更新于：2024-11-01

MYD88

更新于：2024-11-01

基本信息

别名

MYD88、MYD88 innate immune signal transduction adaptor、Myeloid differentiation primary response protein MyD88

简介

Adapter protein involved in the Toll-like receptor and IL-1 receptor signaling pathway in the innate immune response (PubMed:15361868, PubMed:18292575, PubMed:33718825). Acts via IRAK1, IRAK2, IRF7 and TRAF6, leading to NF-kappa-B activation, cytokine secretion and the inflammatory response (PubMed:15361868, PubMed:24316379, PubMed:19506249). Increases IL-8 transcription (PubMed:9013863). Involved in IL-18-mediated signaling pathway. Activates IRF1 resulting in its rapid migration into the nucleus to mediate an efficient induction of IFN-beta, NOS2/INOS, and IL12A genes. Upon TLR8 activation by GU-rich single-stranded RNA (GU-rich RNA) derived from viruses such as SARS-CoV-2, SARS-CoV and HIV-1, induces IL1B release through NLRP3 inflammasome activation (PubMed:33718825). MyD88-mediated signaling in intestinal epithelial cells is crucial for maintenance of gut homeostasis and controls the expression of the antimicrobial lectin REG3G in the small intestine (By similarity).

关联

项与 MYD88 相关的药物

INNA-1605

靶点

MYD88

作用机制

MYD88抑制剂

在研机构

宁波亿诺药业有限公司初创企业

原研机构

宁波亿诺药业有限公司初创企业

在研适应症

银屑病

非在研适应症-

最高研发阶段临床申请批准

首次获批国家/地区-

首次获批日期1800-01-20

INNA1602

靶点

MYD88

作用机制

MYD88抑制剂

在研机构

宁波亿诺药业有限公司初创企业

原研机构

宁波亿诺药业有限公司初创企业

在研适应症

结直肠癌

非在研适应症-

最高研发阶段临床前

首次获批国家/地区-

首次获批日期1800-01-20

LM9

靶点

MYD88

作用机制

MYD88抑制剂

在研机构

温州医科大学

原研机构

温州医科大学

在研适应症

肥胖

非在研适应症-

最高研发阶段临床前

首次获批国家/地区-

首次获批日期1800-01-20

100 项与 MYD88 相关的临床结果

登录后查看更多信息

100 项与 MYD88 相关的转化医学

登录后查看更多信息

0 项与 MYD88 相关的专利（医药）

登录后查看更多信息

10,375

项与 MYD88 相关的文献（医药）

2025-01-01·Journal of Ethnopharmacology

The total alkaloids of Berberidis Cortex alleviate type 2 diabetes mellitus by regulating gut microbiota, inflammation and liver gluconeogenesis

Article

作者: Tao, Yiwen ; Fan, Gang ; Zeng, Yujiao ; Gou, Xiaoling ; Zhou, Xianhua ; Zhang, Jing ; Nhamdriel, Tsedien ; Zeng, Rui

ETHNOPHARMACOLOGICAL RELEVANCEType 2 diabetes mellitus (T2DM) has become a public health problem worldwide. There is growing interest in finding drugs to treat T2DM from herbal medicine. Berberidis Cortex is a traditional Tibetan herb commonly used in the treatment of T2DM, and alkaloids are its main active components. However, the anti-diabetic mechanisms of the total alkaloids of Berberidis Cortex (TBC) remain unclear.AIM OF THE STUDYThe aim of this study was to evaluate the anti-T2DM efficacy of TBC and reveal the mechanisms behind its effects.MATERIALS AND METHODSUPLC-Q-Exactive Orbitrap MS technology was employed to qualitatively identify alkaloid components in TBC. T2DM rat models were induced by high-fat diet combined with streptozotocin, and then treated with different doses of TBC (43.5, 87, 174 mg/kg/d) for 40 days. Biochemical parameters, such as fasting blood glucose (FBG), oral glucose tolerance test (OGTT), glycated serum protein (GSP), homeostatic model assessment of insulin resistance (HOMA-IR), total cholesterol (TC), triglycerides (TG), and low-density lipoprotein cholesterol (LDL-C), alongside H&E and PAS staining were used to evaluate the anti-diabetic activity of TBC. More importantly, metagenomics, transcriptomics, targeted metabolomics, and Western blot analysis were integrated to reveal the underlying mechanisms of TBC for T2DM treatment.RESULTSTBC significantly reduced the levels of FBG, OGTT, GSP, HOMA-IR, TC, TG, and LDL-C, and improved the histopathological alterations of pancreatic and liver tissues in T2D rats. It also reduced serum levels of lipopolysaccharide (LPS) and several pro-inflammatory cytokines (IL-6, IL-1β and TNF-α). Gut microbiome analysis by metagenomics proved that TBC could improve gut microbiota dysbiosis, including an increase in some beneficial bacteria (e.g., Bifidobacterium pseudolongum and Lactobacillus acidophilus) and a decrease in some harmful bacteria (e.g., Marvinbryantia and Parabacteroides). Western blot analysis found that TBC significantly up-regulated the expression of three intestinal barrier related tight junction proteins (ZO-1, occludin, and claudin-1), and effectively suppressed several key proteins in the TLR4/MyD88/NF-κB inflammatory cascade, including TLR4, MyD88 and p-NF-κB p65. Moreover, hepatic transcriptomics analysis further revealed the regulatory role of TBC on gluconeogenesis related genes, such as Pgc, and Creb1. Targeted metabolomics and Western blot analysis showed that TBC improved BAs dysregulation in T2DM rats, specifically increasing TCDCA and CA levels, thereby activating several proteins in the FXR/FGF15 signaling axis (i.e., FXR, FGF15 and FGFR4), and then decreased the expression of p-CREB1 and PGC-1α to inhibit liver gluconeogenesis.CONCLUSIONSTBC can significantly improve hyperglycemia, insulin resistance, hyperlipidemia, and inflammation in T2DM rats. The mechanism is related to the regulation of multiple links, including improving gut microbiota dysbiosis, protecting the intestinal barrier by up-regulating the expression of three tight junction proteins, reducing inflammation by inhibiting the LPS/TLR4/MyD88/NF-κB pathway, and inhibiting liver gluconeogenesis by regulating BAs/FXR/FGF15 and CREB1/PGC-1α signaling pathways.

2025-01-01·Bioactive Materials

Inhalable and bioactive lipid-nanomedicine based on bergapten for targeted acute lung injury therapy via orchestrating macrophage polarization

Article

作者: Liao, Ran ; Wu, Jun ; Lin, Ran ; Sun, Zhi-Chao ; Zhang, Zhongde ; Fang, Yifei ; Zhuo, Guifeng ; Xian, Caihong ; Liu, Yuntao ; Yang, Rongyuan ; Wang, Liying ; Wang, Haiyan

Acute lung injury (ALI) or its more severe form, acute respiratory distress syndrome, is a life-threatening disease closely associated with an imbalance of M1/M2 macrophage polarization. However, current therapeutic strategies for ALI are controversial due to their side effects, restricted administration routes, or poor targeted delivery. The development of herbal medicine has uncovered numerous anti-inflammatory compounds potentially beneficial for ALI therapy. One such compound is the bergapten, a coumarin, which has been isolated from Ficus simplicissima Lour. However, it's been used as an anti-cancer drug and it's effects on ALI remain unexplored. The poor solubility and biodistribution of bergapten heavily limit its application. In this timely report, we developed a bioactive and lung-targeting lipid-nanomedicine by integrating bergapten and DPPC liposome, named as Ber-lipo. A comprehensive series of in vitro experiments confirmed the anti-inflammatory effects of Ber-lipo and its protective roles in maintaining the homeostasis of macrophage polarization and epithelial-endothelial integrity. In a lipopolysaccharide (LPS)-induced ALI mouse model, Ber-lipo can target inflamed lungs and significantly improve lung edema, tissue injury, and pulmonary function, relieve body weight loss, pulmonary permeability, and proinflammatory status, and especially maintain a balance of M1/M2 macrophage polarization. Furthermore, RNA sequencing analysis showed Ber-lipo's potential in effectively treating inflammatory lung diseases such as pneumonia, inhibiting proinflammatory signals, and altering the transcriptome of M1/M2 macrophages-associated genes in lung tissues. Molecular docking and Western blot analyses validated that Ber-lipo suppressed the activation of the TLR4/MyD88/NF-κB signaling axis responsible for ALI progression. In conclusion, this study demonstrates for the first time that new inhalable nanomedicine (Ber-lipo) can target inflamed lungs and ameliorates ALI by reprogramming macrophage polarization to an anti-inflammatory state via inactivating the TLR4/MyD88/NF-κB pathway, hence providing a promising strategy for enhanced ALI therapy in the clinic.

2025-01-01·Food Chemistry

Enhanced anti-inflammatory effect of fish myofibrillar protein by introducing pectin oligosaccharide and its molecular mechanisms

Article

作者: Li, Wenzhao ; Yang, Boxue ; Joe, Ga-Hyun ; Saeki, Hiroki ; Shimizu, Yutaka

This study investigated the efficacy of glycation with edible uronic acid-containing oligosaccharides via the Maillard reaction to enhance the anti-inflammatory effect of fish myofibrillar protein (Mf). Lyophilized Mf was reacted with pectin oligosaccharide (PO, half of the total protein weight) at 60 °C and 35 % relative humidity for up to 12 h to produce glycated Mf (Mf-PO). After pepsin and trypsin digestion, the anti-inflammatory effect was assessed by measuring the secretions of proinflammatory cytokines in LPS-stimulated RAW 264.7 macrophages, and the anti-inflammatory effect of Mf was enhanced by PO-glycation without marked lysine loss and browning. The effects on the expressions of genes related to the LPS-stimulated signaling pathway in macrophages were also examined. PO-glycation suppressed LPS-stimulated inflammation by suppressing expression of cd14 and enhancing suppressive effect of Mf on the TLR4-MyD88-dependent inflammatory signaling pathway. Therefore, as an edible reducing sugar, PO could be an effective bioindustrial material for developing anti-inflammatory Mf.

