GSK-3888550A

摘要：呼吸道合胞病毒（RSV）是婴儿和儿童支气管炎和肺炎的重要致病因子。RSV表面融合糖蛋白的鉴定和结构分析是RSV预防发展的关键进展。本综述全面总结了ClinicalTrials.gov上注册的RSV单克隆抗体（mAb）和疫苗临床试验，重点介绍了新生儿、婴儿和儿童RSV疫苗的分类、名称、靶标、阶段、临床结果和安全性数据。我们还讨论了用于母体免疫的RSV疫苗类型的特点，并总结了目前孕妇RSV疫苗的临床研究进展及其在婴儿中的保护效果。本综述将为未来儿童RSV预防的发展提供新的思路。 1.引言 呼吸道合胞病毒（RSV）是婴儿支气管炎和肺炎的主要病原体，也是6个月以下婴儿严重下呼吸道感染（LRTIs）的最常见原因，几乎所有儿童在2岁之前都感染过RSV，并且再次感染是常见的。根据2005年的一份报告，RSV感染或相关并发症导致的死亡人数估计在5岁以下儿童中为66,000至160,000人。尽管RSV发病率高，但目前尚无明确的治疗方法。 RSV基因组跨度为15.2 kb（如图1所示），包含10个基因，编码11种蛋白质。值得注意的是，M2基因包含两个重叠的ORF，产生M2-1和M2-2两种蛋白质。M2-1对病毒转录至关重要，而M2-2控制从转录到基因组复制的转变。RSV基因组的初始转录产生非结构蛋白NS1和NS2，它们共同作用以抑制凋亡和干扰素反应。此外，RSV病毒颗粒的特征是单链、负义RNA基因组，被脂质双层包裹，展示融合（F）、附着（G）和小疏水（SH）蛋白（图1）。病毒表面主要由G和F糖蛋白组成，它们在进入过程中发挥关键作用。F蛋白的前融合构象是人类血清中RSV中和活性的主要靶标，许多强效抗体对此构象具有特异性。因此，在开发含F蛋白的疫苗候选物时，优先考虑基于结构的工程策略，以稳定F蛋白在其前融合构象。 图1展示了RSV基因组的组织和蛋白质结构。(A) RSV基因组组织；(B) RSV蛋白质结构。 近年来，在理解RSV糖蛋白的构型和运作以及它们与宿主细胞因子的相互作用方面取得了显著进展，这些相互作用促进了宿主细胞的进入，从而为阻止RSV提供了新的途径。迄今为止，RSV预防干预策略包括mAbs和六种类型的疫苗，包括基于颗粒的疫苗、基于载体的疫苗、减毒或嵌合疫苗、亚单位疫苗、mRNA疫苗。 本文全面概述了目前针对新生儿、婴儿和儿童的RSV疫苗和mAbs的临床研究进展。考虑到母婴免疫的重要性，我们还包括了针对孕妇的RSV疫苗的临床研究。讨论包括各种疫苗的作用机制、应用范围、有效性和可能的不良反应，引用了Clinical Trials.gov和PubMed的数据。本综述旨在为政府政策制定者、学术机构和制药企业提供值得注意的见解和创新视角。 2.材料和方法使用关键词“respiratory syncytial virus” AND “Early Phase 1, Phase 1, Phase 2, Phase 3, and Phase 4”在ClinicalTrials.gov网站的“Additional Criteria”字段中进行搜索，研究开始时间限制在2025年5月20日之前。试验排除标准如下：（1）状态为暂停、终止、撤回或未知，（2）研究条件不是RSV，以及（3）主要目的是治疗、基础科学或其他。共筛选了254项临床试验，根据其状态排除了28项试验，根据其研究条件排除了19项试验，根据其主要目的排除了86项试验。最终，121项临床试验被纳入分析。 数据检索过程如图2所示。 图2展示了数据检索的过程。 收集以下信息进行分析：NCT编号、干预措施、药物、分类、给药方式、状态、赞助者/合作者、性别、年龄、阶段、资金、首次发布日期和地点。描述性分析使用数值和百分比表示分类变量，数据处理和分析使用Microsoft Office Excel 365进行。由于研究仅使用公开数据且不包含个人信息，因此免于伦理委员会审查。 3.结果 3.1.基本特征 共纳入121项试验，其基本特征如表1所述。大多数RSV疫苗试验已完成，占67.77%，14.05%的试验正在招募中，17.36%的试验正在进行但未招募。这些试验的详细信息如表2所示。 考察的RSV疫苗类型包括47种亚单位疫苗（38.84%）、26种减毒疫苗（21.49%）、23种基于载体的疫苗（19.01%）、19种mAbs疫苗（15.70%）、5种mRNA疫苗（4.13%）和1种基于颗粒的疫苗（0.83%）。大多数试验（85.12%）在两性中进行，13.22%的试验仅在女性中进行。有42项试验仅在儿童中进行（34.71%），74项试验在成人中进行（61.16%），5项试验在儿童和成人中进行（4.13%）。RSV临床研究的概览如图3所示。 图3提供了RSV疫苗试验的概览。(A) 从2005年到2023年每年各阶段试验的数量；(B) 各种疫苗类型中各阶段试验的数量。 从受试者人群的角度来看，47项试验关注儿童，13项关注孕妇。发现孕妇使用的RSV疫苗是亚单位疫苗和基于颗粒的疫苗，而儿童使用的包括亚单位疫苗、减毒疫苗、基于载体的疫苗、mRNA疫苗和mAbs。图4A、B显示了每种疫苗和mAbs的药物详细信息。 3.2.儿童RSV单克隆抗体 3.2.1.mAbs 单克隆抗体（mAbs）因其对病原体的显著特异性和提供被动免疫反应的能力，成为解决病毒感染的有力替代方案。主要目标是针对RSV前F蛋白上的一个高度中和、敏感的表位。此外，最新一代的RSV抗体经过Fc突变修饰，可以延长其半衰期。有5种针对RSV活性的mAbs，包括帕利珠单抗、莫他珠单抗、尼西瑞单抗、克雷索瑞单抗和TM001。 （1）帕利珠单抗。帕利珠单抗（Synagis）是FDA批准的首个用于预防高风险婴儿因细支气管炎住院的人源化mAb。帕利珠单抗在首个RSV季节的五个月里，每月以15 mg/kg的剂量通过肌肉注射给药，以预防儿童严重的RSV LRTI。帕利珠单抗结合RSV融合（F）蛋白上的抗原位点A，这是一个高度保守的区域，能够通过结合病毒表面的RSV融合蛋白阻止膜融合过程，也可以防止感染RSV的细胞之间的融合过程。这种干预仅限于儿科人群中的一小部分，即胎龄低于35周的婴儿和RSV季节开始时年龄在6个月以下的婴儿。这使得每年有数百万婴儿面临严重或潜在致命疾病的风险，没有RSV的保护。目前正在进行两项临床试验，研究帕利珠单抗对两岁以下儿童预防RSV的有效性（NCT01006629/2/3期；NCT01466062/3期）。鉴于新型长效mAbs的出现，有必要进一步实验以验证其对6个月以上儿童的保护效果。 3.2.2.莫他珠单抗 莫他珠单抗，也称为MEDI-524或Numax，是通过亲和力成熟技术从帕利珠单抗开发出的第二代mAb。研究发现，它能有效减轻高风险婴儿的RSV疾病负担。这种mAb已经进行了五项临床试验。一项随机、双盲、安慰剂对照试验（NCT00121108/3期）表明，与安慰剂组相比，莫他珠单抗使因RSV住院的婴儿比例相对减少了87%。此外，接受莫他珠单抗治疗的受试者不良事件（AEs）的发生率低于接受安慰剂的受试者，并且没有报告与莫他珠单抗相关的死亡。两组之间严重不良事件（SAEs）或超敏反应事件的发生没有统计学上显著差异。比较单独使用莫他珠单抗与莫他珠单抗和帕利珠单抗联合方案的给药，观察到高风险儿童连续联合方案给药相关的不良事件和抗药物抗体（ADAs）的发生率在两组之间相似。 3.2.3.尼西瑞单抗 尼西瑞单抗是一种针对F蛋白的Ø位点设计的人源mAb，其Fc部分具有YTE突变，以延长其血清半衰期，作为单一剂量给药，在整个RSV季节提供全面保护。2022年11月，EMA和欧盟批准了Beyfortus（尼西瑞单抗）在新生儿和婴儿中的使用，以帮助预防他们最初的RSV大流行季节期间的RSV LRTIs。 MEDI8897的平均半衰期在不同剂量队列中为85至117天，随后在给予300毫克肌肉注射剂量后，生物利用度为77%（NCT02114268/1期）。干预组中ADA和AEs的发生率与安慰剂组观察到的相似。