JY-231

欢迎加入“艺药荟”知识星球，持续尊享学习资源! 经典阅读： 图形摘要 摘要 1介绍了体内CAR-T治疗的机制、临床进展及优化策略。 2重点关注在体内CAR-T治疗中制定质量控制策略的考虑因素。 3重点讨论了其非临床研究的关键考虑因素。 嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）疗法在治疗血液恶性肿瘤方面取得了显著成功。然而，传统的体外CAR-T疗法受制于复杂的制造工艺、长生产周期和有限的临床适用性。为解决这些局限性，简化治疗流程并提升可及性，已开发出原位递送CAR编码基因至内源性T细胞的策略。本综述总结了体内CAR-T治疗载体和载荷的设计，概述了该领域的最新进展，并探讨其持续存在的挑战和潜在解决方案。本文重点讨论基于CAR-T产品特性及相关指南，针对体内CAR-T产品的关键质量控制和非临床研究，旨在为该技术的转化应用提供见解。 【NO.1】引言 嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）疗法涉及使用基因工程T细胞表达嵌合抗原受体（CAR）。该受体通常由识别特定肿瘤抗原的细胞外抗原结合结构域组成，结合如CD3ζ链和激活T细胞效应功能的共刺激结构域，从而实现对恶性细胞的精准定位和消除。CAR-T疗法在血液恶性肿瘤中取得了显著的临床成功。自2017年首款CAR-T产品Kymriah获批以来，截至2025年底，全球共批准了14款CAR-T产品。为复发/难治性白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤患者提供长期缓解和治愈的希望。 然而，目前可用的CAR-T产品是体外自体CAR-T疗法，需要分离患者自身的T细胞，进行体外基因改造，并进行后续再输注。它们的临床应用也面临一系列限制。从生产角度看，复杂的体外制造工艺、对专用设备的严格要求以及严格的供应链需求导致了高处理成本和有限的可及性。此外，显著的产品差异也使质量控制变得复杂。从临床角度看，漫长的准备期可能导致患者错过最佳治疗窗口，治疗前必要的淋巴细胞耗竭治疗会增加感染风险。此外，免疫抑制微环境以及CAR-T细胞在固体组织中的浸润能力不足，限制了其在实体肿瘤及其他实体组织疾病中的更广泛应用潜力。尽管异体体外CAR-T疗法通过“现成”供应缩短制备时间并降低产品变异性，但它们面临多种独特的免疫排斥挑战，因为移植物抗宿主反应可能引发CAR-T相关毒性，而宿主抗移植物反应可能导致CAR-T细胞快速清除。虽然敲除特定基因可以减少免疫排斥，异体CAR-T的体外制造过程相对复杂，未能完全克服依赖淋巴细胞耗竭和对实体肿瘤浸润不足等限制。 在此背景下，体内CAR-T技术能够在患者体内直接原位编程内内，成为下一代CAR-T疗法开发的有前景方向。体内CAR-T解决了体外CAR-T固有的缺点，如复杂过程、长的准备周期以及化疗淋巴细胞耗尽的需求。此外，其生产工艺更贴近标准化生物制剂，有助于过程控制和质量检测，从而为细胞疗法的广泛采用和提高效率开辟新道路（详见图示摘要）。然而，作为一种新型基因治疗产品，其质量控制和非临床研究存在较大不确定性，缺乏转化经验和参考指南。与体外CAR-T疗法中按特定剂量的工程细胞治疗不同，体内方法中CAR-T细胞的有效剂量取决于原位T细胞工程的效率，使得剂量更难预测。此外，体内CAR-T还面临与载体递送相关的上游风险，如非靶向转导和随机整合。现有关于体内CAR-T的综述主要关注其技术原理和开发进展。相比之下，本综述旨在提供一个整合的视角，桥接技术研究与临床转化。在本综述基于技术原理、研究进展和优化策略的介绍，重点讨论识别关键质量属性的考虑因素、产品质量控制策略的制定以及非临床研究的关键考虑因素。通过弥合早期研发与转化应用之间的鸿沟，本综述旨在为体内CAR-T产品的开发提供前瞻性的见解。 【NO.2】IN VIVO CAR-T 的历史与技术方面 体内CAR-T的临床转化得益于两项重大技术的突破：CAR分子设计的进步，奠定了CAR-T治疗的基础理论；以及基因递送载体的进步，解决了靶向和基因改造特定细胞群体的原位挑战（图1）。本节回顾了体内CAR-T疗法的历史发展，并介绍其主要递送平台的技术原理。 图1 体内CAR-T时间线 2.1 CAR构造设计 CAR-T疗法的核心机制是通过基因工程化表达合成设计的嵌合抗原受体（CAR）。CAR结构的结构对其治疗效果至关重要。CAR是一种模块化合成受体，由四个功能域组成：（1）细胞外抗原结合结构域；（2）提供柔韧性的铰链区域；（3）用于膜锚定的跨膜结构区；以及（4）一个细胞内信号结构域，在抗原识别时驱动T细胞激活。表达该合成受体的T细胞能够特异性地识别并消除表达相应抗原的靶细胞，且其表达方式与主要组织相容性复合体（MHC）无关。 