140

项与 MYD88 相关的新闻（医药）

2024-10-28

·药明康德

“癌症之王”患者6个月生存率超90%的KRAS靶向小分子；疾病控制率达100%的FGFR3靶向疗法…… | 一周盘点

▎药明康德内容团队编辑本期看点 1. 口服选择性FGFR3靶向疗法TYRA-300的早期临床结果亮眼，接受剂量≥90 mg/天的FGFR3突变转移性尿路上皮癌（mUC）患者的疾病控制率（DCR）为100%。 2. 泛RAS抑制剂RMC-6236在经治胰腺导管腺癌（PDAC）患者中展现出令人鼓舞的抗肿瘤活性和安全性，携带任意RAS突变的PDAC患者在6个月的总生存率为91%。 3. 治疗转移性透明细胞肾细胞癌（ccRCC）的小分子HIF-2a抑制剂casdatifan在一项1/1b期临床试验中的DCR达81%。药明康德内容团队整理 TYRA-300：公布1/2期临床试验数据 Tyra Biosciences公司公布了其潜在“first-in-class”的口服疗法TYRA-300治疗转移性尿路上皮癌（mUC）患者的1/2期研究SURF301的数据。TYRA-300是一种FGFR3选择性抑制剂，旨在避免抑制FGFR1、FGFR2和FGFR4时产生的毒性，且无论是否存在与耐药性相关的FGFR3门卫（gatekeeper）突变都能发挥作用。截至2024年8月15日的数据，接受剂量≥90 mg/天的FGFR3突变mUC患者的DCR为100%，54.5%（6/11）的患者达到部分缓解（PR），其中3例仍在治疗中，接受90 mg/天剂量的患者中有50%（5/10）达到PR。安全性方面，TYRA-300的耐受性总体良好，FGFR2和FGFR1相关毒性不常见。 RMC-6236：公布1/1b期临床试验数据 Revolution Medicines公司宣布，其在研泛RAS抑制剂RMC-6236在经治胰腺导管腺癌患者中展现出令人鼓舞的抗肿瘤活性和安全性。RMC-6236是一款口服、可靶向突变和野生型RAS在GTP结合（具活性，ON）状态下的选择性抑制剂。此次公布的1/1b期多中心、开放标签、剂量递增和剂量扩展研究RMC-6236-001旨在评估RMC-6236作为单药治疗携带RAS突变或野生型RAS晚期实体瘤患者的效果。结果显示，RMC-6236单药作为二线疗法可改善携带任意RAS突变PDAC患者的中位无进展生存期（PFS）与总生存期（OS）。在二线治疗中，携带KRAS G12X突变（KRAS G12X指的是KRAS蛋白第12位的甘氨酸因为基因突变，转换成其它氨基酸）的PDAC患者的中位PFS为8.5个月，中位OS为14.5个月。携带任意RAS突变的PDAC患者在二线治疗中的中位PFS为7.6个月，中位OS为14.5个月。携带KRAS G12X突变与携带任意RAS突变的PDAC患者在6个月时的总生存率分别为89%与91%。在二线治疗组中，携带KRAS G12X突变患者的客观缓解率（ORR）为29%，在三线及以上治疗组（3L+）中为22%，这些患者的DCR分别为91%和89%。目前该疗法的3期临床试验RASolute 302正在进行中。 Casdatifan：公布1/1b期临床试验数据 Arcus Biosciences公司公布了其在研小分子HIF-2a抑制剂casdatifan治疗转移性透明细胞肾细胞癌的1/1b期临床试验数据。HIF-2a是一种致癌转录因子，参与多个器官和肿瘤中的氧感应。由于VHL通路的基因异常，ccRCC几乎普遍与HIF-2a失调有关。通过选择性抑制HIF-2a，casdatifan可使一系列涉及肿瘤增殖和存活、耐药性和血管生成的通路失效，从而导致癌细胞死亡。截至2024年8月30日的数据，中位随访时间为11个月。在100 mg每日剂量扩展队列（n=32）中，DCR达81%，ORR为34%（2个待确认的缓解），许多患者仍在接受治疗。安全性方面，casdatifan具有可接受且可管理的安全性。 ▲Casdatifan治疗ccRCC患者的1/1b期试验数据（图片来源：参考资料[7]） NX-5948：公布1a/1b期临床试验数据 Nurix Therapeutics公司公布其在研蛋白降解剂NX-5948在治疗复发/难治性华氏巨球蛋白血症（WM）患者的1a/1b期临床试验中的最新数据。NX-5948是一种口服、可穿越血脑屏障的小分子布鲁顿氏酪氨酸激酶（BTK）蛋白降解剂。Nurix此前报告称，NX-5948对一系列对现有BTK抑制剂耐药的肿瘤细胞系表现出高效的抑制活性，这对于经过大量前期治疗的B细胞恶性肿瘤患者群体尤为重要。截至2024年10月10日的数据，在9例可评估应答的患者中，7例患者（77.8%）出现客观缓解，两例患者病情稳定（22.2%）。所有7例缓解均在8周的首次评估中观察到，其中5例患者仍在接受治疗，2例患者的治疗时间超过一年。不论患者基线MYD88和CXCR4的突变状态如何，均观察到应答。 Bel-sar（AU-011）：公布1期临床试验数据 Aura Biosciences公司宣布，其在研病毒样偶联药物（VDC）bel-sar（AU-011）在治疗非肌层浸润性膀胱癌（NMIBC）患者的1期临床试验中获得积极早期数据。Bel-sar由靶向肿瘤表面表达的糖蛋白的类病毒颗粒（VLP）与可由光激活的细胞毒性药物偶联生成。它被设计为具有双重作用机制，既能诱导肿瘤细胞坏死，又能激发强大且持久的抗肿瘤免疫反应。该试验共纳入了13名患者，主要终点是评估bel-sar单独使用（n=5）和bel-sar结合光激活（n=8）局部给药的安全性和可行性。次要终点是评估生物活性及肿瘤微环境（TME）中的免疫介导变化。13名研究参与者中，10名为低级别疾病患者，另外3名为高级别疾病患者。在接受bel-sar结合光激活治疗的患者（n=8）中，5名低级别疾病患者中有4名在组织病理学评估中显示无肿瘤细胞残留，达到了临床完全缓解（CR）。3名高级别疾病患者中有2名在膀胱镜检查中显示肿瘤明显缩小。 ONCT-534：公布1/2期临床试验数据 Oncternal Therapeutics公司公布了其在研雄激素受体（AR）抑制剂ONCT-534治疗复发性或难治性转移性去势抵抗性前列腺癌（mCRPC）患者的1/2期研究的最新数据。ONCT-534在前列腺癌模型中对未发生突变的AR以及多种形式的AR突变和异常都具有活性。ONCT-534具有治疗对AR通路抑制剂耐药（包括AR扩增、AR配体结合域突变或AR配体结合域缺失型剪接变体）的mCRPC患者的潜力。截至2024年9月30日的数据，每天两次的给药方案耐受性良好，没有出现与治疗相关的3级或更高级别的毒性反应。1名患者在接受每日两次160 mg剂量ONCT-534治疗后，前列腺特异性抗原（PSA）升高，但在随后4周以每日两次300 mg剂量ONCT-534治疗后，PSA下降了50%，同时计算机断层扫描（CT）显示与基线相比，靶病灶减少了16%。循环肿瘤细胞（CTCs）的计数和生物标志物分析显示，在另外6名患者中，ONCT-534对AR调控基因的表达和AR的核转位有令人鼓舞的效果。 Lunresertib+camonsertib：公布1期联合治疗试验数据 Repare Therapeutics公司公布了1期临床试验MYTHIC的最新数据，该试验评估了其PKMYT1抑制剂lunresertib和口服小分子ATR抑制剂camonsertib（lunre+camo）的组合疗法。在这项分析中，Repare公司对接受2期段推荐剂量（RP2D）的患者进行了约9个月的随访。结果显示，lunre+camo在保持临床疗效的同时，成功地减轻了与抗肿瘤药物机制相关的贫血。此外，在这些患者中未观察到任何级别的血小板减少或严重的中性粒细胞减少。 ATX-559：IND申请获得FDA许可 Accent Therapeutics公司宣布美国FDA已批准其潜在“first-in-class”的DHX9抑制剂ATX-559的IND申请，可在实体瘤患者中开展1期研究，重点关注BRCA1/2缺陷的乳腺癌和微卫星不稳定性高（MSI-H）和/或错配修复缺陷（dMMR）的实体瘤，预计首例患者将在2024年第四季度接受给药。 DHX9是一种DNA/RNA螺旋酶，据报道在复制、转录、翻译、RNA剪接、RNA处理以及维持基因稳定性等方面发挥着重要作用，该酶是一个有吸引力的新肿瘤学靶点。ATX-559通过抑制DHX9可利用关键的肿瘤弱点，导致癌症特异性细胞死亡。 ▲欲了解更多前沿技术在生物医药产业中的应用，请长按扫描上方二维码，即可访问“药明直播间”，观看相关话题的直播讨论与精彩回放参考资料（可上下滑动查看） [1] Revolution Medicines Presents Updated Data from RMC-6236 Monotherapy Study in Patients with Advanced Pancreatic Ductal Adenocarcinoma. Retrieved October 23, 2024 from https://www.globenewswire.com/en/news-release/2024/10/23/2967583/0/en/Revolution-Medicines-Presents-Updated-Data-from-RMC-6236-Monotherapy-Study-in-Patients-with-Advanced-Pancreatic-Ductal-Adenocarcinoma.html [2] Multiple Clinical Complete Responses Demonstrated Following Single Low Dose Administration of Bel-sar in Patients with Non-Muscle-Invasive Bladder Cancer (NMIBC) in Ongoing Phase 1 Trial. Retrieved October 18, 2024, from https://ir.aurabiosciences.com/news-releases/news-release-details/multiple-clinical-complete-responses-demonstrated-following [3] Oncternal Therapeutics Announces Updated Safety and Efficacy Data for Phase 1/2 Study of ONCT-534 for the Treatment of R/R Metastatic Castration-Resistant Prostate Cancer. Retrieved October 25, 2024, from https://www.globenewswire.com/news-release/2024/10/22/2967000/0/en/Oncternal-Therapeutics-Announces-Updated-Safety-and-Efficacy-Data-for-Phase-1-2-Study-of-ONCT-534-for-the-Treatment-of-R-R-Metastatic-Castration-Resistant-Prostate-Cancer.html [4] Nurix Therapeutics Presents Positive Results from the Ongoing Clinical Trial of Its BTK Degrader NX-5948 in Patients with Relapsed/Refractory Waldenstrom’s Macroglobulinemia. Retrieved October 21, 2024, from https://www.globenewswire.com/en/news-release/2024/10/19/2965795/0/en/Nurix-Therapeutics-Presents-Positive-Results-from-the-Ongoing-Clinical-Trial-of-Its-BTK-Degrader-NX-5948-in-Patients-with-Relapsed-Refractory-Waldenstrom-s-Macroglobulinemia.html [5] Repare Therapeutics Announces Updated Positive Safety and Tolerability Results from the Phase 1 MYTHIC Clinical Trial. Retrieved October 25, 2024, from https://ir.reparerx.com/news-releases/news-release-details/repare-therapeutics-announces-updated-positive-safety-and [6] Tyra Biosciences Reports Interim Clinical Proof-of-Concept Data for TYRA-300, an Investigational Oral FGFR3-Selective Inhibitor, in Phase 1/2 SURF301 Study in Patients with Metastatic Urothelial Cancer (mUC). Retrieved October 25, 2024, from https://www.callunapharma.com/wp-content/uploads/2024/01/Calluna_Pharma_Launch_PR.pdf [7] First Clinical Data for Arcus Biosciences’ HIF-2a Inhibitor, Casdatifan, Showed Promising Clinical Activity and Tumor Shrinkage in Patients with Metastatic Kidney Cancer. Retrieved October 25, 2024, from https://investors.arcusbio.com/investors-and-media/press-releases/press-release-details/2024/First-Clinical-Data-for-Arcus-Biosciences-HIF-2a-Inhibitor-Casdatifan-Showed-Promising-Clinical-Activity-and-Tumor-Shrinkage-in-Patients-with-Metastatic-Kidney-Cancer/default.aspx [8] Interius BioTherapeutics Doses First Patient with in vivo Chimeric Antigen Receptor (CAR) Gene Therapy for B-cell Malignancies. Retrieved October 25, 2024, from https://interiusbio.com/2024/10/interius-biotherapeutics-doses-first-patient-with-in-vivo-chimeric-antigen-receptor-car-gene-therapy-for-b-cell-malignancies/ [9] Spur Therapeutics Showcases Positive New Data from Phase 1/2 GALILEO-1 Trial of FLT201, Its Novel Gene Therapy Candidate for Gaucher Disease, in Oral Presentation at ESGCT 31st Annual Congress. Retrieved October 25, 2024, from https://www.globenewswire.com/news-release/2024/10/23/2967469/0/en/Spur-Therapeutics-Showcases-Positive-New-Data-from-Phase-1-2-GALILEO-1-Trial-of-FLT201-Its-Novel-Gene-Therapy-Candidate-for-Gaucher-Disease-in-Oral-Presentation-at-ESGCT-31st-Annua.html [10] Find Therapeutics Announces First Subject Dosed in Phase 1 Clinical Study of FTX-101. Retrieved October 25, 2024, from https://www.prnewswire.com/news-releases/find-therapeutics-announces-first-subject-dosed-in-phase-1-clinical-study-of-ftx-101-302278520.html [11] Zymeworks Announces First Patient Dosed in Phase 1 Clinical Trial Evaluating ZW171 in Advanced Mesothelin-Expressing Cancers. Retrieved October 25, 2024, from https://www.globenewswire.com/news-release/2024/10/21/2966023/0/en/Zymeworks-Announces-First-Patient-Dosed-in-Phase-1-Clinical-Trial-Evaluating-ZW171-in-Advanced-Mesothelin-Expressing-Cancers.html [12] Aligos Therapeutics Announces U.S. FDA Clearance of IND Application for ALG-000184. Retrieved October 25, 2024, from https://www.globenewswire.com/news-release/2024/10/22/2966892/0/en/Aligos-Therapeutics-Announces-U-S-FDA-Clearance-of-IND-Application-for-ALG-000184.html [13] Pierre Fabre宣布在PFL-002/VERT-002的I/II期首次给药，这是一种MET改变的NSCLC靶向治疗. Retrieved October 25, 2024, from https://www.prnasia.com/story/465694-1.shtml [14] Inozyme Pharma Announces Positive Interim Data from Phase 1 SEAPORT 1 Trial of INZ-701. Retrieved October 25, 2024, from https://www.globenewswire.com/news-release/2024/10/24/2968997/0/en/Inozyme-Pharma-Announces-Positive-Interim-Data-from-Phase-1-SEAPORT-1-Trial-of-INZ-701.html [15] Apogee Therapeutics Announces Results Up to 9 Months from Phase 1 Trial of APG777, its Novel Half-Life Extended Anti-IL-13 Antibody for the Treatment for Atopic Dermatitis and Other Inflammatory Diseases. Retrieved October 25, 2024, from https://www.globenewswire.com/news-release/2024/10/24/2968646/0/en/Apogee-Therapeutics-Announces-Results-Up-to-9-Months-from-Phase-1-Trial-of-APG777-its-Novel-Half-Life-Extended-Anti-IL-13-Antibody-for-the-Treatment-for-Atopic-Dermatitis-and-Other.html [16] BridgeBio Shares Positive Data from High Dose Cohort of Phase 1/2 CANaspire Study of Gene Therapy BBP-812 for Canavan Disease at ESGCT 2024. Retrieved October 25, 2024, from https://www.globenewswire.com/news-release/2024/10/24/2968601/0/en/BridgeBio-Shares-Positive-Data-from-High-Dose-Cohort-of-Phase-1-2-CANaspire-Study-of-Gene-Therapy-BBP-812-for-Canavan-Disease-at-ESGCT-2024.html [17] Precision BioSciences Receives First Approval of Clinical Trial Application to Initiate PBGENE-HBV First-In-Human Study for the Treatment of Chronic Hepatitis B. Retrieved October 25, 2024, from https://investor.precisionbiosciences.com/news-releases/news-release-details/precision-biosciences-receives-first-approval-clinical-trial [18] First Patients Dosed in Phase 1 Clinical Study of ImmunityBio’s CAR-NK Cell Therapy for the Treatment of Relapsed B-Cell Non-Hodgkin Lymphoma. Retrieved October 25, 2024, from https://ir.immunitybio.com/news-releases/news-release-details/first-patients-dosed-phase-1-clinical-study-immunitybios-car-nk?field_nir_news_date_value[min]= [19] Aprea Therapeutics Presents Preliminary Findings on Oral WEE1 Inhibitor APR-1051 at EORTC-NCI-AACR International Conference on Molecular Targets and Therapeutics. Retrieved October 25, 2024, from https://ir.aprea.com/news-releases/news-release-details/aprea-therapeutics-presents-preliminary-findings-oral-wee1 [20] Autolus Therapeutics Presents Clinical Data Update at the 2024 Lymphoma, Leukemia & Myeloma Congress. Retrieved October 25, 2024, from　https://www.globenewswire.com/news-release/2024/10/16/2964125/0/en/Autolus-Therapeutics-Presents-Clinical-Data-Update-at-the-2024-Lymphoma-Leukemia-Myeloma-Congress.html [21] Accent Therapeutics Announces FDA Clearance of IND Application for ATX-559, a First-In-Class Oral DHX9 Inhibitor. Retrieved October 25, 2024, from　https://www.prnewswire.com/news-releases/accent-therapeutics-announces-fda-clearance-of-ind-application-for-atx-559-a-first-in-class-oral-dhx9-inhibitor-302285845.html [22] Calluna Pharma launches and announces EUR 75 million Series A financing to develop novel therapies for inflammatory and fibrotic diseases. Retrieved October 25, 2024, from　 https://www.businesswire.com/news/home/20241023939388/en/Calluna-Pharma-Successfully-Completes-Phase-1-Clinical-Study-of-CAL101-a-First-in-Class-Therapeutic-for-Fibrotic-and-Fibro-Inflammatory-Indications/#:~:text=Calluna%20Pharma%20Successfully%20Completes%20Phase%201%20Clinical%20Study,CAL101%20is%20now%20entering%20Phase%202%20clinical%20development 免责声明：药明康德内容团队专注介绍全球生物医药健康研究进展。本文仅作信息交流之目的，文中观点不代表药明康德立场，亦不代表药明康德支持或反对文中观点。本文也不是治疗方案推荐。如需获得治疗方案指导，请前往正规医院就诊。版权说明：本文来自药明康德内容团队，欢迎个人转发至朋友圈，谢绝媒体或机构未经授权以任何形式转载至其他平台。转载授权请在「药明康德」微信公众号回复“转载”，获取转载须知。分享，点赞，在看，聚焦全球生物医药健康创新