随后的2期（NCT02878330）和3期试验（NCT03979313）表明，尼西瑞单抗在治疗药物处理患者中的LRTIs方面的有效性分别为70.1%（95% CI，52.3至81.2）和74.5%（95% CI，49.6至87.1）。此外，尼西瑞单抗在预防早产儿因RSV住院方面的有效性分别发现为78.4%（95% CI，51.9至90.3）和62.1%（95% CI，-8.6至86.8）。两组之间的SAEs相似。此外，尼西瑞单抗在被诊断为先天性心脏病（CHD）或慢性肺病（CLD）的婴儿中的安全性与接受帕利珠单抗治疗的早产儿观察到的相似（NCT03959488/2/3期）。 3.2.4.Clesrovimab (MK-1654) Clesrovimab是一种半衰期延长的单克隆抗体，具有与尼西瑞单抗相同的YTE突变，旨在靶向RSV F蛋白的位点IV，尽管它部分靶向位点V，并且优先结合前F。在日本成人中进行了两项1期临床试验，以测试MK-1654。单次肌肉注射MK-1654使RSV血清中和抗体（SNA）滴度呈剂量依赖性增加。该抗体的半衰期在73至88天之间，估计在300毫克肌肉注射剂量下的生物利用度为69%。MK1654组和安慰剂组之间的安全性事件没有显著差异。Orito等人证明，健康成人中MK-1654的生物利用度分别为100毫克肌肉注射和300毫克肌肉注射的86%和77%。在clinicaltrials.gov中未找到注册号。目前，这种单克隆抗体正在7项婴儿试验中进行测试。 3.3.儿童RSV疫苗 3.3.1.减毒活疫苗（LAVs） 由于其鼻内给药、能够诱导局部粘膜和系统反应以及在存在母体抗体时的免疫原性，LAVs是幼儿的有希望的选择，从而使高风险重症婴儿能够免疫。对RSV基因组和反向遗传学的增强理解，促进了通过消除或改变对RNA生物合成控制或阻碍宿主免疫反应有显著影响的蛋白质（如NS2、M2-2、SH、L和G蛋白）的LAV候选物的合理发展，从而限制了病毒复制。LAVs为可能无法从母体疫苗或单克隆抗体获得充分保护的较大婴儿提供了宝贵的无针主动鼻内免疫选择。 3.3.2.RSV DNS2/D1313/I1314L 通过删除NS2基因和L聚合酶蛋白的氨基酸S1313，开发了RSV DNS2/D1313/I1314L。因此，获得了在生理条件下显示温度敏感性的表型稳定变体。在RSV血清阴性的儿童中，给予106个斑块形成单位（PFU）剂量的RSV/DNS2/D1313/I1314L被发现耐受性良好，并且能够诱导免疫反应。在RSV季节之后，观察到接种疫苗的个体与安慰剂接受者相比，RSV滴度显著增加（1:955对比1:69），表明疫苗的有效性（NCT01893554）。RSV/DNS2/D1313/I1314L和RSV/276疫苗接种者（NCT03227029）在接种疫苗后都经历了上呼吸道感染和/或发热，症状通常较轻。值得注意的是，接受RSV/276的受试者咳嗽的发生率显著高于接受RSV/DNS2/D1313/I1314L的受试者（48%对比12%）。未观察到下呼吸道感染和SAEs。两组均在血清RSV中和滴度和抗RSV F IgG滴度方面分别有60%和92%的提升。 3.3.3.MV-012-968 MV-012-968是一种无佐剂的减毒活疫苗。该疫苗对其NS1和NS2蛋白以及G蛋白进行了修改，删除了SH并去除了分泌型G蛋白。目前正在对MV-012-968的安全性和免疫原性进行1期和2期临床试验，但结果尚未公布。 3.3.4.RSV LID DM2-2 RSV LID DM2-2是一种涉及删除RSV M2-2的候选疫苗。LIDDM2-2的减毒导致病毒基因转录和抗原表达增加，RNA复制减少。发现95%接受LIDDM2-2（105 PFU）疫苗的个体脱落疫苗病毒（中位峰值滴度，3.8 log10 PFU/mL；6.3 log10拷贝/mL）（NCT02237209）。此外，90%的疫苗接种者血清中和抗体（SNA）增加了至少四倍。值得注意的是，疫苗和安慰剂组都经历了高比例的呼吸道症状和发热。值得注意的是，一名疫苗接种者在疫苗脱落、鼻病毒和肠病毒的同时，出现了2级喘息。 3.3.5.LID/DM2-2/1030s 通过消除RSV M2-2蛋白并在RSV聚合酶蛋白中引入遗传稳定的温度敏感突变（称为1030s），生产了LID/DM2-2/1030s疫苗。LID/DM2-2/1030s疫苗（105 PFU）显示85%的疫苗脱落和血清中和抗体至少四倍增加。疫苗接种者（60%）和安慰剂接种者（27%）通常报告呼吸道症状和发热。值得注意的是，一名疫苗接种者因鼻病毒而出现2级喘息，但并未同时脱落LID DM2-2/1030s。 3.3.6.D46/NS2/N/DM2-2-HindIII D46/NS2/N/DM2-2-HindIII是一种具有M2-2缺失的重组减毒活疫苗，源自早期候选疫苗LID/DM2-2。所有21名接受D46/NS2/N/DM2-2-HindIII（105 PFUs）（NCT03102034, NCT03099291）的个体均被发现感染了疫苗，其中20人（95%）显示出疫苗脱落。值得注意的是，95%和100%的疫苗接种者分别经历了血清RSV中和抗体和抗RSV融合免疫球蛋白G的至少四倍增加。此外，疫苗接种者（76%）和安慰剂接种者（18%）报告了轻度上呼吸道感染和/或发热。 3.3.7.rA2cp248/404/1030 D SH突变和rA2cp248/104/1030 Delta SH突变 这两种疫苗是针对幼儿RSV免疫的初始减毒候选疫苗。两种疫苗在成人和RSV血清阳性儿童中均显示出高度减毒，同时在RSV血清阴性儿童中也表现出良好的耐受性和免疫原性。值得注意的是，rA2cp248/404/1030 Delta SH在RSV血清阴性儿童中的复制受到限制，平均峰值滴度为10（2.5）PFUs/mL，而rA2cp248/404 Delta SH为10（4.3）PFUs/mL。尽管rA2cp248/404/1030 Delta SH在婴儿中耐受性良好，但只有44%接受两个10（5.3）PFU剂量疫苗的接种者显示出明显的抗体反应。 3.3.8.MEDI-559和RSV冷通道/稳定2 MEDI-559是从RSV rA2cp248/404/1030 D SH突变而来，目前正在进行1/2期临床试验（NCT00767416）。RSVcps2是一种新开发的疫苗，通过引入五个核苷酸变化和一个氨基酸变化从MEDI-559修改而来。这种修改导致两个重要衰变突变的稳定，从而防止它们的降解。通过鼻内给药RSVcps2，显著比例的疫苗接种者（85%）获得了RSVcps2感染，其中77%脱落疫苗病毒，59%的RSV SNA滴度增加了至少四倍（NCT01852266, NCT01968083）。疫苗组和安慰剂组之间呼吸道和/或发热疾病的发生率相似。 图4展示了儿童和孕妇中试验的RSV疫苗类型和药物。(A) 儿童；(B) 孕妇。 3.4.基于载体的疫苗 在重组载体疫苗中，使用基因改造的复制缺陷病毒来传递编码RSV抗原的基因，以引发体液和细胞免疫。目前，有3种疫苗候选物正在进行儿科人群的临床试验，分别是源自黑猩猩腺病毒载体的ChAd155-RSV（GSK3389245A）、Ad26.RSV.preF，以及PIV5载体RSV疫苗（BLB-201）。 3.4.1.ChAd155-RSV 目前正在研究的ChAd155-RSV疫苗是一种基于黑猩猩腺病毒的疫苗，表达三种不同的蛋白，即融合蛋白、核蛋白和M2-1蛋白（55）。在给予GSK3389245A（NCT02927873；1/2期试验）的第一剂后，所有组（0.5 × 1010、1.5 × 1010和5 × 1010病毒颗粒）均显示出RSV-A Nab滴度的剂量依赖性增加，第二剂后未观察到明显的增强效应。一年后，RSV-A Nab滴度仍高于接种前水平。