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▲体内CAR疗法-全球研究与发展格局（2025）免费领取！  离体 CAR-T 细胞开发面临复杂的工艺和高昂的成本，使得人们开始全力攻克 In vivo CAR-T。根据递送载体的不同，In vivo CAR-T 可分为病毒载体和非病毒载体。在非病毒载体中，近一年多以来，基于 mRNA-LNP 技术路线的 In vivo CAR-T 药物开发掀起了一股细胞治疗领域的小热潮。 近日，虹信生物在新英格兰医学杂志发表文章：In vivo CD19-CAR T-Cell Therapy for Refractory Systemic Lupus Erythematosus，这项研究初步证实 In vivo CAR T 候选药物 HN2301 在系统性红斑狼疮(SLE)病人体内的有效性和安全性。HN2301 是一款基于 mRNA-LNP 技术路线的体内 CAR-T 药物，药物活性成份为 anti CD19 CAR-mRNA，递送载体为靶向 T 细胞表面分子 CD8 的抗体偶联 LNP（tLNP）。静脉注射 HN2301，tLNP 将 anti CD19 CAR-mRNA 递送至 CD8+T 细胞里面，表达生成体内 CAR-T 细胞，靶向并杀死 B 细胞。该论文的发表宣告 mRNA-LNP 技术路线的 In vivo CAR-T 首次在人体内获得临床验证。 传统四组份 LNP 的 安全性和有效性已经在真实世界得到大规模验证。然而，静脉注射后，传统 LNP 大部分会聚集到肝脏，而在富含 CD4+T 细胞的器官分布很少，例如肝脏，骨髓，胸腺。因此，In vivo CAR-T 首先要解决靶向递送，人们已做出一些尝试： 第一，开发选择性器官靶向脂质纳米颗粒递送系统SORT LNP，即在传统 LNP 传统 4 组分配方中加入了第 5 种脂质成分，以实现 mRNA 的肝外靶向递送。尽管 SORT LNP 能够实现器官水平的靶向性，但是，在细胞水平的靶向性非常有限，特别是对于免疫细胞亚群。 第二，在 LNP 表面修饰配体，使其能够与靶细胞表面的受体发生特异性结合，从而介导 LNP 被靶细胞吞噬，实现主动靶向。其中，单抗被广泛应用与开发靶向特定免疫细胞的 LNP。抗体偶联的 LNP 也存在一些缺陷，例如，Fc 介导的免疫激活，影响 LNP 摄取的空间位阻及高昂的成本。 除了抗体以外，还有没有其他的配体，能够与 LNP 偶联，使其实现主动靶向递送呢？有人将目光转向了适配体（Aptmer）。适配体是一种具有空间三维结构的单链短核苷酸分子（RNA/DNA），适配体不通过碱基配对，而是类似于抗体，依靠其三维结构特异性结合配体。适配体靶标分子可以为金属离子、小分子、细菌或者病毒及疾病相关的蛋白，已经广泛应用于疾病的诊断治疗。 近日，AtomBio 研究团队在 bioRxiv 发表文章：Lipid Nanoparticles with Aptamers Enable Targeted mRNA Delivery to CD4⁺ T Cells，他们将适配体 Apt62 偶联至 LNP 表面，利用 Apt62 与 CD4 发生特异性结合，将 mRNA 靶向递送至 CD4+T 细胞。Apt62LNP 针对 CD4+T 细胞的转染效率依赖于其表面的 Apt62 配体密度，而且，与非靶向 SM102 LNP 相比，Apt62LNP 将 mRNA 递送至脾脏中的效率提升数十倍。这项研究为 LNP 偶联适配体，尤其是基于 AI 优化增强的适配体，实现体内靶向递送，生成 In vivo CAR-T 提供了一种新型载体路线。 1    AptaBLE AI 模型高效设计适配体 该文章选择的 Apt62 早已经被证实可以以纳摩尔亲和力结合 CD4，破坏 gp120-CD4 相互作用，并抑制 HIV-1 进入多个表达 CD4 的细胞系。那如果是未知的靶标分子，如何获得与其能够发生特异性结合的适配体序列呢？ 通常，经典的做法是采用指数富集的配体系统进化技术（systematic evolution of ligands by exponential enrichment)进行体外筛选适配体序列。在 SELEX 体外筛选过程中，将靶物质与随机的单链寡核苷酸库混合，分离出与靶物质结合的核酸分子后，通过 PCR 对这些结合的核酸进行扩增，生成新的核酸文库，使与靶物质具有高亲和力的核酸分子数量增加，以便进行下一轮筛选。