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元旦/春节[知识福利]—VIP资源请加入“艺药荟”知识星球。 经典阅读： 本文内容来自经典书籍《生物制药工艺：生产工艺开发、设计和实施》的第6.2章节，主要概括总结了生物制药哺乳动物宿主细胞系统的来源、特点和应用。 6.2.1 培养类型 动物细胞培养可以根据不同的培养类型进行划分，每种类型都有特定的特征，对生物制造商很重要。原代培养物源自正常动物组织，可以作为外植体培养，或者在酶消化后作为单细胞悬液培养。分离出的原代细胞可以有两种不同类型:贴壁细胞，需要附着在表面才能生长；悬浮细胞，在悬液中自由生长。贴壁细胞大多源自器官组织，它们在那里是固定的，并嵌入结缔组织中。悬浮细胞源自血液/血浆系统。当原代培养物进行传代培养(转移到装有新鲜营养物的新容器中)时，它就被称为细胞系。原代细胞系只能在体外维持有限的时间，在此期间，细胞通常保留体内细胞的大部分特征。在生物制药生产中，原代细胞系，例如鸡胚成纤维细胞，用于病毒疫苗生产。原代细胞系的一个新兴应用领域是细胞治疗。原代细胞系也广泛用于研究和发现应用以及生物测定。常见的原代细胞系包括角质形成细胞、黑素细胞、上皮细胞、成纤维细胞、内皮细胞、肌肉细胞、造血细胞和间充质干细胞。 正常细胞通常在失去增殖能力之前只能分裂有限的次数。然而，一些细胞通过称为转化的过程变得永生，这种转化可以自发发生，也可以通过化学或病毒诱导发生。当有限细胞系发生转化时，它就变成了连续细胞系。连续细胞系在转化过程中会失去许多其原有的体内特征，但它们将获得长期可用的好处。在文献中，连续细胞系大多仅被称为“细胞系”。连续细胞系可以作为单细胞或小的漂浮团块在悬液中生长，或者附着在表面生长。在大规模生物制造中，悬浮细胞系是首选，因为与贴壁细胞相比，它们的处理更方便，扩大培养也更容易。只要有可能，生产培养物就会适应悬浮生长。一般来说，连续细胞系的生长特性反映了其来源的组织。源自血液的细胞系倾向于在悬液中生长(例如源自小鼠骨髓瘤的NS0细胞)，而源自实体组织的细胞倾向于贴壁生长。两种最常用的生产细胞系CHO和HEK293本质上是贴壁的，然而两者都有市售产品，可适应在无血清细胞培养基中悬浮生长。 6.2.2 非人类哺乳动物系统 中国仓鼠卵巢细胞(CHO)是动物细胞重组蛋白生产的主要体系。2015年，在所有由动物细胞生产并获得美国食品药品监督管理局(FDA)/欧洲药品管理局(EMA)批准的重组产品中，超过半数(55%)是由CHO细胞生产的。CHO细胞占据主导地位的原因包括在重组蛋白生产方面早期取得的成功、易于操作、监管部门认可以及高表达水平。用于大规模制药生产的其他哺乳动物细胞系包括小鼠骨髓瘤细胞系NS0和Sp2/0、幼仓鼠肾(BHK)细胞、来自非洲绿猴的Vero细胞以及来自犬类的麦迪逊-达比犬肾(MDCK)细胞。后两种细胞(Vero和MDCK)主要用于疫苗生产，而其他细胞系大多用于重组蛋白生产。除了这些已确立的细胞系，未转化的培养物用于特定的生物制药过程，例如疫苗生产和细胞治疗。 中国仓鼠卵巢细胞(CHO) 首个中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系由T.Puck于1957年开发用于细胞遗传学研究，在20世纪80年代初，这些细胞作为异源蛋白的生产宿主受到越来越多的关注。原始的CHO细胞系已被多次亚克隆，最常用的生物制造亲本细胞系(CHO-K1、CHO DG44和CHO-S)各自起源于不同的CHO谱系，如图6.4所示。CHO细胞的特点是遗传和表型不稳定，导致高度的多样性。不同的培养条件会导致对具有独特功能属性(例如增殖、聚糖能力和重组蛋白生产力)的CHO细胞进行自然选择。这意味着由于其高水平的基因组动态性，大多数工业上使用的CHO细胞系在最大细胞生产力、生长行为和代谢活性以及翻译后修饰类型方面表现出相当大的差异。毫无疑问，这对在生物制药行业中将CHO细胞用作表达宿主具有重要影响。例如，在筛选能够维持长时间过程、技术转移或扩大到大规模生产的生产克隆时，这可能会导致意想不到的结果。 从本质上讲，CHO细胞贴壁生长且依赖血清，但它们相对容易适应无血清悬浮生长。适应无血清悬浮生长的CHO细胞系有商业供应。这一事实，再加上CHO细胞的稳健性，促进了大规模CHO生产工艺的发展。CHO也被认为是一个非常安全的生产平台。针对人类的致病病毒，如腺病毒、疱疹病毒、肝炎病毒、艾滋病毒、麻疹病毒和流感病毒，在CHO细胞中不会复制。此外，几轮基因诱变为产生缺乏代谢关键酶的CHO亚系铺平了道路。这些亚系可用于建立对异源蛋白表达具有有利特性的新型CHO细胞工厂。使用二氢叶酸还原酶dhfr-或谷氨酰胺合成酶的选择技术是重组蛋白生产常用的系统。这些系统将在第7章中更详细地描述。 图6.4 CHO细胞谱系。当今用于生物制造的不同CHO亚系的历史概述 2011年，CHO-K1细胞系的基因组公布，最近，中国仓鼠黑线仓鼠(C.griseus)以及包括CHO-K1、DG44和CHO-S在内的其他几个CHO细胞系的基因组也已发表。这些基因组进一步深入了解了CHO细胞的特征，并突出了不同CHO谱系之间的差异。然而，鉴于前面提到的CHO细胞的多样性和不稳定性，对于特定生产克隆的影响仍必须逐个评估。事实上，即使在克隆的CHO培养物中，不同细胞之间的表达水平也可能相差70%。在非克隆的CHO细胞系，如CHO-K1 SV中，差异可能更加明显，对生长和蛋白质生产能力有影响。 对于中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达系统而言，一个特别的关注点是优化聚糖模式，因为已有研究表明聚糖谱的变化会影响产品的稳定性和功能，并且非人类糖型可能具有免疫原性。由于生物类似药的发展趋势和生物优化药的研发，这一点最近受到了特别关注。在生物类似药的情况下，挑战在于使聚糖模式与原研产品的模式相匹配。对于生物优化药而言，挑战则可能是尽量减少次优糖型，以提高疗效并减少副作用。CHO细胞缺乏人类细胞中存在的某些糖基转移酶，因此它们无法产生所有人类糖型。相反，CHO细胞可以产生人类中不存在的鼠类型聚糖，即末端α-Gal5和NGNA6表位([32,32a])，但通常含量非常低。这就是为什么CHO细胞产生的糖蛋白通常被认为是安全的原因之一。然而，α-半乳糖和N-羟乙酰神经氨酸(NGNA)表位都能够在人类中引发免疫反应。通过优化工艺条件可以改变聚糖模式，但除非对细胞进行基因工程改造，CHO的基本局限性将始终存在。因此，如果产品依赖于具有人类聚糖模式，那么人类细胞系可能比CHO细胞系是更好的选择。已知细胞培养基中的某些成分对糖基化有特定影响。例如，这些成分可以是特定糖基转移酶功能所需的微量元素。优化生物反应器参数，如pH和溶解氧(DO)，也可以有效地最大化所需聚糖谱的产量。 CHO-K1 CHO-K1细胞系是源自原始卵巢组织分离物的非常早期建立的克隆细胞系之一，并且仍被生物制药行业以及生物医学研究领域所使用。