不良事件（AEs）的发生率在所有组中相似，高剂量组发热更为普遍。大多数发热症状轻微。未报告与疫苗相关的SAEs和住院治疗。 3.4.2.Ad26.RSV.preF 编码预融合F（preF）蛋白的腺病毒血清型26 RSV载体（Ad26.RSV.preF），结合RSV preF蛋白。先前的研究已经证明Ad26.RSV.preF在减轻老年人群RSV引起的下呼吸道感染方面的有效性。接受Ad26.RSV.preF的12-24个月龄儿童（NCT03606512；1/2期试验）的RSV A2中和几何平均滴度从121（第0天）显著增加至1608（第29天），并进一步增加至2235（第57天），在7个月以上的时间内保持在较高水平。与接受安慰剂的儿童（5, 41.7%）相比，接受Ad26.RSV.preF的儿童（1, 4.2%）RSV感染的发生率较低。未报告与疫苗接种相关的SAEs。 3.4.3.PIV5载体RSV疫苗（BLB-201） 副流感病毒5（PIV5）是一种被用作基于载体的疫苗开发平台的副黏液病毒。已经开发了两种不同的重组PIV5病毒，一种表达融合（F）蛋白，另一种表达附着糖蛋白（G）。目前正在进行1期临床试验，以评估BLB-201疫苗在儿童中的安全性、耐受性和免疫原性（NCT05655182）。 4.其他 目前，mRNA疫苗（mRNA-1345, NCT04528719）和亚单位疫苗（NCT02296463）的安全性正在1期临床试验中进行评估。 4.1.孕妇RSV疫苗 孕妇免疫被认为是通过转移母体免疫力来保护婴儿免受生命最初阶段多种危险感染的可行方法。这些疫苗类型包括亚单位和基于颗粒的疫苗。RSV preF3、RSV preF和RSV F疫苗是值得注意的例子，它们已经进入3期临床试验，并且根据已发布的数据，显示出良好的安全性、免疫原性和母婴传输率。下面部分将详细介绍这些发现。 4.1.1.RSVPreF3 RSVPreF3是一种无佐剂疫苗。有关RSVPreF3的七项临床研究。在一组健康的非孕妇女中，RSVPreF3（GSK3888550A）（30/60/120 µg）组比安慰剂组（0% ~ 15.9%）显示出更高诱导局部不良事件（AEs）的发生率（4%~53.2%）。然而，大多数上述事件被归类为轻度至中度。此外，RSVPreF3和安慰剂之间的非预期AE报告频率相似，并且没有记录与药物相关的SAEs（NCT03674177, 1期）。Bebia等人建议，RSVPreF3（RSV MAT 009）（60/120 µg）耐受性良好，因为在孕妇及其后代中均未观察到与疫苗相关的AEs。此外，即使在分娩后43天，母亲对RSV的nAbs水平也增加了10倍以上，范围为8.9-10.0倍。新生儿的nAbs水平在出生时达到峰值，逐渐下降，直到产后第181天（NCT04126213/2期）。 4.1.2.RSV稳定预融合F亚单位疫苗 在一组孕妇中，随机分配接受双价RSVpreF疫苗（120/240 mg），无论是否含有氢氧化铝，或安慰剂（NCT04032093/2b期）。研究表明，与安慰剂组相比，接种组的50% nAb滴度显著增加。此外，通过胎盘转移的中和抗体比例在1.41和2.10之间。此外，疫苗组中观察到的妇女和婴儿的AEs发生率与安慰剂组相似。RSVpreF在单独或与吸附无细胞百日咳疫苗（Tdap）联合给药时均表现出良好的耐受性和安全性（NCT04071158/2b期）。在妊娠24至36周的孕妇中给予单次肌肉注射RSVpreF疫苗或安慰剂（NCT04424316/3期）。在出生后的前90天内，疫苗在预防由药物治疗引起的严重下呼吸道感染方面的有效率为81.8%（99.5% CI, 40.6至96.3），在预防与呼吸道合胞病毒相关的下呼吸道感染方面的有效率为57.1%（99.5% CI, 14.7至79.8）。此外，在出生后的前180天内，预防严重下呼吸道感染的预防治疗有效率为69.4%（97.58% CI, 44.3至84.1）。在母亲参与者或婴儿和幼儿中未检测到明显的安全信号，直到24个月大。注射或出生1个月内报告的AEs频率在两组之间相似。 通过单次肌肉注射在健康非孕妇女中评估GSK3003891A（30/60/120 mg）的免疫原性和安全性（NCT02956837/2期）。结果显示，几何平均滴度（GMT）和PCA浓度以剂量依赖性方式增加。另一项比较分析旨在评估RSV F-020/GSK3003895A（NCT02360475/2期）和RSV F-024/GSK3003891A疫苗（NCT02753413/2期）的安全性和免疫原性。在RSV F-020临床试验中，参与者随机接受单剂量RSV PreF疫苗（30/60 mg无佐剂或60 mg含铝佐剂）或Tdap。在RSV F-024试验（NCT02753413/2期）中，参与者随机分配接受单剂量RSV PreF（60 mg无佐剂）或Tdap。两项研究显示RSV-PreF和Tdap疫苗之间的反应原性概况相似。没有与疫苗注射相关的SAEs。 4.1.3.RSV F疫苗（RSV融合（F）蛋白纳米颗粒） 接受RSV F疫苗的孕妇显示出RSV特异性抗体水平的显著提高，表现出与针对多种RSV中和表位的mAbs相当的反应性。（NCT02247726/2期）。通过胎盘传递给免疫女性所生新生儿的抗体转移率在不同检测中发现在90%到120%之间。接受疫苗接种的母亲所生的后代表现出大约40天半衰期的RSV特异性抗体，并且这些新生儿中未检测到严重的RSV疾病。 孕妇通过肌肉注射接受了RSV F疫苗，以评估其效果及其为活产婴儿提供保护的潜力。（NCT02624947/3期）。在生命的最初90天内，疫苗对与RSV相关的临床显著下呼吸道感染的有效性为39.4%，对伴有严重低氧血症的与RSV相关的下呼吸道感染的疫苗效力为48.3%。此外，疫苗在预防因与RSV相关的下呼吸道感染而住院方面的有效性被确定为44.4%。观察到疫苗接种的女性中局部注射部位反应的发生频率更高（40.7%对比9.9%）。在这些mAbs和疫苗中，可以在PubMed检索到的效力和安全性数据列在表3中。基于与临床试验阶段相关的属性，合理地优先传播来自大样本量的临床研究结果。例如，Nirsevimab已成功完成3期临床试验，因此只提供了3期效力和安全性数据。 5.展望 本文全面回顾了儿童和孕妇RSV疫苗研究的当前进展。本综述的发现为RSV疫苗的未来发展提供了宝贵的见解和新思路。尽管RSV疫苗最近取得了进展，但四个值得注意的问题仍然存在：首先，RSV疫苗的保护效果持续时间，已有报道称像MK1654这样的疫苗可持续长达一年，但需要进一步研究以确定它们的长期效力；其次，尽管已观察到老年人、孕产妇免疫和婴儿单克隆抗体治疗的RSV疫苗取得了成功的结果，但6个月至5岁的儿童仍需要保护；第三，RSV和多种流感病毒流行季节的同时出现导致婴儿经常经历多种病毒感染。同时给予RSV和流感疫苗的效力和安全性需要通过更多数据进一步证实。第四，尽管母婴免疫是保护新生儿的有效方法，但产前疫苗接种对胎儿发育的潜在影响需要进一步审查。

