Acetic Acid, Glacial

2018年以来，国家医保局已组织开展九批国家组织药品集采，共纳入374种药品，平均每批国采纳入41个品种左右，第五批国采品种数量最多达到61个。故推测，第十批国采的化药品种数可能在41-61个。第九批中选和执行时间预计在今年3月执行，如果按此时间推算，第十批国采将在今年上半年开始。截至2024年2月26日，已经有120个品种满足“原研+过评”企业≥5家的竞争格局。第十批集采预测品种序号药品名称医保剂型规格过评+原研1磷酸西格列汀片口服常释剂型0.1g、25mg、50mg、100mg22+12地氯雷他定口服溶液口服液体剂0.5g：2.5mg、1g：5mg、100ml:50mg、10ml：5mg、120ml：60mg、150ml：75mg、30ml：15mg、50ml：25mg、60ml：30mg16+03苯甲酸阿格列汀片口服常释剂型12.5mg、25mg、6.25mg、12.5mg、25mg12+14哌柏西利胶囊口服常释剂型0.125g、0.1g、75mg、100mg、125mg11+15阿普米司特片口服常释剂型10mg、20mg、30mg10+16氨溴特罗口服溶液口服液体剂60ml：盐酸氨溴索90mg与盐酸克仑特罗60μg、100ml：盐酸氨溴索150mg与盐酸克仑特罗100μg、1ml：盐酸氨溴索1.5mg与盐酸克仑特罗1μg11+07氢溴酸伏硫西汀片口服常释剂型10mg、20mg、5mg10+18阿司匹林肠溶片口服常释剂型0.1g、0.3g、100mg9+19达格列净片口服常释剂型10mg、5mg9+110拉米夫定片口服常释剂型0.15g、0.1g、0.3g9+111沙库巴曲缬沙坦钠片口服常释剂型50mg（沙库巴曲24mg/缬沙坦26mg）、100mg（沙库巴曲49mg/缬沙坦51mg）、200mg（沙库巴曲97mg/缬沙坦103mg）9+112盐酸美金刚口服溶液口服液体剂100ml：1g、120ml：0.24g、50ml：0.5g9+013普瑞巴林口服溶液口服液体剂100ml：2g、200ml：4g、473ml：9.46g9+014碳酸司维拉姆片口服常释剂型0.8g8+115盐酸左西替利嗪口服滴剂口服液体剂10ml：50mg、15ml：75mg、20ml：0.1g、150ml：75mg、75ml：37.5mg9+016利格列汀片口服常释剂型5mg7+117索磷布韦片口服常释剂型0.4g7+118利培酮口服液口服液体剂0.001、30ml:30mg、0.1%(30ml:30mg)、0.1%(100mL:100mg)6+119磷酸特地唑胺片口服常释剂型0.2g5+120叶酸片口服常释剂型5mg6+021环孢素软胶囊口服常释剂型10mg、25mg、50mg、100mg4+122阿仑膦酸钠片口服常释剂型10mg、70mg4+123阿瑞匹坦胶囊口服常释剂型0.125g、80mg、120mg4+124艾曲泊帕乙醇胺片口服常释剂型25mg4+125艾司唑仑片口服常释剂型1mg、2mg5+026吡拉西坦片口服常释剂型0.4g、0.8g5+027丙戊酸钠口服溶液口服液体剂100ml：4g、300ml：12g4+128地诺孕素片口服常释剂型2mg4+129依帕司他片口服常释剂型50mg7+030艾地骨化醇软胶囊口服常释剂型0.5μg、0.75μg5+131重酒石酸卡巴拉汀胶囊口服常释剂型1.5mg、3mg、6mg5+132乙磺酸尼达尼布软胶囊口服常释剂型0.15g、0.1g6+033泊沙康唑肠溶片口服常释剂型0.1g5+134盐酸伐地那非片口服常释剂型5mg、10mg、20mg4+135酒石酸伐尼克兰片口