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该研究开发了一种免疫疗法方法，通过脂质纳米颗粒共封装的STING和TLR4先天性免疫激动剂与衰老诱导RAS靶向疗法结合，可以通过衰老相关分泌表型（SASP）重塑PDAC的免疫抑制性肿瘤微环境。 马萨诸塞大学的研究人员在 Science 子刊 Science Translational Medicine 上发表了题为：Nanoparticle delivery of innate immune agonists combined with senescence-inducing agents promotes T cell control of pancreatic cancer 的研究论文。 该研究表明，使用纳米颗粒递送先天性免疫激动剂（STING激动剂、TLR4激动剂）联合衰老诱导剂（MEK抑制剂、CDK4/6抑制剂），能够促进T细胞控制胰腺癌，产生了强大的T细胞驱动和I型干扰素介导的肿瘤消退和长期生存。 此前的研究表明，RAS靶向疗法不仅可以通过上调肿瘤细胞的MHC-I分子来增加抗原呈递，还可以诱导细胞衰老和随后的衰老相关分泌表型（SASP），包括能够以动态方式重塑免疫抑制性TME的血管生成和炎症因子。 在KRAS突变的肺腺癌模型中，靶向下游KRAS信号通路的丝裂原活化蛋白激酶激酶（MEK）抑制剂曲美替尼（Trametinib，简称T）和细胞周期素依赖性激酶4/（CDK4/6）抑制剂帕柏西利（Palbociclib，简称P）的联合治疗可诱导促炎性的衰老相关分泌表型（SASP），导致NK细胞介导的肺肿瘤消退。相比之下，在KRAS突变的胰腺导管腺癌（PDAC）模型中，使用相同的T/P治疗方案治疗可诱导促血管生成的SASP，促进血管重塑和内皮细胞激活，从而增加化疗药物的递送、细胞毒性T淋巴细胞转运和抗PD-1免疫检查点疗法的疗效。 这些针对特定器官的免疫反应的差异似乎是由宿主微环境决定的。特别是最近发现，在PDAC的肿瘤微环境中普遍存在的成纤维细胞有助于抑制T/P治疗后的促炎性SASP因子，并增强NK细胞和CD8+T细胞的免疫反应。 针对PDAC的肿瘤微环境驱动的免疫抑制机制导致激活了干扰素调节因子（IRF）的表达和下游干扰素信号通路，这表明激活干扰素信号通路可能是激活PDAC中细胞毒T淋巴细胞活性的一种方法。 STING（干扰素基因刺激因子）通路是I型干扰素产生的主要调节因子，现已成为一种重要的先天免疫通路，可增强抗肿瘤NK细胞和T细胞免疫。在体外和小鼠体内的临床前研究中，给予cGAMP和其他合成的STING激动剂已被证明可以刺激抗原呈递的树突状细胞，重编程免疫抑制性巨噬细胞，减少抑制性的调节性T细胞（Treg）的数量，并增加CD8+T细胞的激活，从而产生抗肿瘤效果。 虽然STING激动剂作为潜在的免疫疗法具有很大的潜力，但由于以下原因，其临床开发受到了限制： 1、由于细胞摄取量有限和血浆半衰期较短，STING激动剂的药代动力学特性和生物利用度不佳； 2、系统性给药时可能出现的不良毒性和免疫抑制效应； 3、包括胰腺在内的一些肿瘤部位难以进行肿瘤内注射。 为了克服这些局限性，研究团队设计了基于脂质的纳米颗粒，使STING激动剂能够在全身范围内被递送，并由于其较小的尺寸和“隐形”表面涂层而优先沉积和被肿瘤周围的“渗漏”区域内的抗原呈递细胞摄取，从而延长了循环时间。利用纳米颗粒可以作为多种免疫刺激剂载体的事实，研究团队不仅将STING激动剂环二鸟苷单磷酸（cdGMP）装载到纳米颗粒中，还将Toll样受体4（TLR4）激动剂单磷酸脂质A（MPLA）装载到纳米颗粒中，以进一步刺激Ⅰ型干扰素（IFN）反应。 研究团队在黑色素瘤和三阴性乳腺癌模型中证明，在纳米颗粒中系统性共递送STING和TLR4激动剂，可使它们进入甚至血管化不良的肿瘤微环境（TME）中，并导致比仅携带单一激动剂的纳米颗粒更高的干扰素β（IFN-β）产生。在这些肿瘤模型中，免疫-纳米颗粒疗法导致了强大的先天性免疫反应（抗原呈递细胞和自然杀伤细胞）和适应性免疫反应（细胞毒性T淋巴细胞），抑制了肿瘤生长，延长了生存时间，这种治疗效果无法通过直接递送激动剂或抗PD-1单抗治疗实现。 研究团队推测，将T/P疗法与免疫-纳米颗粒疗法结合起来，可以协调免疫细胞、肿瘤细胞和肿瘤微环境中的血管之间的免疫抑制网络，从而产生持久的抗肿瘤T细胞反应。 在这项研究中，研究团队使用同基因移植和原发性PDAC小鼠模型，发现联合治疗导致肿瘤微环境中多种细胞类型对免疫-纳米颗粒的摄取增加，激活了I型干扰素和与SASP相关的细胞因子和趋化因子，并上调了肿瘤细胞和抗原呈递细胞上的抗原呈递，最终导致持续的IFN-α和IFN-β受体亚基1（IFNAR）依赖的、由CD8+T细胞介导的抗PDAC免疫反应。 总的来说，该研究开发了一种免疫疗法方法，通过脂质纳米颗粒共封装的STING和TLR4先天性免疫激动剂与衰老诱导RAS靶向疗法结合，可以通过衰老相关分泌表型（SASP）重塑PDAC的免疫抑制性肿瘤微环境。将该联合疗法应用于PDAC小鼠模型，能够增强PDAC肿瘤微环境中多种细胞类型对纳米颗粒的摄取，诱导I型干扰素和其他促炎信号通路，增加肿瘤细胞和抗原呈递细胞的抗原呈递，并随后激活先天性免疫反应和适应性免疫反应。 这种双管齐下的治疗策略产生了强大的T细胞驱动和I型干扰素介导的肿瘤消退和长期生存。因此，将局部免疫激动剂递送与系统性肿瘤靶向治疗相结合，可以协调I型干扰素驱动的先天性免疫反应和适应性免疫反应，产生持久的抗肿瘤效果，以对抗胰腺导管腺癌（PDAC）。

摘要：复制缺陷型腺病毒（Ad）载体因其具有高转导效率、相对较大的转基因容量和高滴度生产等高度优越的性质，在基因治疗研究和基因功能分析的基本研究中被广泛用作基因传递载体。此外，Ad载体能够诱导适度水平的先天免疫，并且具有相对较高的热稳定性，使它们成为潜在疫苗载体的非常吸引人的选择。因此，预计Ad载体将用于预防传染病的疫苗，包括埃博拉病毒病和获得性免疫缺陷综合症（AIDS）。目前，人们非常关注Ad载体疫苗用于2019年冠状病毒病（COVID-19）的潜在用途。在这篇综述中，我们描述了Ad载体的基本特性，Ad载体诱导的先天免疫以及对Ad载体产生的转基因产物的免疫反应。我们还讨论了开发能够克服传统Ad载体疫苗缺点的新型Ad载体，以及Ad载体疫苗在几种传染病的临床应用。 1.引言 2019年冠状病毒病（COVID-19）以及引起该病的严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）提醒我们，传染病仍然是对人类构成重大全球威胁的疾病。疫苗是对抗各种病原体的强大工具，可以预防传染病的感染和进展。传统疫苗通常由灭活或减毒的病原体以及来源于病原体的蛋白质组成。传统疫苗模拟病原体感染，导致对病原体衍生蛋白质的免疫反应的诱导。尽管传统疫苗已成功用于诱导对许多传染病的持久保护性免疫，但传统疫苗开发不是应对由大部分未知病原体引起的新兴传染病爆发的合适方法。传统疫苗的开发需要很长时间，通常超过10年。为了应对新兴传染病的爆发，疫苗的高效快速生产是不可或缺的。此外，经常会产生能够逃脱疫苗效果的病原体突变株。减毒活疫苗具有恢复毒力的潜在风险。灭活病毒疫苗并不总是能引起保护效果。病原体的培养和传播对于生产减毒或灭活疫苗是不可或缺的，但这些过程通常伴随着许多困难，包括对高生物安全水平设施和大规模生产的要求。为了克服这些障碍，迫切需要新的疫苗方法或平台。 由编码病原体蛋白质的DNA或mRNA组成的新型疫苗预计将越来越多地用于应对新兴传染病，因为当新兴感染性疾病爆发时，可以通过在现有平台上替换编码病原体蛋白质的DNA或mRNA，快速生产基于DNA和mRNA的疫苗。基于DNA和mRNA的疫苗在给药后将编码病原体蛋白质的DNA或mRNA传递到细胞中，导致细胞内病原体蛋白质的生产和对这些蛋白质的相应免疫反应的诱导。由于DNA和mRNA是非常大且高度带负电的分子，因此需要药物递送系统（DDS）进行高效疫苗接种。在用于疫苗的各种DDS中，基于腺病毒（Ad）载体的疫苗具有高转导效率和高滴度生产等特性，使它们成为应对新兴传染病的潜在疫苗载体。