2000年，龙沙集团(Lonza)对原始的CHO-K1细胞系进行改造，使其能够在悬浮培养和无血清培养基中生长，后来又开发了一个称为CHO-K1 SV的亚系。CHO-K1 SV细胞系大多与独特的谷氨酰胺合成酶(GS)选择系统结合使用，在该系统中，目的基因(GOI)与GS基因的一个拷贝一起导入细胞。在无谷氨酰胺培养基中选择稳定细胞，该培养基也可以补充特定的GS抑制剂甲硫氨酸亚砜胺(MSX)，以提高选择的严格性并提高生产力。然而，Jun及其同事的一项研究表明，由于染色体重排，克隆不稳定性可能是MSX扩增的生产克隆中的一个问题。在甲氨蝶呤(MTX)扩增的二氢叶酸还原酶(DHFR)缺陷型CHO-DG44生产细胞系中也经常观察到这种现象。 CHO-S 在20世纪60年代初，西奥多·帕克(Theodore Puck)注意到CHO细胞的亚群可以作为非贴壁悬浮培养物生长。大约十年后，拉里·汤普森(Larry Thompson)和雷蒙德·贝克(Raymond Baker)首次提及并描述了CHO-S细胞系的悬浮培养，该细胞系是CHO pro-5细胞系的后代。值得注意的是，CHO细胞适应悬浮培养标志着动物细胞培养技术的范式转变，并最终为使用搅拌罐生物反应器(STR)大规模生产重组蛋白治疗药物铺平了道路，生产规模可达20000升。如今，符合cGMP标准的保藏悬浮生长CHO-S生产细胞可以通过商业途径获得。然而，CHO-S细胞的一个主要缺点是该细胞系在悬浮培养中倾向于形成大的聚集体。 CHO-DXB11 用于生产生物制药的CHO细胞的商业开发始于建立一种缺乏功能性二氢叶酸还原酶(DHFR)表达的CHO细胞系，DHFR是合成胸苷和次黄嘌呤所需的一种酶。因此，缺乏DHFR的CHO细胞是甘氨酸、次黄嘌呤和胸苷的三重营养缺陷型细胞，因此需要在培养基中添加这些营养物质。为了获得这种后来被称为CHO-DXB11的细胞系，CHO-K1细胞通过γ射线诱变，产生了一种缺乏DHFR活性的突变细胞系。特别地，CHO-DXB11细胞的一个DHFR基因座发生了物理缺失，而另一个等位基因携带DHFR基因的错义突变(T137R)。DHFR活性的缺乏使得CHO-DXB11细胞非常适合用基因传递载体进行稳定转染，这些载体还携带一个转基因以及DHFR基因的功能拷贝。转染后的细胞可以在不含次黄嘌呤和胸苷(HT)的培养基中进行稳定筛选，因为DHFR的表达使细胞能够在没有上述脱氧核糖核苷的情况下合成DNA。CHO-DXB11也是基因泰克公司用于商业生产首个获批的重组蛋白治疗药物——人组织纤溶酶原激活剂(tPA；商品名为Activase)的主要重组CHO宿主细胞系。 说明：【4】.α[2-6]唾液酸转移酶和α[1-3/4]岩藻糖基转移酶。【5】.半乳糖-α-1,3-半乳糖。【6】.N-羟乙酰神经氨酸。 CHO-DG44 由于CHO-DXB11细胞系的一个DHFR等位基因中存在错义突变，DHFR活性仍有较低但潜在的恢复风险。因此，乌尔劳布和查辛决定使用原始的CHO细胞系进行额外的诱变轮次，以获得表现出DHFR基因双等位基因敲除的CHO细胞。这些努力最终导致建立了另一种缺乏DHFR的CHO细胞系，称为CHO-DG44，其中两个DHFR基因座都发生了物理缺失。从那时起，CHO-DG44细胞已成为全球生物制药工业生产中最常用的源自CHO的宿主细胞系。缺乏DHFR的CHO细胞取得成功的一个主要优势是，当用叶酸类似物甲氨蝶呤(MTX)处理转染细胞时，它们能够扩增转基因。MTX通过竞争性结合DHFR酶的催化位点来抑制DHFR活性，从而阻止二氢叶酸转化为DNA合成所需的活性四氢叶酸。在稳定转染了编码感兴趣基因(GOI)以及DHFR的载体的缺乏DHFR的CHO细胞培养基中逐步增加MTX浓度，会给细胞增加进一步的选择压力。这进而导致DHFR和GOI的基因组扩增，导致转基因拷贝数增加，因此存活的细胞池通常表现出重组蛋白的细胞生产力提高。然而，MTX介导的基因扩增以及随之而来的蛋白质产量增加不可避免地伴随着主要的基因组重排，并且很可能也伴随着基因表达的变化。此外，在其他因素中，MTX诱导的基因组畸变被认为是克隆不稳定性的驱动力之一，这在生物制造中是一个严重问题。尽管如此，除了CHO-K1之外，源自CHO-DG44的细胞系仍然在全球大量制药公司中频繁使用。 骨髓瘤细胞 自20世纪70年代杂交瘤技术发展以来，骨髓瘤细胞一直是抗体生产中的主力(附录I)。如今，在用于生产已获批生物治疗药物的动物细胞系统中，骨髓瘤细胞的使用数量仅次于中国仓鼠卵巢细胞(CHO)。骨髓瘤细胞既可用作创建杂交瘤细胞系的融合伙伴，也因其自身优点用作生产宿主细胞。骨髓瘤细胞的优点包括悬浮生长且易于扩大培养规模、在无血清条件下增殖良好的能力以及易于产生抗体的倾向。然而，目前使用骨髓瘤细胞系统进行生产的兴趣不大，主要是由于上一节所述的更易于使用的即插即用CHO系统具有吸引力。此外，小鼠细胞通常内源性逆转录病毒/病毒样颗粒(VLP)水平相当高，这使得病毒去除/灭活验证研究相当繁重。 骨髓瘤细胞能够产生非人类聚糖结构。这包括末端半乳糖-α-半乳糖(α-Gal)表位和N-羟乙酰神经氨酸(Neu5Gc或NGNA)残基。α-Gal表位可与人类体内的α-GalIgE抗体发生反应，临床观察表明α-Gal结构与生物治疗药物的不良反应之间存在关联。例如，用Sp2/0骨髓瘤细胞生产的爱必妥(西妥昔单抗)治疗的患者出现的过敏反应归因于预先存在的α-GalIgE抗体。历史上，Neu5Gc(NGNA)残基并未受到太多关注，但最近在人类中发现循环抗Neu5Gc抗体，这引发了对含有Neu5Gc结构的治疗药物风险升高的潜在担忧。为降低非人类聚糖带来的潜在风险，可以进行早期靶向筛选，以鉴定产生这些结构水平较低的克隆。 最常用的骨髓瘤细胞系NS0和Sp2/0源自同一只BALB/c7小鼠浆细胞瘤肿瘤细胞。这些细胞经过了多次筛选和克隆步骤，最终得到了具有良好生理特性的非分泌型生产细胞系。Sp2/0细胞系已用于生产多种畅销药物(表6.2)。这些产品大多在20世纪90年代获批，爱必妥于2004年获批，类克的生物类似药英夫利昔单抗于2013年获欧洲药品管理局(EMA)批准，这两个产品除外。 表6.2 骨髓瘤细胞系生产的生物药 由Sp2/0或骨髓瘤生产的生物制药产品已在美国或欧洲获得市场批准。本汇编不包括诊断产品。 NS0细胞系最初用作杂交瘤生成中的融合伙伴，但最近也因其自身优点与谷氨酰胺合成酶(GS)选择系统结合用于生产(见第7章)。NS0细胞的GS内源性表达非常低，未转染的细胞是谷氨酰胺营养缺陷型。因此，要拥有一个功能齐全的基于GS的选择系统，不需要对NS0进行基因改造。用编码产物和GS的载体转染细胞，并使用不含谷氨酰胺的选择培养基来鉴定转染子。至于GS-CHO细胞，可以通过添加GS抑制剂甲硫氨酸亚砜胺(MSX)来增加选择压力和基因拷贝数。然而，NS0培养所需的MSX水平通常比CHO-GS培养所需的水平低得多，分别为10至100μM和250至500μM。用含GS的载体转染后，NS0细胞的代谢会发生变化，需要更多的谷氨酰胺组成成分天冬酰胺和谷氨酸。GS-NS0细胞产生的乳酸水平较低，氨水平极低。 