服常释剂型0.5mg、1mg4+136盐酸非索非那定片口服常释剂型30mg、60mg、120mg、180mg4+137福多司坦口服溶液口服常释剂型100ml：8g、120ml：9.6g、500ml：40g、50ml：4g、5ml：0.4g5+038卡马西平片口服常释剂型0.1g、0.2g4+139口服补液盐散（Ⅲ）口服散剂5.125g5+040甲磺酸雷沙吉兰片口服常释剂型1mg4+141富马酸卢帕他定片口服常释剂型10mg4+142螺内酯片口服常释剂型0.1g、20mg、25mg5+043氯雷他定糖浆口服液体剂100ml：0.1g、1ml：1mg、60ml：60mg4+144瑞戈非尼片口服常释剂型40mg4+145替米沙坦氢氯噻嗪片口服常释剂型每片含替米沙坦40mg，氢氯噻嗪12.5mg、每片含替米沙坦80mg和氢氯噻嗪12.5mg4+146托伐普坦片口服常释剂型15mg、30mg5+047维生素B2片口服常释剂型5mg5+048硝酸甘油片口服常释剂型0.5mg5+049盐酸伊托必利片口服常释剂型50mg4+150左炔诺孕酮片口服常释剂型0.75mg、1.5mg4+151米拉贝隆缓释片缓释控释剂型25mg、50mg6+152枸橼酸托法替布缓释片缓释控释剂型11mg6+153左乙拉西坦缓释片缓释控释剂型0.5g、0.75g5+054曲伏前列素滴眼液滴眼剂0.4ml:16μg、2.5ml:0.1mg、2.5ml:0.075mg5+255溴芬酸钠滴眼液滴眼剂0.4ml:0.4mg、5ml:5mg6+156普拉洛芬滴眼液滴眼剂5ml：5mg4+157吸入用乙酰半胱氨酸溶液吸入剂3ml：0.3g11+158吸入用七氟烷吸入剂120ml、250ml6+259他克莫司软膏软膏剂10g:10mg、10g:3mg、0.1%(10g:10mg)、0.03%(10g:3mg)7+160乙酰半胱氨酸泡腾片其他0.6g5+161舒更葡糖钠注射液注射液2ml：0.2g、2ml：200mg、5ml：500mg16+162间苯三酚注射液注射液4ml：40mg14+063注射用哌拉西林钠注射剂0.5g、1g、2g、3g、4g13+064胞磷胆碱钠注射液注射剂2ml：0.1g、2ml：0.25g、4ml：0.5g10+065拉考沙胺注射液注射剂20ml：0.2g、10mg/ml9+166帕拉米韦注射液注射剂15ml：0.15g、20ml：0.2g、60ml：0.3g10+067泊沙康唑注射液注射剂16.7ml：0.3g9+168复方碳酸氢钠电解质注射液注射剂500ml、1000ml10+069注射用氨苄西林钠舒巴坦钠注射剂0.75g、1.5g、2.25g、3g7+170注射用氨苄西林钠舒巴坦钠注射剂0.5g、1g、2g8+071醋酸钠林格注射液注射剂500ml8+072氟尿嘧啶注射液注射剂10ml：0.25g、10ml：0.5g、20ml：1g8+073羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液注射剂250ml:15g:2.25g、500ml:30g:4.5g、500ml:30g7+174氨茶碱注射液注射剂10ml:0.25g、0ml:0.25g、2ml:0.25、20ml:0.5g、2ml:0.5g、7+075氨基己酸注射液注射剂10ml:2g、20ml:4g、20ml:5g、8ml:2g7+076低钙腹膜透析液(乳酸盐-G1.5%）注射剂2000ml7+077低钙腹膜透析液(乳酸盐-G2.5%注射剂2000ml、2500ml7+078注射用拉氧头孢钠注射剂0.25g、0.5g、lg7+079注射用盐