CAR技术的发展历经数代人（图2）。经过广泛验证的第二代CAR架构成为目前大多数体内CAR-T候选产品的基础。然而，从体外范式直接应用其设计需要对关键设计元素的仔细重新考虑。首先，选择共刺激域需要仔细重新评估。由于体内给药相比体外制造缺乏广泛的T细胞前激活能力，因此由两个主流共刺激结构域CD28和4-1BB驱动的独特代谢程序和功能状态（例如，CD28偏向效应表型，4-1BB促进持久性），在体内可能带来显著不同的治疗效果。其次，安全和可控性的设计更加紧迫。临床前研究显示，载体给药后CAR-T细胞生成的效率和动力学在个体间存在显著变异性，而给药后直接干预则具有挑战性。因此，引入诸如感应自杀开关等安全模块，这是第四代CAR的标志，是管理潜在毒性的关键策略。最后，灵活性是未来的关键方向。第五代“分体CAR”为靶点切换设计，为潜在抗原逃逸或体内序列治疗的需求提供了解决方案。然而，它们复杂的多组分协调对载体设计和体内功能验证提出了更高的要求。 图2 嵌合抗原受体（CAR）结构的发展 第一代CAR仅将抗原结合结构域融合到CD3ζ信号结构域并展示了有限的激活能力。第二代CAR结合了单一的共刺激结构域，配合CD3ζ，提供完整的激活信号，从而实现了临床转化的成功。第三代CAR试图通过整合多个共刺激结构域来增强信号传导。第四代CAR集成了额外的效能增强模块或者引入自杀开关或逻辑门控控制。第五代CAR配备了可切换的分体CAR系统以实现目标灵活性。 总之，体内CAR-T疗法的合理开发需要针对每个CAR模块进行针对性的重新评估和优化，基于体内细胞工程的独特生物学特性及预期临床应用。 2.2 T细胞靶向策略 长期以来，体内CAR-T治疗的进展因早期递送平台的根本性限制而受阻，尤其是在靶向特异性、效率和安全性方面。近年来，靶向载体的进展通过将T细胞表面标记特异性抗体或配体结合到载体表面，克服了这些局限，使该方法从概念转变为应用。本节将首先探讨如何通过选择合适的T细胞表面靶点和分子靶向工具，实现载体的特异性体内递送。 对于T细胞靶向，主要抗原包括CD3、CD4、CD8和CD7。靶向CD3——TCR复合体的核心成分——在一定程度上可以直接激活静息T细胞无需IL-7的预激活；它促进了泛T细胞池的招募，包括CD4+和CD8+亚群，使CD8+ CAR-T亚群能够实现更持久和更强的激活。这使得CD3靶向成为体内CAR基因递送的广泛采用策略。然而，该策略的局限在于无法精确控制产物亚组的最终比例，以及免疫抑制调节T细胞转导的风险。CD8靶向策略可以快速生成细胞毒性效应CAR-T细胞亚组以启动肿瘤杀死。然而，缺乏活化的CD4+ T细胞帮助可能导致持续性不足。此外，由于CD8也在某些NK和NKT细胞上表达，这可能导致这些细胞类型的意外转导。针对CD4主要激活辅助CAR-T细胞，这些细胞表现出较低的疲劳标记表达水平，表明它们在持续抗原刺激下可能更具韧性。CD7表达在T细胞和NK细胞表面；因此，针对CD7可以产生CAR-T和CAR-NK混合效应细胞群，从而实现协同的抗肿瘤效应。然而，针对CD7的载体通常对静息T细胞的转导效率不足。 确定T细胞靶后，选择合适的分子靶向配体至关重要。实现慢病毒载体T细胞靶向的主流分子工具包括单链变异片段（scFv）、纳米抗体（重链抗体的可变域，VHHs）和设计的强直蛋白重复蛋白（DARPins）。单链可变片段（scFvs），在传统CAR-T治疗中具有广泛临床记录，保持一个可靠的选择。纳米抗体（VHH）因其体积小而在识别复杂表位方面具有优势。设计的安基蛋白重复蛋白（DARPins）具有紧凑尺寸、高模块化及与无细胞选择系统的兼容性，也被积极研究用于体内CAR-T的开发。除了膜锚定格式外，靶向还可以通过非锚定策略实现；例如，2021年的一项研究使用抗SINV/抗CD3双特异性抗体将SINV-LV载体重新靶向CD3+ T细胞。 2.3 当前体内CAR-T递送平台 在确定靶向策略后，需要将靶向分子结合到合适的递送载体上。目前，体内CAR-T递送平台可分为病毒载体和非病毒载体，其关键特征的比较总结如下表1。 表1. 体内CAR-T治疗主要载体平台比较 2.3.1 病毒载体递送平台 病毒载体能够将功能性核酸输送到人体，广泛应用于癌症、遗传缺陷疾病和疫苗研发，其中基于左左心病的体内CAR-T疗法已进入临床试验阶段。 （1）缓释病毒载体递送平台 慢病毒（LV）是一种包膜RNA病毒。慢病毒载体促进转基因稳定整合到宿主基因组中，实现持续且长期的表达并在体外CAR-T治疗领域取得了显著成功。 作为包膜RNA病毒，慢病毒的包膜糖蛋白负责识别宿主细胞受体并介导膜融合，使其成为载体工程的重点。通过用伪定型技术替换或修饰包膜糖蛋白，其自然的嗜性可以被调整以针对特定细胞类型。