在这篇综述中，我们描述了针对新兴传染病的基于Ad载体的疫苗。 2.腺病毒载体的基本特性  腺病毒（Ads）是不包膜病毒，包含一个35-36 kb的线性双链DNA基因组，位于一个直径为70-90 nm的二十面体病毒颗粒内（图1）。Ads从包括人类、小鼠、狗和非人灵长类在内的多种脊椎动物宿主中分离出来。已经鉴定出70多种人类Ads，并将它们分类为7个物种（A-G）。人类感染Ads会导致类似感冒的症状、咽喉痛、腹泻和呕吐。传统的Ad载体由C物种Ad血清型5（Ad5）组成。位于左侧反向末端重复序列（ITR）旁边的E1A基因对病毒复制至关重要，因为它是感染后转录的第一个病毒基因，并且E1A蛋白激活了病毒早期基因的转录。因此，删除E1A基因使Ad载体无法复制。除了E1A基因外，E3基因通常也从病毒基因组中删除，以扩大转基因插入的容量。E3基因对病毒复制是可有可无的。转基因表达盒插入到E1或E3删除区域。Ad载体可以在稳定表达Ad5 E1基因蛋白的HEK293细胞中扩增。 图1. 腺病毒载体疫苗的示意图。ITR，反向末端重复序列；pA，聚腺苷酸信号。 传统的Ad载体通过纤维结的结合识别柯萨奇病毒-腺病毒受体（CAR），这是一种免疫球蛋白超家族蛋白，介导同型细胞间的相互作用，形成紧密连接，作为感染受体（图2）。CAR在包括肝细胞、上皮细胞和心肌细胞在内的各种类型的细胞上表达。随后，五边形基座上的Arg-Gly-Asp（RGD）基序与avb3和avb5整合素之间发生相互作用，然后是网格蛋白介导的内吞作用。进入细胞后，内体酸化触发衣壳蛋白的构象变化，导致内体逃逸到细胞质中。在细胞质中，Ad病毒颗粒经历微管介导的逆行运输到核孔复合体。然后，Ad载体基因组被释放到核内部，导致转基因表达。 图2. 腺病毒载体疫苗的转导途径。CAR，柯萨奇病毒-腺病毒受体；NPC，核孔复合体。 除了CAR和av整合素外，已经证明肝素硫酸盐也是Ad载体的受体。凝血因子X（FX）特别与六角蛋白的高变区（HVRs）5和7结合，具有高亲和力。FX还结合到细胞表面的肝素硫酸盐上。FX作为Ad载体和肝素硫酸盐之间的桥梁。特别是当Ad载体通过血管内给药时，Ad六角蛋白、FX和肝素硫酸盐之间的相互作用在肝脏转导中起着至关重要的作用。肝脏是通过血管内给药后Ad载体转导的主要器官。超过90%的注射剂量在血管内给药后1小时内累积在肝脏中。 包括Ad血清型3、11、26和35在内的几种与Ad5不同的Ad血清型，识别CD46、桥粒蛋白和/或唾液酸作为感染受体。由于纤维结与这些感染受体结合，含有这些其他Ad血清型的纤维蛋白的Ad5载体和完全由其他Ad血清型组成的Ad载体通过与CD46、桥粒蛋白和/或唾液酸的相互作用介导转导。CD46、桥粒蛋白和唾液酸在各种类型的细胞上广泛表达。这些新型Ad载体是将基因传递到CAR阴性靶细胞的强大工具。 然而，这些感染受体与Ad载体诱导的疫苗接种之间的相互作用是否至关重要，仍有待完全理解。成熟的骨骼肌细胞是肌肉内疫苗接种后的主要靶细胞，它们的CAR表达较差。在骨骼肌中，CD46的表达水平已被证明低于其他组织。此外，感染受体的相互作用对于肌肉内给药后的Ad载体介导的疫苗接种来说并不是非常关键。当使用高剂量的Ad35载体肌肉内给药时，在仅在睾丸中表达小鼠CD46的野生型小鼠和广泛表达人类CD46的人CD46转基因小鼠之间，实现了相当的转基因表达和疫苗效果水平，这种表达模式与在人类中观察到的相似。如上所述，由于CAR主要位于形成紧密连接的基底外侧表面，因此在Ad载体通过鼻内或气管内给药后，CAR难以接触。CD46也是一种基底外侧蛋白。对Ad载体介导的疫苗接种中感染受体的参与进行进一步研究，可以为改进Ad载体疫苗提供重要线索。 3.Ad载体诱导的先天免疫  激活先天免疫对于激活适应性免疫至关重要。先天免疫诱导产生的炎症细胞因子和干扰素（IFNs）导致包括T细胞和B细胞在内的免疫细胞的激活，随后激活适应性免疫。传统疫苗通常含有能够通过刺激模式识别受体（PPRs）有效激活先天免疫的佐剂。Ad载体在没有佐剂的情况下适度激活先天免疫，因为Ad颗粒的成分被各种类型的PPRs识别，包括Toll样受体（TLRs）、视黄酸诱导基因-I（RIG-I）样受体和环状鸟苷腺苷合酶（cGAS），并起到佐剂的作用。另一方面，Ad载体并不会引起严重的先天免疫反应，如细胞因子风暴或转导细胞中的严重损害。Ad载体介导的先天免疫激活水平适当，可以在没有严重副作用的情况下激活对转基因产物的适应性免疫。以下PRR家族已被证明参与Ad载体诱导的先天免疫。 Toll样受体。TLRs是主要的PRR家族，由10个人类Toll样受体（TLR）成员和12个小鼠成员组成。每个TLR家族成员识别不同的配体。在TLR家族成员中，TLR9主要位于内体膜上，识别未甲基化的CpG基序含有DNA，在Ad载体颗粒被细胞内吞后，通过内体识别Ad载体基因组，导致激活NF-kB信号和干扰素调节因子（IRF）信号。TLR9主要表达在树突细胞（DCs）、NK细胞和巨噬细胞上。除TLR9外，TLR2和TLR4也被证明参与Ad载体诱导的先天免疫。TLR2主要表达在DCs、单核细胞和T细胞上，识别具有二酰基和三酰基甘油基团、蛋白质和多糖的分子。Ad载体介导的转基因产物特异性IgM、IgG2、IgG3和IgA在TLR2基因敲除（KO）小鼠中下调，尽管尚不清楚TLR2识别的Ad载体成分是什么。TLR4主要表达在DCs、单核细胞和T细胞上，识别各种损伤相关分子模式（DAMPs）。乳铁蛋白是TLR4的配体，与Ad载体的衣壳结合，通过TLR4激活先天免疫。在TLR4-KO小鼠中，转基因产物特异性IgG3水平低于野生型小鼠。除了TLR3外，所有TLR家族成员都需要MyD88，这是TLR信号转导的关键适配分子。在MyD88-KO小鼠中，转基因产物特异性抗体产生和细胞毒性T淋巴细胞（CTL）诱导在肌肉内接种Ad载体疫苗后减弱，表明TLR-MyD88信号在Ad载体介导的疫苗接种中非常重要。 cGAS。cGAS是一种位于细胞质中的PRR。Ad载体基因组在内体逃逸到细胞质后与并激活细胞质中的cGAS。cGAS在各种细胞中广泛表达。Ad载体基因组与cGAS的结合导致激活NF-kB信号和IRF信号。在cGAS-KO小鼠中，Ad载体诱导的炎症细胞因子产生和DCs上的活化标记表达水平大幅降低，但抗Ad抗体产生水平在野生型和cGAS-KO小鼠中相当。 RIG-I样受体。包括RIG-I和黑色素瘤分化相关基因-5（MDA5）在内的RIG-I样受体也位于细胞质中。RIG-I和MDA5在各种细胞中广泛表达，主要识别病原体来源的双链RNA，导致激活NF-KB和IRF信号。病毒相关RNA（VA-RNAs）被证明被RIG-I样受体识别。VA-RNAs是大约160-nt长的非编码RNA，不仅从野生型Ad基因组转录而来，也从复制缺陷型Ad载体基因组转录而来。在遗传缺乏线粒体抗病毒信号（MAVS）（也称为干扰素-b启动子刺激因子1（IPS-1））的小鼠原代细胞中，Ad载体介导的先天免疫激活显著低于野生型细胞。在MAVS-KO小鼠中，粘膜腔室的CTL诱导在Ad载体疫苗接种后减弱，尽管在用显示抗原表位的改良Ad载体免疫后，野生型和MAVS-KO小鼠之间的转基因产物特异性抗体产生水平相当。这些结果表明，RIG-I样受体途径对于Ad载体疫苗介导的粘膜腔室CTL诱导至关重要。 除了上述PRRs外，其他PRRs，包括黑色素瘤缺失2（AIM2）和NALP3，也被报道参与Ad载体诱导的先天免疫。如上所述，PRRs在Ad载体介导的疫苗效果中的参与非常复杂，并且高度依赖于给药途径、抗原类型、注射剂量和Ad载体类型（上述大多数研究是使用Ad5载体进行的）。需要进一步检查以充分理解PRRs在Ad载体介导的疫苗接种中的参与。 4.对Ad载体产生的转基因产物的免疫反应  Ad载体能够诱导针对转基因产物的特异性免疫反应，即不仅产生抗体，还产生细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）。Ad载体表达的转基因产物被识别为非自身物质，并被免疫系统清除。在Ad载体给药后，转基因在非免疫细胞（例如，肌细胞、成纤维细胞）和/或免疫细胞（例如，树突细胞、巨噬细胞）中表达。