大多数NS0细胞系是胆固醇营养缺陷型，需要在培养基中添加外源性胆固醇以实现最佳生长和生产。由于胆固醇在水溶液中的溶解度低，补充胆固醇是一个复杂的过程。最常见的是通过血清或使用环糊精等载体进行补充。胆固醇通常来自动物来源，如羊毛。培养基中存在动物源性成分是不理想的，虽然有合成胆固醇可用，但其高成本是大规模生产过程中的一个问题。已开发出不依赖胆固醇的NS0克隆来解决这个问题。然而，有报道称不依赖胆固醇的NS0克隆对剪切敏感，这与大规模生产过程中的稳健性和适用性有关。2008年，商业生产过程中使用的所有NS0生产克隆都被认为依赖胆固醇。将NS0与CHO比较时，产品产量和功能会因所生产的分子而异。在某些条件下，这两个系统的产量相当，NS0至少可产生2-3g/L的产量(#377)。 幼仓鼠肾细胞（BKH-21） BHK-21是1961年从1日龄仓鼠肾脏建立的细胞系的一个亚克隆。BHK是少数几种既能贴壁生长又能悬浮生长的哺乳动物细胞系之一。与工业生产中使用的其他哺乳动物细胞系相比，其生长速度适中，据报道，在最佳条件下分批培养时，活细胞密度峰值在4×106个细胞/毫升范围内。BHK-21细胞一直是许多不同病毒(包括口蹄疫病毒和狂犬病病毒)生长的实验室标准，该细胞系也被用于生物过程的研究。BHK-21细胞系用于生产诺和诺德公司的血液因子诺其凝血素(凝血因子VIIa)、安万特贝林公司的海乐妙(凝血因子VIII)以及拜耳公司的凝血因子VIII产品科跃奇和科法曲。科跃奇和科法曲蛋白具有相同的氨基酸序列，但生产工艺和各自的BHK-21生产细胞系不同。在科法曲生产工艺中，用于生产科跃奇的原始BHK-21细胞通过引入人热休克蛋白70(HSP70)基因进行了改造。HSP70是一种伴侣蛋白，被认为通过促进蛋白质正确折叠来增加FVIII表达，并通过抑制细胞凋亡来提高细胞存活率。科跃奇和科法曲均采用灌流工艺生产，使用的生物反应器体积可达500升。目前大多数已批准的BHK-21生产工艺在千禧年前后或之前获得批准，科法曲除外，它于2016年获得批准。如今，在新产品开发中，CHO或HEK等生产系统往往比BHK-21细胞更受青睐。 6.2.3 人体细胞 尽管有多种细胞系可供选择，但人类文化在生物制造中的应用仍然有限。首个人类细胞系海拉细胞(HeLa)源自宫颈癌，于1951年建立[64a]。20世纪60年代，人类二倍体细胞被用于疫苗生产，但对致癌病毒的担忧阻碍了当时人类细胞的广泛使用。在后续的研发工作中，来自其他哺乳动物的细胞成为了首选。迄今为止，大多数生物制药蛋白都是使用仓鼠和小鼠骨髓瘤细胞系生产的，只有三种人类细胞系被用于生产已获批的重组生物治疗药物:纳马瓦淋巴瘤细胞、人胚肾HEK293细胞和纤维肉瘤细胞系HT-1080(表6.3)。最近建立的人类细胞系，如源自视网膜的Per.C6细胞和CAP羊膜细胞，已被用于临床试验中治疗候选药物的生产，但在撰写本文时，这些产品均未获得生物许可批准。其他已被研究用于重组蛋白生产的人类细胞系包括HEK293和人类淋巴瘤的杂交细胞系HKB-11以及肝癌细胞系HuH-7。HKB-11的优势包括高水平的蛋白生产且不形成聚集体，与BHK-21和HEK293相比，它在人凝血因子VIII的表达上显示出了有前景的结果。HuH-7已被研究用于重组凝血因子XI的生产。 表6.3 人类细胞系生产的生物治疗产品 已在美国或欧盟获得市场批准的人源细胞系生产的生物治疗产品。PERC6系统已用于后期临床试验的生产，但在撰写本文时，尚无在PER.C6中生产的生物制药产品获得市场批准。本汇编不包括细胞治疗产品(自体和异体)或脐带血产品。 人源细胞系的主要优势在于其完全人源的蛋白质生产机制，可实现正确的翻译后修饰和人源聚糖模式。然而，直接比较表明，使用人源细胞系不一定能产生完全内源性形式的产品。此外，尚无确凿证据表明重组人源形式的蛋白质比重组中国仓鼠卵巢细胞(CHO)来源的对应物更安全或更有效。 人胚肾细胞(HEK) 人胚肾293(HEK293)细胞系是一种多功能系统，用于在生物制造过程中生产研究级蛋白质、病毒载体和重组蛋白。首个HEK293细胞系于1977年通过用5型腺病毒DNA的剪切片段转化HEK细胞而建立。这是首次通过E1A和E1B基因转化实现永生化。HEK细胞易于在无血清悬浮培养中生长，并且有几种适应无血清悬浮生长的HEK克隆可供商业购买。由于质粒DNA的高效转染与人源翻译后加工能力相结合，HEK如今广泛用于研究中重组蛋白的瞬时生产和临床前研究。HEK293细胞广泛用于病毒载体生产，例如生产腺病毒、慢病毒、逆转录病毒和腺相关病毒。目前，几种使用HEK细胞系生产的病毒载体正处于II期和III期临床试验阶段。在生物制药生产中，自2001年以来一直使用稳定的HEK转染细胞。2015年，四种获得许可的治疗性蛋白质Alprolix、Eloctate、Nuwiq和Xigris在HEK细胞中生产。例如，Xigris在HEK293中生产，因为当该产品在CHO细胞中生产时，对其正常功能至关重要的翻译后修饰并不充分。 裸露的DNA无法自行进入细胞，因此在HEK细胞的瞬时表达中使用了多种转染方法。最常用的化学转染试剂包括聚乙烯亚胺(PEI)、磷酸钙、脂质体转染试剂(Lipofectamine)和转染试剂(Metafectene)。后几种试剂价格昂贵，因此大多用于小规模实验。磷酸钙和PEI成本较低，已用于至少100L规模的实验。据报道，使用PEI作为转染试剂通过HEK细胞瞬时转染可获得克/升水平的抗体产量。物理转染方法如电穿孔也被认为是大规模瞬时表达的一种潜在替代方法。为了在HEK细胞的瞬时过程中实现产量最大化，人们研究了各种参数。例如，优化转染的DNA量、DNA与转染试剂的比例、复合物形成的时间和溶液条件、转染培养基、转染后培养基补充以及转染时的细胞密度。 PER.C6 PER.C68表达系统于1998年由用编码序列Ad5E1A和E1B的腺病毒永生化的非致瘤性人胚胎视网膜母细胞建立。PER.C6的产生符合良好实验室规范，并且从最初阶段就对该细胞系进行了广泛记录，以确保满足临床和商业生产的所有监管要求。这些细胞经过广泛测试，不存在外源病毒。PER.C6最初是为生产用于疫苗开发和基因治疗目的的腺病毒载体而开发的，但该系统也已用于重组蛋白生产。几个使用PER.C6细胞的项目已进入临床试验阶段，但在撰写本文时，这些项目均未获得市场批准。PER.C6受到广泛专利组合的保护，该细胞系可从帕西昂公司(Patheon)获得许可使用。 PER.C6细胞的优势包括能够在无血清培养基中悬浮生长、无需基因扩增就能获得高产量、具备人类翻译后修饰能力，以及能够达到超过1亿个细胞/毫升的极高细胞密度。2008年，Crucell和Percivia公司宣布，使用专利XD工艺，PER.C6细胞产生的抗体滴度达到了创纪录水平27g/L，这使得PER.C6系统受到了全球关注。该结果来自于一项研究规模的实验。在生物制造中，通常不会追求如此高的体积生产力，因为这可能会导致不必要的蛋白质聚集、产品降解以及下游纯化过程中的其他问题。