经过多轮重复筛选和扩增，文库中的高亲和力核酸分子逐渐占据主导地位。最后，经过测序分析、亲和力评估、特异性评估及结构分析，筛选出最优的适配体核酸序列。然而，SELEX 是一项耗时费力的工作，通常需要 1-3 个月的迭代轮次，并且分离出高亲和力结合剂的概率通常很低。 AtomBio 是一家基于 AI 技术设计优化适配体的公司，他们开发了一种基于深度学习的人工智能模型 AptaBLE，根据蛋白质-适配体相互作用的专有数据进行训练，使我们能够以前所未有的速度、准确性和效率设计和优化适配体。AptaBL 具有以下优势：第一，既能从头合成多样化的候选适配体库，又可优化现有的适配体；第二，设计具有耐核酸酶降解的适配体，无需化学修饰即可实现；第三，脱靶概率将至极低。 2    Apt62LNP 的转染效率和体内分布 Apt62LNP 制备过程为：先使用微流控设备制备 mRNA-LNP，然后与硫醇化适配体 Apt62 进行表面偶联。适配体偶联制剂设计为理论上每个 LNP 连接 25 个或者 100 个适配体。非靶向 SM102 和 MC3 LNP 的平均尺寸分别为 90 和 98 nm。适配体偶联并没有显着改变流体动力学直径，仅适度增加约 4-12 nm 的尺寸。所有制剂的 PDI 值均保持在 0.2 以下，表明单分散颗粒群。目标 LNP 的平均 zeta 电位为–2.7 mV，带负电荷的适配体附着使值略微偏移至负值，值在–3.0 和–3.8 mV 之间，表明对表面电荷的影响很小。所有制剂的包封效率均高于 95%。 与抗体偶联 LNP 相比， AptLNP 的一个关键优势是能够调整表面适配体密度，同时保持与抗体 LNP 相当的理化性质和整体完整性。 与常规 SM102 或者 MC3 LNP 转染剂量（75ng~600ng/105 细胞）相比，Apt62 LNP 未表现出明显的细胞毒性。在 CD4⁺ SUPT-1 和 CD4⁻ HSB-2 T 细胞系中，将适配体密度从 25:1 增加至 100:1，明显增强 Apt62 LNP 转染效率。在 CD4⁺ SUPT-1 细胞中，CD4 单克隆抗体修饰的 SM102 LNP 转染效率明显低于 Apt62 修饰的 SM102 LNP。 尾静脉注射不同配方的 Fluc-mRNA LNP 制剂，观察注射后其在小鼠体内分布情况，仅在肝脏和脾脏中检测到荧光信号分布。非靶向性的 MC3 或者 SM102 LNP 主要分布于小鼠肝脏中，在脾脏中未检测荧光信号。偶联适配体 Apt62，在脾脏中检测荧光信号分布。对于 MC3 LNP 来说，偶联适配体 Apt62 后，使得脾脏摄取率增加 20 倍；对于 SM102LNP 来说，偶联适配体 Apt62 后，使得脾脏摄取率增加 80 倍。此外，Apt62LNP 在小鼠体内是安全的，未造成器官/组织损伤或者引发显著的免疫反应。 识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入 生物制品微信群！ 请注明：姓名+研究方向！ 版 权 声 明 本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观不本站。

注：本文不构成任何投资意见和建议，以官方/公司公告为准；本文仅作医疗健康相关药物介绍，非治疗方案推荐（若涉及），不代表平台立场。任何文章转载需得到授权。 自从2021年Georg Schett教授在全球首次将自体CAR T疗法应用于系统性红斑狼疮(SLE)的治疗并获得革命性的突破以来，CAR T疗法在自免疾病中的临床探索不断取得新的进展。最近Georg团队的研究更进一步证实了，相对于传统的单抗及TCE，只有CAR T疗法能够实现深度的淋巴结B细胞清除，CAR T治疗自身免疫性疾病展示出了显著的临床优势。遗憾的是，自体CAR T面临生产工艺复杂、制备周期长、成本高昂等多项挑战。此外，患者在接受体外生成CAR T治疗前，还需要进行化疗清淋。这些方面极大限制了CAR T这颠覆性的疗法应用于广大自免病患。 基于mRNA-LNP的In vivo CAR T技术通过靶向LNP精准递送mRNA至T细胞，直接在自免患者体内将内源性T细胞原位改造为CAR T细胞，有望克服体外生成CAR T的众多挑战，无疑是下一代颠覆性CAR T技术。2025年6月30日，AbbVie宣布以21亿美元收购Capstan，则是将体内CAR T的行业热度推上了新的高度。