当Ad载体疫苗在非免疫细胞中介导转基因表达时，转基因产物从细胞释放，随后被抗原呈递细胞（APCs）摄取，主要产生针对转基因产物的特异性抗体。Ad载体疫苗在给药后能够诱导产生各种亚型和亚类的转基因产物特异性抗体。此外，肌肉内给药的Ad载体疫苗不仅能够诱导系统性体液免疫，还能够在一定程度上诱导粘膜体液免疫，尽管已经证明粘膜给药的Ad载体疫苗比肌肉内给药更有效地诱导粘膜免疫。 当转基因在免疫细胞中表达时，抗原呈递发生在免疫细胞中，主要导致CTLs的产生。在静脉、肌肉内和鼻内给药后，发现单核细胞/巨噬细胞以及几种树突细胞亚群，如CD8a+树突细胞、langerin+皮肤树突细胞（dDCs）、浆细胞样树突细胞（pDCs）和炎症性树突细胞（inf DCs）中存在转基因表达。CTLs的诱导对于消除病原体感染的细胞至关重要。此外，肌肉内给药的Ad载体疫苗诱导了显示多功能性表型的CD8+ T细胞。Ad载体疫苗还介导抗原交叉呈递，即外源性抗原在APCs上的MHC I类分子上呈递，导致CTLs的产生。Quinn等人证明，在基础亮氨酸拉链ATF样转录因子3（BATF3）-KO小鼠中，Ad载体介导的系统性CTLs的诱导减弱。BATF3-KO小鼠缺乏CD8a+树突细胞和langerin+皮肤树突细胞（dDCs），这些细胞对于向CD8+ T细胞交叉呈递抗原至关重要。这些数据表明，转基因产物的交叉呈递对于Ad载体介导的系统性CTLs的诱导至关重要。 Ad载体疫苗不仅在系统性腔室中诱导强烈的CTL反应，也在粘膜腔室中诱导。这是Ad载体疫苗的一个吸引人的优势，因为病原体通常从粘膜腔室感染和侵入。Hemmi等人提出了以下机制来解释肌肉内给药后Ad载体疫苗介导的粘膜CTLs的诱导。首先，炎症性单核细胞在肌肉内给药Ad载体后被招募到肌肉中。然后，这些单核细胞摄取转基因产物，导致分化为inf DCs。inf DCs迁移到引流淋巴结（dLNs），随后诱导T辅助17（Th17）细胞。Th17细胞迁移到肠道粘膜，导致粘膜腔室中抗原特异性CTLs的增殖。此外，作为SARS-CoV-2疫苗平台的黑猩猩Ad基载体ChAdOx1，已被证明通过以下机制有效地激活粘膜相关恒定T（MAIT）细胞，这些是粘膜腔室中的先天淋巴细胞，在粘膜免疫中发挥重要作用。首先，ChAdOx1感染pDCs，导致pDCs中产生IFN-a。然后，pDCs产生的IFN-a激活单核细胞。最后，激活的单核细胞产生白细胞介素（IL）-18和肿瘤坏死因子（TNF）-a，导致MAIT细胞的激活和抗原特异性CTLs的诱导。然而，同一研究发现传统的Ad5载体未能感染pDCs。用Ad5载体处理的外周血单核细胞（PBMCs）产生的TNF-a低于ChAdOx1。 5.中和性抗Ad5抗体是传统Ad载体疫苗的最大障碍  由于自然感染Ad5，许多研究报告了成人中对Ad5的高血清流行率。实际上，超过80%的成人拥有抗Ad5抗体。中和性抗Ad5抗体显著抑制Ad载体的转导，通过抑制Ad载体与感染受体的结合以及促进Ad载体的蛋白酶体降解，导致疫苗效果水平低，即使Ad载体是局部（例如，肌肉内）给药。中和性抗Ad5抗体主要识别六角蛋白和纤维蛋白，尽管也检测到针对五边形基座的中和性抗Ad5抗体。为了规避中和性抗Ad5抗体介导的抑制，已经开发了由成人中血清流行率低的罕见Ad血清型组成的Ad载体，包括Ad血清型11、26、35和48，以及包含来自罕见Ad血清型的六角蛋白高变区（HVRs）的六角蛋白嵌合Ad载体。六角蛋白HVRs包含中和性抗Ad5抗体的表位。还开发了基于非人Ad的Ad载体，包括黑猩猩、大猩猩和犬Ad。尽管非人Ad载体通常存在实现高滴度生产的难题，但通过在几种非人Ad载体中用Ad5 E4基因替换E4基因，已经在HEK293细胞中实现了Ad载体的高滴度生产。这些新型Ad载体不仅可以规避由Ad5载体给药产生的中和性抗Ad5抗体，而且不太可能被初次疫苗接种时预先存在的中和性抗体所抑制。 为了规避中和性抗Ad5抗体介导的抑制，还报道了其他方法。涂覆聚乙二醇（PEG）的Ad载体可以通过阻断抗Ad5抗体与病毒颗粒的结合来逃避中和性抗Ad5抗体介导的抑制。还证明了脂质体包裹的Ad载体能够逃避中和性抗Ad5抗体。阳离子和阴离子脂质体都已用于包裹Ad载体。特别是，由于Ad载体具有负表面电荷，它们可以通过简单地将Ad载体和阳离子脂质体混合在一起，轻易地被阳离子脂质体包裹。此外，最近，报道了含有Ad颗粒的细胞外囊泡，如外泌体，尽管目前尚不清楚含有Ad载体的细胞外囊泡是否可以规避中和性抗Ad5抗体。PEG修饰和囊泡包裹的Ad载体都有可以重复给药的优势。 6.Ad载体疫苗的临床应用  人类免疫缺陷病毒（HIV）疫苗。由于迄今为止尚未开发出有效的HIV疫苗，因此一直在积极追求HIV的Ad载体疫苗。表达HIV-1 gag/pol/nef（每种HIV-1抗原的Ad载体1:1:1混合物）的Ad5载体疫苗在一项双盲、随机、安慰剂对照的临床试验中进行了测试。尽管这些Ad载体疫苗诱导了HIV-1特异性的CD8+和CD4+细胞反应，但发现疫苗组的HIV-1感染发病率高于对照组。此外，HIV获取的风险因素将包括接种组中预先存在的对Ad5的免疫。为了规避这种预先存在的抗Ad5免疫，基于Ad血清型26和黑猩猩Ad的HIV-1的Ad载体疫苗已在临床试验中进行了测试。 寨卡病毒疫苗。自2015年巴西爆发寨卡病毒以来，寨卡病毒疫苗的研发一直在积极进行中。为了针对寨卡病毒感染进行疫苗接种，将编码膜蛋白和包膜蛋白的基因纳入了Ad载体基因组。基于Ad血清型26的载体疫苗在临床试验中无严重副作用地引发了高水平的抗寨卡病毒中和抗体。 流感病毒疫苗。尽管传统的流感病毒疫苗（包括减毒活病毒疫苗、灭活病毒疫苗和分裂病毒疫苗）广泛可用，但这些疫苗的免疫效率相对较低。此外，传统流感病毒疫苗具有株特异性，覆盖范围非常有限。由于全球关注包括禽流感病毒在内的新兴流感病毒可能引发大流行，因此正在开发一种新的流感病毒疫苗平台。一个表达血凝素（HA）的复制缺陷型Ad5载体和表达核蛋白（NP）和基质蛋白-1（M1）的黑猩猩Ad基载体（ChAdOx1）已在临床试验中进行了测试。此外，一个在E3区域含有HA蛋白表达盒的复制型Ad血清型4（Ad4）显示出延长的系统性和粘膜免疫。复制型Ad4已作为针对Ad4呼吸道疾病的疫苗口服给药给超过1000万人，并显示出没有严重副作用。不仅复制缺陷型而且复制型Ad将是一个有前景的Ad载体疫苗平台。 埃博拉病毒疫苗。埃博拉病毒病会引起严重症状，包括高烧、头痛和腹泻，并且死亡率很高。埃博拉病毒于1976年首次被发现，自发现以来，在非洲发生了几次埃博拉病毒感染的爆发。由于很少有抗埃博拉病毒药物获得批准（一个例外是Inmazeb，由三种单克隆抗体混合而成，于2020年被食品和药物管理局（FDA）批准为抗埃博拉病毒药物），因此一直在努力开发针对埃博拉病毒的疫苗。一个表达埃博拉病毒糖蛋白的Ad血清型26（Ad26）基载体（Ad26.ZEBOV）已在欧盟获得批准。相应的方案包括Ad26.ZEBOV作为初免疫苗，以及编码来自埃博拉、苏丹、马尔堡和Tai Forest病毒的核蛋白的牛痘病毒（MVA-BN-Filo）作为加强疫苗。此外，表达埃博拉病毒糖蛋白的黑猩猩Ad型3载体疫苗和Ad5载体疫苗也被证明能有效地诱导抗埃博拉病毒免疫。 SARS-CoV-2疫苗。COVID-19是自1918年（西班牙流感）以来最严重的全球大流行病。自2019年12月确定SARS-CoV-2以来，针对SARS-CoV-2的疫苗开发进展迅速。已有四种Ad载体疫苗获得批准（表1）：ChAdOx1 nCoV-19（VAXZEVRIA，AZD1222）（阿斯利康/英国牛津大学），卫星V（俄罗斯加马列亚研究所），Ad26.COV2-S（强生公司，欧洲）和Ad5-nCOV（中国康希诺生物股份公司）。ChAdOX1 nCoV-19、卫星V和Ad5-nCOV表达SARS-CoV-2的全长刺突蛋白，而Ad26.COV2-S表达一种前融合稳定的刺突蛋白。ChAdOX1 nCoV-19和Ad26.COV2-S分别由黑猩猩Ad型Y25和人类Ad血清型26组成，以逃避抗Ad5抗体介导的抑制。卫星V使用Ad26载体疫苗作为增强剂，Ad5载体疫苗作为初免。