摘要：随着对新型佐剂在人类疫苗中作用的认识的不断深入，其在预防疾病方面的贡献，特别是在具有挑战性的人群和由复杂病原体引起的疾病中，正在不断扩大。AS01是一种基于脂质体的疫苗佐剂系统，包含两种免疫刺激剂：3-O-去酰基-4'-单磷脂脂A和皂甙QS-21。含有AS01的疫苗已经获得批准，并且已经在全球范围内数百万人中使用。涉及领域：在这里，我们报告了对AS01作用机制的理解进展，这些进展有助于开发有效的疫苗，预防由疟疾、带状疱疹和呼吸道合胞病毒引起的疾病。AS01诱导早期先天免疫激活，诱导具有优化的功能特性的T细胞介导和抗体介导的反应，并诱导免疫记忆。含有AS01的疫苗似乎对基线免疫状态相对不敏感，转化为在人群中的高效力。目前许可的含有AS01的疫苗在临床试验和市场后环境中显示出可接受的安全性概况。专家意见：最初的期望，即通过AS01佐剂可以支持有效的疫苗反应并有助于疾病控制，已经实现。目前正在进行研究AS01在预防其他具有挑战性的疾病（如结核病）的疫苗中的效用，同时努力完全定义其在不同疫苗设置中的作用机制。 文章亮点 • 在多个年龄组的临床试验和市场后环境中，含有AS01的结核病、疟疾、带状疱疹和呼吸道合胞病毒疫苗的有效性和可接受的安全性概况已经得到证明。 • AS01的佐剂效应依赖于AS01和抗原的空间和时间共定位。注射后不久，AS01从肌肉排出到近端淋巴结，在那里迅速产生细胞因子和先天效应细胞的涌入。 • 3-O-去酰基-4'-单磷脂脂A（MPL）和皂甙QS-21的下游信号活动相互作用，推动AS01的佐剂效应。MPL和QS-21共享信号通路，促进复杂的信号整合，并且它们共同激活不同的细胞类型，创建了一个先天效应功能网络。 • AS01先天特征的标志是引流淋巴结中干扰素（IFN）-γ的快速产生。AS01还在接种疫苗者的血液中诱导了一个核心先天基因签名，在接种疫苗后24小时内，包括与IFN途径和自然杀伤（NK）细胞相关功能相关的基因。核心先天基因签名与适应性反应的幅度相关，并能预测实验试验中体液反应的持续性。 • 重要的是，AS01在大多数受试者中诱导了核心签名，无论他们的基础免疫状态如何。因此，AS01能够克服个体免疫异质性，减少免疫适应性差对疫苗反应的影响，即使是在老年人和免疫受损者中。 • AS01诱导T滤泡辅助细胞，广泛的抗体反应具有优化的功能特性和免疫记忆的诱导，一致地在婴儿、老年人和免疫受损者中诱导多功能T细胞反应。 1.引言 佐剂是添加到疫苗中的成分，用于增加对疫苗抗原的免疫反应的强度、持久性和/或广度。铝盐是第一种用于人类疫苗的佐剂，其使用已有一个世纪的历史。新的佐剂和佐剂系统（AS，两种或更多免疫调节剂的组合）最初在20世纪90年代开发，以增强通常对疫苗接种反应较差的脆弱人群中的免疫原性。如今，佐剂和AS已经被包含在众多许可疫苗中（见表1）。在这篇综述中，我们重点讨论佐剂系统AS01（GSK）。AS01指的是一类佐剂：AS01B（每注射剂量含50微克3-O-去酰基-4'-单磷脂脂A（MPL）和50微克Quillaja saponaria Molina，21号部分（QS-21））和AS01E（每注射剂量含25微克MPL和25微克QS-21），均为脂质体配方。七年前，在本期刊上，一篇综述总结了AS01的独特方面，并得出结论，它通过疫苗接种展示了控制疾病的良好前景。当时，作者认为，“在未来5年内，我们将看到含有新型佐剂的新疫苗，例如CpG佐剂的候选乙型肝炎疫苗，旨在针对铝盐作为佐剂证明不足的病原体。这些新型佐剂疫苗将旨在为老年人和免疫功能低下者等脆弱人群提供更好的保护。”。自那篇出版物发布以来，2019冠状病毒病（COVID-19）大流行的爆发刺激了采用包括mRNA、腺病毒载体、胞嘧啶磷鸟苷（CpG）-氢氧化铝、Alhydroxiquim-II、AS03和Matrix-M（Novavax AB）在内的各种现有和新技术的疫苗的生产和推广。此外，几种含有AS01的疫苗也获得了批准；RTS,S/AS01E疟疾疫苗（Mosquirix，GSK）用于儿童，gE/AS01B重组带状疱疹疫苗（RZV，Shingrix，GSK）用于50岁及以上成人和免疫功能低下者18岁及以上，以及最近在60岁及以上成人中使用的呼吸道合胞病毒（RSV）疫苗（RSVPreF3-AS01 E疫苗，AREXVY，GSK），并正在审查用于50岁及以上有风险成人的批准。自2019年以来，RTS,S/AS01E已推广并接种给约200万儿童，其有效性和可接受的安全性概况已得到确认，并在大型监测研究中继续积极监测。在III期试验中证实的成人年龄组的RZV长期有效性已在市场后实际效果研究中得到确认。自从我们上次综述以来，我们对含有AS01的疫苗的广泛临床经验使我们能够扩展和更新我们对这种佐剂系统作用机制的了解，并再次强调其在推动对疫苗目标的有效免疫反应中的重要性。 2.什么是佐剂系统AS01？ 20世纪90年代，在尝试使用经典方法开发人类免疫缺陷病毒（HIV）疫苗未成功后，首次探索了佐剂的组合。已知从1980年代开始，MPL（3-O-去酰基-4'-单磷脂脂A）和QS-21（Quillaja saponaria Molina，21号部分，由GSK从Antigenics LLC许可，Antigenics LLC是Agenus Inc.的一个全资子公司，Agenus Inc.是一家特拉华州公司）可以增强免疫反应的不同方面。这些免疫调节分子和铝盐、乳液和脂质体等经典佐剂的组合，预计在诱导特定免疫反应方面具有相加或可能的协同效应。 AS01是一个含有MPL、QS-21和脂质体的佐剂系统。MPL（由GSK生产）是通过水解来自Salmonella minnesota的脂多糖（LPS）获得的去毒化脂多糖。QS-21是从Quillaja saponaria Molina树皮中纯化的三萜皂甙。脂质体含有胆固醇，作为传递载体。脂质体配方中的胆固醇抑制了QS-21的内在溶血活性。AS01在动物研究中诱导了强烈的CD4+和体液反应，因此最初作为RTS,S疟疾疫苗中的佐剂进行了测试。 2.1. MPL与QS-21之间的相互作用对驱动AS01的佐剂性至关重要 MPL结合到先天免疫受体Toll样受体4（TLR4），它属于模式识别受体（PRRs）家族。PRRs如TLR4识别病原体相关分子模式（PAMPs），并利用它们来识别对免疫稳态的威胁。激活后，TLR4通过涉及2个适配分子的复杂信号通路激活促炎免疫反应，Myd88（髓系分化原响应88）控制细胞因子的释放，TRIF（含有TIR结构域的适配分子，诱导干扰素[IFN]-β）诱导释放1型IFN。然而，与在小鼠中的发现不同，人类细胞中MPL信号在参与干扰素调节转录因子3途径方面的效率较低，并且不会在体外诱导1型IFN。 QS-21触发的信号通路了解较少。QS-21在引流淋巴结（dLN）的驻留巨噬细胞中积累，并激活caspase-1，这是一种转化酶，可将其他蛋白质如白介素-1β（IL-1β）和IL-18切割成它们的活性成熟形式。这些事件刺激促炎细胞因子的产生和先天免疫细胞如树突状细胞的募集和激活。QS-21的佐剂效应取决于caspase-1和Myd88途径的整合以及HMGB1（高迁移率族蛋白B1）的释放（图1）。重要的是，MPL和QS-21的组合诱导了一个先天特征，这在单独给予各个组分时并未观察到。这可能来自两个联合效应。首先，MPL和QS-21共享信号通路，当先天细胞暴露于两种免疫刺激剂时，可能发生复杂的信号整合。其次，MPL和QS-21激活不同的细胞类型，创建了一个先天效应功能网络。这些机制都已被报道作为在启动抗菌反应中信号放大的一种手段，并且可能导致对疫苗抗原的改善反应。 图1：MPL和QS-21触发的细胞机制信号通路的示意图。MPL和QS-21通过脂质体传递给先天免疫细胞。MPL结合到先天免疫受体Toll样受体4（TLR4），通过髓系分化原响应88（MyD88）的复杂信号通路激活促炎免疫反应，触发促炎细胞因子的表达和释放。QS-21被内吞并激活ASC-NLRP3（caspase招募域-含吡啶结构域的NOD样受体蛋白）炎症体，随后释放白细胞介素（IL）-1β/IL-18。QS-21的佐剂效应至少部分依赖于HMGB1（高迁移率族蛋白B1）的释放，它也通过TLR4传递信号。根据生物分布和受体表达，MPL和QS-21可能同时作用于同一细胞或不同细胞。促炎细胞因子的自分泌和旁分泌效应可能是AS01佐剂效应的贡献者。 MPL，3-O-去酰基-4'-单磷脂脂A；QS-21，Quillaja saponaria Molina，21号部分（由GSK从Antigenics LLC许可，Antigenics LLC是Agenus Inc.的一个全资子公司，Agenus Inc.是一家特拉华州公司）。使用BioRender.com创建。 