最常见的策略是利用囊泡性口炎病毒G糖蛋白（VSV-G）通过广泛表达的低密度脂蛋白受体（LDLR）来介导广谱转导。然而，传统的慢病毒载体无法直接用于体内CAR-T治疗。以VSV-G伪型载体为例，其转导效率依赖于目标细胞中的LDLR表达水平，这使得在体内高效转导静息T细胞变得困难。此外，静息期T细胞处于G0期，其特征是代谢率低且限制因子表达高，这为慢病毒进入和整合创造了不利环境。此外，LDLR在多种细胞类型的普遍表达增加了非靶向转导的风险，而人类群体中既有抗体的高血清流行率则可介导载体中和，这些载体共同限制了其疗效和安全特性。 因此，体内CAR-T型慢病毒载体的一种核心工程方法是解耦并独立优化病毒的“膜融合”和“T细胞靶向”功能。对于融合模块，策略包括使用缺乏LDLR结合能力的VSV-G突变体或采用血清流行率较低的替代富生蛋白，以规避既有抗体相关问题并减少非特异性结合。同时，将针对T细胞表面标记物（如scFvs、纳米抗体或DARPIN）定向到病毒包膜上的靶向基层（如scFvs、纳米抗体或DARPIN）可实现精确的细胞特异性转导。2018年，一项开创性的概念验证研究表明，CD8靶向的工程LV细胞可以在免疫缺陷小鼠模型中生成功能性抗CD19 CAR-T细胞。 还开发了额外的工程创新以提升低压载体的功能性和安全性。Umoja的VivoVec平台在左腰室表面呈现抗CD3 scFv共刺激分子融合蛋白，直接提供完整的激活信号以增强转导效率，同时增强CAR-T细胞的体内持久性和抗肿瘤功能。TetraVecta平台采用TRiP技术，在载体生产过程中抑制CAR翻译和衣壳掺入，从而降低非靶向转导的风险。另一种方法，以EsoBiotec的ESO-T01为代表，将CD47纳入载体包膜，以抑制吞噬清除并降低免疫原性。 虽然大多数概念验证研究是在人源化小鼠模型中进行的，但其简化的免疫系统不足以准确预测人类免疫反应的复杂性。非人灵长类动物（NHP）模型的免疫系统更接近人类，因此为临床前验证提供了关键平台。令人鼓舞的是，多个领先的靶向左室平台，如Umoja的VivoVec™、Kelonia Therapeutics的iGPS和Interius的CD7-LV，已证明能够生成功能正常的CAR-T细胞，从而在不需先前淋巴细胞耗尽的情况下，实现NHPs中显著且持久的靶细胞清除率。 （2）腺相关病毒载体递送平台 腺相关病毒（AAV）是一种小型、无包膜、线性单链DNA病毒，缺乏自主复制能力。其基因组主要以表层体的形式存在，AAV载体在遗传疾病治疗领域拥有丰富的临床经验，拥有多款获批产品，使其在产品制造和监管路径上更具可行性。 目前所有基于AAV的体内CAR-T探索均处于临床前阶段。其临床转化的主要障碍是：人群中针对天然AAV血清型的既有抗体水平较高，限制了重复剂量；静脉注射时天然AAV血清型的肝脏嗜性，带来剂量相关毒性风险；转基因作为非整合性表层体存在——如果没有重复剂量，T细胞的快速扩增会导致CAR表达水平迅速下降；以及AAV载体的保守封装容量，不超过4.7 kb，这对CAR转基因盒设计构成更大挑战。 AAV的自然血清型缺乏足够的组织和细胞类型特异性，因此需要通过衣壳导向进化或插入靶向基层来提升T细胞的靶向。定向进化策略通过筛选重组衣壳来提升T细胞的亲向性。例如，2021年使用基于AAV-DJ的载体在体内生成CAR-T细胞并首次清除肿瘤，完成了AAV介导体内CAR-T的概念验证；2026年，一种AAV6-M2变异体在系统性红斑狼疮小鼠模型中成功生成了CD62L+ CAR-T细胞并清除了致病B细胞。然而，通过定向进化获得的衣壳通常仍保有对其他细胞类型的靶向能力。相比之下，插入目标部分的策略可以实现更精确的目标定位。 将缺失的AAV2或AAV6衣壳转化为HSPG结合缺陷的载体，能够在单次注射后高特异性转导>90%的CD8+ T细胞，同时消除小鼠的肝脏原生嗜向性。同样，AAVivo的 AVO-100 在 AAV 衣壳上添加了靶向肽，在拉吉淋巴瘤小鼠模型中有效延长了生存期。仿生膜涂层是克服重复AAV剂量相关免疫原性挑战的有效策略。例如，一项研究将AAV6衣壳封装在红细胞来源的膜囊泡中，并将抗CD3抗体结合到囊泡表面，生成靶向T细胞的人工包膜AAV（αCD3-AEV6）；在弥漫性大B细胞淋巴瘤小鼠模型中反复给药，显著抑制肿瘤。 2.3.2 非病毒载体递送平台 脂质纳米颗粒（LNPs）和阳离子聚合物是体内CAR-T治疗的两种主要非病毒递送平台，通常表现出低于病毒载体的免疫原性。其载荷通常是mRNA，使CAR能够瞬时表达，从而预防持续CAR-T活性带来的潜在长期毒性风险。基于LNP-mRNA的体内CAR-T产品已进入临床试验，而阳离子聚合物及其他非病毒载体仍处于概念验证阶段。 （1）脂质纳米颗粒载体递送平台 LNP-mRNA平台的可行性已在mRNA疫苗等应用中得到广泛验证。标准LNP制剂通常包含四个关键成分：可电离脂质、磷脂、胆固醇和环乙酰化脂质。其主要功能是高效封装并递送核酸治疗药物，通过内胚体逃逸释放有效载荷进入细胞质，实现瞬时转基因表达。然而，未修饰的LNP在静脉注射后会在肝脏中积累，限制治疗效果并带来剂量相关毒性风险。 LNPs的脂质组成是其表现的关键决定因素，直接影响递送效率和器官向性。在提升转染效率方面，用7α-羟基胆固醇替代传统胆固醇作为辅助脂质，可以提升LNP稳定性并促进内体体逃逸，从而使人体原发T细胞体外转染效率约提升两倍；而可电离脂质的结构修饰则影响膜融合特性和细胞选择性，从而促进T细胞转染。关于器官嗜向的调节，脂质工程可以改变LNPs的自然肝脏积累倾向。新兴的非阳离子硫脲基LNP通过氢键结合mRNA，表现出阳离子相关毒性较低且脾脏靶向倾向更强。此外，选择性ORgan靶向（SORT）技术通过引入永久阴离子脂质，可以促进LNPs向脾脏的递送。然而，仅依赖器官层面的亲向性无法满足T细胞基因工程的高精度要求，且可能因非靶向递送至抗原呈递细胞而引发不必要的免疫反应。 通过在LNP表面展示T细胞特异配体构建的靶向脂质纳米颗粒（tLNP），实现精确递送至特定免疫细胞。2022年，CD5靶向tLNP在小鼠心衰模型中生成了抗纤维化CAR-T细胞，验证了该平台在非肿瘤适应症上的可行性。随后，CD3靶向tLNPs在白血病和实体肿瘤小鼠模型中有效生成CAR-T细胞并清除肿瘤。然而，传统制剂的tLNP仍可能表现出非特异性的肝脏积累和配体非依赖转染。因此，有必要结合脂质工程或仿生修饰来增强tLNPs的淋巴器官靶向能力。例如，一项研究在LNP表面展示了红细胞膜蛋白，利用红细胞的脾脏归巢特性，增强脾脏的嗜向性，并实现脾CD11b+髓系细胞的高度特异性转染。 有效载荷格式的选择需要在安全性与耐久性之间权衡，基于治疗目标。LNP-mRNA平台通过瞬时表达规避基因组整合风险，提供相对可控的CAR表达并避免持续抗原刺激导致的CAR-T细胞耗尽。这使得它适用于需要受控干预的自身免疫性疾病。其表达持续时间可以通过重复给药延长，利用环状RNA，即核酸化学修饰。对于需要持久疗效的恶性肿瘤，LNPs还可以协同递送DNA和转座酶mRNA，实现长期基因组整合表达，不过这需要权衡相应的集成风险。 此外，LNPs的巨大容量支持共封策略，使CAR基因和免疫调节单元能够同步传递，从而在体内编程过程中同步调控细胞功能和安全性。例如，CAR基因与IL-6靶向干扰RNA基因的共递可以减轻细胞因子释放综合征。共递一种共递的CAR和免疫抑制分子CD24的竞争性受体可以逆转免疫抑制微环境。这些策略凸显了LNP平台整合多重治疗功能的灵活性，为其在更复杂疾病场景中的应用提供了可能性。未来研究还可进一步整合传统CAR-T疗法中成熟的免疫调节理念，扩大其应用范围。 除了小鼠模型外，多个LNP平台在非人灵长类（NHP）模型中也表现出优异表现：Capstan Therapeutics的CellSeeker™平台实现了犬猕猴的CD8+ T细胞转染高效和深度B细胞枯竭；Mina Therapeutics的MT-303实现了GPC3特异性CAR在单核细胞中的靶向表达，初步验证了其在实体肿瘤治疗中的潜力。 （2）阳离子聚合物纳米颗粒载体递送平台 阳离子聚合物纳米颗粒通过静电相互作用高效加载核酸，并可通过化学修饰实现细胞特异性靶向。传统阳离子聚合物容易与血液成分发生非特异性相互作用，且被肝脏迅速清除，导致靶向特异性和转导效率较低。因此，需要采用结合T细胞靶向基团等策略来提升其靶向性。 2017年，一项使用CD3ε靶向聚（β-氨基酯）（PBAE）聚合物结合小鼠抗CD19 CAR质粒递送睡美人转座子系统的研究，在免疫正常白血病小鼠模型中显著延长了生存期。该系统是CAR-T体内首次完整的概念验证演示。随后，2020年同一团队将该策略扩展到实体肿瘤模型。利用CD8靶向颗粒，他们在前列腺癌小鼠模型中体内生成抗受体酪氨酸激酶样孤儿受体1（ROR1）CAR-T细胞，并将中位生存期延长40天。该研究强调了该平台在克服复杂肿瘤微环境中挑战中的转化潜力。 阳离子聚合物载体的应用也已扩展到其他免疫效应细胞。在一项关于脑干胶质瘤的创新研究中，开发出一种RP-182肽修饰的合成DNA纳米载体，载有ErbB2靶向CAR基因。该构造体能够特异性地靶向并重编程肿瘤相关巨噬细胞（TAMs），在体内生成CAR巨噬细胞，延长携带NOG胶质瘤的小鼠的存活期，75%的治疗小鼠存活超过100天。 （3）其他非病毒载体 除了主流非病毒载体如LNPs和阳离子聚合物外，基于肽、仿生囊泡和生物高分子水凝胶技术的一系列新型载体平台也处于体内CAR-T领域的临床前概念验证阶段，提供多样化解决方案以克服现有递送瓶颈。 