Ad5-nCOV基于Ad血清型5。这些Ad载体疫苗在肌肉内给药后有效地诱发了免疫反应，包括诱导抗刺突蛋白抗体和CD8+ T细胞反应，对SARS-CoV-2。临床试验研究报告称，AZD1222和卫星V在随机对照临床试验中具有高疫苗效力（AZD1222，70.4%；卫星V，91.6%）。Ad26.COV2-S也显示出有效的疫苗效力（66.1%）。在Ad5-nCOV的随机对照临床试验中报告了超过90%的血清转化率。然而，ChAdOx1 nCoV-19和Ad26.COV2-S被报告有潜在风险，可能诱发血栓性血小板减少症和播散性血管内凝血，特别是在年轻成人中，尽管这些并发症的发病率非常低。目前，正在积极进行进一步检查以规避这些副作用反应。 7.结论  人类历史上的大部分时间都在与传染病作斗争。即使现在，人们仍然担心新出现的和重新出现的传染病以及生物恐怖主义，因此开发新的疫苗平台至关重要。已有几种COVID-19的Ad载体疫苗获得批准并在全球范围内使用。Ad载体疫苗的全球使用揭示了Ad载体作为新出现和重新出现的传染病疫苗平台的巨大潜力。此外，重组Ad已作为基因传递载体和溶瘤病毒在临床研究中得到广泛应用。使用Ad载体的基因治疗和溶瘤Ad的病毒治疗的临床研究中获得的数据将为改进Ad载体疫苗提供重要信息。 为了推动人用及兽用疫苗行业交流，共同探讨该领域的最新研发进展、产业化现状及未来发展趋势，生物制品圈联合四叶草会展将于2024年8月16日-17日在苏州共同举办“第三届新型疫苗研发峰会”。诚邀全国相关领域专家、学者和企业家共享学术盛会。现将有关事宜通知如下。 名称：2024第三届新型疫苗研发峰会 时间：2024年8月16-17日（周五-周六） 地点：苏州（酒店定向通知） 主办单位：四叶草会展、生物制品圈 媒体支持：药时空、抗体圈、细胞基因研究圈 会议费用：点击二维码即可查询。 报名方式：扫描下方二维码→ 填写表格 → 报名成功（报名志愿者，免交报名费，承担一定工作任务）！ 转发分享福利：疫苗研发企业、科研院校和监管机构人员，前30位报名人员转发分享会议信息可免费参会（不含餐饮）报名后，扫描下方二维码加工作人员微信后，发送截图即可。 组委会获得报名信息后，根据报名信息进行初筛，并进一步与报名者沟通确认，实现精准邀请，最终有机会进入大会微信群（严格审核通过）。 大会日程 已经确定的报告人 识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入 生物制品微信群！ 请注明：姓名+研究方向！ 版 权 声 明 本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。

摘要：大多数疫苗都是通过肌肉接种。皮肤含有大量的抗原提呈细胞，被认为是疫苗接种更具免疫原性的部位。皮内接种已被批准用于提高流感疫苗的效力和节省流感疫苗剂量。为了应对最近暴发的猴痘疫情，皮内接种也被批准通过延长有限的猴痘疫苗剂量，以免疫更多有风险的人。疫苗佐剂的加入有望进一步提高皮内接种效力，节省更多疫苗剂量。然而，与肌肉接种相比，皮内接种与更显著的局部反应有关。因此，适合于皮内接种的佐剂应具有良好的局部安全性，而不会引起明显的局部反应。本文介绍了目前已批准用于人类疫苗中的佐剂及其皮内给药的相对反应原性、具有良好局部安全性可用于皮内接种的新型化学和物理佐剂，同时对开发物理佐剂的合理性、物理佐剂的类型以及物理佐剂用于皮内接种的独特优势也进行了介绍。1.皮肤结构皮肤覆盖全身，具有重要的生理功能，如防止热量和水分流失，防止环境病原体感染。皮肤可分为3层：角质层(SC)、表皮层和真皮层。SC层位于皮肤的最外层，由角质细胞组成，是终末分化的角质细胞，并且具有高度的亲脂性。SC层承担皮肤的主要屏障作用。表皮位于SC层之下，主要由角质细胞（90%）组成，中间散布着朗格汉斯细胞（LC，3-5%），作为免疫哨兵）。表皮层还含有黑色素细胞，可根据其密度和黑色素含量赋予皮肤特殊的颜色。表皮层下面是真皮层，它比SC层和表皮层包含更多的解剖结构。真皮层中含有汗腺和毛囊，以及血液和淋巴管网和神经纤维。真皮层还包含多种类型的细胞，包括成纤维细胞和先天性免疫细胞，如树突状细胞（DC）、巨噬细胞、肥大细胞和嗜酸性粒细胞。有趣的是，皮肤还含有大量的T淋巴细胞，其中大部分是表皮和真皮层中皮肤驻留记忆T细胞。皮肤先天性免疫细胞是抵御病原体感染的第一道防线，也有助于诱导病原体或疫苗特异的适应性免疫应答。图1显示了带有常驻天然免疫细胞的简化皮肤模型。图1.皮肤结构和固有免疫细胞的图解：皮肤包含3个主要层：角质层、表皮和真皮。表皮含有朗格汉斯细胞，真皮含有树突状细胞、巨噬细胞、肥大细胞和嗜酸性粒细胞为主的天然免疫细胞。2.皮内疫苗接种及其好处由于肌肉注射的便利性，仅需要简单培训即能操作，因此大多数疫苗都是通过肌肉接种进行免疫。过去20-30年的大量研究发现，将疫苗接种途径从肌肉途径改为皮内途径可以诱导更有效的免疫反应。免疫原性更强的皮内接种在很大程度上可以归因于皮肤而不是肌肉中存在丰富的抗原提呈细胞，如表皮LC和真皮DC。抗原提呈细胞(主要是真皮DC)负责真皮内疫苗抗原在主要组织相容性复合体(MHC)I或II分子上的摄取和递呈，然后迁移到引流淋巴结，引发抗原特异性T和B细胞应答。皮内接种疫苗还可以激活局部先天性免疫细胞来分泌细胞因子和趋化因子，并招募循环中的先天免疫细胞，从而促进疫苗引起的局部反应。皮内接种有望能提高疫苗功效并节省疫苗剂量。最近的一项综述研究发现，在老年人中，皮内递送流感疫苗通常比肌内或皮下注射更具免疫原性。另外，在年轻人中，皮内接种低剂量流感疫苗（6或9µg）与肌肉注射全剂量疫苗（15µg）引起的免疫反应相当。除了流感疫苗外，皮内接种也能有效增强其他疫苗诱导的免疫反应，例如狂犬病疫苗和乙型肝炎疫苗。由于近期猴痘疫情暴发以及猴痘疫苗短缺，美国食品和药物管理局(FDA)授权皮内接种猴痘疫苗，以扩大疫苗剂量，让更多高危人群获得免疫接种。3.皮内接种的局限性皮内接种虽然提高了疫苗的免疫原性，但提高的程度相对较弱。皮内接种只能节省40-60%的流感疫苗剂量。在老年人中，皮内接种仅能将H1N1株的血清转换率从40%提高到52.3%，将H3N2株的血清转换率从49.1%提高到61.3%，将B型株的血清转换率从56.4%提高到61.3%。另一项研究也发现了类似的结果，即通过皮内接种流感疫苗，老年人的血清转换率仅略有增加。疫苗佐剂的加入有望进一步提高疫苗效力并节省更多的疫苗剂量。然而，添加佐剂的皮内疫苗面临着诱发严重局部反应的风险。研究一致发现，与肌肉接种疫苗相比，不含佐剂的皮内接种疫苗会诱发更频繁、更严重的局部不良反应。皮肤中存在的各种类型的先天性免疫细胞（如LCs、DCs、巨噬细胞）可以解释这种情况。这些细胞有助于增加抗原摄取和更有效的适应性免疫，同时通过合成和释放细胞因子和趋化因子以及招募外周中性粒细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞而引起局部不良反应。因此，用于皮内接种的佐剂需要比用于肌肉注射的佐剂具有更好的局部安全性。本综述侧重于介绍用于预防传染病疫苗的皮内接种佐剂，尽管这种途径对其他疾病（例如过敏和恶性肿瘤）的疫苗接种也很有吸引力。本综述还重点介绍佐剂如何增强皮内蛋白和亚单位疫苗诱导的免疫反应。此外，具有佐剂效应的疫苗/佐剂制剂（如聚合物纳米颗粒、脂质体）（至少有一部分是由二者联合引起的），不包括在本综述中。4.已获批准的佐剂及其皮内反应原性疫苗佐剂在开发新型疫苗和改良疫苗方面发挥着关键作用，因此在21世纪受到越来越多的关注。美国国家过敏与传染病研究所（NIAID）于2008年启动了"佐剂开发计划"，以支持新型佐剂的筛选、鉴定和临床前/临床开发。随着对这一领域的兴趣和投资不断增加，在过去二十年中，有五种佐剂被批准用于人类，而在过去八十年中，只有两种佐剂被批准用于人类（表1）。有趣的是，所有这些佐剂都被批准用于肌肉接种。如果没有皮内反应原性数据，则根据其肌肉注射后的局部不良反应来预测其皮内给药后诱发局部不良反应的可能。局部不良反应可能是皮肤红斑、肿胀、变色或组织学变化，如组织坏死或细胞死亡，或局部炎症反应，或细胞因子和趋化因子释放及免疫细胞浸润等。