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伏立康唑联合低剂量维奈克拉及阿扎胞苷治疗老年急性髓系白血病疗效及安全性Efficacy and safety of low-dose venetoclax combined with  azacitidine and voriconazole in elderly patients with acute myeloid leukemia李志远1 ，卞铁荣2 ，刘 倩1 ，马 涛1 ，郭渠莲1 ，邢宏运1* (1. 西南医科大学附属医院血液内科，四川泸州 646000；2. 西南医科大学附属医院医学分子实验中心，四川泸州 646000)引用李志远, 卞铁荣, 刘倩, 等. 伏立康唑联合低剂量维奈克拉及阿扎胞苷治疗老年急性髓系白血病疗效及安全性[J]. 世界临床药物, 2025, 46(3): 284-290. DOI:10.13683/j.wph.2025.03.013.作者简介李志远，主治医师，研究方向：血液学。 通信作者：邢宏运，博士，主任医师，研究方向：血液学。 基金项目：四川省科技计划项目(2022YFS0622-B3)01摘要目的 分析伏立康唑联合低剂量维奈克拉阿扎胞苷方案治疗老年急性髓系白血病 (acute myeloid leukemia，AML) 的效果。方法 收集西南医科大学附属医院 2021 年 6 月至 2023 年 6 月住院治疗的老年 AML 患者的临床资料，所有患者 完成 4 个周期的维奈克拉联合阿扎胞苷治疗，对比不同治疗方案的效果及安全性。结果 最终共纳入 45 例患者，其中 12 例采用标准剂量维奈克拉＋阿扎胞苷治疗，33 例采用低剂量维奈克拉＋阿扎胞苷＋伏立康唑治疗。在低剂量组中，24 例 (72.7%) 患者治疗后被评估为完全缓解 (complete remission，CR) 或 CR 伴血液学不完全恢复 (complete remission with  incomplete count recovery，CRi)，19 例 (57.6%) 患者获得微小残留病灶 (minimal residual lesion，MRD) 阴性缓解。在标 准剂量组中，10 例 (83.3%) 患者被评估为 CR/CRi，3 例 (25.0%) 患者获得 MRD 阴性缓解。此外，观察到伴有 SRSF2、 BCOR、NPM1 或 IDH1/2 基因突变的患者对治疗较敏感。低剂量组粒细胞缺乏、血小板减少、转氨酶升高、电解质紊乱、 贫血、低蛋白血症以及感染发生率均高于标准剂量组。标准剂量组平均总生存期 (overall survival，OS)、中位 OS 均长于 低剂量组。结论 使用低剂量维奈克拉联合阿扎胞苷方案治疗老年 AML 时，联合伏立康唑进行抗真菌治疗可使维奈克拉达有效血浆药物浓度，且并未增加 CR/CRi 率，但该方案治疗相关不良反应较标准给药方案增加，并且 OS 缩短。02关键词 维奈克拉 ；急性髓性白血病 ；阿扎胞苷 ；伏立康唑03章节导览1 资料与方法   1.1 临床资料收集  1.2 给药方案  1.3 疗效评估  1.4 观察指标  1.5 统计学方法2 结果   2.1 一般特征  2.2 治疗反应分析  2.3 分子生物学特征  2.4 不良反应  2.5 生存分析  2.6 血浆药物浓度检测3 讨论4 结论04文章节选急性髓系白血病(acute myeloid leukemia， AML) 是一种造血干细胞恶性克隆性疾病，是 最常见的成人急性白血病，老年患者 AML 发病率高且预后差。AML 患者发生侵袭性真菌病 (invasive fungal disease，IFD) 风 险 较 高， 在化疗的 AML 患者中尤为常见。IFD 致死率较高，发生 IFD 的血液系统肿瘤患者接受治疗后的死亡率为 11.7%。预防性抗真菌治疗可降低 IFD 发生风险，以及降低感染导致的死亡率和全因死亡率。 