肽基纳米颗粒（PEP-NPs）是一类新型纳米载体，利用两性短肽的自组装特性，实现高效的核酸负载和肝外靶向递送。2025年的一项研究显示，单次静脉注射eGFP mRNA负载的PEP-NPs在C57BL/6小鼠T细胞中实现了15-22%的转染效率，并在细胞层面证明了产生功能性抗CD19 CAR-T细胞的能力。尽管全面的体内疗效验证尚待确定，但本研究提供了支持该平台应用潜力的初步证据。 病毒拟合成纳米囊泡（FuNVs）是仿生囊泡载体，模拟病毒膜融合机制，直接将预装载在囊泡膜上的CAR蛋白送达T细胞。2024年的一项研究通过将麻疹病毒或哺乳动物直肠孤病毒fusogen蛋白与抗CD3 scFv融合，生成囊泡，囊泡上显示该融合蛋白及抗CD19 CAR的细胞膜。在B细胞淋巴瘤小鼠模型中，该方法成功将约2%的外周T细胞转化为抗CD19 CAR-T细胞，并在反复给药下实现超过50%的肿瘤抑制率，且未诱发细胞因子释放综合征，显示出强烈的转化潜力。 细胞外囊泡（EVs）天然来源于活细胞的质膜，具有高生物相容性，代表了核酸递送的新兴平台。2023年的一项研究使用经CD3/CD28 scFvs修饰的外泌体递送CAR mRNA，成功在体外生成CAR-T细胞。作为可工程化的运输载体，电动汽车可以直接传递CAR基因和免疫调节因子，同时表面显示功能分子，进一步调节免疫反应。例如，MHC抗原肽复合物的表面呈现与共刺激配体可以直接激活抗原特异性T细胞。如果进一步设计以显示针对肿瘤的抗体，EVs可能增强T细胞识别和肿瘤结合能力，类似于双特异性抗体。尽管体内验证研究尚未发表，但EVs体外成功递送为开发体内CAR-T载体提供了新的概念框架。 基于水凝胶的三维载体系统可以模拟细胞外基质微环境，从而在肿瘤微环境中招募和工程化T细胞，实现高效且持久的体内CAR-T制造，使其适合实体肿瘤治疗。研究表明，多功能海藻酸盐基支架（MASTER）载有T细胞激活剂和包裹携带抗CD19 CAR基因的逆转录病毒载体，皮下植入携带Daudi淋巴瘤模型的NSG小鼠时，将体外CAR-T的100天无肿瘤生存率从16.6%提升至50%。另一项研究通过肿瘤内注射由α环糊精和阳离子聚合物PPP结合抗CD3 F(ab')片段的水凝胶，在人源化小鼠中生成功能正常的CAR-T细胞，显著增强细胞毒性T细胞浸润并逆转免疫抑制性肿瘤微环境。 尽管还需进一步验证，这些独特的新型载体平台为体内CAR-T的应用打开了更多可能性。 【NO.3】体内CAR-T临床研究与开发的进展 自2022年以来，体内CAR-T研发流程迅速扩展。根据Synapse药物数据库（synapse.zhihuiya.com）的统计数据，截至2026年1月初，全球已报告了90多项公开披露的体内CAR-T候选资产，涵盖多个治疗领域，包括血液恶性肿瘤、实体肿瘤和自身免疫疾病。 就靶点分布而言，含有CD19和CD19的双靶组合主导了公开的体内CAR-T管线，其次是BCMA、CD20和CD22等其他B细胞抗原。这一分布与传统体外CAR-T在血液恶性肿瘤中的临床成功非常相似。与此同时，靶向GPC3和TROP2等实体的药物开发，表明人们对体内CAR-T策略在实体肿瘤适用性的信心不断提升。 体内CAR-T疗法目前正在广泛适应症领域被探索，包括血液恶性肿瘤、自身免疫疾病和实体肿瘤。值得注意的是，披露的临床前研究流程中有相当一部分聚焦于自身免疫疾病，这凸显了该技术在解决高未满足医疗需求的潜力。 截至2026年1月底，全球共有16项体内CAR-T药物候选人正在进行研究者发起的试验（IIT）（不包括终止或暂停的试验）；已有9款体内CAR-T产品获得IND认证。这些研究涉及16个瘦病毒载体平台和9个LNP-mRNA平台。研究的适应症包括血液恶性肿瘤、实体肿瘤和自身免疫性疾病，详见下表2、表3以及图3，该内容将在下文单独描述。 表2 IIT临床试验中的体内CAR-T 缩写：B-NHL，B细胞非霍奇金淋巴瘤；B-ALL，B细胞急性淋巴细胞白血病；系统性红斑狼疮（SLE）；艾滋病，自身免疫疾病。数据来源： 表3 IND临床试验中的体内CAR-T 数据来源：Clinicaltrials.gov 和中国临床试验注册处。 图3 体内CAR-T治疗的临床试验适应症及相应CAR靶点 截至2026年1月底，已有9款体内CAR-T产品获得IND批准，16款已注册参加由研究者发起的临床试验（不包括终止或暂停的试验）。（左）体内CAR-T疗法的临床适应症分布按载体平台划分（同一适应症类别内的多项试验一次计入）。（正确）临床试验中体内CAR-T候选药物的靶向分布。 3.1 体内CAR-T血液恶性肿瘤临床进展 体内CAR-T技术应用于血液恶性肿瘤，是在传统体外CAR-T疗法既有成功的基础上建立的基础。