表1.目前批准的佐剂及其皮内反应原性l明矾佐剂明矾佐剂是一种铝盐类佐剂。临床上明矾佐剂主要以氢氧化铝为基础，由于纤维状纳米颗粒（图2A）或磷酸铝形成板状纳米颗粒的聚集而形成广泛的微米结构（0.5-10微米）。明矾佐剂是全球使用最广泛的佐剂，它已被用于多种儿童疫苗，如百白破（破伤风、白喉和百日咳）、乙型肝炎、乙型流感嗜血杆菌疫苗，明矾佐剂主要增强Th2细胞的抗体反应，但诱导细胞介导免疫反应的能力较弱。将明矾佐剂注射到肌肉组织中会引起明显的组织应激和细胞死亡。腹膜内注射明矾佐剂后也能观察到类似的现象。肌内注射明矾佐剂会诱导细胞因子/趋化因子的大量释放并快速募集中性粒细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞。研究发现，在小鼠皮肤中皮内注射Imject（一种实验性明矾佐剂）可诱导高密度炎症细胞浸润，并持续至少四天。由于明矾佐剂会诱发严重的组织应激和炎症，因此在皮内注射后很有可能诱发严重的局部反应。lAS04佐剂AS04佐剂是通过将MPL（3-O-去酰基-4'-单磷酰脂质A）吸附在氢氧化铝佐剂上制备的组合佐剂（图2B）。MPL是一种Toll样受体(TLR)4激动剂。MPL/TLR4结合激活骨髓分化初级反应88(MyD88)和下游信号通路，导致核因子-κB(NFκB)和激活蛋白(AP)-1激活以及促炎细胞因子基因表达。AS04被批准用于增强人乳头瘤病毒疫苗的效力。研究发现，与明矾佐剂疫苗相比，AS04佐剂疫苗可在局部注射部位诱导更高水平的细胞因子和趋化因子，并在引流淋巴结中募集更多数量的单核细胞和DC。研究发现，与不含佐剂的疫苗相比，含有AS04佐剂的疫苗会引起更频繁的局部反应，例如疼痛、发红和肿胀。局部不良反应可在几天内消失。研究发现AS04佐剂可诱导更平衡的辅助性T细胞1(Th1)/Th2免疫反应。我们之前的研究发现。皮内注射MPL/明矾佐剂会引起皮肤真皮组织红斑和肿胀，并伴有大量炎症细胞浸润。这些数据表明AS04佐剂在皮内递送后诱发严重局部反应的风险很高。lAS01佐剂AS01是一种含有MPL和QS21的脂质体制剂，QS21是从肥皂树（Quillajasaponaria）中纯化的皂苷成分（图2C）。AS01佐剂已被批准用于提高疟疾RTS,S疫苗的功效。研究发现AS01佐剂可诱导Th1为主的免疫反应，而对Th2反应的诱导较弱。研究发现肌肉注射AS01佐剂被快速清除，3h时AS01水平显著降低，24h后几乎检测不到AS01水平。AS01诱导细胞因子的短暂表达，该表达在24h内达到峰值，然后迅速消退。AS01还诱导中性粒细胞和单核细胞迅速聚集到注射佐剂的肌肉中。考虑到AS01含有MPL，预计局部细胞因子和趋化因子的刺激至少部分是由TLR4和下游MyD88信号通路的刺激引起的。研究发现MPL和QS21能协同激活驻留淋巴结的自然杀伤细胞(NK)和CD8+T细胞并促进早期干扰素(IFN)γ产生，该细胞通过白细胞介素(IL)-18分泌通过荚膜下的巨噬细胞控制白细胞介素(IL)-18分泌，并得到IL-12支持。MPL和QS21的协同作用以及对局部炎症的强烈诱导表明，AS01佐剂在皮内给药后诱发显著局部反应的风险很高。这种作用由巨噬细胞通过白细胞介素（IL）-18的分泌来控制，并得到IL-12的支持。MPL和QS21的协同作用以及对局部炎症的强烈诱导表明，AS01佐剂在皮内给药后诱发显著局部反应的风险很高。lMF59和AS03佐剂MF59和AS03是基于角鲨烯水包油型纳米乳液佐剂。角鲨烯是一种天然三萜油，作为动物和人类胆固醇合成过程中的一种生化中间体。角鲨烯的可生物降解性使其成为佐剂配方中的安全成分。MF59和AS03分别由Novartis和GlaxoSmithKline（GSK）开发，化学成分略有不同（图2D）。MF59的主要油相成分是角鲨烯，而AS03的油相中含有角鲨烯和α-生育酚（维生素E）。α-生育酚还具有可生物降解性和免疫调节功能。关于表面活性剂，MF59含有两种表面活性剂（Tween80和Span85），而AS03仅含有聚山梨醇酯80（Tween80）。MF59最初被批准用于提高欧洲老年人接种季节性流感疫苗功效。MF59最近在美国被批准用于增强老年人季节性流感疫苗（FluadQuadrivalent）的效力以及大流行前H5N1疫苗（Audenz）的效力。AS03最初被批准用于增强欧洲2009年甲型H1N1流感大流行期间的2009年甲型H1N1大流行流感疫苗(Pandemrix)效力，后来被批准用于增强美国大流行前H5N1疫苗的效力。研究发现MF59和AS03佐剂可诱导偏向Th2的免疫反应，而对Th1反应的诱导较弱。肌内注射MF59佐剂会诱导组织应激和细胞死亡。此外，MF59的清除不依赖于抗原，在肌肉中的清除半衰期为42h。研究发现，尽管时间招募模式相同，但发现肌内注射MF59比肌内注射明矾更能有力地募集中性粒细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞。与肌内注射后的明矾佐剂相比，肌肉注射MF59佐剂可诱导多种细胞因子和趋化因子释放模式。皮内注射MF59样AddaVax佐剂可强烈诱导中性粒细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞，注射后4d，中性粒细胞和单核细胞水平显著升高。皮内注射AddaVax佐剂还可诱导各种细胞因子和趋化因子的延长表达至少4d。这些数据表明MF59佐剂在皮内递送后诱发严重局部反应的风险很高。研究发现，肌内注射AS03佐剂可持续诱导至少7d的细胞因子表达（例如C-C基序趋化因子配体2(CCL2)、IL-1β）。AS03比明矾佐剂诱导更强的细胞因子表达。AS03佐剂中的α-生育酚可通过激活巨噬细胞和单核细胞显著增加细胞因子的表达,AS03佐剂可诱导脂质代谢快速且短暂的下调，导致细胞内脂质水平升高，诱导内质网(ER)应激并激活未折叠蛋白反应途径。此外，消耗髓系细胞中ER应激激酶传感器肌醇需要的跨膜激酶内切核糖核酸酶-1α(IRE1α)会减少AS03佐剂诱导的细胞因子表达和高亲和力抗体的诱导。局部炎性细胞因子和趋化因子以及ER应激的强烈诱导表明AS03佐剂也可能在皮内递送后诱导显著的局部反应。lMatrix-M佐剂Matrix-M佐剂由两种独特的40nm颗粒配方制成，来自皂苷提取物的两种组分（组分A和C）（图2E），并已被纳入最近批准的基于蛋白质的Novavax新冠疫苗（NVX-CoV2373），用于新型冠状病毒肺炎大流行期间的紧急使用。每种纳米颗粒制剂均由皂苷A或C部分以及胆固醇和磷脂制成。Matrix-M佐剂被发现可诱导偏向Th1的免疫反应。研究发现，含有Matrix-M佐剂的新冠疫苗与无效对照剂相比更容易引起局部反应（第一剂：57.6% vs 17.9%；第二剂：79.6% vs 16.4%）。大多数局部不良反应为轻度或中度，并在3天内消失。Matrix-M佐剂可刺激猪单核细胞和淋巴细胞表达IL-1β和C-X-C基序趋化因子配体8(CXCL8)，但不表达肿瘤坏死因子α(TNFα)或IL-6。猪体内肌肉注射Matrix-M佐剂可诱发以中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞浸润为特征的急性炎症。局部不良反应还包括大多数猪的出血和部分猪的坏死。Matrix-M佐剂组比生理盐水对照组出现发红的频率更高。与对照相比，Matrix-M佐剂显着增加了384个基因表达并降低了162个基因表达。al,2012).在上调最多的基因中，23个中有10个与干扰素调节基因(IRGs)有关。尽管迄今为止还没有研究探索Matrix-M在促进皮内疫苗接种方面的有效性和安全性，但一项研究发现在猪模型中皮内给药脂质体中的QS-2（另一种基于皂素的佐剂）会剂量依赖性地诱发局部不良反应，如红斑、肿块和结痂。人类受试者肌肉注射免疫后出现较频繁的局部不良反应，至少一些猪出现强烈的局部炎症反应、出血和坏死，以及与之密切相关的QS-21佐剂皮内递送后诱发局部不良反应的剂量依赖性，都表明Matrix-M佐剂皮内递送后诱发严重局部反应的风险很高。