临床结果基因疗法临床终止

2024-10-28

·先导药物

先导科普荟 | 寡核酸药物临床前免疫原性研究

前言：从1978年第一款核酸药物诞生至今，寡核酸药物研发历程坎坷。近年来，得益于新型化学修饰技术对稳定性的改善，以及新型递送系统的应用解决肝细胞摄取效率低等问题，寡核酸药物发展势头迅猛。然而，免疫原性、脱靶等问题仍然给寡核酸药物研发带来了较大阻碍。免疫原性数据是监管部门批准药物疗法的必备条件之一，用于评估某一疗法的安全性和有效性。目前，关于治疗性单克隆抗体和其他生物制剂的免疫原性评估的相关监管指南和行业白皮书已经发布，但寡核酸药物在动物或患者体内免疫原性的报道较少，监管部门也未发布明确的针对寡核酸药物开发的免疫原性研究的系统性指南。业界对寡核酸药物免疫原性理解的局限，大大限制了这类药物的研发进程。相较于单克隆抗体等大分子生物制剂，寡核酸药物的结构更简单，分子量更小，具有更少的潜在表位，因此，它们通常被认为具有较低的免疫原性。然而，寡核酸分子由于其结构的特殊性，与免疫系统的相互作用复杂，可能诱导非特异性的先天免疫反应的产生。为了提高寡核酸药物的稳定性、安全性、细胞吸收及疗效，新一代寡核酸药物的研发过程中通常会对其进行各种化学修饰，目前已报道的各类修饰有一百多种，而这些修饰有的可能降低其免疫原性，有的可能增加其免疫反应。因此，对寡核酸药物进行临床前免疫原性分析是十分必要的。 · 寡核酸药物免疫原性的来源：免疫系统通过不同的胞外和胞内模式识别受体识别小RNA，这是机体的一种病毒防御机制。胞外识别由内体中的TLR3/7/8介导，胞内识别由细胞质中的受体介导。识别治疗性RNA的主要途径是TLR信号通路，它通过髓样分化因子88（MyD88）介导并激活各种途径，导致核因子-κB（NF-κB）激活和I型干扰素反应和/或促炎细胞因子（IL-6、IL-8、IL-12和TNF）释放，最终导致多种下游免疫应答的激活。小RNA对TLR7和TLR8的刺激依赖于富含GU的序列（例如5'-UGUGU-3'或5'-GUCCUUCAA-3'）的存在，引起IFNα介导的炎症反应，激活树突状细胞和巨噬细胞中NF-κB，最终介导炎性细胞因子的生成。 · 寡核酸药物免疫原性的解决办法：单体和骨架修饰现在RNA药物普遍使用了化学修饰，如引入某些2'-核糖和末端骨架修饰，包括2'-O-甲基（2'-OMe）、2'-氟（2'-F）和磷酸硫酯（PS）等，这些修饰一方面可以显著提高寡核酸药物的体内稳定性，也可以在一定程度上降低其免疫原性。递送系统现在RNA药物普遍使用了化学修饰，如引入某些2'-核糖和末端骨架修饰，包括2'-O-甲基（2'-OMe）、2'-氟（2'-F）和磷酸硫酯（PS）等，这些修饰一方面可以显著提高寡核酸药物的体内稳定性，也可以在一定程度上降低其免疫原性。其他此外，不同的给药剂型配方、给药途径、给药剂量频率的优化均可能达到降低药物免疫原性的效果。而且，末端修饰等方法可以改善药物在体内的代谢稳定性、RNA干扰复合物（RISC）稳定性、组织分布等，通过降低药物体内给药剂量，也可以在一定程度上间接降低药物的免疫原性作用。 · 寡核酸药物的临床前免疫原性检测方法：目前人外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells，PBMC）常被用于寡核酸药物细胞免疫原性评估。PBMC通过血液循环分布到全身各组织器官中，参与免疫应答和免疫调节，可用于模拟体内环境，为药物研发提供有效的体外模型，可以用于初步评估药物的免疫安全性，故而被广泛应用于RNA药物或其它可能具有免疫刺激性药物（如大分子药物、小分子免疫激动剂等）的临床前免疫原性评估中。具体检测方法：以siRNA为例，通过特定的转染试剂转染一定剂量的siRNA进PBMC细胞，进而检测I型干扰素相关免疫因子响应水平。如下图，在体外人PBMC细胞中，评估一组阳性刺激物（包含TLR小分子激动剂和siRNA）对IFN-α（左图）和IL-6（右图）的激活水平，各阳性刺激物均呈现不同程度的免疫响应。 PBMC的寡核酸药物免疫激活实验失败率较高，采集外周血后到分离PBMC的时长、提取方式、冻存方式、运输条件、解冻和复苏步骤等每一个环节均可能会影响到PBMC的活性和功能，进而影响后续试验的成败。因此，细胞免疫原性检测前需要规范化PBMC的处理方式，在保留较大提取收率的同时，也要有效维持PBMC的活性和功能。成都先导现已建立稳定的使用PBMC细胞进行寡核酸药物免疫原性评价的体系，确保PBMC供体的活性和激活结果，并已成功用于客户项目的评价支持。了解更多信息，欢迎访问www.hitgen.com或发送邮件至bd@hitgen.com联系我们。 Tang Q, Khvorova A. RNAi-based drug design: considerations and future directions. Nat Rev Drug Discov. 2024 May;23（5）:341-364. doi: 10.1038/s41573-024-00912-9. Epub 2024 Apr 3. PMID: 38570694; PMCID: PMC11144061. Winkle M, El-Daly SM, Fabbri M, Calin GA. Noncoding RNA therapeutics - challenges and potential solutions. Nat Rev Drug Discov. 2021 Aug;20（8）:629-651. doi: 10.1038/s41573-021-00219-z. Epub 2021 Jun 18. PMID: 34145432; PMCID: PMC8212082. Liu Q, Dai G, Wu Y, Zhang M, Yang M, Wang X, Song M, Li X, Xia R, Wu Z. iRGD-modified exosomes-delivered BCL6 siRNA inhibit the progression of diffuse large B-cell lymphoma. Front Oncol. 2022 Aug 2;12:822805. doi: 10.3389/fonc.2022.822805. PMID: 35982974; PMCID: PMC9378967. Berger M, Toussaint F, Djemaa SB, Laloy J, Pendeville H, Evrard B, Jerôme C, Lechanteur A, Mottet D, Debuigne A, Piel G. Poly（vinyl pyrrolidone） derivatives as PEG alternatives for stealth, non-toxic and less immunogenic siRNA-containing lipoplex delivery. J Control Release. 2023 Sep;361:87-101. doi: 10.1016/j.jconrel.2023.07.031. Epub 2023 Aug 2. PMID: 37482343. GUIDELINE ON IMMUNOGENICITY ASSESSMENT OF BIOTECHNOLOGY –DERIVED THERAPEUTIC PROTEINS, EMEA, Dec, 2007. Immunogenicity Testing of Therapeutic Protein Products--Developing and Validating Assays for Anti-Drug Antibody Detection, Guidance for Industry, FDA, Jan, 2019. Heil F, Hemmi H, Hochrein H, Ampenberger F, Kirschning C, Akira S, Lipford G, Wagner H, Bauer S. Species-specific recognition of single-stranded RNA via toll-like receptor 7 and 8. Science. 2004 Mar 5;303（5663）:1526-9. doi: 10.1126/science.1093620. Epub 2004 Feb 19. PMID: 14976262. 获取更多信息，请致电+86-28-85197385或访问www.hitgen.com。媒体查询：media@hitgen.com 投资者咨询：investors@hitgen.com 商务开发：bd@hitgen.com