迄今为止，已有20款针对血液恶性肿瘤的体内CAR-T试验性产品进入临床试验。BCMA和CD19是该领域最先进的靶点，在临床前研究中显示出有利的安全性和疗效，早期临床试验的初步数据现已陆续浮出水面。 在B细胞恶性肿瘤中，针对CD19或BCMA的治疗尤为重要。由深圳GYGene Bio开发的JY-231（一种编码抗CD19 CAR的CD3-scFv靶向lentiviral载体），在一名64岁复发/难治性弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者中进行了评估。单次输注后，体内生成的CAR-T细胞于第17天达到峰值，患者在第3个月达到完全反应。治疗相关不良事件主要包括骨髓抑制（血液毒性）和一级细胞因子释放综合征（CRS），未报告神经毒性或严重感染。该病例为体内CAR-T治疗B细胞恶性肿瘤提供了初步概念验证。然而，本病例报告源自会议摘要，属于单案设计；其结论应谨慎解读。 由武汉联合医院与EsoBiotec联合开发的ESO-T01（一种CD47修饰、TCR靶向的致病毒，编码抗BCMA的CAR），在四例复发/难治性多发性骨髓瘤（RRMM）患者中进行了评估。单次低剂量（2.0×10^8^TU）静脉输注且无淋巴细胞耗尽化疗，CAR-T细胞在10至17天间外周血达到峰值。所有患者在第28天达到最低残留病变（MRD）阴性，2名患者髓外病变完全缓解，符合严格完全反应标准。安全性包括3级CRS（3例患者）、1级免疫效应细胞相关神经毒性综合征（ICANS）（1例）及可逆3-4级血液毒性，且无报告严重非血液系统事件。Kelonia Therapeutics的KLN-1010（一种编码抗BCMA的CD3靶向lentiviral载体）在一项首次涉及三名RRMM患者的人体一期临床试验中进行了评估。在无淋巴细胞耗尽的情况下，所有患者均达到MRD阴性（10^−5^到10^−6^敏感度）并且至少在一个月内出现部分反应。随访时间最长的患者在三个月后MRD阴性，并保持了非常好的部分反应。治疗与输注反应和2级CRS相关；血液毒性为轻度且短暂，未报告神经毒性或感染。这些早期发现共同强调了体内CAR-T在难治性多发性骨髓瘤中的治疗潜力。这些发现基于样本量小、随访时间短，以及主要来自会议摘要或IIT披露的数据；在更大规模、同行评审的临床研究中得到验证前，应谨慎解释。 除了CD19和BCMA外，CD20靶向策略在小鼠和非人灵长类动物（NHP）临床前模型中也展现出良好疗效，显示其未来临床转化的强大潜力。 3.2 体内CAR-T在实体肿瘤的临床进展 传统CAR-T疗法长期以来因T细胞归巢不足、肿瘤浸润有限以及免疫抑制微环境损害效应细胞功能而受阻。体内CAR-T策略具有多项显著的理论优势：递送载体的小型可能有助于组织穿透，且持续表达CAR有助于在肿瘤微环境中维持长期免疫压力。 临床前研究已初步验证了这一概念。例如，在小鼠黑色素瘤模型中，通过递送TRP1特异性CAR mRNA的抗CD3靶向脂质纳米颗粒（tLNPs）成功生成能够浸润肿瘤并选择性消除TRP1阳性癌细胞的功能性CAR-T细胞。 该方法的临床转化正在进行中。CREATE Medicines的MT-302是一种编码抗TROP2 CAR的骨髓细胞靶向LNP，在一项涉及27名晚期实体肿瘤患者（11个亚型）的一期临床试验中进行了评估。在未进行淋巴细胞耗竭的情况下，反复输注会导致CAR阳性骨髓细胞浸润到肿瘤组织，伴随着T细胞招募、抗原递增增强以及肿瘤微环境的促炎重塑。观察到的最佳总体反应是HR阳性乳腺癌患者的部分反应持续16个月。该疗法安全性可接受，不良事件主要包括低度直肠直肠综合征、发热和血液毒性；仅在最高剂量队列中出现了一例4级ICANS病例。生物标志物分析证实，CAR在循环骨髓系细胞中表达迅速，且活检样本中CAR阳性骨髓系细胞与TROP2阳性肿瘤细胞共定位。 尽管取得了这些进展，实体肿瘤体内CAR-T仍面临重大挑战，包括肿瘤微环境介导的抑制、免疫抑制性T细胞亚组的潜在非靶向转导，以及功能耗尽患者T细胞产生的CAR-T细胞的疗效或持久性有限。未来的优化策略可能包括加入含有共刺激抗体或激动抗体的载体，共同递送免疫调节细胞因子，利用本地生物材料支架重塑肿瘤微环境，开发双靶向系统以增强特异性，或将此方法转向更易重编程浸润的髓系细胞。 3.3 体内CAR-T自身免疫疾病的临床进展 体内CAR-T技术在自身免疫疾病中的应用正受到越来越多的关注。与传统抗体疗法相比，CAR-T可能实现更深层次、更持久的B细胞枯竭。体内方法无需体外制造和耗尽淋巴细胞的化疗，降低治疗复杂性和相关风险，同时允许重复剂量以调整治疗强度，这可能为长期疾病管理带来独特优势。 B细胞耗尽策略已被证明在多种自身免疫疾病中有效。多平台的临床前研究已证明，体内抗CD19介导的CAR-T介导的B细胞清除率强健，为自身免疫适应症临床研究提供了依据。