然而，该实验表明了至少在理论上能够达到的水平，这使得此后对PER.C6细胞的关注有所增加。PER.C6具有出色的细胞生长能力，但在细胞特异性生产力方面，CHO系统为许多产品设定了标准。高细胞特异性生产力的优势在于，对于一定的体积生产力，所需的细胞数量相对较少。相反，如果细胞特异性生产力较低，那么对于相同的体积产量，就需要相对更多的生物质。大量的生物质可能会在下游处理中带来挑战，例如去除细胞膜、DNA和宿主细胞蛋白等细胞副产物。 CAP CEVEC公司的羊膜细胞生产系统(CAP)是一种源自羊水的人类细胞系。该细胞系通过用5型腺病毒E1基因进行转化而永生化。开发CAP是为了满足快速生成能够分泌高水平蛋白质且无需抗生素选择的人类生产细胞系的需求。CAP细胞在无血清培养基中悬浮生长，并且能够进行完全的人类翻译后修饰。该细胞系能够表达至少30pg/细胞/天的完全糖基化和唾液酸化的蛋白质。在没有任何抗生素选择的情况下，目的基因的表达在超过90代中显示出稳定性。2013年，CAP细胞成功完成了I期临床研究，达到了人类首个里程碑。在撰写本文时，尚未有使用CAP细胞生产的产品获得生物许可批准。 CAP-T是该细胞系的一个变体，它组成性地表达SV40大T抗原。开发CAP-T是为了实现携带SV40复制起点的质粒的瞬时基因表达。据推测，CAP细胞类似干细胞的起源可能使它们能够更有效地生产难以表达的产品，这可能是由于特定酶和伴侣蛋白的表达。研究规模下测试蛋白的高产似乎表明，CAP/CAP-T细胞能够进行瞬时生产，产量与HEK-293细胞相似甚至更高。CEVEC公司还提供了CAP生产系统的第三个变体CAP-GT，它是为基因治疗目的而开发的。 关注“艺药荟”知识星球，下载课程和行业资源，联系星主享受9折优惠。 邀您加入“艺药荟社群”交流学习! 备注：姓名+单位+方向 版权说明：本文欢迎个人转发至朋友圈，谢绝媒体或机构未经授权以任何形式转载至其他平台。转载授权或其他合作需求，请联系梓树ZiShu（微信：Z07302256）。 免责声明：本文仅作信息交流之目的，文中观点不代表“艺药荟”立场，亦不代表“艺药荟”支持或反对文中观点。本文不作为治疗方案推荐。如需治疗指导，请前往正规医院就诊。

点击蓝字 关注我们 注射用重组人凝血因子 VIII 综合研究报告1. 产品概述与临床应用1.1 适应症范围与临床定位 注射用重组人凝血因子 VIII 是一种重组抗血友病因子，主要适用于 A 型血友病（先天性凝血因子 Ⅷ 缺乏）患者的治疗。该产品的核心适应症包括：A 型血友病成人和儿童患者的按需治疗与出血控制、围手术期出血管理，以及儿童患者的常规预防治疗，以降低出血发生频率和既往没有关节损伤的儿童患者发生关节损伤的风险。 从临床定位来看，注射用重组人凝血因子 VIII 在血友病 A 治疗中占据核心地位。血友病 A 是一种 X 连锁隐性遗传性出血性疾病，约占所有血友病患者的 80%-85%。根据凝血因子 Ⅷ 活性水平，血友病 A 患者可分为三个严重程度等级：重型（FⅧ 活性 < 1%）、中型（FⅧ 活性 1%-5%）和轻型（FⅧ 活性 6%-30%）。重组人凝血因子 VIII 对所有严重程度的患者均有效，其中重型患者由于频繁自发性出血，对预防治疗的需求最为迫切。 在临床应用中，该产品不适用于血管性血友病的治疗，因为其不含血管假性血友病因子。这一限制明确了产品的适用边界，避免了不适当的临床使用。1.2 治疗方案与给药策略 注射用重组人凝血因子 VIII 的临床应用主要包括预防性治疗和按需治疗两种策略。预防性治疗是指定期输注凝血因子以维持体内因子水平，预防出血的发生；按需治疗则是在出血事件发生后及时给予治疗以控制出血。 预防性治疗方案方面，国际上推荐的标准预防剂量为 30-50 IU/kg，每周 2-3 次。具体而言，青少年（12-17 岁）和成人患者通常每 2 天给药 30-40 IU/kg，儿童患者（2-11 岁）每 2 天或每周 3 次给药 30-50 IU/kg。Novoeight® 等产品已被批准用于常规预防，给药频率为隔日一次或每周 3 次。 按需治疗方案针对急性出血事件，需在 2 小时内给予 50-100 IU/kg 剂量，严重颅内或消化道出血需维持因子水平 80-100% 持续 7-14 天。剂量计算遵循标准公式：FⅧ 首次需要量 =(需要达到的 FⅧ 浓度 - 病人基础 FⅧ 浓度)× 体重 (kg)×0.5。 在手术前后的用药管理方面，大手术前血友病 A 患儿需输注 60-80 IU/kg 的凝血因子，以确保手术安全。术后需继续输注凝血因子至伤口愈合，通常需要维持较高的因子水平数天至数周。1.3 特殊人群用药考量 儿童患者是注射用重组人凝血因子 VIII 的重要使用群体。由于儿童患者的药代动力学特征与成人存在差异，需要特别关注个体化给药。2 岁以下患儿禁用去氨加压素（DDAVP）进行辅助治疗，而重组人凝血因子 VIII 可安全用于所有年龄段的儿童患者。 对于有抑制物产生的患者，治疗策略需要相应调整。抑制物是指患者体内产生的抗凝血因子 VIII 抗体，约 30% 的重型血友病 A 患者会产生抑制物。对于这类患者，需要采用免疫耐受诱导疗法（ITI）或使用旁路制剂（如重组凝血因子 VIIa、凝血酶原复合物）控制出血。 老年患者的用药需要考虑肝肾功能变化对药物代谢的影响，但目前尚无专门针对老年患者的特殊用药指南。妊娠和哺乳期女性患者的用药安全性数据有限，需要在医生指导下谨慎使用。2. 全球市场动态分析2.1 市场规模与增长趋势 全球血友病治疗市场呈现强劲增长态势。根据最新市场研究数据，2024 年全球血友病治疗市场规模达到 184.2 亿美元，预计到 2034 年将增长至 576.8 亿美元，2025-2034 年的复合年增长率（CAGR）为 12.09%。其中，血友病 A 作为最主要的亚型，2024 年市场规模约为 104.4 亿美元，预计以 6.8% 的 CAGR 增长至 2030 年。 从地域分布来看，北美市场占据主导地位，2024 年占全球市场份额的 45%，市场规模达到 62.2 亿美元。欧洲市场规模为 42 亿美元，预计以 4.8% 的 CAGR 增长至 2034 年的 68 亿美元。亚太地区虽然目前市场规模较小，但增长最快，年复合增长率预计达 12.3%（2024-2030 年），主要驱动力来自中国、日本对创新药准入政策的优化及患者诊断率的提升。 中国市场方面，2023 年重组人凝血因子 VIII 市场规模约为 28.6 亿元人民币，较 2022 年同比增长 19.3%。预计到 2025 年底，该市场规模将突破 38 亿元，复合年增长率维持在 18% 以上。到 2030 年，中国市场规模有望达到 72-75 亿元人民币。2.2 竞争格局与主要厂商 全球血友病治疗市场呈现高度集中的竞争格局，主要由跨国药企主导。根据市场份额数据，拜耳（Bayer）、辉瑞（Pfizer）、诺和诺德（Novo Nordisk）与赛诺菲（Sanofi）四大跨国药企合计占据超过 82% 的市场份额。 