lCpG 1018CpG 1018是一个未甲基化的含CpG基序的寡核苷酸。CpG 1018可激活TLR9和MyD88信号通路，从而激活各种转录因子，如NFκB、AP-1和干扰素调节因子（IRF），并控制细胞因子的表达，如TNFα、IL-1β、I型干扰素和IL-12。CpG1018刺激偏向Th1的抗体反应和细胞介导的免疫反应。CpG 1018已被纳入最近批准的乙肝疫苗。添加CpG 1018佐剂的乙肝疫苗被发现比添加明胶佐剂的乙肝疫苗诱导更有效的免疫反应。与物种特异性CpG寡核苷酸不同，CpG 1018在啮齿动物、非人类灵长类动物和人类中具有广泛的响应，从而在临床前和临床研究中不需要改变CpG序列。研究发现皮内注射小鼠特异性CpG只会诱发轻微的局部反应和低水平的免疫细胞招募。CpG 1018预计具有较低的皮内反应原性，有望安全地促进皮内疫苗接种。 图2.目前批准的颗粒状佐剂:A.氢氧化铝佐剂。B.AS04佐剂是由MPL吸附在氢氧化铝助剂上制备的。C.用脂质体包裹MPL和QS21制备AS01佐剂。D.角鲨烯纳米乳剂MF59和AS03佐剂。E.由两种皂素提取物(组分A和C)制成的两种纳米颗粒制剂组成的Matrix-M佐剂总之，大多数已批准的佐剂在皮内给药后诱发严重局部反应的风险很高。有趣的是，预测皮内反应原性较高的化学佐剂本质上都是自然界中微粒（表1），它们会强烈激活局部先天性免疫系统并诱发明显的局部反应。CpG1018可能是个例外，因为它能诱导轻微炎症，而不会引起明显的局部反应（图3A）。图3.皮内接种安全佐剂的化学结构A.CpG 1018。DNA骨架进行硫代修饰以提高佐剂的稳定性。B.具有六个14碳侧链的合成GLA。C.咪喹莫特。D.Poly(I：C)。E.cGAMP。F.PCPP聚合物。5.用于安全皮内接种的其他化学佐剂由于担心已获批准的佐剂具有较高的局部反应原性，人们还探索了其他化学佐剂的安全性和有效性，以促进皮内疫苗接种。其中几种佐剂已进入临床试验阶段。由于疫苗佐剂在皮内给药后有可能诱发明显的局部反应，因此本综述不包括未报告局部安全性数据的佐剂。lGLA-AF佐剂几种已获批准的佐剂，如AS01和AS04，都含有MPL作为提升疫苗接种效果的主要成分。虽然MPL还没有被批准作为一种独立的佐剂，但我们在小鼠模型中发现MPL皮内注射引起了轻微的炎症，没有明显的局部不良反应。Carter等人评价了一种合成的TLR4激动剂(GLA-AF)(图3B)以促进雪貂和人类皮内接种H5N1疫苗，并发现GLA-AF对于皮内接种H5N1疫苗在雪貂中诱导单针保护和在人类中诱导血清保护至关重要。此外，在人类临床研究中，加入GAL-AF的H5N1疫苗没有在豚鼠体内引起体温上升或体重下降，并没有引起一过性红斑和其他明显的不良反应。这项研究表明GLA-AF和其他可能的TLR4激动剂用于皮内接种的有效性和安全性。l外用咪喹莫特佐剂FDA批准外用咪喹莫特乳膏(5%阿尔达拉)用于治疗各种疾病，如光化性角化病、浅表性基底细胞癌和外生殖器疣。咪喹莫特是一种TLR7激动剂(图3C)并激活TLR7-MyD88信号通路，导致NFκB和IRF7的激活以及促炎细胞因子和I型干扰素基因的表达。有趣的是，外用咪喹莫特乳膏的载体也可能有助于观察到的疗效，因为在没有咪喹莫特的情况下，诱导激活炎症小体、角质细胞死亡和IL-1释放。在一项双盲、随机对照的临床试验中，在皮内接种流感疫苗前局部应用咪喹莫特乳膏可以获得更高的疫苗病毒株血清转换率和更好的非疫苗病毒株血清转换率。最常见的局部不良反应是1级红肿，尽管与其他组没有统计学差异，但局部应用咪喹莫特组红肿发生率更高。在炎症性肠病(IBD)患者中，外用咪喹莫特乳膏后皮下注射乙型肝炎疫苗的血清保护率明显高于外用水乳膏后肌肉注射疫苗的血清保护率。虽然局部咪喹莫特组引起更频繁的瘙痒和肿胀，但各组之间的局部不良反应无明显差异。这些结果表明，外用咪喹莫特乳膏可显著提高皮内疫苗的疗效，且总体上具有良好的局部安全性。lPoly(I:C)佐剂聚肌胞苷酸(Poly(I:C))是双链RNA(dsRNA，图3D)的合成类似物，可根据位置激活两种不同的信号通路。内质多聚体(I:C)激活TLR3并诱导IL-12和I型IFN产生，而胞质多聚体(I:C)可激活视黄酸诱导基因I(RIG-I)和黑色素瘤分化相关蛋白5(MDA-5）并增强I型干扰素的产生。Poly(I:C)还用于皮内或透皮疫苗接种，以诱导针对各种类型传染病的有效免疫反应。Weldon等人发现，当在小鼠模型中将Poly(I:C)佐剂亚单位流感疫苗涂覆在微针表面时，可引发与单独的亚单位疫苗类似的免疫反应和保护佐剂效果不明显，可能与该研究中使用的Poly(I:C)剂量相对较低有关（1µg）。在另一项研究中，Bardel等人发现25µg Poly(I:C)可以显著增强皮内HIV-1gp140或HSV-2gD糖蛋白诱导的全身和粘膜抗体反应以及在HSV-2攻击研究中对小鼠模型的保护作用，而不会明显增强小鼠模型中对皮肤反应原性的保护作用。这项研究表明，皮内接种添加Poly(I:C)佐剂的HIV-1gp140或HSV-2gD糖蛋白疫苗具有良好的安全性和效力，可诱导有效的粘膜免疫。Du等人发现，将白喉毒素（DT）和Poly(I:C)封装到脂质体中，然后以空心微针为基础进行皮内给药，与单独以空心微针为基础进行皮内单独接种DT相比，可显著增强DT特异性IgG2a抗体反应。有趣的是，该研究中使用了相对较低的poly(I:C)剂量（0.31µg），但并未观察到总IgG或IgG1抗体反应的显著增强。最近，在一项1期临床研究中测试了用聚-L-赖氨酸稳定的poly(I:C)与光化学内化（PCI）相结合增强人乳头瘤病毒多肽疫苗接种的效果，光化学内化是一种通过光诱导过程促进内吞抗原的胞体释放，从而促进诱导细胞介导的免疫反应的技术。尽管没有研究基于poly(I:C)佐剂在增强人乳头瘤病毒多肽疫苗接种方面的效力，但研究发现，当光敏剂剂量低于一定阈值时，整体对研究对象是安全的。上述研究表明，poly(I:C)佐剂用于加强皮内接种具有良好的安全性。lcGAMP佐剂2′3′-环GMP-AMP（cGAMP，图3E）是细胞内干扰素基因刺激物（STING）通路的刺激物，可导致NFκB和IRF3激活以及促炎细胞因子和I型IFN基因表达。cGAMP及其类似物，如cdAMP和cdGMP，已被探究为诱导Th1免疫应答对抗传染性疾病和癌症的有效佐剂。研究发现，在小鼠和猪模型中，皮内注射cGAMP与H5N1流感疫苗或2009年大流行H1N1疫苗可显著增强疫苗诱导的免疫反应，而不会引起明显的局部不良反应。此外，在小鼠模型中，cGAMP被发现是一种比CpG或MPL更有效的佐剂，可增强皮内对H5N1免疫。最近，Hernandez-Franco等人探索了cdAMP和一种以植物为基础的阳离子α-D-葡聚糖纳米粒(Nano-11)增强小鼠和猪皮内OVA免疫的安全性和有效性，发现cdAMP佐剂的皮内OVA免疫在注射后24小时诱发一过性变色，14天后消失，而Nano-11佐剂的皮内OVA免疫则不会诱发明显的不良反应。这些研究支持STING激动剂作为安全的佐剂来促进皮内疫苗接种。lPCPP佐剂微针是将疫苗递送至皮肤的一种极具吸引力的技术。疫苗可以涂布在金属或不可溶解聚合物微针的表面，或封装在可溶解聚合物微针结构中。考虑到微针通常会诱导与肌肉注射给药相当的免疫反应，人们探索了安全的佐剂来促进基于微针的皮内疫苗接种。Andrianov等人发现，PCPP（图3F）是一种合成的、水溶性、可生物降解的聚磷嗪聚合物，在药物输送和组织工程中有着广泛的应用，是一种安全的佐剂，可促进猪的基于微针的皮内乙型肝炎疫苗接种。此外，PCPP可作为一种关键的微针疫苗制造材料，以减少对表面活性剂的依赖。在这项研究中，只观察到轻微的皮肤红痕，没有发现严重的不良反应。除PCPP外，研究还发现一种新型聚磷腈聚合物PCEP可安全促进仔猪皮内接种H1N1流感疫苗，尽管对H3N2病毒缺乏异种亚型保护。总之，皮内反应原性低的化学佐剂通常是水溶性的或制成水性制剂，以便于从局部给药部位快速清除。这些佐剂大多基于病原体相关分子模式（PAMPs）或其合成类似物，可激活模式识别受体（PRRs），如TLR3、TLR4、TLR7、TLR9和STING，从而在不过度激活先天性免疫系统的情况下发挥佐剂作用。