基于抗体偶联LNP-mRNA能否在选择性地递送至自免病人T细胞？能否表达出相当峰度的CAR T？进而能否清除B细胞？安全性如何？以及高频次给药导致的免疫原性等问题都亟待通过临床试验来验证。 2025年9月，虹信生物（MagicRNA）在新英格兰医学杂志（The New England Journal of Medicine）上全球首次公布了基于mRNA-LNP的In vivo CAR T候选药物HN2301在系统性红斑狼疮(SLE)病人的临床试验研究数据，论文题为“In vivo CD19-CAR T-Cell Therapy for Refractory Systemic Lupus Erythematosus”，中国科学技术大学附属第一医院（安徽省立医院）风湿免疫科陈竹教授、CAR T自免治疗先驱Georg Schett教授、虹信生物创始人查高峰博士为论文共同通讯作者，中国科学技术大学附属第一医院风湿免疫科王倩主治医师、虹信生物CSO肖泽秀博士、中国科学技术大学附属第一医院检验科郑旭博士和安庆市立医院风湿免疫科王贵红主任医师为论文共同第一作者。 该临床研究论文展示了虹信生物基于抗体偶联LNP的mRNA CAR T候选药物HN2301的最新临床数据：通过虹信生物工程化细胞靶向平台（EnC-LNP）开发新型靶向CD8的脂质纳米颗粒递送编码CD19 CAR的mRNA，在SLE病人中首次实现了CAR T细胞重编程、B细胞清除，同时观察到了良好的安全性以及初步的临床疗效。该论文的发表宣告mRNA-LNP路径的In vivo CAR T正式进入临床研究阶段，并且在人体上首次获得了临床验证。 HN2301的核心成分由自主知识产权的可离子化氨基脂质（ILB-3132）、人源化的CD8靶向抗体片段以及自主知识产权的Anti-CD19 CAR mRNA组成，为静脉滴注给药。 患者接受低剂量HN2301进行安全性验证 本研究共纳入5例难治性SLE患者。其中四例合并狼疮肾炎（LN），均为女性，年龄介于31-46岁之间，SLEDAI-2K基础评分为8-22分，患病时长至少7年，最长达18年。基础用药包括羟氯喹（HCQ）、环磷酰胺（CTX）、他克莫司（Tac）、环孢素（CsA）、泰他西普（TACI ）、马替麦考霉酚酸酯（MMF）等。 给药前无需清淋处理，首先使用低剂量(2mg/dose)进行了单次给药，首次输注HN2301前一周内停用免疫抑制药物，给药后患者出现了一过性的发热，并且伴随着CAR T细胞的生成。给药后6h监测到外周血中CAR T达到10%，以及外周B细胞水平降低至给药前10%。第2名患者给予了3次2mg给药，每次间隔48h，观察到了每次给药后CAR T细胞生成与B细胞水平降低，但未能实现B细胞清零，并且观察到了与第一例患者相似的安全性。 两个低剂量病人的给药初步证明了低剂量下单次与多次给药的安全性，以及观察到了CAR T的生成与B细胞一定程度的清除，同时也证实了重复给药下，CAR T的表达与B细胞的清除，初步在人体上证明了重复给药的可行性。 以上数据支持开展下一步的剂量递增研究。 患者接受中剂量HN2301进行有效性验证 从第3患者开始，进行剂量爬坡，即单次剂量为4mg，每48h给药2-3次。输注6小时后，外周血中检测到CD8+ CD19-CAR T细胞。外周血中CAR T细胞在每次输注HN2301后6小时达到峰值，最高重编程比例达到了60%以上，并在2-3天内降至基线水平。CAR在非CD8+ 的T细胞上脱靶表达小于10%。令人鼓舞的是，在第一次治疗后6小时内接受4mg剂量的患者外周血中循环B细胞完全耗竭（<1 B细胞/μl），并且耗竭持续了7-10天。重要的是，CD69在CD8+细胞上显著上调，而在CD4+ T细胞上未观察到，这表明CAR T细胞被激活。 通过QPCR检测到CAR-mRNA在每次输注HN2301后6小时达到峰值，且多次给药下CAR-mRNA水平与第一次给药后的水平相当或更高。 对于安全性评估，所有3例中剂量患者在第一次给药后均出现1级CRS，这与CRP和IL-6水平升高相关，3例患者均接受了单剂量tocilizumab治疗。值得注意的是，肝酶，包括天冬氨酸转氨酶（AST）和丙氨酸转氨酶（ALT），在观察期间保持正常范围。除短暂性淋巴细胞减少外，未见明显的血液异常。此外，在治疗期间或治疗后未观察到神经毒性作用或其他严重不良事件。 与HN2301清除B细胞一致，抗核小体抗体在3例患者中显著下降，患者4和患者5抗dsDNA抗体也下降。