在具体产品层面，赛诺菲凭借其长效重组因子 VIII 产品 Hemlibra（艾美赛珠单抗）占据全球市场约 30% 的份额。诺和诺德 2024 年在血友病治疗领域的收入贡献达 15 亿美元，CSL Behring 为 12 亿美元。其他主要参与者还包括罗氏（Roche）、武田（Takeda）、CSL Behring、Grifols、BioMarin、Shire 等。 中国市场的竞争格局正在发生变化。传统上，外资企业如拜耳、赛诺菲等凭借成熟的生产技术和丰富的产品线占据超过 60% 的市场份额。但近年来，本土企业快速崛起，2023 年国内重组凝血因子市场中，本土企业占比已提升至 58.7%，较 2020 年的 42.1% 实现显著跨越。主要本土企业包括华兰生物、上海莱士、神州细胞、江苏晟斯生物、同路生物、广东双林、成都蓉生等。 值得注意的是，本土企业通过自主研发和国际合作加速市场渗透。例如，正大天晴的安恒吉（重组人凝血因子 VIII）通过专利挑战成功突破原研药专利壁垒，2024 年上市首年即斩获 12 亿元销售额，标志着本土企业在生物类似药领域实现重大突破。2.3 产品差异化竞争分析 在产品差异化方面，各大厂商主要通过技术创新和给药便利性提升来构建竞争优势。长效制剂成为重要的差异化方向，通过延长药物半衰期减少给药频率。例如，Jivi（BAY94-9027）是一种通过聚乙二醇修饰延长半衰期的重组凝血因子 VIII，在临床试验中其半衰期达到了 17.9 小时，是对照组的 1.4 倍。 给药方式创新也是重要的竞争策略。传统的重组人凝血因子 VIII 需要静脉注射，而新型产品如艾美赛珠单抗采用皮下注射，给药频率从每周 2-3 次静脉注射减少到每周 1 次皮下注射。最新获批的马塔西单抗（Marstacimab）同样采用皮下注射，起始负荷剂量 300mg，随后每周皮下注射 150mg 即可维持稳定效果。 在适应症拓展方面，传统重组人凝血因子 VIII 主要用于血友病 A，而新型药物如 fitusiran（Qfitlia）则可同时用于 A 型和 B 型血友病患者，无论是否存在抑制物。这种全类型覆盖的特点为患者提供了更多选择。 从价格策略来看，不同厂商采取差异化定价。原研产品通常维持较高价格，而生物类似药和本土产品则通过成本优势提供更具竞争力的价格。2023 年中国医保谈判中，包括拜耳 Kovaltry、辉瑞 Advate 及神州细胞 SCT800 在内的多个 rFVIII 产品成功续约或新纳入目录，平均降价幅度达 45%-60%。3. 临床研究进展与创新突破3.1 新疗效发现与安全性评估 近年来，注射用重组人凝血因子 VIII 相关的临床研究取得了多项重要进展。在疗效方面，N8-GP（turoctocog alfa pegol）的 IIIb 期 PATHFINDER 10 研究在中国患者中显示出优异效果。该研究纳入 36 例中国重度血友病 A 患者，接受每 4 天一次 50 IU/kg 的 N8-GP 预防治疗，结果显示年化出血率（ABR）为 2.55（95% CI：1.24-5.23），中位 ABR 为 0，69.4% 的患者未发生任何出血。 在安全性评估方面，长期随访数据显示重组人凝血因子 VIII 总体安全性良好。N8-GP 研究共报告 40 例不良事件，发生率为 1.95 例 / 患者年，多数为轻度（31 例），6 例可能与 N8-GP 相关，未出现 FVIII 抑制剂、过敏反应或血栓事件。部分患者基线检测出抗 PEG 抗体（8 例）或抗 N8-GP 抗体（2 例），但未导致不良事件或 FVIII 活性下降。 抑制物产生是血友病治疗的重要安全性考量。传统重组因子 VIII 治疗的抑制物发生率约为 30%。然而，新型制剂在降低抑制物产生方面取得突破。例如，华毅乐健的基因疗法 GS1191-0445 在临床试验中未检测到 FⅧ 抑制物，通过载体优化和衣壳改造降低了药物的免疫原性，有效避免了传统治疗中约 30% 患者产生抑制物的风险。 在血栓风险评估方面，新型非因子替代疗法如 fitusiran 通过降低抗凝血酶水平来增加凝血酶生成，虽然有效但存在血栓风险。ATLAS-OLE 研究显示，通过优化剂量方案将抗凝血酶活性水平控制在 15%-35%，可在维持疗效的同时降低血栓风险。3.2 新型制剂开发与给药技术 在制剂技术创新方面，延长半衰期成为主要发展方向。天坛生物的 "注射用重组人凝血因子 Ⅷ-Fc 融合蛋白" 通过 Fc 融合技术，使半衰期延长 1.5-1.7 倍，达到 18-20 小时，而对照药仅为 8-12 小时。这种半衰期的显著延长可显著降低患者的 "针头负担"，减轻频繁注射痛苦，提高治疗依从性。 皮下注射剂型的开发是另一个重要突破。传统重组人凝血因子 VIII 需要静脉注射，而新型制剂如 ALTUVIIIO 通过独特的 vWF 片段、XTEN 技术和 Fc 融合三组分设计，实现了皮下注射给药的可能。艾美赛珠单抗作为双特异性抗体，已成功实现皮下注射，给药方案灵活，可选择每周 1.5mg/kg、每两周 3mg/kg 或每月 6mg/kg。 在给药频率优化方面，fitusiran 创造了革命性突破，通过 RNAi 技术实现每年最少皮下注射 6 次的极长给药间隔，与传统需要每周多次静脉输注凝血因子的方案相比是革命性改变。这种给药便利性的大幅提升极大地减轻了患者及其家庭的治疗负担。 固定剂量给药也是技术创新方向。马塔西单抗采用固定剂量皮下注射，起始负荷剂量 300mg，随后每周 150mg 维持，无需根据体重调整剂量，简化了给药流程。这种固定剂量模式特别适合居家治疗，有助于提高患者依从性。3.3 临床应用证据更新 最新的临床研究证据不断更新我们对重组人凝血因子 VIII 疗效和安全性的认识。在预防治疗效果方面，多项研究证实规律预防治疗可显著降低出血频率和关节损伤风险。一项比较低剂量预防与按需治疗的研究显示，预防组的年化 FⅧ 消耗量为 1662.6 IU/kg/ 年，而按需治疗组为 328 IU/kg/ 年，但预防组在出血控制和关节保护方面显著优于按需治疗组。 在儿童患者治疗方面，2025 年 5 月 FDA 批准 Jivi 用于 7 岁及以上血友病 A 儿科患者，基于 Alfa-PROTECT 和 PROTECT Kids 研究数据，这些研究证明了 Jivi 在 7 至 12 岁以下重度血友病 A 儿童中的安全性和有效性。这一批准将预防性治疗的适用年龄从 12 岁扩展到 7 岁，使更多儿童患者受益。 手术患者管理的临床证据也在不断完善。中国的临床指南建议，对于接受三、四级手术的血友病 A 患儿，术前预防性使用活化重组凝血因子 Ⅶ 90 μg/（kg・次），手术当天给药 4 次，术后第 1、2 天每日 3 次，之后每日 2 次，并根据病情决定是否需重复给药以及给药时长。 在真实世界研究方面，中国血友病协作组 2024 年的临床登记数据显示，全国确诊 A 型血友病患者约 13 万人，其中接受规律预防治疗者不足 25%，远低于发达国家 70% 以上的水平。这一数据反映出中国患者在规范化治疗方面仍有巨大提升空间，也为未来临床应用改进指明了方向。4. 