酸罗沙替丁醋酸酯注射剂75mg7+080乳酸钠林格注射液注射剂500ml6+081注射用醋酸西曲瑞克注射剂0.25ms5+182注射用右雷佐生注射剂0.25g、0.5g6+083硫酸阿米卡星注射液注射剂1ml：0.1g、2ml：0.2g5+084达肝素钠注射液注射剂0.2ml：2500IU、0.2ml：5000IU、0.3ml：7500IU、4+185注射用尼可地尔注射剂12mg、2mg、48mg7+086硫酸特布他林注射液注射剂1ml:0.5mg、5ml:2.5mg7+087地高辛注射液注射剂1ml:0.1mg、2ml:0.5mg、6+088乳酸环丙沙星氯化钠注射液注射剂100ml:0.2g、200ml:0.4g5+189左西孟旦注射液注射剂5ml:12.5mg5+190己酮可可碱注射液注射剂5ml:0.1g6+091卡前列素氨丁三醇注射液注射剂1ml:0.25mg5+192注射用青霉素钠注射剂100万IU、160万IU、400万IU、40万IU、500万IU、800万IU、80万IU6+093重酒石酸去甲肾上腺素注射液注射剂1ml:2mg、4ml:8mg6+094盐酸多巴酚丁胺注射液注射剂1.6ml：20mg、20ml：0.25g、40ml：0.5g、5ml：0.1g5+095盐酸多柔比星脂质体注射液注射剂10ml：20mg、25ml：50mg、5ml：10mg5+096注射用福多匹坦双葡甲胺注射剂0.15g5+097腹膜透析液（乳酸盐-G1.5%）注射剂2000ml5+098腹膜透析液（乳酸盐-G2.5%）注射剂2000ml5+099钆布醇注射液注射剂7.5ml：4.5354g、1:4.5354g、15ml：9.0708g4+1100盐酸格拉司琼注射液注射剂1ml：1mg、3ml：3mg5+0101重酒石酸间羟胺注射液注射剂1ml：10mg5+0102盐酸林可霉素注射液注射剂10ml：3g、2ml：0.6g5+0103氯化钾注射液注射剂10ml：1.5g、10ml：1g、20ml：3g5+0104盐酸纳洛酮注射液注射剂10ml：4mg、1ml：0.4mg、1ml：1mg、2ml：2mg5+0105盐酸曲马多注射液注射剂1ml：50mg、2ml：0.1g、2ml：50mg4+1106去氨加压素注射液注射剂1ml：13.35μg、1ml：15μg、1ml：3.56μg、1ml：4μg4+1107注射用头孢哌酮钠注射剂0.5g、1g、1.5g、2g、3g5+0108注射用头孢他啶阿维巴坦钠注射剂2.5g4+1109盐酸戊乙奎醚注射液注射剂1ml：0.5mg、1ml：1mg、2ml：2mg4+1110硝酸异山梨酯注射液注射剂10ml：10mg、5ml：5mg4+1111注射用亚胺培南西司他丁钠注射剂0.5g、1g4+1112小儿盐酸氨溴索滴剂口服液体剂50ml：0.75g15+0盐酸氨溴索滴剂20ml：0.3g、50ml：0.75g盐酸氨溴索口服溶液100ml：0.3g、100ml：0.6g、10ml：30mg、10ml：60mg、5ml：15mg、5ml：30mg113盐酸艾司洛尔注射液注射剂10ml：0.g、250ml：2.5g：1.475g12+0盐酸艾司洛尔氯化钠注射液100ml：2g：0.41g、50ml：1g：0.205g、2ml：0.2g114布洛芬混悬滴剂口服液体剂20ml：0.8g9+0布洛芬混悬液100ml：2g、30ml：0.6g115低钙腹膜透析液（乳酸盐-G1.35%）注射剂2000ml、2500ml9+0低钙腹膜透析液（乳酸盐-G4.25）2000ml腹膜透析液（乳酸盐）（低钙）2000ml116平衡盐溶液(