2.2.AS01如何调节免疫反应——有什么新发现？ 人们早已理解，包括AS01在内的佐剂在先天反应水平上对免疫反应发挥作用，然后转化为优化的适应性反应。AS01增强免疫反应的作用机制已在动物模型中得到充分研究。在动物中，AS01的佐剂效应依赖于AS01和抗原的空间和时间共定位，表明佐剂在肌肉和dLNs中局部起作用。已描述了AS01诱导的先天反应的多个特征（图2）。 图2：AS01作用机制的示意图。注射后几小时内，AS01和抗原排入引流淋巴结。在这里，多层次的细胞间相互作用支持AS01的佐剂性。A). 与细胞募集相关的趋化因子被释放，导致不同种类的树突状细胞浸润，可能增加了抗原呈递细胞（APCs）的频率。同时，驻留的巨噬细胞也被激活。B). 因此，树突状细胞和巨噬细胞分泌诸如IL-12和IL-18等细胞因子，放大先天免疫激活并激活引流淋巴结内的NK细胞。C). 总的来说，这些效应导致有效的抗原特异性T细胞启动，进而支持B细胞的激活和成熟，促进强大的CD4+ T细胞辅助反应和广泛的体液反应。 APC，抗原呈递细胞；AS，佐剂系统；IFN-γ，干扰素γ；IL，白细胞介素；NK，自然杀伤细胞。使用BioRender.com创建。 注射后不久，AS01从肌肉排出到达dLN。在免疫后的3小时，注射肌肉和dLN中都能检测到细胞因子的快速产生。这种炎症反应是短暂的，1-2天达到峰值，7天后恢复到基线。释放了与细胞募集相关的特定趋化因子，导致肌肉和dLN中先天细胞浸润。 具体来说，dLN中的树突状细胞和淋巴细胞数量迅速增加，可能导致抗原呈递细胞（APC）和T细胞相互作用的频率增加，最终有利于抗原特异性T细胞的启动。AS01还增加了dLN中树突状细胞亚群的多样性，并增强了它们对关键共刺激分子（如CD86和CD40）的表达。总的来说，这些效应导致有效的抗原特异性T细胞启动，这反过来支持B细胞的激活和成熟，促进疫苗接种的体液反应。 在肌肉和dLN中对先天效应细胞的动物研究表明，迁移性和组织驻留的先天淋巴细胞都有助于通过快速效应细胞因子释放，在dLNs中塑造AS01的适应性免疫反应。最近在小鼠中进行的研究表明，肌肉和dLN中的造血细胞表达的TLR4足以介导AS01的佐剂效应，几乎没有来自这两个位置的非造血细胞的输入。 与其他佐剂如乳液或铝盐不同，AS01不会直接增强单核细胞或树突状细胞的抗原摄取。然而，最近的证据表明，AS01确实增加了小鼠dLN B细胞的抗原摄取，突出了AS01与dLN细胞环境之间的复杂相互作用。虽然这种效应与淋巴流动和抗原进入dLN的影响有关，对于一种不同的基于纳米颗粒的皂甙/MPL配方，作者没有调查这些参数对AS01的影响。 AS01先天特征的标志现在被认为是IFNγ和与IFNγ相关的细胞因子（如CXCL10, CXCL9）的强劲产生。在小鼠中，dLN中的IFNγ产生在免疫后3小时就可以检测到，并在6小时达到峰值，表明AS01通过先天免疫激活的极其快速。在初次反应中，这种效应是MPL和QS-21协同作用的直接后果，可能依赖于这些组分激活的复杂细胞网络。例如，IFNγ反应依赖于IL-12（可能由树突状细胞产生）和IL-18，由淋巴结驻留的巨噬细胞释放。驻留的自然杀伤（NK）细胞，是dLN中IFNγ的主要产生者，代表了早期AS01介导的先天免疫刺激的“信号整合中心”。 我们提出，干扰素γ（IFNγ）的早期产生是放大免疫激活的关键步骤，因为IFNγ是一个在免疫反应的不同步骤中都涉及的重要细胞因子，包括激活巨噬细胞和自然杀伤（NK）细胞，以及T细胞和B细胞的分化。在动物挑战模型中，IFNγ在介导RTS,S/AS01E疟疾疫苗的佐剂效应中的作用已被证实，其中阻断IFNγ导致疫苗诱导的保护丧失。重要的是，在动物模型中发现的关于AS01作用机制的许多结果已通过含有AS01的疫苗的临床经验得到证实。开展探索性临床试验，比较不同的佐剂系统（AS01、AS03、AS04，以及佐剂氢氧化铝）与乙型肝炎表面抗原（HBsAg）配方，允许在人类中测试上述一些提议的作用机制，并重复了许多早期发现（图3）。用两剂AS01/HBsAg（相隔1个月）接种乙型肝炎病毒初次感染者，结果显示产生了强大的抗体滴度，并且重要的是，CD4+ T细胞反应，这些反应比其他测试的佐剂配方诱导的反应更高。所有佐剂配方都能诱导具有高度多功能性的T细胞，但AS01/HBsAg中多功能CD4+ T细胞的数量最多。同样，通过早期血清细胞因子反应测量的先天免疫激活在接受AS01/HBsAg的受试者中最高。重要的是，AS01在血清中驱动了IFNγ反应，包括下游趋化因子CXCL10的高水平。外周血单核细胞的转录分析确定了在接种疫苗后24小时内出现的一组核心先天基因签名，包括与IFN途径和NK细胞相关功能相关的基因。这种核心签名的表达与先天反应的早期激活以及适应性反应的幅度有关，最近还与体液反应的持久性有关（手稿准备中）。重要的是，与其他在本研究中调查的佐剂系统不同，AS01不仅诱导了这种签名的最高平均表达，还在大多数受试者中表达了核心签名。这表明AS01诱导的更强的先天反应能够克服个体免疫异质性，从而减少免疫适应性差对疫苗反应的影响。这一假设与使用含有AS01的RZV和RSVPreF3-AS01E疫苗接种的50岁以上老年人中观察到的强大的免疫反应一致，并且有证据表明，含有AS01的结核病（TB）疫苗的2剂可以克服个体在他们的基线结核病免疫方面的差异。 图3：比较不同佐剂与乙型肝炎表面抗原（HBsAg）配方的临床试验设计（A组）以解析在人类中的作用机制（B组）。 A) 研究设计：年龄在18至45岁之间健康且未感染乙型肝炎病毒的成年人被随机分配接受两剂用氢氧化铝(Al(OH)3)、佐剂系统AS01B、AS01E、AS03A或AS04佐剂的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)。在第0天和第30天接种。在研究期间评估安全性，并在每次接种后14天内记录反应原性。在研究期间直至第390天评估体液和细胞介导的免疫反应。 B) 免疫反应：与传统临床研究一样，探索性临床研究的主要终点（用大的蓝色圆圈表示）是免疫原性（通常通过抗体滴度和抗原特异性T细胞产生的细胞因子分析来衡量）和反应原性。探索性终点允许更深入地探索佐剂疫苗的作用机制。这些可能包括评估免疫反应数量和质量的多个方面的检测（其中一些在紫色中明确指出，其他未定义的用空圆圈表示）。总体而言，通过机器学习和人工智能方法整合这些数据将更好地定义对疫苗接种的整体适应性和先天免疫反应（黄色圆圈），并理想地提供对其临床效果的新见解。 AlPO4，磷酸铝；Al(OH)3，氢氧化铝；AS，佐剂系统；D，天；h，小时；HBsAg，乙型肝炎表面抗原；MPL，3-O-去酰基-4'-单磷脂脂A；QS-21，Quillaja saponaria Molina，21号部分（由GSK从Antigenics LLC许可，Antigenics LLC是Agenus Inc.的一个全资子公司，Agenus Inc.是一家特拉华州公司）；y，年。使用BioRender.com创建。 与HBsAg/氢氧化铝相比，在HBsAg/AS01诱导的体液免疫反应的数量和质量上观察到显著差异。具体来说：（i）HBsAg/AS01诱导了更高滴度的HBsAg特异性抗体；（ii）HBsAg/AS01诱导了更高质量的抗体，例如增加的亲和力、增加的抗体介导的效应功能范围和增加的B细胞记忆反应；（iii）与HBsAg/氢氧化铝相比，HBsAg/AS01显示高亲和力抗体的受试者比例更高。有趣的是，尽管成分和信号传递不同，乳液佐剂系统AS03对HBsAg特异性体液反应的影响相似。因此，考虑到AS01和AS03对HBsAg T细胞反应的不同影响，这两种佐剂之间的功能差异仍有待部分阐明。 虽然从探索性临床研究研究中可以得出宝贵的信息，但这些研究资源密集。使用原代人细胞的体外模拟佐剂效应正在成为补充动物和临床佐剂作用机制数据的途径。