生产工艺技术特点4.1 表达系统与纯化技术 注射用重组人凝血因子 VIII 的生产主要采用哺乳动物细胞表达系统，包括中国仓鼠卵巢（CHO）细胞、幼仓鼠肾（BHK）细胞和人胚肾（HEK）细胞。不同生产厂家在表达系统选择上各有偏好，其中 CHO 细胞是最常用的表达系统，因其具有高表达水平、遗传稳定性和良好的翻译后修饰能力。 在具体生产工艺中，以 B 结构域缺失的重组凝血因子 VIII（BDDrFVIII）为例，生产过程包括将人 BDDrFVIII 基因稳定插入 CHO 细胞，筛选能够持续表达活性 BDDrFVIII 的细胞系，并建立细胞库。生产工艺始于在大型生物反应器中培养 CHO 细胞，通过改变细胞培养条件使细胞停滞在静止生长期，从而诱导 BDDrFVIII 的高表达。 纯化工艺是确保产品质量的关键环节。目前主流的纯化流程包括四个柱层析步骤和一个溶剂 - 去污剂病毒灭活步骤。具体而言，收获的培养基通过层析浓缩，然后依次经过离子交换色谱、亲和色谱、疏水相互作用色谱和凝胶过滤色谱等步骤。其中，免疫亲和色谱使用针对重链 A2 结构域的单克隆抗体 F25，能够分离纯化的 rFVIII 分子，排除不完整分子，特别是那些在重链最不稳定位置 720 处有损伤的分子。 在病毒灭活方面，溶剂 - 去污剂处理是关键步骤，能够有效灭活脂包膜病毒如 HIV、乙肝病毒和丙肝病毒。此外，一些生产工艺还采用纳米过滤技术进一步提高安全性，如科跃奇 ® 独有的 20 纳米病毒过滤技术能够去除潜在的杂质，安全性更高。4.2 质量控制与稳定性改进 质量控制体系涵盖从原材料到成品的全过程监控。在原材料控制方面，通过消除人血清白蛋白在最终制剂中的存在，使含 BDDrFVIII 的凝血产品达到了抗微生物和病毒污染的高标准。这种无血清培养和制剂技术显著降低了潜在的感染风险。 在产品稳定性改进方面，生产工艺的优化主要集中在以下几个方面： 糖基化修饰是提高稳定性的重要手段。科跃奇 ® 通过提高唾液酸化程度，使其较其他重组八因子有更长的半衰期，在体内可以更持久地保护血友病患者的关节。这种糖基化修饰不仅延长了药物半衰期，还提高了产品在储存和使用过程中的稳定性。 配方优化也是关键技术。现代重组人凝血因子 VIII 产品通常采用冻干制剂，在配方中加入甘露醇、蔗糖等保护剂，以及组氨酸、枸橼酸等缓冲剂，确保产品在 2-8℃条件下稳定保存 24-36 个月。一些新型制剂还采用了预充式注射器包装，进一步提高了使用便利性和产品稳定性。 生产工艺标准化方面，各厂家都建立了严格的生产质量管理规范（GMP）体系。通过对发酵参数（温度、pH 值、溶氧量等）的精确控制，以及对纯化过程中各项参数的实时监测，确保产品质量的一致性和批次间的稳定性。4.3 技术创新与成本优化 在技术创新方面，近年来的主要突破集中在提高生产效率和降低生产成本两个方向。一些创新技术包括： 灌流培养技术的应用显著提高了单位体积的产量。通过在生物反应器中耦合倾斜沉降器，采用低温度（31°C）结合戊酸（VA）补充的灌流工艺，可使细胞比生产率（qp）提高 2 倍以上。这种技术不仅提高了产量，还改善了产品质量。 连续生产工艺是另一个重要创新方向。通过采用高细胞比灌流速率（CSPR）支持高细胞密度，随后以低 CSPR 继续灌流促进更高效的静止期，大幅减少了所需培养基的总体积。这种工艺不仅降低了生产成本，还提高了生产效率和产品质量的一致性。 在成本控制方面，各厂家采取了多种策略。中国生物制药开发了具有自主知识产权的生产工艺 "一种制备重组人凝血因子 Ⅷ 的方法"（ZL201610200676.4），突破人源细胞培养工艺，生产效率高且工艺稳健，能够稳定生产出符合质量标准的产品。 规模化生产也是降低成本的重要手段。通过建设大规模生产设施，提高设备利用率，优化供应链管理等措施，有效降低了单位生产成本。同时，通过技术转让和本地化生产，一些跨国企业在中国建立了生产基地，不仅降低了成本，还提高了产品可及性。 在质量标准提升方面，各国监管机构不断更新和提高对重组人凝血因子 VIII 的质量要求。例如，中国药典对重组人凝血因子 VIII 的纯度要求达到 95% 以上，比活性要求达到 1.0 IU/mg 以上。这些严格的质量标准推动了生产工艺的持续改进和创新。5. 定价策略与市场准入5.1 全球定价体系比较 全球血友病治疗药物的定价体系呈现显著的地区差异，反映了不同市场的支付能力、医保政策和竞争格局。在美国市场，基因治疗药物价格达到天价水平，如血友病 B 基因治疗药物 Hemgenix 定价为 350 万美元 / 剂，血友病 A 基因治疗药物 Roctavian 定价为 290 万美元 / 剂。相比之下，传统重组因子 VIII 产品的价格相对较低，但仍属于高值药物范畴。 欧洲市场的定价普遍低于美国。以 Roctavian 为例，其在德国的定价为每瓶 28,933.53 欧元（约合 31,780 美元），而在美国的定价高达 290 万美元，欧洲价格约为美国的 1/10。这种巨大的价格差异反映了欧洲更严格的药品定价监管和更强的医保谈判能力。 在传统重组因子 VIII 产品方面，各国价格体系差异明显。中国市场的参考价格为 1907 元人民币，但这一价格在医保谈判后大幅下降。2023 年中国医保谈判中，包括拜耳 Kovaltry、辉瑞 Advate 及神州细胞 SCT800 在内的多个 rFVIII 产品平均降价幅度达 45%-60%。 日本市场的定价策略值得关注。首个长效制剂 eftrenonacog alfa 的药价比标准常规预防方案使用短效制剂的成本高 5%，其他长效制剂按此标准定价。这种定价策略既体现了创新价值，又考虑了医保支付能力，为其他国家提供了参考。5.2 医保覆盖与支付政策 医保覆盖政策对重组人凝血因子 VIII 的市场准入和患者可及性具有决定性影响。在美国，大多数血友病患者通过商业保险或公共医疗保险（如 Medicare、Medicaid）获得覆盖。各州的具体政策有所不同，例如康涅狄格州通过立法确保凝血因子产品的保险覆盖，包括因子 VIIa、因子 VIII 和因子 IX 产品等。 中国的医保政策近年来显著改善了患者的支付负担。自 2017 年重组人凝血因子 VIII 首次纳入国家医保目录以来，经过多轮谈判降价，其报销比例已在全国多数省份提升至 70% 以上，部分地区如浙江、广东等地更实现门诊特殊病种全额报销。根据湖南省的医保政策，血友病患者分为非急性出血和急性出血期两类，非急性出血的待遇为 "医保支付限额 280 元 / 月"，急性出血期参照住院标准执行。 在医保谈判机制方面，中国建立了常态化的谈判制度。2023 年国家医保目录调整中，共有 5 款 rFVIII 产品纳入乙类报销，报销比例因地而异，通常在 50%-70% 之间。通过集中采购和医保谈判，医院采购价普遍较上市初期下降 40%-60%，但医保报销比例提升有效对冲了价格压力，保障了企业合理利润空间。 多层次保障体系的建设也在不断完善。除基本医保外，部分省份将 rFVIII 纳入 "惠民保" 等商业健康保险保障范围，如 "沪惠保"" 苏惠保 "等产品对医保目录外费用提供额外赔付。