核酸药物寡核苷酸

2024-10-24

·生物制品圈

向佐剂开发进展：聚焦于抗病毒疗法

摘要：近几十年来，疫苗一直是预防病原体传播和癌症的非凡资源。即使它们可以由单一抗原形成，但添加一个或多个佐剂是增强免疫信号对抗原反应的关键，从而加速并增加保护效果的持续时间和效力。它们的使用对于脆弱人群，如老年人或免疫功能低下的人尤其重要。尽管佐剂非常重要，但只是在过去的四十年里，对新型佐剂的寻找才有所增加，发现了新的免疫增强剂和免疫调节剂类别。由于涉及免疫信号激活的级联反应的复杂性，它们的作用机制仍然不甚了解，即使得益于重组技术和代谢组学，最近已经取得了显著的发现。本综述着重于研究中的佐剂类别、近期作用机制研究，以及纳米输送系统和可以化学操纵以创造新型小分子佐剂的新型佐剂类别。 1.引言佐剂——根据该词的拉丁语词源（adjuvare，意为“帮助”）——被定义为添加到疫苗中以增强免疫系统对抗原的反应并延长其持续时间的物质。在疫苗开发中使用佐剂利用了这些物质可以提供的许多好处，例如减少每次接种剂量所需的抗原量和加强接种的频率，或通过延长其半衰期改善抗原成分的稳定性，从而增强其免疫原性。佐剂可以根据其作用机制、化学性质或来源（合成、天然、内源性）进行分类。佐剂超级家族包括许多不同的物质，特别是能够激活或增强免疫信号或传递系统的小分子或大分子。免疫增强剂是能够在成人或脆弱人群中激活免疫信号的化合物；其中包括模式识别受体（PRRs）的激动剂，如RIG-I样受体（RLR）、干扰素基因（STING）、Toll样受体（TLR）和NOD样受体（NLRs）。传递系统是能够改善和延长疫苗保护的佐剂，如乳液和纳米制剂，类似于脂质体、病毒样颗粒和病毒体。根据所需的免疫反应类型，抗原应与适当的佐剂或佐剂组合正确配制，以获得尽可能少的副作用的最佳反应。到目前为止，已经开发出适当的配方，特别是通过结合不同的佐剂家族，尤其是铝盐与脂质体或乳液。确定适当的佐剂组合可能极为重要，目前许多临床研究正在进行中，以研究它们在不同病理情况下的疗效，特别是在癌症方面。由于佐剂的应用范围从病原体到过敏、自身免疫性疾病和癌症，需要正确理解关键机制，以便只针对特定途径，避免潜在的毒性。即使疫苗试验遵循严格的指导方针，多年来也出现了许多关于其安全性的担忧，特别是在COVID-19疫苗接种活动期间。疫苗的潜在毒性有时归因于所含佐剂。最近还对最成熟和最安全的佐剂，如铝衍生物的潜在毒性表示担忧。即使铝含量在许可的佐剂中每剂从0.8到0.125毫克不等，但近年来出现了关于神经毒性和自闭症的担忧。相比之下，其他研究表明铝的神经毒性是在长期服用后发生的，监管机构将铝在食品中的可容忍周摄入量（TWI）限制在每公斤体重1毫克。有趣的是，有时佐剂由脂质构成，如纳米制剂的脂质体，或其他内源性无风险大分子。EMA和FDA已经批准了47种疫苗，但这些制剂中包含的大多数佐剂是最早的铝佐剂类成员，或脂质体制剂。这种选择可能是由于这些佐剂类的已知耐受性，以及寻找新化合物的相关成本。事实上，近年来发现了不同类别的小分子免疫增强剂；然而，与药物一样，这些化合物需要适当的、耗时的临床前和临床试验来评估它们的疗效和安全性。在最近和最有趣的类别中，报告了几种PRR激动剂，对成人群体具有有希望的结果。最近的研究表明，能够通过线粒体应激途径激活免疫反应的小分子具有通过PRR途径激活免疫反应的效力。本综述着重于作用机制，开发的佐剂类别，特别强调可以针对的新的途径，以创建新的佐剂。 2.佐剂作用机制尽管佐剂通常用于数十亿剂疫苗的配方中，但其作用机制仍然不甚了解。因此，深入理解作用方式和参与免疫系统对病原体反应的免疫机制是开发新佐剂的关键步骤。最近，人们非常关注更深入地理解疫苗佐剂如何刺激免疫反应。由于最近在免疫学研究方面的进展，已经有可能阐明佐剂作用的一些机制，如储存效应和细胞因子和趋化因子的释放，免疫细胞在注射部位的动员，适应性免疫反应的诱导，增加抗原免疫原性，以及抗原呈递细胞（APCs）的激活。阐明佐剂发挥作用的所有机制将提供关于自适应免疫如何由先天免疫促进的关键信息，并有助于开发新的强效疫苗。可以使用广泛因素对佐剂进行分类，包括它们的物理化学特性、起源和作用模式；最受欢迎的分类方案将疫苗佐剂分为两组，传递系统和免疫刺激剂。另一类佐剂由粘膜佐剂组成，可以作为传递载体或免疫刺激化合物，如壳聚糖及其衍生物（N-三甲基和单-N-羧甲基壳聚糖）、霍乱毒素（CT）和热敏肠毒素（LTK3和LTR72）。表1中报告了新的传递系统佐剂。传统上，传递载体仅作为免疫刺激佐剂的储存库，以激活先天免疫系统的细胞。由于现在有证据表明一些传递机制可以激活先天免疫，这种分类不再准确。事实上，传递载体佐剂既作为抗原载体，又通过激活先天免疫系统引起局部促炎反应，导致免疫细胞被招募到注射部位。抗原-佐剂复合物通过作为病原体相关分子模式（PAMPs）激活模式识别受体（PRR）途径。这些现象导致先天免疫细胞的激活，导致细胞因子和趋化因子的释放，这是免疫增强剂佐剂利用的相同作用模式。免疫佐剂（表1）是通过直接刺激先天免疫系统来增强抗体产生的免疫增强剂化合物。此外，作为免疫调节剂的佐剂可以刺激特定类型的细胞因子的产生，从而增强免疫系统的反应。例如，铝盐、弗氏佐剂和CpG寡脱氧核苷酸已被报道能够诱导产生和释放一些参与调节先天和适应性免疫的细胞因子，如干扰素（IFNs）、干扰素-γ（IFN-γ）和白细胞介素（IL2和IL12）。已有几种细胞因子被报道作为免疫增强剂佐剂，刺激抗原特异性血清/粘膜抗体和细胞介导的免疫。在这类物质中，最知名的细胞因子佐剂是粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、IFN、趋化因子和一些白细胞介素（IL-1, IL-2, IL-12-IL-15, IL-18）[15]。此外，免疫刺激剂对于招募免疫细胞（如巨噬细胞、中性粒细胞和树突细胞（DCs））、激活APCs以及疫苗在注射部位的长期积累非常有用。最近的研究将Toll样受体（TLR）与自身免疫系统联系起来，发现了TLR激活先天免疫系统导致适应性免疫和炎症反应诱导的机制，确保了持久保护。佐剂可以作为传递系统，捕获、吸附或聚集抗原，并随时间缓慢释放它们。这种被称为"贮存效应"（图1a）的机制发生在注射部位，佐剂通过防止由于肝脏清除导致的抗原移除，增强了疫苗的半衰期，并确保了免疫系统的持续刺激，从而产生高抗体滴度。多年来，许多通过贮存效应发挥作用的佐剂被描述出来，如脂质体、乳液（油包水和水包油）、病毒体，以及脂质或聚合物纳米颗粒（NPs）。其中一些已被开发来模拟病原体膜，以运输、保存和释放抗原，并同时增强其免疫原性功能。几种类型的脂质体，如传统的脂质体、多层囊泡（MLVs）或固体核心脂质体，也通过促进贮存效应发挥作用。油包水乳液，如完全弗氏佐剂（CFA），以及一些NPs也通过确保持久免疫反应的贮存效应发挥作用。图1. (a) 贮存效应及细胞因子和趋化因子的募集。(b) 免疫细胞的募集和炎症体的激活。颗粒佐剂可以通过利用几种机制诱导免疫反应，例如上调细胞因子和趋化因子的释放，诱导注射部位的炎症状态，激活炎症级联反应，并招募先天免疫细胞。例如，油包水（o/w）乳液MF59和AS03刺激免疫细胞（中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞和树突细胞）的募集，这些细胞将抗原和佐剂运输到更接近的淋巴结。免疫细胞在注射部位的募集诱导半胱氨酸蛋白酶的激活，导致进一步释放趋化因子（IL-18、IL-33、IL-1β），吸引其他树突细胞并延长这一现象（图1b）。此外，MF59和AS03在注射部位增加了CCR2、白细胞募集趋化因子（例如CCL2、CCL3和CCL5）以及集落刺激因子3（CSF3）的表达。同样，明矾在注射后诱导局部促炎微环境，引发补体级联反应，导致从血液流中招募免疫细胞。炎症体是先天免疫系统的重要组成部分。它们是针对病原体的有效免疫反应所必需的。当炎症体被激活时，细胞分泌促炎细胞因子，如IL-18、IL-33和IL-1β，这些细胞因子增强适应性免疫反应（图1b）。炎症体是由工作成分组成的细胞质蛋白信号通路，如富含亮氨酸的重复（LRR）C末端或DNA结合域（HIN200）、caspase-1效应物和适配蛋白ASC，这些蛋白激活炎症caspases。粒细胞、T细胞和B细胞、单核细胞、肝细胞、神经元、小胶质细胞和朗格汉斯细胞都表达炎症体，负责识别病原体并启动先天免疫反应。当炎症体被激活时，它蛋白水解裂解前caspase 1，释放活性形式，将前IL-1β和前IL-18转化为活性物种。ILs从细胞释放后，启动炎症并诱导保护免受病原体侵害的免疫反应。此外，IL-18激活淋巴细胞并刺激T细胞和B细胞的增殖，自然杀伤细胞（NKs）的活性，以及IFN-γ、TNF、IL-1和IL-2的分泌。因此，作为炎症体激活剂的佐剂是增强和维持免疫反应强度的成功策略。这些佐剂通过类似的机制激活炎症体，包括溶酶体降解、cathepsin释放和活性氧（ROS）的形成。在炎症体激活剂中，可以找到如铝盐、壳聚糖、皂素、鞭毛蛋白和合成阳离子聚合物等佐剂。铝盐诱导溶酶体损伤，诱导参与炎症体形成的cathepsin B的产生，特别是NOD样受体蛋白3（NLRP3）；活性炎症体触发caspase-1并刺激细胞因子的释放。壳聚糖和由合成阳离子聚合物制成的纳米颗粒激活NLRP3炎症体，并增强多种白细胞介素（IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A和TNF）、IFN和IgG滴度的分泌，增强细胞和体液免疫反应。佐剂可以通过一系列机制增强疫苗的免疫反应，如贮存效应和刺激先天免疫。先天免疫代表了针对病原体的第一道防线。事实上，早期识别病原体是发展适应性免疫反应的关键步骤。佐剂可以通过激活细胞模式识别受体（PRRs），识别PAMPs和损伤相关分子模式（DAMPs），刺激抗原呈递细胞（APCs）。由于在先天免疫系统中的中心作用，PRRs代表了新佐剂的战略目标。在PRRs超家族中，区分为表面和内体受体的Toll样受体（TLRs）是很有前途的佐剂目标，因为它们可以诱导信号通路，从而诱导关键转录因子的产生，如核因子-B（NF-B）。佐剂也可以用于靶向内体PRRs，如寡聚化结构域样受体（NLRs）和视黄酸诱导基因I样受体（RLRs）（图2a）。定位与它们的性质密切相关；事实上，血浆TLR识别病原体蛋白和脂质，而内体受体则由核酸激活。TLR通过MyD88途径诱导NF-kB，导致促炎细胞因子的释放。基于TLR的佐剂复制了感染期间产生的PAMPs，因此可以非常有效地对抗通常诱导PRRs的病原体或疾病。尽管PRR激动剂具有出色的免疫刺激性效果，但它们作为疫苗佐剂的使用受到高制造成本的限制，这代表了未来临床应用的限制。APCs，如树突细胞（DCs），表达各种PRRs，使它们能够识别多种病原体成分。当PRRs被PAMPs激活时，它们启动复杂的信号级联反应，导致细胞因子和趋化因子的产生，包括干扰素（IFNs），增强抗原呈递能力，以及DCs向淋巴组织的迁移，在那里它们与T细胞和B淋巴细胞相互作用，启动和塑造适应性免疫反应。