例如，用AS01刺激外周血单核细胞导致强烈的单核细胞激活。重要的是，尽管与年龄相关的免疫功能下降，老年人的单核细胞仍然能够在响应AS01时产生炎症和共刺激信号。 总体而言，在含有AS01的疫苗的临床开发中积累的证据表明，上述描述的AS01作用机制的许多特征都参与了促进有效的适应性免疫反应，最终有助于疫苗诱导的保护。 3.含有AS01的疫苗的全球经验 3.1 RTS,S/AS01E疟疾疫苗更新 RTS,S/AS01E包含一种与乙型肝炎表面抗原（HBsAg）融合的恶性疟原虫环孢子蛋白（CSP）的形式，并与AS01E配方。RTS,S/AS01E现在已在疟疾疫苗实施计划（MVIP）中进行了评估，MVIP是一个多合作伙伴合作项目，旨在评估RTS,S/AS01E在非洲疟疾流行地区5-17个月大儿童中的实际效果和安全性。基于4年试点项目的结果，世界卫生组织（WHO）推荐所有生活在中等到高传播P. falciparum地区的儿童使用RTS,S/AS01E。近200万儿童已经接受了他们的第一剂RTS,S/AS01E。MVIP的数据发现，接种疫苗对因严重疟疾住院的有效性为30%（95%置信区间[CI] 8-46%），对因疟疾检测阳性住院的有效性为21%（95% CI 7-32%），这与III期疗效研究的结果一致。最近，在布基纳法索和马里的儿童中，季节性疟疾疫苗接种与季节性化学预防的结合显示出比这两种干预措施单独使用显著更高的保护效果，为疟疾控制的新预防策略打开了大门。 恶性疟原虫物种具有复杂的生命周期，包括蚊媒、人类肝脏和人类血液阶段。蚊子在吸血时注入孢子，然后它们在进入肝脏细胞之前在血液中花费数小时。通过诱导针对孢子的强烈抗体反应，RTS,S/AS01E旨在预防肝脏感染和临床疟疾。RTS,S/AS01E诱导的抗体反应的大小与对疟疾的保护相关。RTS,S/AS01E在血清中诱导增加的IFNγ水平和与控制疟疾挑战的保护相关的外周血单核细胞中的IFN相关转录反应。RTS,S/AS01E诱导的抗体似乎通过阻止孢子转移到肝脏并在该器官中限制其感染性来发挥作用（图4）。 图4：RTS,S/AS01E疟疾疫苗作用机制的示意图。A) 在肝脏中，孢子穿越由肝窦内皮细胞衬里的窦道毛细血管，穿过（少数）库普弗细胞，然后感染肝细胞。库普弗细胞将CSP肽呈现给CD4+ T细胞，这些细胞开始分泌IL-2，从而激活肝脏NK细胞，这些细胞又通过库普弗细胞分泌的IL-12进一步激活。激活的NK细胞可以分泌IFNγ，这有助于控制寄生虫血症。此外，NK细胞通过与覆盖在肝细胞表面的穿越孢子的CSP的FcγRIII受体结合的CSP特异性抗体，激活NK细胞释放细胞毒性颗粒，杀死感染的细胞。B) 环孢子蛋白特异性抗体通过ADCC和ADCP促进孢子的杀伤。C) 强烈的抗体反应中和循环中的P. falciparum孢子，防止肝细胞感染。ADCC指的是通过免疫效应细胞杀死已经被特定抗体结合的靶细胞；ADCP指的是吞噬和内部降解已经被特定抗体结合的靶细胞的膜表面抗原；dLN，引流淋巴结；IFNγ，干扰素γ；IL，白细胞介素。使用BioRender.com创建。 最近，在疟疾挑战研究中，免疫反应的质量在预测保护方面被认为是重要的，包括抗体特异性、亚类分布和抗体亲和力。特别是，RTS,S/AS01E诱导的CSP特异性抗体促进抗体依赖性细胞毒性（ADCC）在预测挑战研究中的保护方面发挥了重要作用。ADCC主要由NK细胞介导，NK细胞是AS01作用机制中的重要细胞类型。NK细胞在外周血液中的存在与RTS,S/AS01E的抗体反应以及对疟疾的保护呈负相关。这一观察可能是由于RTS,S/AS01E疫苗接种刺激NK细胞离开循环并转移到淋巴器官和肝脏，在那里它们与CSP特异性抗体相互作用，通过杀死感染的肝细胞（图4A）或直接杀伤（图4B）来抑制孢子的侵袭。 如果CSP介导的保护机制主要是抗体介导的，那么RTS,S/AS01E诱导的强大的CD4+ T细胞反应如何有助于保护？首先，CD4+ T细胞在促进抗体质量方面发挥着至关重要的作用。淋巴结中的一种特殊亚群的CD4+ T细胞，滤泡辅助T细胞，为最佳的B细胞成熟和抗体产生提供帮助。RTS,S/AS01E诱导了强烈的滤泡辅助T细胞反应，并且当与不同的疟疾抗原联系起来时，AS01比其他疫苗平台诱导更高水平的抗原特异性CD4+ T滤泡。来自滤泡辅助T细胞的适当帮助将产生具有超越中和循环孢子的多种效应功能的抗体（图4C）。通过与不同的先天免疫细胞相互作用，高度功能性的抗体可以通过ADCC或抗体依赖性细胞吞噬作用（ADCP）直接介导孢子的杀伤（图4B）。其次，效应CD4+ T细胞可能通过促进肝脏中的ADCC间接有助于保护效应功能（图4A）。CSP特异性抗体结合到感染肝细胞表面的CSP。CSP特异性CD4+ T细胞分泌IL-2并引起肝脏NK细胞的激活。肝脏NK细胞通过CSP特异性抗体结合表面FcγRIII受体进一步激活。因此，激活免疫反应的多个臂，RTS,S/AS01E能够释放合作的适应性和先天效应功能。 3.2 关于重组带状疱疹疫苗（RZV）的更新 RZV含有与AS01B（gE/AS01B）的重组水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E（gE）抗原。即使在通常导致次优免疫反应和较差疗效的免疫衰老的极端老年人群中，RZV在预防带状疱疹及其最常见的并发症——带状疱疹后神经痛方面也非常有效。在美国（US）和欧洲，RZV已被批准用于预防50岁及以上成人的带状疱疹和带状疱疹后神经痛，最近也被批准用于预防18岁及以上免疫功能低下或免疫抑制成人的带状疱疹和带状疱疹后神经痛。在自体造血细胞移植受者中，疫苗效力为68.2%（95% CI，55.6-77.5%），在血液恶性肿瘤患者中为87.2%（44.3-98.6%），在已有潜在免疫介导疾病（pIMD）的患者中为90.5%（73.5-97.5%）。 RZV后的保护效力似乎是持久的。在接种2剂RZV后，疫苗效力在第10年期间保持在73.2%（95% CI 46.9-87.6%）。到第10年，免疫反应已适度减弱，抗gE抗体仍比接种前水平高5倍，并且gE特异性CD4+ T细胞频率几乎没有变化。建模研究预测，接种疫苗后的体液和细胞介导的免疫（CMI）反应应持续20多年。在最初免疫程序10年后，对80多岁的成年人进行的额外接种在抗体水平和CD4+ T细胞频率上引起了显著增加，表明了强大的回忆反应。 AS01B对RZV诱导的免疫反应的贡献已有充分记录。与单独给予gE相比，添加AS01B会产生显著更高的抗体水平和CD4+ T细胞反应。通过比较RZV与减毒活带状疱疹疫苗（ZVL, Zostavax, MSD）可以进一步了解AS01B对RZV介导的细胞免疫反应的贡献。与ZVL相比，RZV在最后一次接种后30天诱导了更高的gE和水痘-带状疱疹病毒VZV特异性记忆Th1反应。RZV诱导了一个显著的记忆T细胞反应，这与持久性相关，而ZVL诱导的gE特异性T细胞具有效应表型，这与免疫反应的持续时间较短相关。重要的是，这些发现不仅适用于CD4+ 辅助T细胞，也适用于CD8+ T细胞。最近比较ZVL和RZV疫苗的数据还表明，RZV扩增了更多具有更广泛特异性的gE特异性CD4+ T细胞。有趣的是，对T细胞受体序列和gE特异性持久CD4+ T细胞的分析表明，RZV引起的免疫反应的持久性可能部分依赖于其在疫苗反应的早期阶段招募naïve CD4+ T细胞的能力。最后，RZV或ZVL都已显示出产生抗-gE和抗-VZV ADCC，有证据表明RZV比ZVL具有更大的诱导ADCC抗体的能力。 3.3.呼吸道合胞病毒（RSV）疫苗 人们越来越认识到RSV在老年人、免疫功能低下者以及包括心血管疾病在内的慢性疾病患者中造成了巨大的疾病负担。RSV是这些人群中发病率和死亡率的驱动因素，尽管真正的疾病负担尚未完全描述。RSV有两种主要亚型，A型和B型，它们可能同时流行。