常会下降，且后续增殖能力显著减弱。 3.4 细胞传代技术规范细胞传代是维持细胞连续培养的重要环节，规范的传代操作能够保持细胞的生物学特性稳定。SK-OV-3细胞的传代操作步骤如下：吸出原培养液，加入3-4ml左右PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞，吸出PBS丢弃，这一步是为了去除血清中的酶抑制剂，便于后续胰酶消化；加入1ml左右0.25%胰蛋白酶溶液（含EDTA），轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞，放入37℃培养箱消化2-3分钟，或室温下消化1-3分钟；在显微镜下观察细胞形态，当细胞间隙变大、部分细胞开始脱离瓶壁时，表明细胞-基质和细胞-细胞间的连接均已断裂，此时应立即终止消化，不要等到所有细胞都完全离散，过度消化会对细胞造成伤害；加入2-3ml含血清的培养基终止消化，轻柔吹打细胞，使其脱壁并形成单细胞悬液，注意吹打力度要适中，避免细胞破裂；收集细胞悬液离心，900-1000rpm离心3-5分钟，吸出上清丢弃；加入新鲜培养基，吹打混匀细胞，按1:2-1:6的比例接种到新培养瓶中，补足培养基，拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养。在传代过程中，要严格遵守无菌操作规范，避免细胞污染和交叉污染。实验进行前，超净台以紫外灯照射30分钟灭菌，以70%乙醇擦拭无菌操作台面，并开启超净工作台风扇运转数分钟后，才开始实验操作；每次操作只处理一株细胞株，以避免失误混淆或细胞间污染；实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70%乙醇擦拭无菌操作台面。四、SK-OV-3 Cells人卵巢腺癌细胞种子库保种质量控制体系 4.1 细胞鉴定 4.1.1 STR鉴定短串联重复序列（STR）鉴定是细胞系身份认证的金标准，通过检测细胞基因组中的STR位点，能够准确判断细胞的来源和纯度，防止细胞交叉污染。在SK-OV-3细胞种子库的保种过程中，每5-10代细胞需要进行一次STR鉴定，确保细胞系的真实性和一致性。各机构在进行STR鉴定时，结果应与权威机构公布的SK-OV-3细胞STR图谱一致，若出现差异，应及时排查原因，如细胞交叉污染、基因突变等，并采取相应的措施进行处理。SK-OV-3细胞的STR鉴定图谱为：Amelogenin:X,Y;CSF1PO:11;D13S317:8,11;D16S539:12;D18S51:16,17,18;D19S433:14,14.2;D21S11:30,31.2;D2S1338:18,23;D3S1358:14;D5S818:11;D7S820:13,14;D8S1179:14,15;FGA:24,25;TH01:9,9.3;TPOX:8,11;vWA:17,18。 4.1.2 细胞标志物检测通过免疫荧光染色、Western Blot、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）等方法检测SK-OV-3细胞中CA125、HE4等卵巢癌相关标志物的表达情况，验证细胞的起源和恶性特征。定期进行细胞标志物检测，能够及时发现细胞生物学特性的变化，确保细胞符合实验要求。例如，若SK-OV-3细胞中CA125的表达量显著下降，可能提示细胞的恶性特征发生了改变，需要进一步分析原因并采取相应的措施。 4.2 无菌检测微生物污染是细胞培养过程中的常见问题，会严重影响细胞的生长和实验结果的准确性。因此，在SK-OV-3细胞种子库的保种过程中，必须进行严格的无菌检测，包括细菌、真菌、支原体等检测。细菌和真菌检测：取少量细胞培养液接种于细菌培养基（如血平板）和真菌培养基（如沙氏葡萄糖琼脂培养基）中，37℃培养7-14天，观察是否有菌落生长。同时，也可以通过显微镜直接观察细胞培养液中是否有细菌或真菌存在。支原体检测：采用PCR法、培养法、荧光染色法等检测细胞中是否存在支原体污染。支原体感染会导致细胞生长缓慢、形态改变，甚至影响细胞的基因表达和功能，因此必须确保细胞无支原体污染。常用的支原体PCR检测试剂盒具有灵敏度高、特异性强、检测速度快等优点，能够有效检测细胞中的支原体污染。 4.3 细胞活力检测细胞活力是反映细胞状态的重要指标，常用的检测方法包括台盼蓝拒染法、MTT法、CCK-8法等。在细胞冻存前和复苏后，都需要进行细胞活力检测，确保细胞存活率达到90%以上。台盼蓝拒染法通过观察细胞是否被台盼蓝染色，判断细胞的死活，操作简单、快速，但准确性相对较低；MTT法和CCK-8法则通过检测细胞内线粒体脱氢酶的活性，间接反映细胞的活力，准确性较高，但操作相对复杂。