虽然PCPP不是PAMP，但研究发现PCPP可通过TLR3、TLR4和TLR9直接激活免疫细胞。这些研究表明，某些PRR激动剂作为皮内接种佐剂是安全的。6.安全用于皮内疫苗接种的物理佐剂除了注射化学佐剂，人们还探索了在皮内注射疫苗前在皮肤表面短暂施加物理能量，以促进皮内疫苗接种。l开发物理佐剂的合理性由于缺乏对佐剂作用原理的了解，过去的佐剂开发主要依赖于经验或试错方法，尤其是那些非PAMP型佐剂，如明矾、MF59和QS21。这些佐剂没有特定的细胞受体来介导其佐剂效应，因此不会直接激活先天性免疫细胞，如直流电和巨噬细胞。相反，这些佐剂更有可能刺激组织应激和细胞死亡，从而释放内源性危险信号或损伤相关分子模式（DAMPs）来介导其佐剂效应。20世纪90年代，Matzinger和她的同事提出了"危险理论"，证明免疫系统是由受压或受损细胞释放的危险信号激活的。"危险理论"解释了在没有外来病原体入侵的情况下诱导适应性免疫，如移植排斥、某些化疗诱导的全身性抗肿瘤免疫激活。在过去的二三十年中，人们发现了各种类型的DAMPs，其中包括尿酸和ATP等小分子化学物质以及dsDNA等大分子物质，它们能够根据"危险理论"调节免疫系统的功能。这些物质在生理条件下被封闭起来，无法被免疫系统识别，但在组织应激或细胞死亡时会释放出来，激活免疫系统。研究发现，明矾佐剂可刺激尿酸释放，从而激活NOD-、LRR-和含吡啶结构域蛋白3（NLRP3）炎性小体和Caspase-1激活，部分介导其促炎症反应。明矾佐剂还能刺激宿主DNA的释放，从而诱导IgG1抗体的产生和IgE类的转换，并延长DC和CD4+T细胞的相互作用。MF59佐剂可刺激ATP释放，从而增强疫苗接种的免疫反应。这些进展表明，刺激组织应激或细胞死亡的物理模式可能会诱导内源性危险信号的释放，从而促进疫苗接种。l物理佐剂类型研究最多的两种疫苗佐剂物理能量是激光和射频。图4总结了各种类型的激光佐剂和射频佐剂。图4.不同类型的物理佐剂。简要说明不同类型的激光佐剂(全表面、非消融部分、消融部分)和射频佐剂l激光佐剂激光发出窄波长的光，可被特定的组织发色团吸收。可见光主要被黑色素和血红蛋白吸收，而近红外光主要被组织水吸收。激光在美学和医学方面有着独特的应用。由于其超细的光束，高能激光已被用于无刀片激光辅助原位角膜磨镶术(LASIK)，术后并发症最少。激光还被用于低强度激光治疗，以刺激伤口愈合和缓解疼痛。激光还被用于皮肤表面处理、胎记和皱纹去除。已经探索了几种激光来促进皮内疫苗接种。Onikienko等人探索了一种发射两种波长(510nm和578nm)的铜蒸气激光，通过诱导持续的局部炎症来增强疫苗诱导的免疫反应，类似于化学佐剂。我们探索了非侵入性Q开关Nd：YAG532nm激光治疗来增强皮内疫苗诱导的免疫反应，并发现非侵入性激光治疗可以显著增强模型抗原OVA和流感疫苗诱导的小鼠模型的免疫反应，而不会导致可见或组织学皮肤损伤。激光治疗几乎没有诱导细胞因子的表达或免疫细胞的招募。进一步的研究发现，非炎症性激光治疗显著促进了MHCII+细胞(如巨噬细胞和DC)在皮肤内的迁移。MHCII+巨噬细胞和DC的局部运动增强可能有助于增强抗原摄取和增强获得性免疫。我们进一步发现，激光佐剂可以通过促进DC进入淋巴管和迁移到引流淋巴结来增强基于DC的抗肿瘤免疫治疗。激光佐剂被发现还能增强皮内尼古丁疫苗诱导的抗尼古丁抗体的产生。研究人员还开展了1064纳米近红外激光(NIR)增强疫苗皮内接种效果的研究。结果发现，无组织损伤的近红外治疗可以瞬时诱导一组明确的趋化因子，如CCL2和CCL20的表达，并增加表皮和真皮中DC的浓度。近红外激光治疗被发现显著提高皮内卵白蛋白和流感疫苗诱导的小鼠模型的免疫反应。进一步研究发现，近红外激光增加并激活皮肤中的Lang+和CD11b-DC亚群，并促进DC迁移到引流淋巴结，以增强疫苗诱导的免疫反应。与这项研究一致的是，皮肤中的CD103+DC亚群被发现在近红外佐剂效应中发挥关键作用。初步临床研究探索了近红外治疗在人类中的最大耐受量，并发现近红外激光促进CD1a+LC和CD11c+DC在真皮中的迁移。与非侵入性全表面激光治疗不同的是，非消融性部分激光(NAFL)也被用于增强皮内接种效果。NAFL发射高能微激光，并在皮肤表面形成微温区。在低温区域的死亡细胞招募浆细胞样树突状细胞(PDC)，它可以被局部咪喹莫特激活以增强皮内流感疫苗接种效果。NAFL治疗后皮内接种流感疫苗，然后局部注射咪喹莫特，在NAFL或局部咪喹莫特存在的情况下，比皮内接种流感疫苗产生更好的免疫反应，而在AddaVax佐剂存在的情况下，肌肉接种流感疫苗产生类似的免疫反应。有趣的是，NAFL/咪喹莫特佐剂的组合流感疫苗在小鼠和猪模型中显示出良好的局部和系统安全性。另一项研究发现，在小鼠模型中，与在NAFL或单独使用咪喹莫特的情况下皮内接种疱疹病毒多肽相比，局部应用咪喹莫特和NAFL治疗，然后皮内接种疱疹病毒多肽疫苗，可以诱导最有效的疫苗特异性CD4+和CD8+T细胞反应，并对生殖器疱疹病毒感染提供最显著的保护。上述研究表明，NAFL的使用顺序、局部应用咪喹莫特和皮内接种并不是该组高免疫原性的关键，只是在皮内接种疫苗之前使用NAFL以避免疫苗抗原的潜在热灭活。进一步研究发现，NAFL刺激死亡细胞释放dsDNA，并激活STING和IRF途径来介导其佐剂作用。NAFL还被发现在小鼠和猪模型中安全地加强基于微针的流感疫苗接种。关于激光疫苗佐剂更详细分类可参考其他综述。除了仅将激光用作佐剂外，最近开发了基于激光的粉末递送系统(LPD)，用于无需外部佐剂的无针经皮疫苗递送和辅助植入。LPD是基于消融部分激光(AFL)治疗产生皮肤微通道，然后局部应用粉末疫苗涂层阵列贴片，通过AFL产生的皮肤微通道将疫苗输送到皮肤。研究发现，能量为10mJ、覆盖率为10%的超脉冲CO2 AFL在促进OVA皮内免疫方面具有强大的佐剂作用。此外，基于AFL的粉末注射流感疫苗比皮内注射相同剂量的流感疫苗产生更强的抗体反应。在致命的病毒攻击后，流感疫苗的LPD也比皮内注射提供更显著的保护。AFL治疗诱导了显著的细胞因子和趋化因子的释放，并将中性粒细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞招募到微通道周围的组织中。由于消融了一小部分皮肤和靠近皮肤微通道的局部炎症反应，AFL治疗的皮肤没有明显的不良反应，并在几天内完全恢复。AFL的佐剂作用被认为是由于旁观者的光热效应。由于激光的脉冲宽度较长，在激光消融过程中产生的热量会扩散到周围组织，并导致周围一层薄薄的微通道组织的热损伤。dsDNA被发现从低温区域释放并诱导细胞因子表达。研究发现AFL还能激活NLRP3炎症体和Caspase1，导致IL-1β的活性释放。有趣的是，dsDNA、NLRP3炎症体和IL-1β对于激光佐剂效应是非必需的，而MyD88对激光佐剂有重要作用。与光热应激不同的是，在微针疫苗接种过程中施加的机械压力也被发现可以增强疫苗诱导的免疫反应。Ng等人发现，增加微投影阵列应用能量来诱导机械压力和细胞死亡增强疫苗(包被在微针表面)诱导的免疫反应，而不加入化学佐剂。这种方法被发现可以诱导与肿瘤坏死因子α和核因子-κB信号通路相关的基因表达。这些开创性的研究支持开发自佐剂疫苗递送技术，以便在不注射针头或化学佐剂的情况下进行更具免疫原性的疫苗接种。l射频佐剂射频(RFs)是交变电磁波。中高频(0.3-10MHz)的射频可产生组织加热，在美学和医学上有着广泛的应用。由于其热效应，RFs已被用于肿瘤治疗中的肿瘤组织消融或在皮肤表面修复中诱导新的胶原合成。为了寻求替代的物理能量来促进皮内疫苗接种，我们探索了在皮内疫苗注射之前对一小块皮肤进行双极射频治疗的潜在佐剂效果。射频治疗受到控制，以诱导显著的加热效应，但不会对皮肤造成损害。我们发现，非侵入性RF治疗诱导了一过性、低水平的局部炎症，而化学佐剂，如明矾、AddaVax和MPL，则诱导了持久且更强烈的局部炎症。RF治疗被发现显著增加真皮CD103+和CD11b-DC亚群的抗原摄取，并促进真皮DC向引流淋巴结的迁移。此外，射频治疗显著增加了引流淋巴结中传统DC和PDC的成熟。