供灌注用)外用液体剂250ml、500ml、7+1平衡盐冲洗液1000ml平衡盐眼内灌洗液15ml117西格列汀二甲双胍片口服常释剂型——6+1西格列汀二甲双胍片(I)磷酸西格列汀50mg(以游离碱计)和盐酸二甲双胍500mg西格列汀二甲双胍片(Ⅱ)磷酸西格列汀50mg(以游离碱计)和盐酸二甲双胍850mg、118盐酸安非他酮缓释片缓释控释剂型0.1g、0.15g、0.2g5+1盐酸安非他酮缓释片(Ⅱ)0.15g、0.3g119拉莫三嗪分散片口服常释剂型25mg、50mg5+1拉莫三嗪片0.1g、25mg、50mg、100mg120双氯芬酸钠缓释片缓释控释剂型0.1g、75mg5+0双氯芬酸钠缓释胶囊（Ⅰ）0.1g推荐阅读制剂/改良新药/立项/MAH/CXO/药品注册，报名get这场大会！↓

我们知道，saRNA（自复制 RNA）要比一般的线性mRNA来说长很多。对长度为 1500nt 的 mRNA 来说，其对应的 saRNA长度会达到 9500nt，这是因为在 saRNA 中存在两个开放阅读框：一个用来编码 4 个非病毒结构蛋白（NSP），另外一个才用来编码靶标基因。相比传统线性 mRNA 来说，saRNA 最为显著的优势就是以极低剂量实现更持久的表达。mRNA 编码蛋白表达持续时间仅仅为 3-4 天，然而，saRNA 编码蛋白表达时间可持续至 60 天。saRNA 与 mRNA 均是通过体外转录反应（IVT）来合成。伦敦帝国理工学院的 Robin J. Shattock 教授曾利用DoE优化IVT反应体系，提升saRNA产量，发现 Mg2+浓度是影响 saRNA 产量的关键。然而，目前大部分对于 IVT 反应的优化，以小于 1500nt RNA 为合成产量为评估指标，得到 IVT 合成配方中各个组分的最优浓度范围和最适反应调节：Mg2+浓度为 40-60mM 提升 mRNA 合成速率。添加尿素（0.8-1.2M）、突变改造 T7RNA 聚合酶以及提升温度来降低 dsRNA 含量。亚精胺（spermidine）可使 RNA 聚合酶从质粒模板上解离，作用于 RNA 合成的起始和延伸阶段，刺激转录反应。有研究表明低浓度亚精胺有利于 RNA 合成。二硫苏糖醇（DTT）一种还原剂，保护酶免于氧化。有研究表明超过 10 mM DTT 不会改善较短 RNA 的合成。有些研究发现 DMSO 可将转录效率提升高达 15%，然而，还有些研究发现 10% DMSO 对于 RNA 产量没有影响。有趣的是，有人还发现，对于小 RNA 分子，添加 DMSO 会导致全长转录本和流产转录本生成更快。2024 年 3 月 9 号，加拿大不列颠哥伦比亚大学UBC Anna Blakney Lab 在 European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 发表文章：Effect of in vitro transcription conditions on yield of high quality messenger and self-amplifying RNA (点击末尾阅读原文可见)，他们采用 DOE 方法探索 IVT 反应中各个反应参数如何影响 mRNA 与 saRNA 的产量和质量（纯度），寻找合成短 mRNA 和长 saRNA 的最佳反应条件。👀   相比 mRNA，saRNA 对温度更加敏感随着温度从 20℃上升至 42℃，mRNA 产量一直处于增加趋势，同时，mRNA 纯度并未发生明显变化。相反，随着温度从 20℃上升至 42℃，saRNA 产量虽然也会增加，但是，saRNA 纯度在温度超过 32℃时急剧下降。