在实际应用中，可以根据具体需求选择合适的检测方法。 4.4 生物学特性监测定期监测SK-OV-3细胞的生物学特性，包括细胞形态、生长曲线、染色体核型等。绘制细胞生长曲线，了解细胞的增殖速率和生长规律；观察细胞形态是否发生改变，是否出现分化、空泡化异常等情况；分析染色体核型，检查是否存在染色体畸变。通过这些监测，能够及时发现细胞生物学特性的变化，采取相应的措施进行干预。例如，若SK-OV-3细胞的生长速率明显减慢，可能提示细胞的增殖能力下降，需要检查培养基质量、培养环境等因素，必要时更换细胞种子。 4.5 遗传稳定性检测 SK-OV-3细胞在长期传代和冻存过程中，可能会发生基因突变、染色体畸变等遗传变异，导致细胞生物学特性改变。因此，需要定期进行遗传稳定性检测，包括基因突变检测、染色体核型分析等。基因突变检测可以采用全基因组测序、靶向测序等方法，检测细胞中是否存在与卵巢癌发生发展相关的基因突变；染色体核型分析则通过观察细胞染色体的数目、形态和结构，判断是否存在染色体畸变，如染色体数目异常、易位、缺失等。通过遗传稳定性检测，能够及时发现细胞的遗传变异，确保细胞的生物学特性稳定。五、SK-OV-3 Cells人卵巢腺癌细胞种子库的应用价值 5.1 基础研究领域 5.1.1 卵巢癌发病机制研究 SK-OV-3细胞是研究卵巢癌发病机制的重要模型，通过对SK-OV-3细胞的研究，科学家们能够深入探究肿瘤细胞的增殖、分化、侵袭和转移等过程的分子机制。例如，利用SK-OV-3细胞研究可以揭示卵巢癌相关基因的功能和调控网络，分析信号通路在肿瘤发生发展中的作用，为开发新的治疗靶点提供理论依据。研究表明，SK-OV-3细胞的增殖和侵袭能力与多条信号通路的异常激活有关，如PI3K/Akt、MAPK等信号通路，通过抑制这些信号通路的活性，能够有效抑制SK-OV-3细胞的恶性行为。 5.1.2 卵巢癌耐药机制研究由于SK-OV-3细胞对肿瘤坏死因子和几种细胞毒性药物（包括白喉毒素、顺铂和阿霉素）耐受，使其成为研究卵巢癌耐药机制的理想模型。科学家们可以利用SK-OV-3细胞研究药物耐药的分子机制，分析耐药细胞与敏感细胞在基因表达、信号通路等方面的差异，找出耐药相关的分子靶点，为开发逆转耐药的药物提供思路。例如，通过长期低浓度给药的方法诱导SK-OV-3细胞产生耐药性，然后利用基因芯片、蛋白质组学等技术分析耐药细胞的基因和蛋白质表达变化，发现耐药相关的关键基因和信号通路。 5.1.3 肿瘤微环境研究 SK-OV-3细胞可以用于研究卵巢癌肿瘤微环境的组成和功能，探索肿瘤细胞与微环境中其他细胞（如成纤维细胞、免疫细胞等）之间的相互作用。通过构建SK-OV-3细胞与其他细胞共培养体系，研究细胞间的信号传递和物质交换，深入了解肿瘤微环境在卵巢癌发生发展中的作用，为开发针对肿瘤微环境的治疗策略提供实验依据。 5.2 药物开发领域 5.2.1 抗肿瘤药物筛选 SK-OV-3细胞对部分化疗药物和靶向药物具有敏感性，因此被广泛用于抗肿瘤药物的筛选，能够快速评估药物的疗效及毒性。利用SK-OV-3细胞建立药物库筛选平台，通过检测药物对细胞增殖、凋亡、侵袭等方面的影响，快速识别潜在的抗癌化合物。高通量筛选技术能够在短时间内对大量药物进行筛选，大大提高了药物研发的效率。例如，科学家们利用SK-OV-3细胞筛选出了多种具有抗癌活性的天然化合物和合成化合物，这些化合物为开发新型抗肿瘤药物提供了先导化合物。 5.2.2 药物疗效与毒性评价在药物研发过程中，需要对药物的疗效和毒性进行全面评估。SK-OV-3细胞模型能够模拟体内卵巢腺癌细胞的生物学特性，通过测试化疗药物、靶向疗法等对SK-OV-3细胞的杀伤效果，初步评估药物的疗效。同时，观察药物对细胞形态、活力、基因表达等方面的影响，评估药物的毒性作用，为药物的临床试验提供参考依据。例如，在新药研发阶段，通过观察SK-OV-3细胞在药物作用下的细胞凋亡情况、细胞周期变化等，能够初步判断药物的抗肿瘤活性和潜在毒性。 5.2.3 药物联合治疗研究卵巢癌的治疗往往需要采用联合治疗方案，以提高治疗效果。SK-OV-3细胞可以用于研究不同药物联合使用的疗效和机制，探索最佳的药物联合方案。例如，研究化疗药物与靶向药物联合使用对SK-OV-3细胞的杀伤作用，分析联合治疗的协同效应及其分子机制，为卵巢癌的临床联合治疗提供实验依据。 5.3 临床转化应用 5.3.1 卵巢癌诊断技术研究 SK-OV-3细胞可以用于卵巢癌诊断技术的研究和开发，如肿瘤标志物的筛选、诊断试剂盒的研发等。通过对SK-OV-3细胞分泌的蛋白质、核酸等生物标志物的研究，筛选出具有诊断价值的卵巢癌标志物，如CA125、HE4等，为卵巢癌的早期诊断提供重要的工具。此外，利用SK-OV-3细胞还可以研发卵巢癌诊断试剂盒，如检测CA125、HE4的试剂盒，提高卵巢癌诊断的准确性和特异性。 