同时，慈善赠药项目（如中国初级卫生保健基金会" 生命之光 " 项目）与医院药房直供模式共同构建了多元支付路径。5.3 成本效益与价值评估 从成本效益角度分析，重组人凝血因子 VIII 的价值体现在多个维度。虽然药物本身价格昂贵，但通过预防出血和减少并发症，总体医疗成本和社会成本显著降低。研究显示，在接受标准预防治疗的中重度血友病 A 患者中，年均关节出血次数由未规范治疗时期的 8.6 次降至 1.2 次，年住院率下降 62%，直接医疗成本虽有所上升，但间接社会成本大幅降低。 在长期价值评估方面，基因治疗虽然单次治疗费用极高（如 Hemgenix 达 350 万美元），但 CSL 估计该治疗可节省高达 500 万美元的终身治疗费用。这种 "一次性高费用、终身受益" 的模式正在改变传统的成本效益评估框架。 药物经济学研究显示，预防性治疗相比按需治疗具有更好的成本效益。虽然预防治疗的年化 FⅧ 消耗量（1662.6 IU/kg/ 年）远高于按需治疗（328 IU/kg/ 年），但预防治疗在减少出血事件、降低关节损伤、提高生活质量等方面的获益远超额外的药物成本。 在不同产品比较方面，长效制剂虽然单价较高，但由于给药频率降低，总体治疗成本可能更优。例如，N8-GP 的年化总消耗量为 5036.2 IU/kg，虽然略高于传统制剂，但其每 4 天一次的给药频率显著降低了给药相关成本和患者负担。 从社会价值角度看，重组人凝血因子 VIII 的广泛应用显著改善了血友病患者的生活质量，使患者能够正常参与社会活动，创造社会价值。据统计，规范接受预防性治疗的血友病 A 患者比例已由 2018 年的不足 20% 上升至 2023 年的 46%，这不仅减轻了患者痛苦，也减少了社会负担。6. 多视角综合分析6.1 患者视角：治疗负担与生活质量 从患者角度来看，注射用重组人凝血因子 VIII 既是生命的保障，也是日常生活的负担。血友病 A 患者面临的主要挑战包括频繁出血带来的身体痛苦、关节损伤导致的残疾风险，以及治疗过程中的经济压力和心理负担。 在治疗便利性方面，传统重组人凝血因子 VIII 需要静脉注射，通常每周 2-3 次，每次注射需要寻找合适的静脉，这对患者尤其是儿童患者来说是很大的痛苦。新型制剂的发展带来了显著改善，如艾美赛珠单抗改为皮下注射，给药频率降至每周 1 次，而 fitusiran 更是实现了每年仅需 6 次注射的革命性突破。这些改进极大地减轻了患者的 "针头负担"，提高了治疗依从性。 生活质量改善是患者最关注的问题。研究显示，规律的预防治疗可使年均关节出血次数从 8.6 次降至 1.2 次，这意味着患者可以像正常人一样生活、工作和运动。特别是对于儿童患者，早期预防治疗可以有效避免关节损伤，确保正常的生长发育和生活质量。 在经济负担方面，虽然医保覆盖显著减轻了患者负担，但自费部分仍然可观。以中国为例，即使在医保报销 70% 的情况下，患者年治疗费用仍可能达到 10-20 万元。对于没有医保或医保覆盖不全的患者，经济负担更为沉重，这也是为什么中国接受规律预防治疗的患者比例仅为 46%，远低于发达国家 96% 的水平。 心理影响不容忽视。血友病是一种终身疾病，患者需要长期治疗，这种不确定性给患者和家庭带来巨大心理压力。频繁的治疗过程、对出血的恐惧、社会歧视等因素都可能导致患者出现焦虑、抑郁等心理问题。因此，除了药物治疗，心理支持和社会关爱同样重要。6.2 医生视角：临床决策与治疗选择 医生在使用注射用重组人凝血因子 VIII 时面临复杂的临床决策，需要综合考虑患者的疾病严重程度、年龄、体重、既往治疗史、抑制物状态等多个因素。 在治疗方案选择上，医生需要在预防性治疗和按需治疗之间做出选择。对于重型患者（FⅧ 活性 < 1%），国际指南强烈推荐预防性治疗，因为这类患者出血风险极高，致残率高。对于中型和轻型患者，可以根据个体情况选择按需治疗或间歇性预防治疗。 剂量调整是临床实践中的关键环节。标准剂量计算公式为：FⅧ 首次需要量 =(目标 FⅧ 浓度 - 基础 FⅧ 浓度)× 体重 ×0.5。但实际应用中，需要考虑患者的个体差异、出血部位和严重程度、是否存在抑制物等因素。例如，对于有抑制物的患者，可能需要使用旁路制剂如重组凝血因子 VIIa，剂量为 90 μg/kg，每 2-3 小时一次。 在新型药物选择方面，医生面临更多选择但也面临新的挑战。传统重组因子 VIII 虽然有效，但存在抑制物产生风险（约 30%）。新型非因子替代疗法如艾美赛珠单抗虽然避免了抑制物问题，但可能增加血栓风险。基因治疗虽然可能实现 "治愈"，但价格昂贵且长期安全性数据有限。 药物相互作用和实验室监测也是医生需要关注的问题。例如，抗纤溶药物（如氨甲环酸）不能与活化的凝血酶原复合物浓缩物（aPCC）同时使用，如需使用建议间隔 6 小时以上，以降低血栓事件风险。在实验室监测方面，使用新型药物可能影响传统的凝血功能检测，需要采用特定的检测方法。6.3 制药企业视角：研发投入与商业回报 对制药企业而言，注射用重组人凝血因子 VIII 代表着高投入、高风险但也可能带来高回报的业务领域。 在研发投入方面，从基因克隆、细胞系建立、工艺开发到临床试验，整个研发周期通常需要 10-15 年，投入资金可达 10 亿美元以上。以基因治疗为例，BioMarin 的 Roctavian 从研发到获批历时超过 20 年，累计投入超过 20 亿美元。 生产设施投资巨大。重组人凝血因子 VIII 需要在符合 GMP 标准的生物制药设施中生产，建设一个现代化的生物制药工厂投资通常超过 5 亿美元。而且，由于产品的特殊性，需要专门的生产线，设备利用率相对较低。 在市场策略方面，企业需要在不同市场采取差异化策略。在发达国家市场，企业可以通过创新产品获得高价，但需要面对严格的监管和激烈的竞争。在中国等新兴市场，企业需要通过技术转让、本地化生产等方式降低成本，同时适应医保谈判机制。 产品生命周期管理至关重要。由于血友病是终身疾病，患者忠诚度较高，因此早期进入市场并建立品牌优势非常重要。同时，企业需要持续创新，开发长效制剂、新型给药方式等，以保持竞争优势。 在风险控制方面，企业面临多重挑战。技术风险包括产品研发失败、生产工艺不稳定等；市场风险包括竞品上市、价格压力、医保政策变化等；监管风险包括审批延误、质量问题、安全事件等。因此，企业需要建立完善的风险管理体系。6.4 投资者视角：市场前景与投资价值 从投资者角度分析，注射用重组人凝血因子 VIII 市场具有独特的投资价值和风险特征。 市场增长潜力巨大。全球血友病治疗市场预计以 12.09% 的年复合增长率增长，到 2034 年达到 576.8 亿美元。中国市场增长更快，预计年复合增长率达 18% 以上，2030 年市场规模将达 72-75 亿元人民币。这种高速增长为投资者提供了良好的机会。 在投资标的选择上，投资者可以关注不同类型的企业。跨国巨头如拜耳、诺和诺德等具有强大的研发能力和市场地位，但估值较高，增长空间相对有限。本土企业如神州细胞、华兰生物等虽然规模较小，但增长迅速，特别是在国产替代趋势下具有较大投资价值。 