成熟的DCs也可以刺激naive CD4+ T细胞分化为不同的T辅助（Th）亚群（例如，Th1和Th2细胞），帮助B细胞产生抗体。几种细胞因子调节Th细胞分化；例如，如IL-12、IL-15和IL-27等细胞因子调节naive CD4+ T淋巴细胞向Th1细胞的发展。总之，Th1细胞主要响应于细胞内病原体，如病毒和一些细菌，而Th2细胞主要响应于大型细胞外寄生虫。DCs还能够刺激naive细胞毒性CD8+ T细胞成为活化的CD8+ T细胞。这种现象称为“交叉呈递”，对于诱导针对外源性抗原的强大和持久的细胞免疫，以及有效预防病毒疾病和癌症是必要的。目前尚不清楚外源性抗原是如何在DCs中处理并呈现给MHCI上的CD8+ T淋巴细胞的；然而，已经提出了两种不同的机制。在细胞质途径中，抗原通过内体囊泡进入细胞质，并被蛋白酶体降解。在囊泡途径中，抗原在溶酶体隔室中被降解，独立于蛋白酶体活性。铝、皂素和TLR佐剂可以利用这种机制。图2. (a) 表面和内体 TLR 激活。(b) 增强抗原呈递。由主要组织相容性复合物（MHC）在抗原呈递细胞（APCs）上呈递的抗原，是激活适应性免疫的关键步骤。许多佐剂，如明矾、乳液和纳米颗粒（NPs），被认为通过"靶向"抗原到APCs，增强MHC的抗原呈递功能。迄今为止，尚不清楚佐剂增加抗原呈递的机制是否有助于适应性免疫系统的发展。例如，明矾已被证明可以增强树突细胞对抗原的摄取，以及延长抗原呈递的持续时间。抗原大小似乎在调节抗原呈递效率方面很重要。在早期内体/吞噬体中发现了大的脂质囊泡，它们增加了抗原呈递，而在晚期溶酶体中发现了较小的囊泡，它们减少了抗原呈递。 3.佐剂类型 3.1.铝盐基于铝的佐剂（ABA）最早发现于1926年，目前是全球疫苗中最常用的佐剂。最初使用的铝佐剂是硫酸铝钾，通常称为"明矾"，通过将抗原溶液和佐剂与碱直接沉淀制备而成（明矾沉淀疫苗）。今天，抗原被吸附到预先形成的铝盐凝胶上（直接吸附），在商业制剂的标准化和可重复性方面提供了更多的优势。目前，传统使用的明矾几乎完全被类氢氧化铝（Alhydrogel?，Croda，丹麦Frederikssund）和非晶磷酸铝（AdjuPhos?，Croda，丹麦Frederikssund）所取代。两种新型佐剂是硫酸铝羟磷酸盐（AAHS），目前用于某些人类乳头瘤病毒（HPV）疫苗的配方和Imject? Alum（Pierce，Rockford，美国），由非晶碳酸铝和结晶氧化镁组成。在人类疫苗接种中，ABA主要用于针对破伤风、白喉、百日咳、脊髓灰质炎、甲型和乙型肝炎以及人类乳头瘤病毒（HPV）的疫苗。FDA批准的含有ABA的人类疫苗列表见表2。ABA也在兽医疫苗中广泛应用，用于预防细菌、病毒和寄生虫感染。尽管使用历史悠久，但关于ABA（铝盐佐剂）免疫刺激特性背后的机制仍需进一步阐明。最初，ABA的佐剂特性首先归因于"贮存效应"。根据这一假设，抗原颗粒从不溶性盐颗粒中缓慢释放到体内，随着时间的推移，允许抗原对免疫系统的长期暴露和强化的免疫刺激，从而产生更高的抗体滴度。然而，最近的发现挑战了这一理论，证明抗原在接种部位的保留并不是免疫反应所必需的，而是接种部位炎症的程度才是佐剂效应的解释。因此，除了作为缓释系统外，ABA对免疫刺激还有其他主要影响，如先天免疫细胞的募集和激活、炎症介质的释放以及通过诱导Th2细胞激活适应性免疫。给药后，先天炎症细胞，如中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、树突细胞（DC）和单核细胞，被招募到注射部位。尽管许多免疫佐剂的活性基于Toll样受体（TLR）信号，但铝盐显然不引起基于TLR的反应。与在细胞损伤后释放到细胞质中的不溶性单体尿酸钠（MSU）晶体的尿酸类似，已经显示ABA的颗粒性质促进了巨噬细胞的吞噬作用和APCs中抗原的摄取。此外，ABA的细胞毒性诱导了热休克蛋白（如hsp70）和其他DAMPs（如MSU形式的尿酸）的分泌。NLR家族含吡啉结构域3（NLRP3）是核苷酸结合寡聚化结构域（NOD）样受体家族（NLR）的成员，是一种细胞质模式识别受体（PRR），在调节先天免疫信号中起着至关重要的作用。NLRP3通过钾离子外流激活，作为膜完整性的感应器。当被ATP、石棉、硅石、铝佐剂或MSU等刺激触发时，NLRP3与适配蛋白凋亡相关斑点蛋白含有CARD（ASC）和非活性前caspase-1结合形成NLRP3炎症体多聚体复合物。前caspase-1的自蛋白解剪切为活性caspase-1，将促炎细胞因子前体pro-IL-1β、pro-IL-18和pro-IL-33裂解为它们的活性和分泌形式。有假设认为，铝盐可能通过直接方式激活NLRP3炎症体，通过吞噬溶酶体损伤和随后的cathepsin B释放，或者通过MSU的间接释放。除了NLRP3介导的炎症外，哨兵细胞极化为活跃的巨噬细胞和APCs，增加了吞噬体活性氧物种（ROS）的产生，吞噬体酸化干扰和通过低氧诱导转录因子-1α（HIF-1α）的细胞代谢重编程，是最近揭示的对ABA免疫刺激特性有贡献的其他机制（图3）。图 3. 基于铝的佐剂（ABA）的效果。哨兵细胞激活为抗原呈递细胞（APCs）对适应性反应至关重要，从而将先天免疫与适应性免疫联系起来。ABA通过主要组织相容性复合体II类（MHCII）分子增加活化树突细胞上的抗原呈递。MHCII抗原呈递位点激活CD4+ T细胞，这些细胞分化并激活B细胞，进而主要产生IgG，推动体液免疫。铝盐优先增强抗体介导的免疫反应，通过TFH细胞和IL-4信号，结果产生IgG1并诱导Th2细胞分化，这些细胞通过IgE推动嗜酸性粒细胞炎症反应。与强烈的Th2反应相比，明矾对需要Th1细胞介导保护的感染效果较差。在小鼠研究中，已证明明矾间接抑制Th1反应，原因是IL-4激活。通过Th1反应产生的淋巴因子是补体固定IgG2a抗体的基本诱导因子，因此是巨噬细胞的刺激因子。此外，先天免疫系统的细胞可以发展适应性特性（“训练免疫”），并且铝佐剂可能涉及训练免疫的诱导。然而，NLRP3炎症体和caspase-1在抗体反应诱导中的作用仍然存在争议。经过近一个世纪的使用，铝盐仍然是疫苗佐剂的里程碑，因为它们具有确立的安全性和有效性记录。ABA非常耐受，并且仅报告了一些轻微的局部反应，如注射部位疼痛、肿胀、红斑，以及罕见的肉芽肿和过敏反应，这些反映了它们通过炎症体激活、促炎介质、吞噬细胞积累和抗体产生的作用模式。在一些免疫接种对象中还描述了接触性皮炎的罕见病例，注射后头痛、关节痛和肌痛以及持续性肿胀。有关铝佐剂长期毒性的辩论引起了广泛关注，包括如阿尔茨海默病（AD）、慢性自身免疫和多发性硬化症等影响。由佐剂引起的自身免疫综合征（ASIA）指的是一组不良效应，包括海湾战争综合征、巨噬细胞性肌筋膜炎、硅肺症和与佐剂暴露相关的接种后现象。此外，由于铝离子在AD的发病机制中被牵连，人们对ABA的生物持久性和潜在神经毒性提出了担忧，但这种相关性从未被证明。尽管需要进一步的知识来更新和确认ABA的安全概况，但作为佐剂的铝盐的风险-效益概况仍然极其积极，并确认它们作为疫苗佐剂的黄金标准。 3.2.STING激动剂佐剂环状GMP-AMP合酶/干扰素基因刺激因子（cGAS/STING）途径是先天免疫系统胞质模式识别受体（PRRs）网络的一部分，监测细胞质以感知危险刺激。途径的刺激激活下游的核因子-κB（NF-κB）和干扰素调节因子3（IRF3），增加I型干扰素（IFN-1）和其他促炎细胞因子的转录，从而增强抗原呈递和免疫反应。cGAS/STING在免疫调节中的关键作用使其成为免疫疗法的重要靶点，特别是与癌症相关的，并且是使用STING激动剂作为有前途的疫苗佐剂的理由。STING激动剂（图4）主要在肿瘤学和病毒学中应用，包括环状二核苷酸（CDNs）、非核苷小分子（NCDNs）、胞质双链DNA（dsDNA）、锰离子、可电离脂质和聚合物。如20,3-环状鸟苷酸-腺苷酸（cGAMP）、环状二聚鸟苷酸（c-di-GMP）或环状二聚腺苷酸（c-di-AMP）等环状二核苷酸是途径的天然激动剂，但它们由于高极性和由于外切核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶（ENPP1）酶降解导致的短半衰期，其药代动力学（PK）特性较差，大大限制了它们的使用。为了改善环状二核苷酸的PK特性，已经测试了如ADU-S100的磷酸衍生物，ENPP1抑制剂也是一个有前途的新策略。为了选择活性更好的候选物，寻找模仿CDNs和STING结合构象的刚性类似物的研究导致了一类新的激动剂，即大环桥接刺激剂（MBS），如E7766。为了克服环状二核苷酸的PK限制，研究还集中在NCDNs上，如黄酮类5,6-二甲基黄酮-4-乙酸（DMXAA）和α-芒果苷，以及二聚酰胺苯并咪唑（diABZI）衍生物，这些在肿瘤免疫疗法和针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）方面取得了有希望的结果。图 4. 小分子STING激动剂的二维结构作为触发STING途径的一种方式，诱导细胞质双链DNA (dsDNA) 释放的策略也被采用，例如使用放疗、基于明矾的佐剂，以及化疗药物，如顺铂或多柔比星。无机锰被发现能激活cGAS，并通过增强第二信使cGAMP的产生，充当STING的间接激动剂。在其他激动剂类别中，我们列举了聚合物，如壳聚糖或PC7A，以及基于纳米粒子的可电离脂质。目前在临床试验中的STING激动剂总结在表3中。 cGAS/STING信号的触发因素是细胞质dsDNA，这是细胞损伤的重要标志。因此，cGAS作为直接的DNA受体，催化dsDNA转化为第二信使cGAMP，这诱导了STING的激活和寡聚化。STING寡聚体激活TANK结合激酶1 (TBK1)，它招募IRF3并通过NF-κB诱导I型干扰素刺激基因的转录。下游自噬的诱导和NLRP3炎症体的激活增加了病原体清除，并在自身免疫和炎症性疾病、衰老以及与肿瘤相关的炎症中具有重要意义。STING激动剂通常与环状二核苷酸有关，如cGAMP、c-di-GMP和c-di-AMP，它们作为各种微生物的代谢产物被发现。 STING途径的激动剂能直接诱导树突细胞的成熟和MHCII分子的上调，增加抗原呈递、T细胞的启动，并通过炎症细胞因子间接促进前述效应。STING激动剂还增强适应性免疫反应，通过IgG1和IgG2的产生、脾脏生发中心的诱导以及记忆B细胞的刺激来增强体液免疫。此外，I型干扰素诱导CD4 T细胞分化为Th1和TFH细胞，显著帮助B细胞的启动，也促进CD8 T细胞的激活和增殖，这对抗击耐药肿瘤细胞很重要。通过STING刺激协调的多种免疫反应使得这一途径成为免疫疗法的一个有吸引力的靶点。尽管cGAS/STING的急性激活无疑对病原体和癌细胞有益处，但慢性激活可能导致由IFN驱动的系统性炎症，引发细胞因子风暴（细胞因子释放综合征），类似于败血症。除了可能诱发系统性炎症反应外，STING过度刺激引起的其他主要问题包括缺乏细胞和组织特异性以及淋巴细胞毒性。这些前提，加上具有挑战性的药代动力学特性，使得STING激动剂的全身给药情况复杂化，它们通常在肿瘤内给药。使用药物载体技术，如纳米粒子、基于脂质的载体和抗体至关重要，以实现更选择性的靶向，结合改善的传递和功效。