在小动物模型中，Aera Therapeutics开发的平台（tLNP）显示出人源小鼠中剂量依赖且显著的B细胞耗竭；而SAIL（tLNP-eRNA）平台在0.01 mg/kg的低剂量下，实现了外周血单核细胞（PBMC）人源化小鼠多个B细胞亚群的深度耗竭。在大型动物模型中，Capstan Therapeutics开发的平台（CD8-tLNP）以及赛诺菲（CD8-tLNP）在犬猕猴中取得了卓越的B细胞清除率，具有可控的毒性特征，显示其翻译潜力。 在系统性红斑狼疮（SLE）中，这是一种以B细胞活动失调为特征的疾病，MagicRNA的HN2301（一种抗CD19 CAR-T疗法）在难治性红斑狼疮患者中显示出初步临床活性。输注后6小时内，CAR-T细胞可在外周血中检测到。在中等剂量队列（4毫克）中，重复输注结果显示CAR-T细胞占外周T细胞的60%以上，伴有持续7-10天的完整B细胞发育不良。临床上，患者在抗双链DNA抗体滴度下降，补体水平在2-3个月内正常化，疾病活跃度评分显著改善（SLEDAI-2000）。该疗法安全性可接受，低级别CRS为主要不良事件，且无治疗相关感染或神经毒性报告。未来，在更大队列和更长随访时间的研究中，疗效需要进一步确认。 与整合平台相比，tLNP-mRNA平台规避了基因组整合的风险，其生成的CAR-T细胞扩增有限，同时有效消耗B细胞并促进免疫重组。这一轮廓显著提升了治疗自身免疫疾病的风险与收益比，带来了明确的转化优势，并有望成为一种新颖的治疗策略。 3.4 体内CAR-T其他疾病的临床进展 虽然尚未进入临床试验阶段，体内CAR-T在抗纤维化治疗和针对炎症性衰老等领域展现出探索性潜力。纤维化由活化成纤维细胞产生的过多细胞外基质引发，缺乏直接消除这些致病细胞的疗法。2022年的一项概念验证研究利用CD5靶向tLNP在心脏损伤模型中递送抗FAP CAR mRNA，生成CAR-T细胞，清除活化的成纤维细胞，减少胶原蛋白并改善功能。短暂的CAR表达可能避免干扰正常组织修复，为其他纤维化疾病提供可调节的策略。另一种方法是针对炎症性衰老——一种慢性、促纤维化的炎症状态。在肝纤维化模型中，通过递送抗uPAR CAR circRNA的T细胞热带LNP清除了衰老细胞，减少了损伤标志物，并减轻了瘢痕，支持衰老清除作为修复策略。过敏研究以及传染病进一步凸显了该平台在传统疗法未能充分解决的疾病中的潜力。 邀您加入“艺药荟社群”交流学习! 备注：姓名+单位+方向 版权说明：本文欢迎个人转发至朋友圈，谢绝媒体或机构未经授权以任何形式转载至其他平台。转载授权或其他合作需求，请联系梓树ZiShu（微信：Z07302256）。 免责声明：本文仅作信息交流之目的，文中观点不代表“艺药荟”立场，亦不代表“艺药荟”支持或反对文中观点。本文不作为治疗方案推荐。如需治疗指导，请前往正规医院就诊。

In vivo CAR 领域使用慢病毒载体的主要玩家 by TiPLab 木桃 Interius BioTherapeutics / Gilead 技术源自 UPenn 的 Saar Gill 团队（在宾大医院从事血液肿瘤与骨髓移植相关临床工作，研究聚焦在新一代CAR设计），载体设计通过 CD7 靶向在体内生成 CAR-T 和 CAR-NK 细胞。INT2104 （靶向CD20 CAR）的临床研究正在进行，其中一位患者（6.3e8 TU剂量）在第 6 天实现近乎完全 B 细胞清除。2025 年，Gilead Sciences（Kite）以约 3.5 亿美元收购 Interius，补齐体内递送能力。EsoBiotec / AstraZeneca 平台技术来自 Luigi Naldini 团队（首次证明慢病毒载体可以转导非分裂细胞，慢病毒基因治疗领域奠基性人物）。其慢病毒载体平台 ENaBL 采用 CD47 免疫屏蔽以减少慢病毒载体在体内被清除，CAR 设计使用特异性启动子以提高靶细胞表达，并使用靶向TCR的纳米抗体。 主导项目ESO-T01 采用抗 BCMA 单域抗体 CAR（来自于Pregene），其治疗复发/难治性多发性骨髓瘤的临床数据已读出，四名患者 ORR：100%（sCR：50%，PR：50%）。 2025 年，AstraZeneca 以最高 10 亿美元收购EsoBiotec，为该赛道较早的大药企收购之一。Kelonia Therapeutics / Eli Lilly 平台源于MIT的 Michael E. Birnbaum 实验室，此前构建了带有 K47Q 和 R354A 双突变的 VSV-G 假型慢病毒载体以提高靶向转导效率。