维奈克拉是首个商业化的B淋巴细胞瘤 (B-cell  lymphoma，BCL)-2 基因抑制剂，其通过结合 BH3 结合位点以抑制 BCL-2，启动内源性细胞凋亡，发挥抗肿瘤作用。临床多将维奈克拉联合阿扎胞苷作为 AML 一线治疗方案，有效性、安全性良好，其中维奈克拉一日 400 mg 是联合治疗时的最佳剂量。此外，因维奈克拉由细胞色素 (cytochrome， CY)P450 3A4 途径代谢，强效 CYP3A 抑制剂如伏立康唑可增加维奈克拉血浆药物浓度，此时目标剂量应减至一日 100 mg。本研究旨在明确老年 AML 患者预防性使用抗真菌药物预防 IFD 的有效性，以及对比标准剂量与低剂量维奈克拉治疗老年 AML 的效果，报道如下。    ←长按二维码阅读原文END聚焦药物综合评价  促进临床合理用药请看《世界临床药物》！本刊为月刊，大16开。邮发代号4-302，全国各地邮局均可订阅。定价：26元，全年312元。订阅电话：021-62790477-751订阅传真：021-62473200订阅邮箱：guohx@pharmadl.com分享收藏在看点赞

01. 文献概述 近期，北大的团队在Nature Catalysis期刊发表了一篇名为《In situ lysosomal proteomics enabled by bioorthogonal photocatalytic proximity labelling》的文章，主要描述了其开发了一种新的溶酶体邻近标记技术。 图1. CAT-Lyso系统用于活细胞中溶酶体蛋白质组分析的示意图。 溶酶体是细胞内的一个重要细胞器，参与多种细胞过程。溶酶体功能异常与多种疾病相关。 传统的亚细胞蛋白质组学方法，需要细胞裂解处理，会改变细胞和细胞器的原始状态，且存在材料需求大、时空分辨率低、易受污染等问题。而生物催化邻近标记方法需要基因工程改造细胞以引入外源酶，限制了其在原代样本中的应用。 而北大团队开发的这项技术将能够突破这些壁垒，特异性的靶向活细胞溶酶体中的蛋白质并进行标记。 02. 研究方法 1. 伊红在吗啉基团的加入下，LysoCat（伊红光催化剂）就形成啦，这是一种能够靶向溶酶体的伊红衍生物，它可以用于对活细胞中溶酶体蛋白质组的原位分析。注意： 没有引物吗啉基团的伊红可是没有特定靶向的哦，它是在细胞质内均匀分布的。 2. LysoCat在被活细胞摄取后，细胞内的酯酶会将其去乙酰化，释放出高活性的伊红会定向到细胞的溶酶体，在那里，如果用绿色发光二极管（LED；波长520 nm，功率15 mW/cm²)照射的话，被保护的探针就会被催化，脱离保护被暴露出来，从而被激活。这些被激活的，与生物素偶联探针，就会标记附近的溶酶体内蛋白质啦。 3. 利用链霉素对生物素的亲和作用，这些被生物素偶联的蛋白质就会被富集到一起，然后就可以通过液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）进行富集和蛋白质组分析，鉴定出溶酶体内蛋白质或跨膜蛋白质啦。 03. 基础实验小课堂 问：为什么要测试不同的细胞类型？ 答：为了测试并验证该技术平台对于各类细胞的普适性。 那么要如何测试呢？让我们一起来看一下吧 不同细胞类型的溶酶体光催化邻近标记（CAT-Lyso） 图2. 免疫印记分析前细胞处理的示意图 流程： 1. 将Hela细胞接种到12孔板中培养，待汇合度>90%时，移除培养基 2. 将细胞与LysoCat（10 µM，1 ml DMEM）在37°C、5% CO₂下孵育30分钟 3. 用DMEM洗涤三次，用PBS洗涤一次 4. 加入SF2（50 µM，1 ml DMEM），细胞在37°C、5% CO₂下孵育30分钟 5. 在室温下用绿色LED照射15分钟，并在黑暗中放置15分钟 6. 用PBS（每孔1 ml）洗涤一次 7. 用100 µl RIPA强裂解缓冲液重悬 8. 在冰上孵育10分钟 9. 加入25 µl 5× SDS-PAGE还原上样缓冲液（上样缓冲液的最终浓度为1×） 10. 