融合蛋白（F）是RSV包膜上发现的一种主要糖蛋白，而预融合（PreF）构象是中和抗体的主要靶点。 目前还没有RSV的保护相关因素，但可能有多种机制有助于预防疾病，特别是在老年人中。中和抗体在预防RSV引起的下呼吸道感染中起着主要作用，老年人中低血清中和滴度与RSV感染症状和住院风险增加有关。除了体液反应外，老年人中的RSV特异性CD4+和CD8+ T细胞反应发生的频率较低，功能和增殖能力也低于年轻人，这可能导致老年人对严重疾病的敏感性增加。 RSVPreF3-AS01E是重组RSVPreF3蛋白和AS01E的组合，旨在诱导强大的体液和细胞免疫反应，帮助保护老年人和那些年龄在50至59岁之间、有慢性疾病导致RSV疾病风险增加的成年人，预防RSV相关的下呼吸道感染。与其他含有AS01的疫苗一样，RSVPreF3抗原与AS01E的组合与单独使用RSVPreF3相比，诱导了统计学上更高的Th1 CD4+ T细胞反应。含有AS01的配方增强了细胞免疫反应，并在老年人中恢复了RSVPreF3 Th1 CD4+ T细胞水平至年轻人所见范围内。在抗体反应的幅度上没有佐剂效应。然而，进一步的研究表明，与未佐剂的RSVPreF3相比，RSVPreF3-AS01E诱导了更广泛的中和抗体增强反应，覆盖了抗原性不同的RSV株，包括目前在流行中占主导地位的株。 在连续的RSV季节进行的III期疗效研究中，RSVPreF3-AS01E在预防目标人群中RSV下呼吸道感染方面显示出统计学上显著且具有临床意义的总体效力，为82.6%（96.95% CI，57.9–94.1%）。疫苗效力对严重RSV疾病的预防为94.1%（95% CI，62.4–99.9%），在有基础心肺和内分泌代谢疾病的老年人中为94.6%（95% CI，65.9–99.9%）。疫苗对RSV A型和B型亚型的效力相似。最近的结果显示，效力在两个季节中持续存在，对RSV下呼吸道感染的累积疫苗效力为67.2%（97.5% CI 48.2–80.0），对严重下呼吸道感染再次为78.8%（95% CI 52.6–92.0）。在有基础疾病的老年人中观察到的高效力可能对最脆弱人群中RSV导致的发病率和死亡率产生显著影响。除了诱导高水平的广泛中和抗体滴度和恢复RSVPreF3特异性CD4+ T细胞外，其他免疫参数可能有助于III期研究中观察到的高效力，目前正在进行调查。 RSVPreF3-AS01E首次于2023年5月在美国获得批准，用于预防60岁及以上个体中由RSV引起的下呼吸道感染，随后在包括欧洲、加拿大和日本在内的其他国家获得批准。RSVPreF3-AS01E是有史以来第一个获得批准的RSV疫苗。 3.4 安全性和反应原性 含有AS01的疫苗已经给数百万人接种，现在有广泛的发表证据表明它们的安全概况。反应原性指的是疫苗接种引起的炎症反应的身体表现。通常，含有相同抗原的佐剂疫苗比未含有佐剂的配方更具反应原性。例如，当与HBsAg一起使用时，AS01比氢氧化铝具有更高的反应原性，注射部位的疼痛和其他不良反应的发生率更高。这可能是由于佐剂成分在注射部位增强的先天免疫反应的结果。这些反应大多是轻度到中度的，并且是短暂的。一项对老年人中新佐剂（AS01、AS02、AS03和MF59）安全性的荟萃分析得出结论，尽管与对照组相比，新佐剂疫苗观察到的反应原性增加，但没有整体增加严重不良事件或死亡。 3.4.1 RTS,S/AS01E 在临床试验中对RTS,S/AS01E的评估涉及大约15,000名6-12周和5-17个月大的儿童，他们接受了3剂RTS,S/AS01E或对照疫苗（儿童中的狂犬病疫苗和幼儿中的脑膜炎球菌C群结合疫苗）的接种计划，以及4200多名在第3剂后18个月接受第4剂RTS,S/AS01E的儿童。在III期试验中，接受RTS,S/AS01E的婴儿与接受研究中使用的童年疫苗的婴儿相比，局部不良事件症状的报告频率相似。系统性反应原性在RTS,S/AS01E组中高于对照组。第4剂RTS,S/AS01E在儿童和幼儿中也比对照疫苗更具反应原性，系统性和局部反应的频率都更高[47]。严重的（3级）预期不良事件（例如，嗜睡、易怒和食欲丧失）很少，除了3级发热（>39°C），在接受第4剂RTS,S/AS01E的儿童中发生在5.3%，在婴儿中发生在1.5%。正如在初级系列中观察到的，在接受第4剂RTS,S/AS01E疫苗的婴儿和儿童中，接种后7天内发热的发生率高于接受对照疫苗的婴儿和儿童，少数这些发热反应伴随着全身性惊厥发作。该研究指出，在发生脑膜炎和脑疟疾病例的儿童（而不是婴儿）中，RTS,S/AS01E和对照组之间存在不平衡，并且接种RTS,S/AS01E的女孩比对照疫苗的女孩死亡率更高。在I/II期研究中，其他III期研究或MVIP试点评估中均未观察到这些信号。基于此，WHO得出结论，这些都是偶然发现。对21项RTS,S/AS01E临床试验的系统综述得出结论，大多数在接受RTS,S/AS01E后观察到的不良事件也在其他疫苗后观察到。 3.4.2 RZV 在针对老年人的临床试验中，RZV比安慰剂更具反应原性。在50岁以上的成年人中，17.0%的RZV接受者和3.2%的安慰剂接受者报告了3级症状。在70岁以上的成年人中，注射部位和系统性反应的报告在RZV接受者中也比安慰剂接受者更常见。不良事件通常为轻度至中度，并且是短暂的，严重不良事件、pIMDs（潜在免疫介导的疾病）和死亡的总体发生率在研究组之间相似。一项开放标签研究发现，疫苗相关的反应原性没有影响大多数接种者的生活质量。RZV的市场后安全性数据与临床试验中观察到的安全性概况一致，通常报告的不良事件表明了反应原性。在六项RZV临床试验的概述中，包括了18岁及以上的免疫功能低下人群，这些人群包括自体造血干细胞移植患者、肾脏移植患者、血液恶性肿瘤患者、实体瘤患者或HIV感染者，他们患带状疱疹的风险增加，报告严重不良事件、死亡和pIMDs的成年人百分比在RZV和安慰剂接受者之间是平衡的。在安全性概述中没有发现安全问题。一项对17项临床试验和19项队列研究的荟萃分析，旨在调查RZV和带状疱疹活疫苗在免疫功能正常和免疫功能低下受试者中的效力、有效性和安全性，发现RZV接受者中注射部位症状、系统性不良事件、严重不良事件和死亡的发生率在免疫功能低下和免疫功能正常的受试者之间没有统计学上的显著差异。 3.4.3 RSVPreF3-AS01E 在针对60岁及以上成年人的大型III期安慰剂对照试验中，RSVPreF3-AS01E比安慰剂更具反应原性，但这些反应通常是短暂的，并且轻度到中度。疫苗组和安慰剂组中pIMDs和严重不良事件的总体发生率相似。 4.结核病疫苗：AS01含有的新疫苗开发中的一个例子 全球范围内，结核病（TB）是继COVID-19之后第二大由传染病引起的死亡原因，2022年有130万人死于结核病。耐多药结核病是一个公共卫生危机，威胁着全球疾病控制。一种能够有效预防成人结核病复发的有效疫苗将对减少疾病传播和减轻活动性肺结核造成的疾病负担产生深远的影响。 结核病疫苗的开发受到疾病的复杂性、其各种临床表现以及结核分枝杆菌在肉芽肿中长期潜伏的能力的阻碍。传统上认为需要强烈的T细胞反应来介导对活动性结核病的保护，但越来越多的证据指向体液免疫的重要贡献。 含有AS01的调查性结核病疫苗包含M72抗原，这是一种由两种免疫原性的结核分枝杆菌抗原Mtb32A和Mtb39A衍生的重组融合蛋白。在HIV阴性成人（18-50岁）中进行的概念验证IIb期研究发现，M72/AS01E（两剂在1个月间隔内接种）在第36个月的疫苗效力为49.7%（95% CI 2.1–74.2%）。 在小鼠中，M72/AS01E诱导了多功能的、表达Th1的M72特异性CD4+和CD8+ T细胞，在肺部观察到高水平。两剂M72/AS01E诱导了高水平的M72特异性抗体反应和表达Th1细胞因子的多功能M72特异性CD4+ T细胞；即IFNγ、TNFα和IL-2，在接种后3年仍然可以检测到。