也就是说，在 IVT 合成过程中，由于 saRNA 要比 mRNA 更长，更脆弱，因此，saRNA 对温度变化更加敏感。👀   采用 DOE，探索合成 mRNA 与 saRNA 的最佳反应条件采用确定性筛选设计（ Definitive Screening Design）评估对 mRNA 与 saRNA 的质量产量造成关键差异的 IVT 参数。研究者对每个 RNA 分子进行了 25 次 IVT 反应，重复三次。这样做会显着减少运行的 IVT 反应数量。如果不采用确定性筛选设计，考虑到八个因素中的每一个都有三种可能的组合，那么要执行的反应总数将为 6,561 。研究人员的最终筛选设计包括八个因素和三个响应变量，并使用标准最小二乘模型进行分析。筛选的目的是确定 IVT 成分（如亚精胺、二硫苏糖醇、醋酸镁）、反应时间、离液剂（尿素）、二甲基亚砜 (DMSO) 和 pH 值如何影响合成 mRNA/saRNA 的产量、纯度以及 dsRNA 形成。由于 42℃以上，saRNA 降解非常厉害，因此将合成温度最高为 37℃。saRNA 纯度应该＞50%，mRNA 纯度应该>70%。👀   分析模型预测结果   合成不同要求的 mRNA 与 saRNA 的最适配方合成 mRNA 时，实现最佳质量*产量条件为：Mg2+ 浓度为 43.77 mM，温度为 37 °C，DMSO 浓度为 10 %，时间为 4 h。合成 mRNA 时，最小化 dsRNA 形成的最佳反应条件为：将 DTT 增加至 40 mM，将亚精胺浓度降低至 2 mM，Mg2+ 浓度为 10mM，温度为 37℃，反应时间为 4h，同时，将 DMSO 浓度增加至 10%，缓冲液 pH 为 8。合成 saRNA 时，实现最佳产量*质量条件为：反应时间需要延长至 4 小时，并在 37 °C 下运行，Mg2+ 浓度为 50.9 mM，DMSO 浓度为 10 %，DTT 浓度为 10 mM，亚精胺浓度为 2 mM，pH 为 7。   影响 saRNA 与 mRNA 产量*质量的因素在本文考察的 IVT 反应参数中，对 mRNA 和 saRNA 产量影响最为显著的因素是 Mg2+ 和温度。无论是较短的 RNA，还是均长的 RNA，增加 Mg2+ 和温度可显著提升 RNA 产量。相比较而言，其他 IVT 成分对于增加 mRNA 产量来说没有明显影响。此外，研究者还发现增加 DMSO 浓度和延长反应时间会对 saRNA 产量产生积极影响。众所周知，DMSO 会降低 DNA 的解链温度并促进聚合酶的作用。在 IVT 中添加 DMSO 有可能会更进一步提高转录反应效率。尽管从本研究初步的温度筛选来看，在低于 42℃下，mRNA 质量不会受到温度变化的显著影响。然而，降低反应温度依然会对 mRNA 质量有轻微提升。有趣的是，本研究显示，合成高纯度 saRNA 所需的 IVT 反应条件是低浓度 Mg2+ 和低温，相反，mRNA 分子需要高 Mg2+浓度（49.6 mM）实现最佳产量和纯度，降低Mg2+浓度反而会产生低质量 mRNA。此前，已有研究表明 Mg2+是聚合酶活性的关键，并且最佳转录反应需要最佳转录反应需要 NTP浓度超过 Mg2+浓度 9 mM 。在此次筛选中，实现高质量或者高产量所需的最佳 Mg2+浓度是不相同的，并且，合成 mRNA 或者 saRNA 所需的最佳 Mg2+ 浓度也是不相同的。与 NTP 浓度 相比，实现高纯度 saRNA 的最佳Mg2+浓度是过量 2 mM，而为了获得高产量saRNA，则Mg2+浓度需要过量约 40 mM。   