尽管它们的药代动力学具有挑战性，且全身使用的疗效指数较窄，STING激动剂代表了一个非常有前途的佐剂类别，需要优化它们的制剂以进一步提高其佐剂性。 3.3.TLR配体 3.3.1.Toll样受体市场上的大多数疫苗主要由单一佐剂组成，但通常保护性免疫反应并未达到有效使用疫苗的标准。因此，显著的Toll样受体（TLR）是先天免疫的关键组成部分，提供防御性炎症反应以抵御入侵的病原体。人类TLR包括10个成员（TLR1-10），可以跨越细胞表面（TLR1、2、4、5、6、10）或定位在内质网膜（TLR3、7、8、9）上，并参与不同PAMPs（表4）的识别。PAMPs的结合诱导TLR同二聚体（TLR3、4、5、7、8、9）或异二聚体（TLR1/2或TLR2/6）的形成，将两个toll/IL-1受体（TIR）结构域聚集在一起，允许适配蛋白MyD88（髓样分化初级反应-88）与复合物结合。TLR3是唯一结合不同适配蛋白的受体，即含有TIR结构域的适配蛋白-诱导干扰素-β（TRIF）蛋白。与其他TLR不同，TLR4信号可以通过涉及MyD88信号适配蛋白或TRIF的两条独立途径进行。一旦激活，TLR将增加免疫细胞的迁移并引发适应性免疫反应。由于TLRs作为免疫增强剂，它们的激动剂可以用作疫苗佐剂。疫苗产生的免疫反应类型取决于由特定TLR及其适配蛋白激活的信号通路。虽然大多数TLR途径导致Th1免疫反应，TLR2诱导Th0、Th1或Th2反应，TLR3激活NF-κB途径。表1总结了疫苗配方中使用的几种TLR激动剂，TLR激动剂的结构报告在图5中，临床试验中的TLR激动剂在表5中。 3.3.2.TLR2激动剂 TLR2可以识别许多PAMPs，因为它们可以与TLR1和TLR6形成异二聚体。L-pampo是由PAM3CSK4（PAM3）、TLR1/2、聚(I:C)和TLR3构成的复杂系统，是一种有效的佐剂。它在乙型肝炎病毒（HBV）疫苗中使用，诱导细胞介导的免疫反应，增加CD4+ T细胞水平。目前，它正在作为使用RBD（受体结合域）、S1抗原和RBD-Fc作为病毒抗原的SARS-CoV-2疫苗的佐剂进行研究，已被证明能引发强烈的体液和细胞免疫反应。 TLR2识别细菌脂蛋白，因此，由细菌LPS衍生的合成脂肽作为疫苗佐剂被开发出来。MALP2（巨噬细胞激活脂肽2，图5）来源于支原体发酵，利用TLR2-MyD88信号通路激活免疫细胞。PAM2CSK4和PAM3CSK4是两种作为疫苗佐剂评估的TLR2激动剂，用于对抗利什曼病、疟疾和流感。由于它们的尺寸、化学复杂性和疏水性，TLR2激动剂通常不用于疫苗开发，即使在固相自动肽合成研究可以帮助发现新的更简单的衍生物。图5.小分子Toll样受体激动剂的2D结构。TLR2激动剂（紫罗兰色上部）面板）、TLR4 激动剂（青色，中间面板）、TLR 7/8 激动剂（绿色，下面板）。 3.3.3.TLR3激动剂 TLR3是内体受体，能够检测病毒dsRNA。聚(I:C)是一种结构类似于病毒RNA的佐剂。它能够诱导IFN-I和IFN-III的产生，并刺激Th1细胞因子反应。MVS途径（RIG-1和/或MDA5）的激活会导致人类毒性，因此开发了新的聚(I:C)衍生物，聚(ICLC)和聚(IC12U)。聚(ICLC)是一种聚-L-赖氨酸羧甲基纤维素，能刺激干扰素的产生。它诱导炎症体和补体系统的表达，并在针对恶性疟原虫、HIV和癌症的疫苗候选中使用，显示出引发Th1反应的强能力。由于这种佐剂的高度免疫刺激性和对血清核酸酶的高抗性，设计了聚(IC12U)。这种新物质显示了尿嘧啶和鸟嘌呤残基的错配，导致毒性较低（不与MDA5结合），以及IFN-I的产生减少。 3.3.4. TLR4激动剂 TLR4通过MD-2（髓样分化因子-2）和CD14识别细菌脂多糖。LPS的免疫刺激性活性是由于脂质A区域，并且脂肪酸链的变化反映了不同的生物活性。Eritoran是一种TLR4-MD2激动剂。它是一种由脂质A衍生的合成物，其特点是含有四个脂质链，其中一个含有顺式双键。3-O-去酰基-40'-单磷酸脂质A（MPLA，图5）和葡萄糖基脂质A（GLA）表现出低致热性和强免疫增强特性。LeIF（利什曼原虫真核起始因子）和neoseptins（合成肽模拟化合物，图5）是两种非糖脂配体，它们不像LPS，但能够像天然配体一样激活TLR4。在THP-1细胞中筛选激活NF-κB途径的小分子化合物，发现了一种属于吡啶并吲哚类的特定TLR4激动剂（1Z105，图5）。1Z105被确定为安全的TLR4激动剂，其他研究目前正在进行中。TLR4可以激活一个强大的TRIF介导的细胞反应，其特征是多能CD8+/CD4+ T细胞的存在和对癌症和传染病的CTL活性增强。 3.3.5.TLR5激动剂 TLR5由多种免疫细胞表达，参与细菌鞭毛蛋白的识别。配体与TLR5的结合诱导炎症途径的激活，释放包括TNFα、IL-1β、IL-6和一氧化氮在内的炎症介质，引发Th1和Th2反应。当与抗原一起给予时，鞭毛蛋白诱导粘膜免疫反应，这对于保护免受呼吸和胃肠道感染至关重要。鼠伤寒沙门氏菌的鞭毛蛋白已与PR8流感病毒（IPR8）、HA（H5N1）或禽流感病毒（AIV）H5N1抗原配方，证明它能引发强烈的免疫反应，包括IgA的产生。对鞭毛蛋白的修改导致了嵌合鞭毛蛋白或活细菌中的鞭毛蛋白抗原复合物，如结核分枝杆菌、霍乱弧菌、化脓性链球菌、单核细胞增生李斯特菌、肠毒素大肠杆菌（ETEC）等，并在动物模型中使用。三种使用鞭毛蛋白作为佐剂的疫苗正在进行临床试验阶段，其中两种针对流感病毒，一种针对鼠疫耶尔森菌。 3.3.6.TLR7/8激动剂 TLR7/8能够诱导Th1免疫反应，并产生高水平的I型干扰素、IL-12、TNF-α和IL-1β。TLR7/8和TLR9激动剂能够激活并促进cDCs（常规树突细胞）和浆细胞样树突细胞（pDCs）的克隆扩展，动员CD14+ CD16+炎症单核细胞和CD14dimCD16+巡逻单核细胞。Imiquimod（R837，图5）目前已获批准并用于治疗生殖器疣、表浅基底细胞癌和日光角化病。另一种异喹啉衍生物resiquimod（R848）具有抗病毒和抗癌治疗用途，正在评估用于黑色素瘤治疗。已经开发了不同的结构相关的oxoadenine化合物，尽管需要其他临床前研究来证明它们的疗效。CL075是一种结构相关的杂环化合物，具有融合的喹啉-噻唑环。 3.3.7.TLR9激动剂 TLR9识别细菌DNA基序胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤（CpG）二核苷酸，通过MyD88途径激活免疫系统。CpG是已被修改以防止蛋白酶降解并用作佐剂的分子基序。CpG-CDNs能在自然杀伤细胞、B细胞和pCCS中引起强烈的趋化因子、细胞因子和抗体产生，并引发强烈的Th1型免疫反应。CpG1018是一种能够引发Th1型免疫反应的寡核苷酸。CpG1018是过去20年中批准的四种新型佐剂之一。即使它的使用最初在Hepliisav-B疫苗中受到限制，但目前正在评估用于对抗黑色素瘤和SARS-CoV-2的疫苗。MGN1703属于TLR9激动剂，是一种包含CG基序并呈现线性结构的小DNA分子。它由中间的双链DNA部分构成，两侧是单链结构。它作为疫苗的佐剂在癌症疫苗中进行了测试，在那里它激活了先天和适应性免疫反应，仅有轻微或暂时的副作用。它目前正在作为免疫调节剂单独或联合用于治疗恶性肿瘤，如黑色素瘤、小细胞肺癌和结直肠癌的I/II期研究中进行评估。 3.4.CLR配体 C型凝集素受体（CLRs）是病原体和受损组织来源脂质的免疫传感器，参与激活先天和获得性免疫。免疫反应可以通过CLRs细胞信号通路和其他PRRs（如TLR）的串扰来引发，导致不同信号通路的激活和特定细胞因子的表达。CLR触发的佐剂包括Curdlan、PGA-45、海藻糖二硬脂酸酯（TDB）和海藻糖二肉豆蔻酸酯（TDM），它们诱导强烈的Th17和Th1反应。 Curdlan在铜绿假单胞菌疫苗中使用，并诱导高水平的IL-17A和CD44+ CD62L-CD69+ CD4+ TRM细胞产生。Curdlan还能够激活树突细胞（DCs）并增强基于DC的抗肿瘤免疫，因此正在评估用于抗肿瘤免疫疗法。由于Curdlan的高度疏水性，开发了部分氧化的Curdlan衍生物β-1,3-聚葡萄糖醛酸，PGA-45聚合物，它能够刺激IKK-β的磷酸化并降低磷酸化Akt的表达，表明PGA-45可以激活多种细胞表面受体，包括TLR4和dectin-1。海藻糖-6,60-二肉豆蔻酸酯（TDM）及其合成类似物海藻糖-6,60-二硬脂酸酯（TDB），能够通过与C型凝集素受体Mincle结合来激活巨噬细胞和树突细胞。TDB在结核病亚单位疫苗的临床研究中。TDB还可以独立于Mincle发挥作用，通过PLC-γ1/钙/CaMKKβ/AMPK途径诱导小胶质细胞极化为M2表型，使这种佐剂成为治疗神经炎症性疾病的治疗剂。 3.5.RLR配体视黄酸诱导基因I（RIG-I）样受体（RLRs）是病毒感染的传感器，诱导产生I型和III型干扰素和炎症细胞因子，激活参与先天和获得性免疫反应的信号通路。RLRs可以检测病毒和宿主RNA，导致抗病毒反应，但如果RLR途径被无控制地激活，也会导致免疫病理。聚(I:C)激活RLRs途径，因为它模仿细胞中的病毒入侵，导致MAVS-IRF3/7级联的激活和IFN-β和ISGs的产生。IFN-β的表达取决于聚(I:C)的长度；短序列在髓样细胞中诱导IFN-β表达，而长序列在成纤维细胞中诱导IFN-β表达。这意味着使用特定激动剂刺激RLR途径将导致细胞特异性IFN-β表达的诱导，特别是在成纤维细胞中，与单核细胞和巨噬细胞相比，可以赋予更强的抗病毒状态。 4.辅助佐剂和佐剂配方市场上的大多数疫苗只包含一种佐剂，然而，保护性免疫反应通常不足以实现疫苗的有效性。为了增强疫苗的效果，开发了许多佐剂配方。佐剂和抗原可以一起传递，使用两种流行的方法之一，共价偶联或将抗原和佐剂包装在传递机制中。适当的佐剂组合选择可以导致对疫苗免疫反应的补充或协同改善。例如，AS04中的明矾和MPL的联合使用在乙型肝炎病毒（HBV）和人类乳头瘤病毒（HPV）疫苗中显示出比仅使用明矾盐的相同疫苗更好的免疫反应。 4.1.脂质体脂质体是球形颗粒，可以包裹抗原和免疫刺激性分子，保护它们免受降解并将其传递给APCs。脂质体由可生物降解、生物相容、无毒的磷脂组成，允许灵活的结构修改，以实现可调节的特性，如大小、表面电荷、膜柔韧性和药物装载模式。作为疫苗佐剂传递系统（VADS）的脂质体使用带来了许多优点，如高安全性和强烈的免疫反应。市场上的脂质体配方包括Epaxal和inflixal，分别用于对抗甲型肝炎和季节性流感病毒。另一种基于脂质体的疫苗是GSK（GlaxoSmithKline）开发的Shingrix，已获得FDA批准，用于带状疱疹病毒的老年人预防。 4.2.乳液作为疫苗佐剂开发的乳液可以分为两种主要形式，完全弗氏佐剂（CFA）和不完全弗氏佐剂（IFA）。这两种佐剂都是油包水乳液，具有运输抗原和激活先天免疫系统的能力。CFA由矿物油、乳化剂和热杀死的结核分枝杆菌组成，促进免疫反应的刺激。