技术创新是投资决策的关键因素。基因治疗、RNAi 技术、新型给药系统等创新技术可能带来颠覆性变化。例如，fitusiran 作为首个通过降低抗凝血酶水平治疗血友病的药物，每年仅需 6 次注射，具有革命性意义。投资者需要密切关注这些技术进展。 政策风险需要重点考虑。医保谈判、集中采购、价格管控等政策可能对企业盈利能力产生重大影响。例如，中国 2023 年医保谈判使 rFVIII 产品平均降价 45%-60%，虽然销量可能增加，但对企业利润率的影响需要仔细评估。 长期投资价值值得关注。血友病是终身疾病，患者群体稳定且不断扩大。随着诊断率提升、治疗理念进步、医保覆盖扩大，市场需求将持续增长。特别是在发展中国家，随着经济发展和医疗水平提升，市场潜力巨大。 从投资策略角度，建议采取多元化投资策略，既投资成熟的跨国企业以获得稳定回报，也投资具有创新能力的生物技术公司以分享高增长收益。同时，需要关注产业链上下游机会，如生物反应器、纯化设备、检测试剂等相关企业。7. 发展趋势与前景展望7.1 技术发展趋势 注射用重组人凝血因子 VIII 领域正经历着前所未有的技术变革，多项创新技术正在重塑该领域的发展格局。 基因治疗被认为是最有前景的颠覆性技术。虽然目前主要用于血友病 B，但其成功经验正在向血友病 A 拓展。BioMarin 的 Roctavian 作为全球首个获批的血友病 A 基因疗法，通过 AAV 载体将功能性 FⅧ 基因递送至肝脏，实现内源性 FⅧ 表达。然而，血友病 A 基因治疗面临更大挑战，因为 FⅧ 基因尺寸过大，超出了 AAV 载体的负载能力，需要通过 B 结构域缺失等策略来解决。 RNA 干扰（RNAi）技术带来了全新的治疗思路。fitusiran（Qfitlia）通过靶向抗凝血酶 mRNA，降低抗凝血酶水平，从而重新平衡凝血系统，可同时用于 A 型和 B 型血友病，每年仅需 6 次皮下注射。这种 "一石二鸟" 的治疗方式不仅简化了给药，还可能降低治疗成本。 双特异性抗体技术已经在临床应用中取得成功。艾美赛珠单抗通过模拟 FⅧ 的辅因子功能，连接 FIXa 和 FX，恢复凝血酶生成，用于 A 型血友病的预防治疗。其优势在于皮下注射给药，抑制物风险极低（<1%），且对已有抑制物的患者也有效。 在蛋白质工程方面，通过分子改造延长半衰期成为主流方向。除了已有的 Fc 融合、聚乙二醇化技术外，新型技术如 XTEN 技术、vWF 融合等正在开发中。这些技术通过不同机制延长药物在体内的停留时间，最终目标是实现每周、每两周甚至每月一次给药。 新型给药系统的开发也在加速。除了皮下注射外，研究人员正在探索口服、鼻腔、透皮等非注射给药途径。虽然技术挑战较大，但一旦成功将彻底改变血友病的治疗模式，极大提高患者依从性。7.2 市场演变预测 基于当前的技术发展和市场动态，注射用重组人凝血因子 VIII 市场将在未来 5-10 年发生深刻变化。 市场规模预测显示持续高速增长。全球市场预计从 2024 年的 184.2 亿美元增长到 2034 年的 576.8 亿美元，CAGR 达 12.09%。中国市场增长尤为迅速，预计从 2025 年的 38 亿元增长到 2030 年的 72-75 亿元，CAGR 超过 15%。这种增长主要由患者诊断率提升、治疗渗透率提高、新型药物上市等因素驱动。 竞争格局将更加多元化。虽然跨国企业仍将保持领先地位，但本土企业的崛起不容忽视。预计到 2030 年，中国本土企业的市场份额将从目前的约 50% 提升到 60% 以上。同时，随着生物类似药审批路径的完善，更多仿制产品将进入市场，加剧价格竞争。 产品结构将发生重大变化。传统短效重组因子 VIII 的市场份额将逐渐下降，长效制剂将成为主流。预计到 2030 年，长效制剂将占据全球市场 60% 以上的份额。同时，非因子替代疗法和基因治疗将开始占据一定市场份额，预计到 2030 年合计达到 15-20%。 价格趋势总体向下但结构分化。随着竞争加剧和医保谈判常态化，传统重组因子 VIII 的价格将持续下降，预计年均降幅 5-10%。但新型创新药物如基因治疗、RNAi 药物等仍将维持高价，形成 "高端高价、低端低价" 的市场格局。 区域发展将更加不平衡。发达国家市场趋于成熟，增长主要来自新产品替代和患者人数自然增长。新兴市场将成为主要增长动力，特别是中国、印度、巴西等国家，随着经济发展和医疗保障体系完善，市场潜力巨大。7.3 挑战与机遇 注射用重组人凝血因子 VIII 领域的发展既面临严峻挑战，也充满重大机遇。 主要挑战包括： 技术挑战方面，基因治疗虽然前景光明，但仍面临诸多技术难题，如载体免疫原性、长期安全性、疗效持久性等。特别是对于血友病 A，由于基因尺寸问题，技术难度更大。非因子替代疗法虽然避免了抑制物问题，但可能带来血栓风险，需要长期监测和风险评估。 经济挑战不容忽视。基因治疗的天价（200-350 万美元）虽然从长期看可能具有成本效益，但短期内对医保体系和患者家庭都是巨大负担。如何在创新价值和可负担性之间找到平衡，是整个行业面临的挑战。 监管挑战日益复杂。随着新技术的涌现，传统的监管框架需要调整和完善。例如，基因治疗的长期随访要求、新型药物的疗效评估标准、药物相互作用的监测等，都需要监管机构制定相应的指导原则。 竞争挑战日趋激烈。随着更多企业进入该领域，市场竞争将更加激烈。特别是生物类似药的大量上市，将对原研产品造成巨大价格压力。企业需要通过持续创新和差异化策略来维持竞争优势。 重大机遇包括： 患者需求持续增长。全球约有 40 万血友病患者，其中 75% 无法获得常规治疗。随着诊断技术进步和公众认知提高，将有更多患者被确诊并接受治疗，为市场提供巨大增长空间。 技术突破带来新机遇。基因治疗有望实现 "一次治疗、终身受益"，从根本上改变血友病的治疗模式。RNAi、双特异性抗体等新技术也在不断突破，为患者提供更多选择。 政策环境持续改善。各国政府越来越重视罕见病防治，出台了一系列支持政策，包括加快审批、医保覆盖、研发资助等。中国的 "健康中国 2030" 战略、罕见病用药保障机制等，都为行业发展创造了良好环境。 商业模式创新提供新思路。除了传统的药品销售模式，企业正在探索多种创新模式，如按疗效付费、分期付款、保险合作等，以提高患者可及性。这些创新不仅有助于扩大市场，也能为企业带来长期稳定的收入。 国际合作前景广阔。血友病是全球性疾病，需要各国加强合作。通过技术转让、联合研发、市场准入合作等方式，企业可以更好地开拓国际市场，特别是发展中国家市场。 综合而言，注射用重组人凝血因子 VIII 领域正处于技术变革和市场转型的关键时期。虽然面临诸多挑战，但机遇大于挑战。对于患者而言，未来将有更多、更好、更便捷的治疗选择；对于医生而言，将有更精准、更安全的治疗方案；对于企业而言，需要在创新和可负担性之间找到平衡；对于投资者而言，需要把握技术趋势，选择具有长期价值的投资标的。随着技术进步和社会发展，我们有理由相信，血友病患者的生活质量将得到根本改善，"让每个血友病患者都能正常生活" 的目标终将实现。 点击 告诉TA吧