患者4、5在经HN2301治疗后2-3个月补体水平恢复到正常范围。经过三个月的观察，患者3的系统性红斑狼疮疾病活动指数（SLEDAI-2000）评分从14分降至4分，患者4从22分降至2分，患者5从9分降至6分。 总结 本研究首次证明了基于靶向LNP的体内CAR T治疗SLE的可行性。 本研究共同通讯作者、自免CAR T治疗先驱、国际知名风湿免疫学家Georg Schett教授：“这项研究是整个细胞治疗领域的一个重要里程碑，并取得了革命性的突破，我们第一次看到功能性CAR - T细胞直接在患者体内产生，实现了B细胞的快速清除和自身免疫性疾病的临床改善。这些发现，加上良好的安全性，为免疫治疗的新时代铺平了道路。” 研究团队正在探索优化输注剂量和流程，并将逐步扩展到治疗其他复发难治性自身免疫病。随着技术的不断成熟和完善，体内原位生成CAR T细胞有望成为自身免疫病治疗领域的一项颠覆性技术，真正实现细胞免疫治疗的普及化和规模化，为广大自身免疫病患者带来新希望。 参考资料 Müller F, Taubmann J, Bucci L, et al. CD19 CAR T-cell therapy in autoimmune disease — a case series with follow-up. N Engl J Med 2024, DOI: 10.1056/NEJMoa2308917 Wang Q, Xiao Z, Zheng X, et al. In vivo CD19-CAR T-Cell Therapy for Refractory Systemic Lupus Erythematosus. N Engl J Med 2025, DOI: 10.1056/NEJMc2509522 Tur C, Eckstein, M, Bucci L, et al. Effects of different B-cell-depleting strategies on the lymphatic tissue. Ann Rheum Dis 2025, DOI: 10.1016/j.ard.2025.06.2120 信息来源：虹信生物 扫码进群 掌握CAR-T疗法 、干细胞疗法、基因 疗法、溶瘤病毒、核酸药物全方位信息

说两个有意思的新闻事件 1、恒瑞HER2 ADC递交第二项上市申请 恒瑞医药递交了HER2 ADC药物注射用瑞康曲妥珠单抗（SHR-A1811）的第二项上市申请，推测适应症为治疗既往接受过一种或一种以上抗HER2药物治疗的局部晚期或转移性HER2阳性成人乳腺癌患者。 虽然没有明说是那种抗HER2药物， 但是如果是能对DS-8201治疗后进展的患者仍然会有效，那就很有意思了。 如果这样，比直接击败T-DM1有意义多~ 映恩生物HER2 ADC击败T-DM1还不够，干掉DS-8201才是终局 ~ 这让之前一直在说的序贯治疗就真的成为可能了。 2、虹信生物：In vivo CAR T治疗SLE的临床数据 在新英格兰医学杂志（The New England Journal of Medicine）上全球首次公布了基于mRNA-LNP的In vivo CAR T候选药物HN2301在系统性红斑狼疮(SLE)病人的临床试验研究数据，论文题为“In vivo CD19-CAR T-Cell Therapy for Refractory Systemic Lupus Erythematosus”。 技术：主要是通过靶向CD8的脂质纳米颗粒递送编码CD19 CAR的mRNA。 结果：两个低剂量病人的给药初步证明了低剂量下单次与多次给药的安全性，以及观察到了CAR T的生成与B细胞一定程度的清除，同时也证实了重复给药下，CAR T的表达与B细胞的清除，初步在人体上证明了重复给药的可行性。对于安全性评估，所有3例中剂量患者在第一次给药后均出现1级CRS，这与CRP和IL-6水平升高相关，3例患者均接受了单剂量tocilizumab治疗。 南郭先生评： 虽然只是一个早期的研究结果，但是从某种意义上对in vivo CAR-T进行了可行性验证。 利用抗体做靶向，LNP做载体，mRNA编码，三个关键元件，没有一个是全新的玩意儿，但是能把三个元件组装成能有效发挥作用的药物就是一个很重要的集成创新。 未来相信会有更多的有意思的类似的集成创新的东西。 其实我也在想，现在基因治疗的AAV未来还有没有必要，如果抗体-纳米颗粒技术成本能更低，靶向更好，可携带载体更大，那么技术革命可能很快就来了。