影响 dsRNA 形成的因素在合成 mRNA 和 saRNA 的 IVT 反应体系中，Mg2+对 dsRNA 的形成也具有最为显著的影响。以前早有研究在合成 mRNA 反应中观察到类似效应 。对 saRNA 和 mRNA 来说，将Mg2+浓度从 40 mM 减少至 10 mM 会明显降低 IVT 反应中形成的 dsRNA，当然产量也会随之发生降低。非常有趣的是，pH、亚精胺、温度、DMSO 和时间对合成 mRNA 的 IVT 反应中的 dsRNA 形成有显著影响，然而，对合成 saRNA 的 IVT 反应中的 dsRNA 形成没有明显影响。在 mRNA 合成过程中，增加反应时间和 DMSO 会减少 dsRNA 副产物形成，但是，这样做不会对 saRNA 合成反应中的 dsRNA 副产物的形成产生明显影响。较高的温度 (37 °C) 对于减少 mRNA 合成反应中 dsRNA 形成是最佳的，但对 saRNA 合成反应中 dsRNA 的形成没有明显影响。此外，在 mRNA 和 saRNA 合成反应中，研究人员没有发现 dsRNA 副产物的形成与尿素浓度之间存在明显的相关性。在 0 ~0.8 M 浓度范围内，尿素对响应变量没有影响。好玩的是，在产生最少量 dsRNA 和最高纯度 RNA 的反应体系中均具有高尿素浓度 (0.8 M)。👀   根据不同的需求优化 IVT 反应此研究针对高纯度、高产量及其双重组合筛选出各自对用的最优 IVT 反应体系。根据应用场景的不同，可选择不同体系的最优 IVT 反应。如果最终的 RNA 产品应用于基因疗法或蛋白质替代疗法，那么对 IVT 反应来说将需要形成更少的 dsRNA 和更高质量的转录本。然而，由于 dsRNA 具有免疫原性，对于 mRNA 疫苗来说，IVT 反应中 dsRNA 的形成可能是有益的。先前有研究表明，在较高温度下，突变 T7 聚合酶对于减少 mRNA 合成反应中的 dsRNA 形成非常有效。然而，尚不清楚这种突变聚合酶是否也同样适用于 saRNA 合成，因为温度的升高会明显降低 saRNA 质量。另外一方面，低温和低 Mg2+ 浓度肯定会严重抑制 RNA 产量。为解决 saRNA 合成中面临的高质量/低产量挑战，研究者认为可以从嗜冷微生物中提取 T7 聚合酶来改善 IVT 反应。有趣的是，此前有报道称，这种 T7 聚合酶可在 4 ~ 25 °C 下降低 mRNA 合成反应中的 dsRNA 含量 ，但尚不清楚它如何影响质量，因为 mRNA 的高质量与低 dsRNA 含量不存在相关性。嗜冷噬菌体聚合酶或丁香假单胞菌 RNA 聚合酶也可能提高 saRNA 的质量和产量。还可以在 saRNA 合成的背景下探索 DNA 模板启动子区域序列修饰以实现与 T7 聚合酶的最佳结合亲和力。未来的 IVT 优化过程还应考虑 saRNA 和 mRNA 的不同质量要求。👀   小结此前，IVT 产量和质量之间的关系尚未明确。这项研究通过 DOE 方法确定了短和长 RNA 转录本的最佳 IVT 条件。研究者观察到 saRNA 需要较低的温度和 Mg2+浓度才能产生高质量的转录本和最少的 dsRNA 副产物。然而，mRNA 质量不会受到相同程度的温度变化影响，并且需要高 Mg2+ 浓度才能实现高产量和高质量。上述观察结果对于以 saRNA/m 为基础的疫苗和药物的设计生产非常重要。识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入生物制品微信群！请注明：姓名+研究方向！版权声明本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。