然而，CFA可能会引起强烈、持久的局部炎症，并有在注射部位形成溃疡的潜力。IFA与CFA的成分相同，但不含有杀死的细菌M. tuberculosis。这种佐剂可以产生比没有它的相同疫苗更强大和持久的抗体反应。然而，IFA在疫苗配方中的使用受到其强烈副作用和毒性的限制，这是由高水平的非生物降解油和质量差引起的。 4.2.1.Montanide Montanide 是一个包括油包水和水包油乳液在内的大型家族，它已被用于兽医和人类疫苗中。MontanideTM 的生物可降解性质减少了与 IFA 类似物理结构的许多细胞毒性特征。在注射部位形成储存库，有助于抗原的逐渐释放，这是这种基于油的佐剂的作用机制的一部分。产生集中并防止恶化的抗原，并促进吞噬作用。Montanide ISA 51 和 ISA 720 已在涉及癌症、艾滋病、疟疾或自身免疫疾病的疫苗的多项临床试验中使用。Montanide ISA 201 和 ISA 206 则被用于口蹄疫疫苗。 4.2.2.MF59 MF59 是一种水-油乳液佐剂，由角鲨烯组成，角鲨烯是一种生物可降解且与人体兼容的油，是人体的正常成分，在 pH 6.5 的 10 mM 柠檬酸钠缓冲液中通过表面活性剂 Tween 80 和 Span 85 稳定，平均粒径小于 200 纳米。它首次在 1997 年在欧洲被批准用于人类疫苗（Fluad），现在已在超过 30 个国家的超过 1 亿人中使用。其作用机制类似于明矾盐，具有在注射部位的储存活性，刺激局部先天免疫反应。肌肉中 MF59 的给药激活了强大的细胞和体液免疫反应，释放 ATP 并上调细胞因子和趋化因子，这反过来促进了白细胞的募集、抗原摄取和迁移到淋巴结以激活 B 细胞和 T 细胞，结果比明矾盐更有效。MF59 具有可接受的安全性和良好的耐受性，自 1997 年以来已施用了数百万剂。 4.3.AS0佐剂系统 AS0 佐剂系统基于经典佐剂分子的组合，如明矾、乳液和脂质体。它们由葛兰素史克公司开发，以实现最大的佐剂效果和可接受的耐受性，结合免疫刺激分子，如 TLR 配体等。这些经典佐剂和免疫刺激剂的各种组合旨在针对目标人群（包括儿童、老年人和免疫功能低下的个体）的病原体个性化适应性免疫反应。 4.3.1.AS04 AS04 由 3-O-去酰基-40'-单磷酸脂 A（MPL）组成，这是从革兰氏阴性细菌 Salmonella minnesota 分离出的脂多糖（LPS）的去毒形式，吸附在明矾盐上。MPL 在保持较低毒性的同时，通过 TLR4 激活保留了 LPS 的免疫刺激性，当吸附在明矾上时。TLR4 在先天细胞上的信号传导介导了 AS04 的佐剂作用，与明矾的内在免疫调节特性相结合。我们可以在乙型肝炎病毒（HBV）Fendrix 和人乳头瘤病毒（HPV）Cervarix 疫苗中找到 AS04，与仅用明矾盐佐剂的相同疫苗相比，显示出更好的免疫反应。 4.3.2.AS03 AS03 是一种角鲨烯油包水乳液佐剂，与 MF59 类似，结合了表面活性剂聚山梨醇酯 80 和 α-生育酚（维生素 E），结果具有较低的反应原性并具有更好的安全性。2009 年，欧洲委员会批准了 AS03 佐剂疫苗 Pandemrix 的商业化，2013 年食品药品监督管理局授权了 AS03 佐剂流感 A（H5N1）单价疫苗。它也用于 SARS-CoV-2 重组蛋白疫苗（CoV2 preS dTM）。α-生育酚的抗氧化和免疫刺激性特性与 MF59 相比，促进了免疫增强反应，调节了某些细胞因子和趋化因子的表达，如 CCL2、CCL3、IL-6 和 GM-CSF。此外，AS03 通过刺激 NF-κB 激活免疫系统，这导致肌肉和引流淋巴结中细胞因子和趋化因子的释放，并促进先天免疫细胞的迁移。此外，AS03 可以促进 CD4+ T 细胞特异性免疫反应，这可能导致持久的中和抗体产生和更高水平的记忆 B 细胞。为了增加其免疫原性，使用两种强效免疫刺激剂，QS-21（来自 Quillaja saponaria 的皂苷）和 3-O-去酰基-40'-单磷酸脂 A（MPL），产生了 AS02。 4.3.3.AS01 AS01 佐剂是两种强效免疫刺激组分的组合，TLR4 配体也在 AS04 中使用（MPL）和分离纯化的皂苷部分（QS-21），在脂质体中配制。它用于带状疱疹疫苗 Shingrix 和疟疾疫苗 Masquirix 。临床前研究表明，QS-21 作为佐剂增强了抗体以及细胞介导的免疫反应，但作为疫苗中的单一组分佐剂，它的耐受性较差。在 AS01 中，脂质体中的胆固醇允许它结合 QS-21 并抑制其反应原性。MPL 通过 TLR4 激活先天免疫系统，而 QS-21 激活引流淋巴结中副皮质窦巨噬细胞（SSMs）中的 caspase 1。两种已建立的佐剂分子的结合引发了先天免疫的协同激活，结果大于独立组分的总和，激活了不是由任一组分单独触发的新途径，增加了表达 IL-2、IFNγ 和 TNF 的多能 CD4+ T 细胞。AS01 作为佐剂在带状疱疹疫苗中的使用已获批准，该疫苗用于老年人，具有高疗效，并在非洲有限的运动中实施的疟疾疫苗。 4.4.免疫刺激复合物免疫刺激复合物是另一种具有强大佐剂活性的疫苗传递载体。它们是球形的，笼子状的自组装颗粒，大小约为 40 毫米。ISCOMs 由 Quillaja 皂苷、胆固醇、磷脂和抗原组成。没有抗原的颗粒被称为 ISCOM 基质。ISCOM 抗原可以是原生病毒的包膜蛋白、细胞膜蛋白或通过极性相互作用含有疏水域的肽。ISCOMATRIX® 是使用与 ISCOMs 相同的材料开发出来的，但没有抗原，可以在疫苗配方中添加，使得使用更加多样化，并消除了疏水抗原的限制。树突状细胞（DCs）和 ISCOM 相互作用可以改善结合抗原的交叉呈递。因此，有效地诱导了 CD4+ 和 CD8+ 抗原特异性 T 细胞反应。诱导细胞毒性 T 细胞、平衡的 Th1/Th2 反应和持久的抗体反应都是 ISCOM 疫苗的记录效果。其他 ISCOM/ISCOMATRIX 疫苗已针对 HIV、HPV 和癌症利用抗原 NY-ESO-1 进行了临床试验。在所有情况下，研究都显示出良好的安全性和耐受性，以及诱导体液和细胞免疫反应。尽管具有这些特点，但由于一些皂苷在高浓度下具有毒性，因此对人类疫苗中使用 ISCOMs 的安全性问题已经阻止了其使用。 4.5.类病毒颗粒类病毒颗粒（VLPs）是与病毒大小相似的二十面体纳米颗粒（范围在20至800纳米之间），它们具有自我组装衣壳蛋白的能力。它们是非感染性颗粒，因为它们没有遗传物质。VLPs由具有重复表位的外部病毒壳组成，这些表位被免疫系统识别为非自身，并产生快速且持久的免疫反应，即使没有佐剂。它们可以通过使用不同的技术和细胞系统，如大肠杆菌、酵母（酿酒酵母和毕赤酵母）、杆状病毒、哺乳动物细胞、植物细胞或无细胞系统，由各种病毒类型生产。历史上的VLPs制造方法包括一个称为“先组装后纯化”的多步骤方法。第一步包括衣壳蛋白在表达细胞载体内的自发组装。第二步则提供新形成颗粒的纯化。有时需要将VLPs拆解后再重新组装，以获得纯化的颗粒并提高质量。另一种VLPs的制造方法提供了使用无细胞体外组装，颠覆了传统的自我组装方法。特别是，体外系统被用作一个平台，在衣壳蛋白表达和纯化后诱导其自发组装，无需拆解新形成的VLPs。在市场上，两种重要的佐剂疫苗使用这种类型的纳米颗粒，即乙型肝炎（HBV）和人乳头瘤病毒（HPV）疫苗。当前的乙型肝炎疫苗是一种利用酿酒酵母作为表达载体的重组DNA疫苗，包括用于预防乙型肝炎感染的乙型肝炎表面抗原（HBsAg）。这种疫苗已被证明至少可以提供10年的免疫力。在HPV疫苗中，非包膜HPV病毒颗粒包含双链DNA（dsDNA）。L1和L2蛋白组成衣壳的主要和次要结构蛋白，具有二十面体对称性。酿酒酵母是目前用于表达L1蛋白的载体。VLPs和佐剂（AlP）的结合导致强烈的免疫反应和90%的宫颈癌保护。 4.6.病毒体病毒体是一种药物传递系统，由病毒包膜和病毒或其他病原体的成分组成。它们由重组流感病毒包膜形成，包含血凝素（HA）、神经酰胺酶（NA）和磷脂，并且像VLPs一样缺乏病毒遗传物质。第一个基于病毒体的疫苗是在1975年开发的，这允许研究这种类型疫苗的有效性。自那以后，有两种疫苗已经上市，用于预防甲型肝炎（Epaxal）和流感（Inflexal）。病毒体结构中HA的存在允许保持受体结合能力，增加免疫原性和膜融合活性，但由于缺乏病毒RNA，病毒体在结合后不能在细胞中诱导感染。病毒体可以将抗原输送到抗原呈递细胞（APCs）的细胞质中，并诱导细胞毒性T淋巴细胞反应，使它们成为完美的传递系统。然而，由于佐剂质量较差，病毒体在激活APCs和鼓励交叉呈递方面效果不佳。使用更强的佐剂可以克服这种固有限制。最近开发了一种基于病毒体的创新流感疫苗，结合了TLR4配体单磷酸脂A（MPLA）和金属离子螯合脂质DOGS-NTA。病毒体可以诱导强烈的体液和细胞免疫，与自然感染和其他强效佐剂相当。由于其极高的耐受性和安全性，这种传递系统已获得FDA批准用于人类。除了针对流感和甲型肝炎的两种基于病毒体的疫苗外，还有几种疫苗正在进行临床试验，包括针对HIV、HPV、RSV和疟疾的疫苗。 5.佐剂设计和开发的新见解如前所述，在过去20年中，发现了新的免疫激活佐剂类别，能够增强免疫功能低下和老年人等脆弱人群的免疫反应。有几种佐剂类别可用，每种都有其自身的优势和劣势。油包水乳液等传递系统是有效且安全的系统，尽管有可能产生局部或系统性不良效应。最近的研究表明，PRR信号在几个人群中可以改变，降低了疫苗配方的保护效果。例如，防止胎儿排斥的免疫机制以及老年人中TLR途径的失调或遗传多态性的存在。出于所有这些原因，选择适当的佐剂配方对于提高效果而不降低风险-效益比至关重要。从化学角度来看，蛋白质数据银行存储库上有几种与特定配体共晶的蛋白质晶体结构，有助于通过计算机辅助药物设计寻找新化合物。报道的STING和TLR小分子激动剂的大多数结构是杂环化合物，模仿核苷酸。即使在这种情况下，也已经开发了许多具有不同应用的结构相关化合物，包括在癌症疾病中广泛应用的激酶抑制剂和作用机制不太明确的配体或人类辅因子的配体。另一个需要考虑的方面是存在用于合成肽的高通量全自动仪器。最近已经做出了努力来合成复杂的高分子量肽和糖蛋白。此外，已经开发了使用天然成分的新型复杂纳米配方，如来自昆虫的功能化聚合物。所有这些方面都非常有前景，并为佐剂发现的发展开辟了新的场景。 6.结论佐剂是疫苗配方的关键组成部分的大家族。它们的使用在历史上最重要的疫苗接种活动中至关重要，包括脊髓灰质炎、猪流感和最近的COVID-19大流行。即使已经取得了良好的结果，但还需要更多的努力来增加疫苗对耐药病毒的保护，并减少额外加强针的需要。重组技术、DNA筛选和生物信息学研究已经阐明了新的机制和免疫信号通路的关键参与者。还需要更多的努力来识别更有效的佐剂，以对抗未来的大流行并增加对抗癌症的成功率。识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入生物制品微信群！请注明：姓名+研究方向！版权声明本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。

疫苗