5.3.2 个性化治疗研究每个卵巢癌患者的肿瘤细胞都具有独特的生物学特性，因此个性化治疗成为提高治疗效果的关键。利用SK-OV-3细胞模型，结合患者的肿瘤组织样本，能够开展个性化治疗研究。例如，将患者的肿瘤细胞与SK-OV-3细胞进行共培养，测试不同药物组合对细胞的杀伤效果，为患者制定个性化的治疗方案。此外，还可以利用SK-OV-3细胞研究患者肿瘤细胞的耐药机制，为选择合适的治疗药物提供依据。 5.3.3 细胞治疗研究细胞治疗是一种新兴的肿瘤治疗方法，具有广阔的应用前景。SK-OV-3细胞可以作为细胞治疗的研究模型，用于评估免疫细胞、干细胞等对卵巢腺癌细胞的杀伤作用。例如，构建SK-OV-3细胞与免疫细胞共培养体系，研究CAR-T细胞、NK细胞等对肿瘤细胞的免疫应答，为细胞治疗的临床应用提供实验依据。此外，SK-OV-3细胞还可以用于研究干细胞治疗卵巢癌的可行性和安全性，为干细胞治疗的临床应用提供参考。六、SK-OV-3 Cells人卵巢腺癌细胞种子库保种的挑战与未来展望 6.1 现存挑战 6.1.1 细胞异质性模拟难题虽然SK-OV-3细胞是研究卵巢癌的重要模型，但它无法完全模拟体内肿瘤的异质性。体内肿瘤组织中存在多种不同类型的细胞，它们之间相互作用，构成复杂的肿瘤微环境。而SK-OV-3细胞是单一的细胞系，在体外培养过程中缺乏体内肿瘤微环境的复杂性，这可能导致实验结果与体内实际情况存在差异。因此，在利用SK-OV-3细胞进行研究时，需要结合动物模型或患者样本进行验证，以确保研究结果的可靠性。 6.1.2 长期保种的稳定性维持尽管SK-OV-3细胞具有较高的遗传稳定性，但在长期的传代和冻存过程中，仍然可能发生基因突变、染色体畸变等情况，导致细胞生物学特性改变。如何维持SK-OV-3细胞在常年保种过程中的稳定性，是细胞种子库面临的一大挑战。需要不断优化保种技术，加强质量监控，尽可能减少细胞生物学特性的变异。此外，SK-OV-3细胞在不同实验室的培养条件可能存在差异，这也会影响细胞的生物学特性和实验结果的重复性，因此需要建立统一的培养和保种标准。 6.1.3 质量控制标准统一难度目前，国内外对于SK-OV-3细胞种子库保种的质量控制标准尚未完全统一，不同机构在细胞鉴定、无菌检测、生物学特性监测等方面的方法和标准存在差异。这给细胞资源的共享和交流带来了困难，也影响了实验结果的可比性。因此，亟需建立统一的质量控制标准，规范SK-OV-3细胞种子库的保种工作。此外，随着生命科学研究的不断发展，对细胞质量的要求也越来越高，需要不断更新和完善质量控制标准，以适应新的研究需求。 6.2 未来展望 6.2.1 新技术融合推动保种发展随着单细胞测序、类器官技术、人工智能等前沿技术的不断突破，将为SK-OV-3细胞种子库的保种和应用带来新的机遇。单细胞测序技术能够更深入地分析细胞的异质性，帮助我们更好地了解SK-OV-3细胞的生物学特性；类器官技术可以构建更加接近体内肿瘤微环境的模型，弥补SK-OV-3细胞模型的不足；人工智能则能够利用大数据和机器学习算法，优化保种技术参数、预测细胞生物学特性的变化，提高保种效率和质量。例如，利用人工智能算法分析SK-OV-3细胞的基因表达数据，预测细胞在长期保种过程中可能发生的基因突变，提前采取措施进行干预。 6.2.2 细胞资源共享网络建设建立全国乃至全球性的SK-OV-3细胞资源共享网络，实现细胞资源的高效利用和合理分配。通过共享网络，科研机构和企业可以方便地获取高质量的SK-OV-3细胞资源，减少重复保种和资源浪费。同时，共享网络还可以促进不同机构之间的合作与交流，共同推动卵巢癌及相关疾病的研究进展。此外，共享网络还可以建立细胞资源的信息数据库，包括细胞的生物学特性、保种历史、应用案例等，为科研人员提供全面的细胞资源信息。 6.2.3 个性化保种服务提供随着精准医学的发展，对细胞资源的个性化需求日益增加。未来，SK-OV-3细胞种子库可以根据不同科研项目和临床应用的需求，提供个性化的保种服务，如定制化的培养基配方、特殊的冻存条件、基因修饰的SK-OV-3细胞等。这将进一步提高细胞资源的利用价值，满足多样化的研究需求。例如，为研究卵巢癌的耐药机制，可以提供具有特定耐药性的SK-OV-3细胞株；为开发新型靶向药物，可以提供表达特定靶点的SK-OV-3细胞株。 6.2.4 质量控制体系完善不断完善SK-OV-3细胞种子库的质量控制体系，建立更加严格、统一的质量控制标准。引入更多先进的检测技术和方法，如单细胞测序技术、质谱技术等，提高细胞鉴定和质量检测的准确性和灵敏度。同时，加强对细胞保种过程的全程监控，确保细胞在整个保种过程中始终保持良好的生物学特性。此外，还需要加强国际合作与交流，借鉴国外先进的质量控制经验，推动我国SK-OV-3细胞种子库保种工作与国际接轨。