与单独给予M72相比，AS01的加入显著增强了体液和CD4+ T细胞反应。与其他含有AS01的疫苗一样，M72/AS01E也在接种疫苗后24小时内在血清中诱导了短暂的IFNγ反应。此外，疫苗接种的体液和细胞介导的免疫（CMI）反应在健康的未接种卡介苗（BCG）的个体和生活在结核病流行地区的接种过BCG的青少年中似乎是相似的，因此更有可能被感染。这进一步说明了AS01克服基线免疫记忆反应个体差异的能力。实际上，两剂疫苗在已经接受过结核病治疗的个体和未患过病的个体中诱导了均匀的转录签名。 5.结论 尽管AS01的作用机制仍在动物模型和临床试验中阐明，但已经清楚的是，含有AS01的疫苗能够克服免疫衰老、慢性疾病和免疫抑制带来的许多免疫反应限制。自从我们上次回顾以来，已有三种含有AS01的疫苗获得批准使用；两种用于预防成人严重的病毒性疾病（带状疱疹和RSV），一种用于预防儿童的复杂寄生虫病，疟疾。RZV和RTS,S/AS01E的有效性已在市场后/实施环境中得到确认，RSVPreF3-AS01E在2023年季节开始对老年人进行市场后疫苗接种。目前许可的含有AS01的疫苗的临床和市场后数据继续显示可接受的安全性概况。 6.专家意见 AS01含量疫苗的研究和使用已经扩展到不同的疾病状态，包括急性呼吸道感染（RSV）、病毒复发的皮肤病表现（带状疱疹）、寄生虫感染（疟疾）和慢性肉芽肿感染（结核病）。因此，AS01的作用机制的新特征变得明显。AS01诱导T滤泡辅助细胞、具有优化功能特性的广泛抗体反应和免疫记忆的诱导，以及在包括儿童、老年人和免疫功能低下者在内的广泛人群中一致诱导多功能T细胞反应。含有AS01的疫苗似乎对基线免疫状态相对不敏感，似乎能够在年龄组和疾病状态以及人群中（老年人和免疫功能低下者）一致诱导强大的反应，这些人群的疫苗反应通常被减弱，转化为这些人群中的高效力。这种“平坦化”先前存在的免疫缺陷的效果是如何发生的，以及它如何能够进一步在疫苗设计中被利用，目前尚不完全清楚。AS01可能同时参与多个免疫途径，确保保护机制的冗余，以便一个途径的缺陷可以被另一个途径所补偿。 AS01的许多免疫特征在不同抗原的疫苗中是相似的，但也有一些不是。例如，在临床前模型中观察到含有AS01的疫苗激活CD8+ T细胞，但在人类中一致的证据一直缺乏。最近，在M72/AS01E和RZV的研究中观察到AS01诱导的抗原特异性CD8+ T细胞反应，但在RSVPreF3-AS01或RTS,S/AS01E的研究中没有。在一项含有AS01的调查性HIV纳米颗粒疫苗的研究中，CD8+ T细胞反应被诱导对抗纳米颗粒的“支架”，而不是HIV抗原。无论RSVPreF3是单独给予还是与AS01结合给予，RSVPreF3给予后中和抗体水平的增加都是相似的，而在其他抗原-AS01给药与单独给予抗原相比，观察到抗体反应的显著增加。这些观察结果突出表明，AS01的佐剂效果将根据疫苗抗原、目标病原体和疫苗接种者的免疫状态（naïve vs prime，latent vs recurrent infection）而有所不同。 到目前为止，AS01反应原性的机制尚未完全解释清楚。IL-6和IFNγ反应与HBsAg/AS01的抗体和T细胞反应相关，并且似乎也与系统性反应原性相关。虽然这里介绍的AS01佐剂疫苗的数据似乎表明，佐剂对抗原特异性免疫反应的效果也与反应原性相关，“不痛不痒”的假设——反应原性是良好的适应性免疫反应的标志——以前已被证明是不一致的。因此，需要更多的工作来理解反应原性的机制及其与诱导保护性免疫反应的关系。 迄今为止，已获许可的AS01疫苗一直用于预防，然而，探索基于AS01的治疗性疫苗的范围为公共卫生提供了进一步的好处。例如，有2项临床试验正在研究用于治疗慢性乙型肝炎的基于AS01的治疗性疫苗（NCT03866187, NCT05276297）。慢性乙型肝炎感染的特点是CD4+和CD8+细胞功能失调和数量减少。人们认为，佐剂可能有助于刺激CD4+ T细胞和B细胞，从而帮助恢复免疫反应并促进病毒清除。除了预防传染病外，人们越来越认识到疫苗可能对免疫系统产生与它们旨在预防的疾病无关的非特异性效应。当这些效应有益时，可以减少对无关感染的敏感性，影响炎症和癌症的发展，减缓或逆转与年龄相关的免疫功能恶化，并影响总体死亡率。这些好处被认为是由于先天免疫细胞的表观遗传重编程，称为训练免疫。最近，人类通过AS01//HBsAg疫苗接种对单核细胞的表观遗传重编程已被描述。如何利用这些效应来改善免疫适应性和人类健康是一个正在积极研究的主题。 由于COVID-19大流行，现在有一系列新的佐剂和疫苗技术，如病毒载体和mRNA疫苗，被认为是自佐剂的。在未来5年，我们预计在3个关键领域进行重要工作以提高我们的了解。首先是了解个体抗原/佐剂相互作用的细微差别，这些相互作用可以指导选择抗原和佐剂组合以获得所需的免疫反应。这也将扩展到mRNA-脂质纳米颗粒与佐剂蛋白疫苗策略的比较，在疫苗开发的早期选择最佳疫苗技术以实现保护性疫苗接种。第二是探索和利用预先存在的免疫和佐剂诱导的免疫调节之间的相互作用，第三是在不同人群中优化剂量和剂量计划。例如，在疟疾、RSV和调查性结核病疫苗中使用的AS01E，含有的佐剂成分是RZV中使用的AS01B的一半。延迟的分数剂量RTS,S/AS01E提高了成人的疫苗效力，但在儿童中没有，原因尚不清楚，尽管研究环境明显不同。剂量和计划优化也可能最小化疫苗接种者在接受佐剂疫苗接种时经历的反应原性。深入理解不同年龄组和具有异质性先前免疫学经验的人群中由佐剂驱动的不同免疫途径，可能允许开发可以预测不同抗原-佐剂组合和计划的可能结果的免疫学模型。这条途径已在COVID-19的治疗和疫苗开发中被探索。最后，接种RZV的老年人感染COVID-19的次数更少、症状更轻的数据是一个有趣的发现，这引发了AS01在促进免疫适应性方面的未来作用的问题。RZV对训练免疫的影响正在一项I期研究中被探索（NCT04523246）。这项研究和其他正在进行的研究的结果，调查训练免疫是否可以被利用来改善人类健康，可能会潜在地扩大我们目前对佐剂和疫苗的看法的范式。 总之，AS01是正在开发的几种佐剂系统之一，用于开发在免疫系统受损的人群中高度有效的疫苗，以及针对经典方法未能成功的复杂疾病。包括AS01在内的佐剂在预防人类传染病方面的作用预计将在未来可预见的时间内继续扩展到新的领域。 目前疫苗研发仍然面临着一些挑战，如多种重要的病原体尚无有效疫苗、病原体的变异不断出现需要通用型疫苗等。为了推动人用及兽用疫苗行业交流，共同探讨该领域的最新研发进展、产业化现状及未来发展趋势，生物制品圈联合四叶草会展将于2024年8月16日-17日在苏州共同举办“第三届新型疫苗研发峰会”。诚邀全国相关领域专家、学者和企业家共享学术盛会。现将有关事宜通知如下。 名称：2024第三届新型疫苗研发峰会 时间：2024年8月16-17日（周五-周六） 地点：苏州（酒店定向通知） 主办单位：四叶草会展、生物制品圈 媒体支持：药时空、抗体圈、细胞基因研究圈 会议费用：点击二维码即可查询。 报名方式：扫描下方二维码或点击文章最底部“阅读原文”→ 填写表格 → 报名成功（报名志愿者，免交报名费，承担一定工作任务）！ 转发分享福利：疫苗研发企业、科研院校和监管机构人员，前30位报名人员转发分享会议信息可免费参会（不含餐饮）报名后，扫描下方二维码加工作人员微信后，发送截图即可。 组委会获得报名信息后，根据报名信息进行初筛，并进一步与报名者沟通确认，实现精准邀请，最终有机会进入大会微信群（严格审核通过）。 大会日程 已经确定的报告人 识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入 生物制品微信群！ 请注明：姓名+研究方向！ 版 权 声 明 本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。