其 lead 项目KLN-1010 的BCMA CAR结构与ESO-T01类似（BCMA scFv/4-1BB/CD3ζ），2026 年 1 月拿到美国 IND，是美国首个抗 BCMA 体内 CAR-T 疗法的多中心临床试验，已有临床数据显示四名复发/难治性多发性骨髓瘤患者的ORR：100%（CR：25%，PR：75%），疗效方面略次于ESO-T01，但安全性更优。 与安斯泰来合作使用其可转换CAR（含有工程化抗体样分子）开发创新体内CAR-T。2026 年被 Eli Lilly 以最高可达 70 亿美元收购，迄今为本领域收购金额最高的交易。Umoja Biopharma 其 VivoVec 平台使用anti-CD3 scFv、Cocal 假型蛋白、RACR/CAR 共表达系统以及 CD80-CD58 共刺激配体。 主导管线 UB-VV111（与 AbbVie 合作）设计采用 VivoVec + CD19-CAR，用于治疗复发/难治性 CD19+ B 细胞恶性肿瘤，2024 年成为首个获得 FDA 批准的体内 CAR-T 细胞疗法。2025年9月，其用于治疗复发/难治性大B细胞淋巴瘤和复发/难治性慢性淋巴细胞白血病获得了FDA授予的快速通道（Fast Track）资格。另外，与国内驯鹿生物和诺纳生物有合作推进管线。Genocury Biotech（济因生物） 采用常规淋巴清除预处理，其慢病毒载体表达一种激活结构域以增强信号。JY231的治疗方案包括 T 细胞分离术，随后进行淋巴细胞清除预处理，并将自体 T 细胞与病毒载体共同输注，1名 R/R DLBCL 患者在治疗后3个月实现完全缓解。Sana Biotechnology 采用源自副黏病毒的 fusogen 进行细胞靶向递送，技术来自于Cobalt Biomedicine，通过载体表面融合蛋白介导的膜融合而非内吞途径进入细胞。 主导项目SG293 使用CD8 靶向且修饰 CD3 配体的 fusogen 递送 CD19 CAR，在非人灵长类中单次给药即可实现深度 B 细胞清除和免疫重置。Vyriad 提出了三种 VSV-G 重定向策略，包括使用嵌合型 VSV-G 蛋白，该蛋白展示靶向 CD3 的配体，但经过修饰以掩盖其与低密度脂蛋白（LDL）受体的天然相互作用。 与 Novartis 等建立合作推进体内 CAR-T，另外从魏茨曼科学研究所引进小型可逆衔接肽，与靶向蛋白结合能够暂时掩盖该蛋白与天然受体的结合，同时呈现一个新的靶向结构域。Exuma Biotech 核心特色是其构建的慢病毒载体使 T 细胞可表达合成蛋白，具备安全开关与效应细胞持久性增强双重功能。目前处于临床前开发阶段。Immunofoco（易慕峰） 慢病毒载体 iMagic平台采用去靶向的 MxV-G 假型蛋白，在传统 VSV-G 基础上通过 AI 设计优化。公司同时拥有自体 CAR-T 实体瘤管线，兼顾体内递送与 ex vivo 策略。Legend Biotech（传奇生物） 拥有成熟的 CAR-T 产品线和全球临床开发能力，在体内 CAR 方向采用 CD19/CD20 双特异性 CAR 设计，并已启动有关血液肿瘤的早期临床尝试。其差异化来自于双靶点覆盖与自身 ex vivo 成功经验的技术累积。PersonGen（博生吉） 其 GUIDED 平台采用 CD7 靶向抗体构建体内 CAR-T 或 CAR-NK 细胞，依托其成熟的CAR技术平台及前期技术积累对CAR结构也进行了优化。公司创始人杨林率先在中国建立了全自动CAR-T细胞生产工艺平台。Pregene Biopharma（普瑞金） 支持 EsoBiotech 设计了 CAR-T 疗法并共同推进其进入临床试验阶段。另外，与 Gilead/Kite 等达成了高额合作协议，提供慢病毒载体设计与工艺支持。 * 以上文字仅为促进讨论与交流，不构成法律意见或咨询建议。 © 作为一家专业服务公司，TiPLab坚持原创的系统的研究，注重系统性知识积累与专业影响力。欢迎读者个人分享转发，各专业平台媒体如需转载请联系TiPLab获得授权。  TiPLab提供基于研究的核心知识产权服务 FTO：技术商业化实施的侵权风险防范 TiPLab通过对细分技术领域内核心技术和重要专利的长期研究，结合自身在数据检索和分析方面的专长，致力于帮助客户深入了解、积极应对潜在的专利侵权风险。 Due Diligence：商业活动中的知识产权尽职调查 在企业许可交易、融资、并购、上市等过程中，TiPLab帮助企业和投资方了解目标技术/产品的专利保护强度及产品商业化过程中潜在的专利侵权风险，从而为商业谈判和决策提供支持依据。 Patenting：全球范围内高价值专利资产的创设 TiPLab熟知全球主要国家和地区的法律实践和细分领域内的前沿技术进展情况，通过前瞻性的专利布局策略，帮助客户通过创设有价值的专利资产而获取、保持和巩固独特的竞争优势。