100 项与二甲亚砜相关的药物交易

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外链

KEGG	Wiki	ATC	Drug Bank
D01043	二甲亚砜	M02AX03 G04BX13	DB01093

研发状态

批准上市

10 条最早获批的记录,

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适应症	国家/地区	公司	日期
间质性膀胱炎	美国	Mylan Institutional LLC	1978-04-04

未上市

10 条进展最快的记录,

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适应症	最高研发状态	国家/地区	公司	日期
肺腺癌	临床前	中国台湾	辅仁大学	2011-04-15
白血病	临床前	韩国	Samsung Medical Center	2004-07-15

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临床结果

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研究	分期	人群特征	评价人数	分组	结果	评价	发布日期


ASCO2017	N/A	造血干细胞移植	982	Dimethyl sulfoxide (DMSO) (DMSO cryopreserved stem cell infusion)	鏇醖淵觸膚選築艱窪鏇(憲夢蓋顧壓網窪壓廠廠) = All 5 pts developed seizures during SCI 積願鬱襯願餘齋繭齋網 (艱衊製製築積鹽繭顧鑰 )	-	2017-05-30
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NCT00583219 (CTgov)	临床1/2期	尿失禁 \| 膀胱功能不全 \| 神经源性逼尿肌过度活动 ... 更多	25	Botulinum-A toxin+Dimethyl sulfoxide	鹽糧鑰鑰蓋範鑰鹽觸蓋(遞遞選齋積獵齋顧夢齋) = 憲窪糧積網遞製淵顧鹹憲淵壓鑰壓淵鏇壓鏇壓 (觸艱鏇齋構願蓋繭齋廠, 鬱網網顧憲顧鏇餘襯壓 ~ 鏇膚廠願鹽艱鏇遞齋窪) 更多	-	2014-04-21
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Pubmed \| J Eur Acad Dermatol Venereol	N/A	基底细胞癌	44	DMSO-supported 5-aminolaevulinic acid-PDT following curettage	鹽製願構積淵醖廠選膚(糧選衊選衊醖鏇遞廠窪) = 遞鏇鑰鬱網鏇淵蓋艱蓋願製積築鬱簾鹽廠膚選 (蓋積艱憲網製願鏇憲衊 )	积极	2009-01-01