在95°C下加热15分钟 11. 4-15%梯度SDS-PAGE和0.2-µm PVDF膜进行免疫印迹分析 12. 使用小鼠抗生物素单克隆抗体（mAb）和β-肌动蛋白mAb作为一抗（1:1,000稀释），辣根过氧化物酶（HRP）偶联抗小鼠免疫球蛋白G（作为二抗（1:5,000稀释） 结果解读： 图3. 经LysoCat处理的Hela细胞的免疫印迹结果 阴性对照（左一泳道）为没有经过临近标记技术处理的Hela细胞组，接着（中间泳道和右一泳道）是经过不同浓度的LysoCat处理后的实验组，通过免疫印迹法检测到强烈的生物素标记信号，证实了光催化标记的发生，更高的LysoCat浓度会导致更强的标记信号。 图4. 经LysoCat处理的不同细胞的免疫印迹结果 在其他对多种类型的细胞（HEK293T、RAW264.7、iBMDM、Raji、K562和Jurkat）进行了相同的标记程序，这些细胞类型从上皮样细胞到巨噬细胞和白血病细胞都有涉及。在所有测试的细胞系中都检测到了明显的光催化标记信号，这表明该策略对广泛的细胞类型都有效。 实验中用到的主要试剂： 图片来源：生产商：康为世纪（CWBIO) 知识点敲黑板： A. 免疫印记是什么？ 这是一种用于检测样本中特异性蛋白的实验技术。它是将电泳分离后的蛋白质从凝胶转移到固相支持物（如硝酸纤维素膜或PVDF膜）上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术。 B. Actin是什么？ 肌动蛋白（Actin） 是一种广泛存在于真核细胞中的蛋白质，具有多种重要的生物学功能在分子生物学实验中，肌动蛋白（Actin）常被用作内参（内参照）基因或蛋白。 C. 为什么选择actin作为内参? 原因主要基于其以下特性： 1.高度保守性 • 序列保守：肌动蛋白基因在不同物种之间高度保守，这意味着其序列在进化过程中变化很小。例如，不同哺乳动物的β-actin基因序列高度相似。 • 结构保守：肌动蛋白的蛋白质结构在不同物种中也高度保守，这使得针对肌动蛋白的抗体可以广泛应用于多种物种的实验。 2.表达稳定且丰富 • 广泛表达：肌动蛋白在几乎所有真核细胞中都有表达，且在不同组织和细胞类型中的表达量相对稳定。 • 表达量适中：肌动蛋白的表达量既不过高也不过低，适合用作内参来标准化实验中的信号。 3.功能重要性 • 细胞骨架成分：作为细胞骨架的重要组成部分，肌动蛋白参与细胞形态维持、细胞运动、细胞分裂等多种生物学过程。 • 实验中的可靠性：由于其在细胞中的重要性，肌动蛋白的表达水平通常不会因实验处理而发生显著变化，这使得它成为可靠的内参。 4.其他优势 • 易于检测：肌动蛋白的分子量适中（约42-43 kDa），且有多种特异性抗体可供选择，便于在Western Blot等实验中检测。 • 适用范围广：适用于多种实验条件和组织类型，但在某些特殊情况下（如肌肉组织）可能需要选择其他内参。 D. 免疫印记中内参的作用? 1.校正蛋白上样量 • 确保上样量一致：在Western Blot实验中，不同样本的蛋白质上样量可能存在差异，这会影响实验结果的准确性。通过检测内参蛋白的表达水平，可以确保各泳道之间的蛋白上样量一致，从而更准确地比较目标蛋白的表达差异。 2.检测转膜效率 • 评估转膜效果：在电泳分离后的蛋白质转移到膜上的过程中，不同泳道的转膜效率可能不同。内参蛋白的转印效率可以帮助确定目的蛋白是否被有效转印到膜上。 3.排除实验误差 • 监测实验体系：内参可以作为实验体系的空白对照，帮助检测整个实验过程中的误差，包括蛋白提取、转膜、显色或发光体系等是否正常。 4.提供定量标准 • 用于定量分析：在半定量或定量分析目标蛋白表达水平时，内参蛋白的表达水平可以作为标准化的参考。通过计算目标蛋白与内参蛋白的灰度值比值，可以更准确地反映目标蛋白的相对表达量。 04. 研究意义 技术优势：CAT-lyso系统作为一种无基因改造的亚细胞蛋白质组学技术，具有广泛的适用性，能够对难以转染的细胞、原代细胞以及临床样本进行原位亚细胞蛋白质组分析。 