RF治疗显著增加了OVA诱导的抗体反应，佐剂效果与AddaVax相当，也增强了OVA特异性细胞免疫反应，佐剂效果与CpG佐剂相当。此外，研究发现，与0.06μg疫苗剂量的AddaVax佐剂疫苗相比，0.3μg疫苗剂量的RFA同样增强了2009年H1N1流感大流行疫苗诱导的抗体应答和保护作用。低剂量下的RFA效果较好，提示其具有优良的剂量节约效应。为了验证这一点，我们研究发现RFA可以帮助毫微克H3N2疫苗在小鼠模型中诱导有效的免疫反应和保护。考虑到先前的激光佐剂效果主要是与相对较弱的明矾佐剂进行比较，RFA是第一个与广泛使用的化学佐剂(类似MF59的AddaVax)相比的物理佐剂，可以增强流感疫苗接种。由于RFA能够帮助蛋白质或亚单位疫苗诱导细胞免疫反应，我们进一步探索了RFA在基于重组核蛋白(NP)和基质蛋白1(M1)的通用流感T细胞疫苗开发中的作用。通用流感T细胞疫苗主要针对保守的病毒细胞内抗原，如NP和M1。佐剂提供了一种方便的策略来帮助NP和M1诱导CD8+T细胞反应。我们发现RFA可以增强真皮内NP和M1诱导的CD8+T细胞反应。在小鼠模型中，在RFA存在的情况下，皮内NP/M1免疫对致死性病毒攻击具有显著的保护作用。在加强NP/M1免疫方面，RFA显示出与AddaVax相似的佐剂作用。最近发现，RFA还可以扩大流感疫苗诱导的针对异源病毒的免疫反应。这种交叉保护免疫可能是由于它诱导了交叉保护的细胞毒性T淋巴细胞。RFA还有效促进了雄性和雌性小鼠的H5N1流感疫苗皮内免疫。含有RFA的H5N1流感疫苗皮内接种(RFA/ID)诱导的血清血凝抑制(HI)效价和免疫球蛋白抗体效价显著高于单独皮内疫苗(ID)。在致死性病毒攻击后，RFA/ID组而不是ID组显示出显著的肺病毒滴度降低。有趣的是，与ID组相比，RFA/ID组攻击后肺组织中分泌肿瘤坏死因子α和干扰素γ的CD4+和CD8+T细胞显著增加。RFA/ID组对体重减轻也有显著的保护作用。RFA/ID组小鼠不分性别全部存活，ID组部分小鼠存活(雌鼠占25%，雄鼠占75%)。有趣的是，在这项研究中，与AddaVax佐剂相比，RFA对促进H5N1流感疫苗接种的作用较弱。比较组织蛋白质组学最近被用来鉴定RFA治疗后独特表达的蛋白质。我们发现，与化学佐剂处理(MPL、AddaVax、Alum、MPL/Alum)相比，RFA诱导了14种唯一表达的蛋白质。在唯一表达的蛋白质中，热休克蛋白70(HSP70)在RFA效应中发挥了关键作用。验证研究发现，与野生型小鼠相比，HSP70基因敲除小鼠显著降低了促进OVA和pdm09疫苗接种的RFA效应。有趣的是，这项研究发现RFA引起的局部组织蛋白质组变化最小，而AddaVax佐剂引起的局部组织蛋白质组变化最大。RFA对局部组织蛋白质组的最小变化与其诱导的一过性和低水平的局部炎症是一致的。l物理佐剂的优点物理佐剂将物理能量短暂地应用于皮肤表面，然后皮内注射疫苗，以增强疫苗诱导的免疫反应(图5)。物理佐剂主要由医疗器械输送，可在室温下保存，无需冷链储存。这与化学佐剂不同，化学佐剂通常与疫苗一起保存，并需要冷链储存。物理佐剂设备可以重复使用，每次应用的成本可能类似于化学佐剂。物理佐剂不需要与疫苗混合，因此不需要改变或修改疫苗制造或给药过程。物理佐剂不太可能引起显著的全身性或长期副作用，这可能是化学佐剂的一个问题。这是因为物理佐剂的作用主要局限于治疗部位，而化学佐剂可以迁移到引流淋巴结，甚至到达体循环，从而广泛激活免疫系统。物理佐剂可诱导良好控制的组织应激(例如，热)，并允许皮肤快速恢复，而不会产生持久的影响。物理佐剂经常引起短暂的、低水平的局部炎症，而化学佐剂往往引起持续的、更强烈的局部炎症。物理佐剂主要是改变局部环境以增加DC的运动性，诱导内源性危险信号的释放以增强抗原摄取和DC成熟，或促进DC迁移到引流淋巴结以增强疫苗诱导的免疫反应(图5)。经过适当的开发，物理佐剂的效果可以与化学佐剂一样强大。图5.化学佐剂和物理佐剂在皮内接种中的不同作用机制。皮内给药后，化学佐剂通过与PRRs结合直接激活DC，诱导DC成熟，诱导DC释放细胞因子/趋化因子，招募天然免疫细胞，或促进DC向引流淋巴结迁移，以增强疫苗诱导的免疫应答。物理佐剂传递激光或射频能量，诱导组织应激释放危险信号，刺激DC成熟，诱导DC释放细胞因子/趋化因子，并招募先天免疫细胞。物理佐剂还可以增加DC在真皮组织中的运动性，并促进DC迁移到引流淋巴结，以增强疫苗诱导的免疫反应。7.专家评论皮肤已被公认为疫苗接种的高免疫原性部位。与肌肉接种相比，皮内接种疫苗通常能诱导更强的免疫反应，在提高疫苗效力或节省疫苗剂量方面有很大作用。事实上，已有几种疫苗获得了皮内接种的许可，其中包括流感疫苗、狂犬病疫苗和最近的猴痘疫苗。然而，皮内接种面临着诱发严重局部反应的风险。目前获批的大多数佐剂都不适合皮内接种，因为它们具有诱发严重局部反应的高风险。我们需要新型佐剂来安全地增强皮内接种效果，同时避免皮肤出现明显的反应。最近的研究发现了几种有可能安全增强疫苗皮内接种效果的化学佐剂，包括CpG1018、GLA-AF、局部咪喹莫特、poly(I:C)、cGAMP和PCPP。CpG1018已被授权用于促进肌肉接种乙型肝炎疫苗，而GLA-AF和局部咪喹莫特已在临床试验中用于增强皮内接种流感疫苗。由于这些佐剂在人体中的安全性已得到证实，因此可随时用于皮内疫苗接种。poly(I:C)已在临床试验中被用于增强肿瘤内、肌内或皮下注射后的抗肿瘤免疫力。poly(I:C)其总体良好的耐受性支持对其进行评估，以增强皮内疫苗接种。皮内接种佐剂疫苗的好处是可以进一步提高疫苗效力，节省更多疫苗剂量，并有可能诱导交叉保护性免疫。流感疫苗可作为测试皮内佐剂接种的良好目标，以解决疫苗失配问题，因为疫苗失配会大大降低疫苗效力，或通过节省疫苗剂量来解决每年流感疫苗生产的负担。在批准皮内佐剂疫苗供大众使用时，需要仔细评估其效益/风险比。除化学佐剂外，人们还探索了不同类型的物理佐剂（激光、射频），以安全地促进皮内疫苗接种。物理佐剂是一种相对较新的佐剂类型，它利用物理能量诱导组织应激以促进皮内接种。虽然物理佐剂提高人类疫苗效力的潜力仍有待探索，但最近发现内源性危险信号在化学佐剂效应中发挥关键作用（如明矾、MF59），这支持了物理佐剂的发展，以诱导组织应激和释放内源性危险信号来促进疫苗接种。最近在临床前动物模型中研究了物理佐剂的概念及其增强皮内疫苗接种的安全性和有效性。这些研究支持物理佐剂在促进皮内疫苗接种方面具有良好的安全性和有效性。尽管取得了这些令人鼓舞的成果，但物理佐剂在人类使用方面仍面临着一些挑战。首先，物理佐剂是依靠设备的。目前，还没有指导物理佐剂开发和审批的指导方针。其次，物理佐剂的开发需要设备制造商和疫苗公司的共同努力，还需要引入佐剂开发和医疗设备审批方面的监管机构。多方的参与可能会给物理佐剂的开发带来新的挑战。第三，使用目前的物理佐剂进行皮内接种需要两个步骤：物理佐剂处理和皮内接种。与化学佐剂结合疫苗接种相比，两步接种过程需要花费更多时间，而且公众对这种新型疫苗接种的接受程度还有待进一步探讨。佐剂的开发在21世纪受到极大关注。在批准新佐剂供人类使用和阐明疫苗佐剂的内在机制方面取得了重大进展。所有这些努力都有望促进安全的化学和物理佐剂的开发，从而增强皮内接种疫苗的效果。参考来源：Chen X. Emerging adjuvants for intradermal vaccination. Int J Pharm. 2023 Feb 5;632:122559. doi: 10.1016/j.ijpharm.2022.122559. Epub 2022 Dec 28. PMID: 36586639; PMCID: PMC9794530.推荐学习：疫苗佐剂概述：发展现状和未来展望基于TLR激动剂佐剂的设计疫苗佐剂：选择标准、与免疫应答相关的作用机制和未来方向识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入生物制品微信群！请注明：姓名+研究方向！版权声明本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。