疾病研究与治疗：该技术为深入研究溶酶体相关疾病的发生机制、发现新的疾病标志物和治疗靶点提供了有力支持，有助于推动相关疾病的研究和治疗进展。 推文用于传递知识，如因版权等有疑问，请于本文刊发30日内联系医药速览。 原创内容未经授权，禁止转载至其他平台。 有问题可发邮件至yong_wang@pku.edu.cn获取更多信息。 ©2021 医药速览 保留所有权利 往期链接 “小小疫苗”养成记 | 医药公司管线盘点  人人学懂免疫学 | 人人学懂免疫学（语音版）    综述文章解读 | 文献略读 | 医学科普 | 医药前沿笔记 PROTAC技术 | 抗体药物 | 抗体药物偶联-ADC 核酸疫苗 | CAR技术 | 化学生物学 温馨提示 医药速览公众号目前已经有近12个交流群（好学，有趣且奔波于医药圈人才聚集于此）。进群加作者微信（yiyaoxueshu666）或者扫描公众号二维码添加作者，备注“姓名/昵称-企业/高校-具体研究领域/专业”，此群仅为科研交流群，非诚勿扰。 简单操作即可星标⭐️医药速览，第一时间收到我们的推送 ①点击标题下方“医药速览”   ②至右上角“...”  ③点击“设为星标

▎药明康德内容团队编辑   作为CRISPR基因编辑技术的先驱之一，2013年，张锋教授团队首次将诞生不久的CRISPR-Cas9基因编辑系统改进、应用于哺乳动物和人类细胞，掀起了一场生物技术革命。如今，这套基因编辑工具在生命科学研究中得到广泛应用；基于CRISPR-Cas9的首款基因编辑疗法已经获批用于治疗镰刀型细胞贫血病，此外还有多款疗法正在临床试验阶段。 CRISPR-Cas9诞生后，这位任职于Broad研究所、麻省理工学院的科学家仍在持续拓展基因编辑工具箱。2021年，张锋团队在一篇《科学》论文中，报道了一类起源于细菌的全新RNA引导核酸酶——CRISPR-Cas系统的“祖先”OMEGA。2023年，他们又在一项《自然》研究中，首次在真核生物中发现了可编程的RNA引导系统——Fanzor蛋白，这个能够精准靶向DNA的“真核生物CRSIPR”，有潜力成为更精准的基因编辑工具。就在同一年，张锋团队借助创新算法，在一篇《科学》论文中，从大量极端环境微生物中一次性挖掘出188种新型CRISPR系统，有望带来新型基因编辑工具…… ▲就在两周前，张锋团队发表《细胞》论文，破解了CRISPR-Cas13系统的进化起源之谜。点击此处阅读报道。（图片来源：张锋实验室主页/MIT麦戈文脑科学研究所） 正如这188种新型CRISPR系统的发现，自然多样性蕴含了大量潜在的基因编辑工具，从大自然中的“寻宝”或许能挖掘出更多基因编辑系统。在一项发表于《科学》杂志的新研究中，张锋团队揭示了一种全新的RNA引导系统——TIGR-Tas。相比于CRISPR-Cas，TIGR-Tas系统拥有更高的靶向灵活性，并且递送难度更低。这一发现不仅拓展了RNA引导系统的多样性，还为基因编辑工具的开发提供了全新思路。 RNA引导系统是通过RNA分子指导蛋白质，靶向特定核酸序列的分子工具。不过，现有的RNA引导系统仍存在局限性。例如，CRISPR-Cas需要依赖特定的PAM（原间隔区相邻基序）序列来识别目标位点，这限制了其靶向范围；此外，CRISPR系统需要复杂的适配蛋白，也增加了工程化改造的难度。因此，寻找更简单、更灵活的RNA引导系统成为科学界的重要目标。 在最新研究中，张锋团队从CRISPR-Cas9蛋白的结构出发，重点关注了其RNA结合域——这里正是CRISPR-Cas9易于重编程、成为主流基因编辑工具的重要特征。研究团队对数亿种蛋白质开展了结构同源性搜索，结果IS110转座酶脱颖而出，与Cas9的RNA结合域表现出了相似性。 在筛选出IS110的RNA引导作用后，研究团队进一步挖掘发现，IS110的RNA结合区域和Nop结构域家族类似。Nop结构域在真核生物中有RNA引导功能，团队推测其在原核生物中可能参与类似的RNA-蛋白质协作机制，因此成为挖掘新型RNA引导系统的关键线索。 接下来，研究团队从Nop结构域的“邻居”里找到了目标。基因组环境分析发现，Nop结构域蛋白的编码基因与简称TIGR的长串联重复长阵列相连。这些TIGR长阵列由交替的短重复序列（8-12 nt）和间隔序列（9 nt）组成。这种规律性的间隔重复序列，恰好是CRISPR系统的特征。 ▲TIGR系统的发现（图片来源：参考资料[1]） 到这里，张锋团队锁定了TIGR-Tas系统。TIGR-Tas系统由两部分组成：刚刚介绍的TIGR阵列和Tas蛋白。其中，Tas蛋白根据功能分为三类：TasA（仅含Nop结构域）、TasH（Nop与HNH核酸酶融合）和TasR（Nop与RuVC核酸酶融合）。这种模块化设计使TIGR-Tas系统能够执行DNA切割、基因调控等多种任务。 进一步的研究发现，TIGR阵列被转录为长链RNA前体，随后可被加工成36 nt的tigRNA（TIGR向导RNA）。tigRNA的加工依赖Tas蛋白的存在，但不需要其核酸酶活性。 一个重要发现是，尽管TIGR-Tas与CRISPR-Cas系统有着相似的特性，两者却拥有不同的识别机制——每个tigRNA包含两个间隔序列，分别与目标DNA的两条链互补，因此与CRISPR的单链靶向不同，TIGR-Tas通过双间隔靶向识别双链DNA，并且无需PAM序列。这种机制赋予其更高的靶向灵活性。 在对Tas蛋白的体外实验中，TasR和TasH展现出RNA引导的DNA切割能力。研究团队进一步将TasR引入人类细胞，成功在多个基因位点诱导了插入/缺失突变，编辑效率最高为3.6%。需要指出的是，目前3.6%的编辑效率显然低于CRISPR-Cas9，但TIGR-Tas无需依赖PAM的特性，为开发新型碱基编辑器与先导编辑器提供了可能。此外，Tas蛋白相比于Cas9蛋白体积更小，这也降低了体内递送的难度。 ▲TIGR系统通过RNA引导切割DNA的结构基础（图片来源：参考资料[1]） 最后，研究团队通过冷冻电镜解析了TasR-tigRNA-DNA复合物的结构，并且从结构相似性中推测，TIGR系统可能与真核生物的snoRNA系统具有共同进化起源。对于Tas蛋白，无核酸酶的TasA可能是原始形式，而TasR和TasH通过融合不同的核酸酶结构域演化出切割功能。这种模块化演化模式为理解RNA引导系统的多样性提供了新视角。 综上，张锋团队在最新研究中开发了一种全新的RNA引导系统——TIGR-Tas，其“双间隔靶向”和“无PAM依赖”特性使其在基因编辑领域具有独特优势。例如，传统CRISPR-Cas受限于PAM序列，而TIGR-Tas可靶向更广泛的基因组区域。此外，其紧凑的架构（仅需单个效应蛋白和短tigRNA）简化了递送系统的设计，在病毒载体容量有限的情况下更具应用潜力。张锋团队表示，目前他们目前正在研究TIGR系统在病毒中的作用，以及如何将其应用于研究与治疗。随着进一步的研究，这个“基因魔剪家族”的新成员或许将在精准医学、合成生物学等领域扮演重要角色。 参考资料： [1] Guilhem Faure et al., TIGR-Tas: A family of modular RNA-guided DNA-targeting systems in prokaryotes and their viruses. Science (2025). DOI: 10.1126/science.adv9789 本文来自药明康德内容微信团队，欢迎转发到朋友圈，谢绝转载到其他平台。如有开设白名单需求，请在“学术经纬”公众号主页回复“转载”获取转载须知。其他合作需求，请联系wuxi_media@wuxiapptec.com。 免责声明：药明康德内容团队专注介绍全球生物医药健康研究进展。本文仅作信息交流之目的，文中观点不代表药明康德立场，亦不代表药明康德支持或反对文中观点。本文也不是治疗方案推荐。如需获得治疗方案指导，请前往正规医院就诊。 更多推荐 点个“在看”再走吧~